JPH11106355A - 標的細胞へ治療学上活性な物質を輪送するのに有用な組成物及びその遺伝子治療における使用 - Google Patents
標的細胞へ治療学上活性な物質を輪送するのに有用な組成物及びその遺伝子治療における使用Info
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Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
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Abstract
(57)【要約】
本発明は、少なくとも一つの治療上活性な物質を標的細
胞の内部に転移させるために意図され、少なくとも一つ
の治療上活性な物質と、非プロトン性極性化合物の特定
の群から選択される少なくとも一つの極性化合物との混
合物を含むことを特徴とする組成物に関する。この治療
上活性な物質は好ましくはポリヌクレオチドであり、極
性化合物は、ポリヌクレオチドの標的細胞の内部へのト
ランスフェクションの能力を改善するＤＰＳＯである。
本発明による組成物は、遺伝子治療によってヒトまたは
動物の体の治療をするための、診断上、治療上、予防上
またはワクチン接種用の薬剤として使用され得る。
胞の内部に転移させるために意図され、少なくとも一つ
の治療上活性な物質と、非プロトン性極性化合物の特定
の群から選択される少なくとも一つの極性化合物との混
合物を含むことを特徴とする組成物に関する。この治療
上活性な物質は好ましくはポリヌクレオチドであり、極
性化合物は、ポリヌクレオチドの標的細胞の内部へのト
ランスフェクションの能力を改善するＤＰＳＯである。
本発明による組成物は、遺伝子治療によってヒトまたは
動物の体の治療をするための、診断上、治療上、予防上
またはワクチン接種用の薬剤として使用され得る。
Description
【発明の詳細な説明】本発明は、治療上活性な物質を、
標識細胞、特に脊椎動物細胞、さらに具体的には哺乳動
物細胞に導入するのに使用され得る組成物に関する。さ
らに具体的には、本発明は、治療上活性な物質、特にポ
リヌクレオチドを標的細胞に転移させるためのベクター
を調製するためのこの組成物の使用に関する。
標識細胞、特に脊椎動物細胞、さらに具体的には哺乳動
物細胞に導入するのに使用され得る組成物に関する。さ
らに具体的には、本発明は、治療上活性な物質、特にポ
リヌクレオチドを標的細胞に転移させるためのベクター
を調製するためのこの組成物の使用に関する。
【０００１】遺伝子疾患は特に、特定の遺伝子の発現機
能不全か、または機能しない変異した遺伝子の発現によ
る。例えば嚢胞性繊維症は、平均余命が２５から３０年
の致死遺伝子疾患の最も頻発するもの（1/2000）とみな
されており、粘膜細胞からの分泌物の実質的濃度上昇、
慢性の肺性発作および膵臓の外分泌不全を特徴とする。
この疾病は、電解質、特に塩化物の上皮膜を経る輸送に
おける障害に関連しているが、この障害はＣＦＴＲ（嚢
胞性繊維経膜伝導性制御）遺伝子の変異の結果である
（Rommens, Science 245 (1989), 1059-1066; Rosenfel
d, Chest 109 (1996), 241-252）。この種の疾患に最
も適すると思われる治療上の解決法は、観察される細胞
性機能不全を正常にするために標的細胞に機能性ＣＦＴ
Ｒポリペプチドをコードする遺伝子を転移させる方法で
ある。遺伝子治療とも呼ばれるこのアプローチの背景に
おいては、何人かの著者は、特に利用しやすいという結
果から、呼吸器の上皮細胞が、例えば肺への注入のよう
な肺内投与という手段により、特に好ましい標的である
ことを示している。電解質輸送の回復が観察されるため
には標的細胞において通常のＣＦＴＲ遺伝子の発現の約
５〜７％の発現レベルが得られなければならないことが
示された。同様に、いくつかの刊行物では、癌になった
標的細胞へ遺伝子を転移する技術を使用することによ
る、腫瘍の除去、あるいは除去しそこなった場合に腫瘍
の進行を遅らせる可能性が記述されている。いくつかの
アプローチ、特に、腫瘍に対して細胞性免疫応答を誘導
または活性化できる免疫刺激遺伝子を転移させること
（免疫療法）（例えばそのような遺伝子の治療的使用の
例として、サイトカイン類をコードする遺伝子の投与が
挙げられる）遺伝子を発現する細胞に毒性を与える細胞
毒性遺伝子（例えば１型単純ヘルペスウィルス（ＨＳＶ
−１）のｔｋ遺伝子）を転移させること、あるいは、抗
腫瘍遺伝子、すなわち、網膜芽腫遺伝子もしくはｐ５３
遺伝子のような腫瘍抑制遺伝子、または、アンチセンス
分子や腫瘍遺伝子の特定のメッセンジャーＲＮＡを分解
できるまたはリボザイムのように、腫瘍遺伝子の活性を
阻害できるポリヌクレオチドを転移させることが検討さ
れている。
能不全か、または機能しない変異した遺伝子の発現によ
る。例えば嚢胞性繊維症は、平均余命が２５から３０年
の致死遺伝子疾患の最も頻発するもの（1/2000）とみな
されており、粘膜細胞からの分泌物の実質的濃度上昇、
慢性の肺性発作および膵臓の外分泌不全を特徴とする。
この疾病は、電解質、特に塩化物の上皮膜を経る輸送に
おける障害に関連しているが、この障害はＣＦＴＲ（嚢
胞性繊維経膜伝導性制御）遺伝子の変異の結果である
（Rommens, Science 245 (1989), 1059-1066; Rosenfel
d, Chest 109 (1996), 241-252）。この種の疾患に最
も適すると思われる治療上の解決法は、観察される細胞
性機能不全を正常にするために標的細胞に機能性ＣＦＴ
Ｒポリペプチドをコードする遺伝子を転移させる方法で
ある。遺伝子治療とも呼ばれるこのアプローチの背景に
おいては、何人かの著者は、特に利用しやすいという結
果から、呼吸器の上皮細胞が、例えば肺への注入のよう
な肺内投与という手段により、特に好ましい標的である
ことを示している。電解質輸送の回復が観察されるため
には標的細胞において通常のＣＦＴＲ遺伝子の発現の約
５〜７％の発現レベルが得られなければならないことが
示された。同様に、いくつかの刊行物では、癌になった
標的細胞へ遺伝子を転移する技術を使用することによ
る、腫瘍の除去、あるいは除去しそこなった場合に腫瘍
の進行を遅らせる可能性が記述されている。いくつかの
アプローチ、特に、腫瘍に対して細胞性免疫応答を誘導
または活性化できる免疫刺激遺伝子を転移させること
（免疫療法）（例えばそのような遺伝子の治療的使用の
例として、サイトカイン類をコードする遺伝子の投与が
挙げられる）遺伝子を発現する細胞に毒性を与える細胞
毒性遺伝子（例えば１型単純ヘルペスウィルス（ＨＳＶ
−１）のｔｋ遺伝子）を転移させること、あるいは、抗
腫瘍遺伝子、すなわち、網膜芽腫遺伝子もしくはｐ５３
遺伝子のような腫瘍抑制遺伝子、または、アンチセンス
分子や腫瘍遺伝子の特定のメッセンジャーＲＮＡを分解
できるまたはリボザイムのように、腫瘍遺伝子の活性を
阻害できるポリヌクレオチドを転移させることが検討さ
れている。
【０００２】これまで３０年にわたって、様々な異種遺
伝子を細胞、特にほ乳類の細胞に導入するために多くの
手段が開発されてきた。これらの種々の技術は二つの部
類に分類され得る。第一の部類は、ミクロインジェクシ
ョン、電気穿孔法（エレクトロポレーション）または粒
子ボンバードのような、効果的ではあるが大部分はイン
ビトロでの適用に制限され、その実行は煩わしく細心の
注意が必要となる物理的技術に関する。第二の部類は、
転移される遺伝子を、前記の物質の導入を促進する生物
学的または合成のベクターに結合させる、分子生物学お
よび細胞生物学に関する技術を含む。
伝子を細胞、特にほ乳類の細胞に導入するために多くの
手段が開発されてきた。これらの種々の技術は二つの部
類に分類され得る。第一の部類は、ミクロインジェクシ
ョン、電気穿孔法（エレクトロポレーション）または粒
子ボンバードのような、効果的ではあるが大部分はイン
ビトロでの適用に制限され、その実行は煩わしく細心の
注意が必要となる物理的技術に関する。第二の部類は、
転移される遺伝子を、前記の物質の導入を促進する生物
学的または合成のベクターに結合させる、分子生物学お
よび細胞生物学に関する技術を含む。
【０００３】現在、最も効果的なベクターは、ウィルス
ベクター、特にアデノウィルスベクターまたはレトロウ
ィルスベクターである。開発された技術は、細胞膜を通
り抜け、遺伝子物質の切断を回避し、そしてそのゲノム
を核に入り込ませるために、ウィルスが持っている生来
の特性に基づいている。これらのウィルスは既に多くの
研究の主題となっており、そのいくつかは既に、例えば
ワクチン投与、免疫療法、または遺伝的不全を補うこと
を目的とする治療のために、ヒトにおいて遺伝子ベクタ
ーとして実験的に使用されている。しかしながら、この
ウィルスによるアプローチは、特にウィルスゲノム内で
の限られたクローニング能力のために、産生された感染
性ウィルス粒子が宿主の生体内および環境にまき散らさ
れる危険性、レトロウィルスベクターの場合は宿主細胞
への挿入の結果、人工的変異誘発が起こる危険性、およ
び免疫応答および炎症性の応答が治療処置のあいだにイ
ンビボにおいて強く誘導されるという事実といった多く
の制限を受け、従って実質上、考えられる投与の数は制
限される（McCoy, Human Gene Therapy 6 (1995),1553-
1560; Yang, Immunity 1 (1996), 433-442）。特にヒト
におけるウィルスベクターを使用する環境におけるこれ
らの多くの障害から、いくつかのグループは、ポリヌク
レオチドを転移させるための代わりのシステムを開発し
た。
ベクター、特にアデノウィルスベクターまたはレトロウ
ィルスベクターである。開発された技術は、細胞膜を通
り抜け、遺伝子物質の切断を回避し、そしてそのゲノム
を核に入り込ませるために、ウィルスが持っている生来
の特性に基づいている。これらのウィルスは既に多くの
研究の主題となっており、そのいくつかは既に、例えば
ワクチン投与、免疫療法、または遺伝的不全を補うこと
を目的とする治療のために、ヒトにおいて遺伝子ベクタ
ーとして実験的に使用されている。しかしながら、この
ウィルスによるアプローチは、特にウィルスゲノム内で
の限られたクローニング能力のために、産生された感染
性ウィルス粒子が宿主の生体内および環境にまき散らさ
れる危険性、レトロウィルスベクターの場合は宿主細胞
への挿入の結果、人工的変異誘発が起こる危険性、およ
び免疫応答および炎症性の応答が治療処置のあいだにイ
ンビボにおいて強く誘導されるという事実といった多く
の制限を受け、従って実質上、考えられる投与の数は制
限される（McCoy, Human Gene Therapy 6 (1995),1553-
1560; Yang, Immunity 1 (1996), 433-442）。特にヒト
におけるウィルスベクターを使用する環境におけるこれ
らの多くの障害から、いくつかのグループは、ポリヌク
レオチドを転移させるための代わりのシステムを開発し
た。
【０００４】現在いくつかの非ウィルス的な方法が利用
可能である。例えばリン酸カルシウムとの共沈、ＤＯＴ
ＭＡ(Felgner, PNAS 84 (1987), 7413-7417)、ＤＯＧＳ
またはトランスフェクタム(Behr, PNAS 86 (1989), 698
2-6986)、ＤＭＲＩＥおよびＤＯＲＩＥ (Felgner,Metho
d５(1993), 67-75)、ＤＣ−ＣＨＯＬ (Gao, BBRC 179
(1991), 280-285)、ＤＯＴＡＰ(McLachlan, Gene Thera
py 2 (1995), 674-622)またはリポフェクトアミンなど
の陽イオン性脂質の使用、ウィルスのシステムを模した
受容体(総説として、Cotten, Current Opinion in Biot
echnology 4 (1993), 705-710を参照)の使用、および
ポリアミドアミン（Haensler, Bioconjugate Chem. 4
(1993), 372-379）のようなポリマーの使用が挙げられ
る。これらの技術は有望ではあるが、しかしながら、特
にインビボでの効果のレベルが低いことなど、多くの制
限を受け、インビボでの効果が低いことが実質的に遺伝
子治療におけるこれらの技術の適用を制限している。さ
らに、これらの技術のいくつかは、特に使用される分子
の毒性（ポリブレンが例として挙げられる）のため、ま
たはこれらの化合物の導入に対する炎症性の反応（陽イ
オン性脂質の場合、例として、Scheule, Human Gene Th
erapy 8 (1997), 689-707）のために、インビトロでの
適用に制限されるか、または、多量の核酸物質がエンド
サイトーシスの間、小胞にとらえられて、そのためにも
はや治療に役立たなくなる受容体の場合は制御するのが
困難である。最終的には、これらの技術は環境因子に比
較的敏感であり、これらを標的細胞または選択された投
与形態に適応させるため、そしてさらに具体的にはこれ
らをインビトロのモデルからインビボでの投与に移行さ
せるために、長期の細心の注意を要する開発が必要であ
る。
可能である。例えばリン酸カルシウムとの共沈、ＤＯＴ
ＭＡ(Felgner, PNAS 84 (1987), 7413-7417)、ＤＯＧＳ
またはトランスフェクタム(Behr, PNAS 86 (1989), 698
2-6986)、ＤＭＲＩＥおよびＤＯＲＩＥ (Felgner,Metho
d５(1993), 67-75)、ＤＣ−ＣＨＯＬ (Gao, BBRC 179
(1991), 280-285)、ＤＯＴＡＰ(McLachlan, Gene Thera
py 2 (1995), 674-622)またはリポフェクトアミンなど
の陽イオン性脂質の使用、ウィルスのシステムを模した
受容体(総説として、Cotten, Current Opinion in Biot
echnology 4 (1993), 705-710を参照)の使用、および
ポリアミドアミン（Haensler, Bioconjugate Chem. 4
(1993), 372-379）のようなポリマーの使用が挙げられ
る。これらの技術は有望ではあるが、しかしながら、特
にインビボでの効果のレベルが低いことなど、多くの制
限を受け、インビボでの効果が低いことが実質的に遺伝
子治療におけるこれらの技術の適用を制限している。さ
らに、これらの技術のいくつかは、特に使用される分子
の毒性（ポリブレンが例として挙げられる）のため、ま
たはこれらの化合物の導入に対する炎症性の反応（陽イ
オン性脂質の場合、例として、Scheule, Human Gene Th
erapy 8 (1997), 689-707）のために、インビトロでの
適用に制限されるか、または、多量の核酸物質がエンド
サイトーシスの間、小胞にとらえられて、そのためにも
はや治療に役立たなくなる受容体の場合は制御するのが
困難である。最終的には、これらの技術は環境因子に比
較的敏感であり、これらを標的細胞または選択された投
与形態に適応させるため、そしてさらに具体的にはこれ
らをインビトロのモデルからインビボでの投与に移行さ
せるために、長期の細心の注意を要する開発が必要であ
る。
【０００５】Ｗｏｌｆｆ（Science 2478 (1990), 1465-
1468）は、標的細胞への導入を容易にする他の化合物の
結合していない精製ポリヌクレオチドを単に筋内経路に
よって注入することからなるシステムである、筋細胞に
ポリヌクレオチドを導入するための魅力的で単純なシス
テムを示した。気管内注入（Meyer, Gene Therapy 2(19
95), 450-460）、または動脈注射（Riessen, Human Gen
e Therapy 4 (1993),７４９−７５８）によって、より
最近得られた結果は、そのようなシステムがもたらす重
要性を裏付けている。しかしながら組織に導入された遺
伝子が発現されるレベルはなおかなり制限されるので、
特に肺疾患に関しては、この技術は有効な遺伝子治療と
いう面において実行可能ではない。いくつかの研究がこ
のタイプのヌクレオチドの細胞への導入を改善するため
の代替法を示唆している。例えば、特許出願ＷＯ９５／
２６７１８は、細胞を遺伝子ワクチン促進剤および核酸
分子に接触させる工程を含む、細胞への遺伝物質の導入
方法に関する。そこに記述されている特定の実施例によ
れば、この遺伝子ワクチン促進剤はＤＭＳＯからなり得
る。しかしながら、この特許出願には実験データが示さ
れておらず、Ａｕｂｉｎ（Somatic Cell Mol. Genet. 1
4 (1988), 155-167）またはＲｈｉｍ (Oncogene 4(198
9), 1403-1409)が行った実験は、ＤＭＳＯの使用をポリ
ブレンのような静電架橋分子の使用と組み合わせる必要
性を強調した。より具体的には、Ａｕｂｉｎは二工程の
方法を記述している。第一の必須の工程によれば、トラ
ンスフェクションされるＤＮＡは、このＤＮＡが細胞表
面に吸着するように、静電架橋分子、すなわちポリブレ
ンと接触させ、第二工程によれば、こうして吸着したＤ
ＮＡを、細胞へのＤＮＡの導入を改善するためにＤＭＳ
Ｏと接触させる。これらの研究は、インビボでの適用に
好適であり、ポリヌクレオチド、より具体的にはいかな
るトランスフェクション促進化合物ももたないポリヌク
レオチドを異なる細胞型に効率的に導入することを意図
し、そして、その核酸がその標的細胞において発現する
レベルを改善するプロトコルを特定することは出来な
い。このほかに、Ｏｕｄｈｉｒｉ (PNAS 94 (1997), 1
651-1656)は、細胞への導入を促進するいかなる化合物
ももたないプラスミドの気管内注入の後、肺細胞におい
てルシフェラーゼ遺伝子の発現が得られなかったことを
示した。
1468）は、標的細胞への導入を容易にする他の化合物の
結合していない精製ポリヌクレオチドを単に筋内経路に
よって注入することからなるシステムである、筋細胞に
ポリヌクレオチドを導入するための魅力的で単純なシス
テムを示した。気管内注入（Meyer, Gene Therapy 2(19
95), 450-460）、または動脈注射（Riessen, Human Gen
e Therapy 4 (1993),７４９−７５８）によって、より
最近得られた結果は、そのようなシステムがもたらす重
要性を裏付けている。しかしながら組織に導入された遺
伝子が発現されるレベルはなおかなり制限されるので、
特に肺疾患に関しては、この技術は有効な遺伝子治療と
いう面において実行可能ではない。いくつかの研究がこ
のタイプのヌクレオチドの細胞への導入を改善するため
の代替法を示唆している。例えば、特許出願ＷＯ９５／
２６７１８は、細胞を遺伝子ワクチン促進剤および核酸
分子に接触させる工程を含む、細胞への遺伝物質の導入
方法に関する。そこに記述されている特定の実施例によ
れば、この遺伝子ワクチン促進剤はＤＭＳＯからなり得
る。しかしながら、この特許出願には実験データが示さ
れておらず、Ａｕｂｉｎ（Somatic Cell Mol. Genet. 1
4 (1988), 155-167）またはＲｈｉｍ (Oncogene 4(198
9), 1403-1409)が行った実験は、ＤＭＳＯの使用をポリ
ブレンのような静電架橋分子の使用と組み合わせる必要
性を強調した。より具体的には、Ａｕｂｉｎは二工程の
方法を記述している。第一の必須の工程によれば、トラ
ンスフェクションされるＤＮＡは、このＤＮＡが細胞表
面に吸着するように、静電架橋分子、すなわちポリブレ
ンと接触させ、第二工程によれば、こうして吸着したＤ
ＮＡを、細胞へのＤＮＡの導入を改善するためにＤＭＳ
Ｏと接触させる。これらの研究は、インビボでの適用に
好適であり、ポリヌクレオチド、より具体的にはいかな
るトランスフェクション促進化合物ももたないポリヌク
レオチドを異なる細胞型に効率的に導入することを意図
し、そして、その核酸がその標的細胞において発現する
レベルを改善するプロトコルを特定することは出来な
い。このほかに、Ｏｕｄｈｉｒｉ (PNAS 94 (1997), 1
651-1656)は、細胞への導入を促進するいかなる化合物
ももたないプラスミドの気管内注入の後、肺細胞におい
てルシフェラーゼ遺伝子の発現が得られなかったことを
示した。
【０００６】このように、本発明の基礎となる技術的課
題は、治療上活性な物質の標的細胞に効果的に転移させ
るための手段と方法を提供することである。この技術的
問題の解決は、特許請求の範囲に特徴づけられる実施態
様によって達成され、すなわち、出願人は、治療上活性
な物質、好ましくはポリヌクレオチドを標的細胞へ転移
させるための特異的な組成物を開発した。この組成物
は、特に遺伝子治療という面において、インビボで特に
その成分が無害であることから、使用が考えられ得る。
題は、治療上活性な物質の標的細胞に効果的に転移させ
るための手段と方法を提供することである。この技術的
問題の解決は、特許請求の範囲に特徴づけられる実施態
様によって達成され、すなわち、出願人は、治療上活性
な物質、好ましくはポリヌクレオチドを標的細胞へ転移
させるための特異的な組成物を開発した。この組成物
は、特に遺伝子治療という面において、インビボで特に
その成分が無害であることから、使用が考えられ得る。
【０００７】このように本発明は、第一に、少なくとも
一つの治療上活性な物質と、非プロトン性極性化合物の
特定の群より選択される少なくとも一つの極性化合物と
の混合物を含むことに特徴づけられる組成物に関する。
一つの治療上活性な物質と、非プロトン性極性化合物の
特定の群より選択される少なくとも一つの極性化合物と
の混合物を含むことに特徴づけられる組成物に関する。
【０００８】本発明に関して、「非プロトン性極性化合
物」は、いかなる陽イオン化する水素原子も含まない化
合物（非プロトン性）を指すと理解される。このような
化合物の特性は広く文献に記述されている（例えば、Vo
llhardtおよびSchore,1994,Trait de Chimie Organique
[Treatise on Organic Chemistry], 第二版 De Boeck大
学編集を参照）。特にこのような化合物は、天然からま
たは合成して、または、当初は上記の特性を示さない初
期化合物の化学的変更によって得ることができる。当業
者はこのような化合物を同定するのに必要な知識を持っ
ている。以下に記載するような本発明の組成物、方法お
よび使用に用いられる非プロトン性極性化合物は様々な
販売元からの購入で得ることが可能であり、または先行
技術に記載されたように製造することが可能である。多
数の極性化合物が本発明に関連して使用されることが考
えられ得る。
物」は、いかなる陽イオン化する水素原子も含まない化
合物（非プロトン性）を指すと理解される。このような
化合物の特性は広く文献に記述されている（例えば、Vo
llhardtおよびSchore,1994,Trait de Chimie Organique
[Treatise on Organic Chemistry], 第二版 De Boeck大
学編集を参照）。特にこのような化合物は、天然からま
たは合成して、または、当初は上記の特性を示さない初
期化合物の化学的変更によって得ることができる。当業
者はこのような化合物を同定するのに必要な知識を持っ
ている。以下に記載するような本発明の組成物、方法お
よび使用に用いられる非プロトン性極性化合物は様々な
販売元からの購入で得ることが可能であり、または先行
技術に記載されたように製造することが可能である。多
数の極性化合物が本発明に関連して使用されることが考
えられ得る。
【０００９】この発明の第一の態様によれば、好ましい
ものとしては、（ａ） 一般式Ｉ
ものとしては、（ａ） 一般式Ｉ
【００１０】
【化４】 （この式中、Ｒ１およびＲ２は同一かまたは異ってお
り、任意に繰り返されていてもよく、直線状または分枝
状であり、かつ任意に置換されていてもよい、炭素原子
が１〜８個のアリル基、アルキル基、シクロアルキル
基、フルオロアルキル基、アルケニル基またはオキシア
ルキル基であり、ただし、Ｒ１またはＲ２が１または２
個の炭素原子の基である場合は、それぞれＲ２またはＲ
１は少なくとも３個の炭素原子の基であり、Ｒ１とＲ２
は分子を環化するために連結可能である。）、（ｂ）一
般式II
り、任意に繰り返されていてもよく、直線状または分枝
状であり、かつ任意に置換されていてもよい、炭素原子
が１〜８個のアリル基、アルキル基、シクロアルキル
基、フルオロアルキル基、アルケニル基またはオキシア
ルキル基であり、ただし、Ｒ１またはＲ２が１または２
個の炭素原子の基である場合は、それぞれＲ２またはＲ
１は少なくとも３個の炭素原子の基であり、Ｒ１とＲ２
は分子を環化するために連結可能である。）、（ｂ）一
般式II
【００１１】
【化５】 （この式中、Ｒ３およびＲ４は同一かまたは異ってお
り、任意に繰り返されていてもよく、直線状または分枝
状であり、かつ任意に置換されていてもよい、炭素原子
が１〜８個のアリル基、アルキル基、シクロアルキル
基、フルオロアルキル基、アルケニル基またはオキシア
ルキル基であり、Ｒ３とＲ４は分子を環化するために連
結可能である。）、（ｃ）一般式III
り、任意に繰り返されていてもよく、直線状または分枝
状であり、かつ任意に置換されていてもよい、炭素原子
が１〜８個のアリル基、アルキル基、シクロアルキル
基、フルオロアルキル基、アルケニル基またはオキシア
ルキル基であり、Ｒ３とＲ４は分子を環化するために連
結可能である。）、（ｃ）一般式III
【００１２】
【化６】 （この式中、Ｒ３およびＲ４は同一かまたは異ってお
り、任意に繰り返されていてもよく、直線状または分枝
状であり、かつ任意に置換されていてもよい、炭素原子
が１〜８個のアリル基、アルキル基、シクロアルキル
基、フルオロアルキル基、アルケニル基またはオキシア
ルキル基であり、Ｒ５は（ＣＨ2）xであり、それぞれの
[Ｒ５-Ｓ]nの繰り返し中互いに独立であり、ｘは１〜６
であり、Ｒ５は任意に置換されていてもよく、ｎは１〜
５０であり、Ｒ３とＲ４は分子を環化するために連結可
能である。）、または、（ｄ）ジメチルホルムアミド、
ジメチルアセトアミド、テトラメチル尿素またはこれら
のいずれかの誘導体、により定義される非プロトン性極
性化合物が挙げられる。
り、任意に繰り返されていてもよく、直線状または分枝
状であり、かつ任意に置換されていてもよい、炭素原子
が１〜８個のアリル基、アルキル基、シクロアルキル
基、フルオロアルキル基、アルケニル基またはオキシア
ルキル基であり、Ｒ５は（ＣＨ2）xであり、それぞれの
[Ｒ５-Ｓ]nの繰り返し中互いに独立であり、ｘは１〜６
であり、Ｒ５は任意に置換されていてもよく、ｎは１〜
５０であり、Ｒ３とＲ４は分子を環化するために連結可
能である。）、または、（ｄ）ジメチルホルムアミド、
ジメチルアセトアミド、テトラメチル尿素またはこれら
のいずれかの誘導体、により定義される非プロトン性極
性化合物が挙げられる。
【００１３】好ましくは、このＲ１、Ｒ２、Ｒ３および
／またはＲ４の基は２〜６個の炭素原子、より好ましく
は２〜４個の炭素原子、そして特に好ましくは２〜３個
の炭素原子を含む。
／またはＲ４の基は２〜６個の炭素原子、より好ましく
は２〜４個の炭素原子、そして特に好ましくは２〜３個
の炭素原子を含む。
【００１４】「アルケニル」という表現は、炭素鎖がそ
の鎖に沿って１またはそれ以上の二重結合を含み得るこ
とを意味すると理解される。本発明によれば、極性化合
物のＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４および／またはＲ５の基は
置換され得る。このような置換は、特に、例えば化合物
またはインビトロまたはインビボへの投与後、それを取
り込んだ複合体の分布の可視化を可能にする標識分子
（ＵＳ４,７１１,９５５の標識分子を参照）、細胞標的
分子（リガンド）または固定分子より成り得る。科学刊
行物に広く記載されてきたこれらの因子は、特定の細胞
型の標的化、細胞への浸透の促進、エンドソームの溶解
または核への細胞内輸送を行う。これらの因子は、糖、
グリコール、ペプチド（例えば、ＧＲＰ、ガストリン放
出ペプチド）、オリゴヌクレオチド、脂質、ホルモン、
ビタミン、抗原、抗体（またはその断片）、特異的膜受
容体リガンド、抗リガンドと反応可能なリガンド、融合
ペプチド、核内ペプチド、または、前記化合物の複合
体、例えば、肝細胞の表面のアシアロ糖蛋白質受容体を
標的とするガラクトシル残基、膜融合のためのインフル
エンザウィルス血球凝集素のＨＡ−２サブユニット由来
のＩＮＦ−７融合ペプチド（Plank, J. Biol. Chem. 26
9 (1994), 12918-12924）、またはＳＶ４０ウィルスの
Ｔ抗原（Lanford, Cell 37 (1984), 801-813）またはエ
プスタイン・バーウィルスのＥＢＮＡ−１蛋白質 (Ambi
nder, J.Virol. 65 (1991), 1466-1478)由来の核シグナ
ル配列の、全てまたは一部から構成されてもよい。
の鎖に沿って１またはそれ以上の二重結合を含み得るこ
とを意味すると理解される。本発明によれば、極性化合
物のＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４および／またはＲ５の基は
置換され得る。このような置換は、特に、例えば化合物
またはインビトロまたはインビボへの投与後、それを取
り込んだ複合体の分布の可視化を可能にする標識分子
（ＵＳ４,７１１,９５５の標識分子を参照）、細胞標的
分子（リガンド）または固定分子より成り得る。科学刊
行物に広く記載されてきたこれらの因子は、特定の細胞
型の標的化、細胞への浸透の促進、エンドソームの溶解
または核への細胞内輸送を行う。これらの因子は、糖、
グリコール、ペプチド（例えば、ＧＲＰ、ガストリン放
出ペプチド）、オリゴヌクレオチド、脂質、ホルモン、
ビタミン、抗原、抗体（またはその断片）、特異的膜受
容体リガンド、抗リガンドと反応可能なリガンド、融合
ペプチド、核内ペプチド、または、前記化合物の複合
体、例えば、肝細胞の表面のアシアロ糖蛋白質受容体を
標的とするガラクトシル残基、膜融合のためのインフル
エンザウィルス血球凝集素のＨＡ−２サブユニット由来
のＩＮＦ−７融合ペプチド（Plank, J. Biol. Chem. 26
9 (1994), 12918-12924）、またはＳＶ４０ウィルスの
Ｔ抗原（Lanford, Cell 37 (1984), 801-813）またはエ
プスタイン・バーウィルスのＥＢＮＡ−１蛋白質 (Ambi
nder, J.Virol. 65 (1991), 1466-1478)由来の核シグナ
ル配列の、全てまたは一部から構成されてもよい。
【００１５】本発明によれば、前記の非プロトン性極性
化合物は、特に、ジ−ｎ−プロピルスルホキシド（ＤＰ
ＳＯ）、ジメチルスルホン、スルホラン、テトラメチレ
ンスルホキシド（ＴＥＭＳＯ）、１−メチル−２−ピロ
リドン、メチル−ジ−メチルスルホキシド、メチルジエ
チルスルホキシドおよびこれらの誘導体よりなる群から
選択される。本発明の好適な形態によれば、前記の非プ
ロトン性極性化合物は、ジ−ｎ−プロピルスルホキシド
（ＤＰＳＯ）およびその誘導体よりなる群から選択され
る。付記された実施例に記載されているとおり、ＤＰＳ
ＯはＤＮＡと混合して投与されるときに、細胞によるＤ
ＮＡの取り込みを有意に促進することがわかった。前記
分子のエナンチオマーもまた本発明の範囲に含まれる。
化合物は、特に、ジ−ｎ−プロピルスルホキシド（ＤＰ
ＳＯ）、ジメチルスルホン、スルホラン、テトラメチレ
ンスルホキシド（ＴＥＭＳＯ）、１−メチル−２−ピロ
リドン、メチル−ジ−メチルスルホキシド、メチルジエ
チルスルホキシドおよびこれらの誘導体よりなる群から
選択される。本発明の好適な形態によれば、前記の非プ
ロトン性極性化合物は、ジ−ｎ−プロピルスルホキシド
（ＤＰＳＯ）およびその誘導体よりなる群から選択され
る。付記された実施例に記載されているとおり、ＤＰＳ
ＯはＤＮＡと混合して投与されるときに、細胞によるＤ
ＮＡの取り込みを有意に促進することがわかった。前記
分子のエナンチオマーもまた本発明の範囲に含まれる。
【００１６】本発明の目的のため、前述の化合物のいず
れの「誘導体」も、その化学構造が上述の化合物の化学
構造を基本とし、かつ標的細胞に物質を転移させるため
に使用され得る分子を意味する。このような誘導化合物
を用いた物質のトランスフェクションでの細胞による物
質の取り込みを促進する能力は、天然に存在する非プロ
トン性極性化合物および上記した化合物に比較して強め
られてさえいるかもしれない。このような誘導体の製造
方法は当業者には周知であり、例えば、Beilstein, Han
dbook of Organic Chemistry, Springer edition New Y
ork Inc., 175Fifth Avenue, New York, N.Y. 10010 U.
S.A.およびOrganic Synthesis, Wiley,New York, U.S.
A.に記載されている。前記の誘導体は、当業者に知られ
た方法、または、例えば付記された実施例に記載された
方法に従って、トランスフェクションでの実用性につい
て試験され得る。更に、例えば当業者に知られた方法に
よって、適当な誘導体および類似体のコンピュータが補
助した設計物が使用され得る。更に、ＤＰＳＯおよび他
の関連する非プロトン性極性化合物の三次元的および／
または結晶学的構造が、ＤＮＡ取り込みを促進すること
のできる化合物の設計のために使用され得る(Rose, Bio
chemistry 35 (1996), 12933-12944; Rutenber, Bioor
g. Med. Chem. 4 (1996), 1545-1558)。
れの「誘導体」も、その化学構造が上述の化合物の化学
構造を基本とし、かつ標的細胞に物質を転移させるため
に使用され得る分子を意味する。このような誘導化合物
を用いた物質のトランスフェクションでの細胞による物
質の取り込みを促進する能力は、天然に存在する非プロ
トン性極性化合物および上記した化合物に比較して強め
られてさえいるかもしれない。このような誘導体の製造
方法は当業者には周知であり、例えば、Beilstein, Han
dbook of Organic Chemistry, Springer edition New Y
ork Inc., 175Fifth Avenue, New York, N.Y. 10010 U.
S.A.およびOrganic Synthesis, Wiley,New York, U.S.
A.に記載されている。前記の誘導体は、当業者に知られ
た方法、または、例えば付記された実施例に記載された
方法に従って、トランスフェクションでの実用性につい
て試験され得る。更に、例えば当業者に知られた方法に
よって、適当な誘導体および類似体のコンピュータが補
助した設計物が使用され得る。更に、ＤＰＳＯおよび他
の関連する非プロトン性極性化合物の三次元的および／
または結晶学的構造が、ＤＮＡ取り込みを促進すること
のできる化合物の設計のために使用され得る(Rose, Bio
chemistry 35 (1996), 12933-12944; Rutenber, Bioor
g. Med. Chem. 4 (1996), 1545-1558)。
【００１７】本発明の他の実施態様によれば、前記の非
プロトン性極性化合物はジメチルホルムアミド（ＤＭ
Ｆ）、ジメチルアセトアミド、テトラメチル尿素（ＴＭ
Ｕ）およびこれらの誘導体よりなる群から選択される。
プロトン性極性化合物はジメチルホルムアミド（ＤＭ
Ｆ）、ジメチルアセトアミド、テトラメチル尿素（ＴＭ
Ｕ）およびこれらの誘導体よりなる群から選択される。
【００１８】本発明の組成物の活性物質は、これに制限
はされないが、ペプチド、蛋白質、ポリヌクレオチド、
抗体、低分子の有機化合物リガンド、ホルモン、ペプチ
ド類似体、ＰＮＡ、およびこれに類する、好ましくは被
験者において生理学的反応を誘導および／または媒介す
ることができるものを包含する。好ましくは、本発明に
よる組成物の活性物質はポリヌクレオチドであり、ポリ
ヌクレオチドの細胞へトランスフェクションされる能力
を改善することが可能な非プロトン性極性化合物を伴っ
ている。
はされないが、ペプチド、蛋白質、ポリヌクレオチド、
抗体、低分子の有機化合物リガンド、ホルモン、ペプチ
ド類似体、ＰＮＡ、およびこれに類する、好ましくは被
験者において生理学的反応を誘導および／または媒介す
ることができるものを包含する。好ましくは、本発明に
よる組成物の活性物質はポリヌクレオチドであり、ポリ
ヌクレオチドの細胞へトランスフェクションされる能力
を改善することが可能な非プロトン性極性化合物を伴っ
ている。
【００１９】「ポリヌクレオチド」は、天然から単離さ
れ、または合成された、直鎖状または環状の、二本鎖ま
たは一本鎖のＤＮＡおよび／またはＲＮＡ断片を意味す
ると理解され、また、この用語は、標識されたまたは標
識されていない（例えば、ＵＳ４,７１１,９５５または
ＥＰ３０２１７５参照）、修飾されたまたは修飾されて
いない（例としてＵＳ５,５２５,７１１参照）ヌクレオ
チドの正確な配列を示し、またその長さを制限すること
なく核酸の断片または領域を規定し得る。ポリヌクレオ
チドは、特に、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、プラスミドＤ
ＮＡ、細胞へのその導入を促進するいかなる化合物もも
たないポリヌクレオチド、少なくとも１つの、特にウィ
ルス由来の、更には特に、アデノウィルスまたはレトロ
ウィルス由来のポリペプチドと、または合成ポリペプチ
ドと結合しているポリヌクレオチド、リガンドと結合し
ているポリヌクレオチド、少なくとも１つの陽イオン両
親媒性化合物、特に脂質と結合しているポリヌクレオチ
ド、少なくとも１つの陽イオン性または中性のポリマー
と結合しているポリヌクレオチド、メッセンジャーＲＮ
Ａ、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、転移ＲＮＡ、リ
ボソームＲＮＡ、またはこれらのようなＲＮＡをコード
するＤＮＡを表すと理解される。
れ、または合成された、直鎖状または環状の、二本鎖ま
たは一本鎖のＤＮＡおよび／またはＲＮＡ断片を意味す
ると理解され、また、この用語は、標識されたまたは標
識されていない（例えば、ＵＳ４,７１１,９５５または
ＥＰ３０２１７５参照）、修飾されたまたは修飾されて
いない（例としてＵＳ５,５２５,７１１参照）ヌクレオ
チドの正確な配列を示し、またその長さを制限すること
なく核酸の断片または領域を規定し得る。ポリヌクレオ
チドは、特に、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、プラスミドＤ
ＮＡ、細胞へのその導入を促進するいかなる化合物もも
たないポリヌクレオチド、少なくとも１つの、特にウィ
ルス由来の、更には特に、アデノウィルスまたはレトロ
ウィルス由来のポリペプチドと、または合成ポリペプチ
ドと結合しているポリヌクレオチド、リガンドと結合し
ているポリヌクレオチド、少なくとも１つの陽イオン両
親媒性化合物、特に脂質と結合しているポリヌクレオチ
ド、少なくとも１つの陽イオン性または中性のポリマー
と結合しているポリヌクレオチド、メッセンジャーＲＮ
Ａ、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、転移ＲＮＡ、リ
ボソームＲＮＡ、またはこれらのようなＲＮＡをコード
するＤＮＡを表すと理解される。
【００２０】本発明の一つの特別な実施の態様によれ
ば、前記のポリヌクレオチドは対象の遺伝子およびその
対象の遺伝子を発現可能にする因子を含む。この実施の
態様において、前記のポリヌクレオチドはプラスミドの
形態が好適である。発現を起こすことが可能な因子は、
前記のＤＮＡ断片をＲＮＡ（アンチセンスＲＮＡまたは
ｍＲＮＡ）に転写させることが可能で、かつｍＲＮＡを
ポリペプチドに翻訳することができる因子の全てであ
る。これらの因子は特に、前記の細胞において効果的な
プロモーター配列および／または制御配列、および、そ
れが適したところでは、前記のポリペプチドを分泌さ
せ、あるいは標的細胞の表面で発現可能にするために必
要な配列である。例として、ＲＳＶ、ＭＰＳＶ、ＳＶ４
０、ＣＭＶまたは７．５ｋウィルスまたはワクシニアウ
ィルスのプロモーター、または筋クレアチンキナーゼ、
アクチンおよび肺の界面活性物質をコードする遺伝子の
プロモーターが挙げられる。更に、与えられた細胞型に
特異的な、または規定された条件下で活性化され得るプ
ロモーター配列を選択することが可能である。文献はこ
のようなプロモーター配列に関する多くの情報を提供す
る。さらに、前記のポリヌクレオチドは、転写プロモー
ター活性を示す少なくとも２つの同一または異なる配
列、および／または、隣接して、または離れて位置し、
少なくとも２つの同一または異なるＤＮＡをコードする
配列を包含し得る。そして、この配列は同方向か反対方
向で、それぞれに関しては、転写プロモーターの機能ま
たはそれによって作用を受ける前記の配列の転写を伴わ
ない。同様に、この型の核酸構成物において、転写に影
響を及ぼさず翻訳の段階の前にスプライシングされる
「中間的（neutral）」核酸配列またはイントロンを導
入することが可能である。この種の配列、およびその使
用は文献に記載されている。前記のポリヌクレオチドは
また、細胞内輸送、複製および／または組込みに必要な
配列を包含し得る。そのような配列は当業者に周知であ
る。加えて、本発明によるポリヌクレオチドはまた、標
的細胞のゲノムに組込まれないように修飾されたポリヌ
クレオチド、または例えばスペルミンのような物質によ
って安定化されたポリヌクレオチドであり得る。
ば、前記のポリヌクレオチドは対象の遺伝子およびその
対象の遺伝子を発現可能にする因子を含む。この実施の
態様において、前記のポリヌクレオチドはプラスミドの
形態が好適である。発現を起こすことが可能な因子は、
前記のＤＮＡ断片をＲＮＡ（アンチセンスＲＮＡまたは
ｍＲＮＡ）に転写させることが可能で、かつｍＲＮＡを
ポリペプチドに翻訳することができる因子の全てであ
る。これらの因子は特に、前記の細胞において効果的な
プロモーター配列および／または制御配列、および、そ
れが適したところでは、前記のポリペプチドを分泌さ
せ、あるいは標的細胞の表面で発現可能にするために必
要な配列である。例として、ＲＳＶ、ＭＰＳＶ、ＳＶ４
０、ＣＭＶまたは７．５ｋウィルスまたはワクシニアウ
ィルスのプロモーター、または筋クレアチンキナーゼ、
アクチンおよび肺の界面活性物質をコードする遺伝子の
プロモーターが挙げられる。更に、与えられた細胞型に
特異的な、または規定された条件下で活性化され得るプ
ロモーター配列を選択することが可能である。文献はこ
のようなプロモーター配列に関する多くの情報を提供す
る。さらに、前記のポリヌクレオチドは、転写プロモー
ター活性を示す少なくとも２つの同一または異なる配
列、および／または、隣接して、または離れて位置し、
少なくとも２つの同一または異なるＤＮＡをコードする
配列を包含し得る。そして、この配列は同方向か反対方
向で、それぞれに関しては、転写プロモーターの機能ま
たはそれによって作用を受ける前記の配列の転写を伴わ
ない。同様に、この型の核酸構成物において、転写に影
響を及ぼさず翻訳の段階の前にスプライシングされる
「中間的（neutral）」核酸配列またはイントロンを導
入することが可能である。この種の配列、およびその使
用は文献に記載されている。前記のポリヌクレオチドは
また、細胞内輸送、複製および／または組込みに必要な
配列を包含し得る。そのような配列は当業者に周知であ
る。加えて、本発明によるポリヌクレオチドはまた、標
的細胞のゲノムに組込まれないように修飾されたポリヌ
クレオチド、または例えばスペルミンのような物質によ
って安定化されたポリヌクレオチドであり得る。
【００２１】本発明の組成物はさらに、上記のポリヌク
レオチドに連結しているかまたは例えば組換えプラスミ
ド内で独立した核酸分子である、選択可能なマーカー遺
伝子を含む。この実施の態様は特に組織、細胞および器
官の生体外の処置に適する。外来ＤＮＡの導入に続い
て、操作された細胞は栄養培地で１〜２日生育させても
よく、その後、選択培地に切り替えられる。この組換え
プラスミドにおける選択可能なマーカーは、選択に対す
る耐性を与え、その染色体にプラスミドを安定的に組み
込み、成長して順に細胞系にクローニングされ増殖され
得るフォーカスを形成する。多数の選択システムが使用
されてもよく、これに制限はされないが、ｔｋ-、ｈｇ
ｐｒｔ-またはａｐｒｔ-細胞それぞれにおける単純ヘル
ペスウィルスチミジンキナーゼ（Wigler, Cell 11 (197
7), 223）、ヒポキサンチングアニンホスホリボシルト
ランスフェラーゼ（Szybalska, Proc. Natl. Acad. Sc
i. USA 48 (1962), 2026）、およびアデニンホスホリボ
シルトランスフェラーゼ（Lowy, Cell 22 (1980), 81
7）が含まれる。また、代謝拮抗物質耐性も、メトトレ
キセートに対する耐性をあたえるｄｈｆｒ（Wigler, Pr
oc. Natl. Acad. Sci. USA
レオチドに連結しているかまたは例えば組換えプラスミ
ド内で独立した核酸分子である、選択可能なマーカー遺
伝子を含む。この実施の態様は特に組織、細胞および器
官の生体外の処置に適する。外来ＤＮＡの導入に続い
て、操作された細胞は栄養培地で１〜２日生育させても
よく、その後、選択培地に切り替えられる。この組換え
プラスミドにおける選択可能なマーカーは、選択に対す
る耐性を与え、その染色体にプラスミドを安定的に組み
込み、成長して順に細胞系にクローニングされ増殖され
得るフォーカスを形成する。多数の選択システムが使用
されてもよく、これに制限はされないが、ｔｋ-、ｈｇ
ｐｒｔ-またはａｐｒｔ-細胞それぞれにおける単純ヘル
ペスウィルスチミジンキナーゼ（Wigler, Cell 11 (197
7), 223）、ヒポキサンチングアニンホスホリボシルト
ランスフェラーゼ（Szybalska, Proc. Natl. Acad. Sc
i. USA 48 (1962), 2026）、およびアデニンホスホリボ
シルトランスフェラーゼ（Lowy, Cell 22 (1980), 81
7）が含まれる。また、代謝拮抗物質耐性も、メトトレ
キセートに対する耐性をあたえるｄｈｆｒ（Wigler, Pr
oc. Natl. Acad. Sci. USA
【００２２】77 (1980), 3567; O'Hare, Proc. Natl. A
cad. Sci. USA 78 (1981), 1527）、マイコフェノール
酸に対する耐性を与えるｇｐｔ（Mulligan Proc. Natl.
Acad.Sci. USA 78 (1981), 2072）、アミノグリコシド
Ｇ−４１８に対する耐性を与えるｎｅｏ（Colberre-Gar
apin, J. Mol. Biol. 150(1981), 1）、ハイグロマイシ
ンに対する耐性を与えるｈｙｇｒｏ（Santerre, Gene 3
0 (1984), 147）、またはピューロマイシン(pat、ピュ
ーロマイシン N−アセチルトランスフェラーゼ)を選択
する基礎として使用され得る。追加的な選択可能な遺伝
子としては、例えば、細胞をトリプトファンの代わりに
インドールを利用できるようにするｔｒｐＢ、細胞をヒ
スチジンの代わりにヒスチノールを利用できるようにす
るｈｉｓＤ（Hartman, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85
(1988), 8047）、およびオルニチンデカルボキシラー
ゼ阻害物質、2−（ジフルオロメチル）−DL−オルニチ
ン、ＤＦＭＯに対する耐性を与えるＯＤＣ(オルニチン
デカルボキシラーゼ)（McConlogue, 1987, Current Com
munications in Molecular Biologyにて、Cold Spring
Harbor Laboratory編集）が記載されている。
cad. Sci. USA 78 (1981), 1527）、マイコフェノール
酸に対する耐性を与えるｇｐｔ（Mulligan Proc. Natl.
Acad.Sci. USA 78 (1981), 2072）、アミノグリコシド
Ｇ−４１８に対する耐性を与えるｎｅｏ（Colberre-Gar
apin, J. Mol. Biol. 150(1981), 1）、ハイグロマイシ
ンに対する耐性を与えるｈｙｇｒｏ（Santerre, Gene 3
0 (1984), 147）、またはピューロマイシン(pat、ピュ
ーロマイシン N−アセチルトランスフェラーゼ)を選択
する基礎として使用され得る。追加的な選択可能な遺伝
子としては、例えば、細胞をトリプトファンの代わりに
インドールを利用できるようにするｔｒｐＢ、細胞をヒ
スチジンの代わりにヒスチノールを利用できるようにす
るｈｉｓＤ（Hartman, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85
(1988), 8047）、およびオルニチンデカルボキシラー
ゼ阻害物質、2−（ジフルオロメチル）−DL−オルニチ
ン、ＤＦＭＯに対する耐性を与えるＯＤＣ(オルニチン
デカルボキシラーゼ)（McConlogue, 1987, Current Com
munications in Molecular Biologyにて、Cold Spring
Harbor Laboratory編集）が記載されている。
【００２３】インビトロまたはインビボの遺伝子治療の
ための、本発明の組成物に使用するのに有用な、好適な
ベクターおよびプラスミドは文献に記載されており、お
よび当業者に知られている。例えば、Giordano, Nature
Medicine 2 (1996), 534-539、 Schaper, Circ. Res.
79 (1996), 911-919、Anderson, Science 256 (1992),
808-813、 Isner, Lancet 348 (1996), 370-374、 Muh
lhauser, Circ. Res.77 (1995), 1077-1086、 Wang, N
ature Medicine 2 (1996), 714-716、 WO94/29469、 WO
97/00957 またはSchaper, Current Opinion in Biotech
nology 7 (1996), 635-640、およびこれらにおいて引
用された文献を参照のこと。好ましくは、前記のベクタ
ーは遺伝子の転移物または標的のベクターである。当業
者に周知の方法は上述したポリヌクレオチド、プラスミ
ド、組換えベクターの構築に使用され得る。例えば、Sa
mbrook, Molecular Cloning A Laboratory Manual, Col
dSpring Harbor Laboratory (1989) N.Y.およびAusube
l, Current Protocols inMolecular Biology, Green Pu
blishing Associates and Wiley Interscience, N.Y.
(1989)に記載された技術を参照。
ための、本発明の組成物に使用するのに有用な、好適な
ベクターおよびプラスミドは文献に記載されており、お
よび当業者に知られている。例えば、Giordano, Nature
Medicine 2 (1996), 534-539、 Schaper, Circ. Res.
79 (1996), 911-919、Anderson, Science 256 (1992),
808-813、 Isner, Lancet 348 (1996), 370-374、 Muh
lhauser, Circ. Res.77 (1995), 1077-1086、 Wang, N
ature Medicine 2 (1996), 714-716、 WO94/29469、 WO
97/00957 またはSchaper, Current Opinion in Biotech
nology 7 (1996), 635-640、およびこれらにおいて引
用された文献を参照のこと。好ましくは、前記のベクタ
ーは遺伝子の転移物または標的のベクターである。当業
者に周知の方法は上述したポリヌクレオチド、プラスミ
ド、組換えベクターの構築に使用され得る。例えば、Sa
mbrook, Molecular Cloning A Laboratory Manual, Col
dSpring Harbor Laboratory (1989) N.Y.およびAusube
l, Current Protocols inMolecular Biology, Green Pu
blishing Associates and Wiley Interscience, N.Y.
(1989)に記載された技術を参照。
【００２４】本発明においては、ポリヌクレオチドは標
的細胞に対して同種または異種であり得る。特に、治療
上のまたは予防上の活性、さらに具体的には、細胞性ま
たは体液性のタイプの免疫原性を示すポリペプチドの、
全体または一部をコードするポリヌクレオチドを使用す
ることは好都合であり得る。ポリペプチドという用語
は、ポリペプチドの大きさ、または（例えば糖鎖によ
る）修飾の程度に関する制限のないものとして理解され
るべきである。例として、酵素、ホルモン、サイトカイ
ン、膜受容体、構造ポリペプチド、膜チャネルを形成す
るポリペプチド、輸送ポリペプチド、接着分子、リガン
ド、転写、翻訳、複製または転写安定化を制御する因
子、または抗体をコードする遺伝子であってもよく、例
えば、ＣＦＴＲ蛋白質、ジストロフィン、第VIII因子ま
たは第IX因子、ＨＰＶ Ｅ６／Ｅ７、ＭＵＣ１、ＢＲＡ
Ｃ１、インターフェロン、インターロイキン（ＩＬ-
２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−７およびＩＬ−１
２）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）αまたはＧＭ−ＣＳＦ
（顆粒球マクロファージコロニー刺激因子）をコードす
る遺伝子、または単純ヘルペスウィルス１型（ＨＳＶ−
１）のｔｋ遺伝子、網膜芽腫遺伝子、またはｐ５３遺伝
子、または免疫グロブリンの全体もしくはＦ（ａ
ｂ）2、Ｆａｂ’およびＦａｂ断片などの一部、または
抗イデオタイプ免疫グロブリン（ＵＳ４，６９９，８８
０）がある。もちろん、このリストに制限されず、他の
遺伝子も使用され得ると理解される。
的細胞に対して同種または異種であり得る。特に、治療
上のまたは予防上の活性、さらに具体的には、細胞性ま
たは体液性のタイプの免疫原性を示すポリペプチドの、
全体または一部をコードするポリヌクレオチドを使用す
ることは好都合であり得る。ポリペプチドという用語
は、ポリペプチドの大きさ、または（例えば糖鎖によ
る）修飾の程度に関する制限のないものとして理解され
るべきである。例として、酵素、ホルモン、サイトカイ
ン、膜受容体、構造ポリペプチド、膜チャネルを形成す
るポリペプチド、輸送ポリペプチド、接着分子、リガン
ド、転写、翻訳、複製または転写安定化を制御する因
子、または抗体をコードする遺伝子であってもよく、例
えば、ＣＦＴＲ蛋白質、ジストロフィン、第VIII因子ま
たは第IX因子、ＨＰＶ Ｅ６／Ｅ７、ＭＵＣ１、ＢＲＡ
Ｃ１、インターフェロン、インターロイキン（ＩＬ-
２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−７およびＩＬ−１
２）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）αまたはＧＭ−ＣＳＦ
（顆粒球マクロファージコロニー刺激因子）をコードす
る遺伝子、または単純ヘルペスウィルス１型（ＨＳＶ−
１）のｔｋ遺伝子、網膜芽腫遺伝子、またはｐ５３遺伝
子、または免疫グロブリンの全体もしくはＦ（ａ
ｂ）2、Ｆａｂ’およびＦａｂ断片などの一部、または
抗イデオタイプ免疫グロブリン（ＵＳ４，６９９，８８
０）がある。もちろん、このリストに制限されず、他の
遺伝子も使用され得ると理解される。
【００２５】本発明によれば、必要ならば、本発明によ
る組成物をできるだけ小さい体積で投与できるよう、で
きるだけ高濃度のポリヌクレオチドを含む組成物を得る
ことが望ましいであろう。当業者は、前記のポリヌクレ
オチドを溶解する媒質の溶解能に従ってこの濃度を調節
し得る充分な知識を持っている。好ましい実施態様によ
れば、前記の非プロトン性極性化合物は水溶液中にあ
り、すなわち、適切には生理食塩水で、かつ緩衝された
水溶液中に希釈される。当業者は、標的細胞の型に最も
適した水溶液を選択し得る充分な知識を持っている。よ
り具体的には、前記の極性化合物は、水または例えばｐ
Ｈ７．５の２０ｍＭＨｅｐｅｓのような緩衝液中の溶液
の状態である。非プロトン性極性化合物の体積は、組成
物の全体積の０．１〜１００％、特に５〜５０％、好適
には１５〜２０％とされ得る。
る組成物をできるだけ小さい体積で投与できるよう、で
きるだけ高濃度のポリヌクレオチドを含む組成物を得る
ことが望ましいであろう。当業者は、前記のポリヌクレ
オチドを溶解する媒質の溶解能に従ってこの濃度を調節
し得る充分な知識を持っている。好ましい実施態様によ
れば、前記の非プロトン性極性化合物は水溶液中にあ
り、すなわち、適切には生理食塩水で、かつ緩衝された
水溶液中に希釈される。当業者は、標的細胞の型に最も
適した水溶液を選択し得る充分な知識を持っている。よ
り具体的には、前記の極性化合物は、水または例えばｐ
Ｈ７．５の２０ｍＭＨｅｐｅｓのような緩衝液中の溶液
の状態である。非プロトン性極性化合物の体積は、組成
物の全体積の０．１〜１００％、特に５〜５０％、好適
には１５〜２０％とされ得る。
【００２６】本発明はさらに、本発明の前述の組成物の
いずれか一つ、および任意に薬学的に許容される担体ま
たは賦形剤を含む医薬組成物に関する。好適な薬学的担
体の例は当業者には周知であり、リン酸緩衝生理的食塩
水、水、水中油型エマルション、各種の湿潤剤、滅菌溶
液などを含む。このような担体を含む組成物は、周知の
慣用法で製剤化され得る。これらの医薬組成物は好適な
投与量で患者に投与され得る。好適な組成物の投与は、
例えば、静脈内、気管内、肺内、腹膜内、皮下、筋肉
内、局所または皮内投与のような異なる方法により効力
を発し得る。投与の方法は、担当医師および他の医学的
因子により決定される。医学分野で周知であるとおり、
いかなる患者への投与量も、患者の体格、体表面積、年
齢、投与される特定物質、性別、投与の時間と経路、全
般的な健康状態、および同時期に投与されている薬剤を
含む多くの因子に依存する。一般的に、医薬組成物の通
常の投与としての投与法は、１日に生体活性化合物とし
て１μｇから１０ｍｇの範囲内であるべきである。ま
た、投与法が連続注入であるなら、それは体重１ｋｇあ
たり１分あたりそれぞれについて生体活性化合物として
１μｇから１０ｍｇの範囲内であるべきである。進行は
定期的評価により監視し得る。投与量は変化するが、ポ
リヌクレオチド、例えばＤＮＡの静脈内投与に好ましい
投与量は、ＤＮＡ分子のおよそ１０6から１０16コピー
である。本発明の組成物は局所的にまたは全身的に投与
され得る。投与は一般的に非経口的、例えば静脈内投与
であり、ＤＮＡもまた、例えばカテーテルで動脈内の部
位など、標的部位に直接投与され得る。さらには、本発
明の組成物は、注入の前にマイクロカプセルまたはミク
ロスフェアに結合され得る。二連バルーン(double ball
oon)または他のカテーテルのような多角的な装置が考案
されたインビボ遺伝子転移のアプローチ、または上述し
たような標的組織への直接注入が使用され得る。また
は、上述した組成物の一つを使って後にトランスフェク
ションされ、再注入される、組織にあることが知られて
いる細胞を体から単離する生体外のアプローチを使用す
ることが可能である。
いずれか一つ、および任意に薬学的に許容される担体ま
たは賦形剤を含む医薬組成物に関する。好適な薬学的担
体の例は当業者には周知であり、リン酸緩衝生理的食塩
水、水、水中油型エマルション、各種の湿潤剤、滅菌溶
液などを含む。このような担体を含む組成物は、周知の
慣用法で製剤化され得る。これらの医薬組成物は好適な
投与量で患者に投与され得る。好適な組成物の投与は、
例えば、静脈内、気管内、肺内、腹膜内、皮下、筋肉
内、局所または皮内投与のような異なる方法により効力
を発し得る。投与の方法は、担当医師および他の医学的
因子により決定される。医学分野で周知であるとおり、
いかなる患者への投与量も、患者の体格、体表面積、年
齢、投与される特定物質、性別、投与の時間と経路、全
般的な健康状態、および同時期に投与されている薬剤を
含む多くの因子に依存する。一般的に、医薬組成物の通
常の投与としての投与法は、１日に生体活性化合物とし
て１μｇから１０ｍｇの範囲内であるべきである。ま
た、投与法が連続注入であるなら、それは体重１ｋｇあ
たり１分あたりそれぞれについて生体活性化合物として
１μｇから１０ｍｇの範囲内であるべきである。進行は
定期的評価により監視し得る。投与量は変化するが、ポ
リヌクレオチド、例えばＤＮＡの静脈内投与に好ましい
投与量は、ＤＮＡ分子のおよそ１０6から１０16コピー
である。本発明の組成物は局所的にまたは全身的に投与
され得る。投与は一般的に非経口的、例えば静脈内投与
であり、ＤＮＡもまた、例えばカテーテルで動脈内の部
位など、標的部位に直接投与され得る。さらには、本発
明の組成物は、注入の前にマイクロカプセルまたはミク
ロスフェアに結合され得る。二連バルーン(double ball
oon)または他のカテーテルのような多角的な装置が考案
されたインビボ遺伝子転移のアプローチ、または上述し
たような標的組織への直接注入が使用され得る。また
は、上述した組成物の一つを使って後にトランスフェク
ションされ、再注入される、組織にあることが知られて
いる細胞を体から単離する生体外のアプローチを使用す
ることが可能である。
【００２７】なお、さらなる実施の態様において、本発
明は上述の組成物のいずれか一つを含むワクチンに関す
る。この実施の態様においては、治療上活性な物質は、
好ましくは抗原、または、ヒトまたはその疾患にかかり
やすい動物の疾患に対する防御的な免疫学的反応をもた
らすことが可能な抗原をコードするポリヌクレオチドで
ある。本発明のワクチンは当業界において周知の方法に
より調製され得る。ワクチンに利用される抗原の免疫原
性、例えば、Ｔｈ１−またはＴｈ２−によって制御され
る免疫応答のプログラミングは、例えば分泌サイトカイ
ンまたはケモカインまたは膜分子をコードするｃＤＮＡ
の同時形質導入によって増強され得る。ワクチンは、例
えば皮内、皮下、筋内のいずれかに注入され、または、
特に抗腫瘍ワクチン接種の場合は、腫瘍の増殖部位、ま
たは腫瘍の増殖部位を流出するリンパ管またはリンパ節
に注入され得る。
明は上述の組成物のいずれか一つを含むワクチンに関す
る。この実施の態様においては、治療上活性な物質は、
好ましくは抗原、または、ヒトまたはその疾患にかかり
やすい動物の疾患に対する防御的な免疫学的反応をもた
らすことが可能な抗原をコードするポリヌクレオチドで
ある。本発明のワクチンは当業界において周知の方法に
より調製され得る。ワクチンに利用される抗原の免疫原
性、例えば、Ｔｈ１−またはＴｈ２−によって制御され
る免疫応答のプログラミングは、例えば分泌サイトカイ
ンまたはケモカインまたは膜分子をコードするｃＤＮＡ
の同時形質導入によって増強され得る。ワクチンは、例
えば皮内、皮下、筋内のいずれかに注入され、または、
特に抗腫瘍ワクチン接種の場合は、腫瘍の増殖部位、ま
たは腫瘍の増殖部位を流出するリンパ管またはリンパ節
に注入され得る。
【００２８】別の実施の態様において、本発明は、上述
された本発明組成物のいずれか一つ、および任意に検出
に好適な手段を含む診断用組成物に関する。この実施の
態様において、治療上活性な物質は好ましくは標識され
ている。当業者に知られた多くの異なる標識および標識
方法がある。本発明に使用され得る標識の種類の例は、
酵素、ラジオアイソトープ、金属コロイド、蛍光化合
物、化学発光化合物、および生物発光化合物を含む。追
加的に、または、代わりに、治療上活性な物質は、β-
ガラクトシダーゼ、緑色蛍光蛋白質、またはルシフェラ
ーゼのような直接的または間接的に検出可能な蛋白質を
コードしているマーカー遺伝子を含む。付記の実施例も
参照。本発明の診断用組成物は、患者内で物質を追跡す
るのに使用されるのみならず、例えば選択された部位へ
の光の発光を標的化するのに好適に使用され得る。加え
て、動物における疾病の進行または病原体の位置の把握
および追跡、および、疾病または病原体の抑制に効果的
な推測可能な治療用の化合物を選別するための方法のよ
うに、上述の組成物を使用して病態の動物モデルが完成
され得る。哺乳動物起源の光の検出および位置決定方法
は先行技術、例えばＷＯ９７／１８８４１およびそれに
引用された参考文献に記載されている。
された本発明組成物のいずれか一つ、および任意に検出
に好適な手段を含む診断用組成物に関する。この実施の
態様において、治療上活性な物質は好ましくは標識され
ている。当業者に知られた多くの異なる標識および標識
方法がある。本発明に使用され得る標識の種類の例は、
酵素、ラジオアイソトープ、金属コロイド、蛍光化合
物、化学発光化合物、および生物発光化合物を含む。追
加的に、または、代わりに、治療上活性な物質は、β-
ガラクトシダーゼ、緑色蛍光蛋白質、またはルシフェラ
ーゼのような直接的または間接的に検出可能な蛋白質を
コードしているマーカー遺伝子を含む。付記の実施例も
参照。本発明の診断用組成物は、患者内で物質を追跡す
るのに使用されるのみならず、例えば選択された部位へ
の光の発光を標的化するのに好適に使用され得る。加え
て、動物における疾病の進行または病原体の位置の把握
および追跡、および、疾病または病原体の抑制に効果的
な推測可能な治療用の化合物を選別するための方法のよ
うに、上述の組成物を使用して病態の動物モデルが完成
され得る。哺乳動物起源の光の検出および位置決定方法
は先行技術、例えばＷＯ９７／１８８４１およびそれに
引用された参考文献に記載されている。
【００２９】本発明はまた、少なくとも一つの治療上活
性な物質、特にポリヌクレオチドをインビトロ、エクス
ビボ（生体外）またはインビボ、より特定的にはインビ
ボの標的細胞に転移させるための、本発明による組成物
の使用に関する。
性な物質、特にポリヌクレオチドをインビトロ、エクス
ビボ（生体外）またはインビボ、より特定的にはインビ
ボの標的細胞に転移させるための、本発明による組成物
の使用に関する。
【００３０】導入または転移させる方法はそれ自体周知
である。「転移させること、または転移」は、治療上活
性な物質が細胞に移入され、その方法の最後には、その
細胞の内部、またはその細胞膜の内部もしくは膜上に位
置させることを意味する。もし活性な物質が核酸なら
ば、それは「トランスフェクション」と呼ばれる。トラ
ンスフェクションは、あらゆる適当な方法、例えば、前
記の遺伝子の発現を測定すること、または発現された蛋
白質の濃度を測定することによって実証され得る。
である。「転移させること、または転移」は、治療上活
性な物質が細胞に移入され、その方法の最後には、その
細胞の内部、またはその細胞膜の内部もしくは膜上に位
置させることを意味する。もし活性な物質が核酸なら
ば、それは「トランスフェクション」と呼ばれる。トラ
ンスフェクションは、あらゆる適当な方法、例えば、前
記の遺伝子の発現を測定すること、または発現された蛋
白質の濃度を測定することによって実証され得る。
【００３１】本発明による「標的細胞」は、原核細胞、
酵母細胞および真核細胞、植物細胞、ヒトまたは動物細
胞、および特に哺乳動物細胞を意味すると理解される。
加えて、癌細胞も考慮されるべきである。インビボにお
いて、本発明は、肺、気管、皮膚、筋肉、脳、肝臓、心
臓、脾臓、骨髄、胸腺、膀胱、リンパ、血液、血管、膵
臓、胃、腎臓、卵巣、睾丸、直腸、末梢または中枢神経
系、眼、リンパ器官、軟骨および内皮のような組織の、
間質または間腔部分に適用され得る。本発明の好適な選
択によれば、標的細胞は筋細胞、造血幹細胞または気道
の細胞であり、より特別には気管細胞または肺細胞であ
り、好適には呼吸器上皮細胞である。
酵母細胞および真核細胞、植物細胞、ヒトまたは動物細
胞、および特に哺乳動物細胞を意味すると理解される。
加えて、癌細胞も考慮されるべきである。インビボにお
いて、本発明は、肺、気管、皮膚、筋肉、脳、肝臓、心
臓、脾臓、骨髄、胸腺、膀胱、リンパ、血液、血管、膵
臓、胃、腎臓、卵巣、睾丸、直腸、末梢または中枢神経
系、眼、リンパ器官、軟骨および内皮のような組織の、
間質または間腔部分に適用され得る。本発明の好適な選
択によれば、標的細胞は筋細胞、造血幹細胞または気道
の細胞であり、より特別には気管細胞または肺細胞であ
り、好適には呼吸器上皮細胞である。
【００３２】本発明はまた、標的細胞を本発明による組
成物に接触させることによる、治療上活性な物質を標的
細胞に転移させる方法に関する。好適には、この方法は
組成物を細胞に接触させる前に加温することからなる追
加的な工程を含む。
成物に接触させることによる、治療上活性な物質を標的
細胞に転移させる方法に関する。好適には、この方法は
組成物を細胞に接触させる前に加温することからなる追
加的な工程を含む。
【００３３】本発明によれば、「組成物」は、そこに含
まれる治療上活性な物質と極性化合物が、その活性な物
質が促進物質を伴っていると考えられる面では関連して
いるかまたは一緒に結合していることを意味すると理解
されるべきである。例えば、前記の活性な物質がプラス
ミドＤＮＡである特定の場合、出願人はＤＮＡの物理的
特性がＤＰＳＯの存在下で変更されることを示してい
る。従って、当業者は、第一の化合物が、後の第二の化
合物の投与に引き続いて、特許請求の範囲の組成物をそ
の場で形成することができる限りは、標的器官または組
織への前記の化合物の個別の投与の後、インビトロで、
またインビボにおいても前記の活性物質および極性化合
物を含む組成物を得ることができると容易に予想し得
る。この投与の独立的方法は本発明の同等な実施として
みなされるべきである。
まれる治療上活性な物質と極性化合物が、その活性な物
質が促進物質を伴っていると考えられる面では関連して
いるかまたは一緒に結合していることを意味すると理解
されるべきである。例えば、前記の活性な物質がプラス
ミドＤＮＡである特定の場合、出願人はＤＮＡの物理的
特性がＤＰＳＯの存在下で変更されることを示してい
る。従って、当業者は、第一の化合物が、後の第二の化
合物の投与に引き続いて、特許請求の範囲の組成物をそ
の場で形成することができる限りは、標的器官または組
織への前記の化合物の個別の投与の後、インビトロで、
またインビボにおいても前記の活性物質および極性化合
物を含む組成物を得ることができると容易に予想し得
る。この投与の独立的方法は本発明の同等な実施として
みなされるべきである。
【００３４】上述したとおり、本発明による組成物は、
診断上、治療上、予防上またはワクチン接種を目的とす
る薬剤として使用され得る。この理由により、本発明は
また、治療上、予防上またはワクチン接種を目的とする
薬剤としての本発明の組成物に関する。
診断上、治療上、予防上またはワクチン接種を目的とす
る薬剤として使用され得る。この理由により、本発明は
また、治療上、予防上またはワクチン接種を目的とする
薬剤としての本発明の組成物に関する。
【００３５】特に、本発明の組成物は、少なくとも一つ
の治療上活性な物質、特にポリヌクレオチドを標的細胞
に転移させることからなる治療的な処置方法を実施する
ために使用され得る。好ましくは、これらの標的細胞は
哺乳動物細胞である。この哺乳動物細胞は、特に肺細
胞、筋細胞または造血幹細胞である。
の治療上活性な物質、特にポリヌクレオチドを標的細胞
に転移させることからなる治療的な処置方法を実施する
ために使用され得る。好ましくは、これらの標的細胞は
哺乳動物細胞である。この哺乳動物細胞は、特に肺細
胞、筋細胞または造血幹細胞である。
【００３６】本発明による組成物は、筋肉内、気管内、
鼻腔内、大脳内、胸膜腔内、腫瘍内、表皮、静脈内また
は動脈内の経路により、注射器、または、吸入、点滴ま
たはエアゾールの噴霧のような気道または粘膜の処置に
適した方法を含む、あらゆる他の同等の方法を使用して
投与される。また当業者に完全に周知であり本発明に適
用され得る、クリームの塗布、経口投与またはあらゆる
他の手段による投与も挙げられる。
鼻腔内、大脳内、胸膜腔内、腫瘍内、表皮、静脈内また
は動脈内の経路により、注射器、または、吸入、点滴ま
たはエアゾールの噴霧のような気道または粘膜の処置に
適した方法を含む、あらゆる他の同等の方法を使用して
投与される。また当業者に完全に周知であり本発明に適
用され得る、クリームの塗布、経口投与またはあらゆる
他の手段による投与も挙げられる。
【００３７】本発明によれば、およびインビボの遺伝子
治療において、対象の患者について、投与した化合物の
一つに対して何ら有意な免疫反応を起こすことなく、提
案された手法を数回繰り返すことが可能である。投与
は、１回投与法か、または特定の間隔で一回または数回
繰り返される投与法で行うことができる。適当な投与経
路と投与量は、例えば、処置される個体または疾病、ま
たは転移されるポリヌクレオチドといった様々なパラメ
ータによって変化する。
治療において、対象の患者について、投与した化合物の
一つに対して何ら有意な免疫反応を起こすことなく、提
案された手法を数回繰り返すことが可能である。投与
は、１回投与法か、または特定の間隔で一回または数回
繰り返される投与法で行うことができる。適当な投与経
路と投与量は、例えば、処置される個体または疾病、ま
たは転移されるポリヌクレオチドといった様々なパラメ
ータによって変化する。
【００３８】さらに具体的には、本発明は、診断上、治
療上、予防上、またはワクチン接種を目的とする、遺伝
子治療によりヒトまたは動物の体に施されるように意図
された薬剤を調製するための、本発明による組成物の使
用に関する。第一の可能性によれば、この薬剤は直接イ
ンビボで（例えば、筋肉に、エアゾールなどを用いて肺
に）投与され得る。また、患者から細胞を取り出すこと
（骨髄の幹細胞、末梢血リンパ球、筋細胞など）、本発
明によりそれらをインビトロでトランスフェクションす
ること、および患者に再投与することからなる、生体外
のアプローチを採用することも可能である。
療上、予防上、またはワクチン接種を目的とする、遺伝
子治療によりヒトまたは動物の体に施されるように意図
された薬剤を調製するための、本発明による組成物の使
用に関する。第一の可能性によれば、この薬剤は直接イ
ンビボで（例えば、筋肉に、エアゾールなどを用いて肺
に）投与され得る。また、患者から細胞を取り出すこと
（骨髄の幹細胞、末梢血リンパ球、筋細胞など）、本発
明によりそれらをインビトロでトランスフェクションす
ること、および患者に再投与することからなる、生体外
のアプローチを採用することも可能である。
【００３９】最後に、本発明は、既に規定された組成物
を用いてトランスフェクションされる細胞、特に原核細
胞、または酵母または真核細胞、特に動物細胞、特に哺
乳動物細胞、より特別には癌細胞に関する。本発明の好
ましい実施の態様によれば、上記の細胞は気道の細胞、
特に気管または肺細胞、好適には、呼吸器上皮細胞であ
る。気道投与の場合は、気管支拡張化合物（例えば、テ
オフィリン）の先行投与が有利であろう。出願人は、Ｄ
ＰＳＯを含む組成物のインキュべーションの３０分前に
テオフィリン（Dilatrane）０．３ｍｇをネズミへ経口
投与することによって、この前処理なしの投与に比較し
て発現レベルがわずかに増加し得ることを示した。
を用いてトランスフェクションされる細胞、特に原核細
胞、または酵母または真核細胞、特に動物細胞、特に哺
乳動物細胞、より特別には癌細胞に関する。本発明の好
ましい実施の態様によれば、上記の細胞は気道の細胞、
特に気管または肺細胞、好適には、呼吸器上皮細胞であ
る。気道投与の場合は、気管支拡張化合物（例えば、テ
オフィリン）の先行投与が有利であろう。出願人は、Ｄ
ＰＳＯを含む組成物のインキュべーションの３０分前に
テオフィリン（Dilatrane）０．３ｍｇをネズミへ経口
投与することによって、この前処理なしの投与に比較し
て発現レベルがわずかに増加し得ることを示した。
【００４０】これらの実施の態様および他の実施の態様
は、本発明の詳細な説明と実施例において開示され又は
それらから明白であり、およびそれらに包含される。本
発明に従って用いられるあらゆる方法、使用および化合
物に関するさらなる文献は、例えば電子機器を使用して
公共の図書館から取り寄せ得る。例えば、インターネッ
ト上で、例えばhttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/PubMed/m
edline.htmlのアドレスで使用可能な公的なデータベー
スである「Medline」が利用され得る。さらにhttp://ww
w.ncbi.nlm.nih.gov/、 http://www.infobiogen.fr/、h
ttp://www.fmi.ch/biology/research tools.html、 ht
tp://www.tigr.org/ のようなデータベースおよびアド
レスが当業者に知られており、例えばhttp://www.lyco
s.comを使って得ることもできる。過去の調査および現
在の認識に有用な、生化学についての特許情報の大要お
よび特許情報の適切な情報源の調査は、Berks, TIBTECH
12(1994), 352-364にて得られる。
は、本発明の詳細な説明と実施例において開示され又は
それらから明白であり、およびそれらに包含される。本
発明に従って用いられるあらゆる方法、使用および化合
物に関するさらなる文献は、例えば電子機器を使用して
公共の図書館から取り寄せ得る。例えば、インターネッ
ト上で、例えばhttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/PubMed/m
edline.htmlのアドレスで使用可能な公的なデータベー
スである「Medline」が利用され得る。さらにhttp://ww
w.ncbi.nlm.nih.gov/、 http://www.infobiogen.fr/、h
ttp://www.fmi.ch/biology/research tools.html、 ht
tp://www.tigr.org/ のようなデータベースおよびアド
レスが当業者に知られており、例えばhttp://www.lyco
s.comを使って得ることもできる。過去の調査および現
在の認識に有用な、生化学についての特許情報の大要お
よび特許情報の適切な情報源の調査は、Berks, TIBTECH
12(1994), 352-364にて得られる。
【００４１】本発明の組成物、使用、方法は、その治療
および／または診断が細胞での治療上の物質の転移に関
連するかまたは依存する、すべての種類の疾病の治療に
使用され得る。動物の治療もまたここに記載される方法
および使用に包含されるが、本発明の医薬組成物、方法
および使用はヒトに好ましく用いられ得る。
および／または診断が細胞での治療上の物質の転移に関
連するかまたは依存する、すべての種類の疾病の治療に
使用され得る。動物の治療もまたここに記載される方法
および使用に包含されるが、本発明の医薬組成物、方法
および使用はヒトに好ましく用いられ得る。
【００４２】本発明は、図１から５を参照して以下の実
施例１から７により説明される。本発明、およびその多
くの利点は、説明のために示される以下の実施例によっ
てよりよく理解される。
施例１から７により説明される。本発明、およびその多
くの利点は、説明のために示される以下の実施例によっ
てよりよく理解される。
【００４３】
実施例１：極性化合物がＤＥＳＯまたはＤＰＳＯである
組成物の調製 選択されたポリヌクレオチドすなわちプラスミドｐＴＧ
１１０３３（図１）は、ＣＭＶプロモーターの制御下に
位置しているルシフェラーゼをコードする遺伝子、ＨＭ
Ｇ遺伝子のイントロン１およびＳＶ４０のポリＡ終結シ
グナルを包含する。精製されたプラスミド（塩化セシウ
ム勾配遠心法により精製）の１ｍｇ／ｍｌ溶液、２５０
μｌ中に含まれるプラスミドＤＮＡをエタノールにより
沈殿させる。遠心した後、７０％エタノールで洗浄、乾
燥し、下記の表１に示される以下の組成物を得るため、
核酸のペレットを所定量のＤＥＳＯまたはＤＰＳＯおよ
びｐＨ７．５の２０ｍＭＨｅｐｅｓ緩衝液に溶解する。
組成物の調製 選択されたポリヌクレオチドすなわちプラスミドｐＴＧ
１１０３３（図１）は、ＣＭＶプロモーターの制御下に
位置しているルシフェラーゼをコードする遺伝子、ＨＭ
Ｇ遺伝子のイントロン１およびＳＶ４０のポリＡ終結シ
グナルを包含する。精製されたプラスミド（塩化セシウ
ム勾配遠心法により精製）の１ｍｇ／ｍｌ溶液、２５０
μｌ中に含まれるプラスミドＤＮＡをエタノールにより
沈殿させる。遠心した後、７０％エタノールで洗浄、乾
燥し、下記の表１に示される以下の組成物を得るため、
核酸のペレットを所定量のＤＥＳＯまたはＤＰＳＯおよ
びｐＨ７．５の２０ｍＭＨｅｐｅｓ緩衝液に溶解する。
【００４４】
【表１】 実施例２：気管内注入による組成物の投与 ８週齢のメスのマウス（B6/SJLF1, Iffa Credo）を腹腔
内注射（生理食塩水、ＩＭＡＬＧＥＮＥ１０００、キシ
ラジン／ＲＯＭＰＵＮ）により麻酔した。皮膚を７０％
エタノールで消毒した後、気管が現れるように切開し、
気管に実施例１の組成物５０μｌを注射器にて注入す
る。それぞれの組成物を少なくとも異なる３匹のマウス
に注入する。極性化合物を全く添加しない、ｐＨ７．５
の２０ｍＭＨｅｐｅｓ ５０μｌ中に含まれるＤＮＡ５
０μｇを注入して得た個体と、発現レベルを比較する。
注入を行わないマウスの対照もプロトコルに含まれる。
内注射（生理食塩水、ＩＭＡＬＧＥＮＥ１０００、キシ
ラジン／ＲＯＭＰＵＮ）により麻酔した。皮膚を７０％
エタノールで消毒した後、気管が現れるように切開し、
気管に実施例１の組成物５０μｌを注射器にて注入す
る。それぞれの組成物を少なくとも異なる３匹のマウス
に注入する。極性化合物を全く添加しない、ｐＨ７．５
の２０ｍＭＨｅｐｅｓ ５０μｌ中に含まれるＤＮＡ５
０μｇを注入して得た個体と、発現レベルを比較する。
注入を行わないマウスの対照もプロトコルに含まれる。
【００４５】実施例３：注入したマウスの組織における
ルシフェラーゼ活性の測定 注入の２日後、マウスを解剖する。肺および気管は独立
して処置する。組織を液体窒素中で凍結し、−８０℃で
保管する。ルシフェラーゼの活性を測定するために、組
織をドライアイス上に据えた乳鉢中、乳棒を用いて機械
的にすりつぶす。５００μｌまたは２００μｌの溶解緩
衝液（プロメガ社製）を、肺または気管それぞれから得
られた組織断片に添加し、この溶液を３段階の凍結／融
解に付す。細胞片を遠心分離で除去し、供給元（プロメ
ガ社）の指示に従って、１００μｌの試薬を添加し、発
光により活性を測定することによって、２０μｌの上澄
みのルシフェラーゼ活性（ＲＬＵ／ｍｉｎ、１分あたり
の相対光単位）を測定する。測定されるルシフェラーゼ
活性は、商品として入手可能なルシフェラーゼ（プロメ
ガ社）を使用して得られる標準スケールによってタンパ
ク量について標準化される。総タンパク量はまた、ビシ
ンコニン酸（bicinchoninic acid，BCA) 比色定量法
（Smith, Anal. Biochem. 150 (1985), 76-85）によ
って、上澄みの一部を使用して定量する。このことによ
ってルシフェラーゼ活性を、組織から抽出したタンパク
ｍｇあたりのＲＬＵで表すことが可能になる。与えられ
た組成物について、問題の活性は３匹の注入されたマウ
スから得られた値の平均値に相当する。
ルシフェラーゼ活性の測定 注入の２日後、マウスを解剖する。肺および気管は独立
して処置する。組織を液体窒素中で凍結し、−８０℃で
保管する。ルシフェラーゼの活性を測定するために、組
織をドライアイス上に据えた乳鉢中、乳棒を用いて機械
的にすりつぶす。５００μｌまたは２００μｌの溶解緩
衝液（プロメガ社製）を、肺または気管それぞれから得
られた組織断片に添加し、この溶液を３段階の凍結／融
解に付す。細胞片を遠心分離で除去し、供給元（プロメ
ガ社）の指示に従って、１００μｌの試薬を添加し、発
光により活性を測定することによって、２０μｌの上澄
みのルシフェラーゼ活性（ＲＬＵ／ｍｉｎ、１分あたり
の相対光単位）を測定する。測定されるルシフェラーゼ
活性は、商品として入手可能なルシフェラーゼ（プロメ
ガ社）を使用して得られる標準スケールによってタンパ
ク量について標準化される。総タンパク量はまた、ビシ
ンコニン酸（bicinchoninic acid，BCA) 比色定量法
（Smith, Anal. Biochem. 150 (1985), 76-85）によ
って、上澄みの一部を使用して定量する。このことによ
ってルシフェラーゼ活性を、組織から抽出したタンパク
ｍｇあたりのＲＬＵで表すことが可能になる。与えられ
た組成物について、問題の活性は３匹の注入されたマウ
スから得られた値の平均値に相当する。
【００４６】実施例４：結果 肺由来の抽出物から得られた結果を図２および４にグラ
フで示す。これらの結果は、ヌクレオチドが単独で（５
０μｇ）注入される時は肺組織においてルシフェラーゼ
の発現が観察されない一方で、注入される組成物へのＤ
ＰＳＯの添加は発現を増加させることを示す。
フで示す。これらの結果は、ヌクレオチドが単独で（５
０μｇ）注入される時は肺組織においてルシフェラーゼ
の発現が観察されない一方で、注入される組成物へのＤ
ＰＳＯの添加は発現を増加させることを示す。
【００４７】これらの結果は、発現のレベルがポリヌク
レオチド単独の注入に比較して顕著に改善されることか
ら、ＤＰＳＯは単独で組成物を気管内に注入した後に細
胞にポリヌクレオチドがトランスフェクションされる能
力を改善するための効果的な化合物であることを示して
いる。
レオチド単独の注入に比較して顕著に改善されることか
ら、ＤＰＳＯは単独で組成物を気管内に注入した後に細
胞にポリヌクレオチドがトランスフェクションされる能
力を改善するための効果的な化合物であることを示して
いる。
【００４８】実施例５：試験された他の非プロトン性極
性化合物 同一の方法で、我々は本発明に従って他の非プロトン性
極性化合物が使用可能であることを示した。このことを
示すために、様々な組成物が、実施例１から４に記載さ
れたプロトコルに従って調製された。これらの組成物は
より具体的には、５０μｇのプラスミドｐＴＧ１１０３
３／５０μｌ、および様々な割合（１０または１５％）
の、ＰＤＳＯ、テトラメチレンスルホキシド（ＴＥＭＳ
Ｏ）、（Johnson およびKeiser, 1973, Organic Synthe
sis Coll. 5 (1973), 791参照）、ＤＭＳＯ、テトラメ
チル尿素またはスルホランから選択される物質を含む。
次に、得られた組成物はそれぞれ、先に実施例２に記載
されたプロトコルを用いて、８から１２週齢のマウス
（C57BL/6, Iffa Credo）に気管内に注入された。
性化合物 同一の方法で、我々は本発明に従って他の非プロトン性
極性化合物が使用可能であることを示した。このことを
示すために、様々な組成物が、実施例１から４に記載さ
れたプロトコルに従って調製された。これらの組成物は
より具体的には、５０μｇのプラスミドｐＴＧ１１０３
３／５０μｌ、および様々な割合（１０または１５％）
の、ＰＤＳＯ、テトラメチレンスルホキシド（ＴＥＭＳ
Ｏ）、（Johnson およびKeiser, 1973, Organic Synthe
sis Coll. 5 (1973), 791参照）、ＤＭＳＯ、テトラメ
チル尿素またはスルホランから選択される物質を含む。
次に、得られた組成物はそれぞれ、先に実施例２に記載
されたプロトコルを用いて、８から１２週齢のマウス
（C57BL/6, Iffa Credo）に気管内に注入された。
【００４９】得られた結果である、図３および４は、本
発明が様々な非プロトン性極性化合物を使用することに
よって実施され得ることを示す。従って、上記に列挙し
たようなポリヌクレオチドおよび非プロトン性極性物質
を含む試験された種々の組成物は、ポリヌクレオチドが
単独で、特に濃度に関して同一の条件下で注入されると
きに比較して、気管内注入の後肺細胞のトランスフェク
ションを顕著に改善することが可能である。
発明が様々な非プロトン性極性化合物を使用することに
よって実施され得ることを示す。従って、上記に列挙し
たようなポリヌクレオチドおよび非プロトン性極性物質
を含む試験された種々の組成物は、ポリヌクレオチドが
単独で、特に濃度に関して同一の条件下で注入されると
きに比較して、気管内注入の後肺細胞のトランスフェク
ションを顕著に改善することが可能である。
【００５０】最良の結果はＤＰＳＯまたはＴＭＵを含む
組成物によって観察される。またこれらの極性化合物そ
れぞれの場合に、試験されたＤＮＡの量（５０μｇ）に
ついて、その化合物の割合を増加することによって、ル
シフェラーゼをコードする遺伝子（図４）の発現の測定
レベルを改善することができることも示された。
組成物によって観察される。またこれらの極性化合物そ
れぞれの場合に、試験されたＤＮＡの量（５０μｇ）に
ついて、その化合物の割合を増加することによって、ル
シフェラーゼをコードする遺伝子（図４）の発現の測定
レベルを改善することができることも示された。
【００５１】実施例７：プラスミドＤＮＡ融解曲線の記
録 プラスミドＤＮＡ融解曲線は、ＵＶ／可視ＣＡＲＹ／Ｖ
ＡＲＩＡＮ分光光度計（ソフトウェアバージョン：３．
０４）により２個のテフロン栓付き石英キュベット（Ｌ
＝１ｃｍ）を用いて記録された。サンプルの全量：異な
る割合（０、５、１０、１５、２０％）のジ−ｎ−プロ
ピルスルホキシド（ＰＤＳＯ）を含むｐＨ７．５の２０
ｍＭＨｅｐｅｓ溶液、１ｍｌ（５０μｇ／ｍｌプラスミ
ドＤＮＡ（ｐＴＧ１１０３３））。
録 プラスミドＤＮＡ融解曲線は、ＵＶ／可視ＣＡＲＹ／Ｖ
ＡＲＩＡＮ分光光度計（ソフトウェアバージョン：３．
０４）により２個のテフロン栓付き石英キュベット（Ｌ
＝１ｃｍ）を用いて記録された。サンプルの全量：異な
る割合（０、５、１０、１５、２０％）のジ−ｎ−プロ
ピルスルホキシド（ＰＤＳＯ）を含むｐＨ７．５の２０
ｍＭＨｅｐｅｓ溶液、１ｍｌ（５０μｇ／ｍｌプラスミ
ドＤＮＡ（ｐＴＧ１１０３３））。
【００５２】温度勾配は4℃/分で、３５℃から１００℃
まで２６０ｎｍで測定した（スケール：０．９−１．２
ＯＤ；５０μｇ〜１ＯＤ）。ＤＮＡ融解曲線測定につ
いて、ＤＮＡ単独（「裸の」ＤＮＡ）またはＤＰＳＯ
（「ソルボプレックス(solvoplex)」）存在下でのＤＮ
Ａは異なる挙動を示し、すなわち、スルホキシド化合物
の存在下では吸光度の変化は小さくなり、高温で変化が
起こることが示される（図５）。このことはＤＰＳＯの
ＤＮＡ安定化効果（ＤＮＡ二本鎖を解離するには高温を
要する）と説明され得る。
まで２６０ｎｍで測定した（スケール：０．９−１．２
ＯＤ；５０μｇ〜１ＯＤ）。ＤＮＡ融解曲線測定につ
いて、ＤＮＡ単独（「裸の」ＤＮＡ）またはＤＰＳＯ
（「ソルボプレックス(solvoplex)」）存在下でのＤＮ
Ａは異なる挙動を示し、すなわち、スルホキシド化合物
の存在下では吸光度の変化は小さくなり、高温で変化が
起こることが示される（図５）。このことはＤＰＳＯの
ＤＮＡ安定化効果（ＤＮＡ二本鎖を解離するには高温を
要する）と説明され得る。
【００５３】実施例８：リポソルボプレックス(liposol
voplex)のエアゾール化 呼吸器上皮細胞にベクターを送達する究極の方法はエア
ゾールの形態を使うことであろう。しかしＤＮＡ単独で
は、エアゾール化すると急速に分解される。この効果は
ＤＮＡをリポプレックス(lipoplex)（特許出願番号FR97
/15805に記載されているような陽イオン性両親媒性化合
物、例えばｐＴＧ９０、と結合したＤＮＡ）として複合
化することで回避されるであろう。以前、リポプレック
ス単独では肺においては極めて低く発現されるか、全く
発現されないことが観察されている。本発明により、好
ましい特性のソルボプレックス（本発明の複合体）およ
びリポプレックスを結合させることが試験された。この
目的で、リポソルボプレックス（ＤＮＡと共に陽イオン
性脂質およびＤＰＳＯ）が調製され、エアゾール化さ
れ、冷却トラップにより回収され、そしてマウスに気管
内注入された。ｐＴＧ９０／ＤＯＰＥのみを用いたリポ
プレックスは気管内注入の後のルシフェラーゼ遺伝子は
発現しなかったが、ＤＰＳＯの存在下ではｐＴＧ９０／
ＤＯＰＥリポソルボプレックスについて発現が観察され
た。一般的には、エアゾール化の後は、試験されたリポ
ソルブプレックスでは発現レベルが低下したが、ｐＴＧ
９０／ＤＯＰＥ／ＤＰＳＯリポソルブプレックスについ
てはエアゾール化前にこの同一の複合体で観察される活
性の８６％を回復することができた。
voplex)のエアゾール化 呼吸器上皮細胞にベクターを送達する究極の方法はエア
ゾールの形態を使うことであろう。しかしＤＮＡ単独で
は、エアゾール化すると急速に分解される。この効果は
ＤＮＡをリポプレックス(lipoplex)（特許出願番号FR97
/15805に記載されているような陽イオン性両親媒性化合
物、例えばｐＴＧ９０、と結合したＤＮＡ）として複合
化することで回避されるであろう。以前、リポプレック
ス単独では肺においては極めて低く発現されるか、全く
発現されないことが観察されている。本発明により、好
ましい特性のソルボプレックス（本発明の複合体）およ
びリポプレックスを結合させることが試験された。この
目的で、リポソルボプレックス（ＤＮＡと共に陽イオン
性脂質およびＤＰＳＯ）が調製され、エアゾール化さ
れ、冷却トラップにより回収され、そしてマウスに気管
内注入された。ｐＴＧ９０／ＤＯＰＥのみを用いたリポ
プレックスは気管内注入の後のルシフェラーゼ遺伝子は
発現しなかったが、ＤＰＳＯの存在下ではｐＴＧ９０／
ＤＯＰＥリポソルボプレックスについて発現が観察され
た。一般的には、エアゾール化の後は、試験されたリポ
ソルブプレックスでは発現レベルが低下したが、ｐＴＧ
９０／ＤＯＰＥ／ＤＰＳＯリポソルブプレックスについ
てはエアゾール化前にこの同一の複合体で観察される活
性の８６％を回復することができた。
【００５４】実施例９：ジスルホキシドの合成 9.1 メチルジメチルスルホキシド（ビス（メチルスルフ
ィニル）メタン、ＢｉＭＳｕＭ）（＝ＣＨ3−ＳＯ−Ｃ
Ｈ2−ＳＯ−ＣＨ3） １０．５ｍｌのＣＨ3ＳＯＣＨ2ＳＣＨ3（１２．５ｇ、
１００ｍｍｏｌ；Aldrich 17．795）を１２５ｍｌメタ
ノールに室温にて希釈する。この溶液を攪拌し、０℃に
維持する。２８０ｍｌの水中の２１．４ｇのＮａＩＯ4
（１００ｍｍｏｌ）を９０分間にわたり滴下する。反応
混合物を０℃にて１５時間攪拌しながら維持する。反応
の進行は薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ、溶媒：ＣＨ
2Ｃｌ2／ＣＨ3ＯＨ＝９５／５ Ｉ2、ＫＭｎＯ4にて検
出、ＣＨ3ＳＯＣＨ2ＳＣＨ3 Ｒｆ＝０．９； ＣＨ3Ｓ
ＯＣＨ2ＳＯＣＨ3 Ｒｆ＝０．３３）によって制御す
る。反応混合物をセライトで濾過し、３００ｍｌの水、
２００ｍｌのＣＨ2Ｃｌ2、そして２００ｍｌのメタノー
ルで洗浄する。濃縮された有機画分をプールし、Ｎａ2
ＳＯ4で乾燥し、エバポレートする。生成物を精製し、
二つのエナンチオマーを含む画分を、シリカカラムに３
回通し（ＩＤ ４ｃｍ、ＣＨ2Ｃｌ2中にシリカ１００
ｇ）、５５０ｍｌのＣＨ2Ｃｌ2、２５０ｍｌのＣＨ2Ｃ
ｌ2／ＣＨ3ＯＨ＝９７／３、１０００ｍｌのＣＨ2Ｃｌ2
／ＣＨ3ＯＨ＝９５／５、および１０００ｍｌのＣＨ2Ｃ
ｌ2／ＣＨ3ＯＨ＝９０／１０で溶出して濃縮する。Ｂｉ
ＭＳｕＭの両エナンチオマーは画分９５／５で溶出す
る。画分はＨＰＬＣ（二つのエナンチオマーを分離でき
るＮＨ2カラム）で分析する。一方または他方のエナン
チオマーの濃縮された画分をプールし、エバポレーショ
ンする。分析はＮＨ2−ＨＰＬＣおよび1ＨＮＭＲ（２０
０ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）にて行う。
ィニル）メタン、ＢｉＭＳｕＭ）（＝ＣＨ3−ＳＯ−Ｃ
Ｈ2−ＳＯ−ＣＨ3） １０．５ｍｌのＣＨ3ＳＯＣＨ2ＳＣＨ3（１２．５ｇ、
１００ｍｍｏｌ；Aldrich 17．795）を１２５ｍｌメタ
ノールに室温にて希釈する。この溶液を攪拌し、０℃に
維持する。２８０ｍｌの水中の２１．４ｇのＮａＩＯ4
（１００ｍｍｏｌ）を９０分間にわたり滴下する。反応
混合物を０℃にて１５時間攪拌しながら維持する。反応
の進行は薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ、溶媒：ＣＨ
2Ｃｌ2／ＣＨ3ＯＨ＝９５／５ Ｉ2、ＫＭｎＯ4にて検
出、ＣＨ3ＳＯＣＨ2ＳＣＨ3 Ｒｆ＝０．９； ＣＨ3Ｓ
ＯＣＨ2ＳＯＣＨ3 Ｒｆ＝０．３３）によって制御す
る。反応混合物をセライトで濾過し、３００ｍｌの水、
２００ｍｌのＣＨ2Ｃｌ2、そして２００ｍｌのメタノー
ルで洗浄する。濃縮された有機画分をプールし、Ｎａ2
ＳＯ4で乾燥し、エバポレートする。生成物を精製し、
二つのエナンチオマーを含む画分を、シリカカラムに３
回通し（ＩＤ ４ｃｍ、ＣＨ2Ｃｌ2中にシリカ１００
ｇ）、５５０ｍｌのＣＨ2Ｃｌ2、２５０ｍｌのＣＨ2Ｃ
ｌ2／ＣＨ3ＯＨ＝９７／３、１０００ｍｌのＣＨ2Ｃｌ2
／ＣＨ3ＯＨ＝９５／５、および１０００ｍｌのＣＨ2Ｃ
ｌ2／ＣＨ3ＯＨ＝９０／１０で溶出して濃縮する。Ｂｉ
ＭＳｕＭの両エナンチオマーは画分９５／５で溶出す
る。画分はＨＰＬＣ（二つのエナンチオマーを分離でき
るＮＨ2カラム）で分析する。一方または他方のエナン
チオマーの濃縮された画分をプールし、エバポレーショ
ンする。分析はＮＨ2−ＨＰＬＣおよび1ＨＮＭＲ（２０
０ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）にて行う。
【００５５】エナンチオマーの純度、 Ｒ，Ｓ−ＢｉＭ
ＳｕＭ／Ｒ，Ｒ−ＢｉＭＳｕＭ＝８７／１３：４．５ｇ エナンチオマーの純度、 Ｒ，Ｓ−ＢｉＭＳｕＭ／Ｒ，
Ｒ−ＢｉＭＳｕＭ＝０５／９５：０．６ｇ
ＳｕＭ／Ｒ，Ｒ−ＢｉＭＳｕＭ＝８７／１３：４．５ｇ エナンチオマーの純度、 Ｒ，Ｓ−ＢｉＭＳｕＭ／Ｒ，
Ｒ−ＢｉＭＳｕＭ＝０５／９５：０．６ｇ
【００５６】9.2 メチルジエチルスルホキシド（ビス
（エチルスルフィニル）メタン、ＢｉＥＳｕＭ）（＝Ｃ
Ｈ3ＣＨ2−ＳＯ−ＣＨ2−ＳＯ−ＣＨ2ＣＨ3） ４ｍｌのＣＨ3ＣＨ2−ＳＯ−ＣＨ2−Ｓ−ＣＨ2ＣＨ
3（４．４５ｇ、２９ｍｍｏｌ；Ｆｌｕｋａ０２８４
５）を２５ｍｌメタノールに室温にて希釈する。この溶
液を攪拌し、０℃に維持する。５０ｍｌの水中の７ｇの
ＮａＩＯ4（３３ｍｍｏｌ）を滴下する。反応混合物を
０℃にて１５時間攪拌しながら維持する。反応の進行は
薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ、溶媒：ＣＨ2Ｃｌ2／
ＣＨ3ＯＨ＝９０／１０，Ｉ2、ＫＭｎＯ4にて検出、Ｃ
Ｈ3ＣＨ2ＳＯＣＨ2ＳＣＨ2ＣＨ3 Ｒｆ＝０．９５；ＣＨ
3ＣＨ2ＳＯＣＨ2ＳＯＣＨ2ＣＨ3 Ｒｆ＝０．７）によ
って制御する。反応混合物をセライトで濾過し、３００
ｍｌの水、２００ｍｌのＣＨ2Ｃｌ2、そして２００ｍｌ
のメタノールで洗浄する。水相をＣＨ2Ｃｌ2で３回、そ
して、酢酸エチルで抽出する。有機画分をプールし、Ｎ
ａ2ＳＯ4で乾燥し、エバポレートする。生成物を精製
し、二つのエナンチオマーを含む画分をシリカカラムに
３回通し（ＩＤ２ｃｍ、ＣＨ2Ｃｌ2中にシリカ３８
ｇ）、１００ｍｌのＣＨ2Ｃｌ2、２００ｍｌのＣＨ2Ｃ
ｌ2／ＣＨ3ＯＨ＝９９／１、２００ｍｌのＣＨ2Ｃｌ2／
ＣＨ3ＯＨ＝９７／３、２００ｍｌのＣＨ2Ｃｌ2／ＣＨ3
ＯＨ＝９５／０５、２００ｍｌのＣＨ2Ｃｌ2／ＣＨ3Ｏ
Ｈ＝９２．５／７．５、２００ｍｌのＣＨ2Ｃｌ2／ＣＨ
3ＯＨ＝９０／１０で溶出して濃縮する。ＢｉＥＳｕＭ
の両エナンチオマーは画分９５／５で溶出する。画分は
ＨＰＬＣ／（二つのエナンチオマーを分離できるシリカ
カラム）で分析する。一方のまたは他方のエナンチオマ
ーの濃縮された画分をプールし、エバポレートする。分
析はシリカＨＰＬＣおよび1ＨＮＭＲ（２００ＭＨｚ、
ＣＤＣｌ3）：δ３．８９（ｑｕｉｎｔ．，２Ｈ，−Ｓ
Ｏ−ＣＨ2−ＳＯ−），３．１（ｑｕａｄ．，４Ｈ，−
ＣＨ2−），１．４０（ｔ，６Ｈ，−ＣＨ3）にて行う。
（エチルスルフィニル）メタン、ＢｉＥＳｕＭ）（＝Ｃ
Ｈ3ＣＨ2−ＳＯ−ＣＨ2−ＳＯ−ＣＨ2ＣＨ3） ４ｍｌのＣＨ3ＣＨ2−ＳＯ−ＣＨ2−Ｓ−ＣＨ2ＣＨ
3（４．４５ｇ、２９ｍｍｏｌ；Ｆｌｕｋａ０２８４
５）を２５ｍｌメタノールに室温にて希釈する。この溶
液を攪拌し、０℃に維持する。５０ｍｌの水中の７ｇの
ＮａＩＯ4（３３ｍｍｏｌ）を滴下する。反応混合物を
０℃にて１５時間攪拌しながら維持する。反応の進行は
薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ、溶媒：ＣＨ2Ｃｌ2／
ＣＨ3ＯＨ＝９０／１０，Ｉ2、ＫＭｎＯ4にて検出、Ｃ
Ｈ3ＣＨ2ＳＯＣＨ2ＳＣＨ2ＣＨ3 Ｒｆ＝０．９５；ＣＨ
3ＣＨ2ＳＯＣＨ2ＳＯＣＨ2ＣＨ3 Ｒｆ＝０．７）によ
って制御する。反応混合物をセライトで濾過し、３００
ｍｌの水、２００ｍｌのＣＨ2Ｃｌ2、そして２００ｍｌ
のメタノールで洗浄する。水相をＣＨ2Ｃｌ2で３回、そ
して、酢酸エチルで抽出する。有機画分をプールし、Ｎ
ａ2ＳＯ4で乾燥し、エバポレートする。生成物を精製
し、二つのエナンチオマーを含む画分をシリカカラムに
３回通し（ＩＤ２ｃｍ、ＣＨ2Ｃｌ2中にシリカ３８
ｇ）、１００ｍｌのＣＨ2Ｃｌ2、２００ｍｌのＣＨ2Ｃ
ｌ2／ＣＨ3ＯＨ＝９９／１、２００ｍｌのＣＨ2Ｃｌ2／
ＣＨ3ＯＨ＝９７／３、２００ｍｌのＣＨ2Ｃｌ2／ＣＨ3
ＯＨ＝９５／０５、２００ｍｌのＣＨ2Ｃｌ2／ＣＨ3Ｏ
Ｈ＝９２．５／７．５、２００ｍｌのＣＨ2Ｃｌ2／ＣＨ
3ＯＨ＝９０／１０で溶出して濃縮する。ＢｉＥＳｕＭ
の両エナンチオマーは画分９５／５で溶出する。画分は
ＨＰＬＣ／（二つのエナンチオマーを分離できるシリカ
カラム）で分析する。一方のまたは他方のエナンチオマ
ーの濃縮された画分をプールし、エバポレートする。分
析はシリカＨＰＬＣおよび1ＨＮＭＲ（２００ＭＨｚ、
ＣＤＣｌ3）：δ３．８９（ｑｕｉｎｔ．，２Ｈ，−Ｓ
Ｏ−ＣＨ2−ＳＯ−），３．１（ｑｕａｄ．，４Ｈ，−
ＣＨ2−），１．４０（ｔ，６Ｈ，−ＣＨ3）にて行う。
【００５７】画分１：エナンチオマーの純度、 Ｒ，Ｓ
−ＢｉＥＳｕＭ／Ｒ，Ｒ−ＢｉＥＳｕＭ＝８４／１６：
１．９ｇ 画分２：エナンチオマーの純度、 Ｒ，Ｓ−ＢｉＥＳｕ
Ｍ／Ｒ，Ｒ−ＢｉＥＳｕＭ＝１６／８４：０．０７５ｇ
−ＢｉＥＳｕＭ／Ｒ，Ｒ−ＢｉＥＳｕＭ＝８４／１６：
１．９ｇ 画分２：エナンチオマーの純度、 Ｒ，Ｓ−ＢｉＥＳｕ
Ｍ／Ｒ，Ｒ−ＢｉＥＳｕＭ＝１６／８４：０．０７５ｇ
【００５８】本発明は、本発明の個別の様相の一つの説
明を意図して記載された具体的実施の態様による範囲に
制限されるものではなく、機能的に同等なあらゆる組成
物および化合物も本発明の範囲内である。もちろん、こ
こに示されおよび記載されたものに加えて、本発明の様
々な変更は、前述の説明および添付図面により当業者に
は明白になる。上記の変更は、付記された特許請求の範
囲内となるように意図される。従って、本発明の好まし
い実施の態様がこのように詳細に記載されたが、それら
の多くの明白な変更が本発明の意図または範囲から逸脱
することなく可能であるので、付記された特許請求の範
囲に規定された発明は上記の説明に示された特定の細部
に限定されないと理解されるべきである。
明を意図して記載された具体的実施の態様による範囲に
制限されるものではなく、機能的に同等なあらゆる組成
物および化合物も本発明の範囲内である。もちろん、こ
こに示されおよび記載されたものに加えて、本発明の様
々な変更は、前述の説明および添付図面により当業者に
は明白になる。上記の変更は、付記された特許請求の範
囲内となるように意図される。従って、本発明の好まし
い実施の態様がこのように詳細に記載されたが、それら
の多くの明白な変更が本発明の意図または範囲から逸脱
することなく可能であるので、付記された特許請求の範
囲に規定された発明は上記の説明に示された特定の細部
に限定されないと理解されるべきである。
【図１】プラスミドｐＴＧ１１０３３の遺伝子地図。
【図２】ｐＨ７．５の２０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ緩衝液中
に、５０μｇのＤＮＡと、１５％（v/v）のＤＥＳＯま
たはＤＰＳＯを含む組成物の注入後のルシフェラーゼを
コードする遺伝子の肺における発現レベル（ＲＬＵ／ｍ
ｇタンパク）。
に、５０μｇのＤＮＡと、１５％（v/v）のＤＥＳＯま
たはＤＰＳＯを含む組成物の注入後のルシフェラーゼを
コードする遺伝子の肺における発現レベル（ＲＬＵ／ｍ
ｇタンパク）。
【図３】ｐＨ７．５の２０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ緩衝液中
に、５０μｇのＤＮＡと、ここでは適量として、１０ま
たは１５％(v/v)の異なる極性化合物を含む組成物の注
入後のルシフェラーゼをコードする遺伝子の肺における
発現レベル（ＲＬＵ／ｍｇタンパク）。示された数値
は、同一の組成物を注入したマウスで観察された結果の
平均から各ケースごとに算出される。
に、５０μｇのＤＮＡと、ここでは適量として、１０ま
たは１５％(v/v)の異なる極性化合物を含む組成物の注
入後のルシフェラーゼをコードする遺伝子の肺における
発現レベル（ＲＬＵ／ｍｇタンパク）。示された数値
は、同一の組成物を注入したマウスで観察された結果の
平均から各ケースごとに算出される。
【図４】ｐＨ７．５の２０ｍＭＨｅｐｅｓ緩衝液中に、
５０μｇのＤＮＡと、ここでは適量として、１０または
１５％(v/v)のＴＭＵまたはＤＰＳＯを含む組成物の注
入後の、ルシフェラーゼをコードする遺伝子の肺におけ
る発現レベル（ＲＬＵ／ｍｇタンパク）。示された数値
は、同一の組成物を注入したマウスで観察された結果の
平均から各ケースごとに算出される。ＳＥＭ：平均標準
誤差（Burke, Scientific data management 9 (1997),
32-38を参照。）
５０μｇのＤＮＡと、ここでは適量として、１０または
１５％(v/v)のＴＭＵまたはＤＰＳＯを含む組成物の注
入後の、ルシフェラーゼをコードする遺伝子の肺におけ
る発現レベル（ＲＬＵ／ｍｇタンパク）。示された数値
は、同一の組成物を注入したマウスで観察された結果の
平均から各ケースごとに算出される。ＳＥＭ：平均標準
誤差（Burke, Scientific data management 9 (1997),
32-38を参照。）
【図５】プラスミドＤＮＡ融解曲線（ＤＰＳＯ添加と無
添加） ５０μｇ／ｍｌのプラスミドＤＮＡ（ｐＴＧ１１０３
３）を含むｐＨ７．５の２０ｍＭＨｅｐｅｓ緩衝液、ま
たは５０μｇ／ｍｌのプラスミドＤＮＡ（ｐＴＧ１１０
３３）を含み、更に５、１０、１５または２０％のＤＰ
ＳＯを含むｐＨ７．５の２０ｍＭＨｅｐｅｓ緩衝液を加
温した（４℃／分）。吸光度変化を記録し、３５℃の開
始時の吸光度を基準とした。
添加） ５０μｇ／ｍｌのプラスミドＤＮＡ（ｐＴＧ１１０３
３）を含むｐＨ７．５の２０ｍＭＨｅｐｅｓ緩衝液、ま
たは５０μｇ／ｍｌのプラスミドＤＮＡ（ｐＴＧ１１０
３３）を含み、更に５、１０、１５または２０％のＤＰ
ＳＯを含むｐＨ７．５の２０ｍＭＨｅｐｅｓ緩衝液を加
温した（４℃／分）。吸光度変化を記録し、３５℃の開
始時の吸光度を基準とした。
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成１０年９月２日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正内容】
【特許請求の範囲】
【化１】 （この式中、Ｒ１およびＲ２は同一または異っており、
任意に置換されていてもよく、炭素原子が１〜８個のア
リル基、アルキル基、シクロアルキル基、フルオロアル
キル基、アルケニル基またはオキシアルキル基であり、
ただし、Ｒ１またはＲ２が１または２個の炭素原子の基
である場合は、それぞれＲ２またはＲ１は少なくとも３
個の炭素原子の基であり、Ｒ１とＲ２は分子を環化する
ために連結可能である。）、（ｂ）一般式II
任意に置換されていてもよく、炭素原子が１〜８個のア
リル基、アルキル基、シクロアルキル基、フルオロアル
キル基、アルケニル基またはオキシアルキル基であり、
ただし、Ｒ１またはＲ２が１または２個の炭素原子の基
である場合は、それぞれＲ２またはＲ１は少なくとも３
個の炭素原子の基であり、Ｒ１とＲ２は分子を環化する
ために連結可能である。）、（ｂ）一般式II
【化２】 （この式中、Ｒ３およびＲ４は同一または異っており、
任意に繰り返されていてもよく、直線状または分枝状で
あり、かつ任意に置換されていてもよい、炭素原子が１
〜８個のアリル基、アルキル基、シクロアルキル基、フ
ルオロアルキル基、アルケニル基またはオキシアルキル
基であり、Ｒ３とＲ４は分子を環化するために連結可能
である。）、（ｃ）一般式III
任意に繰り返されていてもよく、直線状または分枝状で
あり、かつ任意に置換されていてもよい、炭素原子が１
〜８個のアリル基、アルキル基、シクロアルキル基、フ
ルオロアルキル基、アルケニル基またはオキシアルキル
基であり、Ｒ３とＲ４は分子を環化するために連結可能
である。）、（ｃ）一般式III
【化３】 （この式中、Ｒ３およびＲ４は同一または異っており、
任意に繰り返されていてもよく、直線状または分枝状で
あり、かつ任意に置換されるていてもよい、炭素原子が
１から８個のアリル基、アルキル基、シクロアルキル
基、フルオロアルキル基、アルケニル基またはオキシア
ルキル基であり、Ｒ５は(ＣＨ2）xであり、それぞれの
[Ｒ５−Ｓ]nの繰り返し中互いに独立であり、ｘは１〜
６であり、Ｒ５は任意に置換されていてもよく、ｎは１
〜５０であり、Ｒ３とＲ４は分子を環化するために連結
可能である。）、または、（ｄ）ジメチルホルムアミ
ド、ジメチルアセトアミド、テトラメチル尿素またはこ
れらのいずれかの誘導体、により定義される化合物から
選択される少なくも一つの非プロトン性極性化合物との
混合物を含む組成物。
任意に繰り返されていてもよく、直線状または分枝状で
あり、かつ任意に置換されるていてもよい、炭素原子が
１から８個のアリル基、アルキル基、シクロアルキル
基、フルオロアルキル基、アルケニル基またはオキシア
ルキル基であり、Ｒ５は(ＣＨ2）xであり、それぞれの
[Ｒ５−Ｓ]nの繰り返し中互いに独立であり、ｘは１〜
６であり、Ｒ５は任意に置換されていてもよく、ｎは１
〜５０であり、Ｒ３とＲ４は分子を環化するために連結
可能である。）、または、（ｄ）ジメチルホルムアミ
ド、ジメチルアセトアミド、テトラメチル尿素またはこ
れらのいずれかの誘導体、により定義される化合物から
選択される少なくも一つの非プロトン性極性化合物との
混合物を含む組成物。
Claims (29)
- 【請求項１】 少なくとも一つの治療上活性な物質と、
（ａ）一般式Ｉ 【化１】 （この式中、Ｒ１およびＲ２は同一または異っており、
任意に置換されていてもよく、炭素原子が１〜８個のア
リル基、アルキル基、シクロアルキル基、フルオロアル
キル基、アルケニル基またはオキシアルキル基であり、
ただし、Ｒ１またはＲ２が１または２個の炭素原子の基
である場合は、それぞれＲ２またはＲ１は少なくとも３
個の炭素原子の基であり、Ｒ１とＲ２は分子を環化する
ために連結可能である。）、（ｂ）一般式II 【化２】 （この式中、Ｒ３およびＲ４は同一または異っており、
任意に繰り返されていてもよく、直線状または分枝状で
あり、かつ任意に置換されていてもよい、炭素原子が１
〜８個のアリル基、アルキル基、シクロアルキル基、フ
ルオロアルキル基、アルケニル基またはオキシアルキル
基であり、Ｒ３とＲ４は分子を環化するために連結可能
である。）、（ｃ）一般式III 【化３】 （この式中、Ｒ３およびＲ４は同一または異っており、
任意に繰り返されていてもよく、直線状または分枝状で
あり、かつ任意に置換されるていてもよい、炭素原子が
１から８個のアリル基、アルキル基、シクロアルキル
基、フルオロアルキル基、アルケニル基またはオキシア
ルキル基であり、Ｒ５は(ＣＨ2）xであり、それぞれの
[Ｒ５−Ｓ]nの繰り返し中互いに独立であり、ｘは１〜
６であり、Ｒ５は任意に置換されていてもよく、ｎは１
〜５０であり、Ｒ３とＲ４は分子を環化するために連結
可能である。）、または、（ｄ）ジメチルホルムアミ
ド、ジメチルアセトアミド、テトラメチル尿素またはこ
れらのいずれかの誘導体、により定義される化合物から
選択される少なくも一つの非プロトン性極性化合物との
混合物を含む組成物。 - 【請求項２】 前記非プロトン性極性化合物が、ジ−ｎ
−プロピルスルホキシド（ＤＰＳＯ）、テトラメチレン
スルホキシド（ＴＥＭＳＯ）、ジメチルスルホン、スル
ホラン、１−メチル−２−ピロリドンおよびこれらの誘
導体からなる群から選択される請求項１記載の組成物。 - 【請求項３】 前記治療上活性な物質がポリヌクレオチ
ドである請求項１および２記載の組成物。 - 【請求項４】 前記ポリヌクレオチドが標的細胞へのそ
の導入を促進するいかなる化合物も伴わないポリヌクレ
オチドである請求項３記載の組成物。 - 【請求項５】 前記ポリヌクレオチドが少なくとも一つ
のウィルスのポリペプチドと結合しているポリヌクレオ
チドである請求項３記載の組成物。 - 【請求項６】 前記ポリヌクレオチドが少なくとも一つ
の陽イオン性両親媒性の化合物、特に脂質と結合してい
るポリヌクレオチドである請求項３記載の組成物。 - 【請求項７】 前記ポリヌクレオチドが少なくとも一つ
の陽イオン性または中性のポリマーと結合しているポリ
ヌクレオチドである請求項３記載の組成物。 - 【請求項８】 前記ポリヌクレオチドがアンチセンスポ
リヌクレオチドである請求項３〜７のいずれか一項に記
載の組成物。 - 【請求項９】 前記ポリヌクレオチドがリボザイムであ
る請求項３〜７のいずれか一項に記載の組成物。 - 【請求項１０】 前記ポリヌクレオチドが対象の遺伝
子、および、その対象の遺伝子の発現を可能にする因子
を含む請求項３〜７のいずれか一項に記載の組成物。 - 【請求項１１】 前記ポリヌクレオチドがポリペプチド
の全体または一部をコードしている請求項１０記載の組
成物。 - 【請求項１２】 前記ポリペプチドが治療上の活性を示
す請求項１１記載の組成物。 - 【請求項１３】 前記ポリペプチドが予防上の活性、特
に免疫原性の活性を示す請求項１１記載の組成物。 - 【請求項１４】 前記ポリペプチドが酵素、ホルモン、
サイトカイン、膜受容体、抗体、転写、翻訳または複製
を制御し転写の安定性に関与する因子、構造ポリペプチ
ド、膜チャネルを形成するポリペプチド、輸送ポリペプ
チド、接着分子またはリガンドである請求項１１記載の
組成物。 - 【請求項１５】 前記非プロトン性極性化合物が水溶液
中にある請求項１〜１４のいずれか一項に記載の組成
物。 - 【請求項１６】 極性化合物の体積が組成物の総体積の
１５〜２０％を示す請求項１〜１５のいずれか一項に記
載の組成物。 - 【請求項１７】 非プロトン性極性化合物が水溶性の溶
液中にある請求項１〜１６のいずれか一項に記載の組成
物。 - 【請求項１８】 請求項１〜１７のいずれか一項に記載
の組成物、および任意に薬学的に許容される担体を含む
医薬組成物。 - 【請求項１９】 少なくとも一つの治療上活性な物質を
標的細胞の内部に転移させるための請求項１８記載の医
薬組成物。 - 【請求項２０】 筋肉内の経路によるか、または吸入、
気管内注入、点滴またはエアゾール化によって投与され
るように設計された請求項１８または１９記載の医薬組
成物。 - 【請求項２１】 請求項１〜１７のいずれか一項に記載
の組成物を含むワクチン。 - 【請求項２２】 遺伝子治療における使用のための請求
項１８〜２０のいずれか一項に記載の医薬組成物または
請求項２１記載のワクチン。 - 【請求項２３】 請求項１〜１７のいずれか一項に記載
の組成物を含む診断用組成物。 - 【請求項２４】 少なくとも一つの治療上活性な物質を
インビトロまたはインビボの標的細胞に転移させるため
の医薬組成物の調製のための請求項１〜１７のいずれか
一項に記載の組成物の使用。 - 【請求項２５】 前記標的細胞が哺乳動物細胞である請
求項２４記載の使用。 - 【請求項２６】 前記標的細胞が筋細胞である請求項２
４または２５に記載の使用。 - 【請求項２７】 前記標的細胞が気道の細胞である請求
項２４または２５記載の使用。 - 【請求項２８】 前記標的細胞を請求項１〜１７の一項
に記載の組成物に接触させる、治療上活性な物質をイン
ビトロの標的細胞に転移させる方法。 - 【請求項２９】 前記組成物を細胞に接触させる前に、
その組成物を加温することからなる追加的な行程を含む
請求項２８記載の方法。
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR9708267 | 1997-07-01 | ||
| FR9708267 | 1997-07-01 | ||
| FR9712950 | 1997-10-16 | ||
| FR9712950 | 1997-10-16 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH11106355A true JPH11106355A (ja) | 1999-04-20 |
| JP3499137B2 JP3499137B2 (ja) | 2004-02-23 |
Family
ID=26233650
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP22223598A Expired - Fee Related JP3499137B2 (ja) | 1997-07-01 | 1998-07-01 | 標的細胞へ治療学上活性な物質を輪送するのに有用な組成物及びその遺伝子治療における使用 |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6656734B1 (ja) |
| EP (1) | EP0890362B1 (ja) |
| JP (1) | JP3499137B2 (ja) |
| CN (1) | CN1212890A (ja) |
| AT (1) | ATE200226T1 (ja) |
| AU (1) | AU707186B2 (ja) |
| CA (1) | CA2242035C (ja) |
| DE (1) | DE69800659T2 (ja) |
| DK (1) | DK0890362T3 (ja) |
| ES (1) | ES2156421T3 (ja) |
| GR (1) | GR3035797T3 (ja) |
| PT (1) | PT890362E (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2003512437A (ja) * | 1999-10-22 | 2003-04-02 | アヴェンティス パストゥール リミテッド | 腫瘍抗原に対する免疫応答を誘発および／または増強する方法 |
Families Citing this family (32)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1006197A1 (en) * | 1998-12-04 | 2000-06-07 | Transgene S.A. | Use of an immuno complex for the preparation of a therapeutic composition useful for transfecting a polynucleotide into macropinocyte cells |
| EP1013772A1 (en) * | 1998-12-21 | 2000-06-28 | Transgene S.A. | Method for preparing suspension of stable posiplexes |
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