JPH1129565A

JPH1129565A - オーラプテンの精製方法

Info

Publication number: JPH1129565A
Application number: JP18693897A
Authority: JP
Inventors: Yasuo Takahashi; 保男高橋; Wataru Kuki; 渉九鬼; Hiroshi Yonei; 博米井
Original assignee: NEW FOOD KURIEESHIYON GIJUTSU KENKYU KUMIAI
Current assignee: NEW FOOD KURIEESHIYON GIJUTSU KENKYU KUMIAI
Priority date: 1997-07-11
Filing date: 1997-07-11
Publication date: 1999-02-02

Abstract

(57)【要約】【課題】オーラプテン含有液を吸着した吸着剤を、異
なるアルコール濃度のアルコールにより洗浄および溶出
することによって、オーラプテンを効率よく精製する方
法を提供すること。【解決手段】以下の工程を包含する、オーラプテンを
精製する方法： (a) オーラプテン含有液を吸着剤に吸着させる工程； (b) 該吸着剤を、５０％未満のアルコール濃度のアルコ
ール水溶液を用いて洗浄する工程；および (c) 該吸着剤を、５０％以上９５％以下のアルコール濃
度のアルコール水溶液を用いて、オーラプテンを溶出す
る工程。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、オーラプテンの精
製方法に関し、より詳細には、オーラプテン含有液を吸
着した吸着剤を異なるアルコール濃度のアルコール水溶
液により洗浄および溶出することによって、オーラプテ
ンを精製する方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】従来から、以下の化学式で表されるオー
ラプテンは、ミカン科の果皮に含まれていることが知ら
れており、近年、エプスタインバーウイルス早期抗原誘
導抑制剤としての用途が見出され（本出願人による特願
平７−３２００１３号を参照）、注目されはじめている
物質である：

【化１】。

【０００３】オーラプテンを含有する液体（例えば、カ
ンキツ類から得られる精油）から、オーラプテンを精製
する従来の方法としては、オーラプテンを含有する液体
を、シリカゲル担体（例えば、和光純薬社製、商品名ワ
コーゲルＣ−２００）を充填したカラムに注入し、次い
でｎ−ヘキサンと酢酸エチルとの展開剤をカラムに流
し、その濃度勾配を利用してオーラプテンを溶出する方
法が挙げられる。

【０００４】しかし、この方法で得られたオーラプテン
溶出液には不純物が多く含まれているので、溶出された
オーラプテンをクロロホルムおよびアルコールを用いて
繰り返し再結晶することが必要である。従って、この従
来の方法は、極めて煩雑な方法であった。

【０００５】また、オーラプテンを含有する液体として
カンキツ類から得られる精油（以下、単に「カンキツ精
油」という）が用いられた場合には、カンキツ精油に含
有されるエポキシオーラプテン、カロテノイドなどが、
オーラプテンと共に溶出し、得られたオーラプテンに不
純物として存在し得る。カロテノイドは有色物質である
ので、得られたオーラプテン中に不純物として存在する
カロテノイドは、得られたオーラプテンを着色するとい
う不都合がある。従って、エポキシオーラプテン、カロ
テノイドなどをオーラプテンから除去するためには、さ
らに再結晶を繰り返すことが必要になるので、オーラプ
テンを精製するためにはさらに煩雑な工程を必要とし
た。

【０００６】さらに、上記の方法においては、ｎ−ヘキ
サン、酢酸エチル、クロロホルムなどのような、人体に
悪影響をもたらし得る溶媒を使用するので、得られたオ
ーラプテンを食品添加物として用いることは極めて不適
切である。また多くの場合、上記の方法には、多量の溶
媒を必要とするので、費用がかかる。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、オーラ
プテン含有液（例えば、カンキツ精油）を吸着した吸着
剤に対して、所定のアルコール濃度未満のアルコール水
溶液を流した場合には、多くのオーラプテンが吸着剤か
ら溶出されずに多くの不純物が除去される一方、所定の
アルコール濃度範囲のアルコール水溶液を流した場合に
は、多くのオーラプテンが吸着剤から極めて容易に溶出
されるという知見を得、本発明を完成した。すなわち、
本発明は、上記従来の課題を解決するためになされたも
のであり、その目的とするところは、オーラプテン含有
液を吸着した吸着剤を、異なるアルコール濃度のアルコ
ール水溶液により洗浄および溶出することによって、オ
ーラプテンを精製する方法を提供することにある。

【０００８】

【課題を解決するための手段】上記課題を達成するため
に、本発明にかかる精製方法は、以下の工程を包含する
構成とした： (a) オーラプテン含有液を吸着剤に吸着させる工程； (b) 該吸着剤を、５０％未満のアルコール濃度のアルコ
ール水溶液を用いて洗浄する工程；および (c) 該吸着剤を、５０％以上９５％以下のアルコール濃
度のアルコール水溶液を用いて、オーラプテンを溶出す
る工程。

【０００９】本明細書において用いられる用語「オーラ
プテン含有液」とは、オーラプテンを含有する液体を指
す。このような液体としては、例えば、ミカン果実を搾
汁する際に飛散する精油を水で回収し、遠心分離するこ
とにより得られるカンキツ精油などが挙げられる。な
お、本明細書において用いられる化合物「オーラプテ
ン」とは、以下の式で表される化合物を指す：

【化２】。

【００１０】なお、本明細書において用いられる化合物
「オーラプテン」は、通常「メランジン」と呼ばれ、以
下の式で表される化合物とは異なる化合物である：

【化３】。

【００１１】吸着剤としては特に限定されないが、オー
ラプテン含有液が吸着する量（以下、単に「吸着量」と
いう）を多くするという観点から、電気的に中性である
ことおよび比表面積が大きい多孔性吸着剤であることが
好ましい。このような吸着剤としては、例えば、スチレ
ンとジビニルベンゼンとの共重合体を含む樹脂が挙げら
れる。樹脂の用い方としては、湿潤状態（市販時の状
態）の樹脂をそのまま用いることができる他、この湿潤
状態の樹脂を乾燥させ、乾燥状態でも用いることができ
る。吸着量を多くして効率よくオーラプテンを精製する
という観点から、樹脂を乾燥状態で用いることが好まし
い。なお、市販の樹脂を用いる場合は、乾燥した状態で
用いるために、市販の湿潤樹脂を熱風（４０℃以下が好
ましい）で予め乾燥させることが好ましい。

【００１２】本明細書において用いられる「％」は体積
比を示し、例えば、「５０％アルコール濃度のアルコー
ル水溶液」は、同一体積のアルコールと水とを混合して
調製される。

【００１３】工程(b)において用いられるアルコール水
溶液のアルコール濃度は、５０％未満であり、好ましく
は１０％以上４５％以下、さらに好ましくは３５％以上
４５％以下である。このアルコール水溶液のアルコール
濃度が５０％以上である場合には、吸着剤に吸着された
不純物と共に多くのオーラプテンが溶出されてしまうの
で不適切である。

【００１４】工程(c)において用いられるアルコール水
溶液のアルコール濃度は、５０％以上９５％以下であ
り、好ましくは６０％以上９０％以下で、さらに好まし
くは７５％以上８５％以下である。このアルコール水溶
液のアルコール濃度が５０％未満である場合には、吸着
剤に吸着したオーラプテンがアルコール水溶液に溶出し
にくいので、不適切である。また、本工程(c)におい
て、９５％を超えるアルコール濃度のアルコール水溶液
を用いた場合には、オーラプテンをより多く溶出できる
一方、工程(b)による洗浄後に吸着剤に残存する不純物
（例えば、カロテノイド）もより多く溶出されるので、
不適切である。

【００１５】上記の工程(b)および工程(c)において用い
られるアルコール水溶液の量は特に限定されないが、オ
ーラプテンの回収率および経済性を考慮すると、工程
(a)において吸着剤に吸着されたオーラプテン含有液の
量の約１４倍であることが好ましい。

【００１６】本発明において用いられるアルコールとし
ては、本発明の方法により精製されたオーラプテンを食
品添加物に用いる場合にはエタノールが好ましく、医薬
品に用いる場合にはイソプロピルアルコールが好まし
い。

【００１７】

【発明の実施の形態】１つの実施態様において、本発明
に係る方法は、以下の工程を包含するオーラプテンを精
製する方法である： (a) オーラプテン含有液を、スチレン−ジビニルベンゼ
ン共重合体からなる乾燥樹脂に吸着させる工程； (b) 上記の樹脂を、上記の樹脂に吸着されたオーラプテ
ン含有液の１４倍量（体積比）の３５％以上４５％以下
のエタノール濃度のエタノール水溶液を用いて洗浄する
工程；および (c) 上記の樹脂を、上記の樹脂に吸着されたオーラプテ
ン含有液の１４倍量（体積比）の７５％以上８５％以下
のエタノール濃度のエタノール水溶液を用いて、オーラ
プテンを溶出する工程。

【００１８】本発明に係るオーラプテンを精製する方法
は、上記の工程を包含するため、以下のような効果を有
する。

【００１９】工程(b)において用いられるエタノール水
溶液のエタノール濃度は５０％未満（好ましくは１０％
以上４５％以下、さらに好ましくは３５％以上４５％以
下）であるので、オーラプテン含有液に含まれる共存物
質エポキシオーラプテンが、スチレン−ジビニルベンゼ
ン共重合体からなる樹脂から溶出しやすいが、オーラプ
テンは樹脂からほとんど溶出せず、樹脂に残存する。さ
らに、オーラプテン含有液に含まれ、樹脂に吸着した多
くの不純物もまた、樹脂から効率的に除去される。

【００２０】工程(c)において用いられるエタノール水
溶液のエタノール濃度は５０％以上９５％以下（好まし
くは６０％以上９０％以下、さらに好ましくは７５％以
上８５％以下）であるので、上記工程(b)によって洗浄
された樹脂から、多くのオーラプテンを効率よく溶出す
ることができると共に、有色物質であるカロテノイドが
溶出されにくく、樹脂に残存する。

【００２１】工程(b)および工程(c)において用いられる
エタノール水溶液の量は、工程(a)において樹脂に吸着
されたオーラプテン含有液の量の約１４倍（体積比）で
あるので、極めて効率的かつ経済的にオーラプテンを精
製することができる。これらのことは、以下の実施例１
においてさらに詳細に説明される。なお、工程(a)にお
いて樹脂に吸着されたオーラプテン含有液の量の約１４
０倍（体積比）の量のエタノール水溶液を用いた場合に
は、オーラプテンの収率は良くなるが、上記の場合と比
較して経済的効率が悪くなる傾向がある。

【００２２】工程(b)および工程(c)において用いられる
アルコールはエタノールであるので、ｎ−ヘキサン、酢
酸エチル、クロロホルムなどのような人体に悪影響をも
たらし得る溶媒を使用する従来の精製方法と比較して、
本発明により得られたオーラプテンは極めて安全に食品
添加物として用いられ得る。

【００２３】工程(a)において用いられる樹脂はスチレ
ン−ジビニルベンゼン共重合体からなる樹脂であるの
で、他の樹脂と比較して効率的にオーラプテンを吸着す
ることができる。このことは、以下の参考例においてさ
らに詳細に説明される。

【００２４】また、本実施態様において得られたオーラ
プテンは、ほぼ白色の無味無臭の粉末形態であるので、
食品添加剤などとして用いられ得、さらにその量を任意
に増減することも可能になる。

【００２５】

【実施例】本発明を以下の実施例を用いてさらに詳細に
説明するが、以下の実施例は例示の目的にのみ用いら
れ、限定の目的で用いられてはならない。

【００２６】カンキツ精油を−１５℃以下で約１週間に
わたって冷蔵保存し、オーラプテンを含有する沈殿物を
得た。この沈殿物を常温に静置すると自発的に溶解する
ので、以下の実施例および参考例では、沈殿物を常温に
静置することによって自発的に溶解した精油沈殿溶解液
として用いた。

【００２７】（実施例１）精油沈殿溶解液（約１５０
ｇ、約１７６ｍｌ）をＨＰ２１樹脂（三菱化成株式会社
製、乾燥樹脂）１００ｇに、常温で３０分かけて吸着さ
せ、次いで以下の表１および表２に示すエタノール濃度
のエタノール水溶液を用いてＨＰ２１樹脂からオーラプ
テン、エポキシオーラプテン、カロテノイドなどを溶出
した。なお、乾燥樹脂１００ｇに対して、精油沈殿溶解
液は約１５０ｇ吸着する。

【００２８】次いで、これらの各溶出液を以下のＨＰＬ
Ｃ（高速液体クロマトグラフィー）を用いて各成分につ
いて定量した。また、カロテノイドについては、分光光
度計（株式会社日本分光製、波長４５１ｎｍ、標品：β
−カロテン）を用いて比較および定量した。定量した結
果を以下の表１および表２に示し、本実施例で用いたＨ
ＰＬＣの測定条件を以下に示す：カラムとして東ソー株式会社製、ＴＳＫゲル−１２０
Ｔ、５μ（カラム寸法：４．６ｍｍφ×２５０ｍｍ）；移動相：エタノール／水＝１９／１；流速：０．３ｍｌ／ｍｉｎ；および検出器：ＵＶ−ＶＩＳ検出器（検出波長＝３２０ｎ
ｍ）。

【００２９】

【表１】

【００３０】

【表２】上記のＨＰＬＣおよび分光光度計を用いて上記のＨＰ２
１樹脂１００ｇに吸着した各成分の量を定量した。その
結果、上記のＨＰ２１樹脂１００ｇに吸着したオーラプ
テンの量は２８ｇ、エポキシオーラプテンの量は８ｇ、
およびカロテノイドの量は２０ｍｇであった。

【００３１】上記の表１および表２より、エタノール水
溶液のエタノール濃度が４０％であれば、樹脂からのオ
ーラプテンの溶出量が少なく、樹脂からのエポキシオー
ラプテンの溶出量を多くすることができ、一方、エタノ
ール水溶液のエタノール濃度が６０％以上であれば、樹
脂からのオーラプテンの溶出量を多くすることができる
ことが理解される。なお、エタノール水溶液のエタノー
ル濃度が約１００％である場合には、樹脂から溶出され
るカロテノイドの量が、他のエタノール濃度のエタノー
ル水溶液を用いた場合と比較して、著しく増加すること
が理解される。

【００３２】従って、上記表１および表２より、精油沈
殿溶解物などのオーラプテン含有液を吸着剤に吸着させ
た後に、５０％未満のアルコール濃度のアルコール水溶
液で洗浄し、次いでこの洗浄した吸着剤から５０％以上
９５％以下のアルコール濃度のアルコール水溶液を用い
て、オーラプテンを溶出することにより、オーラプテン
を精製できることが理解される。

【００３３】樹脂からのカロテノイドの溶出量を多くす
ることなく、樹脂からのオーラプテンの溶出量を多くす
るためには、エタノール水溶液のエタノール濃度を８０
％にすることが適切であることも理解される。

【００３４】また、精油沈殿溶解液に対するアルコール
水溶液の量については、上記の表１より、オーラプテン
の回収率を考慮すれば、樹脂に吸着された精油沈殿溶解
液の１４０倍の量のアルコール水溶液を用いることが好
ましい。しかし、多くのアルコール水溶液を用いなけれ
ばならない点、および溶出後の濃縮および乾燥を考慮す
ると、樹脂に吸着された精油沈殿溶解液の１４倍の量の
アルコール水溶液を用いることが好ましく、この場合で
も本願発明の効果を十分得ることができる点が上記の表
２から理解される（図１も参照のこと）。

【００３５】（実施例２）精油沈殿溶解液（約１５０
ｇ、約１７６ｍｌ）を、ＨＰ２１乾燥樹脂（約１００
ｇ）に常温で３０分かけて吸着させた。本実施例におい
ても、上記のＨＰＬＣおよび分光光度計を用いて上記の
ＨＰ２１樹脂１００ｇに吸着した各成分の量を定量し
た。その結果、上記のＨＰ２１樹脂１００ｇに吸着した
オーラプテンの吸着量は２６．７ｇ、エポキシオーラプ
テンの吸着量は６．５ｇ、およびカロテノイドの吸着量
は１０ｍｇであった。

【００３６】次いで、上記の精油沈殿溶解液を吸着させ
たＨＰ２１樹脂を、４０％エタノール濃度のエタノール
水溶液１．２リットルで２回、洗浄し、次いで８０％エ
タノール濃度のエタノール水溶液１．２リットルで２
回、溶出した。得られた溶出液をエバポレーターにより
濃縮、乾燥し、ほぼ白色の無臭無味の粉末（２６．７
ｇ）を得た。

【００３７】この粉末をエタノールに溶解し、次いでＨ
ＰＬＣおよび分光光度計により各成分について定量した
結果、ほぼ白色の無臭無味の粉末は、オーラプテン２
３．９ｇ（回収率８９．５％）、エポキシオーラプテン
２．８ｇ、およびカロテノイド１．５ｍｇを含有してい
たことが判明した。従って、この実施例による本発明の
オーラプテンの精製方法によれば、食品添加剤などとし
て用いられ得るほぼ白色の無臭無味の粉末が得られる。
また、実施例による本発明のオーラプテンの精製方法に
よれば、得られる粉末はほぼ白色かつ無臭無味であるの
で、食品添加剤として用いられる場合、その量を任意に
増減することも可能になる。

【００３８】（実施例３）吸着剤としてＨＰ２１樹脂に
代えてＨＰ２０樹脂（三菱化成株式会社製、乾燥樹脂）
を用いたこと以外は、実施例２と同様に吸着、洗浄、お
よび溶出を行った。得られたほぼ白色かつ無臭無味の粉
末は、オーラプテン２２．４ｇ（回収率８３．９％）、
エポキシオーラプテン３．９ｇ、およびカロテノイド
１．４ｍｇを含有していた。

【００３９】（参考例）オーラプテンを吸着する吸着剤
の能力を比較するために、精油沈殿溶解液４００ｇ（オ
ーラプテン含有率１８．５％、エポキシオーラプテン
６．０％、およびカロテノイド含有率０．０８％、これ
らの値はＨＰＬＣおよび分光光度計による）を以下の表
３に示されるスチレン−ジビニルベンゼン共重合体を基
本骨格とする各樹脂１００ｇ（いずれも三菱化成株式会
社製、乾燥重量）に常温で３０分かけて吸着させ、次い
で４０％エタノール濃度のエタノール水溶液５リットル
で洗浄、乾燥した。

【００４０】乾燥後の各樹脂の重量を測定し、その吸着
前後の樹脂の重量から、樹脂に吸着された吸着物質の重
量を算出した。

【００４１】なお、湿潤樹脂を用いた場合には、別個
に、精油沈殿溶解液４００ｇを樹脂に吸着させる前に、
湿潤樹脂を約４０℃の熱風により乾燥して軽量し、乾燥
後の重量１００ｇに対する重量の湿潤樹脂に、精油沈殿
溶解液４００ｇを常温で３０分かけて吸着させ、次いで
４０％エタノール濃度のエタノール水溶液５リットルで
洗浄し、乾燥し、次いで乾燥後の各樹脂の重量を測定
し、その吸着前後の樹脂の重量から、樹脂に吸着された
吸着物質の重量を算出した。

【００４２】以下の表３において、「樹脂名」の欄にお
けるアルファベットに続く数字は架橋の程度を示す。ま
た、シリカゲル（和光純薬株式会社製、商品名「ワコー
ゲルＣ−２００」）を吸着剤として用いて同様に実験を
行い、シリカゲルに吸着された吸着物質の重量を測定し
た。この結果についても、表３に併せて示す。

【００４３】

【表３】上記の表３より、精油沈殿溶解液は、イオン交換樹脂
（表３の上から１つ目から７つ目まで）と比較して、イ
オン交換能を有さない樹脂に吸着されやすいことが理解
される。また、湿潤樹脂および乾燥樹脂とを比較する
と、精油沈殿溶解液は乾燥樹脂に吸着されやすいことが
理解される。なお、上記の表３に掲げられた樹脂のう
ち、ＨＰ２０およびＨＰ２１は比表面積が大きいので、
精油沈殿溶解液を吸着させるために極めて適切であるこ
とも理解される。

【００４４】

【発明の効果】本発明により、オーラプテン含有液を吸
着した吸着剤を、異なるアルコール濃度のアルコールに
より洗浄および溶出することによって、オーラプテンを
精製する方法が提供される。

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、約１００％エタノールを用いた場合に
おける、吸着剤からのオーラプテンの溶出率を示すグラ
フである。

【手続補正書】

【提出日】平成９年７月１４日

【手続補正１】

【補正対象書類名】図面

【補正対象項目名】図１

【補正方法】変更

【補正内容】

【図１】

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】以下の工程を包含する、オーラプテンを
精製する方法： (a) オーラプテン含有液を吸着剤に吸着させる工程； (b) 該吸着剤を、５０％未満のアルコール濃度のアルコ
ール水溶液を用いて洗浄する工程；および (c) 該吸着剤を、５０％以上９５％以下のアルコール濃
度のアルコール水溶液を用いて、オーラプテンを溶出す
る工程。
【請求項２】前記吸着剤が多孔性吸着剤である、請求
項１に記載の方法。
【請求項３】前記吸着剤がスチレンとジビニルベンゼ
ンとの共重合体を含む樹脂である、請求項１に記載の方
法。
【請求項４】前記工程(b)に用いられるアルコール水
溶液のアルコール濃度が、１０％以上４５％以下であ
る、請求項１から３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】前記工程(c)に用いられるアルコール水
溶液のアルコール濃度が、６０％以上９０％以下であ
る、請求項１から４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】前記アルコールがエタノールまたはイソ
プロピルアルコールである、請求項１から５のいずれか
に記載の方法。