JPH111416A - 頭部用組成物 - Google Patents

頭部用組成物

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JPH111416A
JPH111416A JP9168012A JP16801297A JPH111416A JP H111416 A JPH111416 A JP H111416A JP 9168012 A JP9168012 A JP 9168012A JP 16801297 A JP16801297 A JP 16801297A JP H111416 A JPH111416 A JP H111416A
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Japan
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hair
extract
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cells
effect
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JP9168012A
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Inventor
Norio Iwabuchi
徳郎 岩渕
Yoshiharu Tsuji
善春 辻
Tsunao Magara
綱夫 真柄
Masahiro Ota
正弘 大田
Masahiro Tajima
正裕 田島
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Shiseido Co Ltd
Original Assignee
Shiseido Co Ltd
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Publication date
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Abstract

(57)【要約】 【課題】 優れた脱毛防止効果、発毛促進効果等の
養毛作用及びフケ、痒み抑制作用を有するとともに、毛
乳頭細胞あるいは毛包上皮系細胞を活性化することによ
って、毛髪伸長の促進をする等の養毛料を提供する。 【解決手段】 フウセンアカメガシワ（学名：Kleinhov
ia hospita）のようなアオギリ科（Sterculiaceae ）フ
ウセンアカメガシワ属（Kleinhovia）植物の抽出物を配
合する。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、特定の生薬抽出物
を有効成分として含んでなる頭部用組成物に関する。具
体的には、アオギリ科（Sterculiaceae ）フウセンアカ
メガシワ属（Kleinhovia）植物の抽出物を配合すること
により、優れた脱毛防止、ふけ・痒み抑制作用効果を有
するとともに、毛乳頭細胞あるいは毛包上皮系細胞を活
性化することによって、毛髪伸長の促進をする等の養毛
効果を有する頭部用組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】高齢化社会、ストレス社会といわれる現
代社会では、頭部毛髪が様々な原因により脱毛の危機に
さらされる機会がますます多くなってきている。これに
対応して、より優れた「養毛料」を提供すべく様々な試
みがなされている。養毛料が毛髪に与える効果として主
なものに、発毛誘導効果（発毛促進効果，成長期誘導効
果）、毛髪を太くする効果、毛髪成長期延長効果、５α
−レダクターゼ阻害効果、血行促進効果、殺菌効果、フ
ケ防止効果、保湿効果、抗酸化効果等の効果が挙げられ
る。
【０００３】しかしながら、前記のように種々の試みが
なされているにもかかわらず、従来の養毛料では、その
脱毛防止，発毛効果等の養毛作用は必ずしも十分なもの
ではなかった。これはおそらく脱毛の原因がさまざまで
あり、また発毛の機構も非常に複雑であるためと考えら
れている。従って、毛髪のより具体的構造に着目して養
毛料を作出することは極めて有用であり、そのような薬
剤の提供が望まれている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】そこで、本発明者は従
来の試験方法として用いられていきた脱毛防止、発毛効
果あるいはふけ、痒み抑制作用に加え、毛髪のより具体
的構造に着目した毛乳頭細胞あるいは毛包上皮系細胞に
直接働きかける成分を有効成分とする頭部用組成物を見
出すことを目指した。すなわち、本発明の目的は、前記
多様な脱毛の原因に対処すべく、優れた脱毛防止効果、
発毛促進効果等の養毛作用及びフケ、痒み抑制作用なら
びに、乳頭細胞あるいは毛包上皮系細胞を活性化するこ
とによって、毛髪伸長の促進をする等の養毛効果を有す
る頭部用組成物を提供することにある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、有用物質
の探索対象を脱毛防止効果及び発毛促進効果等の養毛作
用を示すことが示唆されていない植物体抽出物に広げ、
上記目的を達成すべく検討してきた。その結果、アオギ
リ科（Sterculiaceae ）フウセンアカメガシワ属（Klei
nhovia）に属する民間薬または生薬として使用されるこ
とのある植物の抽出物が、優れた脱毛防止効果、発毛促
進効果等の養毛作用及びフケ、痒み抑制作用を示すこと
を見い出した。さらに、毛乳頭に直接働きかける成分及
び毛髪成長期延長効果を有する成分について、本発明者
が見出した育毛薬剤検定方法を用いて鋭意検討したとこ
ろ、所望する毛乳頭活性化能及び毛髪成長期延長効果が
認められることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００６】すなわち本発明は、アオギリ科（Sterculi
aceae ）フウセンアカメガシワ属（Kleinhovia）植物の
抽出物を配合することを特徴とする頭部用組成物であ
る。本発明の頭部用組成物は、養毛料であることを好適
とする。
【０００７】また本発明は、アオギリ科（Sterculiacea
e ）フウセンアカメガシワ属（Kleinhovia）植物の抽出
物を有効成分とする毛乳頭活性化剤を提供する発明であ
る。
【０００８】前記したように、本発明において「毛乳頭
活性化剤」は、主に後述する育毛検定方法によって毛乳
頭を刺激することによって、毛周期における成長期を延
長させる作用と同休止期から成長期への移行を促進する
作用を有する成分を有効成分として配合した、特に「毛
乳頭」という作用点に着目した毛髪関連薬剤であり、い
わば「個別効能育毛剤」としての特徴を有する。
【０００９】また本発明は、アオギリ科（Sterculiacea
e ）フウセンアカメガシワ属（Kleinhovia）植物の抽出
物を有効成分とする毛髪成長期延長剤を提供する発明で
ある。
【００１０】前記したように、本発明において「毛髪成
長期延長剤」は、主に後述する育毛薬剤検定方法によっ
て少なくとも毛包上皮系細胞の増殖活性を維持又は促進
することで毛髪の成長期を維持又は延長する効果を有す
る成分を有効成分として配合した、特に上記の毛髪成長
期延長効果に着目した毛髪関連薬剤であり、いわば「個
別効能育毛料」としての特徴を有する。
【００１１】この「毛髪成長期延長剤」は、例えば毛根
近傍における毛包上皮系細胞の増殖が緩徐であること等
により成長期が短くなって、相対的に成長期毛よりも休
止期毛の割合が多くなってしまうことに起因する脱毛症
に特に有効な薬剤である。
【００１２】本発明のアオギリ科（Sterculiaceae ）フ
ウセンアカメガシワ属（Kleinhovia）植物の抽出物を有
効成分とする頭部用組成物は、上記の２つの作用点を合
わせ持った養毛料である。すなわち、この「養毛料」
は、漫然とした育毛効果をうたう一般的な養毛料用途と
は一線を画する用途を有するものである。
【００１３】
【発明の実施の形態】以下、本発明の実施の形態につい
て説明する。はじめに、本発明の「養毛」とは、発毛促
進、脱毛防止、さらにふけ、痒み抑制作用等ならびに、
乳頭細胞あるいは毛包上皮系細胞の活性化作用を包含す
る概念で使用する。
【００１４】本発明の頭部用組成物は、アオギリ科（St
erculiaceae ）フウセンアカメガシワ属（Kleinhovia）
植物の抽出物を有効成分とする毛髪関連薬剤である。
【００１５】本発明に用いられるアオギリ科（Sterculi
aceae ）フウセンアカメガシワ属（Kleinhovia）植物の
抽出物としては、フウセンアカメガシワ（学名：Kleinh
oviahospitaまたはKleinhovia hospida）が好適であ
る。これは、東南アジアを中心に分布する植物であり、
タイ国ではハッサクーン（HASKHUN ）、中国では鷓鴣麻
（シャコマ）と呼ばれている。これらを総じて、日本で
はフウセンアカメガシワと呼んでいる。
【００１６】アオギリ科（Sterculiaceae ）フウセンア
カメガシワ属（Kleinhovia）植物の抽出物に関する報告
はこれまでにないばかりか、頭部用組成物への応用は全
くない。
【００１７】本発明に用いられる抽出物は、上記植物の
葉、地下茎を含む茎、根、果実、樹皮等、植物全草を抽
出溶媒と共に浸漬または加熱還流した後、濾過し、濃縮
して得られる。本発明に用いられる抽出溶媒は、通常抽
出に用いられる溶媒であれば何でもよく、特に熱水やメ
タノール、エタノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノ
ール等の低級アルコールあるいはプロピレングリコー
ル、１，３−ブチレングリコール等の多価アルコール、
あるいはこれらの含水アルコール類、アセトン、酢酸エ
チルエステル等の有機溶媒を単独あるいは組み合わせて
用いることができる。低級アルコールを使用する場合、
得られる抽出液をそのまま用いることもできるが、抽出
溶媒を留去し、必要により乾燥した後、本発明の頭部用
組成物に含ませてもよい。
【００１８】本発明におけるアオギリ科（Sterculiacea
e ）フウセンアカメガシワ属（Kleinhovia）植物の抽出
物の配合量は、組成物の形態または施用方法に応じて変
動しうるので特定されるものでない。しかし、後述の実
施例に記載の方法に従って得られる抽出物を使用する場
合、組成物全重量中、一般に抽出物（乾燥物基準）が0.
0005〜20.0重量％、好ましくは 0.001〜10.0重量％であ
る。0.0005重量％未満であると、本発明でいう効果が十
分に発揮されず、20.0重量％を超えると製剤化が困難で
あるので好ましくない。また、10.0重量％以上配合して
もさほど大きな効果の向上は得られない。
【００１９】本発明の頭部用組成物には、上記必須成分
以外に、通常化粧品、医薬部外品や医薬品等の頭部用組
成物に用いられる成分、例えば、油性成分、保湿剤、増
粘剤、金属封鎖剤、その他の活性成分、酸化防止剤、紫
外線吸収剤、界面活性剤、アルコール類、粉末成分、色
剤、水性成分、水、各種皮膚栄養剤等を必要に応じて適
宜配合することができる。
【００２０】具体的には、油分として、例えば高級脂肪
酸、固形パラフィン、流動パラフィン、シリコーン油、
スクワラン等；保湿剤として、例えばヒアルロン酸、プ
ロピレングリコール、マルチトール、アテロコラーゲ
ン、乳酸ナトリウム等；増粘剤、マルメロ粘質物、カル
ボキシビニ−ルポリマー、キサンタンガム等；金属封鎖
剤として、例えばエデト酸二ナトリウム、エデト酸三ナ
トリウム、クエン酸ナトリウム、ポリリン酸ナトリウ
ム、メタリン酸ナトリウム、グルコン酸；その他の活性
成分として、例えばカフェイン、タンニン、ベラパミ
ル、トラネキサム酸およびその誘導体、甘草抽出物、グ
ラブリジン、火棘の果実の熱水抽出物、各種生薬、酢酸
トコフェロール、グリチルリチン酸およびその誘導体ま
たはその塩等の薬剤、ビタミンＣ、アスコルビン酸リン
酸マグネシウム、アスコルビン酸グルコシド、アルブチ
ン、コウジ酸等の他の美白剤、グルコース、フルクトー
ス、マンノース、ショ糖、トレハロース等の糖類などが
挙げられる。
【００２１】また、養毛料の補助成分として、これらの
製剤を調製する上で上記油性成分、保湿剤、増粘剤に加
えて、その他の活性成分として、例えばモノオレイン酸
グリセリル等の油分、ニコチン酸アミド、ニコチン酸ベ
ンジル、ビタミンE アセテート、センブリ抽出物、塩化
カルプロニウム、センブリエキス、アセチルコリン誘導
体等の血管拡張剤、セリン、メチオニン等のアミノ酸
類、ビタミンB6、ビタミンE 及びその誘導体、ビオチン
等のビタミン類、パントテン酸及びその誘導体グリチル
レチン酸及びその誘導体、ニコチン酸、ニコチン酸メチ
ル、ニコチン酸トコフェロールなどのニコチン酸エステ
ル類、セファランチン等の皮膚機能亢進剤、エストラジ
オ−ル等の女性ホルモン剤等を同時に配合してもよい。
さらに、通常、養毛料に用いられる添加剤、例えばヒノ
キチオ−ル、ヘキサクロロフェン、ベンザルコニウムク
ロリド、セチルピリジニウムクロリド、ウンデシレン
酸、トリクロロカルバニリドおよびビチオノール等の抗
菌剤、メントール等の清涼剤、サリチル酸、亜鉛および
その誘導体、乳酸およびそのアルキルエステルなどの薬
剤、クエン酸等の有機酸類、アルギニン等のアミノ酸類
等が本発明の効果を損なわない範囲で適宜配合すること
ができる。
【００２２】本発明の頭部用組成物の性状は、例えばト
ニック、ヘアークリーム、ムース、シャンプー、リンス
等の剤型をとることもできる。
【００２３】
【実施例】次に実施例をあげて本発明をさらに具体的に
説明するが、本発明はこれらにより限定されるものでな
い。なお、配合量は特記しない限り重量％である。ま
ず、発毛効果、育毛効果、培養毛乳頭細胞を用い
た細胞増殖、ヒト培養毛包上皮系細胞活性化に関する
試験方法とその結果について順に説明する。
【００２４】発毛試験 １．抽出物の調製（調製例１） 市販のフウセンアカメガシワ（乾燥物）４８４ｇを、
５．０リットルのメタノールに室温で５日間浸漬した。
抽出液から溶媒を留去し、次いで乾燥してフウセンアカ
メガシワのメタノールエキス乾燥物１８．４ｇを得た。
【００２５】２．試料の調製 上記で得られたメタノールエキス乾燥物 0.5％、１％、
２％を、それぞれ75％エタノール溶液に溶解して試料１
〜３を得た。
【００２６】３．発毛試験方法及びその結果 対照試料として 0.1％クロトン油の75％エタール溶液を
用い、本発明の液状の試料１〜３について下記の発毛試
験行った。実験動物として毛周期の休止期にあるＣ３Ｈ
／ＨｅＮＣｒＪマウスを使用し、小川らの方法（ノーマ
ルアンドアブノーマル、エピダーマル、ディファレンシ
エ−ション［Normal and Abnormal Epidermal Differen
tiation ］、M ．Seiji およびI ．A ．Bernstein 編
集、第159 〜170 ページ、1982年、東大出版）により行
なった。
【００２７】すなわち、マウスを１群10匹とし、それぞ
れ被検試料１〜３と対照試料用の４群に分け、バリカン
およびシェ−バーでマウスの背部を剃毛し、それぞれの
試料を１日１回、 0.1mlずつ塗布した。18日、24日後に
毛の再生面積を測定した。結果は再生面積の平均値で表
した。その結果を表１に示す。
【００２８】
【表１】 ─────────────────────────────────── 試 料 毛再生面積（％） １８日後 ２４日後 ─────────────────────────────────── 試料１（フウセンアカメガシワ抽出物 0.5％） ７５ ９７ 試料２（フウセンアカメガシワ抽出物 １％） ８６ １００ 試料３（フウセンアカメガシワ抽出物 ２％） ９０ １００ 対照試料 ３７ ６６ ───────────────────────────────────
【００２９】表１より、本発明のフウセンアカメガシワ
抽出物は、マウスの発毛試験において優れた発毛効果を
示した。
【００３０】育毛試験（トリコグラム試験） １．抽出物の調製 上記発毛試験例で調製した調製例１の方法で抽出物を調
製した。
【００３１】２．試料の調製 上記方法で得られたメタノールエキス乾燥物 0.5、１お
よび２％を、70％エタノール溶液（90％）、オレイン酸
ナトリウム（0.01％）、ドデシルベンゼンスルホン酸
（0.49％）、硬化ヒマシ油エチレンオキシド（40モル）
付加物（ 0.5％）及びイオン交換水（８％）と混合撹拌
して溶解させた。さらにイオン交換水（残余）を添加混
合して、液状の試料４、５および６を得た。
【００３２】３．育毛試験方法及びその結果 本発明の頭部用組成物の脱毛防止、発毛効果等の養毛作
用を調べるために、ヒトに対して、以下の方法でトリコ
グラム試験を実施した。試料の使用前と使用後の抜去毛
髪の毛根を顕徴鏡下で観察し、毛根の形態から休止期毛
根数を計数し、その割合の増減によって養毛作用を比較
した。尚、休止期毛根とは成長の止まった毛の毛根であ
り、脱毛を訴える人は正常な人よりもこの休止期毛根の
割合が多いことが認められている。
【００３３】被験試料及び対照試料の各試料をそれぞれ
男性被験者10名の頭皮に１日２回、１回２mlずつ６ケ月
間連続して塗布し、塗布直前および６ケ月間塗布終了直
後に被験者１名につき 100本ずつ毛髪を抜去し、それぞ
れの毛根を調ベ、実使用テストを行った。結果を表２に
示す。
【００３４】
【表２】 ──────────────────────────────────── 試 料 休止期毛根の割合 養毛効果 ─────────────────── の評価 20％以上減少 ±20％ 20％以上増加 ──────────────────────────────────── 試料４(0.5％） ５８ ３２ １０ 有効 試料５( １％） ７０ ２８ ２ 著効 試料６( ２％） ８０ ２０ ０ 著効 対照試料 ９ ３３ ５８ 無効 ────────────────────────────────────
【００３５】表２より明らかなように、本発明のフウセ
ンアカメガシワ抽出物は、ヒトのトリコグラム試験にお
いて有意な育毛効果を示した。
【００３６】培養毛乳頭細胞を用いた細胞増殖試験 ３．抽出物の調製 上記抽出物の調製は、上記発毛試験例で調製した調製例
１の方法で抽出物を調製した。さらに、メタノールエキ
ス乾燥物をＤＭＳＯで０．２重量％の溶液に調製して、
これを無血清培地（ＭＥＭ）に希釈してフウセンアカメ
ガシワ抽出物をそれぞれ１．０×１０-9〜１．０×１０
-6％を含む溶液を調製した（調製例２〜５）。
【００３７】２．毛乳頭細胞の採取 整形外科手術によって摘出された３２歳男性の後頭部皮
膚（５mm×１．５cm）から、脂肪組織を分離して、そこ
から毛包を摘出し、毛球部より毛乳頭細胞を単離した。
単離した毛乳頭細胞を２０％ＦＢＳを含むＭＥＭで２週
間培養した〔３７℃，５％ＣＯ2 〕。毛乳頭細胞から細
胞のアウトグロースが確認された時点で、培地を１０％
ＦＢＳを含むＭＥＭ（ＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ）に交換し
て同様の条件で培養した。以降、１週間に２回の割合で
培養液（ＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ）を交換して細胞を維持
した。培養開始より４週間後に継代培養を行い、以後細
胞が十分増殖した時点で再度継代して、この継代を繰り
返した。
【００３８】３．試験方法 継代数３代目の毛乳頭細胞を用い、ＭＥＭ＋１０％ＦＢ
Ｓ培地で，１００００及び細胞／mlの細胞密度の細胞懸
濁液を調製した。この細胞懸濁液を２００μlずつ、９
６ウエルのマイクロプレートに分注し（つまり，２００
０細胞／ウエル）、３７℃，５％ＣＯ2 で３日間インキ
ュベートを行い細胞を付着させた。培養開始７２時間
後、対照は培養液を無血清のＭＥＭに交換した。被検体
系は対象物質であるフウセンアカメガシワ抽出物を含む
無血清培地（ＭＥＭ）（調製例２〜５）に交換した（各
試料７〜１０）。対照および被検体系をいずれもさらに
４日間培養した。
【００３９】培養終了後、それぞれの系にアラマーブル
ー（alamar blue)(BIOSOURSE社製)を２０μl 添加後、
さらに８時間培養し、マイクロプレートリーダー（Micr
o plate reader:Bio RAD社製) で５７０nmと５９５nmの
吸光度を測定した。添付の使用説明書に従って、吸光度
の測定結果によりアラマーブルーの還元率を算出した。
この還元率は細胞数と相関することから対照および被検
体系での細胞増殖率を比較した。
【００４０】４．結果：測定したフウセンアカメガシワ
抽出物（試料７〜１０）における、上記細胞増殖促進指
標を下記第３表に示す。
【００４１】
【表３】 ──────────────────────────────────── 試 料 増殖促進率（％） 効果 ──────────────────────────────────── 試料７ （１．０×１０-9％） ４．７±３．６* あり 試料８ （１．０×１０-8％） １９．０±６．０** あり 試料９ （１．０×１０-7％） １３．３±５．５** あり 試料１０（１．０×１０-6％） ６．２±３．３ なし 対照試料 ２．１±３．１ なし ──────────────────────────────────── ＊；有意差ｐ＜０．０５ ＊＊；有意差ｐ＜０．０１
【００４２】表３より明らかなように、本発明のフウセ
ンアカメガシワ抽出物は、培養毛乳頭細胞活性化試験に
おいて有意な毛乳頭細胞増殖促進効果を示した。
【００４３】ヒト培養毛包上皮系細胞活性化試験 １．ヒト培養毛包上皮系細胞の採取 外科手術の副産物として得られたヒト男性頭皮から毛周
期における成長期の毛包を実体顕微鏡下で機械的に採取
した。この成長期の毛包を1000 U/ml dispase・0.2 ％
コラゲナーゼを含むダルベッコの改変ＭＥＭ（ＤＭＥ
Ｍ）で３０分間、３７℃で処理し、注射針の先を用いて
dermal sheath やdermal papilla、毛球部上皮組織を除
去して、0.05％トリプシン・0.02％ＥＤＴＡを含むリン
酸緩衝液〔ＰＢＳ（−）：（−）とはカルシウムイオン
やマグネシウムイオンを含まない意味である〕で５分
間，３７℃で処理した。次にコラーゲン（Type I）コー
ティングした培養皿に毛包を静置し、外殖片培養を行っ
た。なおこの際の培地は、無血清培地〔Keratinocyte G
rowth Medium（ＫＧＭ）〕を用いた（Keratinocyte Ser
um Free Mediumを用いることもできる）。
【００４４】この培養の４〜５日後に、毛包の培養皿へ
の接着及び細胞の増殖が確認できた時点で培地を交換
し、これ以降２日おきに培地交換を行った。このように
して増殖させた細胞を、0.05wt％トリプシン-0.02 ％Ｅ
ＤＴＡで３７℃で５分間処理した後、等量の0.1 ％トリ
プシンインヒビターで反応を停止させ、遠心処理(800×
g,5 分間) を施して細胞を回収した。
【００４５】次に、細胞を上記の無血清培地に浮遊させ
て、5000 cells／cm2 の密度でコラーゲンコーティング
（Type I）した培養皿に播種し、細胞がsubconfluentに
なるまで２日おきに培地交換を行い、再び0.05wt％トリ
プシン-0.02 ％ＥＤＴＡで３７℃で５分間処理した後、
等量の0.1 ％トリプシンインヒビターで反応を停止さ
せ、遠心処理(800×g,5 分間) を施して、これにより得
られたヒト毛包上皮系細胞に細胞凍結液（セルバンカ
ー：ダイヤトロン製）を添加し、１．０×１０6 cell/m
l の濃度に調整して、各凍結チューブに１．０×１０6
cellずつ入れ、これを凍結保存した。なお、これらの細
胞数は、血球算定板で算出した。
【００４６】上記工程により得た毛包上皮系細胞の線維
芽細胞混入率（ＦＢ混入率）を測定（３０００倍，５視
野）し、その結果ＦＢ混入率が３％以上のものは、アッ
セイの対象から除外した。そして、この毛包上皮系細胞
を培養フラスコ中に播種後、これを０．０５％トリプシ
ンと０．０２％ＥＤＴＡで処理した後、０．１％トリプ
シンインヒビターで反応を停止後、系を１５００rpm で
５分間遠心処理を施し、上清を除去し、残渣にＫＧＭ培
地２０mlを添加して、細胞懸濁液を調製した。
【００４７】０．２ml/well の割合で、９６well-plate
（Ｉ型コラーゲンコーティングプレート：ファルコン社
製）に播種し（１．０×１０4 cell/well ）、細胞がウ
エルの底に沈むまで約２０分間室温下で放置した。その
後、３７℃，５％ＣＯ2 で１日間培養を行い、所望する
ヒト毛包上皮系培養細胞を得た。
【００４８】上記操作により得られた毛包に、０．２５
％トリプシン含有ＰＢＳ（−）を５ml添加して、細胞懸
濁液を３７℃で５分間インキュベートした。インキュベ
ート終了後、５mlの等量の牛胎児血清（ＦＢＳ）とＨａ
ｍ' ｓ Ｆ１２培地を添加して、細胞懸濁液をセルスト
レーナー（100 μm Nalgene 社製）で濾過後、５０ml遠
沈管に入れて、この細胞懸濁液に遠心処理を施した（４
℃，１５００rpm ，５分間）。この系から上清を除去し
て、残渣として所望する毛包上皮系細胞を得た。
【００４９】２．毛包上皮系細胞の前培養 系に混入している線維芽細胞を可能な限り系から除去す
るために、上記工程により得られた毛包上皮系細胞の前
培養を行った。以下、その手順について説明する。３７
℃の恒温槽で、上記工程により得た凍結細胞を融解し
た。次いでＦＡＤ培地〔Ｈａｍ' ｓ Ｆ１２培地（後
述）とＭＥＮ培地を容量比で３対１で混合したものに、
インシュリン(5.0μg/ml），ハイドロコルチゾン（0.45
μg/ml），エピダーマルグロウスファクター(EGF)(10.0
ng/ml)，コレラトキシン（10-9Ｍ）及びウシ胎児血清(1
0 ％) を含有させた培地、以下同様である〕を１０ml添
加し、細胞溶液を希釈して系に遠心処理を施した（１０
℃以下，１５００rpm ，５分間）。遠心後、上清を除去
し、系にＦＡＤ培地を１０ml添加して、細胞塊が認めら
れなくなるまでピペッティングを繰り返した。
【００５０】得られた細胞数を血球算定板で算出し、Ｆ
ＡＤ培地で２．５×１０5 cell/mlの濃度になるように
調製した。Ｉ型コラーゲンでコーティングした７５cm3
のフラスコに細胞を播種して、これを３７℃，５％ＣＯ
2 で一晩培養した。培養後、系をＰＢＳ（−）１０mlで
２回洗浄し、０．２５％トリプシン含有ＰＢＳ（−）を
２ml添加して、これを３７℃，５％ＣＯ2 で４分間イン
キュベートした。次に、系に牛胎児血清（ＦＢＳ）を２
ml添加して、１回軽くゆすった後で上清を除去して、系
に混入している線維芽細胞を除去した。
【００５１】さらに、系にＫＧＭ培地〔表皮角化細胞基
礎培地(Keratinocyto growth medium)：Keratinocyto b
asal medium （ＫＢＭ培地（改変ＭＣＤＢ１５３培地
（クローネティックス社製）））に，ウシ脳下垂体エキ
ス(BPE)(0.4vol％),インシュリン(0.5μm/ml),ハイドロ
コルチゾン(0.5μm/ml),h-EGF(0.1 ng/ml)を添加した培
地、以下同様である〕を１５ml添加し、３７℃，５％Ｃ
Ｏ2 で３日間培養した。上記工程により得た毛包上皮系
細胞を播種した培養フラスコの線維芽細胞混入率（ＦＢ
混入率）を測定（３０００倍，５視野）し、その結果Ｆ
Ｂ混入率が３％以上のものは、アッセイの対象から除外
した。系をＰＢＳ（−）１０mlで２回洗浄し、０．２５
％トリプシン含有ＰＢＳ（−）を２ml添加して、これを
３７℃で３分間インキュベートした。次いで上皮系細胞
と線維芽細胞とのトリプシンに対する反応性の違いを利
用して，系から線維芽細胞を除去するために、トリプシ
ンを除去し、再び０．２５％トリプシン含有ＰＢＳ
（−）を２ml添加して、３７℃，２０rpm で５分間振盪
した。
【００５２】次いで、細胞のはがれを顕微鏡下で確認し
た後、１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地を１０ml添加し
て、５０ml遠心チューブ中でピペッティングを行い、系
を１５００rpm で５分間遠心処理を施した。上清を除去
し、ＫＧＭ培地２０mlを添加して、細胞塊がなくなるま
でピペッティングを行った。
【００５３】懸濁液をセルストレーナー（100 μm Nalg
ene 社製）で濾過後、５０ml遠沈管に入れて、懸濁液中
の生細胞数を血球算定板で算出し、系にＫＧＭ培地を添
加して、系の中の細胞濃度が５．０×１０4 cell/ml に
なるように調整した。次いで、０．２ml/well の割合
で、９６well-plate（Ｉ型コラーゲンコーティングプレ
ート：ファルコン社製）に播種し（１．０×１０4 cell
/well ）、細胞がウエルの底に沈むまで約２０分間室温
下で放置した。その後、３７℃，５％ＣＯ2 で１日間培
養を行い、所望するヒト毛包上皮系培養細胞を得た。
【００５４】３．試験培地の調製 上記調製例１で得たフウセンアカメガシワ抽出物のメタ
ノールエキス乾燥物の０．２％ＤＭＳＯ溶液を、１００
０倍量の改変ＭＣＤＢ１５３培地（クローネティックス
社製）に添加した〔抽出物濃度：２．０×１０-4％（Ｄ
ＭＳＯ ０．１％）〕。
【００５５】これらの対象物質添加培地を０．１％ＤＭ
ＳＯ含有ＫＢＭ培地に添加し、対象物質の濃度を１．０
×１０-8〜１．０×１０-5％（試料１１〜１４）になる
ように希釈した。同様に対象物質添加培地を含まない対
照試料を調製した。
【００５６】４．対象物質培地交換 上記Ａ，Ｂにおいてヒト毛包上皮系培養細胞及びラット
毛包上皮系培養細胞を調製した９６well-plate中のＫＧ
Ｍ培地を上記Ｃにおいて調製した、対象物質添加培地及
びコントロール培地（２００μl/well）と交換して、交
換後３７℃，５％ＣＯ2 で２日間培養した。
【００５７】なお、この培地の交換はウエル内のＫＧＭ
培地を，底面に付着している細胞を傷つけないように留
意しつつアスピレーターで抜いて、その後速やかに対象
物質添加培地等をウエルの両端から添加することにより
行った。
【００５８】５．細胞増殖の測定：アラマーブルー(ala
mar blue：アラマーバイオサイエンス社製) を培地量
（容量）に対して、１／１０量を添加して、３７℃（５
％ＣＯ2 ）で６時間インキュベートした。インキュベー
ト後、マイクロプレートリーダー（Micro plate reade
r:Bio RAD社製) で５７０nmと５９５nmの吸光度を測定
した。添付の使用説明書に従って、吸光度の測定結果に
よりアラマーブルーの還元率を算出した。この還元率は
細胞数と相関することから対照および被検体系での細胞
増殖率を比較した。
【００５９】６．結果：測定したフウセンアカメガシワ
抽出物（試料１１〜１４）における、上記細胞増殖促進
指標を下記第４表に示す。
【００６０】
【表４】 ──────────────────────────────────── 試 料 増殖促進率（％） 効果 ──────────────────────────────────── 試料１１（１．０×１０-8％） ５．０±６．５* あり 試料１２（１．０×１０-7％） １３．３±５．１** あり 試料１３（１．０×１０-6％） １５．７±３．０** あり 試料１４（１．０×１０-5％） ２５．８±５．１** あり 対照試料 1 ．２±２．７ なし ──────────────────────────────────── ＊；有意差ｐ＜０．０５ ＊＊；有意差ｐ＜０．０１
【００６１】表４より明らかなように、本発明のフウセ
ンアカメガシワ抽出物は、ヒト培養毛包上皮系細胞活性
化試験において有意な毛包上皮系細胞増殖促進効果を示
した。
【００６２】 実使用試験 本発明試料例１５ ヘアートニック (1) フウセンアカメガシワ抽出物（調製例１） 1.0 (2) プロピレングリコール 5.0 (3) ヒアルロン酸ナトリウム 0.01 (4) ７５％エタノール 残余
【００６３】上記処方にて製造したヘアートニックにつ
いて実使用でフケ、発毛、脱毛等の症状に対する効果を
検討した。フケ、発毛、脱毛等の症状を呈する１０名の
男性（年齢25才〜55才) に１日１〜２回、１〜３mlずつ
４ヵ月にわたって投与し、以下に述べる評価基準で、フ
ケ防止効果、発毛促進効果および脱毛防止効果を試験し
た。その結果を表３に示す。の結果を得た。表-1から明
らかなように、このヘアートニックは発毛促進並びにフ
ケ及び脱毛の防止に対して優れた効果を奏する。
【００６４】評価基準 (1)フケ防止効果テスト 無効：治療にもかかわらず、何らの改善もみられないも
の。 有効：フケの発生が減少したもの。 著効：フケの発生が止まったもの。
【００６５】(2)発毛効果テスト 無効：治療にもかかわらず、何らの改善もみられないも
の。 有効：脱毛部の２／３以上に毛の新生が認められるも
の。 著効：脱毛部に毛が生えそろったもの。
【００６６】(3)脱毛効果テスト 無効：治療にもかかわらず、何らの改善もみられないも
の。 有効：脱毛の進行が減少したもの。 著効：脱毛が止まったもの。
【００６７】
【表３】 ─────────────────────────────────── 被験者 年齢 フケ 発毛 脱毛 ─────────────────────────────────── １ 40 著効 有効 有効 ２ 31 著効 有効 有効 ３ 48 著効 有効 有効 ４ 38 有効 有効 無効 ５ 42 無効 有効 有効 ６ 28 有効 著効 著効 ７ 25 無効 有効 有効 ８ 55 有効 無効 有効 ９ 35 有効 有効 有効 10 30 無効 有効 著効 ───────────────────────────────────
【００６８】表３から明らかなように、このヘアートニ
ックは、発毛促進、フケ防止および脱毛防止に対して優
れた効果を奏する。
【００６９】以下に、種々の剤型の本発明による頭部用
組成物の処方例を実施例として説明する。
【００７０】 実施例１ シャンプー ココイルメチルタウリンナトリウム ２．０ ポリオキシエチレン(8モル）オレイルアルコール ２．０ ラウリン酸ジエタノールアミド ４．０ エチレングリコール脂肪酸エステル １．０ グリセリン ０．２ メントール ０．１ フウセンアカメガシワ抽出物（調製例１） １．０ 香料 適量 プロピレングリコール ２．０ 精製水 残部
【００７１】 実施例２ ヘアトリートメント 流動パラフィン ２５．０ ステアリン酸 ５．０ セタノール ５．０ ソルビタンモノオレエート ２．０ ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート ３．０ フウセンアカメガシワ抽出物（調製例１） ０．５ １，３−ブチレングリコール ５．０ 防腐剤 適量 精製水 残部
【００７２】 実施例３ フウセンアカメガシワ抽出物（調製例１） １．０ ステアリルジメチルアミンオキシド ０．５ 硬化ヒマシ油エチレンオキシド（40モル）付加物 １．０ ９５％エタノール ５４．０ イオン交換水 残部 （製造法）９５％エタノールにイオン交換水を加え、こ
れに硬化ヒマシ油エチレンオキシド（40モル）付加物お
よびステアリルジメチルアミンオキシドを加えた後エキ
ス乾燥物を加え、撹拌溶解した。
【００７３】 実施例４ ヘアートニック グリセリン ２．０ Ｌ−メントール ０．１ フウセンアカメガシワ抽出物（調製例１） ２．０ ９５％エタノール ５４．０ 香料 ０．５ イオン交換水 残部 （製造法）９５％エタノールにグリセリン、Ｌ−メント
ール、香料及びエキス乾燥物を加え、撹拌溶解した後、
イオン交換水を加えた。
【００７４】 実施例５ Ｎ−ヤシラウリル−β−アミノプロピオン酸ソーダ ０．２ フウセンアカメガシワ抽出物（調製例１） ０．００１ ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム ０．５ 硬化ヒマシ油エチレンオキシド（40モル）付加物 １．０ ９５％エタノール ５４．０ イオン交換水 残部 （製造法）９５％エタノールにイオン交換水を加え、こ
れに硬化ヒマシ油エチレンオキシド（40モル）付加物お
よびステアリルジメチルアミンオキシド及びＮ−ヤシラ
ウリル−β−アミノプロピオン酸ソーダを加えた後エキ
ス乾燥物を加え、撹拌溶解した。
【００７５】
【発明の効果】以上説明したように、本発明の頭部用組
成物は、優れた脱毛防止効果、発毛促進効果等の養毛作
用及びフケ、痒み抑制作用を有するとともに、毛乳頭細
胞あるいは毛包上皮系細胞を活性化することによって、
毛髪伸長の促進をする等の優れた養毛効果を有するもの
である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 大田 正弘 神奈川県横浜市港北区新羽町1050番地 株 式会社資生堂第一リサーチセンター内 (72)発明者 田島 正裕 神奈川県横浜市港北区新羽町1050番地 株 式会社資生堂第一リサーチセンター内

Claims (5)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 アオギリ科（Sterculiaceae ）フウセン
    アカメガシワ属（Kleinhovia）植物の抽出物を配合する
    ことを特徴とする頭部用組成物。
  2. 【請求項２】 アオギリ科（Sterculiaceae ）フウセン
    アカメガシワ属（Kleinhovia）植物がフウセンアカメガ
    シワ（学名：Kleinhovia hospita）である請求項１記載
    の頭部用組成物。
  3. 【請求項３】 養毛料である請求項１または２のいずれ
    かに記載の頭部用組成物。
  4. 【請求項４】 毛乳頭活性化剤である請求項１または２
    のいずれかに記載の頭部用組成物。
  5. 【請求項５】 毛髪成長期延長剤である請求項１または
    ２のいずれかに記載の頭部用組成物。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9310195B2 (en) 2010-08-24 2016-04-12 Rotork Controls Limited Apparatus adapted to provide an indication of an angular position of an input member over multiple turns
WO2020066818A1 (ja) * 2018-09-26 2020-04-02 株式会社オーガンテクノロジーズ 毛包上皮性幹細胞の生体外増殖方法

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JPWO2020066818A1 (ja) * 2018-09-26 2021-11-25 株式会社オーガンテクノロジーズ 毛包上皮性幹細胞の生体外増殖方法

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