JPH11246597A - 有用タンパク質の安定化方法および有用タンパク質組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】有用タンパク質を安定に保管する。 【解決手段】アラビン酸の基本構造を持つ化合物の水溶
液と有用タンパク質を混合する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は有用タンパク質の安
定化および保存方法ならびに有用タンパク質の生理活性
を安定に保持することが可能な組成物に関する。

【０００２】

【従来の技術】タンパク質、特に酵素、生理活性を持つ
有用タンパク質等は遺伝子組み換え技術などにより安価
に量産できるようになっていることから、さまざまな分
野、特に医薬、診断薬あるいは食品分野などで利用され
るようになっている。一方でタンパク質は分解などによ
りその一次構造にダメージを受けた場合に失活するのは
もちろんのこと、その機能が高次構造によるところも大
きく、タンパク質の種類によって程度の違いはあるが、
さまざまな外的要因（温度、時間的変化、光、ｐＨ）に
より容易に高次構造が崩れ、その機能（生理活性）を失
ってしまうという問題があることから、タンパク質の高
次構造を安定化させ、生理活性を維持させる方法が研究
されている。

【０００３】現在、タンパク質の安定化方法として有用
かつ一般的であるのは、他のタンパク質（ゼラチン、ア
ルブミン、血清、コラーゲンなど）と混合させることで
あり、ゼラチンや血清と混合することで比較的長期間保
存できるようになり、医薬品として製品化された酵素お
よび生理活性タンパク質は多く知られている（特開平２
−２６４７２８号公報、特開平２−４９７３４号公報、
特開昭５４−８０４０６号公報、特開昭５６−６８６０
７号公報）。

【０００４】免疫調節作用、抗ウイルス作用を持つ生理
活性物質であり医薬用途で注目されているインターフェ
ロン（ＩＦＮ）の安定化について挙げるならば、特開昭
６０−２２８４２２号公報、特開昭６０−３４９１９号
公報、特開昭６１−１３７８２８号公報、特開昭６０−
２６０５２３号公報においてアルブミンやゼラチンと混
合することにより安定化する方法が開示されている。ま
た、タンパク質以外の化合物でタンパク質の安定化作用
がある化合物の例としては、糖類、特に単糖類、二糖類
およびデキストランやヒドロキシエチルデンプンのよう
な多糖類と混合させる方法（特開昭５９−１８１２２３
号公報、特公平６−５１６４１号公報、特開昭６１−４
４８２６号公報、特開昭６０−１５５１３６号公報）あ
るいはサイクロデキストリンや多価糖アルコールを安定
化剤とする方法がある（特開昭５８−９２６９１号公
報、特公平３−５００８８２号公報）。

【０００５】また、ラクトビオン酸によって、活性の高
いＩＦＮ−γの二量体を優勢にさせる方法もある（特公
平３−５０１６０４号公報）。

【０００６】アラビアゴムとタンパク質の混合物の報告
としては、アラビアゴム水溶液を薬剤の分散剤として用
いたものが多いが（特開平６−３２１８０３号公報な
ど）、希に抗体産生において抗原とするタンパク質を単
独で投与するよりもアラビアゴムとの混合物として投与
する方が抗体産生量が増加した例（特公昭５８−２３８
４７号公報）や抗ガン剤と著量のアラビアゴムとの併用
により抗ガン活性が増した例（特開平３−１２７７４０
号公報）あるいは薬剤（ポリペプチド）とアラビアゴム
の複合体を合成することで薬剤の特定の細胞への輸送効
率を高めた例（米国特許第５５５４３８６号公報）など
特殊な報告例もある。しかし、アラビアゴムと混合する
ことによる有用タンパク質の安定化方法、または、アラ
ビアゴムと混合することにより安定化された有用タンパ
ク質組成物については知られていない。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】医薬用添加物、特に注
射用医薬品の添加物としてタンパク質を用いる場合、添
加物自身が生体にとって異種のタンパク質であるので添
加量によってはアレルギーを引き起こす可能性があるこ
と、また医薬品に種々な目的で添加可能なタンパク質と
してよく用いられるウシ由来のゼラチンにおいては狂牛
病の原因タンパク質が混入することを確実に避けること
が困難であることなど様々な問題が指摘されている。そ
こで、タンパク質以外で、生体に無毒であり、タンパク
質の安定化作用を持つ化合物が求められており、そのよ
うな例として、糖類、多価アルコールなどが知られてい
るが、水溶液状態で有用蛋白質の活性低下が無い状態で
長期保存することは一般に困難である。凍結乾燥品など
固形状態ではある程度保存可能となっても、溶解時や溶
解後の水溶液では十分な効果を持つ化合物は少ない。

【０００８】また幅広いｐＨで生理活性タンパク質を安
定に保つことは困難であり、さらに安全で効果の高い安
定化剤が望まれている。

【０００９】

【課題を解決するための手段】本発明者らは鋭意検討の
結果、新たにアラビン酸の基本構造を持つ化合物の水溶
液を有用タンパク質と混合することによりタンパク質の
活性を安定に保つことができることを見いだした。さら
に、この混合液を凍結乾燥することによって得られた有
用タンパク質の組成物は高い生理活性を保持しており、
また、この組成物は水溶液状態へ復元した後もその生理
活性を高いレベルで維持できることを見い出し、本発明
に至った。

【００１０】即ち、本発明は、アラビン酸の基本構造を
持つ化合物の水溶液と混合することによる有用タンパク
質の安定化方法、および、アラビン酸の基本構造を持つ
化合物を含む有用タンパク質組成物である。

【００１１】

【発明の実施の形態】本発明の有用タンパク質としては
特に限定されないが、アラビン酸の基本構造を持つ化合
物によって活性を阻害されないタンパク質であればよ
く、酵素や生理活性を持つタンパク質、例えばインター
フェロン、インターロイキン、インシュリン、成長ホル
モン、Ｇ−ＣＳＦ、エリスロポエチン、ＮＧＦなどが例
として挙げられる。有用タンパク質として好ましくは、
サイトカイン類であり、さらに好ましくは、インターフ
ェロン−α、β、γまたはωである。インターフェロン
としては、好ましくは、脊椎動物のインターフェロンで
あり、さらに動物由来のインターフェロンであるイヌイ
ンターフェロン（α、β、γの各タイプ）、ネコインタ
ーフェロンωなどが好ましい。

【００１２】ここで本発明のアラビン酸の構造を示す。

【００１３】

【化１】 本発明においてタンパク質を安定化させるために用いら
れるアラビン酸の基本構造を持つ化合物とは、タンパク
質を失活させるような成分あるいはアラビン酸によるタ
ンパク質の安定化作用を妨げるような成分を副成分とし
て含まないすべてのアラビン酸の基本構造を持つ化合物
であり、アラビン酸がいくつもつながった高分子化合物
（分子量２０〜２５万といわれる）であるアラビアゴム
およびその分解物、修飾物も含まれる。好ましくは、ア
ラビアゴムを使用する。

【００１４】アラビアゴムは高分子化合物であり、か
つ、中性領域の水溶液中でマイナスにチャージしてい
る。発明者らは、特にインターフェロンの活性を安定に
保持できる化合物を探索してきたが、アラビアゴム以外
に安定化作用の高い化合物としてゼラチンがあった。ゼ
ラチンも高分子化合物であり、かつ、中性領域の水溶液
中でマイナスにチャージしている。これらのことから、
特に、インターフェロンに対して安定化作用が高い化合
物は、高分子で、かつ、中性領域の水溶液中でマイナス
にチャージする特徴があることが予想できた。この観点
から、アラビアゴム、ゼラチン以外の安定化作用を持つ
と予想される化合物として、カルボキシメチルセルロー
ス、コンドロイチン硫酸などがある。この２つの化合物
についても、インターフェロンの安定化作用を検討した
ところ、予想通り安定化作用を有することを見出した。
その安定化作用はアラビアゴムに比較して低いものでは
あったが、アラビアゴムとの組み合わせでさらに安定性
が改善されることは容易に想定できる。

【００１５】アラビン酸の基本構造を持つ化合物の水溶
液の濃度はいかなる濃度でも良いが、濃度が低すぎると
安定化効果が少なく、高濃度であればコストがかかり、
またアラビアゴムの場合は粘性が増して扱いにくいこと
から、０．０１〜１０．０重量％の濃度が好ましく、さ
らに好ましくは０．５〜２．０重量％である。

【００１６】有用タンパク質は凍結、融解、加熱などに
よる温度変化、抽出、精製、緩衝液への溶解におけるｐ
Ｈ変化などの外的要因により、その生理活性を失いやす
いが、これらの不活性化を誘引する操作に先立ち、アラ
ビン酸の基本構造を持つ化合物の水溶液と混合しておく
ことで、その生理活性は有意に保たれる。

【００１７】また一般的に、タンパク質の精製操作で
は、精製段階が進み目的とするタンパク質の純度が高く
なるとそのタンパク質が失活し易くなることが知られて
いる。すなわち、精製操作もまた不活性化を誘引する操
作の１つであるが、精製前の段階あるいは途中でアラビ
ン酸の基本構造を持つ化合物と混合しておくことで、精
製によるタンパク質の失活を防止することができる。

【００１８】有用タンパク質の水溶液中での経時的失
活、すなわち保存時の失活についてもアラビン酸の基本
構造を持つ化合物の水溶液と混合することで防ぐことが
可能である。アラビン酸の基本構造を持つ化合物を含む
有用タンパク質組成物は液体状態で保存する際には有用
タンパク質の熱安定性にもよるが１５℃以下が好ましい
が、その混合物が凍結しない温度ならば低温であるほど
良く、さらに好ましくは４〜１０℃である。

【００１９】保存が長期に及ぶ場合には該組成物を凍結
もしくは凍結乾燥して保存することが好ましい。凍結保
存する場合には融解しない程度の低温であれば何度でも
良く、融解した後においては液体状態で保存する場合と
同様である。

【００２０】凍結乾燥する場合には、水分含量が少ない
ほど保存性が増すため、好ましくは水分５重量％以下ま
で乾燥させる方が良い。このように凍結乾燥処理した該
組成物は冷暗所に保存することが好ましく、室温保存な
らば一年、冷蔵保存であればそれ以上の期間安定に保存
することが可能である。また、５０℃という苛酷な条件
下においても２ヶ月以上の保存性が望める。なお、凍結
乾燥品は水、場合によっては生理的食塩水などの溶液で
再溶解して使用することになるが、再溶解後の保存に関
しては液体状態での保存方法と同様である。

【００２１】アラビン酸を基本構造とする化合物の水溶
液と有用タンパク質の混合物の好ましいｐＨは有用タン
パク質自身のｐＨ安定性による。しかしながら、有用タ
ンパク質とアラビン酸を基本構造とする化合物とを混合
することによって有用タンパク質のｐＨ安定性の範囲が
広くなる。例えば、本発明において用いたＩＦＮ−γは
水溶液の場合ｐＨ６〜８に保持しないと著しく失活する
事が知られているが、アラビアゴムの水溶液と混合し冷
蔵保存した場合、ｐＨ６〜７の範囲で１００％、ｐＨ
４．５〜８．０の範囲で７０％以上の高い活性を保持で
きる。また、凍結乾燥処理をした場合はｐＨ４．５〜
８．０の範囲で１００％近い活性を保持する。アラビア
ゴムと有用タンパク質の混合物はそのタンパク質の持つ
機能に基づき、さまざまな用途に用いられ得る。有用タ
ンパク質が医薬用途として有用でありかつ医薬用途とし
て問題のないグレードであるならば、アラビアゴムを日
本薬局方収載または医薬品添加グレードにすることで、
その混合物を医薬用途に用いることができる。

【００２２】また、医薬用途以外に各種の測定や診断の
目的で使用されている酵素類についても、本発明によっ
て開示される安定化方法、保存方法、組成物を利用する
ことによって、その安定性が向上し、長期間の使用が可
能になることが期待できる。

【００２３】アラビン酸を基本構造とする化合物を含む
有用タンパク質組成物はこれらの成分以外に、タンパク
質の活性を阻害しないあらゆる化合物を含むことができ
る。例えば、ポリエチレングリコールをはじめとするポ
リオール類、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、Ｔｗｅ
ｅｎ２０のような界面活性剤、ソルビトールのような糖
類、グリシンのようなアミノ酸類あるいはゼラチンのよ
うなタンパク質を添加してもよい。好ましくは、界面活
性剤を添加する。界面活性剤としては、界面活性剤がポ
リオキシエチレン硬化ひまし油、およびポリオキシエチ
レンソルビタン脂肪酸エステルから選ばれる少なくとも
１種であることが好ましい。

【００２４】また、食塩を添加しても問題ないことか
ら、例えば該組成物を注射用医薬品として用いる場合に
は食塩で浸透圧を調整することができる。特に、低濃度
の有用蛋白質を水溶液中で安定に保存するためには、ア
ラビン酸を基本構造とする化合物に加えて、さらに界面
活性剤を添加することが有用である。

【００２５】本発明において有用タンパク質の製造方法
に限定はなく、例えば有機合成法、組換えＤＮＡ技術を
用いて製造されたタンパク質あるいは天然物からの抽出
・精製により製造されたタンパク質など、あらゆる手法
でつくられたタンパク質に適用できる。有用タンパク質
としてイヌインターフェロン−γやネコインターフェロ
ンωなどの安定化をする場合には、大腸菌またはカイコ
により生産されたものに好ましく適用できる。

【００２６】また、本発明の有用蛋白の安定化方法、お
よび、有用蛋白質組成物は、有用蛋白質水溶液を凍結乾
燥して製剤とした後、再度、水によって再溶解するよう
な用途、例えば、注射用医薬品、診断薬などの製造にお
いて有用である。

【００２７】

【実施例】以下、実施例をもって本発明を具体的に説明
する。実施例において使用したアラビアゴムは三栄薬品
貿易、局方グレードを用いた。 参考例 ＜カイコによるイヌインターフェロン−γの作成＞特願
平９−２０８０８７号に開示した遺伝子組換えバキュロ
ウイルスｒＢＮＶγのウイルス液を５令２日のカイコ幼
虫に接種し、２５℃で４日間、市販の人工飼料（カネボ
ウシルクエレガンス社製）を与えて飼育した。５０頭の
カイコ腹部を切り、０．０１％の塩化ベンザルコニウム
を含む５００ｍｌの５０ｍＭ酢酸バッファー（ｐＨ３．
５）に浸漬し、４℃で２０時間保持した。得られたカイ
コ体液抽出液を２ＮＮａＯＨで中和した後に、５０００
ｒｐｍで１５分間遠心分離し上清を回収した。得られた
上清をホロファイバー型の限外濾過膜装置（Ａｍｉｃｏ
ｎ社製、分子量分画サイズ１０万、ＨＩＰ４０−１０
０）を用いて限外濾過を行なった。この透過液をスルホ
プロピルセファロース（ハイパフォーマンスタイプ）に
かけ、２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）で洗浄後、
塩化ナトリウムの直線的な濃度勾配により吸着物を溶出
し、抗ウイルス画分を集めて、イヌＩＦＮ−γを回収
し、２０ｍＭリン酸ナトリウムバッファー（ｐＨ７．
０）中で一晩透析を行い、これをイヌＩＦＮ−γサンプ
ルとして安定化剤の検討に用いた。 ＜大腸菌によるイヌインターフェロン−γの作成＞イヌ
ＩＦＮ−γをコードする遺伝子を組み込んだベクター
（ｐＥＴ）を導入した大腸菌（ＢＬ２１株）をＬＢ液体
培地に植菌し、対数増殖期でＩＰＴＧを終濃度１ｍＭと
なるように添加し、２時間後に集菌した。得られた菌体
を培養時の５０分の１容量の２０ｍＭリン酸ナトリウム
バッファー（ｐＨ７．０）に懸濁し、超音波により菌体
を破砕したのち１４０００ｒｐｍで遠心処理し、得られ
た上清を０．４５μｍの滅菌フィルターでろ過し、ＩＦ
Ｎ−γ抽出液とした。

【００２８】この抽出液をスルホプロピルセファロース
カラム（ハイパフォーマンスタイプ）にて精製した。具
体的には、抽出液をカラムにアプライした後、２０ｍＭ
リン酸ナトリウムバッファー（ｐＨ７．０）で洗浄、さ
らに０．４ＭＮａＣｌを含む２０ｍＭリン酸ナトリウム
バッファー（ｐＨ７．０）にて洗浄した後、０．５Ｍ、
０．６Ｍ、０．７Ｍ、０．８Ｍ、０．９Ｍそして１．０
ＭのＮａＣｌを含むリン酸ナトリウムバッファーにて段
階的に溶出した。得られた溶出画分についてＳＤＳ−Ｐ
ＡＧＥを行い、ＩＦＮ−γが含まれる画分についてさら
にブルーセファロース（ファストフロータイプ）による
精製を行った。具体的にはＩＦＮ−γを含む画分を集め
てカラムにアプライした後、０．５Ｍ ＮａＣｌを含む
リン酸ナトリウムバッファー（ｐＨ７．０）にて洗浄、
続いて１．０Ｍ ＮａＣｌを含むリン酸ナトリウムバッ
ファー（ｐＨ７．０）にて洗浄した後、１．５Ｍ、２．
０Ｍそして２．５ＭＮａＣｌを含むリン酸ナトリウムバ
ッファーにて段階的に溶出し、イヌＩＦＮ−γ画分とし
て得られる２．０Ｍ溶出画分を２０ｍＭリン酸ナトリウ
ムバッファー（ｐＨ７．０）中で一晩透析を行なった。
透析後、この画分をイヌＩＦＮ−γサンプルとして、安
定化剤の検討に供した。 ＜抗ウイルス活性測定法＞イヌインターフェロン−γの
活性は抗ウイルス活性として、プロバーら（Prober et
al）, サイエンス（Science） 238,3 36-341(1987)の文
献に従いＣＰＥ法により測定した。測定用ウイルスとし
てベシキュラー ストマチクス ビールス（Vesicular
Stomatitis Virus）を用い、感受性細胞としてはイヌＭ
ＤＣＫ（ＡＴＣＣ ＣＣＬ−３４）を細胞を用いた。す
なわち、９６穴マイクロプレート上にコンフルーエント
となるまで３７℃で培養されたイヌＭＤＣＫ細胞にイヌ
ＩＦＮ−γを含むサンプルの希釈液を加え、さらに３７
℃で２０〜２４時間培養し、抗ウイルス活性を誘導させ
た。さらにＶＳＶを加え３７℃で１６〜２０時間培養し
た後、生存してマイクロプレート上に付着しているイヌ
ＭＤＣＫ細胞を２０％ホルマリンを含むクリスタルバイ
オレット染色液で染色した。マイクロプレート上のクリ
スタルバイオレットの量を５７０ｎｍにおける吸光度を
測定することによって、細胞を５０％生存させる時のイ
ヌＩＦＮ−γ量を抗ウイルス活性１ユニット（１Ｕ）と
定義した。

【００２９】なお、本法によって得られる抗ウイルス活
性のデータの標準偏差は３２％である。

【００３０】比較例１ 組換えウイルスを接種したカイコより抽出精製したイヌ
ＩＦＮ−γサンプル（２０ｍＭリン酸ナトリウムバッフ
ァー ｐＨ７．０に溶解させたもの）を他の添加物を加
えず冷蔵保管処理、凍結保管処理および安定化剤を加え
ず凍結乾燥処理した際の活性の変化を調べた。活性の残
存率は処理前のサンプルの活性を１００％として表し
た。結果を表１に示す。

【００３１】なお、凍結乾燥品は滅菌蒸留水で再溶解
し、抗ウイルス活性の測定に供した。

【００３２】

【表１】 実施例１ 組換えウイルスを接種したカイコより抽出精製したイヌ
ＩＦＮ−γサンプル（２０ｍＭリン酸ナトリウムバッフ
ァー ｐＨ７．０に溶解させたもの）を１．２４×１０
⁵Ｕを各種濃度のアラビアゴム水溶液（５．０、７．
５、１０．０、１２．５、１５．０、２０．０ｍｇ／ｍ
ｌ）１ｍｌとガラスバイアル中で混合し、凍結乾燥した
後の残存活性と活性の残存率（１．２４×１０⁵Ｕを１
００％とする）を表２に示す。

【００３３】

【表２】 実施例２ 組換えウイルスを接種したカイコより抽出精製したイヌ
ＩＦＮ−γサンプル（２０ｍＭリン酸ナトリウムバッフ
ァー ｐＨ７．０に溶解させたもの）を１．２４×１０
⁵Ｕと各種ｐＨを示す１０ｍｇ/ｍｌ濃度のアラビアゴム
水溶液１ｍｌとを混合し、凍結乾燥処理を行ったのち、
残存活性および活性の残存率（１．２４×１０⁵Ｕを１
００％とする）を調べた。その結果を表３に示す。な
お、アラビアゴム水溶液のｐＨに関しては酸としてＨＣ
ｌ、アルカリとしてＮａＯＨの適当量をアラビアゴム水
溶液に添加したのち、これらのｐＨを測定し、その実測
値を表に示している。なお、このときの凍結乾燥サンプ
ルの水分含量は約１．８％（３回測定中の平均値）であ
り、凍結乾燥サンプル中のアラビアゴムの含量（重量
％）は約９８．２％である。

【００３４】

【表３】 実施例３ 組換え大腸菌より抽出精製したイヌＩＦＮ−γサンプル
（２０ｍＭリン酸ナトリウムバッファー ｐＨ７．０に
溶解させたもの）を１．２０×１０⁵ ＵとＨＣｌおよび
ＮａＯＨを用いて各種ｐＨに調整した１０ｍｇ/ｍｌ濃
度のアラビアゴム水溶液１ｍｌとを混合し、４℃で６日
間保存した後の残存活性および残存率（１．２０×１０
⁵Ｕを１００％とした）を表４に示す。

【００３５】

【表４】 実施例４ 組換え大腸菌より抽出精製したイヌＩＦＮ−γサンプル
（２０ｍＭリン酸ナトリウムバッファー ｐＨ７．０に
溶解させたもの）を４．０×１０⁵Ｕと各種ｐＨを示す
１０ｍｇ/ｍｌ濃度のアラビアゴム水溶液１ｍｌとを混
合し、凍結乾燥処理を行った後の残存活性をおよび残存
率（４．０×１０⁵Ｕを１００％とした）を表５に示
す。なお、このときの凍結乾燥サンプルの水分含量は約
１．７％（３回測定中の平均値）であり、凍結乾燥サン
プル中のアラビアゴムの含量（重量％）は約９８．３％
である。

【００３６】

【表５】 実施例５ 組換えウイルスを接種したカイコより抽出精製したイヌ
ＩＦＮ−γサンプル（２０ｍＭリン酸ナトリウムバッフ
ァー ｐＨ７．０に溶解させたもの）を１．２４×１０
⁵Ｕと１０ｍｇ/ｍｌアラビアゴムおよび０〜０．１％の
各種濃度でレオドール（日本油脂、Ｔｗｅｅｎ２０）を
含む水溶液１ｍｌとを混合し、凍結乾燥処理を行ったの
ち、残存活性および活性の残存率（１．２４×１０⁵Ｕ
を１００％とする）を調べた。なお、このときの凍結乾
燥サンプルの水分含量は約１．７％（３回測定中の平均
値）であり、表中に各々の凍結乾燥サンプルのアラビア
ゴム含量（重量％）を示す。

【００３７】

【表６】 実施例６ 組換えウイルスを接種したカイコより抽出精製したイヌ
ＩＦＮ−γサンプル（２０ｍＭリン酸ナトリウムバッフ
ァー ｐＨ７．０に溶解させたもの）を１．２４×１０
⁵Ｕと１０ｍｇ/ｍｌアラビアゴムおよび０〜１０．０ｍ
ｇ／ｍｌの各種濃度のマクロゴール４０００（日本油
脂、ポリエチレングリコール）を含む水溶液１ｍｌとを
混合し、凍結乾燥処理を行ったのち、残存活性および活
性の残存率（１．２４×１０⁵Ｕを１００％とする）を
調べた。なお、このときの凍結乾燥サンプルの水分含量
は約１．７％（３回測定中の平均値）であり、表中に各
々の凍結乾燥サンプルのアラビアゴム含量（重量％）を
示す。

【００３８】

【表７】 実施例７ 組換え大腸菌より抽出精製したイヌＩＦＮ−γサンプル
（２０ｍＭリン酸ナトリウムバッファー ｐＨ７．０に
溶解させたもの）を１．０×１０⁵Ｕと０〜２．０ｍｇ/
ｍｌの各種濃度のアラビアゴムおよび５．０ｍｇ／ｍｌ
のマクロゴール４０００（日本油脂、ポリエチレングリ
コール）を含む水溶液１ｍｌとを混合し、凍結乾燥処理
を行ったのち、残存活性および活性の残存率（１．０×
１０⁵Ｕを１００％とする）を調べた。なお、このとき
の凍結乾燥サンプルの水分含量は約１．５％（３回測定
中の平均値）であり、表中に各々の凍結乾燥サンプルの
アラビアゴム含量（重量％）を示す。

【００３９】

【表８】 実施例８ 組換え大腸菌より抽出精製したイヌＩＦＮ−γサンプル
（２０ｍＭリン酸ナトリウムバッファー ｐＨ７．０に
溶解させたもの）と各種ｐＨに調整した１０ｍｇ/ｍｌ
アラビアゴム、５ｍｇ／ｍｌマクロゴール４０００（日
本油脂、ポリエチレングリコール）、２０ｍＭグリシン
からなる水溶液と混合し、凍結乾燥処理を行った後の残
存活性を調べた。表９に仕込みのイヌＩＦＮ−γ活性を
１００％としたときの活性残存率を示す。なお、同じ試
験を２回行い、それぞれ試験No.１、試験No.2として結
果に示した。また、このときの凍結乾燥サンプルの水分
含量は約１．７％（３回測定中の平均値）であり、凍結
乾燥サンプル中のアラビアゴムの含量（重量％）は約５
８．９％である。

【００４０】

【表９】 実施例９ 組換えウイルスを接種したカイコより抽出精製したイヌ
ＩＦＮ−γサンプル（２０ｍＭリン酸ナトリウムバッフ
ァーｐＨ７．０に溶解させたもの）１mlを、１l の２０
mＭ酢酸ナトリウムバッファー（ｐＨ５.５）に対して、
４℃、１６時間透析した。ｐＨ５.５に調整した２０ｍ
ｇ／ｍｌアラビアゴム溶液、１％ポリオキシエチレン硬
化ひまし油（ＨＣＯ６０、日本油脂）溶液を用いて調製
した表１０に示す組成のイヌＩＦＮ-γ溶液１ｍｌ（抗
ウイルス活性：４×１０⁴Ｕ／ｍｌ）を注射用ガラスバ
イアルに分注した。また、比較例として、２０ｍｇ／ｍ
ｌカルボキシメチルセルロース溶液、２０ｍｇ／ｍｌコ
ンドロイチン硫酸溶液を用いて同様にイヌＩＦＮ-γ溶
液を調製し、同じく注射用ガラスバイアルに分注した。
これら、イヌＩＦＮ-γ溶液を、４℃で２週間保存した
後のイヌＩＦＮ−γ活性を測定した結果を表１０に示
す。

【００４１】

【表１０】 この表から、カルボキシメチルセルロース、コンドロイ
チン硫酸に比較して、アラビアゴムが有意に安定化作用
が高いことが分かる。また、アラビアゴムに界面活性剤
ポリオキシエチレンヒマシ硬化油ＨＣＯ６０を添加する
ことで、さらにイヌＩＦＮ−γの活性が高く保持される
ことが分かる。

【００４２】

【発明の効果】アラビン酸の基本骨格を持つ化合物を混
合することにより、インターフェロンなどの有用タンパ
ク質を失活することなく、安定に保存することができ
る。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｐ 21/02 Ａ６１Ｋ 37/66 Ｈ //(Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:91） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:19）

Claims (16)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】アラビン酸の基本構造を持つ化合物の水溶
   液と混合することによる有用タンパク質の安定化方法。
2. 【請求項２】アラビン酸の基本構造を持つ化合物を０．
   ０１〜１０．０重量％の濃度で混合することを特徴とす
   る請求項１記載の有用タンパク質の安定化方法。
3. 【請求項３】アラビン酸の基本構造を持つ化合物と界面
   活性剤が共存する水溶液と混合することを特徴とする請
   求項１または２記載の有用タンパク質の安定化方法。
4. 【請求項４】アラビン酸の基本構造を持つ化合物の水溶
   液と混合した有用タンパク質を凍結乾燥することを特徴
   とする請求項１から３のいずれか１項記載の有用タンパ
   ク質の安定化方法。
5. 【請求項５】アラビン酸の基本構造を持つ化合物の水溶
   液と混合した有用タンパク質を凍結乾燥した後、水溶液
   状態に復元することを特徴とする請求項４記載の有用蛋
   白質の安定化方法。
6. 【請求項６】有用タンパク質がサイトカイン類であるこ
   とを特徴とする請求項１〜５のいずれか１項記載の有用
   タンパク質の安定化方法。
7. 【請求項７】アラビン酸の基本構造を持つ化合物を含む
   有用タンパク質組成物。
8. 【請求項８】アラビン酸の基本構造を持つ化合物と界面
   活性剤を含む有用タンパク質組成物。
9. 【請求項９】０．０１〜１０．０重量％の濃度でアラビ
   ン酸の基本構造を持つ化合物を含む水溶液であることを
   特徴とする請求項７または８記載の有用タンパク質組成
   物。
10. 【請求項１０】凍結乾燥処理されたことを特徴とする請
    求項７から９のいずれか１項記載の有用タンパク質組成
    物。
11. 【請求項１１】凍結乾燥後の水分含量が５重量％以下で
    あることを特徴とする請求項１０記載の有用タンパク質
    組成物。
12. 【請求項１２】凍結乾燥後水溶液に復元されることを特
    徴とする請求項１０記載の有用タンパク質組成物。
13. 【請求項１３】アラビン酸の基本構造を持つ化合物を
    ５．０〜９９．９％含むことを特徴とする請求項１０ま
    たは１１記載の有用タンパク質組成物。
14. 【請求項１４】有用タンパク質がサイトカイン類である
    ことを特徴とする請求項７から１３のいずれか１項記載
    の有用タンパク質組成物。
15. 【請求項１５】ポリエチレングリコール、グリシン、食
    塩および界面活性剤の少なくとも１種をさらに含有する
    請求項７から１４のいずれか１項記載の有用タンパク質
    組成物。
16. 【請求項１６】請求項７から１５のいずれか１項に記載
    の有用タンパク質組成物を含む注射用医薬品組成物。