JPH1073596A - 免疫学的反応性物質を検出又は測定する方法 - Google Patents
免疫学的反応性物質を検出又は測定する方法Info
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- JPH1073596A JPH1073596A JP23182696A JP23182696A JPH1073596A JP H1073596 A JPH1073596 A JP H1073596A JP 23182696 A JP23182696 A JP 23182696A JP 23182696 A JP23182696 A JP 23182696A JP H1073596 A JPH1073596 A JP H1073596A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 免疫比濁法もしくは免疫比朧法に用いられて
いる担体を含有せず、抗体もしくは抗原を浮遊させた緩
衝液からなる試薬を使用して、従来法よりも免疫学的凝
集反応を促進させ、高感度で免疫学的反応性物質の存在
を検出又は測定する方法を提供すること。 【解決手段】 抗原もしくは抗体を試薬として用いて、
免疫学的凝集反応により、免疫学的反応性物質を検出又
は測定する方法であって、該反応系に微小電圧を印加す
る。
いる担体を含有せず、抗体もしくは抗原を浮遊させた緩
衝液からなる試薬を使用して、従来法よりも免疫学的凝
集反応を促進させ、高感度で免疫学的反応性物質の存在
を検出又は測定する方法を提供すること。 【解決手段】 抗原もしくは抗体を試薬として用いて、
免疫学的凝集反応により、免疫学的反応性物質を検出又
は測定する方法であって、該反応系に微小電圧を印加す
る。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は特に担体を含まない
試薬を用いる免疫学的凝集反応により、免疫学的反応性
物質を検出又は測定する方法に関する。更に詳しくは、
該反応系に直流、直流パルス、若しくは交流に由来する
微小電圧を印加することにより、免疫学的反応性物質を
迅速且つ簡便に、しかも高感度で検出又は測定する方法
に関する。
試薬を用いる免疫学的凝集反応により、免疫学的反応性
物質を検出又は測定する方法に関する。更に詳しくは、
該反応系に直流、直流パルス、若しくは交流に由来する
微小電圧を印加することにより、免疫学的反応性物質を
迅速且つ簡便に、しかも高感度で検出又は測定する方法
に関する。
【０００２】
【従来の技術】免疫学的反応性物質は、免疫学的凝集反
応により、不溶性凝集塊を形成するのでこれを検出する
ことにより、免疫学的反応性物質を検出又は測定するこ
とが可能である。免疫学的反応性物質を検出又は測定す
る方法として、免疫比濁法、免疫比朧法、この両者を組
み合わせた積分球濁度法が知られている。抗原となる高
分子タンパク質の分子表面には多くのエピトープがあ
り、これと相補的構造を持つ抗体が接近すると、両者は
疎水結合、水素結合、ファンデルワールス力等によっ
て、不溶性凝集塊を形成し濁度を生ずるので、この濁度
を光学的に測定して定量分析することが可能となるので
ある。これらの方法は、簡便性、迅速性、経済性等の諸
点において臨床検査の方法としては極めて有用である
が、検出できる免疫学的反応性物質の感度に限りがある
ため、更に低濃度域の免疫学的反応性物質を検出するた
めには、ラテックス、リポソーム、金コロイド等の担体
粒子に抗体若しくは抗原を担持した高感度化試薬が用い
られている。これら免疫学的凝集反応は、一般に撹拌翼
等で撹拌されることにより開始され、３７℃の温度下で
行われる。このとき測定（反応）に要する時間は約１０
分である。
応により、不溶性凝集塊を形成するのでこれを検出する
ことにより、免疫学的反応性物質を検出又は測定するこ
とが可能である。免疫学的反応性物質を検出又は測定す
る方法として、免疫比濁法、免疫比朧法、この両者を組
み合わせた積分球濁度法が知られている。抗原となる高
分子タンパク質の分子表面には多くのエピトープがあ
り、これと相補的構造を持つ抗体が接近すると、両者は
疎水結合、水素結合、ファンデルワールス力等によっ
て、不溶性凝集塊を形成し濁度を生ずるので、この濁度
を光学的に測定して定量分析することが可能となるので
ある。これらの方法は、簡便性、迅速性、経済性等の諸
点において臨床検査の方法としては極めて有用である
が、検出できる免疫学的反応性物質の感度に限りがある
ため、更に低濃度域の免疫学的反応性物質を検出するた
めには、ラテックス、リポソーム、金コロイド等の担体
粒子に抗体若しくは抗原を担持した高感度化試薬が用い
られている。これら免疫学的凝集反応は、一般に撹拌翼
等で撹拌されることにより開始され、３７℃の温度下で
行われる。このとき測定（反応）に要する時間は約１０
分である。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、免疫比
濁法若しくは免疫比朧法に用いられている担体を含有せ
ず、抗体若しくは抗原を浮遊させた緩衝液からなる試薬
を使用して、従来法よりも免疫学的凝集反応を促進さ
せ、高感度で免疫学的反応性物質を検出又は測定する方
法を知見し、本発明に到達した。
濁法若しくは免疫比朧法に用いられている担体を含有せ
ず、抗体若しくは抗原を浮遊させた緩衝液からなる試薬
を使用して、従来法よりも免疫学的凝集反応を促進さ
せ、高感度で免疫学的反応性物質を検出又は測定する方
法を知見し、本発明に到達した。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明は、抗原若しくは
抗体を試薬として用いて、免疫学的凝集反応により免疫
学的反応性物質を検出又は測定する方法であって、該反
応系に微小電圧を印加することを特徴とする方法を提供
する。本発明において、免疫学的凝集反応とは、抗原抗
体反応、特異的レセプターとの反応等を利用した方法で
あり、定性法及び定量法の両方を含むものである。本発
明における免疫学的反応性物質は、上記の免疫学的凝集
反応によって、測定され得る物質から選択できる。例え
ばＣＲＰ、アルブミン、トランスフェリン、ミオグロビ
ン、ＬＰ（ａ）、Ｃ４、Ｃ３、ＩｇＧ、ＩｇＭ、α１ア
ンチトリプシン等の血清蛋白が挙げられる。また、検出
範囲は概ね１０μｇ／ｄｌ〜１００ｍｇ／ｄｌ、検出感
度は約１０μｇ／ｄｌ〜１ｍｇ／ｄｌである。試薬とし
て用いる抗原若しくは抗体としては、例えば上記血清蛋
白を免疫学的に認識し得る抗体が用いられる。
抗体を試薬として用いて、免疫学的凝集反応により免疫
学的反応性物質を検出又は測定する方法であって、該反
応系に微小電圧を印加することを特徴とする方法を提供
する。本発明において、免疫学的凝集反応とは、抗原抗
体反応、特異的レセプターとの反応等を利用した方法で
あり、定性法及び定量法の両方を含むものである。本発
明における免疫学的反応性物質は、上記の免疫学的凝集
反応によって、測定され得る物質から選択できる。例え
ばＣＲＰ、アルブミン、トランスフェリン、ミオグロビ
ン、ＬＰ（ａ）、Ｃ４、Ｃ３、ＩｇＧ、ＩｇＭ、α１ア
ンチトリプシン等の血清蛋白が挙げられる。また、検出
範囲は概ね１０μｇ／ｄｌ〜１００ｍｇ／ｄｌ、検出感
度は約１０μｇ／ｄｌ〜１ｍｇ／ｄｌである。試薬とし
て用いる抗原若しくは抗体としては、例えば上記血清蛋
白を免疫学的に認識し得る抗体が用いられる。
【０００５】本発明において、微小電圧は直流、直流パ
ルス、若しくは交流に由来するものである。微小電圧
は、有利には、反応系が電気分解を実質的に起こさない
範囲の電圧、例えば反応系の電気伝導度が１７.４ｍＳ
／ｃｍ（生理食塩水相当）のとき、電界強度２.４Ｖ／
ｍｍの直流パルス電圧（パルス幅１０μＳ、１０ＫＨ
ｚ）である。しかし、前記した電圧は電極の材質、面
積、印加時間等により変動する。本発明における交流電
圧の波形は、連続波、パルス波のいずれであってもよ
く、また任意の形状とし得るが、好ましくは正弦波、方
形波、矩形波である。
ルス、若しくは交流に由来するものである。微小電圧
は、有利には、反応系が電気分解を実質的に起こさない
範囲の電圧、例えば反応系の電気伝導度が１７.４ｍＳ
／ｃｍ（生理食塩水相当）のとき、電界強度２.４Ｖ／
ｍｍの直流パルス電圧（パルス幅１０μＳ、１０ＫＨ
ｚ）である。しかし、前記した電圧は電極の材質、面
積、印加時間等により変動する。本発明における交流電
圧の波形は、連続波、パルス波のいずれであってもよ
く、また任意の形状とし得るが、好ましくは正弦波、方
形波、矩形波である。
【０００６】本発明の免疫学的反応性物質の代表的な測
定装置は、例えば図1に示すように、直流パルス電圧、
交流電圧、直流電圧等の任意電圧が印加できる電源装
置、試薬を含む反応系に微小電圧を印加するための容器
内側面に電極を貼り付けた電極付き容器、電圧、周波
数、パルス幅をモニタするためのオシロスコープ、濁度
測定を行う分光光度計等からなる。電源装置としては、
任意のパルス発生装置、例えば市販のファンクションジ
ェネレータや細胞刺激装置等を使用することができる。
電極付き容器としてはガラス、プラスチック等の絶縁性
容器を用いることができ、電極材料としては、白金、ニ
ッケル等を用いることができる。
定装置は、例えば図1に示すように、直流パルス電圧、
交流電圧、直流電圧等の任意電圧が印加できる電源装
置、試薬を含む反応系に微小電圧を印加するための容器
内側面に電極を貼り付けた電極付き容器、電圧、周波
数、パルス幅をモニタするためのオシロスコープ、濁度
測定を行う分光光度計等からなる。電源装置としては、
任意のパルス発生装置、例えば市販のファンクションジ
ェネレータや細胞刺激装置等を使用することができる。
電極付き容器としてはガラス、プラスチック等の絶縁性
容器を用いることができ、電極材料としては、白金、ニ
ッケル等を用いることができる。
【０００７】免疫学的反応性物質の存在を検出又は測定
する方法としては、検体を緩衝液を主成分とする溶液に
加え、通常、室温〜３７℃で、０〜５分間処理した後、
次いで、例えば所定の抗体を含む試薬液（抗血清液）を
加えた後、或いは緩衝液を主成分とする溶液に抗血清液
を加え、通常、室温〜３７℃で、０〜５分間処理し、次
いで検体を加えた後、微小電圧を印加しながら若しくは
微小電圧を印加した後、例えば前出の測定装置を用いて
濁度変化量を求める方法が挙げられる。後者の試薬を含
む溶液に検体を加える方法では、微小電圧を印加しなが
ら又は印加直後に検体を加え、次いで濁度変化を測定す
ることもできる。
する方法としては、検体を緩衝液を主成分とする溶液に
加え、通常、室温〜３７℃で、０〜５分間処理した後、
次いで、例えば所定の抗体を含む試薬液（抗血清液）を
加えた後、或いは緩衝液を主成分とする溶液に抗血清液
を加え、通常、室温〜３７℃で、０〜５分間処理し、次
いで検体を加えた後、微小電圧を印加しながら若しくは
微小電圧を印加した後、例えば前出の測定装置を用いて
濁度変化量を求める方法が挙げられる。後者の試薬を含
む溶液に検体を加える方法では、微小電圧を印加しなが
ら又は印加直後に検体を加え、次いで濁度変化を測定す
ることもできる。
【０００８】本発明に用いられる試薬は、通常、水系媒
体中に分散して用いられる。試薬を含む水系媒体中の塩
濃度は特に規定されないが、好ましくは電気伝導度０〜
１００ｍＳ／ｃｍとなる濃度であり、より好ましくは２
〜６０ｍＳ／ｃｍである。塩としては、例えば塩化カリ
ウム、塩化ナトリウム、硝酸ナトリウム、硝酸アンモニ
ウム等が挙げられ、特に塩化カリウム、塩化ナトリウム
が好ましい。試薬を含む水系媒体の組成としては、当業
者にはよく知られている組成が使用できる。試薬には、
例えばアルブミン等のタンパク、ポリエチレングリコー
ル等の高分子、ツイーン、トライトン等の界面活性剤、
アジ化ナトリウム等の防腐剤等が添加されていてもよ
い。反応系の電気伝導度は小さい方が好ましく、電気伝
導度が小さくなると該反応系に印加できる電界強度を大
きくできるので免疫学的凝集反応の促進効果が得られ易
く望ましい。
体中に分散して用いられる。試薬を含む水系媒体中の塩
濃度は特に規定されないが、好ましくは電気伝導度０〜
１００ｍＳ／ｃｍとなる濃度であり、より好ましくは２
〜６０ｍＳ／ｃｍである。塩としては、例えば塩化カリ
ウム、塩化ナトリウム、硝酸ナトリウム、硝酸アンモニ
ウム等が挙げられ、特に塩化カリウム、塩化ナトリウム
が好ましい。試薬を含む水系媒体の組成としては、当業
者にはよく知られている組成が使用できる。試薬には、
例えばアルブミン等のタンパク、ポリエチレングリコー
ル等の高分子、ツイーン、トライトン等の界面活性剤、
アジ化ナトリウム等の防腐剤等が添加されていてもよ
い。反応系の電気伝導度は小さい方が好ましく、電気伝
導度が小さくなると該反応系に印加できる電界強度を大
きくできるので免疫学的凝集反応の促進効果が得られ易
く望ましい。
【０００９】
【実施例】以下、実施例および比較例をもって本発明を
詳細に説明するが、これらは本発明を限定するものでは
ない。
詳細に説明するが、これらは本発明を限定するものでは
ない。
【００１０】実施例１ （１） ＣＲＰ免疫比濁試薬 Ｎ−アッセイＴＩＡ ＣＲＰ−Ｓ（ニットーボーメディ
カル株式会社）免疫比濁用試薬を使用した。試薬はトリ
ス緩衝液と抗血清液（２０％抗ＣＲＰヤギ血清抗体）と
からなる。 （２） 直流パルス電圧印加装置 図１の実験装置を使用して、オシロスコープにより電極
間にかかる電位の条件を設定して直流パルス電圧を印加
した。（電極間３ｍｍ） （３） 測定方法 電極を張り合わせたガラスセルにトリス緩衝液８４０μ
ｌに検体３６μｌを分注し、３７℃で５分間インキュベ
ーションを行い、吸光度（ＯＤ１）を測定した後、抗血
清液（２０％抗ＣＲＰヤギ血清抗体）１２０μｌを添加
し、直流パルス電圧（波高値６Ｖ、パルス幅１０μ秒、
周波数１０ＫＨｚ）を３０秒間印加した。更に５分間イ
ンキュベーションを行い、再度、吸光度（ＯＤ２）を測
定した。各種検体についてΔＯＤ値（ＯＤ２−ＯＤ１）
を求め、検量線を作成した。検体としては、０.２％牛
血清アルブミンを含有するリン酸緩衝液（以下、０.２
％ＢＳＡ−ＰＢＳと略す）を用いて、市販のＣＲＰ標準
液を希釈してＣＲＰ濃度０〜４.１ｍｇ／ｄｌの検体を
調整し、測定に使用した。 （４） 結果 表１および図２に示した。
カル株式会社）免疫比濁用試薬を使用した。試薬はトリ
ス緩衝液と抗血清液（２０％抗ＣＲＰヤギ血清抗体）と
からなる。 （２） 直流パルス電圧印加装置 図１の実験装置を使用して、オシロスコープにより電極
間にかかる電位の条件を設定して直流パルス電圧を印加
した。（電極間３ｍｍ） （３） 測定方法 電極を張り合わせたガラスセルにトリス緩衝液８４０μ
ｌに検体３６μｌを分注し、３７℃で５分間インキュベ
ーションを行い、吸光度（ＯＤ１）を測定した後、抗血
清液（２０％抗ＣＲＰヤギ血清抗体）１２０μｌを添加
し、直流パルス電圧（波高値６Ｖ、パルス幅１０μ秒、
周波数１０ＫＨｚ）を３０秒間印加した。更に５分間イ
ンキュベーションを行い、再度、吸光度（ＯＤ２）を測
定した。各種検体についてΔＯＤ値（ＯＤ２−ＯＤ１）
を求め、検量線を作成した。検体としては、０.２％牛
血清アルブミンを含有するリン酸緩衝液（以下、０.２
％ＢＳＡ−ＰＢＳと略す）を用いて、市販のＣＲＰ標準
液を希釈してＣＲＰ濃度０〜４.１ｍｇ／ｄｌの検体を
調整し、測定に使用した。 （４） 結果 表１および図２に示した。
【００１１】
【表１】
【００１２】実施例２ 実施例１で用いたと同じ各検体と試薬を使用して、反応
系に印加するパルス電圧を波高値４.６Ｖ、パルス幅２
０μ秒、周波数１０ＫＨｚに設定し、１８秒間印加した
他は、実施例１と同様に操作して、濁度変化を測定し検
量線を作成した。結果を表２および図３に示した。
系に印加するパルス電圧を波高値４.６Ｖ、パルス幅２
０μ秒、周波数１０ＫＨｚに設定し、１８秒間印加した
他は、実施例１と同様に操作して、濁度変化を測定し検
量線を作成した。結果を表２および図３に示した。
【００１３】
【表２】
【００１４】比較例１ 実施例１で用いたと同じ各検体と試薬を使用した。反応
系にパルス電圧の印加を行わない他は、実施例1と同様
に操作して、濁度変化を測定し検量線を作成した。結果
を図２および図３に示した。図２および図３に示した結
果から、本発明方法は、従来法に比べ免疫学的凝集反応
を促進させ、高感度に免疫学的反応性物質を検出又は測
定することが可能であることを示している。
系にパルス電圧の印加を行わない他は、実施例1と同様
に操作して、濁度変化を測定し検量線を作成した。結果
を図２および図３に示した。図２および図３に示した結
果から、本発明方法は、従来法に比べ免疫学的凝集反応
を促進させ、高感度に免疫学的反応性物質を検出又は測
定することが可能であることを示している。
【００１５】実施例３ 電気分解を誘発する電圧の測定 塩化ナトリウムを精製水に溶解し、塩化ナトリウム濃度
０〜６００ｍＭに調整した。各濃度の塩化ナトリウム水
溶液の電気伝導度と電気分解開始電圧を測定した。印加
電圧は、直流パルス電圧（パルス幅１０μ秒、周波数１
０ＫＨｚ）を用いた。結果を表３および図４並びに表４
および図５に示した。
０〜６００ｍＭに調整した。各濃度の塩化ナトリウム水
溶液の電気伝導度と電気分解開始電圧を測定した。印加
電圧は、直流パルス電圧（パルス幅１０μ秒、周波数１
０ＫＨｚ）を用いた。結果を表３および図４並びに表４
および図５に示した。
【００１６】
【表３】
【００１７】
【表４】
【００１８】図４から、電気伝導度と塩濃度は比例関係
にあり、また、図５から、電気分解を誘発する電圧は、
電気伝導度と対数関数の関係にあり、試薬の電気伝導度
が小さいほど電気分解を起こし難いことが分かる。
にあり、また、図５から、電気分解を誘発する電圧は、
電気伝導度と対数関数の関係にあり、試薬の電気伝導度
が小さいほど電気分解を起こし難いことが分かる。
【００１９】
【発明の効果】本発明によれば、従来から用いられてい
る免疫比濁法若しくは免疫比朧法の試薬を使用して、従
来の方法よりも免疫学的凝集反応を促進させ、迅速に、
更に高感度で免疫学的反応性物質を検出又は測定するこ
とができる。
る免疫比濁法若しくは免疫比朧法の試薬を使用して、従
来の方法よりも免疫学的凝集反応を促進させ、迅速に、
更に高感度で免疫学的反応性物質を検出又は測定するこ
とができる。
【図１】本発明で使用した直流パルス電圧印加実験装置
の概略図である。
の概略図である。
【図２】従来法と本発明による方法の低濃度域の検量線
を比較したグラフである。
を比較したグラフである。
【図３】従来法と本発明による方法の低濃度域の検量線
を比較したグラフである。
を比較したグラフである。
【図４】塩濃度と電気伝導度との関係を表すグラフであ
る。
る。
【図５】電気伝導度と電気分解の誘発電圧との関係を表
すグラフである。
すグラフである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 吉村 佳典 茨城県つくば市千現１−13−７ イーグル １ 201号 (72)発明者 軽部 征夫 神奈川県川崎市宮前区東有馬１−３−16
Claims (3)
- 【請求項１】 抗原若しくは抗体を試薬として用いて、
免疫学的凝集反応により、免疫学的反応性物質を検出又
は測定する方法であって、該反応系に微小電圧を印加す
ることを特徴とする方法。 - 【請求項２】 微小電圧が直流、直流パルス、若しくは
交流に由来する請求項１の方法。 - 【請求項３】 微小電圧は反応系が電気分解を実質的に
起こさない電圧である請求項１の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23182696A JPH1073596A (ja) | 1996-09-02 | 1996-09-02 | 免疫学的反応性物質を検出又は測定する方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23182696A JPH1073596A (ja) | 1996-09-02 | 1996-09-02 | 免疫学的反応性物質を検出又は測定する方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1073596A true JPH1073596A (ja) | 1998-03-17 |
Family
ID=16929632
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP23182696A Withdrawn JPH1073596A (ja) | 1996-09-02 | 1996-09-02 | 免疫学的反応性物質を検出又は測定する方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH1073596A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005088309A1 (ja) * | 2004-03-12 | 2005-09-22 | Pulse-Immunotech Corporation | 親和性物質測定方法 |
| WO2009031274A1 (ja) * | 2007-09-03 | 2009-03-12 | Panasonic Corporation | 測定チップ |
| JP2017104870A (ja) * | 2017-03-24 | 2017-06-15 | 菊地 奈美枝 | 強酸性水および強アルカリ性水の製造方法 |
| JP2021021631A (ja) * | 2019-07-26 | 2021-02-18 | 株式会社ファンケル | 角層のターンオーバー遅延を評価する方法 |
-
1996
- 1996-09-02 JP JP23182696A patent/JPH1073596A/ja not_active Withdrawn
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005088309A1 (ja) * | 2004-03-12 | 2005-09-22 | Pulse-Immunotech Corporation | 親和性物質測定方法 |
| WO2009031274A1 (ja) * | 2007-09-03 | 2009-03-12 | Panasonic Corporation | 測定チップ |
| JP2017104870A (ja) * | 2017-03-24 | 2017-06-15 | 菊地 奈美枝 | 強酸性水および強アルカリ性水の製造方法 |
| JP2021021631A (ja) * | 2019-07-26 | 2021-02-18 | 株式会社ファンケル | 角層のターンオーバー遅延を評価する方法 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A300 | Withdrawal of application because of no request for examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A300 Effective date: 20031104 |