JPH11322799A - 抗体の固定化方法 - Google Patents
抗体の固定化方法Info
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- JPH11322799A JPH11322799A JP12994498A JP12994498A JPH11322799A JP H11322799 A JPH11322799 A JP H11322799A JP 12994498 A JP12994498 A JP 12994498A JP 12994498 A JP12994498 A JP 12994498A JP H11322799 A JPH11322799 A JP H11322799A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】抗体の抗原捕捉能力を維持したまま固定化する
方法を提供する。 【解決手段】抗体の抗原認識部位以外の部位、例えばヒ
ンジ部のＳＨ基をリンカー、ビオチン及びアビジンを介
して担体に固定化させ、イムノアッセイ用抗体を得る。
方法を提供する。 【解決手段】抗体の抗原認識部位以外の部位、例えばヒ
ンジ部のＳＨ基をリンカー、ビオチン及びアビジンを介
して担体に固定化させ、イムノアッセイ用抗体を得る。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、抗体の固定化方法
に関するものである。
に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】抗原捕捉免疫化学的検査（エンザイムイ
ムノアッセイ、ラジオイムノアッセイ）における抗体の
プラスチック、ガラス、架橋デキストラン等、不溶性担
体への固定化方法には、担体との疎水性相互作用によ
り、直接担体に固定化させる方法、リンカー等を介して
間接的に固定化する方法がある（エンザイムイムノアッ
セイ、石川栄治監訳、東京化学同人版、第１版、１９８
９年、特開平２―１０７９６６号公報、特開昭５５―１
０５９０号公報）。いずれの方法を用いる場合も、固定
化された抗体は抗原を捕捉する能力を維持していなけれ
ばならないが、従来の抗体固定化方法では、抗体のどの
部分で固定化されているかを規定していないので、固定
化された抗体が抗原捕捉能力を維持しているか否かにつ
いて考慮されていなかった。
ムノアッセイ、ラジオイムノアッセイ）における抗体の
プラスチック、ガラス、架橋デキストラン等、不溶性担
体への固定化方法には、担体との疎水性相互作用によ
り、直接担体に固定化させる方法、リンカー等を介して
間接的に固定化する方法がある（エンザイムイムノアッ
セイ、石川栄治監訳、東京化学同人版、第１版、１９８
９年、特開平２―１０７９６６号公報、特開昭５５―１
０５９０号公報）。いずれの方法を用いる場合も、固定
化された抗体は抗原を捕捉する能力を維持していなけれ
ばならないが、従来の抗体固定化方法では、抗体のどの
部分で固定化されているかを規定していないので、固定
化された抗体が抗原捕捉能力を維持しているか否かにつ
いて考慮されていなかった。
【０００３】例えば、担体に抗体の抗原認識部位が直接
吸着・結合した場合、この抗体は抗原を捕捉することが
できない。また抗体と担体とを架橋して間接的に固定化
する場合に、サクシイミド基などを用いて抗体のアミノ
基やリジン残基にリンカーを導入すると、アミノ基やリ
ジン残基は抗体の各部に存在するため抗体のどの部分に
リンカーが導入されたか規定できず、したがって抗体の
どの部分が固定化されたかを規定することができず、抗
原認識部位にリンカーが導入された場合は、抗原捕捉能
力が失われてしまう可能性があった。
吸着・結合した場合、この抗体は抗原を捕捉することが
できない。また抗体と担体とを架橋して間接的に固定化
する場合に、サクシイミド基などを用いて抗体のアミノ
基やリジン残基にリンカーを導入すると、アミノ基やリ
ジン残基は抗体の各部に存在するため抗体のどの部分に
リンカーが導入されたか規定できず、したがって抗体の
どの部分が固定化されたかを規定することができず、抗
原認識部位にリンカーが導入された場合は、抗原捕捉能
力が失われてしまう可能性があった。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明の課題は、固定
化された抗体が抗原捕捉能力を維持できるような、抗体
を固定化する方法を提供することである。
化された抗体が抗原捕捉能力を維持できるような、抗体
を固定化する方法を提供することである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは前記課題に
鑑みて、鋭意検討を重ねた結果、本発明に到達した。即
ち本発明は、抗体の抗原認識部位以外の部位を、特異的
にかつ化学的に担体に結合させることを特徴とする、抗
体の固定化方法である。以下、本発明をさらに詳細に説
明する。
鑑みて、鋭意検討を重ねた結果、本発明に到達した。即
ち本発明は、抗体の抗原認識部位以外の部位を、特異的
にかつ化学的に担体に結合させることを特徴とする、抗
体の固定化方法である。以下、本発明をさらに詳細に説
明する。
【０００６】本発明では、抗体の抗原認識部位以外の部
位を特異的かつ化学的に担体に結合させる。抗体の抗原
認識部位以外の部位としては特に限定はなく、例えばＦ
ｃ部分やヒンジ部など、抗体の抗原認識部位以外であれ
ばどこでもよい。抗体の抗原認識部位以外の部位を特異
的かつ化学的に担体に結合させる方法としては特に限定
はないが、例えば抗体のヒンジ部のＳＨ基を介して担体
に結合させる、抗体の糖鎖を介して抗体を担体に結合さ
せる、または抗体に導入された官能基を介して抗体を担
体に結合させるなどの方法があげられる。
位を特異的かつ化学的に担体に結合させる。抗体の抗原
認識部位以外の部位としては特に限定はなく、例えばＦ
ｃ部分やヒンジ部など、抗体の抗原認識部位以外であれ
ばどこでもよい。抗体の抗原認識部位以外の部位を特異
的かつ化学的に担体に結合させる方法としては特に限定
はないが、例えば抗体のヒンジ部のＳＨ基を介して担体
に結合させる、抗体の糖鎖を介して抗体を担体に結合さ
せる、または抗体に導入された官能基を介して抗体を担
体に結合させるなどの方法があげられる。
【０００７】例えば抗体のヒンジ部のＳＨ基を利用し、
それを介して抗体を担体に固定化する場合を説明する。
例えばインタクトのマウス抗体ＩｇＧ１のヒンジ部にお
いて２本のＨ鎖がＳ−Ｓ結合しており、それを還元した
ときに生じるＳＨ基を本発明では固定化に利用する。従
ってこの時の抗体は、還元されてＦａｂ´またはＦａｂ
ｃなどにフラグメント化されたものである。通常の抗体
の還元では、ヒンジ部のＳ−Ｓ結合のみ還元されてＳＨ
基が生じ、他の部位のＳ−Ｓ結合は還元されない。従っ
てヒンジ部のＳ−Ｓ結合から生じたＳＨ基のみが固定化
反応に用いられることとなり、この特定の部位を介して
抗体の固定化が行われる。
それを介して抗体を担体に固定化する場合を説明する。
例えばインタクトのマウス抗体ＩｇＧ１のヒンジ部にお
いて２本のＨ鎖がＳ−Ｓ結合しており、それを還元した
ときに生じるＳＨ基を本発明では固定化に利用する。従
ってこの時の抗体は、還元されてＦａｂ´またはＦａｂ
ｃなどにフラグメント化されたものである。通常の抗体
の還元では、ヒンジ部のＳ−Ｓ結合のみ還元されてＳＨ
基が生じ、他の部位のＳ−Ｓ結合は還元されない。従っ
てヒンジ部のＳ−Ｓ結合から生じたＳＨ基のみが固定化
反応に用いられることとなり、この特定の部位を介して
抗体の固定化が行われる。
【０００８】抗体の還元に用いられる還元剤には特に限
定はなく、通常用いられるものを使用することができ
る。例えば、メルカプトエタノール、メルカプトエチル
アミン、ジチオスレイトールなどがあげられる。抗体の
還元は、インタクトの抗体からでもＦ（ａｂ´）2フラ
グメントからでも行うことができる。
定はなく、通常用いられるものを使用することができ
る。例えば、メルカプトエタノール、メルカプトエチル
アミン、ジチオスレイトールなどがあげられる。抗体の
還元は、インタクトの抗体からでもＦ（ａｂ´）2フラ
グメントからでも行うことができる。
【０００９】抗体の糖鎖を介して抗体を担体に結合させ
る場合は、例えばレクチン等を固定化させた担体に、抗
体のＦｃ部分に存在する糖鎖を結合させることにより、
抗体を固定化することができる。これはレクチンが糖結
合性蛋白質だからである。
る場合は、例えばレクチン等を固定化させた担体に、抗
体のＦｃ部分に存在する糖鎖を結合させることにより、
抗体を固定化することができる。これはレクチンが糖結
合性蛋白質だからである。
【００１０】抗体に導入させた官能基を介して抗体を担
体に結合させる場合は、例えば抗体遺伝子又は抗体の抗
原認識部分を含む遺伝子に６個のヒスチジンをコードす
る遺伝子を導入し、大腸菌、酵母、株化細胞などで発現
させる。一方、担体表面にＮＴＡ（Ｎ−（５−ａｍｉｎ
ｏ−１−ｃａｒｂｏｘｙｐｅｎｔｙｌ）ｉｍｉｎｏｄｉ
ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ）などを用いてニッケルを固定
化し、この状態でヒスチジンを末端に発現させた抗体を
加えると、ヒスチジン部分がニッケルに配位するため、
特異的かつ一定方向に、担体表面に抗体が固定化される
ことになる（Ｅ． Ｈｏｃｈｕｌｉ， Ｊｏｕｒｎａｌ
ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ， １９８８，
４４４，２９３（１９８８））。
体に結合させる場合は、例えば抗体遺伝子又は抗体の抗
原認識部分を含む遺伝子に６個のヒスチジンをコードす
る遺伝子を導入し、大腸菌、酵母、株化細胞などで発現
させる。一方、担体表面にＮＴＡ（Ｎ−（５−ａｍｉｎ
ｏ−１−ｃａｒｂｏｘｙｐｅｎｔｙｌ）ｉｍｉｎｏｄｉ
ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ）などを用いてニッケルを固定
化し、この状態でヒスチジンを末端に発現させた抗体を
加えると、ヒスチジン部分がニッケルに配位するため、
特異的かつ一定方向に、担体表面に抗体が固定化される
ことになる（Ｅ． Ｈｏｃｈｕｌｉ， Ｊｏｕｒｎａｌ
ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ， １９８８，
４４４，２９３（１９８８））。
【００１１】本発明において、抗体が固定化される担体
には特に限定はなく、通常使用されるもので良い。例え
ばプラスチック、ガラス、架橋デキストラン、ニトロセ
ルロース膜、アガロース、セルロース、ポリアクリルア
ミドなどがあげられる。
には特に限定はなく、通常使用されるもので良い。例え
ばプラスチック、ガラス、架橋デキストラン、ニトロセ
ルロース膜、アガロース、セルロース、ポリアクリルア
ミドなどがあげられる。
【００１２】本発明では、抗体を担体に直接結合させて
もよい。しかしながら、抗体と担体との間にはリンカー
を介在させることが好ましい。リンカーの一方の端は、
抗体と結合するための結合基を持つか、または結合基を
導入できるものである。結合基としては、特に限定はな
いが、抗体のヒンジ部のＳＨ基を介する場合は、マレイ
ミド基、ピリジルジスルフィド基、ナフチルジスルフィ
ド基、活性ハロゲン、チオフタルイミドなどがあげられ
る。リンカーの例としては、直鎖または分岐のアルキル
基やピペラジニル基、４級アンモニウムなどの親水性基
を含むもの、またオリゴエチレングリコールなどがあ
る。
もよい。しかしながら、抗体と担体との間にはリンカー
を介在させることが好ましい。リンカーの一方の端は、
抗体と結合するための結合基を持つか、または結合基を
導入できるものである。結合基としては、特に限定はな
いが、抗体のヒンジ部のＳＨ基を介する場合は、マレイ
ミド基、ピリジルジスルフィド基、ナフチルジスルフィ
ド基、活性ハロゲン、チオフタルイミドなどがあげられ
る。リンカーの例としては、直鎖または分岐のアルキル
基やピペラジニル基、４級アンモニウムなどの親水性基
を含むもの、またオリゴエチレングリコールなどがあ
る。
【００１３】リンカーの他方の端は担体に結合させれば
よい。この場合、リンカーと担体とを直接結合させても
よいが、さらに他の物質を介して結合させてもよい。例
えば担体とリンカーとの間にリガンド及びそれに対する
レセプターを介在させ、それを介して抗体を担体に結合
させてもよい。例えばリンカーの端にリガンド（または
レセプター）を結合させ、担体表面にはリガンドに対す
るレセプター（またはリガント）を結合させ、その両者
を結合させることにより抗体の固定化を行うことができ
る。
よい。この場合、リンカーと担体とを直接結合させても
よいが、さらに他の物質を介して結合させてもよい。例
えば担体とリンカーとの間にリガンド及びそれに対する
レセプターを介在させ、それを介して抗体を担体に結合
させてもよい。例えばリンカーの端にリガンド（または
レセプター）を結合させ、担体表面にはリガンドに対す
るレセプター（またはリガント）を結合させ、その両者
を結合させることにより抗体の固定化を行うことができ
る。
【００１４】リガンド及びレセプターとしては特に限定
はないが、例えばアビジン−ビオチン、インシュリンと
インシュリンレセプター、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳ
Ｈ）とＴＳＨレセプターなどのホルモンとそのレセプタ
ー、ズブチリシンとズブチリシンインヒビター等のプロ
テアーゼとそのインヒビター、アンヒドロキモトリプシ
ンとＣ末端アミノ酸としてトリプトファン、チロシン、
フェニルアラニンを持つペプチド、アンヒドロトリプシ
ンとＣ末端アミノ酸としてアルギニン、リジンを持つペ
プチドなどのプロテアーゼとその基質、相補的な配列を
持つ２種類のＤＮＡなどがあげられる。
はないが、例えばアビジン−ビオチン、インシュリンと
インシュリンレセプター、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳ
Ｈ）とＴＳＨレセプターなどのホルモンとそのレセプタ
ー、ズブチリシンとズブチリシンインヒビター等のプロ
テアーゼとそのインヒビター、アンヒドロキモトリプシ
ンとＣ末端アミノ酸としてトリプトファン、チロシン、
フェニルアラニンを持つペプチド、アンヒドロトリプシ
ンとＣ末端アミノ酸としてアルギニン、リジンを持つペ
プチドなどのプロテアーゼとその基質、相補的な配列を
持つ２種類のＤＮＡなどがあげられる。
【００１５】またリガンド及びレセプターばかりでな
く、高分子物質を担体とリンカーとの間に介在させて抗
体の固定化を行ってもよい。例えば、高分子物質をあら
かじめ担体に結合させておき、そこにリンカーを結合さ
せることもできる。高分子物質としては、例えばタンパ
ク質があげられ、具体的にはウシ血清アルブミン、カゼ
インなどが使用できる。そのほかにも、糖鎖、ナイロン
などの合成高分子などがあげられる。
く、高分子物質を担体とリンカーとの間に介在させて抗
体の固定化を行ってもよい。例えば、高分子物質をあら
かじめ担体に結合させておき、そこにリンカーを結合さ
せることもできる。高分子物質としては、例えばタンパ
ク質があげられ、具体的にはウシ血清アルブミン、カゼ
インなどが使用できる。そのほかにも、糖鎖、ナイロン
などの合成高分子などがあげられる。
【００１６】本発明の抗体の固定化法は、特にイムノア
ッセイ用抗体の固定化に好ましく用いられる。それは、
短時間化が要求される診断分野の測定に用いられるため
には、反応性がよい固定化抗体が必要だからである。
ッセイ用抗体の固定化に好ましく用いられる。それは、
短時間化が要求される診断分野の測定に用いられるため
には、反応性がよい固定化抗体が必要だからである。
【００１７】
【実施例】以下、本発明をさらに詳細に説明するために
実施例を示すが、本発明はこれら実施例に限定されるも
のではない。
実施例を示すが、本発明はこれら実施例に限定されるも
のではない。
【００１８】実施例１ ＜抗体のＦ（ａｂ´）2フラグメント化＞抗ＴＳＨ（甲
状腺刺激ホルモン）モノクローナル抗体ＴＳＦ９７２．
３を０．１Ｍクエン酸ナトリウム緩衝液に溶解し、ｐＨ
を３．７に合わせた後、ペプシン（ＳＩＧＭＡ社製）を
４０Ｕ（ユニット）／ｍｇタンパク質になるように加え
た。約１０μｇ分をゲルろ過クロマトグラフィー（東ソ
ー社製、Ｇ３０００ＳＷXL）にかけて、分子量の変化
（１５０，０００から１００，０００）をモニターしな
がら、３７℃でインキュベーションした。約９０％の抗
体がＦ（ａｂ´）2フラグメント化したことを確認した
後、３Ｍ Ｔｒｉｓを加えて中和した。このサンプルに
６０％になるように飽和硫酸ナトリウムを加え、Ｆ（ａ
ｂ´）2フラグメントを沈殿させた後、１２０００ｒｐ
ｍ、２０分遠心して沈殿を分離した。この沈殿を０．１
Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．０）に溶解した後、さらに同
緩衝液で１５時間透析した。
状腺刺激ホルモン）モノクローナル抗体ＴＳＦ９７２．
３を０．１Ｍクエン酸ナトリウム緩衝液に溶解し、ｐＨ
を３．７に合わせた後、ペプシン（ＳＩＧＭＡ社製）を
４０Ｕ（ユニット）／ｍｇタンパク質になるように加え
た。約１０μｇ分をゲルろ過クロマトグラフィー（東ソ
ー社製、Ｇ３０００ＳＷXL）にかけて、分子量の変化
（１５０，０００から１００，０００）をモニターしな
がら、３７℃でインキュベーションした。約９０％の抗
体がＦ（ａｂ´）2フラグメント化したことを確認した
後、３Ｍ Ｔｒｉｓを加えて中和した。このサンプルに
６０％になるように飽和硫酸ナトリウムを加え、Ｆ（ａ
ｂ´）2フラグメントを沈殿させた後、１２０００ｒｐ
ｍ、２０分遠心して沈殿を分離した。この沈殿を０．１
Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．０）に溶解した後、さらに同
緩衝液で１５時間透析した。
【００１９】＜Ｆ（ａｂ´）2フラグメントのＦａｂ´
化＞６００μＬの０．１Ｍリン酸緩衝液、ｐＨ６．０に
溶解した抗ＴＳＨモノクローナル抗体ＴＳＦ９７２．３
Ｆ（ａｂ´）2１０ｍｇに０．１Ｍジチオスレイトール
１５０μＬを加え、３７℃、９０分インキュベーション
した。サンプルをゲルろ過クロマトグラフィー（東ソー
社製、Ｇ３０００ＳＷXL、溶離液は５ｍＭＥＤＴＡ含有
０．１Ｍリン酸緩衝液、ｐＨ６．０、）にかけ、Ｆａｂ
´画分を回収した（１．５１ｍｇ／ｍＬ、５ｍＬ）。
化＞６００μＬの０．１Ｍリン酸緩衝液、ｐＨ６．０に
溶解した抗ＴＳＨモノクローナル抗体ＴＳＦ９７２．３
Ｆ（ａｂ´）2１０ｍｇに０．１Ｍジチオスレイトール
１５０μＬを加え、３７℃、９０分インキュベーション
した。サンプルをゲルろ過クロマトグラフィー（東ソー
社製、Ｇ３０００ＳＷXL、溶離液は５ｍＭＥＤＴＡ含有
０．１Ｍリン酸緩衝液、ｐＨ６．０、）にかけ、Ｆａｂ
´画分を回収した（１．５１ｍｇ／ｍＬ、５ｍＬ）。
【００２０】＜ビオチン−ＳＨ−Ｆａｂ´の作製＞抗Ｔ
ＳＨモノクローナル抗体ＴＳＦ９７２．３Ｆａｂ´
（１．５１ｍｇ／ｍＬ）を３ｍＬ（４．５３ｍｇ）に、
ビオチン−リンカー−マレイミド基を有するＢｉｏｔｉ
ｎ―ＰＥＡＣ５―ｍａｌｅｉｍｉｄｅ（同仁化学社製）
５３０μｇを２０μＬのジメチルスルフォキシドに溶解
して加え、２５℃、１６時間インキュベーションした。
その後ゲルろ過クロマトグラフィー（東ソー社製、Ｇ３
０００ＳＷXL、溶離液は１５０ｍＭ硫酸ナトリウム含有
５０ｍＭリン酸緩衝液、ｐＨ６．６）にかけ、Ｂｉｏｔ
ｉｎ―ＰＥＡＣ５―ｍａｌｅｉｍｉｄｅが結合したＦａ
ｂ´（ビオチン−ＳＨ−Ｆａｂ´とする）画分を回収
し、未反応のＢｉｏｔｉｎ―ＰＥＡＣ５―ｍａｌｅｉｍ
ｉｄｅを除いた。
ＳＨモノクローナル抗体ＴＳＦ９７２．３Ｆａｂ´
（１．５１ｍｇ／ｍＬ）を３ｍＬ（４．５３ｍｇ）に、
ビオチン−リンカー−マレイミド基を有するＢｉｏｔｉ
ｎ―ＰＥＡＣ５―ｍａｌｅｉｍｉｄｅ（同仁化学社製）
５３０μｇを２０μＬのジメチルスルフォキシドに溶解
して加え、２５℃、１６時間インキュベーションした。
その後ゲルろ過クロマトグラフィー（東ソー社製、Ｇ３
０００ＳＷXL、溶離液は１５０ｍＭ硫酸ナトリウム含有
５０ｍＭリン酸緩衝液、ｐＨ６．６）にかけ、Ｂｉｏｔ
ｉｎ―ＰＥＡＣ５―ｍａｌｅｉｍｉｄｅが結合したＦａ
ｂ´（ビオチン−ＳＨ−Ｆａｂ´とする）画分を回収
し、未反応のＢｉｏｔｉｎ―ＰＥＡＣ５―ｍａｌｅｉｍ
ｉｄｅを除いた。
【００２１】＜アビジンービオチン固定化Ｆａｂ´と直
接固定Ｆ（ａｂ´）2−１との比較＞９６ウェルプレー
ト（ＭＡＸＩＳＯＲＰ ｂｌａｃｋ 、ＮＵＮＣ社製）
にアビジン（和光純薬社製）を２μｇ／ウェル／１００
μＬ０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）の濃度で分注
し、３７℃、１時間インキュベーションした。０．０５
％Ｔｗｅｅｎ含有０．１Ｍ Ｔｒｉｓ―ＨＣｌ緩衝液
（ｐＨ８．０）でウェルを３回洗浄後、０．５％ＢＳＡ
含有Ｔｒｉｓ―ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．０）を分注して
３７℃、１時間インキュベーションし、ブロッキングし
た。洗浄後、前述のビオチン−ＳＨ−Ｆａｂ´を０．５
％ＢＳＡ含有Ｔｒｉｓ―ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．０）に
溶解し２００ｎｇ／ウェル／１００μＬ分注し、３７
℃、１時間インキュベーションした。結果として、１０
７ｎｇ／ウェルの抗体が固定化された。これをアビジン
ービオチン固定化Ｆａｂ´とする。
接固定Ｆ（ａｂ´）2−１との比較＞９６ウェルプレー
ト（ＭＡＸＩＳＯＲＰ ｂｌａｃｋ 、ＮＵＮＣ社製）
にアビジン（和光純薬社製）を２μｇ／ウェル／１００
μＬ０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）の濃度で分注
し、３７℃、１時間インキュベーションした。０．０５
％Ｔｗｅｅｎ含有０．１Ｍ Ｔｒｉｓ―ＨＣｌ緩衝液
（ｐＨ８．０）でウェルを３回洗浄後、０．５％ＢＳＡ
含有Ｔｒｉｓ―ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．０）を分注して
３７℃、１時間インキュベーションし、ブロッキングし
た。洗浄後、前述のビオチン−ＳＨ−Ｆａｂ´を０．５
％ＢＳＡ含有Ｔｒｉｓ―ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．０）に
溶解し２００ｎｇ／ウェル／１００μＬ分注し、３７
℃、１時間インキュベーションした。結果として、１０
７ｎｇ／ウェルの抗体が固定化された。これをアビジン
ービオチン固定化Ｆａｂ´とする。
【００２２】一方、抗ＴＳＨモノクローナル抗体ＴＳＦ
９７２．３Ｆ（ａｂ´）2を０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐ
Ｈ７．４）に溶解し、ＭＡＸＩＳＯＲＰ ｂｌａｃｋに
２００ｎｇ／ウェル／１００μＬの濃度で分注し、３７
℃、１時間インキュベーションした。ウェルを洗浄後、
０．５％ＢＳＡ含有Ｔｒｉｓ―ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．
０）を分注して３７℃、１時間インキュベーションし、
ブロッキングした。結果として、１３７ｎｇ／ウェルの
抗体が固定化された。これを直接固定Ｆ（ａｂ´）2−
１とする。
９７２．３Ｆ（ａｂ´）2を０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐ
Ｈ７．４）に溶解し、ＭＡＸＩＳＯＲＰ ｂｌａｃｋに
２００ｎｇ／ウェル／１００μＬの濃度で分注し、３７
℃、１時間インキュベーションした。ウェルを洗浄後、
０．５％ＢＳＡ含有Ｔｒｉｓ―ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．
０）を分注して３７℃、１時間インキュベーションし、
ブロッキングした。結果として、１３７ｎｇ／ウェルの
抗体が固定化された。これを直接固定Ｆ（ａｂ´）2−
１とする。
【００２３】以上のようにして得られた、Ｆａｂ´のＳ
Ｈ基をリンカー及びアビジンービオチンを介して固定化
された抗体（アビジン−ビオチン固定化Ｆａｂ´）と、
物理吸着で直接ウェルに固定化された抗体（直接固定Ｆ
（ａｂ´）2−１）とを用いてエンザイムイムノアッセ
イを行った。
Ｈ基をリンカー及びアビジンービオチンを介して固定化
された抗体（アビジン−ビオチン固定化Ｆａｂ´）と、
物理吸着で直接ウェルに固定化された抗体（直接固定Ｆ
（ａｂ´）2−１）とを用いてエンザイムイムノアッセ
イを行った。
【００２４】モノクローナル抗体ＴＳＥ０３１．１（モ
ノクローナル抗体ＴＳＦ９７２．３とはＴＳＨの異なる
部分を認識する）とアルカリフォスファターゼとのコン
ジュゲートを２μｇ／ｍＬに希釈液（１５％ウシ血清
（日本生物材料社製）、１ｍＭＭｇＣｌ2（和光純薬社
製）、及び０．１ｍＭ ＺｎＣｌ2（和光純薬社製）含
有５０ｍＭ Ｔｒｉｓ―ＨＣｌ緩衝液（和光純薬社
製）、ｐＨ８．０）で希釈し、５０μＬずつ抗体を固定
化したウェルに分注した。次にヒトＴＳＨ（スクリップ
ス社製）を希釈液で１０μＵ（ユニット）／ｍＬに希釈
し、５０μＬずつウェルに分注した後、３７℃でインキ
ュベーションした。ヒトＴＳＨを添加してから１０分、
３０分、６０分、９０分、又は１２０分後にウェルを洗
浄後、ＬｕｍｉＰｈｏｓ５３０（和光純薬社製）１００
μＬ加え、室温で２０分放置してから、ＬＵＭＩＮＯＵ
Ｓ ＣＴ―９０００Ｄ（ダイアヤトロン社製）にかけ、
化学発光を測定した。
ノクローナル抗体ＴＳＦ９７２．３とはＴＳＨの異なる
部分を認識する）とアルカリフォスファターゼとのコン
ジュゲートを２μｇ／ｍＬに希釈液（１５％ウシ血清
（日本生物材料社製）、１ｍＭＭｇＣｌ2（和光純薬社
製）、及び０．１ｍＭ ＺｎＣｌ2（和光純薬社製）含
有５０ｍＭ Ｔｒｉｓ―ＨＣｌ緩衝液（和光純薬社
製）、ｐＨ８．０）で希釈し、５０μＬずつ抗体を固定
化したウェルに分注した。次にヒトＴＳＨ（スクリップ
ス社製）を希釈液で１０μＵ（ユニット）／ｍＬに希釈
し、５０μＬずつウェルに分注した後、３７℃でインキ
ュベーションした。ヒトＴＳＨを添加してから１０分、
３０分、６０分、９０分、又は１２０分後にウェルを洗
浄後、ＬｕｍｉＰｈｏｓ５３０（和光純薬社製）１００
μＬ加え、室温で２０分放置してから、ＬＵＭＩＮＯＵ
Ｓ ＣＴ―９０００Ｄ（ダイアヤトロン社製）にかけ、
化学発光を測定した。
【００２５】結果を図１に示す。図中、白丸はアビジン
−ビオチン固定化Ｆａｂ´を用いた場合、白四角は直接
固定Ｆ（ａｂ´）2−１を用いた場合をそれぞれ示す。
図から明らかなように、アビジンービオチン固定化Ｆａ
ｂ´の方が直接固定Ｆ（ａｂ´）2−１よりも固定化さ
れた抗体量は少ないにもかかわらず反応性は高かった。
これは、直接固定Ｆ（ａｂ´）2−１は抗体の抗原認識
部位が担体に固定化されている場合があるからである。
一方、アビジン−ビオチン固定化Ｆａｂ´は抗体の抗原
認識部位以外の部位で特異的に担体に結合していると考
えられる。
−ビオチン固定化Ｆａｂ´を用いた場合、白四角は直接
固定Ｆ（ａｂ´）2−１を用いた場合をそれぞれ示す。
図から明らかなように、アビジンービオチン固定化Ｆａ
ｂ´の方が直接固定Ｆ（ａｂ´）2−１よりも固定化さ
れた抗体量は少ないにもかかわらず反応性は高かった。
これは、直接固定Ｆ（ａｂ´）2−１は抗体の抗原認識
部位が担体に固定化されている場合があるからである。
一方、アビジン−ビオチン固定化Ｆａｂ´は抗体の抗原
認識部位以外の部位で特異的に担体に結合していると考
えられる。
【００２６】実施例２ ＜ＢＳＡ−マレイミド−固定化Ｆａｂ´の作製＞ＭＡＸ
ＩＳＯＲＰ ｂｌａｃｋに０．５％ＢＳＡ含有Ｔｒｉｓ
―ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．０）を３００μＬ／ウェル加
え、３７℃、１時間インキュベーションした。０．５％
ＢＳＡ含有Ｔｒｉｓ―ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．０）を捨
てた後、０．１Ｍリン酸緩衝液に溶解した１ｍｇ／ｍＬ
のｓｕｌｆｏ−ＳＭＣＣ（ピアス社製；リンカー及びマ
レイミド基を有する）１００μＬをウェルに分注し、３
０℃、１時間インキュベーションした後、洗浄した。次
いで実施例１で作製した抗ＴＳＨモノクローナル抗体Ｔ
ＳＦ９７２．３Ｆａｂ´を希釈列を作ってウェルに加え
た。結果として、１ウェルあたり、７．１、４．９、
２．８、１．６、又は１．０ｎｇのＦａｂ´が固定化さ
れた。これをＢＳＡ−マレイミド固定化Ｆａｂ´とす
る。
ＩＳＯＲＰ ｂｌａｃｋに０．５％ＢＳＡ含有Ｔｒｉｓ
―ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．０）を３００μＬ／ウェル加
え、３７℃、１時間インキュベーションした。０．５％
ＢＳＡ含有Ｔｒｉｓ―ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．０）を捨
てた後、０．１Ｍリン酸緩衝液に溶解した１ｍｇ／ｍＬ
のｓｕｌｆｏ−ＳＭＣＣ（ピアス社製；リンカー及びマ
レイミド基を有する）１００μＬをウェルに分注し、３
０℃、１時間インキュベーションした後、洗浄した。次
いで実施例１で作製した抗ＴＳＨモノクローナル抗体Ｔ
ＳＦ９７２．３Ｆａｂ´を希釈列を作ってウェルに加え
た。結果として、１ウェルあたり、７．１、４．９、
２．８、１．６、又は１．０ｎｇのＦａｂ´が固定化さ
れた。これをＢＳＡ−マレイミド固定化Ｆａｂ´とす
る。
【００２７】対照として、実施例１で作製した抗ＴＳＨ
モノクローナル抗体ＴＳＦ９７２．３Ｆ（ａｂ´）2を
０．１Ｍリン酸緩衝液、ｐＨ７．４に溶解し、希釈列を
作って直接ウェルに添加した。０．５％ＢＳＡ含有Ｔｒ
ｉｓ―ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．０）でブロッキング後、
結果として７６．３、３５．０、１６．８、８．４、又
は４．８ｎｇのＦ（ａｂ´）2が固定化された。これを
直接固定Ｆ（ａｂ´）2−２とする。
モノクローナル抗体ＴＳＦ９７２．３Ｆ（ａｂ´）2を
０．１Ｍリン酸緩衝液、ｐＨ７．４に溶解し、希釈列を
作って直接ウェルに添加した。０．５％ＢＳＡ含有Ｔｒ
ｉｓ―ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．０）でブロッキング後、
結果として７６．３、３５．０、１６．８、８．４、又
は４．８ｎｇのＦ（ａｂ´）2が固定化された。これを
直接固定Ｆ（ａｂ´）2−２とする。
【００２８】＜ＢＳＡ−マレイミド−固定化Ｆａｂ´と
直接固定Ｆ（ａｂ´）2−２との比較＞前項で作製した
固定化抗体希釈列のウェルに、モノクローナル抗体ＴＳ
Ｅ０３１．１とアルカリフォスファターゼとのコンジュ
ゲートを２μｇ／ｍＬとなるよう前述の希釈液で希釈
し、５０μＬずつ分注した。次にヒトＴＳＨ（スクリッ
プス社製）を希釈液で１０μＵ／ｍＬに希釈し、５０μ
Ｌずつウェルに分注した後、３７℃で４０分間インキュ
ベーションした。ウェルを洗浄後、ＬｕｍｉＰｈｏｓ５
３０ １００μＬ加え、室温で２０分放置してから、Ｌ
ＵＭＩＮＯＵＳ ＣＴ―９０００Ｄにかけ、化学発光を
測定した。
直接固定Ｆ（ａｂ´）2−２との比較＞前項で作製した
固定化抗体希釈列のウェルに、モノクローナル抗体ＴＳ
Ｅ０３１．１とアルカリフォスファターゼとのコンジュ
ゲートを２μｇ／ｍＬとなるよう前述の希釈液で希釈
し、５０μＬずつ分注した。次にヒトＴＳＨ（スクリッ
プス社製）を希釈液で１０μＵ／ｍＬに希釈し、５０μ
Ｌずつウェルに分注した後、３７℃で４０分間インキュ
ベーションした。ウェルを洗浄後、ＬｕｍｉＰｈｏｓ５
３０ １００μＬ加え、室温で２０分放置してから、Ｌ
ＵＭＩＮＯＵＳ ＣＴ―９０００Ｄにかけ、化学発光を
測定した。
【００２９】結果を図２に示す。図中、黒四角はＢＳＡ
−マレイミド−固定化Ｆａｂ´を用いた場合、黒三角は
直接固定Ｆ（ａｂ´）2−２を用いた場合である。図か
ら明らかなように、同じ発光量を示すときの抗体量は、
直接固定Ｆ（ａｂ´）2−２よりもＢＳＡ−マレイミド
−固定化Ｆａｂ´の方が少なかった。例えば、５０，０
００カウントを示すときの抗体量は、ＢＳＡ−マレイミ
ド−固定化Ｆａｂ´では２．８ｎｇだが、直接固定Ｆ
（ａｂ´）2−２では７６ｎｇであった。これは直接固
定Ｆ（ａｂ´）2−２は抗体の抗原認識部位が担体に固
定化されている場合があるからである。一方、ＢＳＡ−
マレイミド−固定化Ｆａｂ´は抗体の抗原認識部位以外
の部位で特異的に担体に結合していると考えられる。
−マレイミド−固定化Ｆａｂ´を用いた場合、黒三角は
直接固定Ｆ（ａｂ´）2−２を用いた場合である。図か
ら明らかなように、同じ発光量を示すときの抗体量は、
直接固定Ｆ（ａｂ´）2−２よりもＢＳＡ−マレイミド
−固定化Ｆａｂ´の方が少なかった。例えば、５０，０
００カウントを示すときの抗体量は、ＢＳＡ−マレイミ
ド−固定化Ｆａｂ´では２．８ｎｇだが、直接固定Ｆ
（ａｂ´）2−２では７６ｎｇであった。これは直接固
定Ｆ（ａｂ´）2−２は抗体の抗原認識部位が担体に固
定化されている場合があるからである。一方、ＢＳＡ−
マレイミド−固定化Ｆａｂ´は抗体の抗原認識部位以外
の部位で特異的に担体に結合していると考えられる。
【００３０】実施例３ ＜Ｎ−ハイドロキシサクシイミド（ＮＨＳ）を用いてビ
オチン標識したＦ（ａｂ´）2の作製＞アミノ基及びリ
ジン残基に結合するＮＨＳを用いてビオチン標識を行っ
た。即ち、実施例１で作製した抗ＴＳＨモノクローナル
抗体ＴＳＦ９７２．３Ｆ（ａｂ´）2３．１ｍｇ／ｍｌ
の１６０μｌ（５００μｇ）に、７７ｍｇ／ｍｌのＢｉ
ｏｔｉｎ−（ＡＣ５）2−ｓｕｌｆｏ−ＯＳｕ（同仁化
学社製、ビオチン−リンカー−サクシイミド基を有す
る）１μｌを加え、４℃で１６時間インキュベーション
した後、ゲル濾過クロマトグラフィー（東ソー社製、Ｇ
３０００ＳＷXL、溶離液は５０ｍＭリン酸緩衝液、１５
０ｍＭ硫酸ナトリウム、ｐＨ６．６）にかけ、Ｂｉｏｔ
ｉｎ−（ＡＣ５）2−ｓｕｌｆｏ−ＯＳｕが結合したＦ
（ａｂ´）2（ビオチン−ＮＨＳ−Ｆ（ａｂ´）2とす
る）画分を回収し、未反応のＢｉｏｔｉｎ−（ＡＣ５）
2−ｓｕｌｆｏ−ＯＳｕを除いた。
オチン標識したＦ（ａｂ´）2の作製＞アミノ基及びリ
ジン残基に結合するＮＨＳを用いてビオチン標識を行っ
た。即ち、実施例１で作製した抗ＴＳＨモノクローナル
抗体ＴＳＦ９７２．３Ｆ（ａｂ´）2３．１ｍｇ／ｍｌ
の１６０μｌ（５００μｇ）に、７７ｍｇ／ｍｌのＢｉ
ｏｔｉｎ−（ＡＣ５）2−ｓｕｌｆｏ−ＯＳｕ（同仁化
学社製、ビオチン−リンカー−サクシイミド基を有す
る）１μｌを加え、４℃で１６時間インキュベーション
した後、ゲル濾過クロマトグラフィー（東ソー社製、Ｇ
３０００ＳＷXL、溶離液は５０ｍＭリン酸緩衝液、１５
０ｍＭ硫酸ナトリウム、ｐＨ６．６）にかけ、Ｂｉｏｔ
ｉｎ−（ＡＣ５）2−ｓｕｌｆｏ−ＯＳｕが結合したＦ
（ａｂ´）2（ビオチン−ＮＨＳ−Ｆ（ａｂ´）2とす
る）画分を回収し、未反応のＢｉｏｔｉｎ−（ＡＣ５）
2−ｓｕｌｆｏ−ＯＳｕを除いた。
【００３１】＜ビオチン−ＳＨ−Ｆａｂ´とビオチン−
ＮＨＳ−Ｆ（ａｂ´）2と直接固定Ｆ（ａｂ´）2との比
較＞前述のビオチン−ＮＨＳ−Ｆ（ａｂ´）2と実施例
１で作製したビオチン−ＳＨ−Ｆａｂ´は、ストレプト
アビジンダイナビーズ（直径２．８μｍ、ダイナル社）
に、それぞれアビジン−ビオチン結合を介して固定化さ
れた。また実施例１で作製したＦ（ａｂ´）2はトシル
活性化ダイナビーズ（直径２．８μｍ、ダイナル社）に
常法により物理吸着により直接固定化した。結果として
５０μｇのダイナビーズにそれぞれ１６０〜１７０ｎｇ
の抗体が固定化された。
ＮＨＳ−Ｆ（ａｂ´）2と直接固定Ｆ（ａｂ´）2との比
較＞前述のビオチン−ＮＨＳ−Ｆ（ａｂ´）2と実施例
１で作製したビオチン−ＳＨ−Ｆａｂ´は、ストレプト
アビジンダイナビーズ（直径２．８μｍ、ダイナル社）
に、それぞれアビジン−ビオチン結合を介して固定化さ
れた。また実施例１で作製したＦ（ａｂ´）2はトシル
活性化ダイナビーズ（直径２．８μｍ、ダイナル社）に
常法により物理吸着により直接固定化した。結果として
５０μｇのダイナビーズにそれぞれ１６０〜１７０ｎｇ
の抗体が固定化された。
【００３２】これら３種の固定化抗体を用いてエンザイ
ムイムノアッセイを行った。即ち、０．５％ＢＳＡを含
むＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．０）であらかじめ
ブロッキングしたウエルに、各抗体固定化ビーズ５０μ
ｇをいれた。前述のモノクローナル抗体ＴＳＥ０３１．
１とアルカリホスファターゼとのコンジュゲートを２μ
ｇ／ｍｌに前述の希釈液で希釈し、５０μｌずつウエル
に分注した。次にヒトＴＳＨ（スクリップス社製）を希
釈液で１０μＵ／ｍｌに希釈し、５０μｌずつウエルに
分注した後、３７℃でインキュベーションした。ヒトＴ
ＳＨを添加してから１０分，３０分，６０分，１２０分
後にビーズを洗浄後、ＬｕｍｉＰｈｏｓ５３０（和光純
薬社製）１００μｌを加え、３７℃で２０分放置してか
ら、ＬＵＭＩＮＯＵＳ ＣＴ−９０００Ｄ（ダイアヤト
ロン社製）にかけ、化学発光を測定した。
ムイムノアッセイを行った。即ち、０．５％ＢＳＡを含
むＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．０）であらかじめ
ブロッキングしたウエルに、各抗体固定化ビーズ５０μ
ｇをいれた。前述のモノクローナル抗体ＴＳＥ０３１．
１とアルカリホスファターゼとのコンジュゲートを２μ
ｇ／ｍｌに前述の希釈液で希釈し、５０μｌずつウエル
に分注した。次にヒトＴＳＨ（スクリップス社製）を希
釈液で１０μＵ／ｍｌに希釈し、５０μｌずつウエルに
分注した後、３７℃でインキュベーションした。ヒトＴ
ＳＨを添加してから１０分，３０分，６０分，１２０分
後にビーズを洗浄後、ＬｕｍｉＰｈｏｓ５３０（和光純
薬社製）１００μｌを加え、３７℃で２０分放置してか
ら、ＬＵＭＩＮＯＵＳ ＣＴ−９０００Ｄ（ダイアヤト
ロン社製）にかけ、化学発光を測定した。
【００３３】結果を図３に示す。図中、ダイヤはビオチ
ン−ＮＨＳ−Ｆ（ａｂ´）2を固定化した場合、四角は
ビオチン−ＳＨ−Ｆａｂ´を固定化した場合、三角はＦ
（ａｂ´）2を直接固定化した場合である。図より明ら
かなように、Ｆ（ａｂ´）2を直接固定化した場合、及
びビオチン−ＮＨＳ−Ｆ（ａｂ´）2を固定化した場合
よりも、ビオチン−ＳＨ−Ｆａｂ´を固定化した方が反
応性がよかった。これはＦ（ａｂ´）2を直接固定化し
た場合、及びビオチン−ＮＨＳ−Ｆ（ａｂ´）2を固定
化した場合は、抗体の抗原認識部位が担体に固定化され
ている場合があるからである。一方、ビオチン−ＳＨ−
Ｆａｂ´を固定化した場合は、抗体の抗原認識部位以外
の部位で特異的に担体に結合していると考えられる。
ン−ＮＨＳ−Ｆ（ａｂ´）2を固定化した場合、四角は
ビオチン−ＳＨ−Ｆａｂ´を固定化した場合、三角はＦ
（ａｂ´）2を直接固定化した場合である。図より明ら
かなように、Ｆ（ａｂ´）2を直接固定化した場合、及
びビオチン−ＮＨＳ−Ｆ（ａｂ´）2を固定化した場合
よりも、ビオチン−ＳＨ−Ｆａｂ´を固定化した方が反
応性がよかった。これはＦ（ａｂ´）2を直接固定化し
た場合、及びビオチン−ＮＨＳ−Ｆ（ａｂ´）2を固定
化した場合は、抗体の抗原認識部位が担体に固定化され
ている場合があるからである。一方、ビオチン−ＳＨ−
Ｆａｂ´を固定化した場合は、抗体の抗原認識部位以外
の部位で特異的に担体に結合していると考えられる。
【００３４】
【発明の効果】本発明で提供される固定化方法によれ
ば、抗体の抗原認識部位以外の部位を特異的かつ化学的
に担体に結合させるため、抗体の抗原認識部位を担体や
リンカーと結合させることがなく、抗体の抗原捕捉能力
を維持したまま抗体を固定化することが可能である。特
にリンカーを介して固定化させた場合は、担体表面から
より離れた場所に抗体を固定できるので、担体による立
体障害などの影響を受ける事なく抗体の抗原捕捉能力を
発揮することができる。
ば、抗体の抗原認識部位以外の部位を特異的かつ化学的
に担体に結合させるため、抗体の抗原認識部位を担体や
リンカーと結合させることがなく、抗体の抗原捕捉能力
を維持したまま抗体を固定化することが可能である。特
にリンカーを介して固定化させた場合は、担体表面から
より離れた場所に抗体を固定できるので、担体による立
体障害などの影響を受ける事なく抗体の抗原捕捉能力を
発揮することができる。
【図１】実施例１で測定した化学発光の値を示す図であ
る。
る。
【図２】実施例２で測定した化学発光の値を示す図であ
る。
る。
【図３】実施例３で測定した化学発光の値を示す図であ
る。
る。
Claims (8)
- 【請求項１】抗体の抗原認識部位以外の部位を、特異的
にかつ化学的に担体に結合させることを特徴とする、抗
体の固定化方法。 - 【請求項２】請求項１に記載の方法において、抗体のヒ
ンジ部のＳＨ基を介して抗体を担体に結合させることを
特徴とする方法。 - 【請求項３】請求項１に記載の方法において、抗体の糖
鎖を介して抗体を担体に結合させることを特徴とする方
法。 - 【請求項４】請求項１に記載の方法において、抗体に導
入された官能基を介して抗体を担体に結合させることを
特徴とする方法。 - 【請求項５】請求項１〜４いずれかに記載の方法におい
て、抗体と担体との間にリンカーを介在させることを特
徴とする方法。 - 【請求項６】請求項５に記載の方法において、リンカー
と担体との間にリガンド及びレセプターを介在させるこ
とを特徴とする方法。 - 【請求項７】請求項５に記載の方法において、リンカー
と担体との間に高分子物質を介在させることを特徴とす
る方法。 - 【請求項８】請求項１〜７いずれかに記載の方法におい
て、抗体がイムノアッセイ用抗体であることを特徴とす
る方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12994498A JPH11322799A (ja) | 1998-05-13 | 1998-05-13 | 抗体の固定化方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12994498A JPH11322799A (ja) | 1998-05-13 | 1998-05-13 | 抗体の固定化方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH11322799A true JPH11322799A (ja) | 1999-11-24 |
Family
ID=15022305
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP12994498A Pending JPH11322799A (ja) | 1998-05-13 | 1998-05-13 | 抗体の固定化方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH11322799A (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2004040305A1 (ja) * | 2002-10-31 | 2004-05-13 | Reverse Proteomics Research Institute Co., Ltd. | 化合物の固相担体への固定化方法 |
| JP2009510485A (ja) * | 2005-09-21 | 2009-03-12 | コンビマトリックス・コーポレイション | 酵素を用いる電極マイクロアレイにおける結合事象の検出方法 |
| JP2010051764A (ja) * | 2008-07-29 | 2010-03-11 | Fujifilm Corp | 有害物質除去材及び有害物質除去方法 |
| WO2013076959A1 (ja) | 2011-11-25 | 2013-05-30 | パナソニック株式会社 | 生体物質の測定方法およびその測定装置 |
| US10196602B2 (en) | 2007-07-13 | 2019-02-05 | Nmi Naturwissenschaftliches Und Medizinisches Institut An Der Universitaet Tuebingen | Biomaterial based on a hydrophilic polymeric carrier |
-
1998
- 1998-05-13 JP JP12994498A patent/JPH11322799A/ja active Pending
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2004040305A1 (ja) * | 2002-10-31 | 2004-05-13 | Reverse Proteomics Research Institute Co., Ltd. | 化合物の固相担体への固定化方法 |
| JPWO2004040305A1 (ja) * | 2002-10-31 | 2006-03-02 | 株式会社リバース・プロテオミクス研究所 | 化合物の固相担体への固定化方法 |
| US7645614B2 (en) | 2002-10-31 | 2010-01-12 | Reverse Proteomics Research Institute Co., Ltd. | Method of immobilizing compound on solid phase support |
| JP2009510485A (ja) * | 2005-09-21 | 2009-03-12 | コンビマトリックス・コーポレイション | 酵素を用いる電極マイクロアレイにおける結合事象の検出方法 |
| US10196602B2 (en) | 2007-07-13 | 2019-02-05 | Nmi Naturwissenschaftliches Und Medizinisches Institut An Der Universitaet Tuebingen | Biomaterial based on a hydrophilic polymeric carrier |
| JP2010051764A (ja) * | 2008-07-29 | 2010-03-11 | Fujifilm Corp | 有害物質除去材及び有害物質除去方法 |
| WO2013076959A1 (ja) | 2011-11-25 | 2013-05-30 | パナソニック株式会社 | 生体物質の測定方法およびその測定装置 |
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