JPH1129600A - 乳からラクトフェリンを分離、精製する方法 - Google Patents
乳からラクトフェリンを分離、精製する方法Info
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- JPH1129600A JPH1129600A JP20265197A JP20265197A JPH1129600A JP H1129600 A JPH1129600 A JP H1129600A JP 20265197 A JP20265197 A JP 20265197A JP 20265197 A JP20265197 A JP 20265197A JP H1129600 A JPH1129600 A JP H1129600A
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Abstract
(57)【要約】
【解決手段】 κ−カゼイン固定化カラムを用いて、乳
中に含まれるラクトフェリンを、安全、簡便、高純度に
分離する方法に関する。 【効果】 乳中に含まれるラクトフェリンを安全、簡
便、しかも高純度に分離することができる。
中に含まれるラクトフェリンを、安全、簡便、高純度に
分離する方法に関する。 【効果】 乳中に含まれるラクトフェリンを安全、簡
便、しかも高純度に分離することができる。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、以下に述べるよう
に、種々の生理作用を示すラクトフェリンを、簡便、高
純度、しかも安全に分離・精製する方法に関する。
に、種々の生理作用を示すラクトフェリンを、簡便、高
純度、しかも安全に分離・精製する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】ラクトフェリンは乳、涙、唾液等の外分
泌液中に含まれる、分子量が約８万の鉄結合性糖蛋白質
である。その含量は初乳中に多く、ヒト初乳中で約５〜
１０ｍｇ／ｍｌ含まれるが、ウシ常乳中では約０．１〜
０．５ｍｇ／ｍｌと少ない。特に初乳中に多く含まれる
ことから、乳児の健全な発育を維持する上で、重要な働
きを担っていると考えられている。これを裏付けるよう
に、近年、in vitro、及びin vivoにおける多くの研究
で、ラクトフェリンが抗菌作用、過酸化脂質生成抑制作
用、鉄吸収の調節作用、免疫機能調節作用、細胞増殖作
用、及び細菌感染防御作用などの有用な生理作用を有す
ることが報告されている。
泌液中に含まれる、分子量が約８万の鉄結合性糖蛋白質
である。その含量は初乳中に多く、ヒト初乳中で約５〜
１０ｍｇ／ｍｌ含まれるが、ウシ常乳中では約０．１〜
０．５ｍｇ／ｍｌと少ない。特に初乳中に多く含まれる
ことから、乳児の健全な発育を維持する上で、重要な働
きを担っていると考えられている。これを裏付けるよう
に、近年、in vitro、及びin vivoにおける多くの研究
で、ラクトフェリンが抗菌作用、過酸化脂質生成抑制作
用、鉄吸収の調節作用、免疫機能調節作用、細胞増殖作
用、及び細菌感染防御作用などの有用な生理作用を有す
ることが報告されている。
【０００３】このようにラクトフェリンには多岐にわた
る生理活性が期待されることから、栄養生理学的、並び
に薬理学的に重要な物質である。ラクトフェリンを分離
するための原料としては、牛乳およびチーズ製造時に副
生されるチーズホエイが使用されている。ラクトフェリ
ンは栄養学的に優れ、しかも安全な牛乳原料から分離さ
れているため、安全な天然物由来の原料である。また、
最近では遺伝子組み換えラクトフェリンの利用も研究さ
れている。
る生理活性が期待されることから、栄養生理学的、並び
に薬理学的に重要な物質である。ラクトフェリンを分離
するための原料としては、牛乳およびチーズ製造時に副
生されるチーズホエイが使用されている。ラクトフェリ
ンは栄養学的に優れ、しかも安全な牛乳原料から分離さ
れているため、安全な天然物由来の原料である。また、
最近では遺伝子組み換えラクトフェリンの利用も研究さ
れている。
【０００４】従来、乳からラクトフェリンを分離、精製
する方法としては、ホエイの濃縮液を陽イオン交換体に
通液し、リン酸緩衝液で洗浄後、０．３Ｍ塩化ナトリウ
ムを含む同緩衝液でラクトフェリンを溶出させる方法
（特開昭６２−１９５２３）、あるいは脱脂乳を陽イオ
ン交換体と混合、攪拌後、樹脂をカラムに充填し、水洗
後、５％塩化ナトリウムで溶出する方法がある（特開昭
６３−１５２４００）。また、ラクトフェリンと親和性
の強い物質をカラムに固定化し、アフィニティクロマト
グラフィーにより分離する方法がある。例えば、ヘパリ
ン（特開昭６３−２５５２９９）、ラクトフェリンに対
するモノクロナール抗体（特開昭６１−１４５２０
０）、硫酸エステル化物（特開昭６３−２５５３０
０）、ＤＮＡ（T. William Hutchens ら、Biochimica e
t Biophysica Acta, 999 (1989) 323-329）、及び色素
（Mariano Grasselli ら、Netherlands Milk & Dairy
J., 50 (1996)551-561）などをクロマトグラフィー用の
支持体に固定化し、ラクトフェリンを含む乳原料と接触
させ、吸着したラクトフェリンを０．５〜１．０Ｍの塩
化ナトリウムで溶出させる方法などがある。
する方法としては、ホエイの濃縮液を陽イオン交換体に
通液し、リン酸緩衝液で洗浄後、０．３Ｍ塩化ナトリウ
ムを含む同緩衝液でラクトフェリンを溶出させる方法
（特開昭６２−１９５２３）、あるいは脱脂乳を陽イオ
ン交換体と混合、攪拌後、樹脂をカラムに充填し、水洗
後、５％塩化ナトリウムで溶出する方法がある（特開昭
６３−１５２４００）。また、ラクトフェリンと親和性
の強い物質をカラムに固定化し、アフィニティクロマト
グラフィーにより分離する方法がある。例えば、ヘパリ
ン（特開昭６３−２５５２９９）、ラクトフェリンに対
するモノクロナール抗体（特開昭６１−１４５２０
０）、硫酸エステル化物（特開昭６３−２５５３０
０）、ＤＮＡ（T. William Hutchens ら、Biochimica e
t Biophysica Acta, 999 (1989) 323-329）、及び色素
（Mariano Grasselli ら、Netherlands Milk & Dairy
J., 50 (1996)551-561）などをクロマトグラフィー用の
支持体に固定化し、ラクトフェリンを含む乳原料と接触
させ、吸着したラクトフェリンを０．５〜１．０Ｍの塩
化ナトリウムで溶出させる方法などがある。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、上記した技
術の現状に鑑み、数多くの生理作用を有するラクトフェ
リンを安全にしかも簡便、効率的に分離及び／又は精製
する方法を開発する目的でなされたものである。
術の現状に鑑み、数多くの生理作用を有するラクトフェ
リンを安全にしかも簡便、効率的に分離及び／又は精製
する方法を開発する目的でなされたものである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明は、上記目的を達
成するためになされたものであって、各方面から検討の
結果、アフィニティクロマトグラフィーによる方法は、
ラクトフェリンとの特異的吸着反応を用いるため、イオ
ン交換クロマトグラフィー法に比べ、煩雑な工程を経ず
に簡便に高純度のものが得られるという利点がある点に
着目した。ただ、この方法は、たしかにすぐれた方法で
あるが、従来アフィニティカラムに使用されているリガ
ンドとして、ヘパリン、ラクトフェリンに対するモノク
ロナール抗体、硫酸エステル化物、ＤＮＡなどがある
が、何れも大量に入手するのが困難である。また、固定
化した上記物質が脱落してラクトフェリンに混入する恐
れもあり、食品用途としては、安全性に問題があり、更
にもう一段の改良が待たれるところである。
成するためになされたものであって、各方面から検討の
結果、アフィニティクロマトグラフィーによる方法は、
ラクトフェリンとの特異的吸着反応を用いるため、イオ
ン交換クロマトグラフィー法に比べ、煩雑な工程を経ず
に簡便に高純度のものが得られるという利点がある点に
着目した。ただ、この方法は、たしかにすぐれた方法で
あるが、従来アフィニティカラムに使用されているリガ
ンドとして、ヘパリン、ラクトフェリンに対するモノク
ロナール抗体、硫酸エステル化物、ＤＮＡなどがある
が、何れも大量に入手するのが困難である。また、固定
化した上記物質が脱落してラクトフェリンに混入する恐
れもあり、食品用途としては、安全性に問題があり、更
にもう一段の改良が待たれるところである。
【０００７】そこで本発明者らは、鋭意各方面から研究
を行い、ラクトフェリンがκ−カゼインに対して強い親
和性を有するという新事実を見出し、この原理を応用し
てκ−カゼインを固定化したカラムを作成し、ラクトフ
ェリンとの親和性を検討したところ、特異的にラクトフ
ェリンが吸着、溶出されることを発見した。更に、κ−
カゼインは牛乳中に存在する成分であり、従来使用され
てきたヘパリン、モノクロナール抗体などに比べ、極め
て安全で、価格的にも安いという利点がある。
を行い、ラクトフェリンがκ−カゼインに対して強い親
和性を有するという新事実を見出し、この原理を応用し
てκ−カゼインを固定化したカラムを作成し、ラクトフ
ェリンとの親和性を検討したところ、特異的にラクトフ
ェリンが吸着、溶出されることを発見した。更に、κ−
カゼインは牛乳中に存在する成分であり、従来使用され
てきたヘパリン、モノクロナール抗体などに比べ、極め
て安全で、価格的にも安いという利点がある。
【０００８】本発明は、これらの有用新知見に基づき更
に研究の結果完成されたものであって、κ−カゼイン
に、ラクトフェリン含有原料を接触させてラクトフェリ
ンを特異的に吸着させ、次いで吸着したラクトフェリン
を溶出することにより、ラクトフェリンを分離及び／又
は精製する方法に関するものである。
に研究の結果完成されたものであって、κ−カゼイン
に、ラクトフェリン含有原料を接触させてラクトフェリ
ンを特異的に吸着させ、次いで吸着したラクトフェリン
を溶出することにより、ラクトフェリンを分離及び／又
は精製する方法に関するものである。
【０００９】本発明は、κ−カゼインを用いることによ
り、乳、涙、唾液などの外分泌液、微生物や細胞の培養
物、遺伝子組み換え培養液、こ（れら）の濃縮液、抽出
液、等に含まれる生理学的に重要なラクトフェリンを高
純度に、しかも簡便に分離／精製する方法に関するもの
である。以下、本発明について詳述する。
り、乳、涙、唾液などの外分泌液、微生物や細胞の培養
物、遺伝子組み換え培養液、こ（れら）の濃縮液、抽出
液、等に含まれる生理学的に重要なラクトフェリンを高
純度に、しかも簡便に分離／精製する方法に関するもの
である。以下、本発明について詳述する。
【００１０】
【発明の実施の形態】本発明は、κ−カゼインに対して
ラクトフェリンが特異的、選択的に親和性を有するとい
う本発明者らがはじめて発見した新しい原理に基づくも
のであって、ラクトフェリン含有原料をκ−カゼインで
処理し、両者を特異的に結合せしめた後、ラクトフェリ
ンを分離するものである。
ラクトフェリンが特異的、選択的に親和性を有するとい
う本発明者らがはじめて発見した新しい原理に基づくも
のであって、ラクトフェリン含有原料をκ−カゼインで
処理し、両者を特異的に結合せしめた後、ラクトフェリ
ンを分離するものである。
【００１１】したがって、本発明を実施するには、κ−
カゼインを担体に固定化しておき、これにラクトフェリ
ン含有原料を接触せしめてラクトフェリンを特異的にκ
−カゼインに吸着させた後、次いで吸着させたラクトフ
ェリンを溶出せしめるいわば工業的な方法、あるいは、
κ−カゼインを担体に固定化することなく遊離状態にし
ておき、これにラクトフェリン含有原料を接触せしめて
ラクトフェリンとの結合体ないし複合体を形成せしめ、
これを取り出した後に両者を分離するいわば化学的ない
し生物学的方法のいずれもが利用可能である。
カゼインを担体に固定化しておき、これにラクトフェリ
ン含有原料を接触せしめてラクトフェリンを特異的にκ
−カゼインに吸着させた後、次いで吸着させたラクトフ
ェリンを溶出せしめるいわば工業的な方法、あるいは、
κ−カゼインを担体に固定化することなく遊離状態にし
ておき、これにラクトフェリン含有原料を接触せしめて
ラクトフェリンとの結合体ないし複合体を形成せしめ、
これを取り出した後に両者を分離するいわば化学的ない
し生物学的方法のいずれもが利用可能である。
【００１２】κ−カゼインの固定化は、従来より行われ
ている酵素、各種蛋白質、微生物の担体への固定化技術
が適宜利用可能であるすなわち、無機又は有機、天然又
は合成、高分子又は低分子、生物系又は非生物系等各種
担体を用い、共有結合法、イオン結合法、物理的吸着法
等による従来既知の固定化技術が適宜利用可能である。
ている酵素、各種蛋白質、微生物の担体への固定化技術
が適宜利用可能であるすなわち、無機又は有機、天然又
は合成、高分子又は低分子、生物系又は非生物系等各種
担体を用い、共有結合法、イオン結合法、物理的吸着法
等による従来既知の固定化技術が適宜利用可能である。
【００１３】例えば担体としては、アガロース、セルロ
ース、デキストラン、セファローズ、セファデックス等
の多糖類（誘導体）、ポリアクリルアミドゲル、ポリス
チレン等の合成高分子物質、（多孔質）ガラス、（多孔
質）セラミックス、活性炭、シリカゲル、アルミナ、粘
土鉱物等の無機ないしセラミックス系物質が適宜利用さ
れる。
ース、デキストラン、セファローズ、セファデックス等
の多糖類（誘導体）、ポリアクリルアミドゲル、ポリス
チレン等の合成高分子物質、（多孔質）ガラス、（多孔
質）セラミックス、活性炭、シリカゲル、アルミナ、粘
土鉱物等の無機ないしセラミックス系物質が適宜利用さ
れる。
【００１４】これらの担体は、そのまま、あるいは臭化
シアン、水素化シアノホウ素等で処理したり、架橋剤や
縮合試薬で処理したりして、常法にしたがってκ−カゼ
インとの固定化を更に推進せしめてもよい。
シアン、水素化シアノホウ素等で処理したり、架橋剤や
縮合試薬で処理したりして、常法にしたがってκ−カゼ
インとの固定化を更に推進せしめてもよい。
【００１５】本発明を実施するには、先ず、このように
して固定化したκ−カゼインとラクトフェリン含有原料
とを接触せしめるのであるが、ラクトフェリン含有原料
としては、乳、脱脂乳のほか、ホエイ等の乳副製物等ヒ
トを含む哺乳類の乳類；涙、唾液等の各種外分泌液；細
胞中微生物の培養液、遺伝子組み換え培養液；これらの
抽出液や濃縮液等、ラクトフェリンを含有する物質がす
べて包含される。
して固定化したκ−カゼインとラクトフェリン含有原料
とを接触せしめるのであるが、ラクトフェリン含有原料
としては、乳、脱脂乳のほか、ホエイ等の乳副製物等ヒ
トを含む哺乳類の乳類；涙、唾液等の各種外分泌液；細
胞中微生物の培養液、遺伝子組み換え培養液；これらの
抽出液や濃縮液等、ラクトフェリンを含有する物質がす
べて包含される。
【００１６】κ−カゼインとラクトフェリンの接触時に
おいて、ｐＨは４．５〜８．５、好ましくは５．０〜
８．０とするのがよく、イオン強度は０．４以下、好ま
しくは０．３以下とするのがよい。
おいて、ｐＨは４．５〜８．５、好ましくは５．０〜
８．０とするのがよく、イオン強度は０．４以下、好ま
しくは０．３以下とするのがよい。
【００１７】次いで吸着されたラクトフェリンを塩類溶
液で溶出するが、その際塩類溶液としては、イオン強度
が０．３〜１．６、好ましくは０．４〜１．５とするの
がよい。溶出した後、電気透析等の常法にしたがって脱
塩を行い、ラクトフェリンを得る。
液で溶出するが、その際塩類溶液としては、イオン強度
が０．３〜１．６、好ましくは０．４〜１．５とするの
がよい。溶出した後、電気透析等の常法にしたがって脱
塩を行い、ラクトフェリンを得る。
【００１８】吸着ラクトフェリンの溶出に用いられる塩
類溶液としては、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化
カルシウム、塩化マグネシウム、及びこれらの１種又は
それ以上の混合物から選ばれた塩類の溶液が使用され
る。以下、本発明の実施例について述べる。
類溶液としては、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化
カルシウム、塩化マグネシウム、及びこれらの１種又は
それ以上の混合物から選ばれた塩類の溶液が使用され
る。以下、本発明の実施例について述べる。
【００１９】
【実施例１】κ−カゼインの固定化：市販のアクチゲル
１０ｍｌ（アガロースゲル、ステロジェン・バイオセパ
レーション社製）を脱イオン交換水で十分洗浄し、濾過
した後、κ−カゼイン２０ｍｇを１０ｍＭリン酸緩衝液
（ｐＨ７．０）３ｍｌに溶かし、この混合物に水素化シ
アノホウ素ナトリウム（ＮａＣＮＢＨ3）１３０ｍｇを
添加し、κ−カゼイン固定化アクチゲルを得た。
１０ｍｌ（アガロースゲル、ステロジェン・バイオセパ
レーション社製）を脱イオン交換水で十分洗浄し、濾過
した後、κ−カゼイン２０ｍｇを１０ｍＭリン酸緩衝液
（ｐＨ７．０）３ｍｌに溶かし、この混合物に水素化シ
アノホウ素ナトリウム（ＮａＣＮＢＨ3）１３０ｍｇを
添加し、κ−カゼイン固定化アクチゲルを得た。
【００２０】ラクトフェリンの分離、精製：上記の手順
で調製したκ−カゼイン固定化アガロースゲルを直径１
ｃｍ、長さ１０ｃｍのカラムに充填し、１０ｍＭリン酸
緩衝液（ｐＨ７．０）で平衡化した。このカラムに、ウ
シラクトフェリン（シグマ社）（１ｍｇ／ｍｌ）１ｍｌ
を通液し、１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）でカラ
ムを洗浄した。次いで０．５Ｍ ＮａＣｌ ２０ｍｌを
通液してカラムに吸着しているウシラクトフェリンを溶
出した。
で調製したκ−カゼイン固定化アガロースゲルを直径１
ｃｍ、長さ１０ｃｍのカラムに充填し、１０ｍＭリン酸
緩衝液（ｐＨ７．０）で平衡化した。このカラムに、ウ
シラクトフェリン（シグマ社）（１ｍｇ／ｍｌ）１ｍｌ
を通液し、１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）でカラ
ムを洗浄した。次いで０．５Ｍ ＮａＣｌ ２０ｍｌを
通液してカラムに吸着しているウシラクトフェリンを溶
出した。
【００２１】
【実施例２】実施例１で調製したκ−カゼイン固定化ア
ガロースカラム（直径１ｃｍ×長さ１０ｃｍ）に、ヒト
ラクトフェリン（シグマ社）（１ｍｇ／ｍｌ）１ｍｌを
通液し、１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）でカラム
を洗浄した。次いで０．５ＭＮａＣｌ ２０ｍｌを通液
してカラムに吸着しているヒトラクトフェリンを溶出し
た。
ガロースカラム（直径１ｃｍ×長さ１０ｃｍ）に、ヒト
ラクトフェリン（シグマ社）（１ｍｇ／ｍｌ）１ｍｌを
通液し、１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）でカラム
を洗浄した。次いで０．５ＭＮａＣｌ ２０ｍｌを通液
してカラムに吸着しているヒトラクトフェリンを溶出し
た。
【００２２】
【実施例３】κ−カゼイン固定化カラム（直径１ｃｍ×
長さ１０ｃｍ）は、実施例１と同様な手順で調製した。
乳タンパク質共存下において、κ−カゼイン固定化カラ
ムに対するラクトフェリンの特異的吸着性を確認するた
めに、ホエイ中の主要タンパク質である牛血清アルブミ
ン（ＢＳＡ）（０．７ｍｇ）、免疫グロブリン（１．４
ｍｇ）、α−ラクトアルブミン（２．８ｍｇ）、及びβ
−ラクトグロブリン（７．０ｍｇ）をホエイ中の濃度と
同レベルに溶解し、この中にウシラクトフェリン１．０
ｍｇを添加した。
長さ１０ｃｍ）は、実施例１と同様な手順で調製した。
乳タンパク質共存下において、κ−カゼイン固定化カラ
ムに対するラクトフェリンの特異的吸着性を確認するた
めに、ホエイ中の主要タンパク質である牛血清アルブミ
ン（ＢＳＡ）（０．７ｍｇ）、免疫グロブリン（１．４
ｍｇ）、α−ラクトアルブミン（２．８ｍｇ）、及びβ
−ラクトグロブリン（７．０ｍｇ）をホエイ中の濃度と
同レベルに溶解し、この中にウシラクトフェリン１．０
ｍｇを添加した。
【００２３】このようにして調製したホエイのモデル溶
液の全量（２ｍｌ）を、上記のκ−カゼイン固定化カラ
ムに通液し、１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）でカ
ラムを洗浄した。次いで１．０Ｍ ＮａＣｌ ２０ｍｌ
を通液してカラムに吸着しているウシラクトフェリンを
溶出した。溶出したウシラクトフェリン量をＥＬＩＳＡ
で分析したところ、約０．９５ｍｇのウシラクトフェリ
ンが回収されたことから、ウシラクトフェリンの回収率
は９６％であることを確認した。回収したウシラクトフ
ェリンの純度は、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気
泳動（ＰＡＧＥ）図より、９５％以上と測定された。
液の全量（２ｍｌ）を、上記のκ−カゼイン固定化カラ
ムに通液し、１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）でカ
ラムを洗浄した。次いで１．０Ｍ ＮａＣｌ ２０ｍｌ
を通液してカラムに吸着しているウシラクトフェリンを
溶出した。溶出したウシラクトフェリン量をＥＬＩＳＡ
で分析したところ、約０．９５ｍｇのウシラクトフェリ
ンが回収されたことから、ウシラクトフェリンの回収率
は９６％であることを確認した。回収したウシラクトフ
ェリンの純度は、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気
泳動（ＰＡＧＥ）図より、９５％以上と測定された。
【００２４】図面は、κ−カゼイン固定化アフィニティ
クロマトグラフィーによるウシラクトフェリンの分離を
示し、図１は溶出したカラムナンバーと吸光度
（Ａ280）との関係を示し、図２は上記ＳＤＳ−ポリア
クリルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）図を示す。
クロマトグラフィーによるウシラクトフェリンの分離を
示し、図１は溶出したカラムナンバーと吸光度
（Ａ280）との関係を示し、図２は上記ＳＤＳ−ポリア
クリルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）図を示す。
【００２５】
【実施例４】κ−カゼイン固定化カラム（直径１ｃｍ×
長さ１０ｃｍ）は、実施例１と同様な手順で調製した。
ヒト初乳から脂肪を分離した脱脂乳において、塩酸でｐ
Ｈ４．５調整することにより、カゼインを等電点沈殿さ
せて、ホエイ画分を得た。上清液のｐＨを水酸化ナトリ
ウムでｐＨ７．０に調整した。このようにして調製した
ヒト初乳ホエイ５ｍｌをκ−カゼイン固定化カラムに通
液した。１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）でカラム
を洗浄後、１．０Ｍ ＮａＣｌ ２０ｍｌを通液してカ
ラムに吸着している成分を溶出した。この成分をＳＤＳ
−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）で分析
したところ、ヒトラクトフェリンであることが確認でき
た。回収されたヒトラクトフェリンの純度は、９５％以
上であった。
長さ１０ｃｍ）は、実施例１と同様な手順で調製した。
ヒト初乳から脂肪を分離した脱脂乳において、塩酸でｐ
Ｈ４．５調整することにより、カゼインを等電点沈殿さ
せて、ホエイ画分を得た。上清液のｐＨを水酸化ナトリ
ウムでｐＨ７．０に調整した。このようにして調製した
ヒト初乳ホエイ５ｍｌをκ−カゼイン固定化カラムに通
液した。１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）でカラム
を洗浄後、１．０Ｍ ＮａＣｌ ２０ｍｌを通液してカ
ラムに吸着している成分を溶出した。この成分をＳＤＳ
−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）で分析
したところ、ヒトラクトフェリンであることが確認でき
た。回収されたヒトラクトフェリンの純度は、９５％以
上であった。
【００２６】
【実施例５】κ−カゼイン固定カラム（直径１ｃｍ×長
さ１０ｃｍ）は、実施例１と同様な手順で調製した。ゴ
ーダチーズ製造過程で得られるチーズホエイ１０ｍｌを
κ−カゼイン固定化カラムに通液した。１０ｍＭリン酸
緩衝液（ｐＨ７．０）でカラムを洗浄後、１．０Ｍ Ｎ
ａＣｌ ３０ｍｌを通液してカラムに吸着している成分
を溶出した。この成分をＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲ
ル電気泳動（ＰＡＧＥ）で分析したところ、ウシラクト
フェリンであることが確認できた。回収されたウシラク
トフェリンの純度は９５％以上であった。
さ１０ｃｍ）は、実施例１と同様な手順で調製した。ゴ
ーダチーズ製造過程で得られるチーズホエイ１０ｍｌを
κ−カゼイン固定化カラムに通液した。１０ｍＭリン酸
緩衝液（ｐＨ７．０）でカラムを洗浄後、１．０Ｍ Ｎ
ａＣｌ ３０ｍｌを通液してカラムに吸着している成分
を溶出した。この成分をＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲ
ル電気泳動（ＰＡＧＥ）で分析したところ、ウシラクト
フェリンであることが確認できた。回収されたウシラク
トフェリンの純度は９５％以上であった。
【００２７】
【発明の効果】乳等ラクトフェリン含有原料中に含まれ
るラクトフェリンを安全、簡便、しかも高純度に分離及
び／又は抽出することができる。
るラクトフェリンを安全、簡便、しかも高純度に分離及
び／又は抽出することができる。
【図１】カラムナンバーと溶出したウシラクトフェリン
の吸光度の関係を示す。
の吸光度の関係を示す。
【図２】回収したウシラクトフェリンの純度を示す電気
泳動写真である。
泳動写真である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 植田 智子 東京都東村山市栄町１−21−３ 明治乳業 株式会社栄養科学研究所内
Claims (7)
- 【請求項１】 κ−カゼインに、ラクトフェリン含有原
料を接触させてラクトフェリンを吸着させ、次いで吸着
させたラクトフェリンを溶出すること、を特徴とするラ
クトフェリン含有原料からラクトフェリンを分離、精製
する方法。 - 【請求項２】 κ−カゼインを固定化した担体を用い、
アフィニティークロマトグラフィーによりラクトフェリ
ンを分離、精製すること、を特徴とする請求項１に記載
の方法。 - 【請求項３】 ラクトフェリン含有原料が、乳、脱脂
乳、ホエイ、涙、唾液、細胞培養物、微生物培養物、濃
縮液、抽出液から選ばれる少なくともひとつであるこ
と、を特徴とする請求項１又は２に記載の方法。 - 【請求項４】 κ−カゼインとラクトフェリンとの接触
時のｐＨが、５．０〜８．０であること、を特徴とする
請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。 - 【請求項５】 κ−カゼインとラクトフェリンとの接触
時のイオン強度が、０．３以下であること、を特徴とす
る請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。 - 【請求項６】 吸着ラクトフェリンをイオン強度が０．
４〜１．５の塩類溶液で溶出した後、電気透析等で脱塩
すること、を特徴とする請求項１〜５のいずれか１項に
記載の方法。 - 【請求項７】 上記溶出に用いる塩類溶液が、塩化ナト
リウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、塩化マグネシ
ウム、及びこれらの混合物から選ばれた塩類の溶液であ
ること、を特徴とする、請求項１〜６のいずれか１項に
記載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20265197A JPH1129600A (ja) | 1997-07-14 | 1997-07-14 | 乳からラクトフェリンを分離、精製する方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20265197A JPH1129600A (ja) | 1997-07-14 | 1997-07-14 | 乳からラクトフェリンを分離、精製する方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1129600A true JPH1129600A (ja) | 1999-02-02 |
Family
ID=16460884
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP20265197A Pending JPH1129600A (ja) | 1997-07-14 | 1997-07-14 | 乳からラクトフェリンを分離、精製する方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH1129600A (ja) |
-
1997
- 1997-07-14 JP JP20265197A patent/JPH1129600A/ja active Pending
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