JPH11197A - クレアチンキナーゼまたはそのｍｂアイソザイムの定量用乾式分析素子 - Google Patents
クレアチンキナーゼまたはそのｍｂアイソザイムの定量用乾式分析素子Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 常温保存でも感度低下が少なく、従って常温
での保存が可能なクレアチンキナーゼあるいはそのＭＢ
アイソザイムの定量用の乾式分析素子を提供すること。 【解決手段】 支持体上に、クレアチンキナーゼの存在
下で、ＡＴＰを生成するクレアチンリン酸とＡＤＰ、そ
してそのＡＴＰの生成のためのｐＨ環境を提供する緩衝
性化合物を含有し、更に、生成したアデノシン三リン酸
との反応により分光的測定方法により検出可能な化合物
を生成させる指示薬組成物を含有する検出試薬層を積層
したクレアチンキナーゼ定量用乾式分析素子であって、
そのクレアチンリン酸を、ＡＤＰおよび他の検出試薬成
分とから分離させて配置させた分析素子。クレアチンキ
ナーゼのＭサブユニット活性を特異的に阻害する抗体を
組合せて使用することによってクレアチンキナーゼのＭ
Ｂアイソザイムの定量も可能となる。
での保存が可能なクレアチンキナーゼあるいはそのＭＢ
アイソザイムの定量用の乾式分析素子を提供すること。 【解決手段】 支持体上に、クレアチンキナーゼの存在
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性化合物を含有し、更に、生成したアデノシン三リン酸
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【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、クレアチンキナー
ゼの定量用またはクレアチンキナーゼのＭＢアイソザイ
ムの定量用の乾式分析素子に関する。
ゼの定量用またはクレアチンキナーゼのＭＢアイソザイ
ムの定量用の乾式分析素子に関する。
【０００２】
【従来の技術】被験者から採取した血液に含まれている
クレアチンキナーゼ（ＣＫ、クレアチンホスホキナーゼ
（ＣＰＫ）とも云われる）を定量することにより、進行
性筋萎縮症、皮膚筋炎、心筋梗塞などの診断が可能なこ
とは以前より知られており、臨床検査に利用されてい
る。また、クレアチンキナーゼ（ＣＫ）には、クレアチ
ンキナーゼＭＭ（ＣＫＭＭ）、クレアチンキナーゼＭＢ
（ＣＫＭＢ）、そしてクレアチンキナーゼＢＢ（ＣＫＢ
Ｂ）という三種のアイソザイムが存在すること、そして
ＣＫＭＭは主として骨格筋中に、ＣＫＭＢは主として心
筋中に、そしてＣＫＢＢは主として脳や脊髄中に存在す
ることも知られている。さらにＣＫＭＢは、心筋梗塞症
が発生すると、心筋より血液中に排出され、その結果、
血液中のＣＫＭＢ量が増加することも判明している。従
って、被験者の血液中のＣＫＭＢの定量は、心筋梗塞症
の発生の有無を検査するために有力な手段とされてい
る。
クレアチンキナーゼ（ＣＫ、クレアチンホスホキナーゼ
（ＣＰＫ）とも云われる）を定量することにより、進行
性筋萎縮症、皮膚筋炎、心筋梗塞などの診断が可能なこ
とは以前より知られており、臨床検査に利用されてい
る。また、クレアチンキナーゼ（ＣＫ）には、クレアチ
ンキナーゼＭＭ（ＣＫＭＭ）、クレアチンキナーゼＭＢ
（ＣＫＭＢ）、そしてクレアチンキナーゼＢＢ（ＣＫＢ
Ｂ）という三種のアイソザイムが存在すること、そして
ＣＫＭＭは主として骨格筋中に、ＣＫＭＢは主として心
筋中に、そしてＣＫＢＢは主として脳や脊髄中に存在す
ることも知られている。さらにＣＫＭＢは、心筋梗塞症
が発生すると、心筋より血液中に排出され、その結果、
血液中のＣＫＭＢ量が増加することも判明している。従
って、被験者の血液中のＣＫＭＢの定量は、心筋梗塞症
の発生の有無を検査するために有力な手段とされてい
る。
【０００３】上記のように、臨床検査に於て、クレアチ
ンキナーゼを定量（すなわち、総クレアチンキナーゼを
定量）すること、及び／又はクレアチンキナーゼＭＢア
イソザイムを定量することによって、被験者についての
進行性筋萎縮症、皮膚筋炎、心筋梗塞などの診断に有力
な手掛かりを得ることができるため、従来より、それら
の定量方法についての研究が進められ、現在では精度の
高い定量方法が確立されている。
ンキナーゼを定量（すなわち、総クレアチンキナーゼを
定量）すること、及び／又はクレアチンキナーゼＭＢア
イソザイムを定量することによって、被験者についての
進行性筋萎縮症、皮膚筋炎、心筋梗塞などの診断に有力
な手掛かりを得ることができるため、従来より、それら
の定量方法についての研究が進められ、現在では精度の
高い定量方法が確立されている。
【０００４】すなわち、クレアチンキナーゼの測定方法
としては、被験者から採取した血液から血清あるいは血
漿を得て、この血清や血漿中に含まれるクレアチンキナ
ーゼの酵素活性を利用することにより、分光的方法によ
り検出できる化学種を定量的に生成させ、その化学種の
生成量から、血清あるいは血漿中のクレアチンキナーゼ
の存在量を定量する方法である。さらに詳しく云えば、
この定量方法に利用される検出反応系は次の二つに分け
ることができる。
としては、被験者から採取した血液から血清あるいは血
漿を得て、この血清や血漿中に含まれるクレアチンキナ
ーゼの酵素活性を利用することにより、分光的方法によ
り検出できる化学種を定量的に生成させ、その化学種の
生成量から、血清あるいは血漿中のクレアチンキナーゼ
の存在量を定量する方法である。さらに詳しく云えば、
この定量方法に利用される検出反応系は次の二つに分け
ることができる。
【０００５】１）検出反応系１ クレアチンリン酸（ＣＰ）とアデノシン二リン酸（ＡＤ
Ｐ）とを、ｐＨ５．５〜８．５の領域にて緩衝能を示す
緩衝性化合物を用いて酵素反応のｐＨ環境を調整しなが
ら、被検液（血清や血漿など）中の存在するクレアチン
キナーゼ（ＣＫ）と接触させることにより反応させ、そ
のクレアチンキナーゼ（ＣＫ）の量に比例する量のアデ
ノシン三リン酸（ＡＴＰ）を生成させ、ついで、そのＡ
ＴＰとグルコース（Ｇｌｕ）とをヘキソキナーゼ（Ｈ
Ｋ）の存在下に反応させてグルコース−６−リン酸（Ｇ
６Ｐ）を生成させ、次にこのＧ６Ｐをニコチンアミドア
デニンジヌクレオチド酸化型（ＮＡＤ（Ｐ））と、グル
コース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ（Ｇ６ＰＤＨ）の
存在下に反応させてニコチンアミドアデニンジヌクレオ
チド還元型（ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ）を生成させ、最後に、こ
のＮＡＤ（Ｐ）Ｈの生成量を分光的測定方法により測定
し、別に調製した検量線を利用して、クレアチンキナー
ゼ（ＣＫ）を定量する方法である。
Ｐ）とを、ｐＨ５．５〜８．５の領域にて緩衝能を示す
緩衝性化合物を用いて酵素反応のｐＨ環境を調整しなが
ら、被検液（血清や血漿など）中の存在するクレアチン
キナーゼ（ＣＫ）と接触させることにより反応させ、そ
のクレアチンキナーゼ（ＣＫ）の量に比例する量のアデ
ノシン三リン酸（ＡＴＰ）を生成させ、ついで、そのＡ
ＴＰとグルコース（Ｇｌｕ）とをヘキソキナーゼ（Ｈ
Ｋ）の存在下に反応させてグルコース−６−リン酸（Ｇ
６Ｐ）を生成させ、次にこのＧ６Ｐをニコチンアミドア
デニンジヌクレオチド酸化型（ＮＡＤ（Ｐ））と、グル
コース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ（Ｇ６ＰＤＨ）の
存在下に反応させてニコチンアミドアデニンジヌクレオ
チド還元型（ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ）を生成させ、最後に、こ
のＮＡＤ（Ｐ）Ｈの生成量を分光的測定方法により測定
し、別に調製した検量線を利用して、クレアチンキナー
ゼ（ＣＫ）を定量する方法である。
【０００６】なお、生成したＮＡＤ（Ｐ）Ｈの分光的定
量の精度が充分でない傾向があるため、そのＮＡＤ
（Ｐ）Ｈを更にテトラゾリウム塩と反応させてホルマザ
ン色素を生成させて、そのホルマザン色素の生成量を定
量することによって、被検液中のクレアチンキナーゼを
定量する方法も既に開発されている（特開昭６３−３２
４９９号公報参照）。この検出反応系１を反応式により
次に示す。
量の精度が充分でない傾向があるため、そのＮＡＤ
（Ｐ）Ｈを更にテトラゾリウム塩と反応させてホルマザ
ン色素を生成させて、そのホルマザン色素の生成量を定
量することによって、被検液中のクレアチンキナーゼを
定量する方法も既に開発されている（特開昭６３−３２
４９９号公報参照）。この検出反応系１を反応式により
次に示す。
【０００７】 ＣＰ ＋ ＡＤＰ → ＡＴＰ ＋ クレアチン （ＣＫ存在下） ＡＴＰ ＋ Ｇｌｕ → Ｇ６Ｐ ＋ ＡＤＰ （ＨＫ存在下） Ｇ６Ｐ ＋ ＮＡＤ（Ｐ） → ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ ＋ ６−ホスフォグルコン酸 （Ｇ６ＰＤＨ存在下） ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ ＋ テトラゾリウム塩 → ホルマザン色素 ＋ ＮＡＤ（Ｐ）
【０００８】２）検出反応系２ クレアチンリン酸（ＣＰ）とアデノシン二リン酸（ＡＤ
Ｐ）とを、ｐＨ５．５〜８．５の領域において緩衝能を
示す緩衝性化合物にて酵素反応のｐＨ環境を調整しなが
ら、被検液（血清や血漿など）中の存在するクレアチン
キナーゼ（ＣＫ）と接触させることにより反応させ、そ
のクレアチンキナーゼ（ＣＫ）の量に比例する量のアデ
ノシン三リン酸（ＡＴＰ）を生成させ、ついで、そのＡ
ＴＰとグリセロールとをグリセロールキナーゼ（ＨＫ）
の存在下に反応させてＬ−α−グリセロリン酸を生成さ
せ、次にこのＬ−α−グリセロリン酸をＬ−α−グリセ
ロリン酸オキシダーゼの存在下に酸素と反応させて過酸
化水素を発生させ、最後に過酸化水素とロイコ色素とを
反応させて青色の色素を生成させ、この青色色素の生成
量を分光的測定方法により測定し、別に調製した検量線
を利用して、クレアチンキナーゼ（ＣＫ）を定量する方
法である。この検出反応系２を反応式により次に示す。
Ｐ）とを、ｐＨ５．５〜８．５の領域において緩衝能を
示す緩衝性化合物にて酵素反応のｐＨ環境を調整しなが
ら、被検液（血清や血漿など）中の存在するクレアチン
キナーゼ（ＣＫ）と接触させることにより反応させ、そ
のクレアチンキナーゼ（ＣＫ）の量に比例する量のアデ
ノシン三リン酸（ＡＴＰ）を生成させ、ついで、そのＡ
ＴＰとグリセロールとをグリセロールキナーゼ（ＨＫ）
の存在下に反応させてＬ−α−グリセロリン酸を生成さ
せ、次にこのＬ−α−グリセロリン酸をＬ−α−グリセ
ロリン酸オキシダーゼの存在下に酸素と反応させて過酸
化水素を発生させ、最後に過酸化水素とロイコ色素とを
反応させて青色の色素を生成させ、この青色色素の生成
量を分光的測定方法により測定し、別に調製した検量線
を利用して、クレアチンキナーゼ（ＣＫ）を定量する方
法である。この検出反応系２を反応式により次に示す。
【０００９】 ＣＰ ＋ ＡＤＰ → ＡＴＰ ＋ クレアチン （ＣＫ存在下） ＡＴＰ ＋ グリセロール → Ｌ−α−グリセロリン酸 ＋ ＡＤＰ （グリセロールキナーゼ存在下） Ｌ−α−グリセロリン酸 ＋ Ｏ2 → Ｈ2 Ｏ2 ＋ ジヒドロキシアセトリン酸 （Ｌ−α−グリセロリン酸オキシダーゼの存在下） Ｈ2 Ｏ2 ＋ ロイコ色素 → 青色色素 ＋ Ｈ2 Ｏ
【００１０】一方、前記のように、クレアチンキナーゼ
には、三種類のアイソザイムが存在するため、クレアチ
ンキナーゼＭＢアイソザイムの定量は容易ではない。す
なわち、原理的には、ＭＭアイソザイムとＢＢアイソザ
イムとからＭＢアイソザイムを分離して定量する必要が
ある。ただし、ＢＢアイソザイムは、本来的に脳や脊髄
中に存在するものであるため、血液中の存在量は非常に
少なく、その存在は無視することができる。従って、Ｍ
Ｂアイソザイムの定量には、ＭＭアイソザイムを分離す
ることができれば可能となるが、その分離は非常に困難
である。このため、クレアチンキナーゼを含む血液試料
（血清や血漿など）中のＭＭアイソザイムを分離する代
わりに、ＭＢアイソザイムの活性に影響を与えること無
く、ＭＭアイソザイムの活性を阻害させる方法により、
実質的なＭＢアイソザイムの分離を実現する方法が既に
開発されている（特公昭５６−１９２３９号公報参
照）。この方法では、予め調製したクレアチンキナーゼ
ＭＢアイソザイム中のサブユニットＢの酵素活性を阻害
することなく、クレアチンキナーゼのＭＭアイソザイム
およびＭＢアイソザイム中のサブユニットＭの酵素活性
を完全に阻害する抗体を使用する。すなわち、被検液を
先ずこのＭサブユニット不活性化抗体で処理することに
よってクレアチンキナーゼの活性をクレアチンキナーゼ
ＭＢアイソザイムに起因するもののみに限定させ、この
酵素活性を前記の検出反応系１あるいは検出反応系２を
利用して測定することによって、クレアチンキナーゼＭ
Ｂアイソザイムの定量が可能となる。
には、三種類のアイソザイムが存在するため、クレアチ
ンキナーゼＭＢアイソザイムの定量は容易ではない。す
なわち、原理的には、ＭＭアイソザイムとＢＢアイソザ
イムとからＭＢアイソザイムを分離して定量する必要が
ある。ただし、ＢＢアイソザイムは、本来的に脳や脊髄
中に存在するものであるため、血液中の存在量は非常に
少なく、その存在は無視することができる。従って、Ｍ
Ｂアイソザイムの定量には、ＭＭアイソザイムを分離す
ることができれば可能となるが、その分離は非常に困難
である。このため、クレアチンキナーゼを含む血液試料
（血清や血漿など）中のＭＭアイソザイムを分離する代
わりに、ＭＢアイソザイムの活性に影響を与えること無
く、ＭＭアイソザイムの活性を阻害させる方法により、
実質的なＭＢアイソザイムの分離を実現する方法が既に
開発されている（特公昭５６−１９２３９号公報参
照）。この方法では、予め調製したクレアチンキナーゼ
ＭＢアイソザイム中のサブユニットＢの酵素活性を阻害
することなく、クレアチンキナーゼのＭＭアイソザイム
およびＭＢアイソザイム中のサブユニットＭの酵素活性
を完全に阻害する抗体を使用する。すなわち、被検液を
先ずこのＭサブユニット不活性化抗体で処理することに
よってクレアチンキナーゼの活性をクレアチンキナーゼ
ＭＢアイソザイムに起因するもののみに限定させ、この
酵素活性を前記の検出反応系１あるいは検出反応系２を
利用して測定することによって、クレアチンキナーゼＭ
Ｂアイソザイムの定量が可能となる。
【００１１】以前のクレアチンキナーゼの臨床検査およ
びクレアチンキナーゼＭＢアイソザイムの臨床検査で
は、これまでに述べてきた方法を利用して、検出反応を
試薬溶液中で実施する湿式法が一般的に利用されてい
た。しかしながら、湿式法による定量分析操作は、結果
を得るまでにかなりの長時間を必要とするという欠点が
あった。すなわち、例えば、心筋梗塞については、梗塞
の発症から治療開始までの時間が短いほど治療の効果が
高いことが知られており、このため特に心筋梗塞発症の
診断については緊急性の要求が非常に高い。従って、検
査の開始から検査結果の入手までの時間が長いことは、
治療の開始の遅れを引き起こすことになり、好ましくな
い。
びクレアチンキナーゼＭＢアイソザイムの臨床検査で
は、これまでに述べてきた方法を利用して、検出反応を
試薬溶液中で実施する湿式法が一般的に利用されてい
た。しかしながら、湿式法による定量分析操作は、結果
を得るまでにかなりの長時間を必要とするという欠点が
あった。すなわち、例えば、心筋梗塞については、梗塞
の発症から治療開始までの時間が短いほど治療の効果が
高いことが知られており、このため特に心筋梗塞発症の
診断については緊急性の要求が非常に高い。従って、検
査の開始から検査結果の入手までの時間が長いことは、
治療の開始の遅れを引き起こすことになり、好ましくな
い。
【００１２】臨床検査の結果を短時間に得る手段とし
て、透明支持体のうえに検出反応に関与する試薬組成物
を含む試薬層を積層した構成の各種の乾式分析素子が以
前より知られている。そして、上記のクレアチンキナー
ゼ検査反応あるいはクレアチンキナーゼＭＢアイソザイ
ム検査反応に関与する試薬組成物を含む試薬層を積層し
たクレアチンキナーゼ定量用の乾式分析素子およびクレ
アチンキナーゼＭＢアイソザイム定量用の乾式分析素子
も既に開発され、実際に使用されている。このようなク
レアチンキナーゼ定量用の乾式分析素子およびクレアチ
ンキナーゼＭＢアイソザイム定量用の乾式分析素子の構
成については、下記の特許公開公報に詳しい記載があ
る。特開平６１−２５４１９８号公報、特開平６１−２
５４１９９号公報、特開平６１−２６０１６４号公報、
前記の特開平６３−３２４９９号公報。
て、透明支持体のうえに検出反応に関与する試薬組成物
を含む試薬層を積層した構成の各種の乾式分析素子が以
前より知られている。そして、上記のクレアチンキナー
ゼ検査反応あるいはクレアチンキナーゼＭＢアイソザイ
ム検査反応に関与する試薬組成物を含む試薬層を積層し
たクレアチンキナーゼ定量用の乾式分析素子およびクレ
アチンキナーゼＭＢアイソザイム定量用の乾式分析素子
も既に開発され、実際に使用されている。このようなク
レアチンキナーゼ定量用の乾式分析素子およびクレアチ
ンキナーゼＭＢアイソザイム定量用の乾式分析素子の構
成については、下記の特許公開公報に詳しい記載があ
る。特開平６１−２５４１９８号公報、特開平６１−２
５４１９９号公報、特開平６１−２６０１６４号公報、
前記の特開平６３−３２４９９号公報。
【００１３】上記の公知のクレアチンキナーゼ定量用の
乾式分析素子およびクレアチンキナーゼＭＢアイソザイ
ム定量用の乾式分析素子は、それぞれクレアチンキナー
ゼおよびクレアチンキナーゼＭＢアイソザイムの短時間
での定量分析のために利用できる優れた分析用具である
が、分析素子製造後から実際の定量分析に使用するまで
の間における保存性に劣ると云う問題があった。すなわ
ち、それぞれの分析素子を通常の保存条件にて保存を行
なうと、製造後短い期間の内に、感度の低下が発生する
ことが見出されている。従って、これらの乾式分析素子
を良好な保存状態に維持するためには、分析素子を冷凍
保存する必要があった。このような分析素子の保存に、
冷凍保存が必要であると云うことは、その冷凍保存の設
備が必要である上に、実際の臨床検査の開始に際しても
時間的遅れが発生しやすいという問題がある。
乾式分析素子およびクレアチンキナーゼＭＢアイソザイ
ム定量用の乾式分析素子は、それぞれクレアチンキナー
ゼおよびクレアチンキナーゼＭＢアイソザイムの短時間
での定量分析のために利用できる優れた分析用具である
が、分析素子製造後から実際の定量分析に使用するまで
の間における保存性に劣ると云う問題があった。すなわ
ち、それぞれの分析素子を通常の保存条件にて保存を行
なうと、製造後短い期間の内に、感度の低下が発生する
ことが見出されている。従って、これらの乾式分析素子
を良好な保存状態に維持するためには、分析素子を冷凍
保存する必要があった。このような分析素子の保存に、
冷凍保存が必要であると云うことは、その冷凍保存の設
備が必要である上に、実際の臨床検査の開始に際しても
時間的遅れが発生しやすいという問題がある。
【００１４】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、これまでに
知られているクレアチンキナーゼ定量用の乾式分析素子
およびクレアチンキナーゼＭＢアイソザイム定量用の乾
式分析素子の低い保存性を解決することを目的とする。
本発明は特に、常温で保存しても感度低下が少なく、従
って常温での保存が可能なクレアチンキナーゼ定量用の
乾式分析素子およびクレアチンキナーゼＭＢアイソザイ
ム定量用の乾式分析素子を提供することを目的とする。
知られているクレアチンキナーゼ定量用の乾式分析素子
およびクレアチンキナーゼＭＢアイソザイム定量用の乾
式分析素子の低い保存性を解決することを目的とする。
本発明は特に、常温で保存しても感度低下が少なく、従
って常温での保存が可能なクレアチンキナーゼ定量用の
乾式分析素子およびクレアチンキナーゼＭＢアイソザイ
ム定量用の乾式分析素子を提供することを目的とする。
【００１５】
【課題を解決するための手段】本発明は、支持体上に、
クレアチンキナーゼの存在下で、アデノシン三リン酸を
生成するクレアチンリン酸とアデノシン二リン酸、そし
てそのアデノシン三リン酸の生成のためのｐＨ環境を提
供するｐＨ５．５〜８．５の領域において緩衝能を示す
緩衝性化合物を含有し、更に、生成したアデノシン三リ
ン酸との反応により分光的測定方法により検出可能な化
合物を生成させるグルコース、ヘキソキナーゼ、ニコチ
ンアミドアデニンジヌクレオチド（リン酸）酸化型およ
びグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼを含む指示
薬組成物を含有するクレアチンキナーゼ検出試薬層を積
層してなるクレアチンキナーゼ定量用乾式分析素子であ
って、該検出試薬層中において、クレアチンリン酸が、
アデノシン二リン酸およびグルコースとから分離されて
配置されていることを特徴とするクレアチンキナーゼ定
量用乾式分析素子にある。
クレアチンキナーゼの存在下で、アデノシン三リン酸を
生成するクレアチンリン酸とアデノシン二リン酸、そし
てそのアデノシン三リン酸の生成のためのｐＨ環境を提
供するｐＨ５．５〜８．５の領域において緩衝能を示す
緩衝性化合物を含有し、更に、生成したアデノシン三リ
ン酸との反応により分光的測定方法により検出可能な化
合物を生成させるグルコース、ヘキソキナーゼ、ニコチ
ンアミドアデニンジヌクレオチド（リン酸）酸化型およ
びグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼを含む指示
薬組成物を含有するクレアチンキナーゼ検出試薬層を積
層してなるクレアチンキナーゼ定量用乾式分析素子であ
って、該検出試薬層中において、クレアチンリン酸が、
アデノシン二リン酸およびグルコースとから分離されて
配置されていることを特徴とするクレアチンキナーゼ定
量用乾式分析素子にある。
【００１６】本発明はまた、支持体上に、クレアチンキ
ナーゼの存在下で、アデノシン三リン酸を生成するクレ
アチンリン酸とアデノシン二リン酸、そしてそのアデノ
シン三リン酸の生成のためのｐＨ環境を提供するｐＨ
５．５〜８．５の領域において緩衝能を示す緩衝性化合
物を含有し、更に、生成したアデノシン三リン酸との反
応により分光的測定方法により検出可能な化合物を生成
させるグルセロール、グリセロールキナーゼ、Ｌ−α−
グリセロリン酸オキシダーゼ及びロイコ色素を含む指示
薬組成物を含有するクレアチンキナーゼ検出試薬層を積
層してなるクレアチンキナーゼ定量用乾式分析素子であ
って、該検出試薬層中において、クレアチンリン酸が、
アデノシン二リン酸およびグルセロールとから分離され
て配置されていることを特徴とするクレアチンキナーゼ
定量用乾式分析素子にもある。
ナーゼの存在下で、アデノシン三リン酸を生成するクレ
アチンリン酸とアデノシン二リン酸、そしてそのアデノ
シン三リン酸の生成のためのｐＨ環境を提供するｐＨ
５．５〜８．５の領域において緩衝能を示す緩衝性化合
物を含有し、更に、生成したアデノシン三リン酸との反
応により分光的測定方法により検出可能な化合物を生成
させるグルセロール、グリセロールキナーゼ、Ｌ−α−
グリセロリン酸オキシダーゼ及びロイコ色素を含む指示
薬組成物を含有するクレアチンキナーゼ検出試薬層を積
層してなるクレアチンキナーゼ定量用乾式分析素子であ
って、該検出試薬層中において、クレアチンリン酸が、
アデノシン二リン酸およびグルセロールとから分離され
て配置されていることを特徴とするクレアチンキナーゼ
定量用乾式分析素子にもある。
【００１７】本発明はさらに、支持体上に、クレアチン
キナーゼのＭサブユニット活性を特異的に阻害する抗
体、クレアチンキナーゼＭＢアイソザイムの存在下で、
アデノシン三リン酸を生成するクレアチンリン酸とアデ
ノシン二リン酸、そしてそのアデノシン三リン酸の生成
のためのｐＨ環境を提供するｐＨ５．５〜８．５の領域
において緩衝能を示す緩衝性化合物を含有し、更に、生
成したアデノシン三リン酸との反応により分光的測定方
法により検出可能な化合物を生成させるグルコース、ヘ
キソキナーゼ、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド
（リン酸）酸化型及びグルコース−６−リン酸デヒドロ
ゲナーゼを含む指示薬組成物を含有するクレアチンキナ
ーゼＭＢアイソザイム検出試薬層を積層してなるクレア
チンキナーゼＭＢアイソザイム定量用乾式分析素子であ
って、該検出試薬層中において、クレアチンリン酸が、
アデノシン二リン酸およびグルコースとから分離されて
配置されていることを特徴とするクレアチンキナーゼＭ
Ｂアイソザイム定量用乾式分析素子にもある。
キナーゼのＭサブユニット活性を特異的に阻害する抗
体、クレアチンキナーゼＭＢアイソザイムの存在下で、
アデノシン三リン酸を生成するクレアチンリン酸とアデ
ノシン二リン酸、そしてそのアデノシン三リン酸の生成
のためのｐＨ環境を提供するｐＨ５．５〜８．５の領域
において緩衝能を示す緩衝性化合物を含有し、更に、生
成したアデノシン三リン酸との反応により分光的測定方
法により検出可能な化合物を生成させるグルコース、ヘ
キソキナーゼ、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド
（リン酸）酸化型及びグルコース−６−リン酸デヒドロ
ゲナーゼを含む指示薬組成物を含有するクレアチンキナ
ーゼＭＢアイソザイム検出試薬層を積層してなるクレア
チンキナーゼＭＢアイソザイム定量用乾式分析素子であ
って、該検出試薬層中において、クレアチンリン酸が、
アデノシン二リン酸およびグルコースとから分離されて
配置されていることを特徴とするクレアチンキナーゼＭ
Ｂアイソザイム定量用乾式分析素子にもある。
【００１８】そして、本発明は、支持体上に、クレアチ
ンキナーゼのＭサブユニット活性を特異的に阻害する抗
体、クレアチンキナーゼＭＢアイソザイムの存在下で、
アデノシン三リン酸を生成するクレアチンリン酸とアデ
ノシン二リン酸、そしてそのアデノシン三リン酸の生成
のためのｐＨ環境を提供するｐＨ５．５〜８．５の領域
において緩衝能を示す緩衝性化合物を含有し、更に、生
成したアデノシン三リン酸との反応により分光的測定方
法により検出可能な化合物を生成させるグルセロール、
グリセロールキナーゼ、Ｌ−α−グリセロリン酸オキシ
ダーゼ及びロイコ色素を含む指示薬組成物を含有するク
レアチンキナーゼＭＢアイソザイム検出試薬層を積層し
てなるクレアチンキナーゼＭＢアイソザイム定量用乾式
分析素子であって、該検出試薬層中において、クレアチ
ンリン酸が、アデノシン二リン酸およびグルセロールと
から分離されて配置されていることを特徴とするクレア
チンキナーゼＭＢアイソザイム定量用乾式分析素子にも
ある。
ンキナーゼのＭサブユニット活性を特異的に阻害する抗
体、クレアチンキナーゼＭＢアイソザイムの存在下で、
アデノシン三リン酸を生成するクレアチンリン酸とアデ
ノシン二リン酸、そしてそのアデノシン三リン酸の生成
のためのｐＨ環境を提供するｐＨ５．５〜８．５の領域
において緩衝能を示す緩衝性化合物を含有し、更に、生
成したアデノシン三リン酸との反応により分光的測定方
法により検出可能な化合物を生成させるグルセロール、
グリセロールキナーゼ、Ｌ−α−グリセロリン酸オキシ
ダーゼ及びロイコ色素を含む指示薬組成物を含有するク
レアチンキナーゼＭＢアイソザイム検出試薬層を積層し
てなるクレアチンキナーゼＭＢアイソザイム定量用乾式
分析素子であって、該検出試薬層中において、クレアチ
ンリン酸が、アデノシン二リン酸およびグルセロールと
から分離されて配置されていることを特徴とするクレア
チンキナーゼＭＢアイソザイム定量用乾式分析素子にも
ある。
【００１９】本発明のクレアチンキナーゼ定量用の乾式
分析素子あるいはクレアチンキナーゼＭＢ定量用の乾式
分析素子では、前記検出反応系１を利用する場合には、
酵素作用下の反応に関与する試薬成分であるクレアチン
リン酸（ＣＰ）とアデノシン二リン酸（ＡＤＰ）とを分
離して配置し、さらにクレアチンリン酸とグルコース
（Ｇｌｕ）とを分離して配置することを特徴としてい
る。また、前記検出反応系２を利用する乾式分析素子で
は、同じく酵素作用下の反応に関与する試薬成分である
クレアチンリン酸（ＣＰ）とアデノシン二リン酸（ＡＤ
Ｐ）とを分離して配置し、さらにクレアチンリン酸とグ
リセロールとを分離して配置することを特徴としてい
る。すなわち、分析素子の保存中に於ける副反応の発生
を防止あるいは抑制するために、一連の検出反応工程の
うちの酵素反応に関与する二以上の成分を分離して配置
することにより、分析素子の保存性を向上させようとす
るものである。
分析素子あるいはクレアチンキナーゼＭＢ定量用の乾式
分析素子では、前記検出反応系１を利用する場合には、
酵素作用下の反応に関与する試薬成分であるクレアチン
リン酸（ＣＰ）とアデノシン二リン酸（ＡＤＰ）とを分
離して配置し、さらにクレアチンリン酸とグルコース
（Ｇｌｕ）とを分離して配置することを特徴としてい
る。また、前記検出反応系２を利用する乾式分析素子で
は、同じく酵素作用下の反応に関与する試薬成分である
クレアチンリン酸（ＣＰ）とアデノシン二リン酸（ＡＤ
Ｐ）とを分離して配置し、さらにクレアチンリン酸とグ
リセロールとを分離して配置することを特徴としてい
る。すなわち、分析素子の保存中に於ける副反応の発生
を防止あるいは抑制するために、一連の検出反応工程の
うちの酵素反応に関与する二以上の成分を分離して配置
することにより、分析素子の保存性を向上させようとす
るものである。
【００２０】
【発明の実施の形態】本発明のクレアチンキナーゼ定量
用の乾式分析素子あるいはクレアチンキナーゼＭＢ定量
用の乾式分析素子において利用される検出反応系は前記
の検出反応系１あるいは検出反応系２である。従って、
アデノシン三リン酸との反応によって分光的測定方法に
より検出可能な化合物を生成させる指示薬組成物として
は、前記の検出反応系に利用される指示薬組成物のいず
れをも使用することができる。すなわち、指示薬組成物
の例としては、下記の指示薬組成物を挙げることができ
る。
用の乾式分析素子あるいはクレアチンキナーゼＭＢ定量
用の乾式分析素子において利用される検出反応系は前記
の検出反応系１あるいは検出反応系２である。従って、
アデノシン三リン酸との反応によって分光的測定方法に
より検出可能な化合物を生成させる指示薬組成物として
は、前記の検出反応系に利用される指示薬組成物のいず
れをも使用することができる。すなわち、指示薬組成物
の例としては、下記の指示薬組成物を挙げることができ
る。
【００２１】１）グルコース、ヘキソキナーゼ、ニコチ
ンアミドアデニンジヌクレオチド酸化型およびグルコー
ス−６−リン酸デヒドロゲナーゼを含む指示薬組成物。 ２）グルコース、ヘキソキナーゼ、ニコチンアミドアデ
ニンジヌクレオチド酸化型、グルコース−６−リン酸デ
ヒドロゲナーゼ及びテトラゾリウム塩を含む指示薬組成
物。 ３）グリセロール、グリセロールキナーゼ、Ｌ−α−グ
リセロリン酸オキシダーゼ及びロイコ色素を含む指示薬
組成物。
ンアミドアデニンジヌクレオチド酸化型およびグルコー
ス−６−リン酸デヒドロゲナーゼを含む指示薬組成物。 ２）グルコース、ヘキソキナーゼ、ニコチンアミドアデ
ニンジヌクレオチド酸化型、グルコース−６−リン酸デ
ヒドロゲナーゼ及びテトラゾリウム塩を含む指示薬組成
物。 ３）グリセロール、グリセロールキナーゼ、Ｌ−α−グ
リセロリン酸オキシダーゼ及びロイコ色素を含む指示薬
組成物。
【００２２】本発明の発明者の研究によると、従来のク
レアチンキナーゼ定量用の乾式分析素子およびクレアチ
ンキナーゼＭＢアイソザイム定量用の乾式分析素子の低
い保存安定性は、それらの保存中において、試薬組成物
中の試薬が、クレアチンキナーゼ（ＣＫ）やクレアチン
キナーゼＭＢアイソザイム（ＣＫＭＢ）が存在しない状
態で、徐々に反応を起こすことに起因することが判明し
た。すなわち、前記の検出反応系１では、ＣＫやＣＫＭ
Ｂが存在しなくても、ＣＰとＡＤＰとが部分的に反応し
てＡＴＰが生成し、またＣＰとＧｌｕとが反応してＧ６
Ｐを生成させる現象が確認され、一方、検出反応系２で
は、ＣＰとＡＤＰとの部分な反応によるＡＴＰの生成の
他、またＣＰとグリセロールとの反応によるＬ−α−グ
リセロリン酸の生成が確認された。従って、これらのク
レアチンキナーゼあるいはクレアチンキナーゼＭＢアイ
ソザイムの不存在下で発生する反応が分析精度の大きな
低下をもたらす結果となる。
レアチンキナーゼ定量用の乾式分析素子およびクレアチ
ンキナーゼＭＢアイソザイム定量用の乾式分析素子の低
い保存安定性は、それらの保存中において、試薬組成物
中の試薬が、クレアチンキナーゼ（ＣＫ）やクレアチン
キナーゼＭＢアイソザイム（ＣＫＭＢ）が存在しない状
態で、徐々に反応を起こすことに起因することが判明し
た。すなわち、前記の検出反応系１では、ＣＫやＣＫＭ
Ｂが存在しなくても、ＣＰとＡＤＰとが部分的に反応し
てＡＴＰが生成し、またＣＰとＧｌｕとが反応してＧ６
Ｐを生成させる現象が確認され、一方、検出反応系２で
は、ＣＰとＡＤＰとの部分な反応によるＡＴＰの生成の
他、またＣＰとグリセロールとの反応によるＬ−α−グ
リセロリン酸の生成が確認された。従って、これらのク
レアチンキナーゼあるいはクレアチンキナーゼＭＢアイ
ソザイムの不存在下で発生する反応が分析精度の大きな
低下をもたらす結果となる。
【００２３】上記の理由から、本発明者は、上記の様な
乾式分析素子の常温での保存中に発生する望ましくない
副反応の抑制を目的として研究した。そして、その結
果、前記のように、一連の検出反応中の酵素反応に関与
する各成分を分析素子内で分離して配置することによっ
て、その副反応の発生の阻止あるいは抑制が可能である
ことを見出し、本願発明に到達したものである。
乾式分析素子の常温での保存中に発生する望ましくない
副反応の抑制を目的として研究した。そして、その結
果、前記のように、一連の検出反応中の酵素反応に関与
する各成分を分析素子内で分離して配置することによっ
て、その副反応の発生の阻止あるいは抑制が可能である
ことを見出し、本願発明に到達したものである。
【００２４】本発明の分析素子、即ち、クレアチンキナ
ーゼ定量用の乾式分析素子あるいはクレアチンキナーゼ
ＭＢアイソザイム定量用の乾式分析素子の構成、及びそ
れらを構成する各種試薬は、既に知られており、本発明
の乾式分析素子に於ても、前述の特定の緩衝剤化合物を
使用する以外は、同様の構成と同様の各種試薬が利用さ
れる。このような乾式分析素子の構成と試薬の例は、前
述の特許公告公報および公開公報に詳しく記載されてい
るので、ここに改めて詳しく記載しない。
ーゼ定量用の乾式分析素子あるいはクレアチンキナーゼ
ＭＢアイソザイム定量用の乾式分析素子の構成、及びそ
れらを構成する各種試薬は、既に知られており、本発明
の乾式分析素子に於ても、前述の特定の緩衝剤化合物を
使用する以外は、同様の構成と同様の各種試薬が利用さ
れる。このような乾式分析素子の構成と試薬の例は、前
述の特許公告公報および公開公報に詳しく記載されてい
るので、ここに改めて詳しく記載しない。
【００２５】なお、クレアチンキナーゼまたはクレアチ
ンキナーゼＭＢアイソザイムの酵素作用によるアデノシ
ン三リン酸（ＡＴＰ）の生成の為のリン酸（ＣＰ）とア
デノシン二リン酸（ＡＤＰ）との反応には、特定のｐＨ
環境、すなわちｐＨ５．５〜８．５のｐＨ環境が必要で
あることは以前より知られており、このため、初期の頃
にはビス−トリス（Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ）と略称されるグ
ッドの緩衝剤組成物が使用されていたが、その後、クレ
アチンキナーゼの定量に関するＪＳＣＣ勧告により、イ
ミダゾールが緩衝性化合物として一般的に用いられてい
る。
ンキナーゼＭＢアイソザイムの酵素作用によるアデノシ
ン三リン酸（ＡＴＰ）の生成の為のリン酸（ＣＰ）とア
デノシン二リン酸（ＡＤＰ）との反応には、特定のｐＨ
環境、すなわちｐＨ５．５〜８．５のｐＨ環境が必要で
あることは以前より知られており、このため、初期の頃
にはビス−トリス（Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ）と略称されるグ
ッドの緩衝剤組成物が使用されていたが、その後、クレ
アチンキナーゼの定量に関するＪＳＣＣ勧告により、イ
ミダゾールが緩衝性化合物として一般的に用いられてい
る。
【００２６】しかし、本発明者の研究によると、上記の
目的で用いる緩衝剤としては、スルホン酸基を有する緩
衝性化合物、特にグッドの緩衝剤と一般的に呼ばれてい
る緩衝性化合物から選ばれるスルホン酸基を有する緩衝
性化合物であることが好ましいことが判明した。すなわ
ち、グッドの緩衝剤には、スルホン酸基を持つもの、そ
してスルホン酸基を持たないもののいずれもがあるが、
本発明で用いる緩衝性化合物は、それらの内のスルホン
酸基を持つ緩衝性化合物である。なお、グッドの緩衝剤
（あるいは、グッドの緩衝液とも呼ばれる）について
は、例えば、「化学辞典」（森北出版株式会社、１９８
１年発行）、「化学大辞典」（株式会社東京化学同人、
１９８９年発行）などに簡単な記載があり、また更に多
くの臨床検査試薬に関する成書に詳しい記載がある。
目的で用いる緩衝剤としては、スルホン酸基を有する緩
衝性化合物、特にグッドの緩衝剤と一般的に呼ばれてい
る緩衝性化合物から選ばれるスルホン酸基を有する緩衝
性化合物であることが好ましいことが判明した。すなわ
ち、グッドの緩衝剤には、スルホン酸基を持つもの、そ
してスルホン酸基を持たないもののいずれもがあるが、
本発明で用いる緩衝性化合物は、それらの内のスルホン
酸基を持つ緩衝性化合物である。なお、グッドの緩衝剤
（あるいは、グッドの緩衝液とも呼ばれる）について
は、例えば、「化学辞典」（森北出版株式会社、１９８
１年発行）、「化学大辞典」（株式会社東京化学同人、
１９８９年発行）などに簡単な記載があり、また更に多
くの臨床検査試薬に関する成書に詳しい記載がある。
【００２７】グッドの緩衝剤に属し、かつ本発明の乾式
分析素子に於ける使用に適した緩衝性化合物としては、
ＴＥＳ、ＴＡＰＳＯ、ＭＯＰＳＯ、ＭＥＳ、ＤＩＰＳ
Ｏ、ＨＥＰＥＳ、ＨＥＰＳＯと名付けられている化合物
を挙げることができる。これらの化合物の中でも、ＴＥ
Ｓ、ＴＡＰＳＯ、ＭＯＰＳＯ、およびＭＥＳと名付けら
れている化合物が好ましい。特に好ましいのは、ＴＥＳ
とＴＡＰＳＯである。
分析素子に於ける使用に適した緩衝性化合物としては、
ＴＥＳ、ＴＡＰＳＯ、ＭＯＰＳＯ、ＭＥＳ、ＤＩＰＳ
Ｏ、ＨＥＰＥＳ、ＨＥＰＳＯと名付けられている化合物
を挙げることができる。これらの化合物の中でも、ＴＥ
Ｓ、ＴＡＰＳＯ、ＭＯＰＳＯ、およびＭＥＳと名付けら
れている化合物が好ましい。特に好ましいのは、ＴＥＳ
とＴＡＰＳＯである。
【００２８】本発明に於ける、検出反応系１および２で
利用される化学成分の分離は、分析素子の検出試薬層
（検出試薬が含まれている限り、展開層、接着層、ある
いは部別の機能を有する層も全て含まれる）として、二
層以上の複数の層（試薬層）を形成し、それらの試薬層
に、本発明に従って、検出用の酵素反応系に関与する化
学成分を分離して配置すればよい。あるいは、水分の浸
透が可能なマイクロカプセルなどを利用して、分析素子
の保存中に於ける化学成分相互の物理的接触を回避する
方法も利用することができる。
利用される化学成分の分離は、分析素子の検出試薬層
（検出試薬が含まれている限り、展開層、接着層、ある
いは部別の機能を有する層も全て含まれる）として、二
層以上の複数の層（試薬層）を形成し、それらの試薬層
に、本発明に従って、検出用の酵素反応系に関与する化
学成分を分離して配置すればよい。あるいは、水分の浸
透が可能なマイクロカプセルなどを利用して、分析素子
の保存中に於ける化学成分相互の物理的接触を回避する
方法も利用することができる。
【００２９】クレアチンキナーゼ定量用の乾式分析素子
あるいはクレアチンキナーゼＭＢアイソザイム定量用の
乾式分析素子を用いてのクレアチンキナーゼ（ＣＫ）あ
るいはクレアチンキナーゼＭＢアイソザイム（ＣＫＭ
Ｂ）の定量分析の操作は、前述の特許公告公報及び特許
公開公報に記載されているように、既に知られており、
本発明の乾式分析素子を用いてのＣＫあるいはＣＫＭＢ
の定量分析操作は、それらと同様な操作に従って実施す
ることができる。
あるいはクレアチンキナーゼＭＢアイソザイム定量用の
乾式分析素子を用いてのクレアチンキナーゼ（ＣＫ）あ
るいはクレアチンキナーゼＭＢアイソザイム（ＣＫＭ
Ｂ）の定量分析の操作は、前述の特許公告公報及び特許
公開公報に記載されているように、既に知られており、
本発明の乾式分析素子を用いてのＣＫあるいはＣＫＭＢ
の定量分析操作は、それらと同様な操作に従って実施す
ることができる。
【００３０】次に本発明の実施例と比較例とを記載す
る。なお、下記の実施例と比較例とに於ては、検出反応
系１および２を利用するクレアチンキナーゼＭＢアイソ
ザイム定量用の乾式分析素子のみを示すが、本発明で使
用する緩衝性化合物の機能は、クレアチンキナーゼＭＢ
アイソザイム定量用の場合であっても、クレアチンキナ
ーゼ（総クレアチンキナーゼ）定量用の場合であっても
実質的な変りはない。従って、下記の実施例によって、
前述のいずれの態様の乾式分析素子においても、本発明
の各検出反応系で用いる酵素反応に関与する化学成分の
分離の効果が明らかにされていると理解すべきである。
る。なお、下記の実施例と比較例とに於ては、検出反応
系１および２を利用するクレアチンキナーゼＭＢアイソ
ザイム定量用の乾式分析素子のみを示すが、本発明で使
用する緩衝性化合物の機能は、クレアチンキナーゼＭＢ
アイソザイム定量用の場合であっても、クレアチンキナ
ーゼ（総クレアチンキナーゼ）定量用の場合であっても
実質的な変りはない。従って、下記の実施例によって、
前述のいずれの態様の乾式分析素子においても、本発明
の各検出反応系で用いる酵素反応に関与する化学成分の
分離の効果が明らかにされていると理解すべきである。
【００３１】
［実施例１］検出反応系１を利用する本発明に従うＣＫ
ＭＢ定量用分析素子の製造 透明ポリエチレンテレフタレートフィルム（厚さ１８０
μｍ）の表面を親水化処理し、その処理表面上に下記の
組成の塗布液を塗布、乾燥して、乾燥層厚が１２μｍの
試薬層（指示薬とＣＫを含有する層）を形成した。
ＭＢ定量用分析素子の製造 透明ポリエチレンテレフタレートフィルム（厚さ１８０
μｍ）の表面を親水化処理し、その処理表面上に下記の
組成の塗布液を塗布、乾燥して、乾燥層厚が１２μｍの
試薬層（指示薬とＣＫを含有する層）を形成した。
【００３２】 脱イオンゼラチン ２００ｇ 水 １０４０ｇ ５％非イオン系界面活性剤水溶液 ８０ｇ ニトロテトラゾリウムブルー １０ｇ ジアホラーゼ ６９２３０Ｕ クレアチンリン酸（ＣＫ） ６０ｇ
【００３３】別に用意したポリエチレンテトラフタレー
ト紡績糸からなるトリコット編み物に下記組成の塗布液
を塗布量１００ｇ／ｍ2 にて含浸させ、乾燥した。そし
て、上記の試薬層の表面に網点状に接着剤を付け、この
上に上記の塗布処理したトリコット編み物を圧着し、一
体化した。
ト紡績糸からなるトリコット編み物に下記組成の塗布液
を塗布量１００ｇ／ｍ2 にて含浸させ、乾燥した。そし
て、上記の試薬層の表面に網点状に接着剤を付け、この
上に上記の塗布処理したトリコット編み物を圧着し、一
体化した。
【００３４】 水 ３６．６ｇ 抗ヒトＣＫ−Ｍヤギ抗体溶液 ２０ｇ （最終希釈倍率１５００倍時に２０００Ｕ／Ｌの ＣＫＭＭを５０％以上阻害できる能力を持つ溶液） １０％非イオン系界面活性剤水溶液 ２．９ｇ １５％ポリアクリルアミド水溶液 １３．８ｇ （平均分子量３．７万） ２０％塩化マグネシウム水溶液 ８．７ｇ エチレンジアミン４酢酸・２Ｎａ塩 ０．５ｇ グルコース ０．６２ｇ アデノシン−５’−ジホスフェート（ＡＤＰ） ０．３ｇ Ｐ1 ，Ｐ5 −ジ（アデノシン−５’−） ペンタホスフェート（ＡＰ５Ａ） ０．２５ｇ アデノシン−５’−モノホスフェート（ＡＭＰ） １．２ｇ Ｎ−アセチル−Ｌ−システイン ０．１ｇ ニコチンアミドアデニンヌクレオチド酸化型 （ＮＡＤ） ０．６ｇ イミダゾール １．５ｇ １Ｎ ＨＣｌ １０．０ｇ グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ １４０００Ｕ ヘキソキナーゼ（ＨＫ） １９４００Ｕ アスコルビン酸オキシダーゼ ５０００Ｕ
【００３５】最後に、上記にて形成した、支持体上に二
つの試薬層（指示薬とＣＫとを含有する層と、他の反応
試薬を含有する展開層）とが積層された積層体を１２ｍ
ｍ×１２ｍｍの寸法に裁断して、本発明に従う複数の試
薬層を持つＣＫＭＢ定量用分析素子を得た。
つの試薬層（指示薬とＣＫとを含有する層と、他の反応
試薬を含有する展開層）とが積層された積層体を１２ｍ
ｍ×１２ｍｍの寸法に裁断して、本発明に従う複数の試
薬層を持つＣＫＭＢ定量用分析素子を得た。
【００３６】［比較例１］検出反応成分を一層内に配置
したＣＫＭＢ定量用分析素子の製造 透明ポリエチレンテレフタレートフィルム（厚さ１８０
μｍ）の表面を親水化処理し、その処理表面上に下記の
組成の塗布液を塗布、乾燥して、乾燥層厚が１２μｍの
指示薬層を形成した。
したＣＫＭＢ定量用分析素子の製造 透明ポリエチレンテレフタレートフィルム（厚さ１８０
μｍ）の表面を親水化処理し、その処理表面上に下記の
組成の塗布液を塗布、乾燥して、乾燥層厚が１２μｍの
指示薬層を形成した。
【００３７】 脱イオンゼラチン ２００ｇ 水 １１００ｇ ５％非イオン系界面活性剤水溶液 ８０ｇ ニトロテトラゾリウムブルー １０ｇ ジアホラーゼ ６９２３０Ｕ
【００３８】上記指示薬層をゼラチン架橋剤を含む溶液
で湿らせた後（約３０ｇ／ｍ2 ）、その指示薬層の上
に、ポリエチレンテトラフタレート紡績糸からなるトリ
コット編み物を圧着し、乾燥させて展開層とした。次
に、上記展開層の表面に下記の組成の塗布液を、塗布量
１３０ｇ／ｍ2 にて塗布、乾燥した。
で湿らせた後（約３０ｇ／ｍ2 ）、その指示薬層の上
に、ポリエチレンテトラフタレート紡績糸からなるトリ
コット編み物を圧着し、乾燥させて展開層とした。次
に、上記展開層の表面に下記の組成の塗布液を、塗布量
１３０ｇ／ｍ2 にて塗布、乾燥した。
【００３９】 水 ４６．６ｇ 抗ヒトＣＫ−Ｍヤギ抗体溶液 ２０ｇ （最終希釈倍率１５００倍時に２０００Ｕ／Ｌの ＣＫＭＭを５０％以上阻害できる能力を持つ溶液） １０％非イオン系界面活性剤水溶液 ２．９ｇ １５％ポリアクリルアミド水溶液 ３３．８ｇ （平均分子量３．７万） ２０％塩化マグネシウム水溶液 ８．７ｇ エチレンジアミン４酢酸・２Ｎａ塩 ０．５ｇ クレアチンリン酸（ＣＫ） １．３ｇ アデノシン−５’−ジホスフェート（ＡＤＰ） ０．３ｇ Ｐ1 ，Ｐ5 −ジ（アデノシン−５’−） ペンタホスフェート（ＡＰ５Ａ） ０．２５ｇ アデノシン−５’−モノホスフェート（ＡＭＰ） １．２ｇ Ｎ−アセチル−Ｌ−システイン ０．１ｇ ニコチンアミドアデニンヌクレオチド酸化型 （ＮＡＤ） ０．６ｇ イミダゾール １．５ｇ １Ｎ ＨＣｌ １０．０ｇ グルコース ０．６２ｇ グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ １４０００Ｕ ヘキソキナーゼ（ＨＫ） １９４００Ｕ アスコルビン酸オキシダーゼ ５０００Ｕ
【００４０】最後に、上記にて形成した、支持体上に指
示薬層と反応試薬含有展開層とが積層された積層体を１
２ｍｍ×１２ｍｍの寸法に裁断して、検出反応試薬を同
一の試薬層に含有させた比較用のＣＫＭＢ定量用分析素
子を得た。
示薬層と反応試薬含有展開層とが積層された積層体を１
２ｍｍ×１２ｍｍの寸法に裁断して、検出反応試薬を同
一の試薬層に含有させた比較用のＣＫＭＢ定量用分析素
子を得た。
【００４１】［ＣＫＭＢ定量用分析素子の評価：保存中
のＡＴＰの生成］実施例１そして比較例１で得られた分
析素子を、それぞれ３５℃、１１％ＲＨの保存条件で１
０日間保存し、次いで微量の水を各分析素子の展開層の
表面に点着し、３７℃で６分間インキュベーションし
た。次に、波長５４０ｎｍにて、各分析素子で発生した
呈色を測定した。なお、並行して、製造直後の実施例１
と比較例１の分析素子についても同様の呈色試験を行な
った。この測定により判明した各分析素子の呈色を下記
の第１表に示す。
のＡＴＰの生成］実施例１そして比較例１で得られた分
析素子を、それぞれ３５℃、１１％ＲＨの保存条件で１
０日間保存し、次いで微量の水を各分析素子の展開層の
表面に点着し、３７℃で６分間インキュベーションし
た。次に、波長５４０ｎｍにて、各分析素子で発生した
呈色を測定した。なお、並行して、製造直後の実施例１
と比較例１の分析素子についても同様の呈色試験を行な
った。この測定により判明した各分析素子の呈色を下記
の第１表に示す。
【００４２】
【表１】 第１表 ──────────────────────────────────── 分析素子 検出試薬 呈色（光学密度：ＯＤ） の配置 製造直後の分析素子 １日間保存分析素子 ──────────────────────────────────── 実施例１ 分離配置 ０．３５ ０．３６ 比較例１ 同一層内配置 ０．３６ ０．４８ ────────────────────────────────────
【００４３】上記の第１表の結果から、本発明で採用す
る酵素反応に関与する検出試薬の分離配置が行なわれた
分析素子に於いては、クレアチンキナーゼＭＢアイソザ
イムの不存在下でのＡＴＰの副生が効果的に抑制されて
いることがわかる。
る酵素反応に関与する検出試薬の分離配置が行なわれた
分析素子に於いては、クレアチンキナーゼＭＢアイソザ
イムの不存在下でのＡＴＰの副生が効果的に抑制されて
いることがわかる。
【００４４】［ＣＫＭＢ定量用分析素子の評価：保存中
の感度変動］実施例で得られた分析素子そして比較例１
得られた分析素子のそれぞれについて、製造直後のも
の、そして３５℃、１１ＲＨ％の保存条件で１０日間保
存した後のものを用意し、それぞれの分析素子につい
て、ＣＫＭＢ含有量が約５Ｕ／Ｌの検体、ＣＫＭＢ含有
量が約１５Ｕ／Ｌ、そしてＣＫＭＢ含有量が約２８０Ｕ
／Ｌの検体の三レベルの検体を別々に点着した。検体が
点着された分析素子について、３７℃でインキュベーシ
ョンを行ない、次いで波長５４０ｎｍにて、インキュベ
ーション開始後２分後、そして５分後に分光測定を行な
い、予め作成しておいた検量線を参照して、反応速度法
によりＣＫＭＢ量の定量を行なった。その結果を下記の
第２表に示す。
の感度変動］実施例で得られた分析素子そして比較例１
得られた分析素子のそれぞれについて、製造直後のも
の、そして３５℃、１１ＲＨ％の保存条件で１０日間保
存した後のものを用意し、それぞれの分析素子につい
て、ＣＫＭＢ含有量が約５Ｕ／Ｌの検体、ＣＫＭＢ含有
量が約１５Ｕ／Ｌ、そしてＣＫＭＢ含有量が約２８０Ｕ
／Ｌの検体の三レベルの検体を別々に点着した。検体が
点着された分析素子について、３７℃でインキュベーシ
ョンを行ない、次いで波長５４０ｎｍにて、インキュベ
ーション開始後２分後、そして５分後に分光測定を行な
い、予め作成しておいた検量線を参照して、反応速度法
によりＣＫＭＢ量の定量を行なった。その結果を下記の
第２表に示す。
【００４５】
【表２】 第２表 ──────────────────────────────────── 分析素子 検体 ＣＫＭＢ測定値 （ＣＫＭＢ量） 製造直後の分析素子 １０日保存後の分析素子 ──────────────────────────────────── 実施例１ 約５Ｕ／Ｌ ５Ｕ／Ｌ ５Ｕ／Ｌ 約１５Ｕ／Ｌ １５Ｕ／Ｌ １２Ｕ／Ｌ 約２８０Ｕ／Ｌ ２８０Ｕ／Ｌ ２７５Ｕ／Ｌ ──────────────────────────────────── 比較例１ 約５Ｕ／Ｌ ５Ｕ／Ｌ ２５Ｕ／Ｌ 約１５Ｕ／Ｌ １５Ｕ／Ｌ ４０Ｕ／Ｌ 約２８０Ｕ／Ｌ ２８０Ｕ／Ｌ ２９５Ｕ／Ｌ ────────────────────────────────────
【００４６】上記の第２表の結果から、本発明のＣＫＭ
Ｂ定量用分析素子（実施例１）を用いた場合には、通常
の保存条件よりも苛酷な保存条件においてもＣＫＭＢ測
定に関する感度の変動は僅かであることが分る。一方、
従来のＣＫＭＢ定量用分析素子（比較例１）は、その製
造直後に於ては満足すべき感度を示すが、保存を行なう
ことによって明らかな感度低下（ＡＴＰの副生によるバ
ックグランド発色の発生）が現われる。
Ｂ定量用分析素子（実施例１）を用いた場合には、通常
の保存条件よりも苛酷な保存条件においてもＣＫＭＢ測
定に関する感度の変動は僅かであることが分る。一方、
従来のＣＫＭＢ定量用分析素子（比較例１）は、その製
造直後に於ては満足すべき感度を示すが、保存を行なう
ことによって明らかな感度低下（ＡＴＰの副生によるバ
ックグランド発色の発生）が現われる。
【００４７】［実施例２］検出反応系２を利用する本発
明のＣＫＭＢ定量用分析素子の製造 透明ポリエチレンテレフタレートフィルム（厚さ１８０
μｍ）の表面を親水化処理し、その処理表面上に下記の
組成の塗布液を塗布、乾燥して、乾燥層厚が１２μｍの
試薬層（指示薬とＣＫを含有する層）を形成した。
明のＣＫＭＢ定量用分析素子の製造 透明ポリエチレンテレフタレートフィルム（厚さ１８０
μｍ）の表面を親水化処理し、その処理表面上に下記の
組成の塗布液を塗布、乾燥して、乾燥層厚が１２μｍの
試薬層（指示薬とＣＫを含有する層）を形成した。
【００４８】 脱イオンゼラチン ２００ｇ 水 ９３０ｇ 非イオン系界面活性剤 ６．５ｇ メチレンブルーロイコ体 ３．５ｇ メタノール １９０ｇ クレアチンリン酸（ＣＫ） ６０ｇ ペルオキシダーゼ １７５０００Ｕ
【００４９】別に用意したポリエチレンテトラフタレー
ト紡績糸からなるトリコット編み物に下記組成の塗布液
を塗布量１００ｇ／ｍ2 にて含浸させ、乾燥した。そし
て、上記の試薬層の表面に網点状に接着剤を付け、この
上に上記の塗布処理したトリコット編み物を圧着し、一
体化した。
ト紡績糸からなるトリコット編み物に下記組成の塗布液
を塗布量１００ｇ／ｍ2 にて含浸させ、乾燥した。そし
て、上記の試薬層の表面に網点状に接着剤を付け、この
上に上記の塗布処理したトリコット編み物を圧着し、一
体化した。
【００５０】 水 ３６．６ｇ 抗ヒトＣＫ−Ｍヤギ抗体溶液 ２０ｇ （最終希釈倍率１５００倍時に２０００Ｕ／Ｌの ＣＫＭＭを５０％以上阻害できる能力を持つ溶液） １０％非イオン系界面活性剤水溶液 ２．９ｇ １５％ポリアクリルアミド水溶液 １３．８ｇ （平均分子量３．７万） ２０％塩化マグネシウム水溶液 ８．７ｇ エチレンジアミン４酢酸・２Ｎａ塩 ０．５ｇ グルセロール ０．３１ｇ アデノシン−５’−ジホスフェート（ＡＤＰ） ０．３ｇ Ｐ1 ，Ｐ5 −ジ（アデノシン−５’−） ペンタホスフェート（ＡＰ５Ａ） ０．２５ｇ アデノシン−５’−モノホスフェート（ＡＭＰ） １．２ｇ Ｎ−アセチル−Ｌ−システイン ０．１ｇ イミダゾール １．５ｇ １Ｎ ＨＣｌ １０．０ｇ グリセロールキナーゼ １２０００Ｕ Ｌ−α−グリセロリン酸オキシダーゼ ６５００Ｕ アスコルビン酸オキシダーゼ ５０００Ｕ
【００５１】最後に、上記にて形成した、支持体上に二
つの試薬層（指示薬とＣＫとを含有する層と、他の反応
試薬を含有する展開層）とが積層された積層体を１２ｍ
ｍ×１２ｍｍの寸法に裁断して、本発明に従う複数の試
薬層を持つＣＫＭＢ定量用分析素子を得た。
つの試薬層（指示薬とＣＫとを含有する層と、他の反応
試薬を含有する展開層）とが積層された積層体を１２ｍ
ｍ×１２ｍｍの寸法に裁断して、本発明に従う複数の試
薬層を持つＣＫＭＢ定量用分析素子を得た。
【００５２】［比較例２］検出反応成分を一層内に配置
したＣＫＭＢ定量用分析素子の製造 透明ポリエチレンテレフタレートフィルム（厚さ１８０
μｍ）の表面を親水化処理し、その処理表面上に下記の
組成の塗布液を塗布、乾燥して、乾燥層厚が１２μｍの
指示薬層を形成した。
したＣＫＭＢ定量用分析素子の製造 透明ポリエチレンテレフタレートフィルム（厚さ１８０
μｍ）の表面を親水化処理し、その処理表面上に下記の
組成の塗布液を塗布、乾燥して、乾燥層厚が１２μｍの
指示薬層を形成した。
【００５３】 脱イオンゼラチン ２００ｇ 水 ９３０ｇ 非イオン系界面活性剤 ６．５ｇ メチレンブルーロイコ体 ３．５ｇ メタノール １９０ｇ ペルオキシダーゼ １７５０００Ｕ
【００５４】上記指示薬層をゼラチン架橋剤を含む溶液
で湿らせた後（約３０ｇ／ｍ2 ）、その指示薬層の上
に、ポリエチレンテトラフタレート紡績糸からなるトリ
コット編み物を圧着し、乾燥させて展開層とした。次
に、上記展開層の表面に下記の組成の塗布液を、塗布量
１３０ｇ／ｍ2 にて塗布、乾燥した。
で湿らせた後（約３０ｇ／ｍ2 ）、その指示薬層の上
に、ポリエチレンテトラフタレート紡績糸からなるトリ
コット編み物を圧着し、乾燥させて展開層とした。次
に、上記展開層の表面に下記の組成の塗布液を、塗布量
１３０ｇ／ｍ2 にて塗布、乾燥した。
【００５５】 水 ４６．６ｇ 抗ヒトＣＫ−Ｍヤギ抗体溶液 ２０ｇ （最終希釈倍率１５００倍時に２０００Ｕ／Ｌの ＣＫＭＭを５０％以上阻害できる能力を持つ溶液） １０％非イオン系界面活性剤水溶液 ２．９ｇ １５％ポリアクリルアミド水溶液 ３３．８ｇ （平均分子量３．７万） ２０％塩化マグネシウム水溶液 ８．７ｇ エチレンジアミン４酢酸・２Ｎａ塩 ０．５ｇ クレアチンリン酸（ＣＫ） １．３ｇ グルセロール ０．３１ｇ アデノシン−５’−ジホスフェート（ＡＤＰ） ０．３ｇ Ｐ1 ，Ｐ5 −ジ（アデノシン−５’−） ペンタホスフェート（ＡＰ５Ａ） ０．２５ｇ アデノシン−５’−モノホスフェート（ＡＭＰ） １．２ｇ Ｎ−アセチル−Ｌ−システイン ０．１ｇ イミダゾール １．５ｇ １Ｎ ＨＣｌ １０．０ｇ グリセロールキナーゼ １２０００Ｕ Ｌ−α−グリセロリン酸オキシダーゼ ６５００Ｕ アスコルビン酸オキシダーゼ ５０００Ｕ
【００５６】最後に、上記にて形成した、積層体を１２
ｍｍ×１２ｍｍの寸法に裁断して、比較用のＣＫＭＢ定
量用分析素子を得た。 ［ＣＫＭＢ定量用分析素子の評価：保存中のＡＴＰの生
成］実施例２そして比較例２で得られた分析素子を、前
述の方法により評価した結果、前述の結果と同様の傾向
が現われることが確認できた。
ｍｍ×１２ｍｍの寸法に裁断して、比較用のＣＫＭＢ定
量用分析素子を得た。 ［ＣＫＭＢ定量用分析素子の評価：保存中のＡＴＰの生
成］実施例２そして比較例２で得られた分析素子を、前
述の方法により評価した結果、前述の結果と同様の傾向
が現われることが確認できた。
【００５７】［ＣＫＭＢ定量用分析素子の評価：保存中
の感度変動］実施例２そして比較例２で得られた分析素
子を、前述の方法により評価した結果、前述の結果と同
様の傾向が現われることが確認できた。
の感度変動］実施例２そして比較例２で得られた分析素
子を、前述の方法により評価した結果、前述の結果と同
様の傾向が現われることが確認できた。
【００５８】
【発明の効果】クレアチンキナーゼ（ＣＫ）或はクレア
チンキナーゼＭＢアイソザイム（ＣＫＭＢ）の定量分析
で利用する酵素反応に関与する試薬成分を互いに隔離し
て配置する本発明の分析素子では、保存性が顕著に向上
するため、従来のＣＫあるいはＣＫＭＢ定量分析用乾式
分析素子の使用前の保存の際に必須とされていた分析素
子の冷凍保存の必要が無くなるため、実用において非常
に有利となる。
チンキナーゼＭＢアイソザイム（ＣＫＭＢ）の定量分析
で利用する酵素反応に関与する試薬成分を互いに隔離し
て配置する本発明の分析素子では、保存性が顕著に向上
するため、従来のＣＫあるいはＣＫＭＢ定量分析用乾式
分析素子の使用前の保存の際に必須とされていた分析素
子の冷凍保存の必要が無くなるため、実用において非常
に有利となる。
Claims (10)
- 【請求項１】 支持体上に、クレアチンキナーゼの存在
下で、アデノシン三リン酸を生成するクレアチンリン酸
とアデノシン二リン酸、そしてそのアデノシン三リン酸
の生成のためのｐＨ環境を提供するｐＨ５．５〜８．５
の領域において緩衝能を示す緩衝性化合物を含有し、更
に、生成したアデノシン三リン酸との反応により分光的
測定方法により検出可能な化合物を生成させるグルコー
ス、ヘキソキナーゼ、ニコチンアミドアデニンジヌクレ
オチド（リン酸）酸化型及びグルコース−６−リン酸デ
ヒドロゲナーゼを含む指示薬組成物を含有するクレアチ
ンキナーゼ検出試薬層を積層してなるクレアチンキナー
ゼ定量用乾式分析素子であって、該検出試薬層中におい
て、クレアチンリン酸が、アデノシン二リン酸およびグ
ルコースとから分離されて配置されていることを特徴と
するクレアチンキナーゼ定量用乾式分析素子。 - 【請求項２】 指示薬組成物が、更にテトラゾリウム塩
を含むものである請求項１に記載のクレアチンキナーゼ
定量用乾式分析素子。 - 【請求項３】 クレアチンキナーゼ検出試薬層が少なく
とも二層の試薬層からなり、その内の一の試薬層にクレ
アチンリン酸が、そして他の試薬層にアデノシン二リン
酸とグルコースとが含まれている請求項１もしくは２に
記載のクレアチンキナーゼ定量用乾式分析素子。 - 【請求項４】 支持体上に、クレアチンキナーゼの存在
下で、アデノシン三リン酸を生成するクレアチンリン酸
とアデノシン二リン酸、そしてそのアデノシン三リン酸
の生成のためのｐＨ環境を提供するｐＨ５．５〜８．５
の領域において緩衝能を示す緩衝性化合物を含有し、更
に、生成したアデノシン三リン酸との反応により分光的
測定方法により検出可能な化合物を生成させるグルセロ
ール、グリセロールキナーゼ、Ｌ−α−グリセロリン酸
オキシダーゼ及びロイコ色素を含む指示薬組成物を含有
するクレアチンキナーゼ検出試薬層を積層してなるクレ
アチンキナーゼ定量用乾式分析素子であって、該検出試
薬層中において、クレアチンリン酸が、アデノシン二リ
ン酸およびグルセロールとから分離されて配置されてい
ることを特徴とするクレアチンキナーゼ定量用乾式分析
素子。 - 【請求項５】 クレアチンキナーゼ検出試薬層が少なく
とも二層の試薬層からなり、その内の一の試薬層にクレ
アチンリン酸が、そして他の試薬層にアデノシン二リン
酸とグリセロールとが含まれている請求項４に記載のク
レアチンキナーゼ定量用乾式分析素子。 - 【請求項６】 支持体上に、クレアチンキナーゼのＭサ
ブユニット活性を特異的に阻害する抗体、クレアチンキ
ナーゼＭＢアイソザイムの存在下で、アデノシン三リン
酸を生成するクレアチンリン酸とアデノシン二リン酸、
そしてそのアデノシン三リン酸の生成のためのｐＨ環境
を提供するｐＨ５．５〜８．５の領域において緩衝能を
示す緩衝性化合物を含有し、更に、生成したアデノシン
三リン酸との反応により分光的測定方法により検出可能
な化合物を生成させるグルコース、ヘキソキナーゼ、ニ
コチンアミドアデニンジヌクレオチド（リン酸）酸化型
及びグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼを含む指
示薬組成物を含有するクレアチンキナーゼＭＢアイソザ
イム検出試薬層を積層してなるクレアチンキナーゼＭＢ
アイソザイム定量用乾式分析素子であって、該検出試薬
層中において、クレアチンリン酸が、アデノシン二リン
酸およびグルコースとから分離されて配置されているこ
とを特徴とするクレアチンキナーゼＭＢアイソザイム定
量用乾式分析素子。 - 【請求項７】 指示薬組成物が、更にテトラゾリウム塩
を含むものである請求項６に記載のクレアチンキナーゼ
ＭＢアイソザイム定量用乾式分析素子。 - 【請求項８】 クレアチンキナーゼＭＢアイソザイム検
出試薬層が少なくとも二層の試薬層からなり、その内の
一の試薬層にクレアチンリン酸が、そして他の試薬層に
アデノシン二リン酸とグルコースとが含まれている請求
項６もしくは７に記載のクレアチンキナーゼＭＢアイソ
ザイム定量用乾式分析素子。 - 【請求項９】 支持体上に、クレアチンキナーゼのＭサ
ブユニット活性を特異的に阻害する抗体、クレアチンキ
ナーゼＭＢアイソザイムの存在下で、アデノシン三リン
酸を生成するクレアチンリン酸とアデノシン二リン酸、
そしてそのアデノシン三リン酸の生成のためのｐＨ環境
を提供するｐＨ５．５〜８．５の領域において緩衝能を
示す緩衝性化合物を含有し、更に、生成したアデノシン
三リン酸との反応により分光的測定方法により検出可能
な化合物を生成させるグルセロール、グリセロールキナ
ーゼ、Ｌ−α−グリセロリン酸オキシダーゼ及びロイコ
色素を含む指示薬組成物を含有するクレアチンキナーゼ
ＭＢアイソザイム検出試薬層を積層してなるクレアチン
キナーゼＭＢアイソザイム定量用乾式分析素子であっ
て、該検出試薬層中において、クレアチンリン酸が、ア
デノシン二リン酸およびグルセロールとから分離されて
配置されていることを特徴とするクレアチンキナーゼＭ
Ｂアイソザイム定量用乾式分析素子。 - 【請求項１０】 クレアチンキナーゼＭＢアイソザイム
検出試薬層が少なくとも二層の試薬層からなり、その内
の一の試薬層にクレアチンリン酸が、そして他の試薬層
にアデノシン二リン酸とグリセロールとが含まれている
請求項９に記載のクレアチンキナーゼＭＢアイソザイム
定量用乾式分析素子。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13929197A JPH11197A (ja) | 1997-04-18 | 1997-05-14 | クレアチンキナーゼまたはそのｍｂアイソザイムの定量用乾式分析素子 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11655097 | 1997-04-18 | ||
| JP9-116550 | 1997-04-18 | ||
| JP13929197A JPH11197A (ja) | 1997-04-18 | 1997-05-14 | クレアチンキナーゼまたはそのｍｂアイソザイムの定量用乾式分析素子 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH11197A true JPH11197A (ja) | 1999-01-06 |
Family
ID=26454857
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP13929197A Withdrawn JPH11197A (ja) | 1997-04-18 | 1997-05-14 | クレアチンキナーゼまたはそのｍｂアイソザイムの定量用乾式分析素子 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH11197A (ja) |
-
1997
- 1997-05-14 JP JP13929197A patent/JPH11197A/ja not_active Withdrawn
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A300 | Withdrawal of application because of no request for examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A300 Effective date: 20040803 |