JPH11116484A - 炎症性腸疾患予防・治療剤及び飲食品 - Google Patents
炎症性腸疾患予防・治療剤及び飲食品Info
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- JPH11116484A JPH11116484A JP9291772A JP29177297A JPH11116484A JP H11116484 A JPH11116484 A JP H11116484A JP 9291772 A JP9291772 A JP 9291772A JP 29177297 A JP29177297 A JP 29177297A JP H11116484 A JPH11116484 A JP H11116484A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 炎症性腸疾患の予防・治療剤もしくは病態の
悪化を妨げる炎症性腸疾患予防・治療剤及び飲食品を提
供する。 【解決手段】 ガラクトオリゴ糖を有効成分とするも
の、又はガラクトオリゴ糖とビフィドバクテリウム属細
菌とを有効成分とするものである。
悪化を妨げる炎症性腸疾患予防・治療剤及び飲食品を提
供する。 【解決手段】 ガラクトオリゴ糖を有効成分とするも
の、又はガラクトオリゴ糖とビフィドバクテリウム属細
菌とを有効成分とするものである。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、経口投与すること
により、炎症性腸疾患を予防、治療するための炎症性腸
疾患予防・治療剤及び飲食品に関する。具体的には、ガ
ラクトオリゴ糖を含有する炎症性腸疾患の予防・治療剤
及び飲食品に関するものでる。
により、炎症性腸疾患を予防、治療するための炎症性腸
疾患予防・治療剤及び飲食品に関する。具体的には、ガ
ラクトオリゴ糖を含有する炎症性腸疾患の予防・治療剤
及び飲食品に関するものでる。
【０００２】
【従来の技術】炎症性腸疾患(Inflammatory Bowel Dise
ase)は欧米で患者数が多く、近年日本における発症も増
加傾向にある。この炎症性腸疾患は、若年での発症の多
い疾患であり、潰瘍性大腸炎とクローン病とに分けられ
る。
ase)は欧米で患者数が多く、近年日本における発症も増
加傾向にある。この炎症性腸疾患は、若年での発症の多
い疾患であり、潰瘍性大腸炎とクローン病とに分けられ
る。
【０００３】潰瘍性大腸炎は大腸粘膜固有層において、
クローン病は主に大腸及び回腸の全層において発症す
る。これらは、厚生省難病指定の一つとして、その病態
解明に多くの努力がなされているが、未だその原因は明
らかではない。疾患の病態は、腸管の粘膜にび燗や潰瘍
が形成されるものであり、体重減少、下痢、血便等の症
状が現れる。
クローン病は主に大腸及び回腸の全層において発症す
る。これらは、厚生省難病指定の一つとして、その病態
解明に多くの努力がなされているが、未だその原因は明
らかではない。疾患の病態は、腸管の粘膜にび燗や潰瘍
が形成されるものであり、体重減少、下痢、血便等の症
状が現れる。
【０００４】本疾患においては、通常、症状の重い活動
期と、症状の軽い緩解期とが繰り返されている。活動期
と緩解期との見極めは、主に内視鏡による病変部の観察
により行われており、また、好中球の産生する炎症性物
質(ミエロペルオキシダーゼ：ＭＰＯ)の量を指標として
も診断が可能である。
期と、症状の軽い緩解期とが繰り返されている。活動期
と緩解期との見極めは、主に内視鏡による病変部の観察
により行われており、また、好中球の産生する炎症性物
質(ミエロペルオキシダーゼ：ＭＰＯ)の量を指標として
も診断が可能である。
【０００５】このような病態の出現や悪化には、宿主免
疫系の異常及び腸内細菌の関与等も示唆されている。例
えば潰瘍性大腸炎の患者では、大腸におけるムチン分解
活性の上昇が報告されている。
疫系の異常及び腸内細菌の関与等も示唆されている。例
えば潰瘍性大腸炎の患者では、大腸におけるムチン分解
活性の上昇が報告されている。
【０００６】現状では、本疾患を完全に治癒させる薬
剤、治療方法は見出されていないものの、治療剤とし
て、サラゾピリン(一般名:サラゾスルファピリジン(Sal
icylazosulfapyridine))が用いられている。厚生省特定
疾患潰瘍性大腸炎斑による薬物療法指針によれば、サラ
ゾピリン単独療法よりもプレドニゾロン注腸療法を早期
に併用することが肝要であるとされている。(厚生省特
定疾患消化吸収障害調査研究班、昭和58年業績集、198
4,p.11)。
剤、治療方法は見出されていないものの、治療剤とし
て、サラゾピリン(一般名:サラゾスルファピリジン(Sal
icylazosulfapyridine))が用いられている。厚生省特定
疾患潰瘍性大腸炎斑による薬物療法指針によれば、サラ
ゾピリン単独療法よりもプレドニゾロン注腸療法を早期
に併用することが肝要であるとされている。(厚生省特
定疾患消化吸収障害調査研究班、昭和58年業績集、198
4,p.11)。
【０００７】最近では、ウリナスチン(多田正大他：難
治性潰瘍性大腸炎の新しい治療の試み、大腸肛門誌、4
2：578．1989)、魚油のＥＰＡ(エイコサペンタエン酸)
(Salomon P．et al.:Treatment of ulcerative cohtis
acid-an open trial-.J．Clin．Gastroenterol.12:15
7．1990)、ビフイズス菌菌体(特開平７−１２６１７７
号公報)、フラクトオリゴ糖(Digestion ＆ Absorptio
n，Vo1．16 NO.1 1993)などが潰瘍性大腸炎に有効との
報告もあるが、ヒトに対して確立した治療法ではない。
治性潰瘍性大腸炎の新しい治療の試み、大腸肛門誌、4
2：578．1989)、魚油のＥＰＡ(エイコサペンタエン酸)
(Salomon P．et al.:Treatment of ulcerative cohtis
acid-an open trial-.J．Clin．Gastroenterol.12:15
7．1990)、ビフイズス菌菌体(特開平７−１２６１７７
号公報)、フラクトオリゴ糖(Digestion ＆ Absorptio
n，Vo1．16 NO.1 1993)などが潰瘍性大腸炎に有効との
報告もあるが、ヒトに対して確立した治療法ではない。
【０００８】このため、出来るだけ活動期を短くし、速
やかに緩解期に導入することを内科的治療の目的として
いる。実際に病院等で用いられてられている治療方法と
しては、高蛋白、高カロリー、高ビタミン食で残渣の少
ないものを摂らせるなどの食事指導が主流となってい
る。
やかに緩解期に導入することを内科的治療の目的として
いる。実際に病院等で用いられてられている治療方法と
しては、高蛋白、高カロリー、高ビタミン食で残渣の少
ないものを摂らせるなどの食事指導が主流となってい
る。
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】一方、炎症性腸疾患
は、デキストラン硫酸ナトリウム(dextran sodium sulf
ate：ＤＳＳ)の投与により人為的に発症させることがで
きる。また、ＤＳＳの投与量を調節することにより、急
性(acute)あるいは慢性(chronic)のマウス潰瘍性大腸炎
モデルなどを作出することができ、これを用いれば各種
物質の有する炎症性腸疾患予防・治療効果を確認するこ
とも可能である。更に、前述のように、内視鏡による診
断、腸液や糞便中のＭＰＯ活性等を指標として、緩解期
から活動期への病状悪化を抑制する物質を探索すること
もできる。
は、デキストラン硫酸ナトリウム(dextran sodium sulf
ate：ＤＳＳ)の投与により人為的に発症させることがで
きる。また、ＤＳＳの投与量を調節することにより、急
性(acute)あるいは慢性(chronic)のマウス潰瘍性大腸炎
モデルなどを作出することができ、これを用いれば各種
物質の有する炎症性腸疾患予防・治療効果を確認するこ
とも可能である。更に、前述のように、内視鏡による診
断、腸液や糞便中のＭＰＯ活性等を指標として、緩解期
から活動期への病状悪化を抑制する物質を探索すること
もできる。
【００１０】従って、本発明の目的は、上記のような知
見に基づいて、炎症性腸疾患の予防・治療剤もしくは病
態の悪化、即ち、緩解期から活動期への移行を妨げる剤
を見出すことにある。また、この剤としては、薬剤的な
効用と共に、安全性、嗜好性にも優れ、食事指導等に用
いても、患者への負担のかからない物質を探索すること
を目的としている。本発明は、ガラクトオリゴ糖とビフ
ィドバクテリウム属細菌とを共投与すると、より一層の
炎症性腸疾患予防・治療効果が得られることを見出した
ものであり、これらを有効成分とする炎症性腸疾患予防
・治療剤及び食品を提供するものである。
見に基づいて、炎症性腸疾患の予防・治療剤もしくは病
態の悪化、即ち、緩解期から活動期への移行を妨げる剤
を見出すことにある。また、この剤としては、薬剤的な
効用と共に、安全性、嗜好性にも優れ、食事指導等に用
いても、患者への負担のかからない物質を探索すること
を目的としている。本発明は、ガラクトオリゴ糖とビフ
ィドバクテリウム属細菌とを共投与すると、より一層の
炎症性腸疾患予防・治療効果が得られることを見出した
ものであり、これらを有効成分とする炎症性腸疾患予防
・治療剤及び食品を提供するものである。
【００１１】
【課題を解決するための手段】上記課題を解決するため
の本発明は、オリゴ糖類の１種であるガラクトオリゴ糖
が炎症性腸疾患に対する治療効果、病態悪化の抑制効果
を有することを見出したものである。即ち、本発明は、
ガラクトオリゴ糖を有効成分とする炎症性腸疾患の予防
・治療剤を提供するものである。
の本発明は、オリゴ糖類の１種であるガラクトオリゴ糖
が炎症性腸疾患に対する治療効果、病態悪化の抑制効果
を有することを見出したものである。即ち、本発明は、
ガラクトオリゴ糖を有効成分とする炎症性腸疾患の予防
・治療剤を提供するものである。
【００１２】また、ガラクトオリゴ糖は、現状でも飲食
品等に含まれているものであり、安全性、嗜好性共に優
れた物質である。このため、本発明は、食事指導時など
にも好適に使用できる、ガラクトオリゴ糖を有効成分と
する炎症性腸疾患の予防・治療食品をも提供するもので
ある。
品等に含まれているものであり、安全性、嗜好性共に優
れた物質である。このため、本発明は、食事指導時など
にも好適に使用できる、ガラクトオリゴ糖を有効成分と
する炎症性腸疾患の予防・治療食品をも提供するもので
ある。
【００１３】本請求項１に記載された発明に係る炎症性
腸疾患予防・治療剤は、ガラクトオリゴ糖を有効成分と
するものである。
腸疾患予防・治療剤は、ガラクトオリゴ糖を有効成分と
するものである。
【００１４】本請求項２に記載された発明に係る炎症性
腸疾患予防・治療剤は、ビフィドバクテリウム属細菌を
有効成分として更に含有するものである。
腸疾患予防・治療剤は、ビフィドバクテリウム属細菌を
有効成分として更に含有するものである。
【００１５】本請求項３に記載された発明に係る炎症性
腸疾患予防・治療用飲食品は、ガラクトオリゴ糖を含有
するものである。
腸疾患予防・治療用飲食品は、ガラクトオリゴ糖を含有
するものである。
【００１６】本請求項４に記載された発明に係る炎症性
腸疾患予防・治療食品は、ビフィドバクテリウム属細菌
を更に含有するものである。
腸疾患予防・治療食品は、ビフィドバクテリウム属細菌
を更に含有するものである。
【００１７】
【発明の実施の形態】本発明でのガラクトオリゴ糖と
は、一般式 Gal-(Gal)n-Glc (但し、式中Galはガラクトース残基、Glcはグルコース
残基、nは１〜4の整数を、それぞれ表す)で表されるも
ので、母乳オリゴ糖の主要構成成分であり、且つヒト腸
内に生息する有用細菌ビフィドバクテリウム菌の増殖促
進因子であることが知られている。
は、一般式 Gal-(Gal)n-Glc (但し、式中Galはガラクトース残基、Glcはグルコース
残基、nは１〜4の整数を、それぞれ表す)で表されるも
ので、母乳オリゴ糖の主要構成成分であり、且つヒト腸
内に生息する有用細菌ビフィドバクテリウム菌の増殖促
進因子であることが知られている。
【００１８】ガラクトオリゴ糖の製造は、通常酵素法に
より行われている。即ち、細菌等由来のβ−ガラクトシ
ダーゼによる乳糖の分解反応、更に、分解により生じた
グルコース、ガラクトースの乳糖への転移反応の生成物
としてガラクトオリゴ糖が得られるのである。β−ガラ
クトシダーゼはその１種又は２種以上を組合わせること
で、上記のような分解・転移反応を触媒できるものであ
れば何れも使用でき、中でもバチルス・サーキュランス
由来のものが好適である。また、製造方法も特に限定さ
れるものではなく、酵素法及びその他何れの方法で得ら
れたものも使用可能である。
より行われている。即ち、細菌等由来のβ−ガラクトシ
ダーゼによる乳糖の分解反応、更に、分解により生じた
グルコース、ガラクトースの乳糖への転移反応の生成物
としてガラクトオリゴ糖が得られるのである。β−ガラ
クトシダーゼはその１種又は２種以上を組合わせること
で、上記のような分解・転移反応を触媒できるものであ
れば何れも使用でき、中でもバチルス・サーキュランス
由来のものが好適である。また、製造方法も特に限定さ
れるものではなく、酵素法及びその他何れの方法で得ら
れたものも使用可能である。
【００１９】また、本発明の実施例で評価に用いたミエ
ロペルオキシダーゼ(ＭＰＯ)とは、主に好中球が産生す
る炎症性物質であり、その量を測定すれば病状、特に緩
解期であるのか活動期であるのかを把握できる。通常マ
ウスモデル等でＭＰＯ活性を測定する場合には、検体と
して糞便を用いている。しかしながら、今回ヒトを対象
として行った実験では、検体として内視鏡診断の際に洗
浄して得られた内視鏡洗浄液(Lavage solution:ＬＳ)を
用いた。ＬＳは病変部位の病態を最も如実に現してお
り、糞便と比べて新鮮な状態で、病状を把握する指標と
しては好適である。
ロペルオキシダーゼ(ＭＰＯ)とは、主に好中球が産生す
る炎症性物質であり、その量を測定すれば病状、特に緩
解期であるのか活動期であるのかを把握できる。通常マ
ウスモデル等でＭＰＯ活性を測定する場合には、検体と
して糞便を用いている。しかしながら、今回ヒトを対象
として行った実験では、検体として内視鏡診断の際に洗
浄して得られた内視鏡洗浄液(Lavage solution:ＬＳ)を
用いた。ＬＳは病変部位の病態を最も如実に現してお
り、糞便と比べて新鮮な状態で、病状を把握する指標と
しては好適である。
【００２０】本発明においては、マウス及びヒトヘガラ
クトオリゴ糖を投与し、炎症性腸疾患に対する効果を調
べた。マウスの病態は、体重の減少、直腸の肥大、糞便
中のＭＰＯ活性、糞便中のＩｇＧ量(大腸炎の症状が重
いときに増加する)を指標とし、ヒトの病態は、内視鏡
による診察結果及び患者のＬＳに含まれているＭＰＯ活
性を指標とした。
クトオリゴ糖を投与し、炎症性腸疾患に対する効果を調
べた。マウスの病態は、体重の減少、直腸の肥大、糞便
中のＭＰＯ活性、糞便中のＩｇＧ量(大腸炎の症状が重
いときに増加する)を指標とし、ヒトの病態は、内視鏡
による診察結果及び患者のＬＳに含まれているＭＰＯ活
性を指標とした。
【００２１】マウスを用いた実験では、ＤＳＳにより誘
発した急性及び慢性の潰瘍性大腸炎に対し、ガラクトオ
リゴ糖が予防作用を有していることが確認された。ま
た、ヒトヘの投与が患者に与える影響は、投与前の患者
の状態、即ち、患者が緩解期であるのか活動期にあるの
かによって異なっていた。投与前活動期にあった患者の
腸液中のＭＰＯ量は有意に減少したものの、緩解期であ
った患者のＭＰＯ量は投与期間中変化しなかった。しか
しながら、単に食事指導を行ったグループではＭＰＯ量
は増加した。このとき、内視鏡による診断の結果とＭＰ
Ｏ濃度はよく相関していた。
発した急性及び慢性の潰瘍性大腸炎に対し、ガラクトオ
リゴ糖が予防作用を有していることが確認された。ま
た、ヒトヘの投与が患者に与える影響は、投与前の患者
の状態、即ち、患者が緩解期であるのか活動期にあるの
かによって異なっていた。投与前活動期にあった患者の
腸液中のＭＰＯ量は有意に減少したものの、緩解期であ
った患者のＭＰＯ量は投与期間中変化しなかった。しか
しながら、単に食事指導を行ったグループではＭＰＯ量
は増加した。このとき、内視鏡による診断の結果とＭＰ
Ｏ濃度はよく相関していた。
【００２２】また、マウスを用いた実験では、ガラクト
オリゴ糖を単独投与するよりもガラクトオリゴ糖とビフ
ィドバクテリウム属細菌とを共投与する方が、体重減少
やＭＰＯ活性の改善効果が強いことが有意ではないもの
の示されていた。
オリゴ糖を単独投与するよりもガラクトオリゴ糖とビフ
ィドバクテリウム属細菌とを共投与する方が、体重減少
やＭＰＯ活性の改善効果が強いことが有意ではないもの
の示されていた。
【００２３】一方、ガラクトオリゴ糖が炎症性腸疾患を
予防・治療するメカニズムは、明らかではないものの、
本発明者らが既に得ている知見からは、バクテロイデス
属細菌増殖の関与が示唆されている。また、前述のよう
にムチン分解菌やビフィドバクテリウム属細菌との関連
も示唆されており、これらが組合わさって病態の改善等
に係わっているものと考えられる。
予防・治療するメカニズムは、明らかではないものの、
本発明者らが既に得ている知見からは、バクテロイデス
属細菌増殖の関与が示唆されている。また、前述のよう
にムチン分解菌やビフィドバクテリウム属細菌との関連
も示唆されており、これらが組合わさって病態の改善等
に係わっているものと考えられる。
【００２４】ガラクトオリゴ糖は元々食品として使用さ
れているので、安全性、嗜好性共に問題はなく、直接経
口投与しても良い。また、必要に応じて賦形剤、結合
剤、崩壊剤、滑沢剤、被覆剤、乳化剤、分散剤、溶剤安
定化剤等を適宜添加して、錠剤、顆粒剤、散剤、粉末
剤、カプセル剤等に製剤して使用しても良い。
れているので、安全性、嗜好性共に問題はなく、直接経
口投与しても良い。また、必要に応じて賦形剤、結合
剤、崩壊剤、滑沢剤、被覆剤、乳化剤、分散剤、溶剤安
定化剤等を適宜添加して、錠剤、顆粒剤、散剤、粉末
剤、カプセル剤等に製剤して使用しても良い。
【００２５】ガラクトオリゴ糖を継続的に投与する場合
には、１日当たり成人で５g〜10gが好ましく、特に、５
g程度が良い。
には、１日当たり成人で５g〜10gが好ましく、特に、５
g程度が良い。
【００２６】また、本発明でガラクトオリゴ糖と併用さ
れるビフィドバクテリウム属細菌としては、ヒト体内で
の繁殖が望ましいビフィドバクテリウム・ブレーベ（Bi
didobacterium breve）、ビフィドバクテリウム・ロン
ガム（Bididobacterium longum）等が選ばれる。尚、ガ
ラクトオリゴ糖によって繁殖が期待されるラクトバチル
ス属細菌やエンテロコッカス属細菌と併用しても良い。
れるビフィドバクテリウム属細菌としては、ヒト体内で
の繁殖が望ましいビフィドバクテリウム・ブレーベ（Bi
didobacterium breve）、ビフィドバクテリウム・ロン
ガム（Bididobacterium longum）等が選ばれる。尚、ガ
ラクトオリゴ糖によって繁殖が期待されるラクトバチル
ス属細菌やエンテロコッカス属細菌と併用しても良い。
【００２７】
実施例１．ガラクトオリゴ糖(ＢＯＳ)の作成 まず、原料となる乳糖を温水に溶解した後、冷却・ｐＨ
調製を行い、バチルス・サーキュランス由来のβガラク
トシダーゼを添加し、酵素反応を行う。酵素による乳糖
の分解及び単糖の転移反応がなされたら加温により酵素
を失活させる。こうして得られた溶液に濾過、イオン交
換クロマトグラフィー等を行い、ガラクトオリゴ糖を精
製する。
調製を行い、バチルス・サーキュランス由来のβガラク
トシダーゼを添加し、酵素反応を行う。酵素による乳糖
の分解及び単糖の転移反応がなされたら加温により酵素
を失活させる。こうして得られた溶液に濾過、イオン交
換クロマトグラフィー等を行い、ガラクトオリゴ糖を精
製する。
【００２８】実施例２．マウス潰瘍性大腸炎に対するガ
ラクトオリゴ糖の予防効果の検討 以下の条件で、ガラクトオリゴ糖の投与による炎症抑制
効果を検討した。 (2-1) 動物：Balb/cマウス(日本クレア、♂及びSLC、
♂：８〜10週令)を用いた。
ラクトオリゴ糖の予防効果の検討 以下の条件で、ガラクトオリゴ糖の投与による炎症抑制
効果を検討した。 (2-1) 動物：Balb/cマウス(日本クレア、♂及びSLC、
♂：８〜10週令)を用いた。
【００２９】(2-2) ガラクトオリゴ糖：ＢＯＳ(実施例
１に記載)を使用した。
１に記載)を使用した。
【００３０】(2-3) 実験内容：ＢＯＳを10日間前投与し
た後に、ＤＳＳ(分子量50,OOO，５％)を７日間投与して
急性大腸炎を誘導した群及び、１％ＤＳＳを６週間投与
して慢性大腸炎を誘導した群各々に対するＢＯＳの予防
効果を検討した。ＢＯＳの投与効果が現れる投与量を明
らかにするために、ＢＯＳ投与量は６mg，60mg， 120mg
(/mouse/day)とした。対照には生理食塩水を投与し、マ
ウスの数は各々４匹とした。
た後に、ＤＳＳ(分子量50,OOO，５％)を７日間投与して
急性大腸炎を誘導した群及び、１％ＤＳＳを６週間投与
して慢性大腸炎を誘導した群各々に対するＢＯＳの予防
効果を検討した。ＢＯＳの投与効果が現れる投与量を明
らかにするために、ＢＯＳ投与量は６mg，60mg， 120mg
(/mouse/day)とした。対照には生理食塩水を投与し、マ
ウスの数は各々４匹とした。
【００３１】(2-4) 評価方法：急性大腸炎群の評価に
は、体重変化、及び、糞便中のＭＰＯ活性を指標として
用いた。慢性大腸炎群の評価には、大腸重量、糞便中の
ＩｇＧ活性を用いた。また、大腸炎と腸内細菌叢との関
係、ＢＯＳ投与による腸内細菌叢の変化を明らかにする
ため、糞便中の細菌叢と糞便中有機酸を測定した。
は、体重変化、及び、糞便中のＭＰＯ活性を指標として
用いた。慢性大腸炎群の評価には、大腸重量、糞便中の
ＩｇＧ活性を用いた。また、大腸炎と腸内細菌叢との関
係、ＢＯＳ投与による腸内細菌叢の変化を明らかにする
ため、糞便中の細菌叢と糞便中有機酸を測定した。
【００３２】 体重変化の測定 マウスの体重は、大腸炎の誘導後２日毎に測定した。結
果を図１に示す。 大腸重量の測定 ＢＯＳ投与群、コントロール群共にマウスを殺した後、
個体体重に対する大腸重量の割合を測定した。結果を図
２に示す。
果を図１に示す。 大腸重量の測定 ＢＯＳ投与群、コントロール群共にマウスを殺した後、
個体体重に対する大腸重量の割合を測定した。結果を図
２に示す。
【００３３】 糞便中ＭＰＯ活性の測定 ５％ＤＳＳ投与開始より３日目及び７日目にKrawiszら
の方法を用いてＭＰＯ活性を測定した。まず、５倍希釈
した糞便をポリトロンホモゲナイザーでホモゲナイズ
し、−30℃で１時間凍結し、超音波破砕した。融解後、
15,000rpmで15分遠心分離し、上清をO.167mg/ml o-ジ
アニシディンハイドロクロライド(Sigma社製)と0.0005
％ハイドロジェンベルオキシドとを含有する酵素液に混
合し、455nmの吸光度を指標としてＭＰＯ活性を測定し
た。結果を図３に示す。
の方法を用いてＭＰＯ活性を測定した。まず、５倍希釈
した糞便をポリトロンホモゲナイザーでホモゲナイズ
し、−30℃で１時間凍結し、超音波破砕した。融解後、
15,000rpmで15分遠心分離し、上清をO.167mg/ml o-ジ
アニシディンハイドロクロライド(Sigma社製)と0.0005
％ハイドロジェンベルオキシドとを含有する酵素液に混
合し、455nmの吸光度を指標としてＭＰＯ活性を測定し
た。結果を図３に示す。
【００３４】 糞便中ＩｇＧ活性の測定 １%ＤＳＳ投与開始より６週間目の糞便中のＩｇＧ量を
サンドイッチELISA法を用いて測定した。まず、96穴の
マイクロタイタープレートに抗マウスＩｇＧ抗体(Zymed
社製)をコーティングし、更にブロッキング、洗浄を行
い、段階希釈した糞便を37℃、１時間反応させた。これ
をＰＢＳを含有するTriton-Xで数回洗浄した後、ペルオ
キシダーゼ標識した抗マウスＩｇＧ抗体(Zymed社製)を
反応させた。更に、洗浄後基質溶液を加え、基質の発色
を指標として、ＩｇＧ量を測定した。結果を図４に示
す。
サンドイッチELISA法を用いて測定した。まず、96穴の
マイクロタイタープレートに抗マウスＩｇＧ抗体(Zymed
社製)をコーティングし、更にブロッキング、洗浄を行
い、段階希釈した糞便を37℃、１時間反応させた。これ
をＰＢＳを含有するTriton-Xで数回洗浄した後、ペルオ
キシダーゼ標識した抗マウスＩｇＧ抗体(Zymed社製)を
反応させた。更に、洗浄後基質溶液を加え、基質の発色
を指標として、ＩｇＧ量を測定した。結果を図４に示
す。
【００３５】 糞便細菌叢の検索 ＢＯＳの投与前、投与後及びＤＳＳ投与後に検索を行っ
た。総嫌気性細菌、総好気性菌、Bcteroidaceae、Lacto
bacillus、Enterobacteriaceaeの検索には、各々血液Ｇ
ＡＭ（ニッスイ社製），ＴＳＡ（ＢＢＬ社製），ＮＢＧ
Ｔ（ニッスイ社製），ＬＢＳ（ＢＢＬ社製），ＤＨＬ
（ニッスイ社製）の培地を用いた。検索はマウスの糞便
をプールして行った。また、嫌気性ムチン分解菌数の測
定には、塩類溶液、ヘミン、豚胃ムチンからなる培地を
用いた。結果を図５に示す。
た。総嫌気性細菌、総好気性菌、Bcteroidaceae、Lacto
bacillus、Enterobacteriaceaeの検索には、各々血液Ｇ
ＡＭ（ニッスイ社製），ＴＳＡ（ＢＢＬ社製），ＮＢＧ
Ｔ（ニッスイ社製），ＬＢＳ（ＢＢＬ社製），ＤＨＬ
（ニッスイ社製）の培地を用いた。検索はマウスの糞便
をプールして行った。また、嫌気性ムチン分解菌数の測
定には、塩類溶液、ヘミン、豚胃ムチンからなる培地を
用いた。結果を図５に示す。
【００３６】(2-5)ＢＯＳの投与効果 図１の各群の体重変化に示すとおり、全ての群でＤＳＳ
投与後(10日以降)に体重の減少が認められたが、ＢＯＳ
を 120mg投与した群では対照群と比べて体重の減少が抑
制された。図２に示すとおり、個体体重に対する大腸重
量の割合は投与群に比較して対照群の方が有意に高かっ
た。
投与後(10日以降)に体重の減少が認められたが、ＢＯＳ
を 120mg投与した群では対照群と比べて体重の減少が抑
制された。図２に示すとおり、個体体重に対する大腸重
量の割合は投与群に比較して対照群の方が有意に高かっ
た。
【００３７】また、図３に示すとおり、糞便中ＭＰＯ活
性はＤＳＳ投与３日目では、対照群と比較してＢＯＳを
60mg投与した群で有意に減少し、ＤＳＳ投与７日目では
ＢＯＳを前投与した全ての群で有意な減少が認められ
た。図４に示すとおり、ＩｇＧ量は投与群において有意
に減少していた。また、図５に示すとおり、対照群では
嫌気性ムチン分解菌数は変わらず、総好気性菌、Entero
bacteriaceaeの菌数がＤＳＳ投与後に増加する傾向にあ
った。その他の検索した菌の菌数は、実験期間中変化が
見られなかった。
性はＤＳＳ投与３日目では、対照群と比較してＢＯＳを
60mg投与した群で有意に減少し、ＤＳＳ投与７日目では
ＢＯＳを前投与した全ての群で有意な減少が認められ
た。図４に示すとおり、ＩｇＧ量は投与群において有意
に減少していた。また、図５に示すとおり、対照群では
嫌気性ムチン分解菌数は変わらず、総好気性菌、Entero
bacteriaceaeの菌数がＤＳＳ投与後に増加する傾向にあ
った。その他の検索した菌の菌数は、実験期間中変化が
見られなかった。
【００３８】実施例３．マウス潰瘍性大腸炎に対するガ
ラクトオリゴ糖とビフィドバクテリウム属細菌との併用
効果の検討 以下の条件で、ガラクトオリゴ糖単独投与の場合とビフ
イドバクテリウム属細菌と併用した場合との炎症抑制効
果を比較検討した。
ラクトオリゴ糖とビフィドバクテリウム属細菌との併用
効果の検討 以下の条件で、ガラクトオリゴ糖単独投与の場合とビフ
イドバクテリウム属細菌と併用した場合との炎症抑制効
果を比較検討した。
【００３９】(3-1) 動物：Balb/cマウス(日本クレア、
♂及びチャールズリバー、♂：８〜10週令)５匹を用い
た。
♂及びチャールズリバー、♂：８〜10週令)５匹を用い
た。
【００４０】(3-2) ガラクトオリゴ糖：ＢＯＳ(実施例
１に記載)を使用した。
１に記載)を使用した。
【００４１】(3-3) 実験内容：ＢＯＳ又はB.breveの単
独投与群、ＢＯＳ及びB.breveの共投与群を設け、対照
は生理食塩水投与群とした。ＢＯＳの投与量は60mg(/mo
use/day)とした。B.breveの生菌製剤であるBBG-01を滅
菌蒸留1Omlに懸濁し、1000rpmで５分遠心した後、上清
を更に3000rpmで10分遠心した。その沈殿を滅菌蒸留水
１mlに懸濁してB.breveを投与したこの時のB.breveの菌
数は108(/mouse/day)であった。
独投与群、ＢＯＳ及びB.breveの共投与群を設け、対照
は生理食塩水投与群とした。ＢＯＳの投与量は60mg(/mo
use/day)とした。B.breveの生菌製剤であるBBG-01を滅
菌蒸留1Omlに懸濁し、1000rpmで５分遠心した後、上清
を更に3000rpmで10分遠心した。その沈殿を滅菌蒸留水
１mlに懸濁してB.breveを投与したこの時のB.breveの菌
数は108(/mouse/day)であった。
【００４２】各投与群は、ＢＯＳ、B.breveあるいはＢ
ＯＳ及びB.breveを７日前投与しＤＳＳ(分子量50,OOO，
4％)投与(７日)により炎症を誘導した。対照には生理食
塩水を投与し、各群はn=５とした。対照とＢＯＳ単独投
与群を先に実験開始し、その後、B.breveの単独投与
群、ＢＯＳとB.breveの共投与群を開始した。また、遅
れて実験を開始する群においても対照群を設けた。
ＯＳ及びB.breveを７日前投与しＤＳＳ(分子量50,OOO，
4％)投与(７日)により炎症を誘導した。対照には生理食
塩水を投与し、各群はn=５とした。対照とＢＯＳ単独投
与群を先に実験開始し、その後、B.breveの単独投与
群、ＢＯＳとB.breveの共投与群を開始した。また、遅
れて実験を開始する群においても対照群を設けた。
【００４３】(3-4) 評価方法：糞便中のＭＰＯ活性を指
標として用いた。ＭＰＯ活性はＤＳＳ投与開始より２日
目、４日目及び６日目に測定した。方法は実施例２と同
様である。その結果、図６に示すとおり、ＭＰＯ活性は
ＢＯＳとB.breveの投与により、ＤＳＳ投与後２日目、
４日目に有意に抑制されていた。
標として用いた。ＭＰＯ活性はＤＳＳ投与開始より２日
目、４日目及び６日目に測定した。方法は実施例２と同
様である。その結果、図６に示すとおり、ＭＰＯ活性は
ＢＯＳとB.breveの投与により、ＤＳＳ投与後２日目、
４日目に有意に抑制されていた。
【００４４】実施例４．ヒト漬瘍性大腸炎に対するガラ
クトオリゴ糖とビフィドバクテリウム属細菌との併用効
果の検討 ヒト漬瘍性大腸炎患者に対し、ＢＯＳとBBG-O1(B.breve
1O9/1包)とを1年間継続的に投与し、その効果を検討し
た。条件は以下の通りである。
クトオリゴ糖とビフィドバクテリウム属細菌との併用効
果の検討 ヒト漬瘍性大腸炎患者に対し、ＢＯＳとBBG-O1(B.breve
1O9/1包)とを1年間継続的に投与し、その効果を検討し
た。条件は以下の通りである。
【００４５】(4-1) 症例 投与群：(ＢＯＳ，BBG-01投与）２９人、（内服不全者
５人) 対照群：(食事指導群)29人 ＊両群とも、通常治療を行う。
５人) 対照群：(食事指導群)29人 ＊両群とも、通常治療を行う。
【００４６】(4-2〉ガラクトオリゴ糖：ＢＯＳを用い
た。
た。
【００４７】(4-3) 実験内容：活動期及び緩解期の潰瘍
性大腸炎患者29人にＢＯＳ及びBBG-O1(B.breve 109/1
包)を1年間継続的に投与し、内視鏡による診察及びＭＰ
Ｏ活性により、病変部への影響を検討した。投与量はＢ
ＯＳを約5.5g/日、BBB-01を3包/日とした。ＭＰＯ活性
の測定には、ELISA法を用いた。
性大腸炎患者29人にＢＯＳ及びBBG-O1(B.breve 109/1
包)を1年間継続的に投与し、内視鏡による診察及びＭＰ
Ｏ活性により、病変部への影響を検討した。投与量はＢ
ＯＳを約5.5g/日、BBB-01を3包/日とした。ＭＰＯ活性
の測定には、ELISA法を用いた。
【００４８】(4-4) ＢＯＳ及びBBG-O1併用効果 投与開始１年後の内視鏡検査の結果(内服不全者を除く)
を次の表１に示す。また、活動期及び緩解期の潰瘍性大
腸炎患者の治療前及び治療後のＭＰＯ量（内服不全者を
含む）を図７に示す。また、図７の結果に関して、治療
前の患者の病態が活動期であったものを図８に、緩解期
であったものを図９に示す。
を次の表１に示す。また、活動期及び緩解期の潰瘍性大
腸炎患者の治療前及び治療後のＭＰＯ量（内服不全者を
含む）を図７に示す。また、図７の結果に関して、治療
前の患者の病態が活動期であったものを図８に、緩解期
であったものを図９に示す。
【００４９】
【表１】
【００５０】図８及び図９に示す通り、治療前活動期に
あった患者の腸液中のＭＰＯ量は有意に減少したもの
の、緩解期であった患者のＭＰＯ量は投与期間中変化し
なかった。しかしながら、単に食事指導を行ったグルー
プではＭＰＯ量は増加した。このとき、内視鏡による診
断の結果とＭＰＯ濃度はよく相関していたことが判る。
あった患者の腸液中のＭＰＯ量は有意に減少したもの
の、緩解期であった患者のＭＰＯ量は投与期間中変化し
なかった。しかしながら、単に食事指導を行ったグルー
プではＭＰＯ量は増加した。このとき、内視鏡による診
断の結果とＭＰＯ濃度はよく相関していたことが判る。
【００５１】
【発明の効果】本発明のガラクトオリゴ糖を用いれば、
炎症性腸疾患の予防・治療剤及びその食品を安価且つ安
定して供給することが可能である。これは、活動期から
緩解期への病態改善にも有効なものであるので、患者の
症状によらず使用できる。また、ガラクトオリゴ糖は風
味上も好ましいものであるので、食事指導の際など、継
続して投与を行う場合にも好適に使用できる。
炎症性腸疾患の予防・治療剤及びその食品を安価且つ安
定して供給することが可能である。これは、活動期から
緩解期への病態改善にも有効なものであるので、患者の
症状によらず使用できる。また、ガラクトオリゴ糖は風
味上も好ましいものであるので、食事指導の際など、継
続して投与を行う場合にも好適に使用できる。
【図１】ＢＯＳ前投与がＤＳＳ誘導大腸炎マウスの体重
変化に及ぼす影響の結果を示す線図であり、縦軸はマウ
スの体重変化（初回投与時の体重に対する割合）、横軸
はＢＯＳ投与後の時間(day)である。図中、黒三角は対
照、四角はＢＯＳ６mg、黒丸はＢＯＳ60mg、丸はＢＯＳ
120mgの群を示す。
変化に及ぼす影響の結果を示す線図であり、縦軸はマウ
スの体重変化（初回投与時の体重に対する割合）、横軸
はＢＯＳ投与後の時間(day)である。図中、黒三角は対
照、四角はＢＯＳ６mg、黒丸はＢＯＳ60mg、丸はＢＯＳ
120mgの群を示す。
【図２】実験後のＢＯＳ投与群マウスと、コントロール
群マウスの個体体重に対する大腸重量の割合(％)を測定
した結果を示す説明図である。
群マウスの個体体重に対する大腸重量の割合(％)を測定
した結果を示す説明図である。
【図３】ＢＯＳ前投与ＤＳＳ誘導大腸炎マウスにおける
糞便中ＭＰＯ活性に及ぼす影響の結果を示す説明図であ
り、Ａ図はＤＳＳ投与３日目の各群のＭＰＯ活性を示
し、Ｂ図はＤＳＳ投与７日目の各群のＭＰＯ活性を示
す。
糞便中ＭＰＯ活性に及ぼす影響の結果を示す説明図であ
り、Ａ図はＤＳＳ投与３日目の各群のＭＰＯ活性を示
し、Ｂ図はＤＳＳ投与７日目の各群のＭＰＯ活性を示
す。
【図４】糞便中ＩｇＧ活性の測定結果を示す説明図であ
る。
る。
【図５】ＢＯＳの投与前、投与後及びＤＳＳ投与後の糞
便細菌叢の検索結果を示す説明図である。ａ図は総嫌気
性菌数、ｂ図は総好気性菌数、ｃ図はEnterobacteriace
ae、ｄ図はBacteroidaceae、ｅ図はLactobacillus、ｆ
図は嫌気性ムチン分解菌の各々の遷移を示す。
便細菌叢の検索結果を示す説明図である。ａ図は総嫌気
性菌数、ｂ図は総好気性菌数、ｃ図はEnterobacteriace
ae、ｄ図はBacteroidaceae、ｅ図はLactobacillus、ｆ
図は嫌気性ムチン分解菌の各々の遷移を示す。
【図６】ＢＯＳ又はビフィドバクテリウム属細菌の前投
与によるＤＳＳ誘導大腸炎マウスにおける糞便中のＭＰ
Ｏ活性に及ぼす影響を示す説明図であり、ａ図は対照と
ＢＯＳ単独投与との比較を示し、ｂ図は対照、B.breve
単独、ＢＯＳ及びB.breveの比較を示す。
与によるＤＳＳ誘導大腸炎マウスにおける糞便中のＭＰ
Ｏ活性に及ぼす影響を示す説明図であり、ａ図は対照と
ＢＯＳ単独投与との比較を示し、ｂ図は対照、B.breve
単独、ＢＯＳ及びB.breveの比較を示す。
【図７】活動期及び緩解期の潰瘍性大腸炎患者の治療前
及び治療後のＭＰＯ量の測定結果を示す説明図である。
及び治療後のＭＰＯ量の測定結果を示す説明図である。
【図８】活動期の潰瘍性大腸炎患者の治療前及び治療後
のＭＰＯ量の測定結果を示す説明図である。
のＭＰＯ量の測定結果を示す説明図である。
【図９】緩解期の潰瘍性大腸炎患者の治療前及び治療後
のＭＰＯ量の測定結果を示す説明図である。
のＭＰＯ量の測定結果を示す説明図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 田中 隆一郎 東京都港区東新橋１丁目１番19号 株式会 社ヤクルト本社内 (72)発明者 今岡 明美 東京都港区東新橋１丁目１番19号 株式会 社ヤクルト本社内 (72)発明者 瀬戸山 裕美 東京都港区東新橋１丁目１番19号 株式会 社ヤクルト本社内
Claims (4)
- 【請求項１】 ガラクトオリゴ糖を有効成分とすること
を特徴とする炎症性腸疾患予防・治療剤。 - 【請求項２】 ビフィドバクテリウム属細菌を有効成分
として更に含有することを特徴とする請求項１記載の炎
症性腸疾患予防・治療剤。 - 【請求項３】 ガラクトオリゴ糖を含有することを特徴
とする炎症性腸疾患予防・治療用飲食品。 - 【請求項４】 ビフィドバクテリウム属細菌を更に含有
することを特徴とする請求項３に記載の炎症性腸疾患予
防・治療用飲食品。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9291772A JPH11116484A (ja) | 1997-10-09 | 1997-10-09 | 炎症性腸疾患予防・治療剤及び飲食品 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9291772A JPH11116484A (ja) | 1997-10-09 | 1997-10-09 | 炎症性腸疾患予防・治療剤及び飲食品 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH11116484A true JPH11116484A (ja) | 1999-04-27 |
Family
ID=17773229
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9291772A Pending JPH11116484A (ja) | 1997-10-09 | 1997-10-09 | 炎症性腸疾患予防・治療剤及び飲食品 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH11116484A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2012201625A (ja) * | 2011-03-25 | 2012-10-22 | En Otsuka Pharmaceutical Co Ltd | 炎症性疾患用栄養組成物 |
| JP2021023232A (ja) * | 2019-08-07 | 2021-02-22 | 日清食品ホールディングス株式会社 | ストレスによる下痢の軽減剤及び食品組成物 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS55104885A (en) * | 1979-02-08 | 1980-08-11 | Yakult Honsha Co Ltd | Composition for promoting multiplication of bifidobacterium |
| JPS6041449A (ja) * | 1983-12-26 | 1985-03-05 | Yakult Honsha Co Ltd | ビフイドバクテリウム菌増殖促進因子を含有する飲食物の製造法 |
| JPH03151854A (ja) * | 1989-11-10 | 1991-06-28 | Calpis Food Ind Co Ltd:The | 腸内有害腐敗産物低減剤 |
| JPH07126177A (ja) * | 1993-10-29 | 1995-05-16 | Meiji Milk Prod Co Ltd | 潰瘍性大腸炎治療剤 |
-
1997
- 1997-10-09 JP JP9291772A patent/JPH11116484A/ja active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS55104885A (en) * | 1979-02-08 | 1980-08-11 | Yakult Honsha Co Ltd | Composition for promoting multiplication of bifidobacterium |
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| JPH07126177A (ja) * | 1993-10-29 | 1995-05-16 | Meiji Milk Prod Co Ltd | 潰瘍性大腸炎治療剤 |
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|---|---|---|---|---|
| JP2012201625A (ja) * | 2011-03-25 | 2012-10-22 | En Otsuka Pharmaceutical Co Ltd | 炎症性疾患用栄養組成物 |
| JP2021023232A (ja) * | 2019-08-07 | 2021-02-22 | 日清食品ホールディングス株式会社 | ストレスによる下痢の軽減剤及び食品組成物 |
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| A521 | Written amendment |
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| A521 | Written amendment |
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| A521 | Written amendment |
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|
| A521 | Written amendment |
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