JPH11501646A - ポリマー微粒子を製造するための方法、該方法により製造された微粒子及び医療診断におけるそれらの使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、その壁材料がα−，β−又はγ−ヒドロキシカルボン酸のポリエステルから作られた超音波診断のための気体含有微粒子を製造するための方法、該方法に従って製造された粒子、及び医療診断におけるそれらの使用に関する。

Description

【発明の詳細な説明】 ポリマー微粒子を製造するための方法、該方法により製造された微粒子及び医療 診断におけるそれらの使用 本発明は、請求項の記載を特徴とするもの、即ちその壁材料がα−，β−又は γ−ヒドロキシカルボン酸のポリエステルから作られた超音波診断のための気体 含有微粒子を製造するための方法、該方法により作られ得る粒子、及び医療診断 におけるそれらの使用に関する。 超音波診断は、困難のない単純な取扱いのため医学において極めて広範囲に用 いられている。超音波は、異なるタイプの組織のインターフェースにおいて反射 される。この場合に作られるエコーシグナルは電気的に増強され視覚化される。 超音波を用いる血管及び内部器官の視覚化は、一般に、その中に存在する血流 の視覚化を許容しない。液体、特に血液は、周囲の領域と比較して、密度及び圧 縮率の差がある場合にのみ超音波コントラストを作る。医学の超音波診断におい ては、例えば気体を含み又は気体を作り出す物質は、気体と周囲の血液との間の インピーダンスの差が液体又は固体と血液とのそれよりかなり大きいので、造影 剤として用いられる〔Levine，R．A.，J．Am．Coll．Cardiol．3(1989)28; Mach i，I．J．CV 11(1983)3〕。 Roelandtら〔Ultrasound Med．Biol．8（1982）471-492〕は、心臓のエコーコ ントラストが細かい気泡を含む溶液の末梢の注入により達成され得ることを記載 する。これらの気泡は、例えば振とうし、他に撹拌し又は二酸化炭素を添加する ことによって、生理的に適合可能な溶液中で作られる。しかしながらそれらは数 又はサイズに 関して標準化されておらず、不十分にのみ再現され得る。また、それらは、それ らの役立つ寿命が短いので、一般に安定でない。ほとんどの場合それらの平均直 径は、それらが左心、肝臓、腎臓又は脾臓のような器官を後に造影すると共に、 肺の毛細管を通過することができないように、赤血球の径を超える。更に、それ らは、形成された超音波エコーが泡形成、融合、溶解のような互いから分離する ことができないいくつかの過程からなるので、定量に適さない。これにより、例 えばこれらの超音波造影剤の助けにより、心筋層中の造影剤の跡を測定すること により遷移時間に基づく情報を得ることができない。このため、その散乱因子が 十分な安定性を有する造影剤が必要とされる。 EP 0 131 540は、糖による気泡の安定化を記載する。これは、コントラスト効 果の再現性及び均一性を改善するが、これらの気泡は肺を通過して生き残らない 。 EP 0 122 624及び0 123 235 は、糖、糖アルコール、及び塩の気泡安定化効果 が表面活性物質の添加によって改良されることを記載する。肺の毛管の通過並び に大腿動脈血管及び肝臓又は脾臓のような種々の器官を視覚化する可能性は、こ れらの超音波造影剤で供される。しかしながらこの場合、気泡は細胞細胞により 吸収されないので、コントラスト効果は脈管腔に限定される。 長期間体内で変化しない超音波造影剤は記載されていない。静脈内投与後の選 択的濃縮による十分なシグナル強度での器官の視覚化又は定量は、これらの媒体 では可能でない。 例えば超音波造影剤として空気のような気体の被包がEP 0 224 934に記載され る。この場合に用いられる壁材料は、変性により生ずる細胞毒性効果も伴い得る 蛋白質、特に周知であるアレルギー特性を有するヒト血清アルブミンからなる。 特許EP 0 327 490は、生分解性合成材料に基づく超音波診断のための気体状微 粒子を記載する。生分解性ポリマーとして、例えばα−，β−又はγ−ヒドロキ シカルボン酸も開示される。これらの薬剤は、十分な生体内作用寿命を有し、そ して静脈内投与の後、それらは網内細胞系においてこれにより肝臓又は脾臓にお いても細胞内に濃縮するが、本願の実施例により製造され、ヒドロキシカルボン 酸に基づく粒子は、比較的小さな後方散乱係数を有するだけである。それゆえ、 それらから調製されたコントラスト媒体調製物は全ての場合に満足いかない。 それゆえ本発明の目的は、先行技術の粒子より優れた後方散乱係数を有する粒 子を得ることが可能になる、α−，β−又はγ−ヒドロキシカルボン酸のポリエ ステルに基づく粒子を製造するための改良された方法を提供することであった。 粒子及びそれから調製される造影剤調製物は、例えば大きな気体の損失及び基 本的な定量を行うことなく、静脈内投与後に心臓の左心に到達し、アレルギーの 可能性なく優れた適合性を有し、そして水性媒体中で集塊しないのに十分に小さ くかつ安定であるような近年の造影剤に求められる他の要求に更に合致すべきで ある。 この目的は本発明により達成される。 各々のポリエステル及び必要に応じて表面活性物質を、その少くとも１つの溶 媒が容易に水と混和することができる有機溶媒又は溶媒混合物に溶かし、次に液 体過フッ化化合物又は水をこの溶液に分散させ、そして次に、この分散液を撹拌 機構により表面活性物質を含む水に分散し、それにより、ガス中にポンピングし 、真空を適用することにより溶媒を除去することにより、α−，β−又はγ−ヒ ドロキシカルボン酸からポリエステルに基づく微粒子を作ることができることが 見い出された。この場合、最初の水又は液体過フッ化 化合物を含む粒子が析出する。次に、粒子を含む懸濁液は、適切な医薬として許 容される凍結保護物質と混合され、凍結乾燥されて、それにより粒子中に含まれ る液体はかなり逃れ、そして凍結乾燥装置を要求される気体（一般に空気）でエ レーションした後に置換される。乾燥時間により、必要に応じて少量の液体（水 又は過フッ化化合物）が粒子中に蒸気として残る。 過フッ化化合物としては、好ましくはペルフルオロペンタン、ペルフルオロヘ キサン、ペルフルオロ−１，３−ジメチルシクロヘキサン、ペルフルオロシクロ ヘキサン、ペルフルオロデカリン、又はペルフルオロエーテルを用いれる。 本発明による方法に用いられるポリマーとしては次にものが挙げられる： ポリグリコリド（PGA）、並びにそのＬ−ラクチド（PGA/PLLA）又はポリラク チド(PLA)とのコポリマー、並びにそのステレオコポリマー、例えばポリ−Ｌ− ラクチド（PLLA）、ポリ−DL−ラクチドもしくはポリ−Ｌ−ラクチド／DL−ラク チド又はポリ−β−ヒドロキシブチレート（PHBA）、並びにそのβ−ヒドロキシ バレレート（PHBA/HVA）、ポリ−β−ヒドロキシプロピオネート（PHPA）、ポリ −ρ−ジオキサノン(PDS)、ポリ−δ−バレロラクトンもしくはポリ−ξ−カプ ロラクトンとのコポリマー。 乳酸（LA）とグリコール酸（GA）との間のコポリマーにおいて、そのモノマー に関するモル比は85：15〜50：50の範囲、好ましくは75：25である。 ポリマーのための有機溶媒又は溶媒混合物としては、ジクロロメタン、アセト ン、酢酸エチル、酢酸メチル、トリアセチン、クエン酸トリエチル、乳酸エチル 、酢酸イソプロピル、ギ酸プロピル、ギ酸ブチル、ギ酸エチル及び／又は乳酸メ チルが好ましくは用いられ る。 ソルベート、サッカロースエステル（Sisterna The Netherlands）サッカリドエ ステル〔Ryoto 糖エステル(Tokyo)〕、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、脂肪 アルコールポリグリコシド、Chaps（Serva）、Chap（Calbiochem）、Chapso（Ca lbiochem）、デシル−β−Ｄ−グリコピラノシド、デシル−β−Ｄ−マルトピラ ノシド、ドデシル−β−Ｄ−マルトピラノシド、オレイン酸ナトリウム、ポリエ チレングリコール、ポリビニルアルコール又はそれらの混合物の群からの物質が 用いられる。 気体としては、空気、窒素、酸素、希ガス、一酸化二窒素、二酸化炭素、ハロ ゲン化炭化水素、気体形態における飽和もしくは不飽和炭化水素、二酸化窒素及 び／又はアンモニアが用いられる。 α−，β−又はγ−ヒドロキシカルボン酸のポリエステルに基づく微粒子を製 造するための他の方法は、要求されるポリマー及び任意にアミノ酸を少くとも１ の有機溶媒中に溶かし、そしてこの溶液を超臨界ガスで満たされ又はそれが流れ るカラム内にノズルを通して噴霧し、それによりその溶媒が超臨界ガスにより取 り込まれることからなる。 ポリマー又はコポリマーとしては、最初に言及される製造方法に言及されるの と同じ物質がこの変形方法に用いられる。それと同じものがコポリマーの混合比 のために適用される。好ましくは、各々の場合に用いられる溶解されたポリマー （ポリエステル）中の界面活性剤のかわりにアミノ酸が供される。アミノ酸とし ては、好ましくはＬ−リシン、Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−トリプトファン、及 びＤ，Ｌ−フェニルアラニンが用いられる。 溶媒又は溶媒混合物としては、最初の変形方法において言及された溶媒が適し ている。 過フッ化化合物の添加はこの場合必要ない。 超臨界気体としては、一酸化二窒素、二酸化炭素、ハロゲン化炭化水素、飽和 もしくは不飽和炭化水素、二酸化窒素及び／アンモニアが用いられるが、二酸化 炭素が好ましい。超臨界気体は、必要に応じて例えばエタノールのような低級ア ルコール、エステル又は窒素のような気体のような10％までの添加物を含むこと ができる。 結果として生ずる粒子の大きさは、注入ノズルのタイプ、大きさ及び形状、カ ラム内の作動圧及び温度により制御され得る。静脈内投与された超音波造影剤の ために必要な粒径（10μｍ未満）は90〜100bar、好ましくは94〜96bar の間の作 動圧及び36℃の温度で0.5 mmのノズル径の10°の噴霧角のノズルを用いることに よって得ることができる。 本発明の他の態様は、上述の方法に従って製造することができる超音波診断の ための微粒子に関する。 本発明の他の態様は、上述の方法に従って製造される微粒子を含む超音波診断 のための造影剤に関する。 これらの薬剤は、乾燥させた微粒子を医薬として許容される懸濁媒体中に懸濁 することにより、得ることができる。 医薬として許容される懸濁媒体としては、例えば水（p.i.）１以上の無機塩の 水溶液、例えば生理電界質溶液及び緩衝液、例えばタイロード溶液、グルコース もしくはラクトースのようなモノーもしくはジサッカリドの水溶液、例えばポリ ソルベートもしくはポリサッカリドの群からの表面活性物質を更に任意に有する マンニトールのような糖アルコール、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリ コール、サッカロースモノー及びジエステルもしくはポロキサマー もしくはポロキサミンの群からの物質又はそれらの混合物及び／又はグリセリン のような生理的に適合する多価アルコールが適する。しかしながら、注入目的の ために適した水が好ましい。 投与の信頼性を増加させるために、懸濁液は注入直前にろ過することができる 。 α−，β−又はγ−ヒドロキシカルボン酸のポリエステルに基づく本発明の方 法により製造された微粒子又はそれから調製された造影剤は、超音波媒体にセッ トされる全ての要求に合致する。薬剤内に含まれる粒子は、以下の利点により区 別される： ○それらは生体内で迅速に分解され、 ○デグラデーション産物は毒物学的に無害であり、 ○それらは血液循環内に十分な長期間、循環し、 ○それらは超音波診断の全てのモード、特に非線形的効果が用いられるモードに も用いることができ、 ○それらは十分に許容され、 ○それらは均一な制御可能な大きさの分布を示し、 ○それらは製造するのが容易であり、 ○ポリマー粒子はせまい分子量分布を有し、 ○それらは肺を通過して生き残るのに十分に安定であるので、左心を造影するの にも適しており、そして、 ○それらは網内細胞系により取り込まれるので、肝臓及び脾臓を造影するのにも 適している。 本発明の方法により製造される粒子は、特に、α−，β−，γ−ヒドロキシカ ルボン酸から作られるEP 0 327 490に開示される粒子より大きな後方散乱係数を 有する。これは、比較テストにも示した。これにより、５分後のEP 0 327 490に 記載される水中の粒子の新しく調製された懸濁液（実施例１）（濃度18.6mg／ml ）については 、トランスミッター周波数５MHz おいてα_s＝４×10^-4〔dB／cm〕の後方散乱係 数が測定されたのに対して、他は同一条件下である本発明による調製物（水中に 懸濁した実施例１による粒子／濃度0.18mg／ml）については、α_s＝2.7×10^-1〔 dB／cm〕の後方散乱が測定された。本発明による調製物の濃度は比較調製物より 100 倍小さいこと、即ち５倍の後方散乱係数の増加を生じたことが考慮される。 像形成効果は後方散乱係数に直接依存するので、本発明により製造された粒子は 相当により有効な造影剤を表す。 後方散乱係数の測定は、脈管内に存在する造影剤により生ずる後方散乱シグナ ルを測定する生体内実験装備において行われる（“Standardization of the Mea surement of Acoustical Parameters of Ultrasound Contrast Agents”（First European Symposium on Ultrasound Contrast Imaging，January 25-26，1996 ，Rotterdam）も参照のこと）。 以下の実施例は、本発明の対象物をより詳細に説明するために用いられ、これ らの実施例に限定することを意図するものではない。 実施例１ mlのメチレンクロライド／アセトン（容量比50：50）に溶かす。10mlのペルフル オロペンタンを、２分間、Ultraturrax（10,000rpm）を用いてポリマー溶液中に 分散させる。作られた混濁液(0/0)を、０℃に温度平衡化された１％ゼラチン溶 液中に、30分間、機械撹拌メカニズム(Dispermat-FT,VMA-Getzmann GmbH)(1000r pm)を用いて分散させる。そのエマルション(O/O/W)を、撹拌メカニズム（300rpm ）を備えた２１３つ首フラスコ内に移し、そしてその溶媒を、Ｎ₂中にポリピン グすることにより20℃で３時間、及び真空により25℃で３時間、除去する。次に 、その懸濁液を凍結保護物質と混合し て凍結乾燥させる。 水で再懸濁した凍結乾燥物は微粒子（直径0.2〜８μｍ）を含み、優れた試験 管内後方散乱係数〔トランスミッター周波数５mHz でα_s＝2.7×10^-1〔dB／cm〕 及びＣ＝４×10⁶の粒子数〕を有する。粒径の測定は、光散乱及びフラウンホー ファー回析の組合せを行うCoulter Electronics GmbH companyのLS-130で行った 。粒子数の測定はCoulter Counter で行った。 実施例２ ペルフルオロペンタンをペルフルオロデカリンで置換して実施例１の通り手順 を行う。水で再懸濁した凍結乾燥物は、直径0.2〜８μｍの超音波活性微粒子を 含む。 実施例３ ペルフルオロペンタンをペルフルオロヘキサンで置換して実施例１の通り手順 を行う。0.9 ％NaCl溶液で再懸濁した凍結乾燥物は、直径0.2〜８μｍの超音波 活性微粒子を含む。 実施例４ ペルフルオロペンタンをペルフルオロ−１，３−ジメチルシクロヘキサンで置 換して実施例１の通り手順を行う。５％マンニトール溶液で再懸濁された凍結乾 燥物は、直径0.2〜８μｍの超音波活性微粒子を含む。 実施例５ ペルフルオロペンタンをペルフルオロヘプタンで置換して実施例１の通り手順 を行う。５％マンニトール溶液で再懸濁した凍結乾燥物は、直径0.2〜８μｍの 超音波活性微粒子を含む。 実施例６ １の通り手順を行う。0.9 ％NaCl溶液で再懸濁した凍結乾燥物は、 直径0.2〜８μｍの超音波活性微粒子を含む。 実施例７ のメチルクロライド／アセトン（容量比55：45）に溶かして実施例１の通り手順 を行う。0.9 ％NaCl溶液で取った凍結乾燥物は、直径0.2〜８μｍの超音波活性 微粒子を含む。 実施例８ のメチルクロライド／アセトン（容量比60：40）に溶かして、実施例１の通り手 順を行う。水で再懸濁した凍結乾燥物は、直径0.2〜８μｍの超音波活性微粒子 を含む。 実施例９ のメチルクロライド／アセトン（容量比63：37）に溶かして、実施例１の通り手 順を行う。水で再懸濁した凍結乾燥物は、直径0.2〜８μｍの超音波活性微粒子 を含む。 実施例10 ペルフルオロペンタンをペルフルオロヘキサンで置換してポリマ クロライド／アセトン（容量比63：37）に溶かして、実施例１の通り手順を行う 。水で取った凍結乾燥物は、直径0.2〜８μｍの超音波活性微粒子を含む。 実施例11 ペルフルオロペンタンをペルフルオロデカリンで置換してポリマ クロライド／アセトン（容量比63：37）に溶かして、実施例１の通り手順を行う 。水でとった凍結乾燥物は、直径0.2〜８μｍの超音 波活性微粒子を含む。 実施例12 １の通り手順を行う。水で再懸濁した凍結乾燥物は、直径0.2〜８μｍの超音波 活性微粒子を含む。 実施例13 アセトンを酢酸エチルで置換して実施例１の通り手順を行う。水で再懸濁した 凍結乾燥物は、直径0.2〜８μｍの超音波活性微粒子を含む。 実施例14 アセトンを酢酸メチルで置換して実施例１の通り手順を行う。水で再懸濁した 凍結乾燥物は、直径0.2〜８μｍの超音波活性微粒子を含む。 実施例15 ンを酢酸エチルで置換して実施例１の通り手順を行う。水で再懸濁した凍結乾燥 物は、直径0.2〜８μｍの超音波活性微粒子を含む。 実施例16 ペルフルオロペンタンを10mlの20％グルコース溶液で置換して実施例１の通り 手順を行う。水で再懸濁された凍結乾燥物は、直径0.2〜８μｍの超音波活性微 粒子を含む 実施例17 施例１の通り手順を行う。５％マンニトール溶液でとった凍結乾燥物は、直径0. 1〜８μｍの超音波活性微粒子を含む 実施例18 V,biopol．ICI)で置換し、ゼラチン溶液を200 mlの１％PVA 溶液（MW９〜10×10³ ダルトン）で置換し、そしてポリマーを30mlのメチレンクロライド／アセトン （容量比66：34）に溶かして実施例１の通り手順を行う。水で再懸濁した凍結乾 燥物は、直径0.4〜８μｍの超音波活性微粒子を含む。 実施例19 V,biopol．ICI)に置換し、ゼラチン溶液をメチレンクロライド／アセトン（容量 比66：34）30ml中１％PVA 溶液で置換して実施例１の通り手順を行う。水で再懸 濁した凍結乾燥物は、直径0.4〜８μｍの超音波活性微粒子を含む。 実施例20 度：30℃でCHCl₃中1.26dl/g(Birmingham Polymers NC，US〕で置換し、ゼラチン を200 mlの１％PVA 溶液（MW９〜10k ダルトン）で置換し、そしてポリマーを30 mlのメチレンクロライド／アセトン（容量比70：30）中に溶かして実施例１の通 り手順を行う。水で再懸濁した凍結乾燥物は、直径0.2〜８μｍの超音波活性微 粒子を含む。 実施例21 の通り手順を行う。５％マンニトール溶液で再懸濁した凍結乾燥物は、直径0.4 〜８μｍの超音波活性微粒子を含む。 実施例22 ゼラチンを400 mlの0.5 ％オレイン酸ナトリウム溶液で置換して実施例１の通 り手順を行う。５％マンニトール溶液で再懸濁した凍結乾燥物は、直径0.5〜８ μｍの超音波活性微粒子を含む。 実施例23 ゼラチンを400 mlの１％オクチル−β−Ｄ−グルコピラノシド溶液で置換して 実施例１の通り手順を行う。水で再懸濁した凍結乾燥物は、直径0.1〜８μｍの 超音波活性微粒子を含む。 実施例24 ゼラチン溶液を400 mlの１％サッカロースパルミテートＰ−1570（Ryoto Suga r esters）により混合して実施例１の通り手順を行う。水で再懸濁した凍結乾燥 物は、直径0.1〜７μｍの超音波活性微粒子を含む。 実施例25 ゼラチン溶液を400 mlの１％サッカロースステアレート（Ryoto Sugar esters ）Ｓ−1670により置換して実施例１の通り手順を行う。水で再懸濁した凍結乾燥 物は、直径0.1〜７μｍの超音波活性微粒子を含む。 実施例26 ゼラチン溶液のかわりに、400 mlの１％サッカロースジエステル、SP70（Sist ernen，the Netheylands）を用いて実施例１の通り手順を行う。水で再懸濁した 凍結乾燥物は、直径0.1〜７μｍの超音波活性微粒子を含む。 実施例27 メチレンクロライド／アセトン溶液混合物を70mlの酢酸エチルで置換して18ml のペルフルオロペンタンを10mlのペルフルオロペンタンのかわりに用いて実施例 １の通り手順を行う。水で再懸濁した凍結乾燥物は、直径0.1〜５μｍの超音波 活性微粒子を含む。 実施例28 アセトンを酢酸エチルで置換して実施例１の通り手順を行う。水でとった凍結 乾燥物は、直径0.1〜７μｍの超音波活性微粒子を含 む。 実施例29 アセトンを酢酸メチルで置換して実施例１の通り手順を行う。水で再懸濁した 凍結乾燥物は、直径１〜７μｍの超音波活性微粒子を含む。 実施例30 アセトンを酢酸メチルで置換して実施例１の通り手順を行う。水で再懸濁した 凍結乾燥物は、直径１〜６μｍの超音波活性微粒子を含む。 実施例31 アセトンを酢酸エチルで置換して実施例１の通り手順を行う。水でとった凍結 乾燥物は、直径0.1〜６μｍの超音波活性微粒子を含む。 実施例32 アセトンをトリアセチンで置換して実施例１の通り手順を行う。 水で再懸濁した凍結乾燥物は、直径１〜７μｍの超音波活性微粒子を含む。 実施例33 アセトンをクエン酸トリエチルで置換して実施例１の通り手順を行う。水で再 懸濁した凍結乾燥物は、直径１〜７μｍの超音波活性微粒子を含む。 実施例34 0.375ｇのＬ−リシン(Aldrich)を25mlの水酢酸(Merck)に溶かし ロロメタン(Merck)に溶かす。その組み合わされた溶液を図１に示されるような 置換で更に処理する。 その組み合わされた溶液を最初にタンク（17）に加え、そしてそ のユニットを保管ボトルからバルブ（２）及びライン（30）を通して満たす。往 復運動ポンプ（16）を用いて、熱交換器（15）、ライン（54）、バルブ（20）及 び最後のライン（55）にライン（52）を通して流した後に、溶液をタンク（17） からノズル(118)に供給する。94〜96bar の圧力において、そのコポリマーを含 む溶液を、慣用的な一部品のノズル（118）〔Schlick 121Vタイプ〕によりカラ ム内に噴霧し、それにより、同時に、超臨界状態のCO₂入口（８）を通して平行 に流して、90bar/36℃で8.9 kg／ｈの処理量でカラムを通す。ノズルは0.5 mmの 直径を有し、噴霧角は10°である。 溶媒についての超臨界CO₂の高アフィニティに対応して、主に形成された液滴 から溶媒を除去する。球形の固体ポリマー粒子が残る。 基本的に溶媒交換CO₂を精製して再生するが、もはや粒子の生産を行わないよ うに更なるステップを用いる。CO₂の作動を次に通り行うことができる。溶媒が 交換された気体は２つの磁気バルブ（７及び９）により制御されたライン（42） 及び（40）を通してカラムの端に流れ出て、60bar まで加圧される。単位時間当 りにカラム内に流れる液状ガスの量が、カラムの作動圧を維持するよう流れるこ とができるよう、バルブをスイッチする。60bar まで加圧することにより冷却さ れ、溶媒が交換されたCO₂を、21℃に温度平衡化された分離器（10）内にライン （62）により送る。ここでその溶媒混合物は、これらの条件下で強く減少した溶 解度のため、CO₂に分離する。溶媒混合物がそれから除去されるCO₂を、圧力及び 温度を上昇（３及び４）させることによりライン（64及び32）を用いて超臨界状 態（90bar，36℃）にもどし、そして形成された粒子を更に乾燥させるために、 入口（８）を通して、ライン（34）、ラインガスポンプ（４）、ライン（36）、 熱交換器（５）、ライン（38）を通し て再びカラムに供給する。 分離器（10）をバルブ（６）及び（13）により回路から分離した後、及びバル ブ（72）により大気圧までの減圧を行った後、分離器（10）内で分離された溶媒 混合物の除去を行う。 リザーバー内に含まれる溶解されたポリマーの全量を噴霧した後（圧力による 時間、20〜50分）、溶媒ラジカルがもはや分離器（10）内に回収され得ないまで 、CO₂をカラムに通す。 乾燥工程を終了した後、カラムへのCO₂の流れを止め、バルブ（11）及び（14 ）上のカラムを大気圧まで減圧し、そして粒子を下側カラム端（19）で除去する 。 直径５〜10μｍの超音波活性気体含有微粒子を得る。 実施例35 0.375ｇのＬ−リシン(Aldrich)及び2.5 ｇのポリマー（RG-756）を25mlの氷酢 酸(Merck)及び75mlのジクロロメタン(Merck)に溶かし、透明な溶液が形成される まで撹拌する。実施例34と同様に残りの反応を行う。 直径５〜10μｍの超音波活性気体含有微粒子を得る。 実施例36〜41 更なる微粒子の生産を実施例34と同様に行う。各々の場合に用いたポリマー及 び更なるデータを表１に要約する。 全ての場合において、超音波活性気体含有微粒子を得る。得られた超音波活性 中空微粒子は滅菌状態で、溶媒残物、重合触媒又はイニシエーター分子を含まな い。それらは５〜10μｍの平均−粒径分布を有する。 各々の場合において、ポリマーを75mlのジクロロメタン(Merck)及び25mlの氷 酢酸に溶かし、そして各々の量のアミノ酸を加える。Ｄ，Ｌ−フェニルアラニン は50mlまでのメタノール(Merck)に予め 適切に溶かす。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．壁材料がα，β−又はγ−ヒドロキシカルボン酸のポリエステルから作ら れた超音波診断のための気体含有粒子を製造するための方法であって、 （ｉ）各々のポリエステル及び必要に応じて表面活性物質を、その少くとも１ つの溶媒が直ちに水と混和することができる有機溶媒又は溶媒混合物に溶かし、 次に過フッ化化合物又は水をその溶液中に分散し、次にその分散液を、撹拌機構 を用いて表面活性物質を含む水中に分散し、ここでその溶媒を気体中にポンピン グし、真空を適用することにより除去し、そして最後にその得られた懸濁液を適 切な医薬として許容される凍結乾燥保護物質と混合して凍結乾燥するか、又は （ii）要求されるポリエステル及び必要に応じてアミノ酸を少くとも１つの有 機溶媒に溶かし、そしてその溶液を、超臨界ガスで満たされ又はそれが流れるカ ラム内にノズルを通して噴霧し、ここでその溶媒が超臨界ガスにより取り込まれ る ことを特徴とする方法。 ２．前記壁材料が、ポリグリコリド（PGA）、及びそのＬ−ラクチド（PGA/PLL A）もしくはポリラクチド（PLA）とのコポリマー、及びそのステレオコポリマー 、例えばポリ−Ｌ−ラクチド（PLLA）、ポリ−DL−ラクチド又はＬ−ラクチド／ DL−ラクチドもしくはポリ−β−ヒドロキシブチレート（PHBA）、並びにそのβ −ヒドロキシバレレート（PHBA/HVA）もしくはポリ−β−ヒドロキシプロピオネ ート（PHPA）もしくはポリ−ρ−ジオキサノン（PDS）もしくはポリ−δ−バレ ロラクトンもしくはポリ−ξ−カプロラクトンとのコポリマーからなることを特 徴とする請求項１に記載の方法。 ３．乳酸及びグリコール酸からのコポリマーの場合、その混合比が85：15〜50 ：50の範囲であることを特徴とする請求項１又は２に記載の方法。 ４．ジクロロメタン、アセトン、酢酸エチル、酢酸メチル、トリアセチン、ト リエチルクエン酸、乳酸エチル、酢酸イソプロピル、ギ酸プロピル、ギ酸ブチル 、ギ酸エチル、及び／又は乳酸メチルが用いられることを特徴とする請求項１に 記載の方法。 ５．過フッ化化合物として、ペルフルオロペンタン、ペルフルオロヘキサン、 ペルフルオロ−１，３−ジメチルシクロヘキサン、ペルフルオロシクロヘキサン 、ペルフルオロデカイン、及び／又はペルフルオロエーテルが用いられることを 特徴とする請求項１（ｉ）に記載の方法。 ６．表面活性物質として、ポロキサマーもしくはポロキサミン、ポリエチレン グリコールアルキルエーテル、ポリソルベート、サッカロースエステル、サッカ リドエステル、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、脂肪アルコールポリグリコシ ド、Chaps、 Chap、 Chapso、デシル−β−Ｄ−グリコピラノシド、デシル− β−Ｄ−マルトピラノシド、ドデシル−β−Ｄ−マルトピラノシド、オレイン酸 ナトリウム、ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール、又はそれらの混 合物の群からの物質が用いられることを特徴とする請求項１（ｉ）に記載の方法 。 ７．アミノ酸として、Ｌ−リシン、Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−トリプトファ ン、及び／又はＤ，Ｌ−フェニルアラニンが用いられることを特徴とする請求項 １（ｉ）に記載の方法。 ８．超臨界ガスとして一酸化二窒素、二酸化炭素、ハロゲン化炭化水素、飽和 もしくは不飽和気体状炭化水素、二酸化窒素、及び／又はアンモニアが用いられ ることを特徴とする請求項１（ii）に記 載の方法。 ９．前記溶液が、ノズル直径0.5 mm及び噴霧角10°の慣用的単一部品のノズル により、94〜96bar の超過圧力で噴霧されることを特徴とする請求項１（ii）に 記載の方法。 10．請求項１に記載の方法に従って製造される超音波診断のための微粒子。 11．請求項１に記載の方法に従って製造され、気体として、窒素、酸素、希ガ ス、一酸化二窒素、二酸化炭素、ハロゲン化炭化水素、飽和もしくは不飽和気体 状炭化水素、二酸化窒素、及び／又はアンモニアを含む超音波診断のための微粒 子。