JPH11500448A - アポプトシス阻害剤としてのＲＡＲ−γアンタゴニストリガンドまたはＲＡＲ−αアゴニストリガンド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 少なくとも１つの細胞群におけるアポプトシス速度を低下させるための製薬組成物の調製における、ＲＡＲ−αタイプのレセプターに特異的なアゴニストリガンド及びＲＡＲ−γタイプのレセプターに特異的なアンタゴニストリガンドから選択される少なくとも１つのリガンドの使用。この組成物は、少なくとも１つの細胞群におけるアポプトシスの過剰な速度に伴う疾患または障害を治療するのに特に適している。

Description

【発明の詳細な説明】 アポプトシス阻害剤としての ＲＡＲ−γアンタゴニストリガンドまたはＲＡＲ−αアゴニストリガンド 本発明は、特定のレチノイド類の、アポプトシス速度を低下させるための製薬 組成物の調製における使用に関する。 細胞死には２つのメカニズムが含まれる。第１は、古典的なタイプで、壊死と 呼ばれる。モルホロジー的に、壊死は、ミトコンドリア及び細胞質の膨張と核の 歪み、並びに、それに続く細胞の破壊とその自己分解を特徴とし、後者は炎症現 象をともなう。壊死は、受動的かつ偶発的に起こる。組織の壊死は、一般的に、 例えば物理的外傷を受けた細胞によって、または化学的毒素によって起こる。 細胞死の他の形態は、アポプトシス（枯死）と呼ばれる［Kerr，J.F.R．and W yllie，A.H.，Br.J.Cancer，265，239(1972)］が、壊死とは異なり、アポプトシ スは炎症現象をもたらさない。アポプトシスは、種々の生理学的状況下で起こり 得ることが報告されている。これは細胞自滅の高度に選択的な形態であり、容易 に観察可能なモルホロジー的及び生化学的現象によって特徴づけられる。即ち、 エンドヌクレアーゼ活性の有無によらないクロマチンの凝縮、アポプトシス体の 形成、及びエンドヌクレアーゼの活性化によるデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）の１ ８０−２００塩基対ＤＮＡフラグメント（これらのフラグメントは、アガロース ゲル電気泳動によって観察できる）への断片化が特に観察される。 アポプトシスは、組織成長、分化及び再生に含まれるプログラムされた細胞死 として認識され得る。また、細胞の分化、成長及び成熟は、アポプトシスと密接 に関連し、細胞の分化、成長及び成熟において役割を演ずることのできる物質も またアポプトシスの現象に関連していると考えられている。よって、良好な健康 状態のヒトでは、これら全ての現象が平衡状態にある。 医学の分野において、いくつかの病理学的状態が、調節不能であるか否かに関 わらず、修正されたアポプトシスメカニズム、即ち、平衡を達成するために他の 生物学的現象の脱調節をもたらさないメカニズムを示す。即ち、アポプトシスを 誘発又は抑制することによるアポプトシスの意図的な修正が、多くの疾患、特に 癌、自己免疫疾患及びアレルギーの場合のような不十分なアポプトシス速度に伴 う疾患、あるいは、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）免疫不全症候群、神経退行 性疾患（アルツハイマー病）または心筋梗塞の間に誘発される過剰損傷の場合の ようなアポプトシスの過剰な速度に伴う疾患の治療を可能にすることが報告され ている 特に、シクロヘキシミド、シクロスポリン、及びある種のインターロイキンと いった多くのアポプトシス阻害剤が既に記載されている。 レチノイド類の分野では、全トランス−レチン酸が、多くの正常及び形質転換 された細胞タイプの分化及び増殖の調節剤（例えば、阻害剤、あるいは、処理す る細胞の性質によっては刺激剤）であることが知られている。例えば、表皮のケ ラチン細胞等の上皮細胞の分化を阻害する。また、黒色腫細胞などの形質転換さ れた多くの細胞の増殖を阻害する。増殖及び分化に対するこれらの効果は、例え ばＨＬ−６０に分類されるヒトのプロミエロサイト細胞の場合のように単一のタ イプの細胞刺激に影響を与えうる。よって、これらの細胞の増殖が全トランス− レチン酸によって阻害されること、同時にそれらの顆粒球への分化及びそれらの アポプトシスが誘発されることが知られている。 一般的に、全トランス−レチン酸が、ＲＡＲ（レチン酸レセプター）と呼ばれ 細胞核に存在する核レセプターと相互作用することによって細胞の分化及び増殖 に作用することが知られている。今日までに、各々ＲＡＲ−α、ＲＡＲ−β及び ＲＡＲ−γと呼ばれるＲＡＲレセプターの３つのサブタイプが同定されている。 リガンド（例えば全トランス−レチン酸）に結合した後、これらのレセプターは 、レチン酸に調節される遺伝子のプロモータ領域の特異的な反応成分（ＲＡＲＥ ）と相互作用する。反応因子と結合するために、ＲＡＲは、ＲＸＲとして知られ る他のタイプのレセプターとヘテロダイマーを形成する。ＲＸＲの天然リガンド は、９-シス-レチン酸である。ＲＸＲはマスター調節タンパク質であるとして認 識されるが、それらが、ＲＡＲとの相互作用と同様に、ビタミンＤ３のレセプタ ー（ＶＤＲ）、トリヨードチロキシンのレセプター（ＴＲ）及びＰＰＡＲ（ペル オキシソーム増殖因子活性化レセプター）といったステロイド／甲状腺レセプタ ー のスーパーファミリーの他の成員と相互作用して、ヘテロダイマーを形成するか らである。さらに、ＲＸＲは特異的反応因子（ＲＸＲＥ）とホモダイマーの形態 で相互作用しうる。これらの複合体相互作用、及び、組織及び細胞タイプに依存 して異なって発現される多数のＲＡＲ及びＲＸＲレセプターの存在は、実質的に 全ての細胞における多面発現性の効果を説明する。 通常は「レチノイド類」と呼ばれる、全トランス−レチン酸又は９-シス-レチ ン酸の合成構造類似物の多くが今日までに文献に記載されている。これらの分子 の中には、ＲＡＲあるいはＲＸＲに結合し、特異的に活性化できるものもある。 さらに、幾つかの類似物は、ＲＡＲレセプターの特別なサブタイプ（α、βまた はγ）に結合して特異的に活性化できる。最後に、他の類似物は、これらの異な るレセプターに対して特別な選択的活性を示さない。この点において、一例とし て、９-シス-レチン酸は、ＲＡＲとＲＸＲの両方を活性化し、これらいずれのレ セプターにも特筆すべき選択性を持たない（非特異的アゴニストリガンド）が、 全トランス−レチン酸は、サブタイプによらずＲＡＲを選択的に活性化する（Ｒ ＡＲ特異的アゴニストリガンド）。一般的に、かつ定性的に、与えられた物質（ 即ちリガンド）は、与えられたレセプターファミリーに（またはこのファミリー の特定のレセプターに対して）特異的であると言われるのは、前記物質が、この ファミリーの全てのレセプター（または、このファミリーの特定のレセプター各 々）に対して、他のファミリーの全てのレセプター（または、このファミリーに 属するか否かに関わらず、他の全てのレセプター各々）に対して示す親和性より 強い親和性を示すときである。 ９-シス-レチン酸及び全トランス−レチン酸がアポプトシスの調節剤（特に細 胞タイプに依存する活性化剤又は阻害剤）であること、並びに、９-シス-レチン 酸がこれら２つの調節剤の中でより活性が高いことが報告され、この観察結果が 、全トランス−レチン酸はＲＡＲのみを活性化するのに対して、９-シス-レチン 酸はＲＡＲとＲＸＲの両方を活性化するという事実によって説明できるというこ とも報告されている。 従来から述べられている観点から、アポプトシスの新規な調節剤を見出すこと は興味深いことである。 この点において、本出願人は、ＲＡＲ−αタイプのレセプターに特異的なアゴ ニストリガンドまたはＲＡＲ−γタイプのレセプターに特異的なアンタゴニスト リガンドが、種々の細胞タイプ、特に胸腺細胞において、アポプトシスをＲＡＲ −γタイプのレセプターまたはＴ細胞レセプターを用いて誘発したときの、該ア ポプトシスの優れた阻害剤であることを見出した。 よって本発明は、少なくとも１つの細胞群におけるアポプトシス速度を低下さ せるための製薬組成物の調製における、ＲＡＲ−αタイプのレセプターに特異的 なアゴニストリガンド及びＲＡＲ−γタイプのレセプターに特異的なアンタゴニ ストリガンドから選択される少なくとも１つのリガンドの使用に関する。より詳 細には、この細胞群が、アポプトシスをＲＡＲ−γ及び／またはＲＡＲ−αタイ プのレセプターを用いた誘発及び／または阻害によって調節できる細胞、あるい は、アポプトシスをＴ細胞レセプターを用いた誘発により調節できる細胞に相当 する。 本発明の製薬または化粧品組成物は、生理学的に許容される媒体を含む。 本発明では、ＲＡＲ−αタイプのレセプターに特異的なアゴニストリガンドは 、このリガンドのＲＡＲ−αタイプのレセプターに対する解離定数が、このリガ ンドのＲＡＲ−γタイプのレセプターに対する解離定数より少なくとも１０倍低 く、Ｆ９細胞の分化を誘発する全てのアゴニストリガンドを意味すると解される 。 本発明では、ＲＡＲ−γタイプのレセプターに特異的なアンタゴニストリガン ドは、このリガンドのＲＡＲ−γタイプのレセプターに対する解離定数が、この リガンドのＲＡＲ−αタイプのレセプターに対する解離定数より少なくとも１０ 倍低く、Ｆ９細胞の分化を誘発する全てのアイイタゴニストリガンドを意味する と解される。 即ち、全トランス−レチン酸及びその類似物の幾つかは、マウスの胚奇形癌細 胞（Ｆ９細胞）の分化を誘発することができることは知られており；従って、そ れらはＲＡＲレセプターのアゴニストであると認められている。この分化に伴う プラスミノーゲン活性化因子の分泌は、レチノイド類に対するＦ９細胞の生物学 的反応の指標である（Skin Pharmacol.，1990; 3: pp．256-267）。 解離定数は、当業者に標準的な試験を用いて決定される。これらの試験は、特 に以下の参考文献に記載されている：(1)”Selective Synthetic Ligands for N uclear Retinoic Acid Receptor Subtypes”RETINOIDS，Progress in Research and Clinical Applications，19章(261-267頁)，Marcel Dekker Inc.，Maria A ．Livrea and Lester Packer編集；(2)”Synthetic Retinoids: Receptor Selec tivity and Biological Activity”Pharmacol Skin，Basel，Karger，1993，5巻 ，117-127頁；(3)”Selective Synthetic Ligands for Human Nuclear Retinoic Acid Receptors”Skin Pharmacology，1992，5巻，57-65頁；(4)”Identificat ion of Synthetic Retinoids with Selectivity for Human Nuclear Retinoic A cid Receptor-γ”Biochemical and Biophysical Research Communications，18 6巻，2号，1992年 7月，977-983頁；(5)”Selective High Affinity RAR-α or RAR-β Retinoic Acid Receptor Ligands”Mol．Pharmacol.，40巻，556-562頁 。 本発明の他の特徴、態様、目的及び利点は、以下の説明、及び、例示をするた めの非限定的な種々の特別な実施例を読むことにより、さらに明らかになるであ ろう。 ＲＡＲ−αタイプのレセプターに特異的なアゴニストリガンドは、４-（（５ ，６，７，８-テトラヒドロ-５，５，８，８-テトラメチル-２-ナフタレニル） カルボキシアミド）安息香酸、４-（（５，６，７，８-テトラヒドロ-５，５， ８，８-テトラメチル-２-ナフタレニル）カルバモイル）安息香酸、及び、２-ヒ ドロキシ-４-（５，５，８，８-テトラメチル-５，６，７，８-テトラヒドロ-ナ フタレン-２-カルボキシアミド）安息香酸を特に挙げることが出来る。 ＲＡＲ−αタイプのレセプターに特異的なアゴニストリガンドの中で、本発明 では、ＲＡＲ−αタイプのレセプターに対して、ＲＡＲ−γタイプのレセプター に対するよりも、少なくとも２０倍低い解離定数を示すアゴニストリガンド、例 えば、４-（（５，６，７，８-テトラヒドロ-５，５，８，８-テトラメチル-２- ナフタレニル）カルボキシアミド）安息香酸、及び、２-ヒドロキシ-４-（５， ５，８，８-テトラメチル-５，６，７，８-テトラヒドロ-ナフタレン-２-カルボ キシアミド）安息香酸の少なくとも１つを用いるのが好ましい。 ＲＡＲ−γタイプのレセプターに特異的なアンタゴニストリガンドは、２-ヒ ド ロキシ-４-［７-（１-アダマンチル）-６-ベンジルオキシ-２-ナフチル］安息香 酸、２-ヒドロキシ-４-［７-（１-アダマンチル）-６-ヘキシルオキシ-２-ナフ チル］安息香酸、４-［７-（１-アダマンチル）-６-メトキシエトキシエトキシ- ２-ナフチル］安息香酸、５-［７-（１-アダマンチル）-６-ベンジルオキシ-２- ナフチル］-２-チオフェンカルボン酸、４-［７-（１-アダマンチル）-６-ベン ジルオキシ-２-ナフチル］安息香酸、４-［７-（１-アダマンチル）-６-ベンジ ルオキシカルボニル-２-ナフチル］安息香酸、２-ヒドロキシ-４-［７-（１-ア ダマンチル）-６-（４-フルオロベンジル）オキシ-２-ナフチル］安息香酸、４- ［７-（１-アダマンチル）-６-ヘプチルオキシ-２-ナフチル］安息香酸、６-［ ７-（１-アダマンチル）-６-メトキシエトキシメトキシ-２-ナフチル］ニコチン 酸、２-ヒドロキシ-４-［７-（１-アダマンチル）-６-メトキシエトキシメトキ シ-２-ナフチル］安息香酸、２-クロロ-４-［７-（１-アダマンチル）-６-メト キシエトキシメトキシ-２-ナフチル］安息香酸、４-［７-（１-アダマンチル）- ６-メトキシブチルオキシ-２-ナフチル］安息香酸、４-［７-（１-アダマンチル ）-６-メトキシメトキシプロピル-２-ナフチル］安息香酸、４-［７-（１-アダ マンチル）-６-メトキシエトキシプロピル-２-ナフチル］安息香酸、及び、４- ［７-（１-アダマンチル）-６-アセチルオキシブトキシ-２-ナフチル］安息香酸 を特に挙げることが出来る。 本発明では、ＲＡＲ−γタイプのレセプターに特異的なアンタゴニストリガン ドの中で、ＲＡＲ−γタイプのレセプターに対して、ＲＡＲ−αタイプのレセプ ターに対するより、少なくとも２０倍低い解離定数を示すアンタゴニストリガン ド、例えば、４-［７-（１-アダマンチル）-６メトキシエトキシメトキシ-２-ナ フチル］安息香酸等の少なくとも１つを用いるのが好ましい。 よって、本発明の製薬組成物は、少なくとも１つの細胞群の場合におけるアポ プトシスの速度を低下させる必要のあるときに使用することができる。特に、こ の細胞群は、アポプトシスをＲＡＲ−γ及び／またはＲＡＲ−αタイプのレセプ ターを用いた誘発及び／または阻害によって調節できる細胞、あるいは、アポプ トシスをＴ細胞レセプターを用いた誘発により調節できる細胞に相当し、従って 、特に、ＲＡＲ−γ及び／またはＲＡＲ−αタイプのレセプター、またはＴ細胞 レ セプターが存在する細胞群において、例えば、これら３つのタイプのレセプター が存在する胸腺から誘導された細胞においてである。 従って、アポプトシス速度の低下は、アポプトシスの過剰速度が存在し、この 過剰速度が個体によって示される遺伝的又は獲得した状態から生じたものであり 、当該個体に製薬組成物を投与することが望ましい場合に必要であることがわか る。これらの遺伝的または獲得した状態は、アポプトシスを誘発するシグナルを 蓄積しやすく、あるいは、これらのシグナルがアポプトシスを誘発するしきい値 を低下させる。 アポプトシスの過剰な速度に伴う疾患または障害で、特に挙げられるものは、 ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）免疫不全症候群、神経退行性疾患、脊髄形成異 常症候群（形成不能性貧血）、虚血性症候群（心筋梗塞）、毒素（アルコール等 ）に誘発された肝臓疾患、脱毛症、紫外線による皮膚障害、扁平苔癬、皮膚萎縮 症、白内障、あるいは移植拒絶である。 また、神経退行性疾患は、特に、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮 性外側脊髄硬化症、及び、クレウツフェルド-ヤコブ病等の脳の退行に伴う他の 疾患を挙げることができる。 本発明の組成物は、経腸、腸管外、局所または目によって投与することができ る。製薬組成物は、全身経路（注射または潅流）で投与するのに適した形態にパ ッケージするのが好ましい。 経腸経路で投与する場合、組成物、特に製薬組成物は、錠剤、硬質ゼラチンカ プセル、被覆錠剤、シロップ、懸濁液、溶液、粉末、顆粒、エマルション、マイ クロ球体またはナノ球体、あるいは、放出制御できる脂質またはポリマー小胞の 形態とすることができる。腸管外経路で投与される場合、組成物は、潅流または 注射用の溶液または懸濁液の形態であってよい。 本発明で用いられる、ＲＡＲ−αタイプのレセプターに特異的なアゴニストリ ガンド及びＲＡＲ−γタイプのレセプターに特異的なリガンドのアンタゴニスト リガンドから選択されるリガンドは、通常は、体重１ｋｇ当たりに０．０１から １００ｍｇの１日の投与量であり、１回の投与から３回の別々の投与までで与え られる。 局所経路で投与されるとき、本発明の製薬組成物、特に皮膚及び粘膜の処置を するためのものは、軟膏、クリーム、ミルク、ポマード、パウダー、吸収バッフ ァー、溶液、ゲル、スプレー、ローション又は懸濁液の形態であってよい。また 、マイクロ球体又はナノ球体、あるいは脂質又はポリマー小胞、あるいはポリマ ーパッチ及びヒドロゲルの形態でもよく、それらは放出制御が可能である。この 局所投与される組成物は、無水形態でも水性形態でもよい。 目の経路で投与するとき、組成物は主に点眼剤の形態である。 ＲＡＲ−αタイプのレセプターに特異的なアゴニストリガンド及びＲＡＲ−γ タイプのレセプターに特異的なアンタゴニストリガンドから選択されるリガンド は、局所又は目に用いられる場合は、組成物の全重量に対して、０．００１から １０重量％、好ましくは０．１から１重量％の濃度で含有される。 当然のことながら、上記の組成物は、不活性または薬力学的な活性添加剤、あ るいはこれらの添加剤の複数をさらに含んでもよく、特に、湿潤剤；ヒドロキノ ン、アゼル酸(azelaic acid)、カフェー酸またはコウジ酸等の脱色素剤；皮膚軟 化剤；グリセリン、ＰＥＧ４００、チアモルホリノン及びその誘導体、又は尿素 等の加湿剤；Ｓ−カルボキシメチルシステイン、Ｓ−ベンジル−システアミン、 及びそれらの塩又は誘導体、または過酸化ベンゾイル等の抗脂漏剤又は抗アクネ 剤；ケトコナゾールまたはポリメチレン-４，５-イソチアゾリドニン-３-オン等 の抗真菌剤；抗菌剤、カロチノイド、特にβ−カロチン；アントラリン及びその 誘導体等の抗乾癬剤；そして最後に、エイコサ-５，８，１１，１４-テトライン 酸(tetrainoic acid)及びエイコサ-５，８，１１-トリン酸(trynoic acid)及び それらのエステル及びアミドが挙げられる。 また、これらの組成物は、味覚向上剤、パラヒドロキシ安息香酸エステル等の 防腐剤、安定化剤、水分調節剤、ｐＨ調節剤、浸透圧修正用の薬剤、乳化剤、Ｕ Ｖ−Ａ及びＵＶ−Ｂフィルター、酸化防止剤、α−トコフェロール、ブチルヒド ロキシアニソールまたはブチルヒドロキシトルエン等を含んでもよい。 当業者は、考えられる添加によって、本来本発明が有する有利な特性が変化す ること又は実質的に変化することのないように、これらの組成物に添加すべき可 能な化合物（類）を当然に確認するであろう。 ここに、本発明を例示するための、非限定的な複数の実施例を与える。 実施例１ この実験は、ＲＡＲ−γに特異的なアンタゴニストの、アポプトシスが他のレ チノイド類によって誘発されたときのアポプトシス阻害剤としての in vitro で の有効性を示すものである。 細胞の培養及び調製 未処理の４週齢の雌ＮＭＲＩマウス（Godollo，ハンガリー，LATI から販売） から胸腺を胸腺細胞懸濁液の調製の出発材料として使用した。用いた媒質は、Si gma RPMI 1640 媒質であり、それに Gibco のウシ胎児血清、2mMのグルタミン及 び100 IUのペニシリン並びに１ml当たり100μgのストレプトマイシンを添加した 。次いで、胸腺細胞を洗浄し、最終濃度が１０⁷細胞/mlとなるように希釈した後 、加湿インキュベータ内で、5%ＣＯ２及び95%空気の雰囲気下、３７℃でインキ ュベートした。細胞死は、トリパンブルー(trypan blue)の取り込みによって測 定した。 ＤＮＡの定性的及び定量的分析 胸腺細胞を、24 well において、異なる濃度の試験すべき種々の化合物ととも のインキュベートした。６時間のインキュベートの後、0.8mlの細胞懸濁液を、0 .5%(v/v)のTriton X-100、10mMのTris、20mMのEDTAを含み、pH 8.0の溶解バッフ ァー0.7ml を添加することにより溶解し、次いで、13,000gで１５分間遠心分離 した。 ・ＤＮＡの定量分析：ＤＮＡを上清に含有せしめ（フラグメント）、ペレット （無傷のクロマチン）を、等量の10%トリクロロ酢酸で沈降させ、5%トリクロロ 酢酸で再懸濁し、次いでジフェニルアミン試薬を用いて定量した（Burton,K.， （1956）Biochem,J.，62，315-322）。 ・ＤＮＡの定性分析：平行して、上清を0.15mMのＮａＣｌを含むエタノール中 で終夜沈降させた。ペレットを、10mMのTris、1mMのEDTAを含み、pH 8.0 のバッ ファーに再度溶解させ、次いでこれらの溶液を、ＲＮａｓｅで処理し；さらに続 いて等容量のフェノール及びクロロホルム／イソアミルアルコール（２４／１） で抽出し、その後、ＤＮＡをエタノール中で沈降させた後、1.8%アガロースゲル 中で、６０Ｖで３時間電気泳動させた。次いで、ゲルを臭化エチジウムで染色し た後にＤＮＡフラグメントをＵＶ光で可視化した。得られたゲルは、ＤＮＡフラ グメントの梯子模様を提供し、それは１８０から２００の塩基対の多重であり、 アポプトシス誘発に典型的である。実験を通して、断片化の程度は、死亡してト リパンブルー試験に陽性な細胞の数に関連する。 定量分析の結果を下記の表１にまとめる。 ATRA は、全トランス-レチン酸。 9-シスRA は、９-シス-レチン酸。 CD437 は、６-３-（１-アダマンチル）-４-ヒドロキシフェニル）-２-ナフタノ ン酸。 CD2665 は、４-［７-（１-アタマンチル）-６-メトキシエトキシメトキシ-２-ナ フチル］安息香酸。 この表のＤＮＡフラグメントのパーセントは、処理した胸腺で得られたＤＮＡ フラグメントのパーセントと、非処理胸腺で得られたＤＮＡフラグメントのパー セント（これらの胸腺のアポプトシスの基本速度）との違いに相当する。 この表は、ＡＴＲＡ、９−シスＲＡ及びＣＤ４３７で誘発されたアポプトシス が、ＲＡＲ−γタイプのレセプターに特異的なアンタゴニストリガンドであるＣ Ｄ２６６５によって阻害されたことを明らかに示している。 実施例２ この実施例は、ＲＡＲ−αに特異的なアゴニストの、アポプトシスが他のレチ ノイド類によって誘発されたときのアポプトシス阻害剤としての in vitro での 有効性を示すものである。 方法は前述の実施例と同様であるが、試験すべきリガンドの性質とそれらの濃 度のみを変化させた。 即ち、（ＣＤ４３７は、６-３-（１-アダマンチル）-４-ヒドロキシフェニル ）-２-ナフタノン酸）（単一の濃度における）を、胸腺細胞と、異なる濃度のＣ Ｄ３３６（４-（（５，６，７，８-テトラヒドロ-５，５，８，８-テトラメチル -２-ナフタレニル）カルボキシアミド）安息香酸の存在下でインキュベートした 。 得られた結果を表２に整理する。 この表のＤＮＡフラグメントのパーセントは、処理した胸腺で得られたＤＮＡ フラグメントのパーセントと、非処理胸腺で得られたＤＮＡフラグメントのパー セント（これらの胸腺のアポプトシスの基本速度）との違いに相当する。 この表は、ＲＡＲ−γタイプのレセプターに特異的なアゴニストリガンドであ るＣＤ４３７で誘発されたアポプトシスが、ＲＡＲ−αタイプのレセプターに特 異的なアゴニストリガンドであるＣＤ３３６によって阻害されたことを明らかに 示している。 実施例３ この実施例は、ＲＡＲ−αに特異的なアゴニストの、アポプトシスがＴ−細胞 レセプターの活性化によって誘発されたときのアポプトシス阻害剤としての in vitro での有効性を示すものである。 方法は実施例１と同様であるが、試験すべき化合物の性質とそれらの濃度のみ を変化させた。 Ｔ細胞が胸腺内でＴリンパ球に分化することは知られている。この分化の間に Ｔ細胞は増殖し、Ｔ細胞のレセプターを生成する。潜在的に自己反応性細胞レセ プターを発現し、抗原表示細胞と相互作用する細胞はアポプトシスを受ける（負 の選択）（Smith 等，(1989)Nature，337，181-184）。この選択は、ホルボール ジブチラートとＣａ＋＋とを同時に添加することによる、Ｔ細胞レセプターを持 つＣＤ３分子の刺激によって、in vitro で模倣することができる（Iseki 等，( 1991)J．Immunol．147，4286-4292）。 即ち、ホルボールジブチラート（5 ng/ml）及びＣａ＋＋イオノホア（0.5 μM ）を、異なる濃度のＣＤ３３６（４-（（５，６，７，８-テトラヒドロ-５，５ ，８，８-テトラメチル-２-ナフタレニル）カルボキシアミド）安息香酸の存在 下又は不存在下で、胸腺細胞とともにインキュベートした。 得られた結果を表３に整理する。 この表のＤＮＡフラグメントのパーセントは、処理した胸腺で得られたＤＮＡ フラグメントのパーセントと、非処理胸腺で得られたＤＮＡフラグメントのパー セント（これらの胸腺のアポプトシスの基本速度）との違いに相当する。 この表は、Ｐ＋Ｃで誘発されたアポプトシスが、ＲＡＲ−αタイプのレセプタ ーに特異的なアゴニストリガンドであるＣＤ３３６によって、投与量に依存して 阻害されたことを明らかに示している。 実施例４ この実験は、ＲＡＲ−γに特異的なアンタゴニストの、アポプトシスがＲＡＲ −γ特異的アゴニストリガンドによって誘発されたときのアポプトシス阻害剤と しての in vivo での有効性を示すものである。 ４週齢の雌ＮＭＲＩマウス（Godollo，ハンガリー，LATI から販売）を用いた 。胸腺にアポプトシスを誘発するために、これらの雌マウスに、40μlのＤＭＳ Ｏと0.5mlの20%エタノールに溶解した、0.5mgの６-３-（１-アダマンチル）-４- ヒドロキシフェニル）-２-ナフタノン酸のを１回腹膜内注射することによって処 理した。ＲＡＲ−γに特異的なアゴニストリガンドによって胸腺内に誘発された アポプトシスの阻害効果を見るために、雌マウスに、40μlのＤＭＳＯと0.5mlの 20%エタノールに溶解した、0.5mgの６-３-（１-アダマンチル）-４-ヒドロキシ フェニル）-２-ナフタノン酸（ＣＤ４３７）と、5mgの４-［７-（１-アダマンチ ル）-６ -メトキシエトキシメトキシ-２-ナフチル］安息香酸（ＣＤ２６６５）の混合物 を１回腹膜内注射することにより処理した。対照として、雌マウスに、40μlの ＤＭＳＯと0.5mlの20％エタノールとの混合物を１回腹膜内注射することにより 処理した。また、ＣＤ２６６５は、上記と同じ条件で、0.5mgの量でも単独に試 験した。 処理の４８時間後に胸腺の重量を測定し、結果を表４に整理した。 即ち、ＣＤ４３７での処理後に胸腺の縮退が観察され、ＣＤ２６６５では有意 な変化が観察されない一方、ＣＤ２６６５とＣＤ４３７の組み合わせでは胸腺の 縮退は見られたが、それはＣＤ４３７単独で観察されたものより顕著ではなかっ た。

【手続補正書】 【提出日】１９９８年６月３日 【補正内容】 特許請求の範囲 １．ＲＡＲ−αタイプのレセプターに特異的なアゴニストリガンド及び ＲＡＲ−γタイプのレセプターに特異的なアンタゴニストリガンドから選択され る少なくとも１つのリガンドを含有する、少なくとも１つの細胞群におけるアポ プトシス速度を低下させるための製薬組成物。 ２．細胞群が、アポプトシスをＲＡＲ−γ及び／またはＲＡＲ−αタイ プのレセプターを用いた誘発及び／または阻害によって調節できる細胞、あるい は、アポプトシスをＴ細胞レセプターを用いた誘発により調節できる細胞に相当 することを特徴とする請求項１に記載の組成物。 ３．ＲＡＲ−γタイプのレセプターに特異的なアンタゴニストリガンド が、２-ヒドロキシ-４-［７-（１-アダマンチル）-６-ベンジルオキシ-２-ナフ チル］安息香酸、２-ヒドロキシ-４-［７-（１-アダマンチル）-６-ヘキシルオ キシ-２-ナフチル］安息香酸、４-［７-（１-アダマンチル）-６-メトキシエト キシエトキシ-２-ナフチル］安息香酸、５-［７-（１-アダマンチル）-６-ベン ジルオキシ-２-ナフチル］-２-チオフェンカルボン酸、４-［７-（１-アダマン チル）-６-ベンジルオキシ-２-ナフチル］安息香酸、４-［７-（１-アダマンチ ル）-６-ベンジルオキシカルボニル-２-ナフチル］安息香酸、２-ヒドロキシ-４ -［７-（１-アダマンチル）-６-（４-フルオロベンジル）オキシ-２-ナフチル］ 安息香酸、４-［７-（１-アダマンチル）-６-ヘプチルオキシ-２-ナフチル］安 息香酸、６-［７-（１-アダマンチル）-６-メトキシエトキシメトキシ-２-ナフ チル］ニコチン酸、２-ヒドロキシ-４-［７-（１-アダマンチル）-６-メトキシ エトキシメトキシ-２-ナフチル］安息香酸、２-クロロ-４-［７-（１-アダマン チル）-６-メトキシエトキシメトキシ-２-ナフチル］安息香酸、４-［７-（１- アダマンチル）-６-メトキシブチルオキシ-２-ナフチル］安息香酸、４-［７-（ １-アダマンチル）-６-メトキシメトキシプロピル-２-ナフチル］安息香酸、４- ［７-（１-アダマンチル）-６-メトキシエトキシプロピル-２-ナフチル］安息香 酸、及び、４-［７-（１-アダマンチル）-６-アセチルオキシブトキシ-２-ナフ チル］安息香酸から選択されることを特徴とする請求項１または２に記載の組成 物 。 ４．ＲＡＲ−γタイプのレセプターに特異的なアンタゴニストリガンド が、このリガンドのＲＡＲ−γタイプのレセプターに対して、このリガンドの、 ４-［７-（１-アダマンチル）-６メトキシエトキシメトキシ-２-ナフチル］安息 香酸等の、ＲＡＲ−αタイプのレセプターに対する解離定数より少なくとも２０ 倍小さい解離定数を示すことを特徴とする請求項１から３のいずれかに記載の組 成物 。 ５．ＲＡＲ−αタイプのレセプターに特異的なアゴニストリガンドが、 このリガンドのＲＡＲ−αタイプのレセプターに対して、このリガンドのＲＡＲ −γタイプのレセプターに対する解離定数より少なくとも２０倍小さい解離定数 を示すことを特徴とする請求項１または２に記載の組成物。 ６．ＲＡＲ−αタイプのレセプターに特異的なアゴニストリガンドが、 ４-（（５，６，７，８-テトラヒドロ-５，５，８，８-テトラメチル-２-ナフタ レニル）カルボキシアミド）安息香酸、及び、２-ヒドロキシ-４-（５，５，８ ，８-テトラメチル-５，６，７，８-テトラヒドロ-ナフタレン-２-カルボキシア ミド）安息香酸から選択されることを特徴とする請求項１、２または５に記載の組成物 。 ７．アポプトシスの過剰な速度に伴う疾患の治療用である請求項１から ６のいずれかに記載の組成物。 ８．アポプトシスの過剰な速度に伴う疾患が、ヒト免疫不全ウイルス（ ＨＩＶ）免疫不全症候群、神経退行性疾患、脊髄形成異常症候群、虚血性症候群 、毒素による肝臓疾患、脱毛症、紫外線による皮膚障害、扁平苔癬、皮膚萎縮症 、白内障、あるいは移植拒絶であることを特徴とする請求項７記載の組成物。 ９．神経退行性疾患が、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性 外側脊髄硬化症、及び、クレウツフェルド-ヤコブ病等の脳の退行に伴う他の疾 患から選択されることを特徴とする請求項８記載の組成物。 １０．少なくとも１つの細胞群におけるアポプトシス速度を低下させる ための製薬組成物の調製における、ＲＡＲ−αタイプのレセプターに特異的なア ゴニストリガンド及びＲＡＲ−γタイプのレセプターに特異的なアンタゴニスト リガンドから選択される少なくとも１つのリガンドの使用。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ａ６１Ｋ 31/19 ＡＣＶ Ａ６１Ｋ 31/19 ＡＣＶ ＡＤＡ ＡＤＡ ＡＤＦ ＡＤＦ ＡＥＤ ＡＥＤ ＡＧＺ ＡＧＺ 31/455 31/455 (72)発明者 レイシャール，ユーヴェ フランス国 06620 ポン−デュ−ループ アンシャン シュマン ドゥ フェル 73 ヴィラ ヴァルローズ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．少なくとも１つの細胞群におけるアポプトシス速度を低下させるた めの製薬組成物の調製における、ＲＡＲ−αタイプのレセプターに特異的なアゴ ニストリガンド及びＲＡＲ−γタイプのレセプターに特異的なアンタゴニストリ ガンドから選択される少なくとも１つのリガンドの使用。 ２．細胞群が、アポプトシスをＲＡＲ−γ及び／またはＲＡＲ−αタイ プのレセプターを用いた誘発及び／または阻害によって調節できる細胞、あるい は、アポプトシスをＴ細胞レセプターを用いた誘発により調節できる細胞に相当 することを特徴とする請求項１に記載の使用。 ３．ＲＡＲ−γタイプのレセプターに特異的なアンタゴニストリガンド が、２-ヒドロキシ-４-［７-（１-アダマンチル）-６-ベンジルオキシ-２-ナフ チル］安息香酸、２-ヒドロキシ-４-［７-（１-アダマンチル）-６-ヘキシルオ キシ-２-ナフチル］安息香酸、４-［７-（１-アダマンチル）-６-メトキシエト キシエトキシ-２-ナフチル］安息香酸、５-［７-（１-アダマンチル）-６-ベン ジルオキシ-２-ナフチル］-２-チオフェンカルボン酸、４-［７-（１-アダマン チル）-６-ベンジルオキシ-２-ナフチル］安息香酸、４-［７-（１-アダマンチ ル）-６-ベンジルオキシカルボニル-２-ナフチル］安息香酸、２-ヒドロキシ-４ -［７-（１-アダマンチル）-６-（４-フルオロベンジル）オキシ-２-ナフチル］ 安息香酸、４-［７-（１-アダマンチル）-６-ヘプチルオキシ-２-ナフチル］安 息香酸、６-［７-（１-アダマンチル）-６-メトキシエトキシメトキシ-２-ナフ チル］ニコチン酸、２-ヒドロキシ-４-［７-（１-アダマンチル）-６-メトキシ エトキシメトキシ-２-ナフチル］安息香酸、２-クロロ-４-［７-（１-アダマン チル）-６-メトキシエトキシメトキシ-２-ナフチル］安息香酸、４-［７-（１- アダマンチル）-６-メトキシブチルオキシ-２-ナフチル］安息香酸、４-［７-（ １-アダマンチル）-６-メトキシメトキシプロピル-２-ナフチル］安息香酸、４- ［７-（１-アダマンチル）-６-メトキシエトキシプロピル-２-ナフチル］安息香 酸、及び、４-［７-（１-アダマンチル）-６-アセチルオキシブトキシ-２-ナフ チル］安息香酸から選択されることを特徴とする請求項１または２に記載の使用 。 ４．ＲＡＲ−γタイプのレセプターに特異的なアンタゴニストリガンド が、このリガンドのＲＡＲ−γタイプのレセプターに対して、このリガンドの、 ４-［７-（１-アダマンチル）-６メトキシエトキシメトキシ-２-ナフチル］安息 香酸等の、ＲＡＲ−αタイプのレセプターに対する解離定数より少なくとも２０ 倍小さい解離定数を示すことを特徴とする請求項１から３のいずれかに記載の使 用。 ５．ＲＡＲ−αタイプのレセプターに特異的なアゴニストリガンドが、 このリガンドのＲＡＲ−αタイプのレセプターに対して、このリガンドのＲＡＲ −γタイプのレセプターに対する解離定数より少なくとも２０倍小さい解離定数 を示すことを特徴とする請求項１または２に記載の使用。 ６．ＲＡＲ−αタイプのレセプターに特異的なアゴニストリガンドが、 ４-（（５，６，７，８-テトラヒドロ-５，５，８，８-テトラメチル-２-ナフタ レニル）カルボキシアミド）安息香酸、及び、２-ヒドロキシ-４-（５，５，８ ，８-テトラメチル-５，６，７，８-テトラヒドロ-ナフタレン-２-カルボキシア ミド）安息香酸から選択されることを特徴とする請求項１、２または５に記載の 使用。 ７．製薬組成物が、アポプトシスの過剰な速度に伴う疾患の治療用であ る請求項１から６のいずれかに記載の使用。 ８．アポプトシスの過剰な速度に伴う疾患が、ヒト免疫不全ウイルス（ ＨＩＶ）免疫不全症候群、神経退行性疾患、脊髄形成異常症候群、虚血性症候群 、毒素による肝臓疾患、脱毛症、紫外線による皮膚障害、扁平苔癬、皮膚萎縮症 、白内障、あるいは移植拒絶であることを特徴とする請求項７記載の使用。 ９．神経退行性疾患が、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性 外側脊髄硬化症、及び、クレウツフェルド-ヤコブ病等の脳の退行に伴う他の疾 患から選択されることを特徴とする請求項８記載の使用。