JPH0551561B2

JPH0551561B2 -

Info

Publication number: JPH0551561B2
Application number: JP2229886A
Authority: JP
Inventors: Ryoichi Tsukyama; Etsuro Miura; Shigehiro Moriguchi
Original assignee: Higashimaru Shoyu Co Ltd
Current assignee: Higashimaru Shoyu Co Ltd
Priority date: 1986-02-04
Filing date: 1986-02-04
Publication date: 1993-08-03
Also published as: JPS62181202A

Description

【発明の詳細な説明】

産業上の利用分野本発明は、食品、化粧品等の各種工業製品の微
生物汚染による品質劣化を防止するのに利用され
る工業用抗菌剤（以下、単に抗菌剤という）に関
する。本発明の工業用抗菌剤は、バチルス属、クロス
トリジウム属、シユードモナス属等の細菌に抗菌
活性を示す。従つて、本願発明の工業用抗菌剤
は、このような微生物の汚染による品質劣化を防
止するため、特に食品の品質劣化を防止するため
に用いられるものである。従来の技術的背景本発明に係る抗菌剤の活性成分である２−メト
キシ−４，4′−ジヒドロキシ−５−α，α−ジメ
チルアリルカルコンは通称リコカルコンＡと称せ
られ、甘草根中に存在するフラボノイドの一種で
あつて、その合成法も報告されている。〔T.
Saitoh ＆ S.Shibata：「テトラヘドロンレタ
ーズ」（Tetrahedron Letters）」4461，（1975）〕、
除任生ら：「化学学報（中国）」37，289（1979）〕。しかしながら、２−メトキシ−４，4′−ジヒド
ロキシ−５−α，α−ジメチルアリルカルコン
（以下リコカルコンＡと称する）の抗菌性に関し
ては現在のところ全く報告がみられない。なお、甘草根が抗菌性を有することは古くから
知られているが、その抗菌性と成分の関係を直接
言及した報告は少く、甘草根の抗菌性成分は未だ
十分に解明されていない。因に、甘草根の抽出物
のみでは抗菌性はほとんどみられない。本発明者らは、種々のフラボノイドの生理活性
について検討している過程で、リコカルコンＡが
細菌の一種であるバチルス・ズブチリス
（Bacillus subtilis）に対して強い抗菌力を示す
ことを見出し、更に数種の微生物に対する抗菌性
を調べた結果、バチルス・ステアロサーモフイラ
ス（Bacillus stearothermophilus）、バチルス・
ブレビス（Bacillus brevis）、クロストリジウ
ム・スポロゲネス（Clostridium sporogenes）
及びシユードモナス・アエルジノーザ
（Pseudomonas aeroginosa）に対してもその発
育を顕著に抑制することを見出した。発明が解決しようとする問題点本発明は、上述したような、リコカルコンＡが
種々の微生物に対して優れた抗菌力を示すことの
知見に基づいてなされたものであつて、食品、化
粧品等の工業製品の微生物の汚染による品質劣化
を防止するのに利用し得る、リコカルコンＡを活
性成分として含有する抗菌剤を提供することを目
的とする。以下本発明を詳しく説明する。問題点を解決するための手段本発明において活性成分として用いるリコカル
コンＡは種々の方法によつて合成し得るが前掲の
除任生らの方法が高収率で得られるので有利であ
る。また、リコカルコンＡは前述のとおり、甘草
根に存在しているので、甘草根をエチルアルコー
ル、酢酸エチル、ジエチルエーテル、ジクロルメ
タンのような有機溶媒で抽出し、得られた抽出物
を合成吸着剤（例えばダイヤイオンHP−2MG）
やイオン交換樹脂（例えばダウエツクス１×
２）を用いて精製することによつても収得し得
る。なお、リコカルコンＡは水に難溶性であるた
め、甘草根から甘味成分としてのグリチルリチン
を抽出した残渣中に多量含有されていることか
ら、該残渣を原料として用いることが抽出物の精
製手段の簡易化及び資源の有効利用の見地から得
策である。次に、リコカルコンＡの合成法並びに甘草根か
らの調製法を例示する。リコカルコンＡの合成： β−レゾルシルアルデヒド25gを出発原料と
して用い、SAEED AHMAD KHANらの方
法〔インデイアン・ジヤーナル・オブ・ケミス
トリイ（Indian Journal of Chemistry）22B，
276（1983）〕に従つて２−メトキシ−４−（ｏ−
プレニル）−ベンツアルデヒド（化合物）
10gを得た。次に、上記化合物の10gを前掲の除任生ら
の方法に従つて２−メトキシ−４−ヒドロキシ
−５−α，α−ジメチルアリルベンツアルデヒ
ド（化合物）5gを得た。上述のようにして得た上記化合物の5gと
４−ヒドロキシアセトフエノンの4gをアルド
ール縮合させて、粗リコカルコンA7gを得、こ
れをシリカゲルカラムクロマトグラフイー（カ
ラム：４cm×100cm、シリカゲル：フジゲル
BW−127、展開剤：ベンゼン−酢酸エチル
（80−20）〕により精製し、次いでメタノール溶
液中で再結晶させることにより、リコカルコン
A4.5gを得た。本合成法により得られたリコカルコンＡは融点
101℃を示し、その質量分析、紫外部の吸収スペ
クトル、赤外線吸収スペクトル及びプロトン核磁
気共鳴スペクトルの各データは文献値と一致し
た。甘草根からのリコカルコンＡの調整：甘草根を60℃の温水に一夜浸漬した後、その
固形分を水切りして60℃以下の温度で送風乾燥
した。この乾燥固形分の２Kgを採取し、これに
エチルアルコール（95％Ｖ／Ｖ）15を加え、
50℃で一夜浸漬した後固液分離した。得られた
溶液を1400mlまで濃縮した後、水600mlを加え
て混合し、この混合液に活性炭粉末10g添加し
て暫時攪拌した後、一夜放置した。次いで、こ
のものを遠心分離に付して沈殿物を除去して澄
明な褐色液1900mlを得た（このものを成分と
称する）。次に、上記褐色液1600mlを、内径４cmのカラ
ムに、70％のエチルアルコールで洗浄した酢酸
型のダイヤイオンWA−30を予め90cmの高さに
充填したものに、SV≒0.5（空間速度）で通液
した。次いでカラムを70％エチルアルコール
2000mlで洗浄した後、95％エチルアルコール
4000mlを流してリコカルコンＡを溶出した。こ
の溶出液を濃縮、乾固して赤褐色の固形物12g
を得た。（このものを成分と称する）。上述のようにして得た固形物の10gを、50％
エチルアルコール200mlに懸濁した液を内径４
cmのカラムに予め50％エチルアルコールで洗浄
したアンバーライトXA Ｄ−８を80cmの高さ
に充填したものにSV≒0.3で通液し、次いで60
％エチルアルコール3000mlで洗浄した後80％エ
チルアルコール3000mlを流し、リコカルコンＡ
を含む溶出液を得、これを濃縮、乾固して黄褐
色固形物5gを得た（このものを成分と称す
る）。上述のようにして得た黄褐色固形物の4gを
シリカゲルカラムクロマトグラフイー〔カラ
ム：４cm×100cm、シリカゲル：フジゲル
BW−127、展開剤：ベンゼン−酢酸エチル
（80−20）〕及びセフアデツクスLH−20（カラ
ム：2.2cm×145cm、展開剤：メタノール）を用
いた分子篩クロマトグラフイーにより精製し、
メタノール水溶液中で再結晶してリコカルコン
A1.3gを得た。このようにして得たリコカルコンＡの抽出、精
製過程で得られた各成分乃至中のリコカルコ
ンＡの含有率を示すと表１のとおりである。

【表】なお、リコカルコンＡの測定は下記により行つ
た。高速液体クロマトグラフイーによる絶対検量線法装置：島津製作所製 Lc4A カラム：ゾルバツクス ODS φ4.6mm×200mm
温度 50℃ 移動相：70％メタノール流量：1.5ml／分検出：295nmの吸収本発明に係る抗菌剤は、上記リコカルコンＡを
活性成分とするものであつて、リコカルコンＡ単
独で用いるか、もしくは他の保存料等と併用して
もよい。本発明の抗菌剤を利用するにあたつては水に直
接添加してもほとんど溶けないため、例えば、シ
ヨ糖脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エス
テル、キラヤサポニン、あるいはゼラチンなどを
用いて乳化物としたり、アルコールに溶解する等
して用いることが望ましい。また、適正な使用量は対象とする製品の内容成
分やPH等によつて異なるが、リコカルコンＡとし
て概ね１〜200ppmの範囲でよい。例えば、うど
んだし等のつゆ類（液体調味料類）製品の場合、
リコカルコンＡとして５〜15ppmで実用的な保存
性が認められる。また、茹でそばや生そば等の麺
類に対しては10〜30ppmを練り込むか、15〜
50ppmの溶液に浸漬する方法が適当である。本発明の抗菌剤は、バチラス属やクロストリジ
ウム属のような耐熱性の芽胞を形成する菌に対し
て特に強い抗菌力を発揮し、多くの酵母や糸状菌
に対しては実用的な添加量範囲では抗菌力が認め
られない。これらの微生物が混在する食品にあつ
ては、酵母や糸状菌の増殖を抑制するか死滅させ
るための処理や添加物を併用することが望まし
い。例えば70〜80℃での加温処理が例示される。
この処理はもちろん製品の製造加工に必要な加温
（火入れ）処理を利用することができる。従つて、
耐熱性芽胞を死滅させるために行なわれる製品の
品質に悪影響を与えるほどの強い高温加熱を必要
とせず、高品質の製品を製造することが可能とな
る。以下に実施例を示して本発明の活性成分である
リコカルコンＡの抗菌力を具体的に説明する。実施例１上述した合成法並びに甘草根からの調製法によ
つて得られたリコカルコンＡの抗菌力を下記試験
法によつて調べた。試験法：液体培地希釈法を適用し、供試微生物を2.5〜
５×10³の量で各培地に添加して７日間培養後の
増殖の有無を培地の濁度によつて判定した。な
お、判定結果は微生物の増殖を抑制し得る最小の
添加量（固形分として）で表示した。供試微生物の培地並びに培養条件は表２に示す
とおりであり、試験の判定結果は表３に示すとお
りである。なお、比較として甘草根からの調製法
に際し得られた前記各成分〜についても同様
に試験した判定結果を表３に併せて示した。

【表】

【表】たものである。
リコカルコンＡ及び成分〜成分はエチルア
ルコールで溶解して添加した。表３にみられるとおり、リコカルコンＡは合
成、天然を問わず、バチルス・ズブチリスのよう
なバチルス属、クロストリジウム・スポロゲネス
及びシユードモナス・アエルジノーザに対して強
い抗菌力を示すので、これらの微生物の汚染によ
る食品、化粧品等の工業製品の品質劣化の防止に
有効に利用される。実施例２新彊産甘草根を温水により充分洗浄した後その
固形物を60℃以下の温度で乾燥した。この乾燥固
形物10Kgに80％のエチルアルコールを50加え、
40〜45℃で緩やかに攪拌しながら20時間抽出し固
液分離した。更に80％エチルアルコール20で固
形物を洗浄し、合計約65の抽出液を得た。この
抽出液に水40を攪拌しながら加えた懸濁液を、
ダイヤイオンHP−2MG 約25を50％エチルア
ルコールで充填したカラム（内径15cm、高さ150
cm）にSV≒１で通液した。ついで50％エチルア
ルコール25、65％エチルアルコール100を同
じ速度で流し、流出液の固形分に対するリコカル
コンＡの比が30％以上の部分を集めた。この流出液を濃縮すると純度35％のリコカルコ
ンＡ約200gが得られた。このリコカルコンＡ（純
度35％）10gにキラヤサポニン（キラヤニンＣ−
100、丸善化成(株)）5g及びシヨ糖脂肪酸エステル
（DK−SS、第一工業製薬(株)）5gを加え、70％エ
チルアルコールで500mlにして抗菌剤Ａを得た。更に上述のリコカルコンＡ（純度35％）10gを
含水エチルアルコール中で再結晶を繰り返し、純
度93％のリコカルコンＡ約2gを得た。本品1gに
キラヤサポニン1g及びシヨ糖脂肪酸エステルDK
−SS 1gを加え、70％エチルアルコール100mlに
溶解し抗菌剤Ｂを得た。上述したようにして得られた本発明に係わるリ
コカルコンＡを活性成分として含有する抗菌剤Ａ
及び抗菌剤Ｂを用いて、以下のようにしてうどん
だしの保存試験を行なつた。鰹削節1500g、昆布200gを100の熱水で30分
間抽出し、木綿布で濾過した白だしに淡口醤油５
、みりん１、砂糖1000g及び食塩500gを加え
てうどんだしを得た。このうどんだし１に対し
抗菌剤Ａ及び抗菌剤Ｂを１ml又は３ml加えたも
の、エチルアルコールを３ml加えたもの及び無添
加のものを調製し、80℃で保温しながら100mlず
つをポリプロピレン袋（160×110mm）に充填密封
し、蒸気で保温した80℃の室内に10分間置いた後
水で冷却した。抗菌剤Ａ及び抗菌剤Ｂを添加したうどんだし
は、無添加のものと比較して肉眼的及び官能的な
差は認められなかつた。上記うどんだし各20袋を
37℃の恒温室内に21日まで保存して定期的に濁り
の発生を観察するとともに１袋からは無菌的にサ
ンプリングし細菌数を測定した。結果は強い濁りの発生したものを腐敗率として
細菌数とともに表４に示した。エチルアルコール
添加及び無添加のうどんだしは３日後において全
て腐敗し、強い濁りの発生と細菌数の大きい増加
が観察された。一方、抗菌剤Ａ及び抗菌剤Ｂを添
加したものは、濁りの発生及び細菌数の増加は見
られなかつた。また抗菌剤添加区の試料は21日後
に全数について細菌数、PH及び官能検査を行なつ
たが何ら異常は認められなかつた。また、抗菌剤Ａ及び抗菌剤Ｂの３ml添加区にお
いては細菌数の急激な減少が観察され、本発明の
抗菌剤が殺菌作用も併せ持つことが認められた。

【表】

Claims

【特許請求の範囲】１２−メトキシ−４，4′−ジヒドロキシ−５−
（α，α−ジメチルアリル）カルコンを活性成分
として含有することを特徴とする工業用抗菌剤。２工業用抗菌剤が食品用抗菌剤である特許請求
の範囲１記載の抗菌剤。