JPH11501310A

JPH11501310A - レトロウイルスの調節タンパク質から誘導された無毒の免疫原、抗体、製造方法およびそれらを含んでなる医薬組成物

Info

Publication number: JPH11501310A
Application number: JP8526669A
Authority: JP
Inventors: ザギュリー，ジャン−フランソワ; ビッジーニ，ベルナール; ザギュリー，ダニエル
Original assignee: ネオバック
Priority date: 1995-03-08
Filing date: 1996-03-07
Publication date: 1999-02-02
Also published as: EP0814834A1; DK0814834T3; AU5007196A; DE69610295T2; GR3034970T3; EP0814834B1; DE69610295D1; CA2215483C; WO1996027389A1; DE69610295T3; ATE196255T1; CA2215483A1; BR9607659A; AU710626B2; EP0814834B2; PL322143A1; US6132721A; DK0814834T4

Abstract

(57)【要約】無毒であるために、ヒトに投与することができ、そしてＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２、ＨＴＬＶ−１またはＨＴＬＶ−２ウイルス調節タンパク質から化学的方法によりカップリング剤、例えば、アルデヒドを使用して誘導されるか、またはカップリング剤で前処理して活性化された担体タンパク質から誘導され、これにより前記調節タンパク質に対する抗体により認識されることができ、かつ前記自然タンパク質を中和またはブロックする抗体を産生するために十分な免疫原性を保持すると同時に、前記自然タンパク質の毒性の生物学的性質の少なくとも５０％を失っている、免疫原性化合物。

Description

【発明の詳細な説明】レトロウイルスの調節タンパク質から誘導された無毒の免疫原、抗体、製造方法およびそれらを含んでなる医薬組成物本発明は、新規なレトロウイルスの免疫原（これらはレトロウイルスの調節タンパク質を使用し、それらの免疫原性が保持されるか、または増加するように、それらの必須の生物学的性質が前以て不活性化されている）、それらの製造方法およびそれらを含んでなる医薬組成物に関する。これらの新規な「不活性化された」免疫原はヒトにおいて活性免疫化を誘発することができ、この免疫化は前記免疫原が生成される自然タンパク質が生成を促進できる調節解除作用を防止または補正できる。本発明は、また、これらの「不活性化された」免疫原を使用することによって得られる新規な抗体、それらの製造方法およびそれらを含んでなる受動免疫化用組成物に関する。Ｔａｔ分子は、ウイルス粒子の中に見出されないが、ＨＩＶ−１遺伝子によりコードされるＨＩＶ調節タンパク質である。感染した細胞の内部において、プロウイルスＤＮＡによりコードされるこのタンパク質は、ウイルスまたは細胞の遺伝子に対してトランス活性化の役割を演ずる。しかしながら、この遺伝的調節タンパク質は、また、循環する細胞外媒質の中において細胞の外側に見出すことができ、自然の状態または断片化された状態で死んだ細胞の破片内に分泌されるか、または分泌プロセスにより分泌される。循環する媒質中のその存在は、ある血清反応陽性の被検者における検出可能な抗Ｔａｔ抗体の存在を説明する。Ｔａｔのこの細胞外の関係において、細胞表面のインテグリンにより認識されるＲＧＤ残基およびこの分子の塩基領域（残基４５−７０）を有する末端のＣセグメントのために、細菌のトキシンと同様に、Ｔａｔは異なる組織の非感染細胞に作用することができる。こうして、循環するＴａｔタンパク質は、真のウイルストキシンと同様に、内皮細胞に有害作用を発揮することができ、そして、成長因子ＢＦＧＦと組み合って、エイズ疾患を特徴づけるカポージ肉腫の新血管形成に寄与することができる。また、循環するＴａｔタンパク質は、Ｔ細胞に対する直接の免疫抑制作用によるか、またはＡＰＣ（マクロファージまたは樹枝突起細胞）と呼ばれる、抗原提示細胞によるインターフェロン−αの産生の調節解除を促進することによって、エイズにより漸進的確立されるようになる免疫抑制を悪化することがある。後天性免疫不全症候群（エイズ）は、免疫抑制のための日和見性疾患によるか、またはカポージ肉腫により臨床的に定義される。後天性免疫抑制は、ＨＩＶ感染の過程において漸進的に確立され、最初の場合において記憶抗原により、次いで同種抗原により、最後にマイトジェン（ＰＨＡ）により刺激された後、Ｔ細胞の免疫学的反応性（細胞増殖抑制およびＩＬ２産生の減少）の喪失によりそれ自体発現する。免疫抑制はインターフェロン−αおよび−γの過剰産生に関係付けられる。免疫抑制を誘発する細胞変性メカニズムは複雑であり、そして免疫性細胞、Ｔリンパ球およびＡＰＣに直接作用するか、またはサイトカイン系を介して間接的に作用する、ウイルス由来の種々の因子を包含する。エンベロープタンパク質ｇｐ１２０は、ＨＩＶ−１粒子により担体され、そしてその細胞外存在は血清ウイルス負荷により測定され、こうして表現型ＣＤ４のＴ細胞のアネルギーを直接誘発することができる。それらの部分上において、ＨＩＶ調節タンパク質、特にＴａｔは、循環するウイルストキシンのその細胞外立体配置において、また、例えば、記憶抗原または抗ＣＤ３抗体により活性化されたｉｎｖｉｔｒｏＴ細胞がＴａｔ分子の存在においてもはや増殖しないという事実により、Ｔ細胞の直接的免疫抑制または他の病原性を誘発するように思われる。さらに、循環するＴａｔタンパク質は、インターフェロン−α（エイズ疾患で観察される免疫抑制およびアポプトーシスを増幅できる細胞増殖抑制性およびアポプトジェニックのサイトカイン）のＡＰＣにより過剰産生を促進するように思われる。事実、マクロファージによるインターフェロン−αの分泌は、Ｔａｔの存在において、レトロ調節（フィードバック）によりもはや中止されないように思われる。レトロ調節は、正常状態において、このインターフェロン−αの産生を制御する（無反応性期間）。カポージ肉腫は、内皮細胞から出発する新血管形成を表す脈管小結節の出現により、臨床的にそれ自体発現する。これらの細胞は、サイトカイン（インターフェロン−γ、ＩＬ１およびＩＬ６）の産生を発生する炎症プロセスにより活性化されており、ＢＦＧＦ（基本的繊維芽細胞成長因子）を生産し、そして増殖する。活性化された内皮細胞のｉｎｖｉｔｒｏ増殖は、Ｔａｔタンパク質の媒質中の存在により増加される。抗Ｔａｔ抗体は、ｉｎｖｉｔｒｏにおけるＴａｔタンパク質の増殖作用をブロックする。インテグリンのファミリーからのアドヘシン（ａｄｈｅｓｉｎ）をそれらの表面上に担体する内皮細胞に対するＴａｔの作用は、これらの分子により認識されるＲＧＤ配列の存在により説明される。こうして、ｉｎｖｉｖｏカポージ肉腫に根元的な新血管形成は、その細胞外の立体配置におけるＴａｔ調節タンパク質により促進されると言われた。この調節タンパク質は、ＲＧＤ配列を含有するその末端のＣ断片のおかげて、内皮細胞のインテグリンにより認識されることができた。さらに、ＴａｔはＫおよびＲ残基に富んだ塩基領域により作用することもでき、そして結局、成長因子ＢＦＧＦを濃縮する、細胞外基質の硫酸ヘパリンに結合することができる。こうして、成長因子により誘発される内皮細胞の増殖はＴａｔの存在により増加し、そして新血管形成を発生させる。内皮細胞の増殖に対するこの作用は、ｉｎｖｉｔｒｏにおいて、抗Ｔａｔ抗体の作用により減少される。したがって、細胞外媒質（血液、リンパ、腸の媒質．．．）中を循環するレトロウイルス調節タンパク質、特にＴａｔ、すなわち、真のウイルストキシンの有害活性をブロックすることが望ましいように思われる。ＨＩＶウイルスに関すると、現在までに、ワクチン接種の試みは、これらのウイルスの構造タンパク質または構造タンパク質の断片を使用してなされてきているが、これらのウイルスの調節タンパク質または調節タンパク質の断片を使用してなされてきていない。したがって、驚くべきことには、細菌のトキシン（テタヌス、ジフテリアまたはボツリヌス（その毒性が特定の抗体により中和される））に似て、調節ウイルスタンパク質、特にＴａｔ、すなわち、その細胞外立体配置におけるＨＩＶの真のトキシン、の有害作用（これらはＴ細胞の免疫抑制により、ＡＰＣによるインターフェロン−αの産生の調節解除によるか、またはカポージ肉腫に根元的な新血管形成により発揮される）は、下記の実験の部分において理解されるように、特定の抗Ｔａｔ抗体により壊滅される。同一な事柄がＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２、ＨＴＬＶ−１またはＨＴＬＶ−２のようなウイルスの他の調節タンパク質に適用される。ヒトに投与することができ、かつこのような抗体を産生することができる免疫原を入手可能すること、およびまた、治療および予防の双方の目的で、このような抗体を入手可能とすることは望ましいことであろう。事実、免疫原として使用された先行技術の化合物、特に塩基領域を含有する化合物はヒトに対して毒性であることがある（例えば、国際特許出願（ＷＯ−Ａ）第９１１８４５４号参照）。これらはＴａｔ、ＮｅｆまたはＲｅｖの非修飾自然断片であるが、これと対照的に、本発明はこれらのタンパク質またはタンパク質断片の不活性化に基づく。したがって、この出願は、無毒であるために、ヒトに投与できる免疫原性化合物に関し、これらは、カップリング剤、例えば、アルデヒドで化学的に処理することによってＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２、ＨＴＬＶ−１またはＨＴＬＶ−２ウイルス調節タンパク質から誘導されるか、またはアルデヒド、好ましくはホルムアルデヒドまたはグルタルアルデヒドで前処理して活性化された担体タンパク質から誘導され、前記調節タンパク質に対する抗体により認識可能とされ、かつ前記自然タンパク質を中和またはブロックする抗体をつくるために十分な免疫原性を保持すると同時に、前記自然タンパク質の毒性の生物学的性質の少なくとも５０％、特に少なくとも８０％、より特に９５％を失っているようにされていることを特徴とする。これらの化合物は、細菌のトキソイド、例えば、破傷風トキソイドに対する類似性により、下記において「トキソイド」とみなされるであろう。事実、従来の細菌のトキソイドに似て、それらは固有毒性を欠くが、それにもかかわらず、被検者への投与により免疫化を引き起こすことができる。下記の化学的処理は、本発明による免疫原性化合物の残留毒性を減少させる目的で、物理的処理、例えば、照射、特にＵＶ照射により補助することができる。前述のトキソイドは、例えば、調節タンパク質、例えば、Ｔａｔのペプチド配列と同一であるか、またはそれに類似する配列を有するペプチドから製造することができ、そして、例えば、樹脂上の慣用のペプチド合成によるか、または遺伝子工学により得ることができる。すべてのこれらのプロセスはこの分野においてよく知られている。本発明による修飾された調節タンパク質またはその修飾された断片が前記自然調節タンパク質に対する抗体により容易に認識されることを検査するために、下記の実験の部分において理解されるように、例えば、抗原−抗体複合体の形成を免疫学的にＥＬＩＳＡにより特定の抗体の存在において検査することができる。前記自然タンパク質を中和する抗体をつくるために十分に、調節タンパク質の免疫学的性質が保持されたかどうかを決定するために、下記の実験の部分においてＴａｔについて理解されるように、哺乳動物（ウサギ、ラット、マウス）を、例えば、本発明による免疫原性化合物で免疫化し、そして産生された抗体が調節タンパク質の毒性活性を中和することを検査することができる。修飾された調節タンパク質がその生物学的性質の少なくとも５０％を失ったかどうかを決定するために、例えば、Ｔ細胞の免疫抑制に対して、または末梢血の活性化された単核細胞によるインターフェロン−αの産生に対して、またはまた、調節タンパク質により誘発された新血管形成に対して、調節タンパク質、例えば、活性化されたＴａｔの作用を研究することができる。Ｔａｔ調節タンパク質の不活性化は、例えば、「Ｔａｔレスキューアッセイ」により、その複製が自然Ｔａｔの外性供給に依存する、細胞系ＨＬＭ−１上で培養されたＴａｔ欠如非感染性ＨＩＶ変異体を使用して検査される。免疫原性化合物はＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２、ＨＴＬＶ−１またはＨＴＬＶ−２ウイルス調節タンパク質の任意のものから、特にＨＩＶ−１およびＨＩＶ−２ウイルスのＶｉｆ、Ｒｅｖ、ＮｅｆおよびＴａｔから誘導することができる；特にＲｅｖ、ＮｅｆおよびＴａｔ、より特にＲｅｖおよびＴａｔ、好ましくは後者が使用される。また、ＨＴＬＶ−１またはＨＴＬＶ−２のＴａｘタンパク質をモニターすることができる。また、ことにＴａｔおよびＲｅｖの塩基領域の外側の領域、すなわち、Ｔａｔの外側領域４９〜５７およびＲｅｖの３５〜５０、または最大４アミノ酸、好ましくは最大２アミノ酸がオーバーラッピングするこれらの領域、特にペプチドＨＱＶＳＬＳＫＱＰＴＳＱＰＲＧＤを挙げることができる。ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２、ＨＴＬＶ−１またはＨＴＬＶ−２ウイルス調節タンパク質「から誘導」または「誘導すること」は、免疫原性化合物を調節タンパク質のすべてまたは断片から構築することができ、そして、修飾が上に特定した関係（毒性の非存在、免疫学的特性）内に止まる程度に、このタンパク質または断片のアミノ酸の１または２以上の修飾、例えば、欠失、置換、付加または官能化、例えば、アミノ酸のアシル化を包含することができる意味として理解される。例えば、一般に、イソロイシン残基によるロイシンの置換はこのような性質を修飾しない；修飾は少なくとも８アミノ酸、特に少なくとも１２アミノ酸の調節タンパク質の相同セグメントにわたる一般に３０％より低く、好ましくは２０％より低く、特に１０％より低くあるべきである。断片は８〜６０アミノ酸、例えば、好ましくは１２〜４０アミノ酸、特に２５〜４０アミノ酸を含んでなることができる。ＨＩＶ−１のＴａｔのＣ末端における残基６５−８０を例として挙げることができる。優先的条件下に、本発明の免疫原性化合物は全体の調節タンパク質の少なくとも５０％、好ましくは少なくとも７０％、特に少なくとも９０％、ことに前記タンパク質のすべてまたはほとんどすべてを構成する。一般に、修飾、修飾された免疫原と自然タンパク質または自然タンパク質の一部分との間の相同性または類似性、ならびに免疫原性化合物の次元、およびさらに本発明による免疫原性化合物の使用または免疫原性タンパク質、例えば、破傷風トキソイドに対するカップリングに関しては、下記の参考文献を参照のこと：特に国際特許出願（ＷＯ−Ａ）第８６／０６，４１４号または欧州特許出願（ＥＰ−Ａ）第０，２２０，２７３号、またはまた、ＰＣＴ／ＵＳ第８６／００８３１号明細書（これらは同等であり、それらの開示は引用することによって本明細書の一部とされる）。本発明による免疫原性化合物は下記のように使用することができる：本発明による免疫原性化合物を、患者に、例えば、皮下または筋肉内に、治療を必要とする被検者に、治療的レベルにおいて有効であるために十分な量において投与される。投与量は、例えば、３カ月間に１回、次いで誘導される血清抗体レベルに従い周期的に、例えば、２〜６カ月毎に、皮下的に１００〜１，０００ μｇの範囲であることができる。本発明による組成物は、ワクチンの分野において慣用の任意の普通のルートにより、特に皮下、筋肉内、静脈内または経口的に投与することができる。投与は単一の投与で行うことができるか、またはある期間後に１回または数回反復することができる。したがって、この出願は、また、活性成分として上記において定義した免疫原性化合物を含んでなることを特徴とする、治療または予防医薬組成物に関する。免疫原性化合物は、それ自体で処方するか、または薬学上許容される賦形剤、例えば、アジュバントと混合することができる。本発明は、また、上記において定義した免疫原性化合物、前述の免疫原性化合物を含んでなることを特徴とする、ヒトまたは動物の体の治療法において使用するための薬剤、および前述の調節タンパク質、特にＴａｔの有害作用の治療または予防に意図される治療または予防の薬剤を製造するための、このような免疫原性化合物の使用に関する。事実、本発明による化合物は、下記の実験の部分において理解されるように、それらの毒性を失っており、したがってヒトに投与することができる。本発明による免疫原性化合物の投与は積極的免疫療法に相当する。また、受動的免疫療法を実施すること、すなわち、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２、ＨＴＬＶ−１またはＨＴＬＶ−２ウイルス調節タンパク質の有害作用の中和する抗体を直接患者に供給すること、は重要であろう。これらの抗調節タンパク質抗体は、例えば、哺乳動物、ヒトまたは動物を上記において定義した免疫原性化合物で免疫化した後、ＥＢウイルスで形質転換されたヒトＢリンパ球をクローニングし、次いで前記形質転換Ｂリンパ球が分泌する必要な抗体を集めることによって、あるいは、また、ファージのライブラリーの遺伝的組換えにより、好都合に得ることができる。したがって、この出願は、また、哺乳動物を上記において定義した免疫原性化合物で免疫化することを特徴とする、抗ＨＩＶ−１、抗ＨＩＶ−２、抗ＨＴＬＶ −１または抗ＨＴＬＶ−２ウイルス調節タンパク質抗体、特に抗Ｔａｔトキソイド抗体を生産する方法、特に上記抗体を生産する方法に関する。この出願は、また、抗ＨＩＶ−１、抗ＨＩＶ−２、抗ＨＴＬＶ−１または抗ＨＴＬＶ−２ウイルス調節タンパク質抗体、特に前述の方法を実施することによって免疫化されたヒトまたは哺乳動物の被検者から得られた特定のポリクローナルまたはモノクローナル抗体に関する。これらの特定の抗体は、下記のものから由来することができる：１．生物学的に不活性化されているが、免疫原性である調節タンパク質、特にＴａｔを使用する積極的免疫化（ワクチン接種）により誘発された、被検者自身から。例えば、Ｔａｔの場合における、このような免疫原性化合物は、細菌のトキソイドに類似するために、Ｔａｔトキソイドと呼ばれる。２．あるいは、受動的免疫化（血清治療）により、被検者に投与された、外来同種または異種の生物。同種抗体（ヒトにおける）は、本発明による免疫原性化合物またはその誘導体、特にＴａｔ（本発明によるＴａｔトキソイドまたはペプチド断片）で免疫化（ワクチン接種）した後、ボランティアの非感染被検者において発生させることができる。これらの受動的に投与された抗体は、同種（ヒト）または異種（動物）のいずれであっても、完全なモノクローナル抗体またはポリクローナル抗体であるか、または前記抗体のＦ（ａｂ’）２またはＦａｂ断片であることができる。「抗調節タンパク質抗体」は、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体であるか、またはこれらの抗体のＦ（ａｂ’）２またはＦａｂ断片、あるいは、また、ファージのライブラリーから遺伝的構築により得られた抗調節タンパク質抗体であることができる。ヒト由来の同種抗体は、下記の通りである： − ポリクローナル抗体−これは本発明による免疫原性化合物、特にＴａｔトキソイドまたはＴａｔのペプチド断片で免疫化されたボランティアの血清反応陰性の被検者において得るすることができる。 − またはモノクローナル抗体、これらの免疫化された個体（ＥＢＶ特異的Ｂ系統）のＥＢＶウイルスで形質転換されたＢ細胞の特定のクローンからの抗体。異種抗体は、本発明による免疫原性化合物、特にＴａｔまたはその誘導体（本発明によるＴａｔのＴａｔトキソイド、解毒されたペプチド断片）で超免疫化された動物から由来し、そして下記の通りである： − ポリクローナル抗体、超免疫化された動物から由来する、 − またはモノクローナル抗体、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ技術に従い脾細胞または腺細胞上において骨髄腫系統、ｘ６３型、特にｘ６３ＡＧ３とのハイブリダイゼーション後に得られた。この出願は、また、哺乳動物、ヒトまたは動物を上記において定義した免疫原性化合物で免疫化することを特徴とする、抗ＨＩＶ−１、抗ＨＩＶ−２、抗ＨＴＬＶ−１または抗ＨＴＬＶ−２ウイルス調節タンパク質抗体を生産する方法に関する。この出願は、また、本発明による免疫原性化合物で免疫化された個体から由来するＢ細胞を使用し、前記Ｂ細胞をＥＢＶウイルスで形質転換し、そして特定の抗ＨＩＶ−１、抗ＨＩＶ−２、抗ＨＴＬＶ−１または抗ＨＴＬＶ−２ウイルス調節タンパク質抗体をＢ細胞により生産することを特徴とする、モノクローナル抗ＨＩＶ−１、抗ＨＩＶ−２、抗ＨＴＬＶ−１または抗ＨＴＬＶ−２ウイルス調節タンパク質抗体を生産する方法に関する。上記のＥＢＶ＋細胞を培養して、必要な抗体を生産させることができる。これらの細胞は、前述したように、特に自然調節タンパク質で、または本発明による免疫原性化合物で免疫化された患者から由来する。この出願は、また、先行技術においてよく知られている方法（ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ）により、自然調節タンパク質または本発明による免疫原性化合物で免疫化された哺乳動物、特にマウスから、脾細胞または腺細胞から、特にマウスから、および骨髄腫細胞、好ましくはｘ６３系統の骨髄腫細胞から、ヘテロダイマーを生産することを特徴とする、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２、ＨＴＬＶ−１またはＨＴＬＶ−２ウイルス調節タンパク質に対するモノクローナル抗体を生産する方法に関する。この出願は、また、上記において定義した免疫原性化合物を免疫原として使用することを特徴とする、抗ＨＩＶ−１、抗ＨＩＶ−２、抗ＨＴＬＶ−１または抗ＨＴＬＶ−２ウイルス調節タンパク質抗体を生産する方法に関する。この出願は、また、前記抗体のＦ（ａｂ’）２またはＦａｂ断片に関する；これらは、例えば、酵素の消化により得ることができる。本発明は、さらに、ＨＩＶウイルスタンパク質の有害作用をその細胞外の立体配置において中和またはブロックし、そして前述したように生産される、特定の抗ＨＩＶウイルス増殖調節タンパク質抗体、詳しくは抗Ｔａｔ抗体、またはこれらの抗体のＦ（ａｂ’）２またはＦａｂ断片を使用する、ＨＩＶウイルスで汚染された被検者を受動的免疫化する方法に関する。本発明は、また、前述の免疫原性化合物と、ＨＩＶウイルスの構成（構造）タンパク質、特にエンベロープ糖タンパク質ｇｐ１２０またはｇｐ１６０またはそれらの修飾されたペプチドまたは非修飾ペプチド、あるいは不活性化されたＨＩＶウイルス、あるいは、例えば、アルカリ性加水分解により、そのゲノムＲＮＡが欠失されたＨＩＶウイルスとの組み合わせを使用して、積極的抗ＨＩＶまたは抗エイズ免疫化する方法に関する。本発明は、また、前述の免疫原性化合物と、不活性化されたサイトカイン、特にインターフェロン−α、ＴＧＦ−βまたはＴＮＦに基づく１または２以上の免疫原との組み合わせを使用して、積極的抗ＨＩＶまたは抗エイズ免疫化する方法に関する。事実、下記の実験の部分において理解されるように、調節タンパク質に対する本発明による抗体、特に抗インターフェロン−α抗体の作用の組み合わせは、ＨＩＶにより誘発された免疫抑制を完全に回復する。この出願は、また、例えば、国際特許出願（ＷＯ−Ａ）第９１１８４５４号に開示されているような、２つの免疫原性化合物、すなわち、前述の免疫原性化合物と、サイトカイン、例えば、インターフェロン−αまたはＴＦＮ−αに対する抗体を誘導できる免疫原性化合物とを含んでなる組成物、およびサイトカイン、特にインターフェロン−αに対する抗体と、調節タンパク質に対する前述の抗体とを含んでなる組成物に関する。この出願は、また、前述の免疫原性化合物と、無機質、油性または合成の免疫性アジュバントとの組み合わせ、あるいは、また、前述の免疫原性化合物と、その免疫原性を増加するタンパク質との結合物または組み合わせを、免疫原として使用する、積極的免疫化の方法に関する。免疫化は治療的または予防的に実現することができる。好ましくは、Ｔａｔタンパク質の誘導体を上記および下記のすベての方法において免疫原として使用する。本発明は、また、上記において定義した免疫原を、精製された特定の抗体またはそれらのＦ（ａｂ’）２またはＦａｂ断片の投与による受動的血清治療に特に意図することができる、超免疫ヒト血清に使用することを特徴とする、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２、ＨＴＬＶ−１またはＨＴＬＶ−２血清反応陰性または血清反応陽性の被検者を超免疫化する方法に関する。本発明は、また、治療的または予防的成分として、少なくとも１種の上記において定義した、または前述の方法により得られた、抗ウイルス調節タンパク質抗体を含んでなる医薬組成物に関する。本発明は、最後に、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２、ＨＴＬＶ−１またはＨＴＬＶ− ２ウイルス調節タンパク質の有害作用の治療に意図する薬物を製造するための免疫原性化合物または前述の抗体に関する。要約すると、また、特に、本発明は、血清反応陽性の被検者またはＡＲＣ／エイズに罹った被検者に対して、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２、ＨＴＬＶ−１またはＨＴＬＶ−２ウイルス調節タンパク質、特に循環するＴａｔの有害作用をブロックする特定の抗体を治療的または予防的に使用することに関する。これらの特定の抗体は下記のものからの由来であることができる：１．生物学的に不活性化されているが、免疫原性のＴａｔ（細菌トキソイドに類似することによりＴａｔトキソイドと呼ばれる）で積極的免疫化（ワクチン接種）により誘発された、被検者自身、または２．受動的免疫化（血清治療）により被検者に投与された、外来同種または異種生物。同種抗体（ヒトにおける）は、調節タンパク質、例えば、Ｔａｔまたはその誘導体（本発明によるＴａｔのＴａｔトキソイドまたはペプチド断片）で積極的免疫化（ワクチン接種）した後、ボランティアの非感染被検者において発生させることができる。これらの受動的的に投与された抗体は、同種（ヒト）または異種（動物）のいずれであっても、完全なモノクローナル抗体またはポリクローナル抗体であるか、または抗体のＦ（ａｂ’）２またはＦａｂ断片であることができる。Ｔａｔトキソイドは、前述したように、化学物質で処理されたペプチドまたはＴａｔタンパク質を意味するとして理解される。この処理は、循環するＴａｔの毒性の生物学的性質（Ｔ細胞の免疫抑制：インターフェロンを産生する細胞によるインターフェロン−αの産生の誘発；内皮細胞の新血管形成；マクロファージに対するインターフェロンの抗ウイルス作用のブロック）を分子に対して喪失させたが、適当な方法において提示および調製され、「担体」に結合しているか、またはしていない、凝集しているか、またはしていないとき、アジュバントの存在または非存在において、抗体の形成を誘発できる性質を保持させた。Ｔａｔトキソイドの概念は、Ｔａｔの免疫原性ペプチド断片、すなわち、適当な方法において提示され、担体に結合しているか、またはしていないとき、アジュバントの存在または非存在において、抗体の形成を誘発できるＴａｔのペプチド配列、に拡張された。本発明は、また、医薬組成物に関する。ａ）予防剤または治療剤として、本発明による調節タンパク質、特にＴａｔのウイルストキソイドまたは断片または類似体を含んでなる医薬組成物。ｂ）予防剤または治療剤として、本発明による前記タンパク質またはそのＦ（ａｂ’）２またはＦａｂ断片に対して免疫化された生物から生産された抗Ｔａｔ抗体を含んでなる医薬組成物。本発明は、また、活性成分（Ｔａｔトキソイドまたはその誘導体または抗Ｔａｔ抗体）に加えて、アジュバントおよび／または抗レトロウイルス特性を有する他の免疫原を含んでなることができる、ワクチン医薬組成物を含んでなるキットを提案する。最後に、本発明は、慣用のガレヌス製剤の形態の医薬組成物を提案する。特に、本発明による活性成分は、治療的観点から有効であるために十分な量において、製剤学的観点から許容できる希釈剤または担体と組み合わせられる。実験１：循環するＴａｔタンパク質の病原性作用Ｔａｔの存在におけるＴ細胞の免疫抑制末梢血の活性化されたＴリンパ球に対するＴａｔの作用を研究した。免疫磁性により単離された単核細胞（ＰＭＢＣ）およびＴリンパ球（ＨＬＡ３５ＤＲ−）を、Ｔａｔ分子の存在または非存在において、抗ＣＤ₃抗体により活性化させた。５日間培養した後、Ｈ₃−チミジンの組込みにより細胞の増殖を測定した。ＴａｔはＨＬＡＤＲ−Ｔ細胞の増殖を阻害することを結果は示した（１．５μｇ／ｍｌの濃度において、８５％の阻害）。この阻害は特定の抗Ｔａｔ抗体の存在において消失した（Ｉｎｔｒａｃｅｌ、Ｕ．Ｋ．）。実験２：循環するＴａｔタンパク質の病原性作用Ｔａｔの存在におけるマクロファージに対するインターフェロンの作用の阻害慣用の生物学的試験により、ＭＤＢＫ細胞に対するＶＳＶウイルスの細胞変性効力の測定を使用して、インターフェロン−αの抗ウイルス作用に対するＴａｔの作用を測定した。外性インターフェロンに対するＴａｔの作用Ｔａｔの投与量を増加すると、１〜２０μｇ／ｍｌの範囲のＴａｔ濃度についての投与量／作用曲線に従い、低い濃度から外性インターフェロンの抗ウイルス効力を阻害することができた。代表的な実験において、希釈１／４，８００（１５０Ｉ．Ｕ．に相当する）までに明らかなインターフェロン−αの保護作用は、１０μｇ／ｍｌのＴａｔ濃度について、希釈１／３００に減少する。１０μｇ／ｍｌのＴａｔ濃度において、外性インターフェロンの４，８００の希釈で、ＶＳＶの力価はこうして１０^3.8（Ｔａｔを含まないインターフェロン試料）から１０^5.5（Ｔａｔの存在におけるインターフェロン試料）に増加する。これらの実験において、Ｔａｔ分子によるインターフェロン−αの抗ウイルス作用の阻害は、特定の抗Ｔａｔ抗体（Ｉｎｔｒａｃｅｌ、Ｕ．Ｋ．）の存在において抑制され、そしてまた我々が製造したウマ抗体（下記の実施例を参照のこと）により抑制される。実験３：ＨＩＶ−１に感染した被検者における細胞外の立体配置におけるＴａｔタンパク質の検出血清反応陽性患者の血清中の抗Ｔａｔ抗体の存在ａ）抗原として自然Ｔａｔ分子を使用する血清抗Ｔａｔ抗体のＥＬＩＳＡ研究を、５０人の血清反応陽性被検者および１５人の血清反応陰性被検者について実施した。血清反応陰性被検者のすべての血清および血清反応陽性被検者の２０の血清は、限界値（カット−オフ）（ＯＤ＝０．２５０）より下の光学密度で抗Ｔａｔ抗体の存在を明らかにしなかった。前記限界値を超えたＨＩＶ感染被検者の３０の血清の中で、６つは０．５００より大きいＯＤを有する。一方において抗Ｔａｔ抗体の存在と、他方において臨床的症状および血液１ｍｍ³当たりＣＤ４細胞の数との間の明らかな相関を見出すことができなかった。ｂ）抗原としてＴａｔの種々のペプチドを使用する血清抗Ｔａｔ抗体のＥＬＩＳＡ研究を、血清反応陽性被検者について、ＨＩＶ感染の進展の種々の段階において実施した−無症候性被検者；前エイズの臨床的症状を示す患者およびエイズに罹った患者。この研究の結果は下記の通りである：１）Ｔａｔのペプチド配列ＭＥＰＶＤＰＲＬＥＰＷＫＨＰＧ（Ｎ末端における残基１−１５）ＨＱＶＳＬＳＫＱＰＴＳＱＰＲＧＤ（Ｃ末端における残基６５−８０）は、血清反応陽性被検者の血清の大部分により認識されが、血清反応陰性被検者（対照）の血清により認識されなかった。反応は非常に陽性であったが、相関は被検者におけるＨＩＶ感染の進展とＣＤ４数とに関して証明不可能であった。２）研究した他の配列は、適当な方法において、血清反応陽性個体または対照のいずれからの血清よっても認識されなかった。各配列についてわずかに稀な血清のみは、限界値より大きい光学密度を示した（対照血清の平均の２倍）。３）大部分の反応性配列（アミノ酸６５−８０）はインテグリンにより認識されるＲＧＤ残基を含有する配列であることを注意することが重要である。実施例１：免疫原性Ｔａｔタンパク質（Ｔａｔトキソイド）の製造ホルムアルデヒドの存在におけるＴａｔタンパク質の不活性化７０ｍＭのリン酸二ナトリウム、ｐＨ８．０、中のＴａｔ（１ｍｇ／ｍｌ）の溶液に、ホルムアルデヒドを３３ｍＭの最終濃度に添加する。この混合物を３７℃において１、３、５、７および９日間インキュベートする。インキュベーション期間の各々の終わりにおいて、試料を採り、そしてグリシンを１００ｍＭの最終濃度に添加することによって、ホルムアルデヒドとの反応をブロックする。各試料を４℃においてその体積の１００倍のＰＢＳ（リン酸塩緩衝生理食塩水）に対して一夜透析する。実施例２：免疫原性Ｔａｔタンパク質（Ｔａｔトキソイド）の製造グルタルアルデヒドの存在におけるＴａｔタンパク質の不活性化７０ｍＭのリン酸二ナトリウム、ｐＨ８．２中のＴａｔ（１ｍｇ／ｍｌ）の溶液に、グルタルアルデヒドを０．０２６Ｍまたは０．００２６Ｍの最終濃度に添加する。グルタルアルデヒドとの反応を１分から３時間までの変化する種々の時間続ける。選択した反応時間後、実験室温度において、グリシンを１００ｍＭの最終濃度に添加することによって、反応をブロックする。種々の試料を４℃においてそれらの体積の１００倍のＰＢＳに対して１６時間透析する。実施例３：免疫原性Ｔａｔタンパク質（Ｔａｔトキソイド）の製造Ｔａｔの不活性化およびテタヌストキシンへの同時のカップリング７０ｍＭ〜１００ｍＭのリン酸塩緩衝液（６．８から８．２までの変化するｐＨ値）中のテタヌストキシンとＴａｔとの１／１５のモル比の混合物に、グルタルアルデヒドを最終濃度（０．００２６Ｍから０．０２６Ｍまでの変化する）に添加し、そして不活性化およびカップリング反応を実験室温度において種々の時間（３〜１５分）起こさせる。グリシンを１００ｍＭの最終濃度に添加することによって反応をブロックし、そして種々の試料を４℃においてそれらの体積の１００倍のＰＢＳに対して１６時間透析する。実施例４：Ｔａｔトキソイドの免疫原的効力および抗原性マウスにおける免疫原性Ｔａｔトキソイド：ＥＬＩＳＡによる抗体ホルムアルデヒド（Ｔａｔトキソイド）によるか、またはグルタルアルデヒド（Ｔａｔ−ポラン）によるか、またはテタヌストキシンへのカップリング（接合Ｔａｔ−テタヌストキシン）後において、不活性化されたＴａｔの種々の調製物、すなわち、実施例１〜３の免疫原性化合物、の免疫原的効力をマウスにおいて測定した。体重１８〜２０ｇのスイスマウスをフロインド完全アジュバントの存在において実施例１、２および３の免疫原の２回の皮下注射により免疫化し、第２回の注射はフロインド不完全アジュバントの存在において２０μｇの乳剤調製物を使用して第１回の注射後３週において実施した。反復注射後１５日に、血液試料を心臓内で採った。血清中の抗Ｔａｔ抗体をＥＬＩＳＡにより測定した。光学密度を４９０ｎｍにおいて測定した。得られた結果を表１に示す。これらの結果が示すように、すべてのＴａｔ調製物は種々の程度に免疫原性であるが、ただし短時間（３分）グルタルアルデヒドで処理した接合Ｔａｔ−ＴＴは毒性であり、マウスを２４時間以内に殺した（弱く不活性化されたＴＴ）。非免疫化マウスはＴａｔトキソイドに関して同一の方法において自然Ｔａｔ０．２００（ＯＤ）より低く応答することを指摘すべきである。さらに、これらの結果が示すように、自然Ｔａｔはトキソイドと同一の方法において抗体により認識され、これによりそれらの同等の抗原性が確証されそして、また、免疫化のためのＴａｔトキソイドの使用が正当化された。実施例５：急性毒性ＴａｔトキソイドおよびＴａｔポランの調製物の毒性を、体重１８〜２０ｇのスイスマウスへの皮下注射により決定した。Ｔａｔトキソイド（７日）およびＴａｔポラン（１５分；０．０２６Ｍ）の調製物を１００μｇ／マウスの投与量で投与した。動物は７日間観察した。毒性の発現徴候は観察されなかった。動物の体重は増加し続けた。剖検による器官の顕微鏡検査において、異常は明らかにされなかった。実施例６：抗Ｔａｔ抗体抗Ｔａｔ抗体を下記のようにして調製した：Ｇタンパク質のカラムにより、Ｔａｔポランで免疫化されたマウスの血清からＩｇＧ画分を単離した。また、消化により単離されたＩｇＧ画分からＦ（ａｂ’）２断片を調製した。これらの画分の免疫学的反応性をＥＬＩＳＡにより検査した。実施例７：Ｔａｔトキソイドの生物学的不活性ＨＩＶ−１の「長期反復」（ＬＴＲ）の遺伝子リポーターのクロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）依存性の発現活性の試験において、実施例１からの１、３、５および９日間不活性化した種々のＴａｔトキソイドを試験した。この試験の原理は下記の通りである：ＨＩＶのＬＴＲの制御下にＣＡＴ遺伝子を含有するＨｅＬａ系統の細胞を、自然Ｔａｔまたはトキソイドと６時間接触させる。２４時間培養した後、細胞を溶解し、生産したＣＡＴの量をＣＡＴの活性について試験により測定する。この試験はクロラムフェニコールに結合したアセチル−ＣｏＡの百分率を測定する。Ｔａｔ分子が活性である場合、アセチル化クロラムフェニコールの高い百分率が存在し、そしてそうでない場合、百分率が低いであろう。標準的方法において、これらの付着性細胞の培養をＲＰＭＩ、１０％ＦＣＳ培地中で実施する。作用／投与量を与えるために添加されるＴａｔの濃度は、上清の１ｍｌ当たり１μｇ〜１０μｇの範囲である。本明細書において示した結果は、Ｔａｔトキソイドが３日後完全に不活性化され、１日における残留活性が低いことを示す。実施例８：Ｔａｔトキソイドの病原性作用の非存在ａ）Ｔａｔトキソイドの存在におけるＴ細胞の免疫抑制の非存在（実験１および２と対照的）末梢血の活性化されたＴリンパ球に対するＴａｔトキソイド（５日）の作用を研究した。免疫磁性により単離された単核細胞（ＰＭＢＣ）およびＴリンパ球（ＨＬＡ３５ＤＲ−）を、実施例１の免疫原性化合物の存在または非存在において抗ＣＤ₃抗体により活性化した。５日の培養後、細胞の増殖をＨ₃−チミジンの組込みにより測定した。自然Ｔａｔと対照的に、ＴａｔトキソイドはＨＬＡＤＲ −Ｔ細胞の増殖を阻害しないことが結果により示された。したがって、Ｔａｔトキソイドの存在における培養物中の５μｇ／ｍｌの投与量において、細胞の増殖は対照の増殖と同一であった。ｂ）Ｔａｔトキソイドの存在におけるマクロファージに対するインターフェロン−αの作用の阻害の非存在慣用の生物学的試験により、ＭＤＢＫ細胞に対するＶＳＶウイルスの細胞変性効力の測定を使用して、インターフェロン−αの抗ウイルス作用に対するＴａｔトキソイドの作用を測定した。外性インターフェロンに対するＴａｔトキソイドの作用自然Ｔａｔと対照的に、同等の投与量の実施例１のＴａｔトキソイドは、外性インターフェロンの抗ウイルス効力を阻害させなかった。代表的実験において、希釈１／４，８００（１５０ＩＵに相当する）まで明らかであるインターフェロン−αの保護作用は５０μｇのＴａｔトキソイドの存在において維持されるが、自然Ｔａｔではそれは１／３００に減少する。外性インターフェロンの希釈４，８００において、ＶＳＶの力価は１０^3.8における対照のレベルに維持される（Ｔａｔトキソイドを使用するインターフェロンの試料）が、それは１０^5.5に増加する（Ｔａｔの存在におけるインターフェロンの試料）。実施例９：自然Ｔａｔの作用に関する抗Ｔａｔトキソイド抗体の保護の役割実験１のＴａｔトキソイドに対する抗体（３日間のホルムアルデヒドを使用する処理）を、超免疫化ウマにおいて調製した。これらの抗体から、また、Ｆ（ａｂ’）２断片を実施例６に記載する手順に従い調製した。抗体は、Ｆ（ａｂ’）２断片と同様に、種々の試験において自然Ｔａｔの種々の生物学的活性を阻害する：ＨＩＶのＬＴＲのトランス活性化（ＣＡＴ試験）（実施例７参照）、免疫抑制（実験１参照）、培養物に対する外性インターフェロン−αの作用の阻害（実験２参照）。自然Ｔａｔの１μｇ当たり４０μｇの抗体の投与量において抗体またはＦ（ａｂ’）２断片と、この自然Ｔａｔを３７℃において１時間インキュベートするか、またはしないで、自然Ｔａｔを使用して実験２および実施例７を反復した。抗体は自然Ｔａｔの作用を阻害することが結果により示された。実施例１０：抗Ｔａｔ抗体と抗インターフェロン−α抗体との組み合わせによる細胞増殖の系統的回復：抗Ｔａｔ抗体および抗インターフェロン−α抗体の相乗作用ＨＩＶ−１でｉｎｖｉｔｒｏ感染させ、そして６日間培養した健康な被検者のＰＢＬ（末梢血の単核細胞）は免疫抑制活性を有することが見出された。事実、６日間感染させ（または非感染の）そして照射した前記細胞をスタヒロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）エンテロトキシンＢ（ＳＥＢ）タンパク質により活性化されたオートロガス細胞に対して１〜５の比率で添加する場合、４日後、オートロガス細胞の増殖は対照（非感染細胞）に関して８０％だけ減少することが見出される。このモデルにおいて、抗インターフェロン−α抗体をｉｎｖｉｔｒｏ感染した細胞の培養物に添加する場合、これらの細胞は被検者の５０％においてそれらのサプレッサー作用を喪失する。これらの場合の２０％において、抑制細胞はサプレッサー作用の６０％を喪失し、そして３０％の場合において、このサプレッサー作用は有意に維持される。抗Ｔａｔ抗体（実験１に記載するモノクローナル抗体、または実施例９のウマからのポリクローナル抗体）を抗インターフェロン−α抗体に添加する場合、ｉｎｖｉｔｒｏ感染した細胞は場合の１００％においてそれらのサプレッサー作用を喪失する。これらの実験は、ＨＩＶ１により誘発された免疫抑制におけるＴａｔおよびインターフェロン−αの組み合わされた毒性の役割を証明し、そして抗インターフェロン抗体および抗Ｔａｔ抗体の組み合わせが正常の免疫性を回復することを証明する。実施例１１：ＨＩＶ−１感染患者の免疫化２５０〜５００の範囲のＣＤ４リンパ球レベルを有する６人のボランティアの患者を、実施例２に従い調製されたＴａｔポランで免疫化した（１５分）。このために、患者に１カ月の間隔において６カ月の反復でＴａｔトキソイド（４００ μｇ／注射）の３回の初期の筋肉内注射をした。これらの注射に使用したアジュバントはリン酸カルシウムであった。免疫化の前および後（最初の注射後７カ月）において、これらの個体に見出された応答を下記表に示す。これらの結果が示すように、自然Ｔａｔに対する抗体の応答は実施例１のＴａｔトキソイドで免疫化することによって非常に有意に増加し、そしてＣＤ４リンパ球のレベルはこの期間を通じて安定に止まった。この期１の試験はＴａｔトキソイドにより免疫化の無毒性を示し、そしてその免疫原性を確証する。特に、患者の生物学的定数、特にＣＤ４表現型は安定に止まった。実施例１２：免疫原性Ｎｅｆタンパク質（Ｎｅｆトキソイド）の調製ホルムアルデヒドの存在におけるＮｅｆタンパク質の不活性化７０ｍＭのリン酸二ナトリウム、ｐＨ８．０、中のＮｅｆタンパク質（１ｍｇ／ｍｌ）の溶液に、ホルムアルデヒドを３３ｍＭの最終濃度に添加する。この混合物を３７℃において１、３、５、７および９日間インキュベートする。インキュベーション期間の各々の終わりにおいて、試料を採り、そしてグリシンを１００ｍＭの最終濃度に添加することによって、ホルムアルデヒドとの反応をブロックする。各試料をその体積の１００倍のＰＢＳ（リン酸塩緩衝生理食塩水）に対して４ ℃において一夜透析し、そしてＮｅｆトキソイドを単離する。実施例１３：免疫原性Ｎｅｆタンパク質（Ｎｅｆポラン）の調製グルタルアルデヒドの存在におけるＮｅｆタンパク質の不活性化７０ｍＭのリン酸二ナトリウム、ｐＨ８．２、中のＮｅｆ（１ｍｇ／ｍｌ）の溶液に、グルタルアルデヒドを０．０２６Ｍまたは０．００２６Ｍの最終濃度に添加する。グルタルアルデヒドとの反応を１分〜３時間で変化する種々の時間続ける。選択した反応時間後、実験室温度において、グリシンを１００ｍＭの最終濃度に添加することによって、反応をブロックする。種々の試料を４℃においてそれらの体積の１００倍のＰＢＳに対して１６時間透析し、そしてＮｅｆポランを単離する。実施例１４：Ｎｅｆトキソイドの免疫原的効力および抗原性マウスにおける免疫原性Ｎｅｆトキソイド：ＥＬＩＳＡによる抗体ホルムアルデヒド（Ｎｅｆトキソイド）によるか、またはグルタルアルデヒド（Ｎｅｆポラン）により不活性化されたＮｅｆの種々の調製物、すなわち、実施例１２および１３の免疫原性化合物、の免疫原的効力をマウスにおいて測定した。体重１８〜２０ｇのスイスマウスをフロインド完全アジュバントの存在において実施例１２および１３の免疫原の２回の皮下注射により免疫化し、第２回の注射はフロインド不完全アジュバントの存在において２０μｇの乳剤調製物を使用して第１回の注射後３週において実施した。反復注射後１５日に、血液試料を心臓内で採った。血清中の抗Ｎｅｆ抗体をＥＬＩＳＡにより測定した。光学密度を４９０ｎｍにおいて測定した。得られた結果を下記表に要約する。非免疫化マウスの血清はこれらのＥＬＩＳＡ試験において０．２（ＯＤ）より低い応答レベルを与えることに注意すべきである。これらの結果が示すように、自然Ｎｅｆはトキソイドと同一の方法において抗体により認識され、これによりそれらの同等の抗原性が確証されそして、また、免疫化のためのＮｅｆトキソイドの使用が正当化される。

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項【提出日】１９９６年１１月１９日【補正内容】抗Ｔａｔ抗体（実験１に記載するモノクローナル抗体、または実施例９のウマからのポリクローナル抗体）を抗インターフェロン−α抗体に添加する場合、ｉｎｖｉｔｒｏ感染した細胞は場合の１００％においてそれらのサプレッサー作用を喪失する。これらの実験は、ＨＩＶ１により誘発された免疫抑制におけるＴａｔおよびインターフェロン−αの組み合わされた毒性の役割を証明し、そして抗インターフェロン抗体および抗Ｔａｔ抗体の組み合わせが正常の免疫性を回復することを証明する。実施例１２：免疫原性Ｎｅｆタンパク質（Ｎｅｆトキソイド）の調製ホルムアルデヒドの存在におけるＮｅｆタンパク質の不活性化７０ｍＭのリン酸二ナトリウム、ｐＨ８．０、中のＮｅｆタンパク質（１ｍｇ／ｍｌ）の溶液に、ホルムアルデヒドを３３ｍＭの最終濃度に添加する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＣ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者ザギュリー，ダニエルフランス国，エフ−75007 パリ，リュフレドリク−ル−プレイ，１

Claims

【特許請求の範囲】１．カップリング剤、例えば、アルデヒドで化学的に処理することによってＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２、ＨＴＬＶ−１またはＨＴＬＶ−２ウイルス調節タンパク質から誘導されるか、またはカップリング剤で前処理して活性化された担体タンパク質から誘導され、前記調節タンパク質に対する抗体により認識されることができ、かつ前記自然タンパク質を中和またはブロックする抗体をつくるために十分な免疫原性を保持すると同時に、前記自然タンパク質の毒性の生物学的性質の少なくとも５０％を失っていることを特徴とする、無毒であるために、ヒトに投与できる免疫原性化合物。２．下記のＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２ウイルス調節タンパク質から誘導されたことを特徴とする、請求項１に記載の免疫原性化合物：Ｎｅｆ、Ｔａｔ、ＶｉｆまたはＲｅｖ。３．Ｔａｔタンパク質から誘導されたことを特徴とする、請求項２に記載の免疫原性化合物。４．Ｔａｘタンパク質から、ＨＴＬＶ−１またはＨＴＬＶ−２ウイルスから誘導されたことを特徴とする、請求項１に記載の免疫原性化合物。５．請求項１〜４のいずれか一項に記載の免疫原性化合物を含んでなることを特徴とする、医薬組成物。６．ヒトまたは動物の体の治療法において使用のための請求項１〜４のいずれか一項に記載の免疫原性化合物。７．ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２、ＨＴＬＶ−１またはＨＴＬＶ−２ウイルス調節タンパク質をアルデヒドで化学的に処理し、必要な化合物を選択し、次いで精製することを特徴とする、請求項１〜４のいずれか一項に記載の免疫原性化合物を製造する方法。８．化学的処理がアルデヒドによる処理および引き続く担体タンパク質へのカップリングを含んでなることを特徴とする、請求項７に記載の方法。９．哺乳動物を請求項１〜４のいずれか一項に記載の免疫原性化合物で免疫化することを特徴とする、抗ＨＩＶ−１、抗ＨＩＶ−２、抗ＨＴＬＶ−１または抗ＨＴＬＶ−２ウイルス調節タンパク質抗体を生産する方法。１０．ＥＢウイルスで形質転換されたＢリンパ球をクローニングし、次いで前記形質転換されたＢリンパ球により分泌される必要な抗体を集めることを特徴とする、抗ＨＩＶ−１、抗ＨＩＶ−２、抗ＨＴＬＶ−１または抗ＨＴＬＶ−２ウイルス調節タンパク質抗体を生産する方法。１１．ＥＢウイルスで形質転換されたＢリンパ球をクローニングし、次いで前記形質転換されたＢリンパ球により分泌される必要な抗体を集めることを特徴とする、抗ＨＴＬＶ−１または抗ＨＴＬＶ−２ウイルスＴａｔタンパク質抗体を生産する方法。１２．ＥＢウイルスで形質転換されたＢリンパ球をクローニングし、次いで前記形質転換されたＢリンパ球により分泌される必要な抗体を集めることを特徴とする、抗ＨＴＬＶ−１または抗ＨＴＬＶ−２ウイルスＴａｘタンパク質抗体を生産する方法。１３．抗体をファージのライブラリーから出発する遺伝的組換えにより生産することを特徴とする、抗ＨＩＶ−１、抗ＨＩＶ−２、抗ＨＴＬＶ−１または抗ＨＴＬＶ−２ウイルス調節タンパク質抗体を生産する方法。１４．酵素の消化を抗体について実施することを特徴とする、請求項９〜１３のいずれか一項に記載の方法により生産された抗体のＦ（ａｂ’）２またはＦ（ａｂ）断片を製造する方法。１５．請求項１〜４のいずれか一項に記載の免疫原性化合物で哺乳動物を免疫化することによって得られた、抗ＨＩＶ−１、抗ＨＩＶ−２、抗ＨＴＬＶ−１または抗ＨＴＬＶ−２ウイルス調節タンパク質抗体。１６．請求項１５に抗体の記載のＦ（ａｂ’）２またはＦ（ａｂ）断片。１７．請求項１５および１６のいずれか一項に記載の抗体を含んでなることを特徴とする、医薬組成物。１８．請求項１〜５のいずれか一項に記載の免疫原性化合物と、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２、ＨＴＬＶ−１またはＨＴＬＶ−２ウイルスのＧａｇ、ＰｏｌまたはＥｎｖタンパク質との組み合わせを含んでなることを特徴とする、医薬組成物。１９．請求項１〜５のいずれか一項に記載の免疫原性化合物と、自然であるか、または物理的、化学的、遺伝学的または免疫学的処理により不活性化されたｇｐ１２０／ｇｐ１６０タンパク質、またはこのタンパク質の修飾または非修飾ペプチド画分との組み合わせを含んでなることを特徴とする、医薬組成物。２０．アルデヒドで不活性化された後の、下記式：ＨＱＶＳＬＳＫＱＰＴＳＱＰＲＧＤまたはＭＥＰＶＤＰＲＬＥＰＷＫＨＰＧを有するか、またはＨＩＶ１またはＨＩＶ２の自然Ｔａｔに対応する免疫原性化合物。２１．− 請求項１〜４のいずれか一項に記載の免疫原性化合物、 − その自然の形態と異なる形態のサイトカインでありかつ前記サイトカインの不活性化されたまたは不活性の類似体または不活性のまたは不活性化された断片である免疫原性化合物、を含んでなるワクチン組成物。２２．− 抗ＨＩＶ−１、抗ＨＩＶ−２、抗ＨＴＬＶ−１または抗ＨＴＬＶ− ２ウイルス調節タンパク質抗体、 − 抗サイトカイン抗体、例えば、抗ヒトインターフェロン−α抗体、を含んでなる組成物。