JPH11510698A

JPH11510698A - トランスジェニックブタ及びヒトｈｌａ遺伝子を有するブタ細胞

Info

Publication number: JPH11510698A
Application number: JP9508551A
Authority: JP
Inventors: シーバック，ジョーグ; エイチ．サクス，デイビッド; ダーシモニアン，ハロウト; レガーン，クリスチャン
Original assignee: ザジェネラルホスピタルコーポレイション
Priority date: 1995-08-04
Filing date: 1996-08-02
Publication date: 1999-09-21
Also published as: WO1997006241A1; US6558663B1; AU723003C; US6030833A; EP0842266A1; CA2227584A1; AU6687696A; AU723003B2; EP0842266A4

Abstract

(57)【要約】ヒトのＨＬＡ蛋白質をコードするトランスジーンを有する遺伝子工学処理されたブタ細胞。

Description

【発明の詳細な説明】トランスジェニックブタ及びヒトＨＬＡ遺伝子を有するブタ細胞発明の背景この発明は、臓器移植の分野に関するものである。同種間の臓器移植における技術進歩及び非特異的免疫抑制剤の利用可能性は、臓器移植の分野に革命を起こした。しかしながら、この進歩は、適当な大きさで且つ適合した必要な臓器の不足を生じた。この同種移植用臓器の不足は、異種間移植における増大した興味へと導いた。チンパンジーからヒトへの移植が長期の生命維持機能を与え得ることは２５年以上前に示された。しかしながら、多くの霊長動物種は、稀少であって保護されており、ヒヒ等の数の多いものは、しばしば、成人においてそれらの臓器を利用することを可能にする大きさまで成長しない。その上、幾つかの文化においては、臓器の源としての霊長動物の利用は、道徳的に受け入れられない。これらの困難の幾つかは、有蹄類の臓器特にブタの臓器の利用により解決することができた。ブタは、家畜化されており、繁殖が容易で、同腹子が多く、そして最も大きいヒトにおけるそれらの臓器の利用を可能にする大きさにまで急速に成長する。更に、ブタ及びヒトは、解剖学的及び生理学的類似性を有している。しかしながら、ブタ臓器のヒトへの移植は、移植臓器の活発な拒絶を生じる。発明の要約一般に、この発明は、遺伝子工学処理されたブタ細胞例えば培養ブタ細胞、レトロウイルスでトランスフォームしたブタ細胞、又はトランスジェニックブタに由来する細胞を特徴とする。この細胞は、異種の例えばヒトのクラスＩＭＨＣ蛋白質をコードするトランスジーン例えばＨＬＡＡ、Ｂ、Ｃ又はＧ遺伝子を含む。好適具体例において、トランスジーンには、αサブユニット、例えばＨＬＡクラスＩ遺伝子例えばＨＬＡＣ遺伝子が含まれる。トランスジーンがＨＬＡＣ遺伝子を含む場合には、その対立遺伝子は、例えば、何れかのＣｗ１、Ｃｗ２、Ｃｗ３、Ｃｗ４、Ｃｗ５、Ｃｗ６、Ｃｗ７、Ｃｗ８、Ｃｗ９、Ｃｗ７／８ｖ、又はＣｗ１０対立遺伝子であってよい。後述のように、ＨＬＡクラスＩ遺伝子の対立遺伝子は、しばしば、反応性グループに分類することができ、ある反応性グループからの対立遺伝子は、その反応性グループの他の対立遺伝子に特異的なＮＫ細胞に対する防護を与えることができる。従って、好適具体例において、トランスジーンは、反応性グループ例えばグループ１対立遺伝子（例えば、ＨＬＡＣＣｗ２、Ｃｗ４、Ｃｗ５又はＣｗ６対立遺伝子の何れか）又はグループ２対立遺伝子（例えば、ＨＬＡＣＣｗ１、Ｃｗ３、Ｃｗ７、又はＣｗ８対立遺伝子の何れか）のメンバーである対立遺伝子を含む。他の好適具体例において、この対立遺伝子は、残基７７にＡｓｎを有し且つ残基８０にＬｙｓを有し；又は残基７７にＳｅｒを有し且つ残基８０にＡｓｎを有する。好適具体例において、トランスジーンは、ＨＬＡＡ遺伝子を含む。他の好適具体例において、トランスジーンは、ＨＬＡＢ遺伝子を含む。他の好適具体例において、トランスジーンは、ＨＬＡＧ遺伝子（例えば、ＨＬＡＧの対立遺伝子Ｉ〜ＩＶの何れか）を含む。好適具体例において、細胞は、クラスＩＭＨＣ蛋白質を含む第２のトランスジーンを含む。好適具体例において、第２のトランスジーンは、ＨＬＡクラスＩ遺伝子例えばＨＬＡＡ、Ｂ、Ｃ又はＧ遺伝子を含む。好適具体例において、第１のトランスジーンは、第１の反応性グループからの対立遺伝子を含み、第２のトランスジーンは、第２の反応性グループからの対立遺伝子を含む。例えば、第１のトランスジーンは、グループ１対立遺伝子（例えば、ＨＬＡＣＣｗ２、Ｃｗ４、Ｃｗ５又はＣｗ６対立遺伝子の何れか）を含み、第２のトランスジーンは、グループ２対立遺伝子（例えば、ＨＬＡＣＣｗ１、Ｃｗ３、Ｃｗ７又はＣｗ８対立遺伝子の何れか）を含む。好適具体例において、第１のトランスジーンは、残基７７にＡｓｎを有し且つ残基８０にＬｙｓを有する対立遺伝子をコードし且つ第２のトランスジーンは、残基７７にＳｅｒを有し且つ残基８０にＡｓｎを有する対立遺伝子をコードする。他の好適具体例において、第２のトランスジーンは、ヒトβサブユニット例えばβ−２ミクログロブリン遺伝子をコードする。好適具体例において、トランスジーンは、キメラのクラスＩ遺伝子例えばキメラのＨＬＡＡ、Ｂ、Ｃ又はＧ遺伝子を含む。キメラトランスジーンは、クラスＩ蛋白質をコードする遺伝子の第１の対立遺伝子に由来する第１の部分及びクラスＩ蛋白質をコードする遺伝子の第２の対立遺伝子に由来する第２の部分を含むことができる。他の具体例において、クラスＩ遺伝子は、標的細胞をＮＫ細胞の１つより多くのクラスからの攻撃から防護する蛋白質を生成する能力について選択された合成の配列である。好適具体例において、トランスジーンは、ＮＫ細胞の１つより多くのクラスに対する防護を与える遺伝子例えばキメラの又は変異したＨＬＡＣ遺伝子、例えば７７位にセリンを有し且つ８０位にＬｙｓを有するＨＬＡＣの対立遺伝子を含む（例えば、Biassoni，1995，J.Exp.Med.Vol.182: 605-609（参考として、本明細書中に援用する）を参照されたい）。又、Moretta 等、1996、Ann.Rev.Immunol.14:619-648（参考として、本明細書中に援用する）も参照されたい（本明細書の開示と共に、ＨＬＡＣ遺伝子中の別の重要な残基についての案内を与える）。更に他の好適具体例において、遺伝子工学処理されたブタ細胞は、ブタの造血幹細胞例えば臍帯血造血幹細胞、骨髄造血幹細胞、又は胎児若しくは新生児肝若しくは脾臓造血幹細胞であり；分化した血液細胞例えば骨髄性細胞例えば巨核球、単球、顆粒球又は好酸球から誘導され；赤血球細胞例えば赤血球例えばリンパ球様細胞例えばＢリンパ球及びＴリンパ球であり；多能性造血幹細胞例えば造血前駆体例えばバースト形成単位−赤芽球（ＢＦＵ−Ｅ）、コロニー形成単位−赤芽球（ＣＦＵ−Ｅ）、コロニー形成単位−巨核球（ＣＦＵ−Ｍｅｇ）、コロニー形成単位−顆粒球−単球（ＣＦＵ−ＧＭ）、コロニー形成単位−好酸球（ＣＦＵ −Ｅｏ）又はコロニー形成単位−顆粒球−赤血球−巨核球−単球（ＣＦＵ−ＧＥＭＭ）から誘導され；造血幹細胞又は他の血液細胞以外のブタ細胞であり；ブタ胸腺細胞例えばブタ胸腺間質細胞であり；骨髄間質細胞であり；ブタ肝細胞であり；ブタ腎臓細胞であり；ブタ上皮細胞であり；ブタ造血前駆細胞であり；ブタ筋細胞例えば心臓細胞であり；内皮細胞であり；又はその前駆細胞である。更に別の好適具体例において、細胞は、培養細胞例えば初代培養例えば造血幹細胞の初代細胞培養から単離し又は誘導され；トランスジェニック動物から単離され又は誘導される。更に別の好適具体例において、ブタ細胞は、トランスジーンについてホモ接合であり；ブタ細胞は、トランスジーンについてヘテロ接合であり；ブタ細胞は、トランスジーンについてホモ接合であり（ヘテロ接合のトランスジェニックブタを交配させて、トランスジーンについてホモ接合である子孫を生成することができる）；ブタ細胞は、２つ以上のトランスジーンを含む。更に別の好適具体例において、細胞は、ＨＬＡＡ遺伝子をコードするトランスジーン、ＨＬＡＢ遺伝子をコードするトランスジーン、ＨＬＡＣ遺伝子をコードするトランスジーン及びＨＬＡＧ遺伝子をコードするトランスジーンの１つ以上又は全部を含む。他の面において、この発明は、クラスＩＭＨＣ蛋白質をコードする異種の例えばヒトの核酸に操作可能に結合されたブタプロモーターを含む核酸例えばトランスジーンを特徴とする。このブタプロモーターは、例えばブタ造血上皮遺伝子プロモーター、又は異種誘導可能な若しくは発生的に調節されるプロモーターであってよい。好適具体例において、核酸は、例えば、αサブユニットをコードする遺伝子例えばＨＬＡクラスＩ遺伝子例えばＨＬＡＡ、Ｂ、Ｃ又はＧ遺伝子、又はヒトβ サブユニットをコードする遺伝子例えばβ−２ミクログロブリン遺伝子を含む。核酸がＨＬＡＣ遺伝子を含む場合には、対立遺伝子は、例えば、何れかのＣｗ１、Ｃｗ２、Ｃｗ３、Ｃｗ４、Ｃｗ５、Ｃｗ６、Ｃｗ７、Ｃｗ８、Ｃｗ９、Ｃｗ７／８ｖ又はＣｗ１０対立遺伝子であってよい。好適具体例において、核酸は、反応性グループ例えばグループ１（例えば、ＨＬＡＣＣｗ２、Ｃｗ４、Ｃｗ５若しくはＣｗ６対立遺伝子の何れか）又はグループ２（例えば、ＨＬＡＣＣｗＬ、Ｃｗ３、Ｃｗ７若しくはＣｗ８対立遺伝子の何れか）のメンバーである対立遺伝子をコードする。他の好適具体例において、対立遺伝子は、残基７７にＡｓｎを有し且つ残基８０にＬｙｓを有するか又は残基７７にＳｅｒを有し且つ残基８０にＡｓｎを有する。好適具体例において、核酸又はトランスジーンは、転写調節配列例えば、ブタ以外の遺伝子配列に操作可能に結合された組織特異的プロモーター例えば造血系特異的プロモーターを更に含む。好適具体例において、核酸又はトランスジーンは、キメラのクラスＩ蛋白質、例えばキメラのＨＬＡＡ、Ｂ、Ｃ又はＧ蛋白質をコードする。キメラトランスジーンは、クラスＩ蛋白質をコードする遺伝子の第１の対立遺伝子から誘導された第１の部分及びクラスＩ蛋白質をコードする遺伝子の第２の対立遺伝子から誘導される第２の部分を含むことができる。他の具体例において、クラスＩ遺伝子は、標的細胞をＮＫ細胞の２つ以上のクラスからの攻撃から防護する蛋白質を生成する能力について選択された合成の配列である。好適具体例において、トランスジーンは、ＮＫ細胞の２つ以上のクラスに対する防護を与えるキメラの又は変異したＨＬＡＣ遺伝子、例えば７７位にセリンを有し且つ８０位にリジンを有するＨＬＡＣの対立遺伝子である。他の面において、この発明は、ＨＬＡクラスＩ蛋白質をコードする異種の例えばヒトの核酸例えばトランスジーンを含む細胞を有するトランスジェニックブタを特徴とする。好適具体例において、トランスジーンは、αサブユニットをコードする核酸例えばＨＬＡクラスＩ遺伝子（例えばの１つ以上）を含むことができる。他の好適具体例において、トランスジーンは、ヒトβサブユニットをコードする核酸例えばβ−２ミクログロブリン遺伝子を含む。トランスジーンがＨＬＡＣ遺伝子を含む好適具体例において、対立遺伝子は、例えば、任意のＣｗ１、Ｃｗ２、Ｃｗ３、Ｃｗ４、Ｃｗ５、Ｃｗ６、Ｃｗ７、Ｃｗ８、Ｃｗ９、Ｃｗ７／８ｖ又はＣｗ１０対立遺伝子であってよい。好適具体例において、トランスジーンは、反応性グループ例えばグループ１対立遺伝子（例えば、ＨＬＡＣＣｗ２、Ｃｗ４、Ｃｗ５若しくはＣｗ６対立遺伝子の何れか）又はグループ２対立遺伝子（例えば、ＨＬＡＣＣｗ１、Ｃｗ３、Ｃｗ７若しくはＣｗ８対立遺伝子の何れか）のメンバーである対立遺伝子を含む。他の好適具体例において、対立遺伝子は、残基７７にＡｓｎを有し且つ残基８０にＬｙｓを有し又は残基７７にＳｅｒを有し且つ残基８０にＡｓｎを有する。好適具体例において、トランスジーンは、キメラのクラスＩ蛋白質を、例えばキメラのＨＬＡＡ、Ｂ、Ｃ又はＧ遺伝子をコードする。キメラトランスジーンは、クラスＩ蛋白質をコードする遺伝子の第１の対立遺伝子に由来する第１の部分及びクラスＩ蛋白質をコードする遺伝子の第２の対立遺伝子に由来する第２の部分を含むことができる。他の具体例において、クラスＩ遺伝子は、標的細胞をＮＫ細胞の２つ以上のクラスからの攻撃から防護する蛋白質を生成する能力について選択した合成の配列である。好適具体例において、トランスジーンは、ＮＫ細胞の２つ以上のクラスに対する防護を与える遺伝子例えばキメラの又は変異したＨＬＡＣ遺伝子、例えば７７位にセリンを有し且つ８０位にリジンを有するＨＬＡＣの対立遺伝子を含む。好適具体例において、トランスジェニックブタは、クラスＩＭＨＣ蛋白質をコードする第２のトランスジーンを含む。好適具体例において、トランスジーンは、ヒトβサブユニットをコードする遺伝子例えばβ−２ミクログロブリン遺伝子を含む。他の好適具体例において、第２のトランスジーンは、ＨＬＡクラスＩ遺伝子例えばＨＬＡＡ、Ｂ、Ｃ又はＧ遺伝子を含む。好適具体例において、第１のトランスジーンは、第１の反応性グループからの対立遺伝子を含み、第２のトランスジーンは、第２の反応性グループからの対立遺伝子を含む。好適具体例において、トランスジーンは、反応性グループ例えばグループ１対立遺伝子（例えば、ＨＬＡＣＣｗ２、Ｃｗ４、Ｃｗ５若しくはＣｗ６の何れか）又はグループ２対立遺伝子（例えば、ＨＬＡＣＣｗ１、Ｃｗ３、Ｃｗ７若しくはＣｗ８対立遺伝子の何れか）のメンバーである対立遺伝子を含む。他の好適具体例において、第１のトランスジーンは、残基７７にＡｓｎを有し且つ残基８０にＬｙｓを有するＨＬＡＣ対立遺伝子をコードし、第２のトランスジーンは、残基７７にＳｅｒを有し且つ残基８０にＡｓｎを有するＨＬＡＣ対立遺伝子をコードする。更に別の好適具体例において、トランスジェニックブタ細胞は、トランスジーンについてヘミ接合であり；トランスジェニックブタ細胞は、トランスジーンについてヘミ接合であり；トランスジェニックブタは、トランスジーンについてヘテロ接合であり；トランスジェニックブタは、トランスジーンについてホモ接合であり（ヘテロ接合のトランスジェニックブタを交配させて、トランスジーンについてホモ接合である子孫を生成することができる）；トランスジェニックブタは、２つ以上のトランスジーンを含む。更に別の好適具体例において、トランスジェニックブタは、ＨＬＡＡ遺伝子をコードするトランスジーン、ＨＬＡＢ遺伝子をコードするトランスジーン、ＨＬＡＣ遺伝子をコードするトランスジーン、ＨＬＡＧ遺伝子をコードするトランスジーンの１つ以上又は全部を含む。この発明のトランスジェニックブタ（又はブタ細胞）は又、ヒトレシピエントへの移植のための「ヒト化」組織（例えば、造血細胞又は他の組織若しくは臓器）の源としても用いることができる。他の面において、この発明は、ＨＬＡクラスＩ蛋白質をコードする異種の例えばヒトの核酸例えばトランスジーンを含む細胞を有するブタの臓器又はブタの組織を特徴とする。好適具体例において、トランスジーンは、αサブユニットをコードする核酸例えばＨＬＡクラスＩ遺伝子例えばＨＬＡＡ、Ｂ、Ｃ又はＧ遺伝子を含むことができる。他の好適具体例において、トランスジーンは、ヒトのβ サブユニットをコードする核酸、例えばβ−２ミクログロブリン遺伝子を含む。好適具体例において、臓器は、心臓、肺、腎臓、膵臓又は肝臓である。好適具体例において、組織は、胸腺組織；島細胞若しくは島；幹細胞；骨髄；内皮細胞；皮膚；又は血管組織である。トランスジーンがＨＬＡＣ遺伝子を含む好適具体例において、対立遺伝子は、例えば、何れかのＣｗ１、Ｃｗ２、Ｃｗ３、Ｃｗ４、Ｃｗ５、Ｃｗ６、Ｃｗ７、Ｃｗ８、Ｃｗ９、Ｃｗ７／８ｖ又はＣｗ１０対立遺伝子であってよい。好適具体例において、トランスジーンは、反応性グループ例えばグループ１対立遺伝子（例えば、ＨＬＡＣＣｗ２、Ｃｗ４、Ｃｗ５若しくはＣｗ６対立遺伝子の何れか）又はグループ２対立遺伝子（例えば、ＨＬＡＣＣｗ１、Ｃｗ３、Ｃｗ７若しくはＣｗ８対立遺伝子の何れか）のメンバーである対立遺伝子を含む。他の好適具体例において、対立遺伝子は、残基７７にＡｓｎを有し且つ残基８０にＬｙｓを有するか又は残基７７にＳｅｒを有し且つ残基８０にＡｓｎを有する。好適具体例において、トランスジーンは、キメラのクラスＩ蛋白質例えばキメラのＨＬＡＡ、Ｂ、Ｃ又はＧ遺伝子をコードする。キメラトランスジーンは、クラスＩ蛋白質をコードする遺伝子の第１の対立遺伝子由来の第１の部分及びクラスＩ蛋白質をコードする遺伝子の第２の対立遺伝子由来の第２の部分を含むことができる。他の具体例において、クラスＩ遺伝子は、標的細胞をＮＫ細胞の２つ以上のクラスからの攻撃から防護する蛋白質を生成する能力について選択した合成の配列である。好適具体例において、トランスジーンは、ＮＫ細胞の２つ以上のクラスに対する防護を与える遺伝子例えばキメラの又は変異したＨＬＡＣ遺伝子、例えば７７位にセリンを有し且つ８０位にリジンを有するＨＬＡＣの対立遺伝子を含む。更に別の好適具体例において、トランスジェニックブタ臓器又は組織は、トランスジーンについてヘミ接合である細胞を含み；トランスジーンについてヘミ接合である細胞を含み；トランスジーンについてヘテロ接合である細胞を含み；トランスジーンについてホモ接合である細胞を含み（ヘテロ接合のトランスジェニックブタを交配させて、トランスジーンについてホモ接合である子孫を生成することができる）；２つ以上のトランスジーンを含む細胞含む。好適具体例において、ブタ臓器又は組織は、クラスＩＭＨＣ蛋白質をコードする第２のトランスジーンを含む細胞を含む。好適具体例において、第２のトランスジーンは、ヒトβサブユニットをコードする遺伝子例えばβ−２ミクログロブリン遺伝子を含む。他の好適具体例において、第２のトランスジーンは、ＨＬＡクラスＩ遺伝子例えばＨＬＡＡ、Ｂ、Ｃ又はＧ遺伝子を含む。好適具体例において、第１のトランスジーンは、第１の反応性グループからの対立遺伝子を含み、第２のトランスジーンは、第２の反応性グループからの対立遺伝子を含む。好適具体例において、第１のトランスジーンは、反応性グループ例えばグループ１対立遺伝子（例えば、ＨＬＡＣＣｗ２、Ｃｗ４、Ｃｗ５又はＣｗ６対立遺伝子の何れか）のメンバーである対立遺伝子を含み、第２のトランスジーンは、グループ２対立遺伝子（例えば、ＨＬＡＣＣｗ１、Ｃｗ３、Ｃｗ７又はＣｗ８対立遺伝子の何れか）を含む。他の好適具体例において、第１のトランスジーンは、残基７７にＡｓｎを有し且つ残基８０にＬｙｓを有する対立遺伝子を含み、第２のトランスジーンは、残基７７にＳｅｒを有し且つ残基８０にＡｓｎを有する対立遺伝子を含む。更に別の好適具体例において、臓器及び組織は、ＨＬＡＡ遺伝子をコードするトランスジーン、ＨＬＡＢ遺伝子をコードするトランスジーン、ＨＬＡＣ遺伝子をコードするトランスジーン、ＨＬＡＧ遺伝子をコードするトランスジーンの１つ以上又は全部を含む。この発明のブタ臓器及び組織は、ヒトレシピエントへの移植のための「ヒト化」組織（例えば、造血細胞又は他の組織若しくは臓器）の源として用いることができる。レシピエント種のＭＨＣクラスＩ遺伝子を発現する移植組織を用いて、異種組織をレシピエントへ移植する方法を改良することができる。例えば、ヒトレシピエントによるブタ組織の受容は、そのブタ組織がヒトクラスＩ遺伝子好ましくはＨＬＡＣ遺伝子を発現するならば、延長され得る。ＨＬＡクラスＩ遺伝子を発現する移植組織の利用は、ここに記載の寛容を誘導する方法と組合せることができる。従って、他の面において、この発明は、レシピエント哺乳動物例えば霊長類例えばヒトにおける、ブタ例えばミニブタからの移植片に対する寛容を誘導する方法を特徴とする。この方法は：ブタＭＨＣ抗原好ましくはクラスＩ抗原、クラスＩＩ抗原又はこれらの両者をコードするＤＮＡをレシピエント哺乳動物の造血幹細胞例えば骨髄造血幹細胞に挿入し；そのＭＨＣ抗原をコードするＤＮＡをレシピエント中で発現させ；そしてレシピエントに移植片を移植することを含み、ここに、移植片の細胞の幾つか又は実質的にすべては、レシピエントのＮＫ細胞媒介の攻撃を阻止するレシピエント種のクラスＩ遺伝子を発現する。好適具体例において、移植組織は、ＨＬＡＣ遺伝子を発現する。対立遺伝子は、例えば、何れかのＣｗ１、Ｃｗ２、Ｃｗ３、Ｃｗ４、Ｃｗ５、Ｃｗ６、Ｃｗ７、Ｃｗ８、Ｃｗ９、Ｃｗ７／８ｖ又はＣｗ１０対立遺伝子であってよい。好適具体例において、対立遺伝子は、反応性グループ例えばグループ１対立遺伝子（例えば、ＨＬＡＣＣｗ２、Ｃｗ４、Ｃｗ５又はＣｗ６対立遺伝子の何れか）又はグループ２対立遺伝子（例えば、ＨＬＡＣＣｗ１、Ｃｗ３、Ｃｗ７又はＣｗ８対立遺伝子の何れか）のメンバーである。他の好適具体例において、対立遺伝子は、残基７７にＡｓｎを有し且つ残基８０にＬｙｓを有するか、又は残基７７にＳｅｒを有し且つ残基８０にＡｓｎを有する。好適具体例において、移植片は、ＨＬＡＡ遺伝子を発現する。他の好適具体例において、移植片は、ＨＬＡＢ遺伝子を発現する。他の好適具体例において、移植片は、ＨＬＡＧ遺伝子例えばＨＬＡＧの対立遺伝子Ｉ〜ＩＶを発現する。更に別の好適具体例において、移植片は、ＨＬＡＡ遺伝子をコードするトランスジーン、ＨＬＡＢ遺伝子をコードするトランスジーン、ＨＬＡＣ遺伝子をコードするトランスジーン、ＨＬＡＧ遺伝子をコードするトランスジーンの１つ以上又は全部を含む。好適具体例において、移植片は、ＨＬＡクラスＩ対立遺伝子例えばＨＬＡＣ対立遺伝子を含む第１のトランスジーン、及びクラスＩＭＨＣ蛋白質をコードする遺伝子を含む第２のトランスジーンを含む。好適具体例において、第２のトランスジーンは、ヒトのβサブユニット例えばβ−２ミクログロブリン遺伝子を含む。他の好適具体例において、第１のトランスジーンは、第１の反応性グループからのＨＬＡクラスＩ対立遺伝子を含み、第２のトランスジーンは、第２の反応性グループからの対立遺伝子を含む。例えば、第１のトランスジーンは、グループ１対立遺伝子例えばＨＬＡＣＣｗ２、Ｃｗ４、Ｃｗ５又はＣｗ６対立遺伝子の何れかを含み、第２のトランスジーンは、グループ２対立遺伝子例えばＨＬＡＣＣｗ１、Ｃｗ３、Ｃｗ７又はＣｗ８対立遺伝子の何れかを含む。好適具体例において、第１のトランスジーンは、残基７７にＡｓｎを有し且つ残基８０にＬｙｓを有する対立遺伝子をコードし、第２のトランスジーンは、残基７７にＳｅｒを有し且つ残基８０にＡｓｎを有する対立遺伝子をコードする。他の好適具体例において、第２のトランスジーンは、ヒトのβサブユニット例えば β−２ミクログロブリン遺伝子をコードする。好適具体例において、移植片は、キメラのクラスＩ蛋白質例えばキメラのＨＬＡＡ、Ｂ、Ｃ又はＧ遺伝子を発現する。例えば、キメラ遺伝子は、クラスＩ蛋白質をコードする遺伝子の第１の対立遺伝子に由来する第１の部分及びクラスＩ蛋白質をコードする遺伝子の第２の対立遺伝子に由来する第２の部分を含む。他の具体例において、クラスＩ遺伝子は、標的細胞をＮＫ細胞の２つ以上のクラスからの攻撃から防護する蛋白質を生成する能力について選択した合成の配列である。好適具体例において、トランスジーンは、ＮＫ細胞の２つ以上のクラスに対する防護を与える遺伝子例えばキメラの又は変異したＨＬＡＣ遺伝子例えば７７位にセリンを有し且つ８０位にリジンを有するＨＬＡＣの対立遺伝子を含む。好適具体例において、移植片は、トランスジェニックブタ例えばトランスジェニックのヒトクラスＩ遺伝子例えばＨＬＡＡ、Ｂ、Ｃ又はＧ遺伝子を含むトランスジェニックブタからのものである。好適具体例において、この方法は、更に、レシピエントに、ヘルプ減少処理の短期コース例えば高投与量のシクロスポリン処理の短期コースを施すことを含む。ヘルプ減少処理の短期コースは、一般に、移植片をレシピエントに導入する時点の近辺で施す。このヘルプ減少処理の短期コースは、ＭＨＣ抗原の発現後のレシピエントに導入される移植片上の一致しないクラスＩ及び／又はマイナー抗原に対する寛容を誘導することができる。ヘルプ減少処理の短期コースの継続期間は、レシピエント種の成熟Ｔ細胞が、最初に抗原により刺激された後にその抗原の拒絶を開始するのに必要な期間にほぼ等しいか又はそれより短くすべきであり；一層好適な具体例においては、この継続期間は、レシピエント種の成熟Ｔ細胞が最初に抗原により刺激された後にその抗原の拒絶を開始するのに必要な期間の２、３、４、５若しくは１０倍にほぼ等しいか又はそれより短い。他の好適具体例において、ヘルプ減少処理の短期コースを、レシピエント中の成熟Ｔ細胞によるサイトカインの放出を刺激する処理なしで、例えばヘルプ減少処理の所望の効果を打ち消すのに十分な濃度のステロイド剤の不在にて、例えばレシピエント中の成熟Ｔ細胞によるサイトカインの放出を刺激する濃度のプレドニゾン（１７，２１−ジヒドロキシプレグナ−１，４−ジエン−３，１１，２０−トリオン）の不在にて施す。好適具体例において、ヘルプ減少処理の短期コースを、ステロイド剤の不在にて、例えばプレドニゾンの不在にて施す。好適具体例において、ヘルプ減少処理を、移植片を導入する時点の前又はその近辺にて開始し；この短期コースは、手術中であり；又はこの短期コースは、手術後である。好適具体例は、次のようなものを含む：レシピエントの幹細胞を、ＤＮＡ挿入の前にそのレシピエント哺乳動物から取り出し、ＤＮＡ挿入後にレシピエント哺乳動物に戻すもの；移植片を提供する哺乳動物個体と同系である哺乳動物個体からＤＮＡを得るもの；移植片を提供する哺乳動物個体とＭＨＣが一致する（好ましくは同一である）哺乳動物個体からＤＮＡを得るもの；ＤＮＡがＭＨＣクラスＩ遺伝子を含むもの；ＤＮＡがＭＨＣクラスＩＩ遺伝子を含むもの；ＤＮＡをトランスダクションにより例えばレトロウイルスにより例えばモロニーに基づくレトロウイルスにより細胞に挿入するもの；及びＤＮＡが、そのＤＮＡのレシピエントへの導入後、少なくとも１４日、好ましくは３０日、一層好ましくは６０日、最も好ましくは１２０日間レシピエントの骨髄細胞及び／又は末梢血液細胞中で発現されるもの。他の好適具体例は、造血幹細胞移植前に、例えば約１００〜４００ラドの低線量の全身照射にてレシピエント哺乳動物を照射してそのレシピエントの骨髄を涸渇させ又は部分的に涸渇させることにより造血空間を造るステップ；造血幹細胞移植前に、例えば約７００ラドの胸腺照射にてレシピエント哺乳動物を１回以上照射することにより又は上記のように免疫抑制の短期コースをレシピエントに施すことにより胸腺Ｔ細胞を不活性化するステップを含む。他の好適具体例は、移植片の移植前に、例えば第２の種の哺乳動物から得た臓器例えば肝臓又は腎臓を血液灌流することにより、レシピエント哺乳動物の血液から天然の抗体を涸渇させるステップを含む。（臓器の血液灌流において、血液中の抗体は、その臓器の細胞表面上の抗原と結合し、それ故、血液中から除去される。）他の好適具体例において、この方法は、更に、造血幹細胞移植前に、レシピエントに、該レシピエント哺乳動物の成熟Ｔ細胞に結合し得る抗体を導入することを含む。他の好適具体例は、更に、レシピエントに、ドナーから得た移植片例えば肝臓又は腎臓を導入するステップを含む。好適具体例において、ドナー移植片細胞は、造血幹細胞又は他の血液細胞以外であり；ドナー移植片細胞は、ブタ胸腺細胞例えばブタ胸腺間質細胞であり；ドナー移植片細胞は、骨髄間質細胞であり；ドナー移植片細胞は、ブタ肝細胞であり；ドナー移植片細胞は、ブタ腎臓細胞であり；ドナー移植片細胞は、ブタ上皮細胞であり；ドナー移植片細胞は、ブタ筋肉細胞例えば心臓細胞であり；ドナー移植片細胞は、ブタニューロン細胞であり；移植片細胞は、臓器例えば腎臓、肝臓若しくは心臓を含み；ドナー移植片細胞は、樹状細胞又はそれらの前駆細胞を含む。他の好適具体例は、レシピエントに、ドナー種特異的間質組織好ましくは造血間質組織例えば胎児肝又は胸腺を導入するステップを含む。好適具体例において、間質組織を造血幹細胞の導入と同時に、又はその前に導入する。他の面において、この発明は、レシピエント哺乳動物例えば霊長類例えばヒトに、ドナーのブタ例えばミニブタから得た移植片に対する寛容を誘導する方法を特徴とする。この方法は、下記を含む：好ましくは、移植片の移植の前又は移植と同時に、例えば静脈注射により、レシピエント哺乳動物中に、ブタ造血幹細胞例えば骨髄細胞又は胎児肝若しくは脾臓細胞を導入すること（好ましくは、これらの造血幹細胞は、レシピエント哺乳動物中の一部位に向かう）；（適宜）レシピエント哺乳動物のナチュラルキラー細胞を、例えば、造血幹細胞のレシピエント哺乳動物中への導入前に、レシピエント哺乳動物中に該レシピエント哺乳動物のナチュラルキラー細胞に結合することのできる抗体を導入することにより不活性化すること；及び移植片をレシピエントに移植すること（但し、これらの幹細胞、又は移植片の細胞の幾つか若しくは実質的にすべての一方又は両方は、レシピエントＮＫ細胞媒介の攻撃を阻止するレシピエント種のクラスＩ遺伝子を発現する）。好適具体例において、幹細胞又は移植組織の一方又は両方は、ＨＬＡＣ対立遺伝子を発現する。この対立遺伝子は、例えば、何れかのＣｗ１、Ｃｗ２、Ｃｗ３、Ｃｗ４、Ｃｗ５、Ｃｗ６、Ｃｗ７、Ｃｗ８、Ｃｗ９、Ｃｗ７／８ｖ又はＣｗ１０対立遺伝子であってよい。好適具体例において、対立遺伝子は、反応性グループ例えばグループ１対立遺伝子（例えば、ＨＬＡＣＣｗ２、Ｃｗ４、Ｃｗ５若しくはＣｗ６対立遺伝子の何れか）又はグループ２対立遺伝子（例えば、ＨＬＡＣＣｗ１、Ｃｗ３、Ｃｗ７若しくはＣｗ８対立遺伝子の何れか）のメンバーである。他の好適具体例において、対立遺伝子は、残基７７にＡｓｎを有し且つ残基８０にＬｙｓを有するか又は残基７７にＳｅｒを有し且つ残基８０にＡｓｎを有する。好適具体例において、幹細胞又は移植組織の一方又は両方は、ＨＬＡＡ遺伝子を発現する。他の好適具体例において、幹細胞又は移植組織、移植片の一方又は両方は、ＨＬＡＢ遺伝子を発現する。他の好適具体例において、幹細胞又は移植片組織の一方又は両方は、ＨＬＡＧ遺伝子を、例えばＨＬＡＧの対立遺伝子Ｉ〜ＩＶの何れかを発現する。好適具体例において、幹細胞又は移植組織の一方又は両方は、ＨＬＡＡ遺伝子をコードするトランスジーン、ＨＬＡＢ遺伝子をコードするトランスジーン、ＨＬＡＣ遺伝子をコードするトランスジーン、ＨＬＡＧ遺伝子をコードするトランスジーンの１つ以上又はすべてを含む。好適具体例において、幹細胞又は移植組織の一方又は両方は、ＨＬＡクラスＩ対立遺伝子例えばＨＬＡＣ対立遺伝子を含む第１のトランスジーン、及びクラスＩＭＨＣ蛋白質をコードする遺伝子を含む第２のトランスジーンを含む。好適具体例において、第２のトランスジーンは、ヒトのβサブユニット例えばβ−２ミクログロブリン遺伝子を含む。他の好適具体例において、第１のトランスジーンは、第１の反応性グループからのＨＬＡクラスＩ対立遺伝子を含み、第２のトランスジーンは、第２の反応性グループからの対立遺伝子を含む。例えば、第１のトランスジーンは、グループ１対立遺伝子例えばＨＬＡＣＣｗ２、Ｃｗ４、Ｃｗ５又はＣｗ６対立遺伝子の何れかを含み、第２のトランスジーンは、グループ２対立遺伝子例えばＨＬＡＣＣｗ１、Ｃｗ３、Ｃｗ７又はＣｗ８対立遺伝子の何れかを含む。他の好適具体例において、第１のトランスジーンは、残基７７にＡｓｎを有し且つ残基８０にＬｙｓを有する対立遺伝子を含み、第２のトランスジーンは、残基７７にＳｅｒを有し且つ残基８０にＡｓｎを有する対立遺伝子を含む。好適具体例において、幹細胞又は移植組織の一方又は両方は、キメラのクラスＩ蛋白質例えばキメラのＨＬＡＡ、Ｂ、Ｃ又はＧ遺伝子を発現する。例えば、キメラ遺伝子は、クラスＩ蛋白質をコードする遺伝子の第１の対立遺伝子に由来する第１の部分及びクラスＩ蛋白質をコードする遺伝子の第２の対立遺伝子に由来する第２の部分を含む。他の具体例において、クラスＩ遺伝子は、標的細胞をＮＫ細胞の２つ以上のクラスからの攻撃から防護する蛋白質を生成する能力について選択した合成の配列である。好適具体例において、トランスジーンは、ＮＫ細胞の２つ以上のクラスに対する防護を与える遺伝子例えばキメラの又は変異したＨＬＡＣ遺伝子例えば７７位にセリンを有し且つ８０位にリジンを有するＨＬＡＣの対立遺伝子を含む。好適具体例において、幹細胞又は移植組織の一方又は両方は、トランスジェニックブタ例えばトランスジェニックのヒトクラスＩ遺伝子例えばＨＬＡＡ、Ｂ、Ｃ又はＧ遺伝子を含むトランスジェニックブタからのものである。好適具体例において、この方法は、更に、レシピエントに、ヘルプ減少処理の短期コース例えば高投与量のシクロスポリン処理の短期コースを施すことを含む。ヘルプ減少処理の短期コースは、一般に、移植片をレシピエントに導入する時点の近辺にて施す。ヘルプ減少処理の短期コースは、ＭＨＣ抗原の発現後のレシピエントに導入される移植片上の一致しないクラスＩ及び／又はマイナー抗原に対する寛容を誘導することができる。ヘルプ減少処理の短期コースの継続期間は、レシピエント種の成熟Ｔ細胞が抗原により最初に刺激された後にその抗原の拒絶を開始するのに必要な期間とほぼ等しいか又はそれより短くすべきであり；一層好適な具体例においては、この継続期間は、レシピエント種の成熟Ｔ細胞が最初に抗原により刺激された後にその抗原の拒絶を開始するのに必要な期間の２、３、４、５若しくは１０倍とほぼ等しいか又はそれより短い。他の好適具体例において、ヘルプ減少処理の短期コースを、レシピエント中の成熟Ｔ細胞によるサイトカインの放出を刺激する処理なしで、例えばヘルプ減少処理の所望の効果を打ち消すのに十分な濃度のステロイド剤の不在にて、例えばレシピエント中の成熟Ｔ細胞によるサイトカインの放出を刺激する濃度のプレドニゾン（１７，２１−ジヒドロキシプレグナ−１，４−ジエン−３，１１，２０−トリオン）の不在にて施す。好適具体例において、ヘルプ減少処理の短期コースを、ステロイド剤の不在にて、例えばプレドニゾンの不在にて施す。好適具体例において、ヘルプ減少処理を、移植片の導入の時点の前に又はその時点近辺にて開始し；この短期コースは、手術中であり；又はこの短期コースは、手術後である。これらの造血細胞は、Ｂ細胞及びＴ細胞レベルの両方での寛容を誘導することにより、レシピエントに、後続の移植片に対する準備をさせる。好ましくは、造血細胞は、胎児肝若しくは脾臓であり、又は未熟細胞を含む骨髄細胞（即ち、未分化の造血幹細胞；これらの所望の細胞は、投与前に骨髄から分離することができる）であり、又はかかる細胞を含む複合骨髄試料を用いることができる。抗ＮＫ抗体の１つの源は、抗ヒト胸腺細胞ポリクローナル抗血清である。後述のように、好ましくは、第２の抗成熟Ｔ細胞抗体をも投与することができ、それはＴ細胞並びにＮＫ細胞を溶解させる。Ｔ細胞を溶解させることは、骨髄及び異種移植片の両者の生存に有利である。抗胸腺細胞抗血清中には、抗ＮＫ細胞抗体と共に、抗Ｔ細胞抗体が存在する。抗ＮＫ又は抗Ｔ細胞抗体の反復投与量が、好適であり得る。モノクローナル標品を、この発明の方法において用いることができる。他の好適具体例は、レシピエント哺乳動物に、ドナー種特異的な間質組織好ましくは造血間質組織例えば胎児肝又は脾臓を導入するステップを含む。好適具体例において、間質組織は、造血幹細胞と同時に又はそれより前に導入し；造血幹細胞は、抗体と同時に又はそれより前に導入する。他の好適具体例は、次のものを含む：第２の種の同じ哺乳動物が移植片及び造血細胞の一方又は両方のドナーであるもの；及び抗体が、例えばウマ又はブタから得た抗ヒト胸腺細胞ポリクローナル抗血清であるもの。他の好適具体例は、造血幹細胞移植の前に、例えばレシピエント哺乳動物を、例えば約１００〜４００ラドの低線量を用いて全身照射してそのレシピエントの骨髄を涸渇させ又は部分的に涸渇させることにより、造血空間を造るステップ；造血幹細胞移植の前に、例えば約７００ラドの胸腺照射を用いてレシピエント哺乳動物を照射し又はここに記載のように免疫抑制の短期コースを施すことにより、胸腺Ｔ細胞を不活性化するステップを含む。他の好適具体例は、造血幹細胞移植の前に、例えば第２の種の哺乳動物から得た臓器例えば肝臓又は腎臓を血液灌流することにより、レシピエント哺乳動物の血液から天然の抗体を涸渇させるステップを含む。（臓器の血液灌流において、血液中の抗体は、臓器の細胞表面上の抗原に結合し、それ故、血液から除去される。）他の好適具体例において、この方法は、更に、造血幹細胞の移植前に、レシピエントに、該レシピエント哺乳動物の成熟Ｔ細胞に結合することのできる抗体を導入することを含む。他の好適具体例において、この方法は、更に、例えば、造血幹細胞をレシピエントに導入する前に、そのレシピエントのＴ細胞に結合することのできる抗体をそのレシピエントに導入することによりそのレシピエントのＴ細胞を不活性化させることを含む。好適具体例において、この方法は、ドナーから得た移植片（造血幹細胞以外の臓器例えば肝臓又は腎臓から得たもの）をレシピエントに導入するステップを含む。好適具体例において、ドナー移植片細胞は、造血幹細胞又は他の血液細胞以外であり；ドナー移植片細胞は、ブタ胸腺細胞例えばブタ胸腺間質細胞であり；ドナー移植片細胞は、ブタ肝細胞であり；ドナー移植片細胞は、ブタ腎臓細胞であり；ドナー移植片細胞は、ブタ内皮細胞であり；ドナー移植片細胞は、ブタ上皮細胞であり；ドナー移植片細胞は、ブタ筋肉細胞例えば心臓細胞であり；ドナー移植片細胞は、ブタニューロン細胞であり；移植片細胞は、臓器例えば腎臓、肝臓又は心臓を含み；ドナー移植片細胞は、樹状細胞又はそれらの前駆細胞を含む。他の好適具体例は、レシピエントに、ドナー種特異的な間質組織好ましくは造血間質組織例えば胎児肝又は胸腺を導入するステップを含む。好適具体例において、間質組織を、造血幹細胞と同時に又はそれらより前に導入する。この発明の遺伝子工学処理したブタ細胞は、当業者に公知の方法によって、例えばブタ細胞のレトロウイルストランスダクションによって造ることができる。この発明のトランスジェニックブタを生成する方法は、標準的トランスジェニック技術を用いる。これらの方法は、例えば、レトロウイルスを含むウイルスによる接合体又は生物の感染；ウイルスによる組織の感染及び次いでその組織を動物に再導入すること；及び哺乳動物の胚性幹細胞への組換え核酸分子の導入及び続いてその胚性幹細胞の適当な操作によりトランスジェニック動物を生成することを含む。特に、この発明は、生殖細胞及び体細胞がポリペプチドをコードするＤＮＡ配列及びそのＤＮＡ配列に操作可能に結合された組織特異的プロモーターを含むトランスジーンを含むトランスジェニックブタを特徴とする（この組織特異的プロモーターは、ブタの骨髄細胞中での造血ペプチドの発現を達成し、このトランスジーンは、この動物の胚細胞又はこの動物の先祖に導入される）。他の面において、この発明は、レシピエント哺乳動物例えば霊長類例えばヒトにおける、ブタ例えばミニブタから得た移植片に対する寛容を誘導する方法を特徴とする。その方法は、移植片の移植の前に又は移植と同時に、レシピエント哺乳動物に、ブタ胸腺組織例えばブタ胸腺上皮好ましくは胎児又は新生児胸腺組織を導入し；そして移植片をレシピエントに移植することを含む。この胸腺組織は、レシピエントに、Ｔ細胞レベルにおける免疫寛容を誘導することによって、後続の移植片に対する準備をさせる。胸腺組織又は移植片の細胞の幾つか若しくは全部の一方又は両方は、レシピエントのＮＫ細胞媒介の攻撃を阻止するレシピエント種のクラスＩ遺伝子を発現する。好適具体例において、胸腺組織又は移植片の細胞の幾つか若しくは全部の一方又は両方は、ＨＬＡＣ対立遺伝子を発現する。この対立遺伝子は、例えば、何れかのＣｗ１、Ｃｗ２、Ｃｗ３、Ｃｗ４、Ｃｗ５、Ｃｗ６、Ｃｗ７、Ｃｗ８、Ｃｗ９、Ｃｗ７／８又はＣｗ１０対立遺伝子であってよい。好適具体例において、この対立遺伝子は、反応性グループ例えばグループ１対立遺伝子（例えば、ＨＬＡＣＣｗ２、Ｃｗ４、Ｃｗ５又はＣｗ６対立遺伝子の何れか）又はグループ２対立遺伝子（例えば、ＨＬＡＣＣｗ１、Ｃｗ３、Ｃｗ７又はＣｗ８対立遺伝子の何れか）のメンバーである。他の好適具体例において、この対立遺伝子は、残基７７にＡｓｎを有し且つ残基８０にＬｙｓを有するか又は残基７７にＳｅｒを有し且つ残基８０にＡｓｎを有する。好適具体例において、胸腺組織又は移植片の細胞の幾つか若しくは全部の一方又は両方は、ＨＬＡＡ遺伝子を発現する。他の好適具体例において、胸腺組織又は移植片の細胞の幾つか若しくは全部の一方又は両方は、ＨＬＡＢ遺伝子を発現する。他の好適具体例において、胸腺組織又は移植片の細胞の幾つか若しくは全部の一方又は両方は、ＨＬＡＧ遺伝子例えばＨＬＡＧの対立遺伝子Ｉ〜ＩＶの何れかを発現する。好適具体例において、胸腺組織又は移植片の細胞の幾つか若しくは全部の一方又は両方は、ＨＬＡＡ遺伝子をコードするトランスジーン、ＨＬＡＢ遺伝子をコードするトランスジーン、ＨＬＡＣ遺伝子をコードするトランスジーン、ＨＬＡＧ遺伝子をコードするトランスジーンの１つ以上又はすべてを含む。好適具体例において、胸腺組織又は移植片の細胞の幾つか若しくは全部の一方又は両方は、ＨＬＡクラスＩ対立遺伝子例えばＨＬＡＣ対立遺伝子を含む第１のトランスジーン及び、クラスＩＭＨＣ蛋白質をコードする遺伝子を含む第２のトランスジーンを含む。好適具体例において、第２のトランスジーンは、ヒトの βサブユニット例えばβ−２ミクログロブリン遺伝子を含む。他の好適具体例において、第１のトランスジーンは、第１の反応性グループからのＨＬＡクラスＩ対立遺伝子を含み、第２のトランスジーンは、第２の反応性グループからの対立遺伝子を含む。例えば、第１のトランスジーンは、グループ１対立遺伝子（例えば、ＨＬＡＣＣｗ２、Ｃｗ４、Ｃｗ５又はＣｗ６対立遺伝子の何れか）を含み、第２のトランスジーンは、グループ２対立遺伝子（例えば、ＨＬＡＣＣｗ１、Ｃｗ３、Ｃｗ７又はＣｗ８対立遺伝子の何れか）を含む。他の好適具体例において、第１のトランスジーンは、残基７７にＡｓｎを有し且つ残基８０にＬｙｓを有する対立遺伝子を含み、第２のトランスジーンは、残基７７にＳｅｒを有し且つ残基８０にＡｓｎを有する対立遺伝子を含む。好適具体例において、胸腺組織又は移植片の細胞の幾つか若しくは全部の一方又は両方は、キメラのクラスＩ蛋白質例えばキメラのＨＬＡＡ、Ｂ、Ｃ又はＧ遺伝子を発現する。例えば、このキメラ遺伝子は、クラスＩ蛋白質をコードする遺伝子の第１の対立遺伝子に由来する第１の部分及びクラスＩ蛋白質をコードする遺伝子の第２の対立遺伝子に由来する第２の部分を含む。他の具体例において、このクラスＩ遺伝子は、標的細胞をＮＫ細胞の２つ以上のクラスからの攻撃から防護する蛋白質を生成する能力について選択した合成の配列である。好適具体例において、トランスジーンは、ＮＫ細胞の２つ以上のクラスに対する防護を与える遺伝子（例えば、７７位にセリンを有し且つ８０位にリジンを有するＨＬＡＣの対立遺伝子）例えばキメラの又は変異したＨＬＡＣ遺伝子を含む。好適具体例において、胸腺組織又は移植片の細胞の幾つか若しくは全部の一方又は全部は、トランスジェニックブタ例えばトランスジェニックのヒトクラスＩ遺伝子例えばＨＬＡＡ、Ｂ、Ｃ又はＧ遺伝子を含むトランスジェニックブタからのものである。好適具体例は、移植片胸腺の受容及び免疫寛容の誘導を促進し又はこの手順を最適化する他のステップを含む。好適具体例において、肝臓又は脾臓組織、好ましくは胎児又は新生児の肝臓又は脾臓組織を、胸腺組織と共に移植し；ドナー造血細胞例えば臍帯血液幹細胞又は胎児若しくは新生児肝若しくは脾臓細胞をレシピエントに投与し、例えば胎児肝細胞の懸濁液を腹腔内又は静脈投与し；レシピエントを、好ましくは異種移植片胸腺組織の導入の時点の前に又はその時点において、胸腺摘出する。他の好適具体例において、この方法は、（好ましくは、胸腺組織又は幹細胞をレシピエントに導入する時点の前又はその時点において）レシピエントのＮＫ細胞を、例えばレシピエントに、そのレシピエントのナチュラルキラー（ＮＫ）細胞に結合することのできる抗体を導入することによって、涸渇させ、不活性化し又は阻止して、ＮＫ媒介の胸腺組織の拒絶を阻止すること；（好ましくは、胸腺組織をレシピエントへ導入する時点の前又はその時点において）例えば、レシピエントのＴ細胞に結合することのできる抗体をレシピエントに導入することにより、レシピエントのＴ細胞を涸渇させ、不活性化し又は阻止すること；（好ましくは、胸腺組織又は幹細胞をレシピエントへ導入する時点の前又はその時点において）例えばレシピエントのＣＤ４又はＣＤ４⁺細胞に結合することのできる抗体をレシピエントに導入することにより、宿主のＣＤ４⁺細胞機能を涸渇させ、不活性化し又は阻止することを含む。Ｔ細胞並びにＮＫ細胞を溶解させる抗成熟Ｔ細胞抗体を投与することができる。Ｔ細胞を溶解させることは、胸腺組織及び異種移植片の両者の生存に有利である。抗胸腺細胞抗血清中には、抗ＮＫ抗体と共に、抗Ｔ細胞抗体が存在する。抗ＮＫ又は抗Ｔ細胞抗体の反復投与量は、好適であり得る。モノクローナル標品を、この発明の方法において用いることができる。他の好適具体例は、次のものを含む：レシピエントが、ドナー又はドナー種から造血細胞を受けないもの（第２の種の同じ哺乳動物が、移植片及び胸腺組織の両方のドナーである）；ドナー哺乳動物がブタ例えばミニブタであるもの；例えばウマ又はブタから得た抗ヒト胸腺細胞ポリクローナル抗血清をレシピエントに投与するもの。他の好適具体例は、レシピエントの骨髄を涸渇させ又は部分的に涸渇させるために、例えば、約１００〜４００ラドの低線量を用いてレシピエント哺乳動物を全身照射すること、骨髄抑制剤の投与、造血幹細胞不活性化又は涸渇化のための抗体の投与の一つ又は２つ以上によって造血空間を造るステップ（好ましくは、胸腺組織又は造血幹細胞移植の前）を含む。他の好適具体例は、例えば、約７００ラドの胸腺照射にてレシピエントを照射すること、抗Ｔ細胞抗体（例えば、抗ＣＤ４及び／又は抗ＣＤ８モノクローナル抗体）の一若しくは複数の投与量をレシピエントへ投与すること、又はレシピエントに免疫抑制の短期コースを施すことの一つ又は２つ以上によって胸腺Ｔ細胞を不活性化すること（好ましくは、胸腺組織又は造血幹細胞移植の前）を含む。好適具体例において、宿主又はレシピエントは、出生後の個体、例えば、成体又は幼体である。好適具体例において、この方法は、更に、移植片を必要としている宿主又はレシピエントを同定するステップを含む。他の好適具体例は、例えば、天然抗体を涸渇させ若しくは不活性化する薬剤例えばデオキシスパガリンの投与；抗ＩｇＭ抗体の投与；又は例えば宿主の血液をドナー抗原と接触させることによる（例えば、ドナー種からのドナー臓器例えば腎臓又は肝臓の血液灌流による）レシピエント血液からの天然抗体の吸着の一つ又は２つ以上によって天然抗体を涸渇させ或は不活性化することを含む。ここで論じるように、ＮＫ細胞上に見出されるキラー抑制性レセプター（ＫＩＲ）は、多型ＭＨＣクラスＩ分子に特異的である。移植片用に用いるブタ組織は、レシピエントのＮＫ細胞からの防護を最大にするＨＬＡクラスＩ対立遺伝子を発現するであろう。従って、他の面において、この発明は、下記を含むヒトによるブタの異種移植片組織の受容を延長する方法を含む：レシピエントのＨＬＡＡ、ＨＬＡＢ、ＨＬＡＣ又はＨＬＡＧ表現型又は遺伝子型を測定すること；レシピエントのＮＫ細胞に対する防護を与えるレシピエントのＨＬＡ遺伝子を発現するドナー組織を選択し、例えば、ドナートランスジェニック動物を選択してその組織をレシピエントに移植すること。例えば、ドナー組織又は動物は、レシピエントにより発現される対立遺伝子のトランスジェニック型を発現することができる。或は、ドナー組織又は動物は、レシピエント中で発現される１つ以上の対立遺伝子と同じ反応性グループからの対立遺伝子を発現することができる。レシピエントのＨＬＡＡ、Ｂ、Ｃ又はＧ表現型又は遺伝子型は、標準的方法例えばＰＣＲ又はリンパ球毒性によって測定することができる。他の面において、この発明は、第１のトランスジェニックブタ及び第２のトランスジェニックブタを含むトランスジェニックブタのパネルを含む。第１のトランスジェニックブタは、ヒトＨＬＡＡ、Ｂ、Ｃ又はＧ遺伝子の第１の対立遺伝子を含むトランスジーンを有し、第２のトランスジェニックブタは、ヒトＨＬＡＡ、Ｂ、Ｃ又はＧ遺伝子の第２の対立遺伝子を含むトランスジーンを有する。好適具体例において、第１の対立遺伝子は、第１の反応性グループからのものであり、第２の対立遺伝子は、第２の反応性グループからのものである。例えば、第１のブタのトランスジーンは、グループ１対立遺伝子（例えば、ＨＬＡＣＣｗ２、Ｃｗ４、Ｃｗ５又はＣｗ６対立遺伝子の何れか）を含み、第２のブタのトランスジーンは、グループ２対立遺伝子（例えば、ＨＬＡＣＣｗ１、Ｃｗ３、Ｃｗ７又はＣｗ８対立遺伝子の何れか）を含む。他の好適具体例において、第１のブタのトランスジーンは、残基７７にＡｓｎを有し且つ残基８０にＬｙｓを有する対立遺伝子を含み、第２のブタのトランスジーンは、残基７７にＳｅｒを有し且つ残基８０にＡｓｎを有する対立遺伝子を含む。トランスジェニックブタのパネルを用いて、移植片をレシピエントのＮＫ細胞から防護するＨＬＡクラスＩ対立遺伝子を有するドナーを与えることができる。ＮＫ細胞は、異種個体組織の拒絶において重要な役割を演じる。ＮＫ細胞の致死作用（killing）は、標的細胞上のＮＫ細胞型のクラスＩ抗原の存在により阻止されるので、ヒトＮＫ細胞によるブタ組織のＮＫ媒介の攻撃は、この発明によって最小化される。これは、ヒトクラスＩ遺伝子をブタ標的に導入することにより達成される。同種異系の細胞媒介の致死作用と対照的に、異種個体のヒト抗ブタ細胞傷害性は、ＮＫ細胞からの重大な貢献を含んでいる。正常の自己の及び殆どの同種異系細胞は、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）クラスＩ分子の発現のために、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞媒介の細胞傷害性に感受性でない。種々のＭＨＣクラスＩ特異性を有するＫＩＲを介してＮＫ細胞に阻止シグナルが伝達される。異種個体のブタＭＨＣクラスＩ分子は、ヒトＫＩＲにより認識されず、それ故、ブタ細胞をＮＫ細胞媒介の溶解に感受性にするらしい。この発明の他の特徴及び利点は、下記の詳細な説明及び請求の範囲から明らかとなろう。図面図面を、下記に、簡単に説明する：図１Ａは、特異的溶解（％）に対するＥ：Ｔ比のグラフであり、２Ａ２ｕｔ＝塗りつぶした菱形、Ｋ５６２＝白抜きの正方形、２Ａ２／Ｃｗ３＋＝塗りつぶした三角形、２Ａ２／Ａ２＋＝白抜きの丸形、２Ａ２／Ｂ２７＋＝塗りつぶした正方形；１Ｂは、特異的溶解（％）に対するＥ：Ｔ比のグラフであり、２Ａ２ｕｔ＝塗りつぶした菱形、Ｋ５６２＝白抜きの正方形、２Ａ２／Ｃｗ３＋＝塗りつぶした三角形、２Ａ２／Ａ２＋＝白抜きの丸形、２Ａ２／Ｂ２７＋＝塗りつぶした正方形；１Ｃは、特異的溶解（％）に対するＥ：Ｔ比のグラフであり、２Ａ２ｕｔ＝塗りつぶした菱形、２Ａ２／Ｃｗ３＋＝白抜きの正方形、２Ａ２／Ａ２＋＝塗りつぶした三角形。詳細な説明ここで用いる場合、用語「トランスジーン」は、核酸配列が導入されたトランスジェニック動物又は細胞に対して部分的に又は完全に異種性即ち外来性である核酸配列（例えば、１つ以上のクラスＩＭＨＣ蛋白質をコードするもの）を意味する。トランスジーンは、選択した核酸の最適発現に必要であり得る１つ以上の転写調節配列及び任意の他の核酸（イントロン等）（すべて選択した核酸に操作可能に結合）を含むことができ且つエンハンサー配列を含むことができる。ここで用いる場合、用語「トランスジェニック細胞」は、トランスジーンを含む細胞をいう。ここで用いる場合、「トランスジェニック動物」は、その細胞の１つ以上好ましくは本質的に全部がトランスジーンを含有する任意の動物である。トランスジーンは、意図的な遺伝的操作を経由して（例えば、マイクロインジェクションにより又は組換えウイルスを用いる感染により）、細胞の前駆細胞への導入により、直接又は間接に細胞に導入される。用語遺伝的操作は、古典的な交雑又はイン・ビトロでの受精を含まないが、組換えＤＮＡ分子の導入に向けられている。この分子は、染色体中にインテグレートされ得るし、又は染色体外で複製するＤＮＡであってよい。１つ以上のクラスＩＭＨＣペプチドをコードする１つ以上のトランスジーンを含むトランスジェニックブタは、この発明の範囲内にある。例えば、２つ又は３つのトランスジーンを含む二重又は三重のトランスジェニック動物を生成することができる。ここで用いる場合、用語「生殖細胞系列トランスジェニック動物」は、生殖系列にトランスジーンの遺伝情報が存在し、それにより、その情報を子孫に伝える能力を与えるトランスジェニック動物をいう。事実、かかる子孫が、その情報の幾らか又は全部を保持するならば、それらもトランスジェニック動物である。ここで用いる場合、用語「操作可能に結合した」は、選択したＤＮＡ（例えばクラスＩペプチドをコードするもの）が、転写調節配列例えば組織特異的なプロモーターの近くに、その転写調節配列がその選択したＤＮＡの発現を調節することができるように在ることを意味する。用語「遺伝的にプログラムされた」は、ここで用いる場合、細胞のＤＮＡ、ＲＮＡ又は蛋白質含量を永久的に変えることを意味する。ここで用いる場合、用語「組換えブタ細胞」は、組換えベクター又は他のトランスファー核酸のレシピエントとして用いられたブタ好ましくはミニブタに由来する細胞をいうが、該細胞には、トランスフェクトされ又はトランスフォームされた元の細胞の子孫が含まれる。組換えブタ細胞には、トランスジーン又は他の核酸ベクターが宿主細胞のゲノムに取込まれた細胞、並びに宿主細胞ゲノムからの自律性を保持している発現ベクターを有する細胞が含まれる。ここで用いる場合、用語「トランスフェクション」は、核酸例えば発現ベクターの、核酸媒介による遺伝子トランスファーによるレシピエント細胞への導入を意味する。「トランスフォーメーション」は、ここで用いる場合、外因性ＤＮＡ又はＲＮＡの細胞への取込みの結果として細胞の遺伝子型が変化するプロセスをいい、例えば、トランスフォームされたブタ細胞は、ヒトの細胞表面ペプチドを発現する。ここで用いる場合、用語「ベクター」は、それが結合した他の核酸を輸送することのできる核酸分子をいう。好適なベクターの１つの型は、エピソーム即ち、染色体外複製の可能な核酸である。好適なベクターは、それらが結合した核酸の自律的複製及び／又は発現のできるものである。それらが機能的に結合した遺伝子の発現を指令することのできるベクターは、ここでは、「発現ベクター」という。「転写調節配列」は、それが操作可能に結合した蛋白質コード配列の転写を誘導し又は制御する開始シグナル、エンハンサー及びプロモーター等のＤＮＡ配列に言及するためにこの明細書中で用いる包括的用語である。好適具体例において、組換え遺伝子の転写は、ヒトにおける組換え遺伝子の発現を自然に制御し又はブタ細胞における対応する遺伝子の発現を自然に制御するプロモーター配列（又は他の転写調節配列）の制御下にある。更に一層好適な具体例において、この転写調節配列は、組換え蛋白質の造血特異的発現を引き起こす。上記の具体例に逆らう訳ではないが、組換え遺伝子が、組換え蛋白質の転写を自然に制御する配列と異なる転写調節配列の制御下にあってよいことも理解されよう。例えば、組換え遺伝子の転写は、合成のプロモーター配列の制御下にあってよい。好ましくは、組換え遺伝子の転写を制御するプロモーター配列は、骨髄細胞特に造血細胞又は上皮細胞において活性である（即ち、遺伝子発現を促進することができる）。組換え遺伝子の転写を制御するプロモーターは、ウイルス起源であってよい；例は、ウシヘルペスウイルス（ＢＨＶ）、モロニーマウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）、ＳＶ４０、ブタ水疱疾患ウイルス（ＳＶＤＶ）及びサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）から時々導かれるプロモーターである。ここで用いる場合、用語「組織特異的プロモーター」は、プロモーターとして働く、即ちそのプロモーターに操作可能に結合された選択したＤＮＡ配列の発現を調節するＤＮＡ配列及び特異的細胞例えば造血細胞又は上皮細胞における選択したＤＮＡ配列の発現を達成するＤＮＡ配列を意味する。この組織特異的なプロモーターは、造血細胞又は上皮細胞において専ら発現を指令するのではないにしても、優勢に発現を指令する。発現を指令するのに特に有用なプロモーター配列には、組換えヒト遺伝子と自然に結合したプロモーター配列；相同なブタ遺伝子（即ち、組換えヒト遺伝子に対応するもの）と自然に結合したプロモーター配列；造血細胞例えばリンパ球系細胞、赤血球系細胞、又は骨髄系細胞又は上皮細胞において、最初に活性であるプロモーター；Brinster等(1983)Nature 306:3 32-336及びStob等(1984)Nature 310:238-231により記載された免疫グロブリンプロモーター；Ruscon等(1985)Nature 314:330-334及びGrosscheld等(1984)Cell 3 8:647-658により記載された免疫グロブリンプロモーター；Townes等(1985)Mol.C ell.Biol.5:1977-1983及びMagram等(1989)Mol.Cell.Biol 9:4581-4584により記載されたグロビンプロモーターが含まれる。他のプロモーターは、ここに記載され、又は当業者には明らかとなろう。その上、かかるプロモーターは又、発現に必要な更なるＤＮＡ配列例えばイントロン及びエンハンサー配列を含むこともできる。この用語は又、選択したＤＮＡの発現をある組織において主として調節するが、他の組織においても発現を引き起こすいわゆる「漏れ易い」プロモーターをもカバーする。他の調節エレメント例えば遺伝子座制御領域例えばＤＮアーゼＩ過敏性部位を含むことができる。「細胞特異的発現」とは、転写調節エレメントが特定の細胞型例えば骨髄細胞又は上皮細胞において組換え蛋白質の発現を指令することを意図している。「移植片」は、ここで用いる場合、身体の部分、臓器、組織又は細胞をいう。移植片は、肝臓、腎臓、心臓又は肺等の臓器；骨又は骨格マトリックス等の身体部分；皮膚、腸管、内分泌腺等の組織；又は種々の前駆幹細胞よりなるものであってよい。用語「組織」は、ここで用いる場合、移植され得る任意の生物学的材料を意味し、臓器（特に、心臓、肺、肝臓、腎臓及び甲状腺等の内臓）、角膜、皮膚、血管及び他の結合組織、血球及び造血細胞を含む細胞、ランゲルハンス島、脳細胞及び内分泌その他の臓器及び体液に由来する細胞（これらのすべては、移植のための候補である）を包含する。「一致しない種の組合せ」は、ここで用いる場合、移植片を一方から他方へ移植したときに超急性拒絶を生じる２つの種をいう。主題の発明において、ドナーは、ブタ起源であり且つレシピエントはヒトである。「造血幹細胞」は、ここで用いる場合、細胞例えば骨髄細胞、胎児若しくは新生児肝若しくは脾臓細胞、又は臍帯血細胞（成熟骨髄性及び／又はリンパ系細胞に発生し得るもの）をいう。「前駆細胞」は、ここで用いる場合、分化した子孫を生じさせる細胞をいう。幹細胞と対照的に、前駆細胞は、常には自己再生しておらず、発生ポテンシャル内に比較的限定されている。「間質組織」は、ここで用いる場合、臓器の機能的要素又は実質組織から区別される支持組織又はマトリックスをいう。「寛容」は、ここで用いる場合、移植片レシピエントの免疫応答の阻止であって、もし該阻止がなければ、例えば非自己ＭＨＣ抗原のレシピエントへの導入に応答して起きたであろう免疫応答の阻止をいう。寛容には、液性、細胞性、又は液性及び細胞性応答の両者が含まれ得る。寛容は、ここで用いる場合、抗原に対する完全な免疫学的寛容をいうだけでなく、部分的な免疫学的寛容即ちもしこの発明の方法を用いなかったならば見られたであろうものより大きい抗原に対する寛容の程度をもいう。「ミニブタ」は、ここで用いる場合、完全に又は部分的に同系交配した動物をいう。「免疫抑制剤の短期コース」は、ここで用いる場合、一時的な非長期的処理のコースを意味する。この処理は、寛容を誘導する処理を開始する時点の前に又はその時点の近辺で、例えば幹細胞をレシピエントに導入する時点の近辺において開始すべきである。例えば、この短期コースは、寛容を誘導する処理を開始する日に、例えば幹細胞をレシピエントに導入する日に開始することができ、又はこの短期コースは、寛容を誘導する処理を開始する１、２、４、６、８若しくは１０日前若しくは後に、例えば幹細胞をレシピエントに導入する１、２、４、６、８若しくは１０日前若しくは後に開始することができる。この短期コースは、約８〜１２日（好ましくは約１０日）以下の期間、又は８〜１２日若しくは１０日の２、３、４、５若しくは１０倍にほぼ等しいかそれより短い時間にわたって続けることができる。最適には、この短期コースは、約３０日間続ける。その投与量は、胸腺又はリンパ節のＴ細胞を不活性化するのに十分な血中レベルを維持するのに十分であるべきである。約１５ｍｇ／ｋｇ／日の投与量は、霊長類において有効であることが見出されている。「リンパ節又は胸腺Ｔ細胞」は、ここで用いる場合、Ｔ細胞不活性化の従来法による不活性化、例えば、抗Ｔ細胞抗体（例えば、抗体、例えば、ＡＴＧ標品）の単一の静脈投与による不活性化に耐性であるＴ細胞をいう。「ヘルプ減少」は、ここで用いる場合、寛容が望まれる抗原に対する最初の露出時における、少なくとも一種のサイトカイン（例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ガンマーインターフェロン又はＴＮＦの何れか）の、レシピエントのＴ細胞からの放出の阻止によるＴ細胞ヘルプの減少を意味する。レシピエントのＴ細胞のサイトカインの分泌において誘導される阻止は、レシピエントが、ヘルプの減少中に投与される抗原に対して寛容にされるだけ十分でなければならない。理論に拘束される訳ではないが、減少のレベルは、外来抗原の最初の認識に伴うＩＬ−２の初期バーストを実質的に排除するが、教育及び寛容の形成において重要であり得るすべての成熟Ｔ細胞を排除することはないものであると考えられる。「ヘルプ減少剤」は、ここで用いる場合、サイトカインの放出の減少を生じる薬剤例えば免疫抑制剤である。ヘルプ減少剤の例は、シクロスポリン、ＦＫ−５０６及びラパマイシンである。抗Ｔ細胞抗体は、Ｔ細胞を排除することができるので、ヘルプ減少剤としての使用に好適でない。ヘルプ減少剤は、寛容を生じるサイトカイン放出の阻止のレベルを与えるだけ十分な投与量で投与しなければならない。ヘルプ減少剤は、サイトカイン（例えばＩＬ−２）放出を促進する処理なしで投与すべきである。推定の薬剤（ヘルプ減少剤）を、例えば、その推定の薬剤をＴ細胞と接触させ、処理されたＴ細胞のサイトカイン（例えば、ＩＬ−２）を放出する能力を測定することによって、イン・ビトロ又はイン・ビボ試験によって予備スクリーニングすることができる。サイトカイン放出の阻止は、その推定の薬剤のヘルプ減少剤としての効力を示している。かかる予備スクリーニングした推定の薬剤を、次いで、更に、腎臓移植アッセイにおいて試験することができる。腎臓移植アッセイにおいて、推定のヘルプ減少剤を、効力について、その推定の薬剤をレシピエントのサルに投与し、次いで、クラスＩＩ抗原が一致し且つクラスＩ及びマイナー抗原がミスマッチのドナーサルからの腎臓をそのレシピエントに移植することにより試験する。ドナーの腎臓に対する寛容は、その推定の薬剤が、試験した投与量において、ヘルプ減少剤であることを示す。「ヘルプ減少剤の短期コース」は、ここで用いる場合、処理の一時的な非長期的コースを意味する。この処理は、移植片の移植の時点の前又はその時点の近辺で開始すべきである。或は、この処理は、ドナー抗原に対するレシピエントの最初の露出の時点の前又はその時点の近辺に開始することができる。最適には、この処理を、レシピエント種の成熟Ｔ細胞が、抗原により最初に刺激された後にその抗原の拒絶を開始するのに必要な期間にほぼ等しいかそれより短い時間にわたって続ける。この処理の継続期間は、成熟Ｔ細胞が、抗原により最初に刺激された後にその抗原の拒絶を開始するのに必要な期間の２、３、４、５倍若しくは１０倍の時間まで延長することができる。この継続期間は、通常、少なくとも、レシピエント種の成熟Ｔ細胞が、抗原により最初に刺激された後にその抗原の拒絶を開始するのに必要な時間に等しい。ブタ及びサルにおいて、約１２日の処理は十分である。ブタにおけるシクロスポリンＡ（１０ｍｇ／ｋｇ）を用いる実験は、６日が十分でないことを示している。サルにおける他の実験は、シクロスポリンＡ処理の８、９又は１０日目に投与したＩＬ−２が、移植した組織の拒絶を生じることを示している。従って、８、９又は１０日は、恐らく、ブタにおいては十分でない。サルにおいては、１０ｍｇ／ｋｇシクロスポリンの投与量（約５００〜１，０００ｎｇ／ｍｌの血中レベル）は、クラスＩＩ抗原が一致し且つクラスＩ及びマイナー抗原がミスマッチの腎臓に対する寛容を誘導するのに十分である。同じ血中レベル（５００〜１，０００ｎｇ／ｍｌ）は、ブタにおいて寛容を誘導するのに十分である。５ｍｇ／ｋｇの長期投与は、（長期間の免疫抑制により）拒絶を阻止するが、寛容を生じない。ここに記載のように、トランスジェニックドナー組織は、細胞培養又はトランスジェニックブタから得ることができる。このトランスジェニックブタは、少なくとも移植される組織において、組換えヒト遺伝子を発現すべきである（又は、発現可能であるべきである）。本発明の実施は、別途指示しない限り、当業者の範囲内にある技術を用いる。かかる技術は、文献中に十分に説明されている。例えば、Molecular Cloning A Laboratory Manual,第二版、Sambrook，Fritsch 及びManiatis編(Cold Spring Harbor Laboratory Press:1989); DNA Cloning，第Ｉ及びＩＩ巻(D.N.Glover編1 985); Oligonucleotide Synthesis(M.J.Gait編、1984); Mullis等、米国特許第４，６８３，１９５号；Nucleic Acid Hybridization(B.D.Hames & S.J.Higgins 編、1984); Culture Of Animal Cells(R.I.Freshney，Alan R.Liss，Inc.,1987) ; Immobilized Cells And Enzymes(IRL Press,1986); B.Perbal，A Practical G uide To Molecular Cloning(1984);学術論文、Methods In Enzymology(Academic Press，Inc.,N.Y.); Gene Transfer Vectors For Mammalian Cells(J.H.Miller 及びM.P.Calos編、1987、Cold Spring Harbor Laboratory); Methods In Enzymo logy，154 及び155巻(Wu等編)、Immuno-chemical Methods In Cell And Molecul ar Biology(Mayer及びWalker編、Academic Press，London，1987); Handbook Of Experimental Immunology，I-IV巻(D.M.Weir及びC.C.Blackwell編、1986); Man ipulating the Mouse Embryo，(Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold S pring Harbor，N.Y.,1986)を参照されたい。ここに記載のものと類似又は同等の方法及び材料を、本発明の実施又は試験において用いることができるにもかかわらず、好適な方法及び材料は、後述の通りである。ここで言及されるすべての刊行物を、参考として、本明細書中に援用する。更に、これらの材料、方法及び例は、単に説明するためのものであり、制限することを意図したものではない。キラー抑制性レセプターナチュラルキラー（ＮＫ）細胞媒介の免疫（細胞障害性及びサイトカイン分泌を含む）は、幾らかの自己の及び同種異系細胞に対する生物学的抵抗において、主要な役割を演じる。標的細胞認識の一般的機構は、細胞表面上の自己ＭＨＣクラスＩ−ペプチド複合体の欠如又は修飾であるらしく、それは、ウイルス感染細胞、腫瘍細胞及び主要組織適合性ＭＨＣ不適合な移植細胞の排除へと導くことができる。ＮＫ細胞上に発現されるＩｇスーパーファミリーのＫＩＲのメンバーが、最近、発見されてクローン化された。ＫＩＲは、多型ＭＨＣクラスＩ分子に特異的であり、リガンド認識の際に、殆どの系におけるＮＫ細胞媒介の細胞障害性からの標的細胞の防護へと導く負のシグナルを生成する。ＮＫ細胞自已免疫即ち正常自已細胞の溶解を予防するために、個体の各所定ＮＫ細胞は、少なくともＫＩＲ認識において、少なくとも１つの自己ＨＬＡ−Ａ、Ｂ、Ｃ又はＧ対立遺伝子を発現する。ＮＫ細胞媒介の細胞障害性は、異種移植片に対する細胞性免疫応答において重要な役割を演じるらしいが、ＮＫ細胞は、血管新生した同種移植片の拒絶において主要な関連があるようには見えない。イン・ビトロでの異種個体のヒト抗ブタ細胞障害性は、活性化ＮＫ細胞からの重要な貢献を含む。異種個体のヒトＮＫ細胞媒介の細胞障害性に対するブタ細胞の感受性については、少なくとも２つの可能な説明がある。第１に、ブタＭＨＣクラスＩ分子は、ヒトＭＨＣクラスＩ分子と対照的に、ヒトＮＫ細胞により発現されたＫＩＲの引き金を引くことができない（かかるレセプターの関与に決定的に重要なアミノ酸配列における差異のため）。或は、ブタ細胞は、ＮＫＲ−Ｐ１又は他の関連する活性化ＮＫ細胞レセプターを介してＮＫ細胞媒介の溶解を活性化するオリゴ糖を含む表面分子を発現することができる。トランスジェニックヒトクラスＩ遺伝子は、ブタ細胞をヒトＮＫ媒介の溶解から防護する不滅化ブタ骨髄由来の内皮細胞系統（２Ａ２）に、３つの異なるヒトＭＨＣクラスＩ構築物をトランスフェクトした。これらの３つの構築物は、それぞれ、ＨＬＡ−Ａ２．１、ＨＬＡ−Ｂ２７及びＨＬＡ−Ｃｗ３ゲノムＤＮＡを含有した。２Ａ２トランスフェクタント上のヒトＭＨＣクラスＩ分子の表面発現は、Ｗ６／３２（単型抗ヒトＭＨＣクラスＩ抗体）での染色により示された。２Ａ２トランスフェクタントのヒトＮＫ細胞に対する感受性を分析するために、ＮＫクローンを生成し、それらの異種個体致死（killing）特異性について試験した。ＨＬＡ −Ｃｗ３陽性のブタ２Ａ２細胞（未トランスフェクト２Ａ２、２Ａ２ＨＬＡ−Ｂ２７又は２Ａ２ＨＬＡ−Ａ２．１陽性細胞でない）は、ＨＬＡ−Ｃｗ３特異的なＫＩＲｐ．５８を発現しているグループ２（ＧＬ１８３⁺、ＥＢ６^-）ＮＫクローンにより媒介される溶解から防護された。対照的に、２Ａ２ＨＬＡ−Ｃｗ３陽性細胞は、グループ１（ＧＬ１８３^-、ＥＢ６⁺）ＮＫクローンにより容易に溶解された。これらのデータを、下記に、一層詳細に検討する。ブタ内皮細胞（ＥＣ）系統２Ａ２上でのＨＬＡ−Ｃｗ３発現は、ヒトＮＫ細胞媒介の溶解に対する特異的防護を与える：ヒトＮＫクローンを、標準⁵¹Ｃｒ放出細胞障害性アッセイにおいてエフェクター細胞として試験した。標的細胞（５，０００）を、三連で、丸底９６ウェルプレート中のエフェクターＮＫ細胞の連続２倍希釈物に加えた（エフェクター対標的（Ｅ：Ｔ）比２０：１で開始した）。特異的細胞障害性のパーセンテージを測定して、ｙ軸上に示した（図１参照）。ＨＬＡ−Ａ２（２Ａ２／Ａ２＋）、ＨＬＡ−Ｂ２７（２Ａ２／Ｂ２７＋）又はＨＬＡ−Ｃｗ３（２Ａ２／Ｃｗ３＋）分子を発現しているＨＬＡクラスＩ遺伝子でトランスフェクトされた２Ａ２細胞に対するヒトＮＫクローンの細胞障害活性を、未トランスフェクト２Ａ２（２ａ２ｕｔ、塗りつぶした菱形）ブタ内皮細胞系統並びにＮＫ感受性Ｋ５６２赤白血病細胞系統と比較した（図１Ａ、1Ｂ）。ブタ標的細胞（２Ａ２／Ｃｗ３）上でのＨＬＡ−Ｃｗ３の発現は、ＤＣ３Ｂ５及びＤＣ３Ｃ４について示したように、グループ２ＮＫ細胞に対する特異的防護を与えた（それらは、防護がなければ、図１Ｂ、１Ｃのように、トランスフェクトされた２Ａ２／Ａ２、２Ａ２／Ｂ２７並びに２Ａ２／ｕｔ細胞系統を効果的に溶解させることができる）。この特異的溶解は、２０：１のエフェクター対標的比でさえ、１０％未満に減少した。対照的に、グループ１ＮＫクローン（ここでは、ＤＣ１Ｂ２により表示）は、ＨＬＡＣｗ３の発現によって影響されず、２Ａ２／Ｃｗ３細胞が、事実、依然として溶解に感受性であることを示した（図１Ａ）。これらの結果は、ブタ由来の内皮標的細胞上でのＣｗ３の発現の特異的ヒトＮＫ細胞に対する抑制活性を明確に示している。細胞：ＳＶ４０トランスフォーメーションにより不滅化した骨髄由来の内皮細胞（ＥＣ）系統２Ａ２を、標準的方法により得た。ＥＣ特性は、９５％を超えることが、形態学による評価及び内皮細胞特異的マーカー（dil-LDL，マサチューセッツ、Sto ughton在、Biomedical Technologies，Inc.）を用いるＦＡＣＳ分析により確立された。ＮＫ感受性Ｋ５６２ヒト赤白血病細胞系統は、最初、ＡＴＣＣから得た。ＨＬＡ遺伝子トランスフェクション：ＨＬＡ−Ａ２．１の完全長のゲノムＤＮＡ（Koller等、1985、J.Immunol.134:2727-2733）（参考として、本明細書中に援用する）を、ｐＵＣ９ベクターに挿入し、ＨＬＡ−Ｂ２７の完全長のゲノムＤＮＡ（Weiss等、1985、Immunobiology 170:367-380）（参考として、本明細書中に援用する）をｐＵＣ１３ベクターに挿入し、そしてＨＬＡ−Ｃｗ３の完全長のゲノムＤＮＡ（Sodoyer等、1984、EMBO J.3:879-885）（参考として、本明細書中に援用する）を、ｐＢＲ３２８ベクターに挿入した。ＨＬＡクラスＩ構築物の何れかを、標準的リン酸カルシウムトランスフェクションプロトコールを用いて、ｐＷＬＮｅｏ（カリフォルニア、La Jolla在、Stratagene）ベクター中にコードされたネオマイシン耐性遺伝子と、２Ａ２ブタＥＣ中に、同時トランスフェクトした（１：２０の比）。トランスフェクションの１４時間後に、細胞を、氷冷ジメチルスルホキシド（ニュージャージー、Fair Lawn在、Fisher Scientific）で５分間処理し、その後、２回洗った。これらの細胞の生育再開後まもなくして（７２〜９６時間）、それらを、少なくとも２週間、０．２ｍｇ／ｍｌの活性Ｇ４１８（Gibc o-BRL）を含む培地にて選択してから、ヒトＨＬＡクラスＩの発現について、細胞表面染色及びフローサイトメトリーにより試験した。ヒトＣＤ３−Ｃｄ５６／１６＋ＮＫ細胞クローニング：末梢血液単核細胞（ＰＢＭＣ）を、健康なドナーから、フィコール−ハイパーク密度勾配遠心分離により得た。全血液ドナーを、ＨＬＡ−Ａ、Ｂ、Ｃについて、標準の国立衛生研究所のリンパ球障害性技術を用いて分類した。精製したヒトＮＫ細胞を、前に記載されたように、ＭＡＣＳシステム（カリフォルニア、Auburn在、Miltenyi Biotec）を用いて陰性磁気ビーズ選択により単離した。ＮＫクローンを、確立されたプロトコールに若干の改変を加えて、限界希釈クローニングにより生成した。簡単には、精製したＮＫ細胞を、９６ウェルＵ底プレート（マサチューセッツ、Cambridge在、Costar）にて、それぞれ、１細胞／ウェル、３細胞／ウェル及び１０細胞／ウェルの濃度に希釈し、照射（２５００ラド）した自家又は同種異系のフィーダーＰＢＭＣ（１０⁵／ウェル）の存在下で、３７℃、６％ＣＯ₂にてインキュベートした。培養培地（ＣＭ）は、１００Ｕ／ｍｌの組換えヒト（ｒｈ）ＩＬ−２（カリフォルニア、Pal o Alto在、Chiron）、１００Ｕ／ｍｌのペニシリン／１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシン（Gibco-BRL）、１００μｇのＬ−グルタミン（Gibco-BRL）、１０ｍモル／ｌのＨＥＰＥＳ（バージニア、Herndon在、Mediatech）、１ｍＭピルビン酸ナトリウム（メリーランド、Walkersville在、Bio Whittaker）、非必須アミノ酸（Bio Whittaker）、５％自家又は同種異系の熱不活化ヒト血漿、及び５％白血球調製培地（Ritz）を含有するＡＩＭ−Ｖ（ニューヨーク、Grand Island在、Gibco-BRL ）であった。６日後に、新鮮なフィーダーＰＢＭＣ（１０⁵／ウェル）を加え、程なく生育が認められ、２５μｌのＣＭを一日おきに、１０００Ｕ／ｍｌのｒｈＩＬ−２を含む新鮮なＣＭと取り替えた。フローサイトメトリー分析及び抗体：未トランスフェクト（ｕｔ）ブタ２Ａ２ＥＣ及び２Ａ２ＨＬＡトランスフェクタント上でのヒト及びブタＭＨＣクラスＩ分子の表面発現を、Becton Dickinson FACScan（カリフォルニア、Sunnyvale）での、単型抗ヒトＭＨＣクラスＩｍＡｂＷ６／３２及び単型抗ブタＭＨＣクラスＩｍＡｂ２．２７．３Ａを用いる間接免疫蛍光により分析した。ヨウ化プロピジウムゲーティングを行なって、死細胞を除いた。ＨＬＡクラスＩ分子を発現している細胞（Ｗ６／３２⁺）を、FACS Star Plus（Becton Dickinson）での免疫ソーティングにより単離した。ＨＬＡクラスＩ発現は、繰返しフローサイトメトリー分析による評価で安定であった。ヒトＮＫクローンの表現型分析を、間接免疫表現型染色並びにＥＢ６とＧＬ１８３とのハイブリドーマ上清及びBoehringer Mannheim（インディアナ、Indianapolis ）より購入した第２のＦＩＴＣ−ヤギ−抗マウスを用いるフローサイトメトリーにより行なった。フルオロセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）又はフィコエリトリン（ＰＥ）の何れかと直接結合された次のｍＡｂを、二色分析用に用いた：ＰＥ−抗ＣＤ１６（Ｌｅｕ−１１ｃ）及びＰＥ−抗ＣＤ５６（Ｌｅｕ−１９）（Becton Dickinsonより購入）、イソ型マッチした対照用抗体及びＦＩＴＣ−抗ＣＤ３（ＵＣＨＴ１）（PharMingen（カリフォルニア、San Diego）より購入）。細胞障害性アッセイ：ヒトＮＫクローンを、エフェクター細胞として、前に記載された標準的⁵¹Ｃｒ放出細胞障害性アッセイにて試験した。Ｋ５６２細胞を、ＮＫ細胞媒介の細胞障害性についての対照として用いた。トリプシン処理（０．０５％トリプシン、０．５ｍモル／ｌＥＤＴＡ、Life Technology）の後に、２Ａ２ＨＬＡトランスフェクタントを洗い、２００μｉＮａ₂ ⁵¹ＣｒＯ₄（マサチューセッツ、Boston在、Du Pont）／１０×１０⁶細胞（０．５ｍｌＡＩＭ−Ｖ培地中）で、３７℃で、９０分間標識した。未トランスフェクト（ｕｔ）２Ａ２ＥＣ並びにトランスフェクション後にＨＬＡ発現を欠くソートした２Ａ２ＥＣを対照として用いた。３回の洗浄の後に、５×１０³の標的細胞を、丸底の９６ウェルプレートにて、エフェクター細胞の連続２倍希釈物の三連の試料に加えた（２０：１のエフェクター対標的（Ｅ：Ｔ）比にて開始）。ＫＩＲ特異性ＫＩＲは、多型ＭＨＣクラスＩ分子に特異的である。最良の結果のためには、ブタ組織は、レシピエントのＮＫ細胞からの防護を最大にするＨＬＡＡ、Ｂ、Ｃ又はＧ対立遺伝子を発現すべきである。下記のように、これは、幾つかの方法により、達成することができる。レシピエントのＨＬＡＣ遺伝子型は、標準的方法により、例えばＰＣＲ又はリンパ球障害性により測定することができ、レシピエント中に存在する１つ以上の対立遺伝子を発現するドナー動物を、移植用組織を提供するために用いることができる。ＮＫ細胞の２つ以上のクラスからの防護を与える１つ以上の対立遺伝子を発現する「ユニバーサル又はセミユニバーサルドナー」動物を用いることができる。ＮＫ細胞反応性は、２つの広いグループである、グループ１及びグループＩＩに分類される。ＨＬＡＣＣｗ２、Ｃｗ４、Ｃｗ５及びＣｗ６対立遺伝子は、グループ１に入る。ＨＬＡＣＣｗ１、Ｃｗ３、Ｃｗ７及びＣｗ８対立遺伝子は、グループ２に入る。グループ１対立遺伝子は、何れかのグループ１特異性を有するＮＫ細胞に対する防護を与える。グループ２対立遺伝子は、何れかのグループ２特異性を有するＮＫ細胞に対する防護を与える。グループ１対立遺伝子を発現する組織は、何れかのグループ１対立遺伝子を発現するＮＫ細胞に対する防護を与えるであろう。グループ２対立遺伝子を発現する組織は、何れかのグループ２対立遺伝子を発現するＮＫ細胞に対する防護を与えるであろう。グループ１及びグループ２対立遺伝子を発現するブタ組織は、広範な防護を与えるであろう。ＮＫ細胞の２つ以上のクラスからの防護を与えるキメラの、合成の、変異した或は改変された遺伝子を発現するユニバーサル又はセミユニバーサルドナー動物も、用いることができる。例えば、ＮＫ細胞の２つ以上のクラスに対する防護を与えるトランスジーン例えばキメラの又は変異したＨＬＡＣ遺伝子例えば７７位にセリンを有し且つ８０位にリジンを有するＨＬＡＣの対立遺伝子を用いてグループ１及びグループ２のＮＫ細胞の両者に対する防護を与えることができる。例えば、Biassoni，J.Exp.Med．Vol.182:605-609（参考として、本明細書中に援用する）を参照されたい。Moretta等、1996，Ann.Rev.Immunol.14:619-648 （参考として、本明細書中に援用する）も参照されたい（これは、本明細書の開示と共に、ＨＬＡＣ遺伝子中の決定的に重要な残基を変えるためのガイダンスを提供する）。ＨＬＡＣは、ＮＫ媒介の相互作用において最も重要であるように見えるが、ＨＬＡＡ及びＨＬＡＢも又、ＮＫ媒介の溶解において役割を演じ得る。マッチングは、これらの遺伝子では重要性が一層低い。Ｂ対立遺伝子は、すべて単一のＮＫ反応性グループに入る。Ａ対立遺伝子は、１つ若しくは高々２つのグループに入る。必要ならば、Ｃ遺伝子について記載されたのと同様のアプローチを、Ａ、Ｂ及びＧ遺伝子に用いることができる。組換えヒト遺伝子ヒトクラスＩ蛋白質をコードする核酸の本発明のブタ細胞への導入は、組換えヒト遺伝子が細胞又はその前駆細胞に導入されることを必要とする。理解されるであろうが、導入の様式及び生じるブタ細胞の所望のインテグレーション表現型（即ち、ベクターが細胞のゲノム中にインテグレートされるか又はエピソームのままでいるか）は、主題の組換えブタ細胞を生成するのに用いる発現ベクターの選択に影響を及ぼし得る。一般に、ヒトクラスＩをコードする核酸を含む発現ベクターを、適当な転写調節配列例えば組織特異的プロモーターをヒトクラスＩ蛋白質をコードする核酸例えばｃＤＮＡ又はゲノムＤＮＡと操作可能に結合することにより構築することができる。その上、組織特異的プロモーターを、異なるヒトクラスＩ蛋白質をコードする２つ以上のｃＤＮＡと結合することができる。使用する特異的プロモーターに依っては、プロモーター−ｃＤＮＡ構築物を改変して、イントロンスプライス部位及び／又はポリアデニル化シグナルを含むようにすることが望ましい。５’及び３’発現調節配列並びに組換えＤＮＡ（ゲノム又はｃＤＮＡ由来）に加えて、この発明のトランスジーンは、そのトランスジーンの転写されるが翻訳されない５’領域を中断する「組換え介在配列」も含むことができる。かかる介在配列（ＩＶＳ）は、当分野で公知である。かかる配列は、ここで用いる場合、「相同な組換え介在配列」であり、そのＩＶＳ中の５’及び３’ＲＮＡスプライスシグナルは、内因性遺伝子又は異質遺伝子からのＩＶＳ中に普通に見出されるものである。しかしながら、組換え介在配列は又、「ハイブリッド介在配列」をも包含する。かかるハイブリッド介在配列は、種々の起源に由来する介在配列からの５’ＲＮＡスプライスシグナル及び３’ＲＮＡスプライスシグナルを含む。この発明の幾つかの面において、かかるＩＶＳは、少なくとも１つの「許容性ＲＮＡスプライス配列」を含む。ここで用いる場合、許容性ＲＮＡスプライスシグナルは、細胞分化の間に再配置を受ける生殖系列ＤＮＡセグメントのレパートリー内に含まれるイントロン由来のＲＮＡスプライスシグナル、好ましくは３ ’ＲＮＡスプライスシグナルである。かかる遺伝子レパートリーの例には、免疫グロブリン及びＴ細胞抗原レセプターを含む免疫グロブリンスーパー遺伝子ファミリー並びに主要組織適合複合体（ＭＨＣ）遺伝子のレパートリー等が含まれる。特に好適な許容性スプライス配列は、免疫グロブリン（好ましくはＩｇＧクラス）レパートリーから得られるものであり、一層好ましくは、Ｉｇ重鎖及び軽鎖のＪ−Ｃセグメント再配置に関係する３’スプライスシグナル配列であり、最も好ましくは重鎖である。許容性ＲＮＡスプライスシグナルを含むハイブリッド介在配列は、好ましくは、組換えＤＮＡがｃＤＮＡ配列に対応するときに用いられる。前記に基づいて、好適なトランスジーンは、比較的多量の５’及び３’発現調節配列を含むことができるということは、明白である。更に、組換えＤＮＡは、好ましくは、数十〜数百キロベースの長さのゲノムクローンに由来する。ＤＮＡをクローニングし、操作する現在の技術に基づいては、トランスジーンの構築及びマイクロインジェクションは、約１００ｋｂ以下の長さを有する線型化ＤＮＡに実施が限られている。しかしながら、この発明のトランスジーン（特に、約５０ｋｂより長いもの）は、所望のトランスジーンの２つ以上の重複する断片を胚性標的細胞に導入することによって、容易に生成することができる。導入すると、それらの重複する断片は、相同組換えを受けて、標的細胞のゲノム中に完全に再構成されたトランスジーンのインテグレーションを生じる。一般に、かかる重複するトランスジーン断片が、それらの重複する領域内で１００％の相同性を有することは、好適である。しかしながら、一層低い配列相同性は、効率的な相同組換えが起きるならば、許容され得る。もし非相同性が、相同配列部分の間に存在するならば、その非相同性が相同配列部分中に広がらずに不連続な領域内に局在化される方が好ましい。１００％相同であれば、１４塩基対程に少なくても、哺乳動物細胞における相同組換えには十分である（Rubnitz等(1984)Mol .Cell.Biol．4:2253-2258）が、一層長い相同配列部分例えば５００ｂｐは、好適であり、一層好ましくは１，０００ｂｐ、準最好適は、２，０００ｂｐ、最も好ましくは、各相同配列部分が、２，０００ｂｐより長い。この発明の組換え核酸の操作にＹＡＣ及びＭＡＣを用いることも又、望ましいであろう。更なる具体例において、組換えクラスＩ蛋白質は、第１のヒトクラスＩ遺伝子及び第２のヒトクラスＩ遺伝子によりコードされる蛋白質を有するキメラペプチドであってよい。これは、２つ以上のＮＫレセプターへの結合に最適化されたハイブリッドのクラスＩ分子の利用を可能にする。融合遺伝子を作製するための技術は、周知である。本質的に、種々のポリペプチド配列をコードする様々なＤＮＡ断片の結合を、ライゲーション用の鈍端化した又は食い違わせた末端、適当な末端を与えるための制限酵素消化、粘着末端の充填（適宜）、望ましくない結合を回避するためのアルカリホスファターゼ処理及び酵素によるライゲーションを用いる慣用技術により行なうことができる。或は、遺伝子断片のＰＣＲ増幅を、２つの連続する遺伝子断片間で（例えば、ヒト遺伝子とブタ遺伝子の間で）相補的オーバーハングを生じさせるアンカープライマーを用いて行なうことができ、該断片を、続いて、アニールさせてキメラ遺伝子配列を生成することができる（例えば、Current Protocols in Molecular Bio logy,Ausubel等編、John Wiley & Sons: 1992を参照されたい）。第１のトランスジーンを発現するトランスジェニックブタを、第２のトランスジーンを発現するトランスジェニックブタと交雑させて、両方を発現するトランスジェニック動物を与えることができる（この技術の改変を用いて、第３の遺伝子及びそれ以後の遺伝子を加えることもできる）。従って、１つのトランスジーン又はアルファ若しくはベータ鎖の一方のみを発現するトランスジェニックブタを適当なトランスジェニック仲間と交雑させて、両鎖についてキメラである子孫を産出することができる。或は、ブタβ−２鎖と活性レセプター複合体を形成することができるならば、アルファ鎖だけが発現されることが必要である。ヒトクラスＩ遺伝子をコードする組換え核酸構築物は、増幅のために任意の適当なプラスミッド、バクテリオファージ又はウイルスベクターに挿入することができ、それにより、当分野で公知の方法例えばMolecular Cloning A Laboratory Mannual,第二版、Sambrook，Fritsch及びManiatis編(Cold Spring Harbor Labo ratory Press:1989)に記載されたもの等を用いて増殖させることができる。好適具体例において、真核細胞に適合した発現ベクター好ましくは脊椎動物細胞に適したものを用いる。真核細胞用発現ベクターは、当分野で周知であり、種々の商業的供給源から入手可能である。好適なブタ発現ベクターは、原核生物の配列（細菌中でのベクターの増殖を促進する）とブタ細胞中で機能性である１つ以上の真核生物転写ユニットの両方を含む。典型的には、かかるベクターは、所望の組換えＤＮＡ分子の挿入に便利な制限部位を与える。ｐｃＤＮＡＩ、ｐＳＶ２、ｐＳＶＫ、ｐＭＳＧ、ｐＳＶＬ、ｐＰＶＶ−１／ＰＭＬ２ｄ及びｐＴＤＴ（ＡＴＣＣＮｏ．３１２５５）由来のベクターは、ブタ細胞の転写に適した哺乳動物用発現ベクターの例である。これらのベクターの幾つかは、細菌性プラスミッド例えばｐＢＲ３２２からの配列を用いて改変して、原核細胞及び真核細胞の両方での複製及び薬剤耐性選択を促進する。或は、ウイルス例えばウシパピローマウイルス（ＢＰＶ緒１）又はエプスタイン−バールウイルス（ｐＨＥＢｏ、ｐＲＥＰ由来及びｐ２０５）の誘導体を、ブタ細胞における蛋白質の発現のために用いることができる。プラスミッドの調製及び宿主細胞のトランスフォーメーションにおいて用いられる種々の方法は、当分野において周知である。本発明において有用な他の発現システム並びに一般的組換え手順については、Molecular Cloning A Laboratory Mannual，第二版、Sambrook，Fritsch及びManiatis編(Cold Sprin g Harbor Laboratory Press:1989)を参照されたい。組換え核酸分子が宿主ゲノム中に取込まれるべきトランスジーンとしてブタの卵母細胞中に導入される状況においては、構築物を直線化することができ、余分なベクター配列は、好ましくは、例えば、組換え核酸分子を１種以上の制限エンドヌクレアーゼを用いて切断して、所望の転写調節配列及びヒト造血遺伝子をミニマムとして含む直線状核酸分子を生成することにより除去される。好ましくは、核酸分子（例えば、トランスジーン）は、約５，０００塩基対から約１００，０００塩基対の長さである。幾つかのトランスジェニックブタは、複数のトランスジーン（ゲノムの種々の部位に取込まれたトランスジーンのコピー）を有し得る。ゲノムへのトランスジーン取込みの部位は、トランスジーンの発現に強く影響を及ぼし；それ故、トランスジーン発現を、個別の制限酵素断片長多型パターンと関連付けることができる。更に、上記のように、２種のトランスジェニックブタ（それぞれ異なるクラスＩ蛋白質を発現）を交雑させて、両方のトランスジーン産物を発現する動物を生成することができる。同じ効果を、２つの別々のトランスジーンを同じ胚細胞中に導入することによって達成することができる。遺伝子工学処理したブタ細胞この発明のトランスジェニックブタ細胞は、当業者に公知の任意の方法によって生成することができる。トランスジーンを、細胞例えば幹細胞例えば培養幹細胞の植付け又は維持を促進するのに十分なレベル及び期間にわたってそれらの遺伝子の発現を与える任意の方法によって、それらの細胞中に導入することができる。これらの方法には、例えば、トランスフェクション、エレクトロポレーション、粒子銃ボンバードメント、及びウイルスベクター例えばレトロウイルスによるトランスダクションが含まれる。トランスジェニックブタ細胞は又、トランスジェニック動物から取り出すこともできる。トランスジーンのレトロウイルスによる導入組換えレトロウイルスは、好適な送達システムである。それらは、過去数年間にわたって遺伝子トランスファーのためのビヒクルとして大いに開発されてきた（例えば、Eglitis等、1988，Adv.Exp.Med.Biol.241:19を参照されたい）。最も直接的なレトロウイルスベクター構築物は、ウイルスの構造遺伝子が単一の遺伝子で置き変えられ、それが次いでウイルスの長い末端反復（ＬＴＲ）に含まれる調節エレメントの制御下で転写されるものである。モロニーマウス白血病ウイルス（ＭｏＭｕＬＶ）を含む単一の遺伝子ベクター主鎖の変種が用いられてきた。選択可能マーカーの遺伝子及び関心ある第２の遺伝子等の種々の遺伝子の、内部プロモーターの制御下の、複数の挿入を可能にするレトロウイルスベクターを、この型の主鎖から導くことができる。例えば、Gilboa，1988，Adv.Exp.Med.Biol .241:29を参照されたい。蛋白質産物の発現のためのベクターの構築のエレメントは、当業者には公知である。レトロウイルスベクターからの最も効率的な発現は、ＳＶ４０のプロモーター又はＬＴＲのプロモーター等の「強い」プロモーターを用いて転写を制御する場合に見られる（Chang等、1989，Int.J.Cell Cloning 7:264に概説されている）。これらのプロモーターは、構成的であり、一般に、組織特異的発現を与えない。他の適当なプロモーターは、上で論じてある。効率的なパッケージング細胞系統の利用は、生成された組換えビリオンの感染の効率及びスペクトルの両方を増大させることができる（Miller,1990，Human G ene Therapy 1:5を参照されたい）。マウスレトロウイルスベクターは、マウス胚への遺伝子の効率的トランスファー（例えば、Wagner等、1985,EMBO J.4:663; Griedley等、1987 Trends Genet.3:162参照）及び造血幹細胞への遺伝子の効率的トランスファー（例えば、Lemischka等、1986,Cell 45:917-927; Dick等、198 6,Trends in Genetics 2:165-170参照）に有用である。以前に可能であったものより遥かに高いウイルス力価を達成することを可能にするレトロウイルス技術における最近の改良には、環境栄養性及び両栄養性パッケージング細胞系統間での連続的トランスファー（いわゆる、「ピンポン」法）による増幅が含まれる（例えば、Kozak等、1990,J.Virol.64:3500-3508;Bodine 等、1989，Prog.Clin.Biol.Res.319:589-600を参照されたい）。トランスダクション効率は、感染骨髄のレシピエントへの導入前の予備選択により、選択可能な遺伝子を高レベルで発現する骨髄細胞を豊富にして増大させることができる（例えば、Dick等、1985，Cell 42:71-79; Keller等、1985，Natur e 318:149-154を参照されたい）。更に、ウイルス力価を増大させるための最近の技術は、ウイルス産生細胞系統との直接のインキュベーションではなくてウイルス含有上清を用いて効率的なトランスダクションを達成することを可能にする（例えば、Bodine等、1989，Prog.Clin.Biol.Res.319:589-600を参照されたい）。レトロウイルスの宿主ゲノムへのインテグレートには細胞性ＤＮＡの複製が必要であるので、例えば、イン・ビトロでの成長因子処理により標的細胞に分裂を誘導することにより（例えば、Lemischka等、1986，Cell 45:917-927参照）活性に循環している標的幹細胞の頻度を増大させること｛ＩＬ−３とＩＬ−６の組合せは、明らかに最も効きめがある（例えば、Bodine等、1989，Proc.Natl.Acad.S ci.86:8897-8901参照）｝、又はレシピエントを骨髄採取前に（例えば、Lemisch ka等、1986，Cell 45:917-927; Chang等、1989，Int.J.Cell Cloning 7:264280 参照）５−フルオロウラシルにさらすこと（例えば、Mori等、1984，Jpn.J.Clin .Oncol.14補遺 1:457-463参照）は望ましい。サイトカイン又は他の成長因子をレトロウイルストランスフォーメーションに含むことは、一層効率的な標的細胞のトランスフォーメーションへと導く。トランスジェニックブタの作成この発明の他の面により、ヒト患者におけるＮＫ細胞媒介の拒絶を最小にする１つ以上の組換えのヒトＨＬＡクラスＩ蛋白質を発現する移植可能なブタ細胞例えば造血幹細胞例えばブタ骨髄細胞、又は他の組織が提供される。特に、本発明は、ヒトクラスＩ遺伝子を発現する組換えブタ細胞を含む。好適具体例において、ヒトクラスＩ遺伝子は、ヒト遺伝子の直前に位置され且つブタ細胞内でのそのヒト遺伝子の発現を調節する組織特異的プロモーター例えば造血特異的プロモーターを含む組換え核酸分子の一部である。組換えヒトクラスＩ遺伝子を含む組織を、組換え核酸分子を組織例えば骨髄細胞中に、公知のトランスフォーメーション技術を用いて導入することにより調製することができる。これらのトランスフォーメーション技術には、マーカー遺伝子又は薬剤耐性遺伝子の何れかを有するレトロウイルスによるトランスフェクション及び感染が含まれる。例えば、Current Protocols in Molecular Biology，Ausubel等編、John Wile y and Sons，ニューヨーク（1987）及びFriedmann（1989）Science 244:1275-1281を参照されたい。本発明の組換え核酸分子を含む組織を、次いで、再構成技術を用いて、動物中に再導入することができる（例えば、Dick等(1985)Cell 42:71を参照されたい）。本発明は又、組換えヒトクラスＩ遺伝子を細胞中で発現しているブタ好ましくはミニブタをも含む。上記の組換え構築物を、当分野で公知の任意の方法（制限はしないが、μインジェクション、胚性幹（ＥＳ）細胞操作、エレクトロポレーション、細胞銃、トランスフェクション、トランスダクション、レトロウイルス感染等を含む）によってトランスジェニックブタを生成するために利用することができる。本発明のトランスジェニックブタは、トランスジーンをブタの生殖細胞系列、特に骨髄細胞例えば造血細胞のゲノム中に導入することにより生成することができる。種々の発生ステージの胚性標的細胞を用いて、ヒトトランスジーン構築物を導入することができる。当分野で一般に理解されているように、トランスジーンを、胚性標的細胞の発生ステージに依って、異なる方法を用いて導入する。ブタ細胞をトランスジェニック的に改変する一つの技術は、組換え核酸分子を、発生する動物の細胞中に１コピー以上の組換え核酸分子が保持されるように、受精卵の雄性前核中に、マイクロインジェクションにより導入することである。関心のある組換え核酸分子を、細菌中での複製に利用される配列の大部分を取り除いた直線形態で単離する。直線化及び余分なベクター配列の除去は、トランスジェニック哺乳動物の生成における一層増大した効率を生じる。例えば、Brinster等（1985）PNAS 82:4438-4442を参照されたい。一般に、接合子は、マイクロインジェクションの最適の標的である。ブタの場合、雄性前核は、標準的マイクロインジェクション技術によるＤＮＡ溶液の再現可能な注入を可能にするだけの大きさに達する。その上、接合子の遺伝子トランスファーの標的としての利用は、殆どの場合に注入されたＤＮＡが最初の卵割前に宿主ゲノム中に取込まれるという主要な有利さを有する。通常、注入された卵から発生した動物の４０％までが、それらの組織中に、少なくとも１コピーの組換え核酸分子を含有する。これらのトランスジェニック動物は、一般に、その遺伝子を、生殖細胞系列を介して次の世代に伝える。トランスジェニック的に操作した胚の子孫を、その構築物の存在について、組織切片のサザーンブロット分析により試験することができる。典型的には、尾の小部分をこの目的のために利用する。組換え核酸分子のトランスジェニック胚ゲノム中への安定なインテグレーションは、その組換え核酸分子を有する永久的トランスジェニック哺乳動物系統の樹立を可能にする。本発明の組換え核酸分子を含む動物を生成する別法には、受精卵、胚由来の幹細胞、分化全能性胚性カルシノーマ（ＥＣ）細胞又は初期卵割胚の、組換え核酸分子を含むウイルス発現ベクターでの感染が含まれる。（例えば、Palmiter等、 (1986)Ann.Rev.Genet.20:465-499及びCapecchi(1989)Science 244:1288-1292を参照されたい。）レトロウイルス感染も又、ブタにトランスジーンを導入するために利用することができる。発生中の胚を、イン・ビトロで、胚盤胞ステージまで培養することができる。この期間中、卵割球を、レトロウイルス感染の標的とすることができる（Jaenich（1976）PNAS 73:1260-1264）。卵割球の効率的な感染は、酵素処理によって透明帯を除去することにより得ることができる（Hogan等（1986）Manip ulating the Mouse Embryo，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spri ng Harbor，ニューヨーク中）。トランスジーンを導入するために利用されるウイルスベクターシステムは、典型的には、そのトランスジーンを有する複製欠損のレトロウイルスである（Jahner等（1985）PNAS 82:6927-6931; Van der Putten等（1 985）PNAS 82:6148-6152）。トランスフェクションを、卵割球をウイルス産生細胞の単層上で培養することにより得ることができる（Van der Putten前出; Stew art等（1987）EMBO J.6:383-388）。或は、感染を、もっと遅いステージにおいて行なうことができる。ウイルス又はウイルス産生細胞を、卵割腔内に注入することができる（Jahner等（1982）Nature 298:623-628）。創出動物（founder）の大部分は、取り込みが典型的にはトランスジェニックブタを形成した細胞の一つのサブセットでのみ生じるので、トランスジーンについてモザイクである。更に、この創出動物は、ゲノムの種々の位置におけるトランスジーンの種々のレトロウイルス挿入を含むことができる（これらは、一般に、子孫において分離する）。更に、効率は低いが、妊娠中期の胚の子宮内レトロウイルス感染により、トランスジーンを生殖細胞系列に導入することも可能である（Jahner等（1982）前出）。トランスジェニックブタの構築において有用であり得る第３のアプローチは、胚性幹細胞（ＥＳ）中へのトランスジーン導入を標的とする。ＥＳ細胞は、イン・ビトロ培養された移植前の胚から得られ、胚と融合される（Evans等(1981)Nat ure 292:154-156; Bradley等（1984）Nature 309:255-258; Gossler等（1986）P NAS 83:9065-9069;及びRobertson等（1986）Nature 322:445-448）。トランスジーンは、ＤＮＡトランスフェクション又はレトロウイルス媒介のトランスダクションによって効率的にＥＳ細胞に導入することができる。かかるトランスフォームされたＥＳ細胞を、その後、ブタからの胚盤胞と合わせることができる。これらのＥＳ細胞を用いて、その後、胚にコロニー形成して、生じるキメラブタの生殖細胞系列に寄与することができる。総説としては、Jaenisch（1988）Science 240:1468-1474を参照されたい。受精卵母細胞ステージにおける組換え遺伝子の導入は、その遺伝子配列が、トランスジェニック「創出」ブタのすべての生殖細胞及び体細胞中に存在することを確実にする。ここで用いる場合、創出動物（「Ｆ」と略記）は、１細胞胚ステージに組換え遺伝子を導入されたブタを意味する。トランスジェニック創出動物の生殖細胞中の組換え遺伝子配列の存在は、更に、創出動物の子孫の約半分がそれらのすべての生殖細胞及び体細胞中に活性な組換え遺伝子配列を有するであろうことを意味する。もっと遅い胚ステージにおける組換え遺伝子配列の導入は、創出動物の幾つかの体細胞におけるその遺伝子の不在を生じ得るが、その遺伝子を受け継ぐかかる動物の子孫は、それらのすべての生殖細胞及び体細胞中に活性な組換え遺伝子を有するであろう。ブタ卵母細胞のマイクロインジェクション好適具体例において、本発明のトランスジェニックブタを、下記により生成する：ｉ）組換え核酸分子を、ブタ受精卵にマイクロインジェクションにより導入して、遺伝的に改変したブタ卵を生成し； ii）遺伝的に改変したブタ卵を宿主雌ブタに移植し； iii）その宿主雌を該ブタの胎児の妊娠期間と実質的に等しい期間維持し； iv）この遺伝的に改変した哺乳動物卵から発生した少なくとも１つのブタ細胞（ヒトクラスＩ遺伝子を発現する）を有するトランスジェニックブタを収穫する。一般に、トランスジェニック動物の生成におけるマイクロインジェクションプロトコールの利用は、典型的には、次の４つの主要なフェーズに分けられる：（ａ）それらの動物の準備；（ｂ）１細胞又は２細胞胚の回収及びイン・ビトロでの維持；（ｃ）それらの胚のマイクロインジェクション及び（ｄ）胚のレシピエント雌への再移植。トランスジェニックの家畜（特に、ブタ）を生成するために用いられるこれらの方法は、トランスジェニックマウスを生成するために用いられるものと原理的には異ならない。例えば、Gordon等(1983)Methods in Enzymol ogy 101:411及びGordon等(1980)PNAS 77:7380（一般に、トランスジェニックマウスに関する）とHammer等(1985)Nature 315:680，Hammer等(1986)J Anim Sci 6 3:269-278，Wall等(1985)Biol Reprod.32:645-651，Pursel等(1989)Science 244 :1281-1288，Vize等(1988)J Cell Science 90:295-300，Muller等(1992)Gene 12 1:263-270及びVelander等(1992)PNAS 89:12003-12007（これらの各々は、トランスジェニックブタを生成するための技術を教示している）とを比較されたい。ＰＣＴ公開ＷＯ９０／０３４３２及びＰＣＴ公開ＷＯ９２／２２６４６及びそれらにおいて引用されている文献も参照されたい。準備のフェーズの１ステップは、少なくともドナー雌の発情周期を同調させること及び交配前にドナー雌の過剰排卵を誘発することを含む。過剰排卵は、典型的には、発情周期の適当なステージにおいて薬物を投与して濾胞の発生を刺激し、その後、薬物で処理して発情を同調させ、排卵を開始させることを含む。下記の実施例に記載のように、典型的には、妊娠雌ウマ血清を用いて、瀘胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）を真似て（ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）と組合せて用いる）黄体形成ホルモン（ＬＨ）を真似る。ブタにおける過剰排卵の効果的な誘導は、周知のように、雌の年齢及び体重並びにゴナドトロピン投与の量及びタイミングを含む幾つかの変数に依存している。例えば、ブタの過剰排卵を記載しているWall等(1985)Biol.Reprod.32:645を参照されたい。過剰排卵は、多数の健康な胚が入手される見込みを増し、更には、実務者が実験のタイミングを制御することを可能にする。交配後、過剰排卵した雌からの１細胞又は２細胞の受精卵を、マイクロインジェクション用に採取する。ブタから卵を集めるのに有用な種々のプロトコールが公知である。例えば、一つのアプローチにおいて、受精した過剰排卵した雌の卵管を外科的に取り出して緩衝溶液／培養培地中で単離することができ、受精卵はそれらの単離した卵管組織から発現され得る。Gordon等(1980)PNAS 77:7380;及びGordon等(1983)Methods in Enzymology 101:411を参照されたい。或は、卵管にカニューレを挿入して、受精卵を、緩衝溶液／培養培地でフラッシュすることにより麻酔した動物からその動物を犠牲にすることなく外科的に集めることができる。Hammer等(1985)Nature 315:600を参照されたい。過剰排卵した雌の交配後の胚の採取のタイミングは、受精プロセス及び前核が十分大きくなるのに要する時間に依存し得る。この待ち時間は、例えば、ブタの一層大きい品種については、最大で４８時間に及び得る。マイクロインジェクションに適した受精卵例えば前核を含む１細胞卵又は２細胞胚は、解剖顕微鏡下で容易に同定することができる。単離したブタ胚のマイクロインジェクションに必要な器具及び試薬は、マウスについて用いられるものと同様である。例えば、Gordon等(1983)Methods in Enz ymology 101:411;及びGordon等(1980)PNAS 77:7380（胚のマイクロインジェクションのための器具及び試薬を記載している）を参照されたい。簡単には、受精卵を１ｍｍのガラス管で作成した卵ホルダーで位置決めするが、該ホルダーはマイクロマニピュレーターに取り付けられ、それは更に適宜微分干渉コントラスト光学器械に取り付けられた解剖顕微鏡と整合的に作用する。光学的に密な細胞質物質のために前核の可視化が困難な場合（一般に、ブタ胚の場合）には、胚を、その生存力を危うくすることなく遠心分離することができる。Wall等(1985)Biol.R eprod.32:645。遠心分離は、この方法において、通常、必要となるであろう。本発明の組換え核酸分子は、原核生物の配列並びに不必要な隣接配列を除去することを目的として、少なくとも１種の制限エンドヌクレアーゼにより組換え核酸分子を直線化することにより、典型的には、直線化形態で与えられる。更に、組織特異的プロモーター及びヒトクラスＩ遺伝子を含む組換え核酸分子を、１種以上の制限エンドヌクレアーゼを用いて、ベクター配列から単離することができる。組換え核酸分子を操作し、直線化する技術は、周知であり、Mole cular Cloning: A Laboratory Manual ，第二版、Maniatis等編、Cold Spring Ha rbor，ニューヨーク(1989)に記載された技術を含む。直線化した組換え核酸分子を、周知の技術を用いて、ブタ卵にマイクロインジェクションにより導入して、遺伝的に改変された哺乳動物卵を生成することができる。典型的には、直線化した核酸分子を、Gordon等(1980)PNAS 77:7389-7384 により記載されたように、直接、マイクロインジェクションにより受精卵の前核に導入する。これは、生存胚の有意の集団における組換え核酸分子の安定な染色体インテグレーションへと導く。例えば、Brinster等(1985)PNAS 82:4438-4442 及びHammer等(1985)Nature 315:600-603を参照されたい。卵ホルダーと同様に、インジェクションに用いるマイクロニードルも又、ガラス管を引いて作ることができる。マイクロニードルの先端は、毛細管作用によりプラスミッド懸濁液で満たすことができる。次いで、顕微鏡での可視化により、卵ホルダーで保持した細胞の前核に、マイクロニードルを挿入し、プラスミッド懸濁液をその前核に注入する。注入が成功すれば、一般に、前核が顕著に膨張する。次いで、マイクロニードルを引き抜き、マイクロインジェクションを生き抜いた細胞（例えば、溶解してないもの）を、続いて、宿主雌への移植に用いる。この遺伝的に改変した哺乳動物胚を、次いで、レシピエントの卵管又は子宮角に移す。マイクロインジェクションした胚を、移植ピペット中に集め、そのピペットをレシピエント雌の外科的に露出させた卵管に挿入して、それらのマイクロインジェクションした卵を卵管中に排出する。移植ピペットを引き抜いた後、すべての外科的切開を閉じ、胚をその養育母親中で妊娠を継続させる。例えば、Go rdon等(1983)Methods in Enzymology 101:411; Gordon等(1980)PNAS 77:7390;Ha mmer等(1985)Nature 315:600;及びWall等(1985)Biol.Reprod.32:645を参照されたい。移植された遺伝的に改変した哺乳動物卵を含む宿主の雌の哺乳動物を、その遺伝的に改変した哺乳動物卵から発生し、本発明の組換え核酸分子を発現する少なくとも１つの細胞例えば骨髄細胞例えば造血細胞を有するトランスジェニック哺乳動物を誕生させるのに十分な期間維持する。２〜４週齢（生後）に、仔ブタから尾の切片を取り、プロテイナーゼＫで消化する。これらの試料からのＤＮＡをフェノール−クロロホルム抽出し、次いで、種々の制限酵素で消化する。このＤＮＡ消化物を、トリス−ホウ酸上で電気泳動し、ニトロセルロース上にブロットして、ランダムヘキサマーの伸長により標識した関心のある組換えｃＤＮＡのコード領域の少なくとも一部分よりなるプローブとハイブリダイズさせる。厳しい条件下で、このプローブは、内因性のブタ遺伝子とハイブリダイズせず、トランスジェニックブタの同定を可能にする。この発明の好適な特定の具体例により、実施例１に示すように、これらの方法によってトランスジェニックブタを生成することができる。実施例１ＭＨＣクラスＩ蛋白質をコードするヒトの核酸を発現するトランスジェニックブタの生成性的に成熟した若い雌ブタ（＞７月齢）の発情を、１２〜１４日間、活性プロゲストゲン（アリルトレンボロン、ＡＴ：１５ｍｇ／若雌ブタ／日）を経口で与えることにより同期させる。ＡＴ給餌の最終日に、すべての若雌ブタに、プロスタグランジンＦ_2a（Lutalyse：１０ｍｇ／注射）を、０８００及び１６００にて筋肉注射（ＩＭ）する。ＡＴ消費の最終日の２４時間後、すべてのドナーの若雌ブタに、妊娠雌ウマ血清ゴナドトロピン（ＰＭＳＧ：１５００ＩＵ）の単一ＩＭ注射をする。ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ＨＣＧ：７５０ＩＵ）を、ＰＭＳＧの８０時間後に、すべてのドナーに投与する。ＡＴ投与の停止後、ドナー及びレシピエント若雌ブタを、成熟雄ブタを用いて発情の徴候について、１日２回チェックする。ＨＣＧ投与後３６時間以内に発情を示したドナーを、発情の開始後１２及び２４時間にて、人工及び自然の授精（それぞれ）を用いて交配させる。ＨＣＧの投与の５９及び６６時間後に、１細胞及び２細胞卵を、交配させたドナーから、後述の手順を用いて外科的に回収する。体重１ｋｇ当り０．５ｍｇのアセプロマジン及び体重１ｋｇ当り１．３ｍｇのケタミンを、末梢耳静脈から投与することにより全身麻酔を誘導する。麻酔をかけた後、腹中開腹して、生殖管を体外に出す。引いたガラスカニューレ（外径５ｍｍ、長さ８ｃｍ）を卵管の孔に挿入して、単一の絹（２−０）縫合を用いて漏斗部に固定する。２０ｇニードルを卵管の内腔（子宮卵管の２ｃｍ前方）に挿入することにより、卵を逆向様式にてフラッシュする。０．４％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を補った無菌のダルベッコリン酸緩衝塩溶液（ＰＢＳ）を卵管中に注入して、ガラスカニューレ側にフラッシュする。この培地を、無菌の１７×１００ｍｍポリスチレン管中に集める。フラッシュしたものを１０×６０ｍｍペトリ皿に移して、低倍率（５０ ×）にて調べる。すべての１細胞及び２細胞の卵を、１．５％ＢＳＡを補ったBr inster改変Ova Culture-3培地（ＢＭＯＣ−３）にて２回洗い、５０ｍｌの油下のＢＭＯＣ−３液滴に移す。卵を、マイクロインジェクションを実施するまで、９０％Ｎ₂、５％Ｏ₂、５％ＣＯ₂大気下で３８℃で貯蔵する。１細胞及び２細胞卵を、１．５％ＢＳＡを補った１ｍｌのＨＥＰＥＳ培地を含むエッペンドルフ管に入れ（１５卵／管）、１細胞卵中の前核及び２細胞卵中の核を可視化するために、６分間、１４０００×ｇで遠心分離する。次いで、卵を、窪み付きスライドグラス上の５〜１０ｍｌの油下のＨＥＰＥＳ培地液滴に移す。マイクロインジェクションを、Normarski光学器械及びLeitzマイクロマニピュレーターを付けたLaborlux顕微鏡を用いて行なう。操作可能にプロモーターに結合されたヒト遺伝子を含む１０〜１７００コピーのＤＮＡ構築物（トリス−ＥＤＴＡ緩衝液１ｍｌ当り１ｎｇ）を、１細胞卵の前核又は２細胞卵の両方の核に注入する。マイクロインジェクションした卵を、油下のＢＭＯＣ−３培地液滴に戻して、それらを適当なレシピエントにトランスファーするまで、９０％Ｎ₂、５％ＣＯ₂ 、５％Ｏ₂大気下で３８℃で維持する。卵は、回収後１０時間以内にトランスファーする。同日又はドナーより２４時間遅れて発情を示したレシピエントだけを、胚トランスファーに用いる。レシピエントを、上記のように麻酔する。一つの卵管を体外に出してから、少なくとも３０の注入された１細胞及び／又は２細胞卵及び４〜６の対照用卵を次の様式でトランスファーする。２１ｇ×３／４蝶型注入セットからの管を１ｃｃシリンジに接続する。卵及び１〜２ｍｌのＢＭＯＣ−３培地をこの管に吸引する。次いで、この管を、卵管の孔を通して、先端が卵管の下側１／３又は峡部に達するまで送り込む。次いで、この管をゆっくり引き抜きながら卵を排出させる。生殖管の露出させた部分を、無菌の１０％グリセロール／０．９％塩溶液に浸し、体腔に戻す。白線を含む結合組織、脂肪及び皮膚を、３つの別個の層として縫合する。連続ハルステッド縫合を用いて白線を閉じる。脂肪及び皮膚を、それぞれ、単純連続縫合及びさし縫い縫合を用いて閉じる。次いで、局所用抗菌剤（フラゾリドン）を切開領域に投与する。レシピエントを、４匹ずつのグループにしておりに入れて、１．８ｋｇの標準的１６％粗蛋白質トウモロコシ−大豆飼料を与える。１８日目（０日目＝発情の開始）に始めて、すべてのレシピエントを、成熟雄を用いて、発情の徴候について毎日チェックする。３５日目に、妊娠の検出を、超音波を用いて行なう。１０７日目に、妊娠レシピエントを分娩室に移す。分娩時に付き添うことを確実にするために、妊娠１１２日に０８００及び１４００時間にプロスタグランジンＦ_2a の投与（１０ｍｇ／注射）により分娩を誘発する。レシピエントは、ＰＧＦ_2a投与から約３４時間以内に分娩するはずである。異種間移植におけるトランスジェニックブタ造血幹細胞の利用下記の手順をデザインして、移植されたブタの臓器（異種移植片）が異種宿主中で拒絶される前に生存する時間を延ばした。臓器は、任意の臓器例えば肝臓、例えば腎臓、例えば心臓であってよい。主なストラテジーは、天然抗体の灌流による除去、寛容を誘導するトランスジェニックブタ幹細胞の移植及びドナー間質細胞の移植（適宜）である。ドナー幹細胞、又は移植片の細胞の幾らか若しくは全部の一方又は両方は、一種以上のヒトＭＨＣクラスＩ蛋白質を発現する。移植のためのレシピエントの準備は、これらのステップの何れか又は全部を含む。好ましくは、それらは、下記の順序で実施する。第１に、ウマ抗ヒト胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）の標品を、レシピエントに静脈注射する。この抗体標品は、成熟Ｔ細胞及びナチュラルキラー細胞を排除する。任意の哺乳動物宿主から得た抗ヒトＡＴＧ、例えばブタにおいて生成されたＡＴＧも（これまで、ブタＡＴＧ標品は、ウマ由来のＡＴＧより低い力価を有するが）用いることができる。ＡＴＧは、抗ＮＫ細胞モノクローナル抗体より優れている。何故なら、後者は、一般に、すべての宿主ＮＫ細胞に対して溶解性でないが、ＡＴＧのポリクローナル混合物は、すべての宿主ＮＫ細胞を溶解させることができるからである。しかしながら、抗ＮＫモノクローナル抗体を用いることはできる。宿主のＴ細胞が、移植後に再生する期間における、宿主胸腺中のドナー抗原の存在は、宿主Ｔ細胞を寛容にするのに決定的に重要である。もしドナーの造血幹細胞が、宿主胸腺において樹立され得ず、宿主Ｔ細胞が再生する前に寛容を誘導することができないならば、抗レシピエントＴ細胞抗体の反復投与が、非骨髄芽球養生法の間中必要であり得る。宿主Ｔ細胞の連続的涸渇が、数週間にわたって必要であり得る。或は、例えば、もしこのアプローチが成功せず、これらの動物において寛容が誘導されなければ（ドナー皮膚移植片の受容、イン・ビトロでの特異的細胞応答性低下、及び液性寛容により測定）、アプローチを改変して、宿主胸腺摘出を含めることができる。非ドナー型の同種異系ドナー皮膚移植片を拒絶する能力及び病原体を含む環境で生存する能力により、免疫適格を測定することができる。貧血を回避するために、レシピエントに脾臓摘出を施すことも必要又は好適であり得る。第２に、レシピエントに、造血空間を造るために、低線量照射を施す。１００〜４００ラドの準致死的線量の全身照射に７００ラドの局所的胸腺照射を加えたものが、この目的に対して有効であることが見出された。第３に、ブタ肝臓の血液灌流により又は抗原カラム上での吸着により、レシピエントの血液中から天然の抗体を吸収する。前に形成された天然抗体（ｎＡＢ）は、移植片拒絶の主要な因子である。天然抗体は、異種内皮細胞に結合し、主としてＩｇＭクラスのものである。これらの抗体は、異種ドナーの抗原に対する如何なる公知の以前の露出にも無関係である。これらの天然抗体を産生するＢ細胞は、Ｔ細胞非依存性の傾向があり、正常には、発生中に自己抗原にさらされることによりそれらの抗原に対して寛容となる。新たに発生するＢ細胞が寛容となる機構は、未知である。肝臓は、腎臓より効果的な天然抗体の吸収材である。非骨髄芽球手順における第４のステップは、ドナーの間質組織好ましくは胎児肝、胸腺及び／又は胎児脾臓から得られたものをレシピエントに好ましくは腎臓カプセルにて移植することである。異種バリヤーを横切る幹細胞植付け及び造血は、ドナー種からの造血間質環境を与えることにより増大される。間質マトリックスは、造血細胞とそれらの間質環境との間の相互作用に必要な種特異的因子例えば造血成長因子、接着分子及びそれらのリガンドを与える。このステップをブタサイトカインの投与と置き替えることは、一般に、好ましいであろう。胸腺は、Ｔ細胞成熟の主要な部位である。各臓器は、宿主に移植された個々の未分化幹細胞の分化を支持することのできる臓器特異的な間質マトリックスを含む。成体の胸腺を用いることはできるが、妊娠の十分初期に得られた胎児組織は、ＧＶＨＤを引き起こし得る成熟Ｔリンパ球を含まないので好適である。胎児組織は又、移植されたときに成体組織よりよく生存する傾向がある。ＧＶＨＤに対する更なる用心として、胸腺間質組織を、移植前に照射することができる（例えば、１０００ラドで照射）。移植の別法又は補助として、胎児肝細胞を懸濁液にて投与することができる。（トランスジェニック「ヒト化」ブタ細胞（宿主細胞と一層効果的に競争して宿主中で再増殖することのできるもの）の利用は、このステップの必要性を排除し得る）第５に、トランスジェニックブタ骨髄幹細胞（ＢＭＣ）例えばヒトＭＨＣクラスＩ蛋白質を発現するように処理されたブタＢＭＣをレシピエントに注入する。ドナーのＢＭＣは、レシピエントの適当な部位に向かい、残っている宿主細胞と隣接して成長し且つ増殖して、キメラのリンパ造血集団を形成する。このプロセスにより、新たに形成されるＢ細胞（及びそれらが産生する抗体）は、ドナー抗原にさらされ、それにより、移植物が自己として認識されるようになる。ドナーに対する寛容は又、造血幹細胞例えばＢＭＣ植付けが達成された動物中でのＴ細胞レベルにおいても認められる。骨髄キメリズムが誘導された数カ月後のかかるレシピエント中に臓器移植片を置くと、ドナーに対する天然抗体は消失しており、移植片は、免疫系の体液性及び細胞性武装の両者に受け入れられるであろう。このアプローチは、造血細胞例えばＢＭＴ例えば胎児肝懸濁液の移植後に臓器移植を十分に長く実施することを可能にするという更なる利点を有し、正常の健康及び免疫適格が臓器移植時点で回復するであろう。異種ドナーの利用は、同じ動物又は遺伝的にマッチした動物からの骨髄細胞及び臓器を利用する可能性を与える。これらの手順の何れも移植された臓器の生存を助け得るが、最良の結果は、すべてのステップを合わせて用いる場合に達成される。移植のドナー及び寛容を誘導する造血細胞又は灌流される肝臓の何れかを供給する個体は、同一個体であるか又はできるだけ近縁であるべきである。例えば、高度に同系交配されたドナー群から移植組織を得ることは好ましい。他の具体例造血細胞移植（例えば、ＢＭＴ）前に導入された間質組織は、（１）胎児の肝及び胸腺組織を細胞懸濁液として投与すること；（２）胎児肝若しくは胸腺間質組織を投与する（但し、両方ではない）こと；（３）間質移植組織を他のカプセル封入された十分血管形成された部位に置くこと、又は（４）間質組織源として成体胸腺若しくは胎児脾臓を用いることによって変わり得る。この発明の方法は、新生物疾患特に普通の治療例えば化学療法又は放射線療法に耐性の疾患に苦しめられている組織又は臓器を置き変えるのに特に有用である。好適具体例において、移植片は、消化管又は腸からの組織、例えば胃からの組織、又は腸組織（例えば、小腸、大腸若しくは結腸）を含み；移植片は、レシピエントの消化系の一部を、例えば消化管又は腸、例えば胃、腸（例えば、小腸、大腸若しくは結腸）の全部又は一部を置き替える。寛容は、ここで用いる場合、抗原に対する完全な免疫学的寛容をいうだけでなく、部分的寛容（即ち、この発明の方法を用いなかったならば見られたであろうものより大きい抗原に対する寛容の程度）をもいう。ここで論じるように、移植片レシピエントを、混合キメリズムの発生を促進するために照射にさらすことは、しばしば、望ましいことである。本発明者は、照射線量を分割することにより、即ち照射を２回以上の露出又は持続期間にて送達することにより、一層低い照射毒性で混合キメリズムを誘導することが可能であることを発見した。従って、異種移植片又は同種移植片のレシピエント例えば霊長類例えばヒトレシピエントの照射を要求するこの発明の如何なる方法においても、その照射は、単一露出にて送達してもよいし又は、一層好ましくは、２回以上の露出若しくは持続時間に分けてもよい。これらの分割した線量の総計は、好ましくは、ラド又はＧｙにて、単一露出にて与えた場合に混合キメリズムを生じ得る照射線量と等しい。これらの分割照射は、好ましくは、ほぼ等しい線量とする。例えば、７００ラドの単一線量は、３５０ラドずつの２分割照射に置き替えることができ、又は１００ラドずつの７回の分割照射に置き替えることができる。照射線量の過剰分割も又、この発明の方法において用いることができる。これらの分割照射は、同じ日に送達することもできるし又は、１、２、３、４、５日以上の間隔にて分けることもできる。全身照射、胸腺照射、又はこれらの両方を分けることができる。本発明者は又、寛容にする幹細胞及び／又は移植片の移植の数日後、好ましくは、７２、４８若しくは２４時間以内に、調製用養生法の多く若しくはすべてをレシピエントに送達し又は施与することができることをも発見した。これは、死体からの移植片を受けるヒトの場合に、特に、有用である。従って、幹細胞及び／又は移植片の移植前に処理（宿主の抗体を不活性化若しくは涸渇させる処理、宿主のＴ細胞若しくはＮＫ細胞を不活性化する処理、又は照射）の施与を要求するこの発明の方法の何れにおいても、これらの処理を、幹細胞及び／又は移植片の移植の数日後、好ましくは、７２、４８若しくは２４時間以内に施与することができる。特に、霊長類例えばヒトレシピエントには、宿主抗体を不活性化し若しくは涸渇させる処理、宿主Ｔ細胞若しくはＮＫ細胞を不活性化させる処理、又は照射の何れか若しくはすべてを、幹細胞及び／又は移植片の移植後数日以内好ましくは７２、４８若しくは２４時間以内に施与することができる。例えば、レシピエントのＴ細胞及び／又はＮＫ細胞を涸渇させる処理例えばＡＴＧの投与を、−２、−１及び０日目に施与することができ、ＷＢＩ、胸腺照射及び幹細胞（例えば、骨髄幹細胞）を０日目に施与することができる。（移植片例えば腎臓同種移植片を０日目に移植する）この発明の方法は、レシピエントの脾臓摘出を含むことができる。ここで論じるように、血液灌流（例えば、ドナー臓器を用いる血液灌流）を用いて、宿主の天然抗体を涸渇させることができる。他の天然抗体を涸渇させ或は不活性化させるための方法を、ここに記載の任意の方法と共に用いることができる。例えば、天然抗体を涸渇させ又は不活性化させる薬物例えばデオキシスパガリン（ＤＳＧ）（Bristol）又は抗ＩｇＭ抗体を、同種移植片又は異種移植片のレシピエントに投与することができる。ＤＳＧ（又は、同様の薬物）、抗ＩｇＭ及び血液灌流の内の一つ又は幾つかを用いて、この発明の方法において、レシピエントの天然抗体を涸渇させ或は不活性化させることができる。６ｍｇ／ｋｇ／日の濃度のＤＳＧ（静脈注射）が、ブタにおけるカニクイザル腎臓移植片に対する天然抗体機能を抑制するのに有用であることが見出された。ここに記載の方法の幾つかは、致死的照射を用いて造血空間を造り、それにより、同種異系の、異種の、同系の又は遺伝子工学処理した自已の幹細胞の投与に対するレシピエントの準備をする。ここに記載の方法（特に、霊長類又は臨床用の方法）の何れにおいても、かかる細胞の投与のための造血空間を、非致死的手段により例えば準致死的線量の照射、骨髄を涸渇させる薬物又は抗体を投与することによって造ることが好ましい。準致死的レベルの骨髄涸渇の利用は、レシピエントにおける混合キメリズムの生成を与える。混合キメリズムは、一般に、レシピエントの骨髄の全体的又は致死的消耗とその後の投与された幹細胞によるレシピエントの完全な再構成に好ましい。胸腺Ｔ細胞の不活性化のための別法も又、この発明の具体例に含まれる。ここに記載の方法の幾つかは、胸腺照射を施して宿主の胸腺Ｔ細胞を不活性化させるか或はドナー抗原に対する宿主の胸腺Ｔ細胞媒介の応答を減じることを含む。この発明の同種又は異種移植法において要求される胸腺照射は、宿主の胸腺Ｔ細胞媒介の応答を減じる他の処理によって（例えば、胸腺Ｔ細胞を涸渇させること及び／又は１種以上のＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）、ＣＤ４コレセプター若しくはＣＤ８コレセプターを下方制御することにより）補われ又は置き替えられ得ることが発見された。例えば、胸腺照射を、宿主の胸腺Ｔ細胞媒介の応答を減じるだけ十分な回数、十分な量で、十分な期間投与された抗Ｔ細胞抗体（例えば、抗ＣＤ４及び／又は抗ＣＤ８モノクローナル抗体）により、補い又は置き替えることができる。最良の結果のためには、抗Ｔ細胞抗体を、繰り返し投与すべきである。例えば、抗Ｔ細胞抗体を、ドナー骨髄移植の前に、１、２、３回以上投与することができる。典型的には、骨髄移植前の抗体投与量は、骨髄移植の約５日前に患者に与えられる。骨髄移植の６、７又は８日前に更なる一層早い投与量を与えることもできる。最初の処理を施し、次いで、患者が血清中の過剰の抗体及び末梢Ｔ細胞の約９９％涸渇を示すまで骨髄前投与を１〜５日間毎日繰り返し、次いで、骨髄移植を実施するのが望ましい。抗Ｔ細胞抗体は又、ドナー骨髄移植後も、１、２、３回以上投与することができる。典型的には、骨髄移植後処理は、骨髄移植後２〜１４日に与える。この骨髄移植後施与は、必要な回数繰り返すことができる。２回以上の施与を与える場合は、約１週間間隔でよい。もし患者が、早い又は望ましくないＴ細胞回復を受けるようならば、更なる投与量を与えることができる。好ましくは、抗Ｔ細胞抗体を、ドナー骨髄移植の前に、少なくとも１回（好ましくは、２、３回以上）投与し、且つドナー骨髄移植後に、少なくとも１回（好ましくは、２、３回以上）投与する。ここに記載の方法の幾つかは、造血幹細胞のレシピエントへの投与を含む。それらの方法の多くにおいて、造血幹細胞は、移植片（同種又は異種移植片）の移植前又は移植の時点に投与され、この造血幹細胞の投与の主な目的は移植片に対する寛容を誘導することである。本発明者は、その後の１回以上の造血幹細胞の投与（例えば、第２、３、４、５又はそれ以上の投与）が寛容の生成及び／又は維持に望ましいことを見出した。従って、この発明は又、ここで言及される方法の何れかの部分として造血幹細胞を以前に投与されたレシピエント例えば霊長類例えばヒトに、造血幹細胞を投与する方法をも含む。理論に拘束されることは望まないが、本発明者は、反復幹細胞投与は、移植片レシピエントにおけるキメリズム及び恐らくは長期欠失性寛容を促進することができるものと考える。従って、ここで言及される造血幹細胞の投与を含む任意の方法は、更に、幹細胞の複数の投与を含むことができる。好適具体例において、幹細胞の第１及び第２の投与を、移植片の移植の前に与え；幹細胞の第１の投与を移植片の移植前に与え且つ幹細胞の第２の投与を移植片の移植時点に与える。他の好適具体例において、幹細胞の第１の投与を、移植片の移植の前又は移植の時点に与え、幹細胞の第２の投与を、移植片の移植の後に与える。造血幹細胞の投与の間の期間は、変わり得る。好適具体例において、造血幹細胞のその後の投与を、幹細胞の前の投与の少なくとも２日後、１週間後、１月後又は６月後に与え；移植片の移植の少なくとも２日後、１週間後、１月後又は６月後に与える。この方法は、更に、レシピエントが例えば移植された臓器の機能低下により、宿主のドナー特異的抗体応答の変化により又はドナー抗原に対する宿主リンパ球応答の変化により示される拒絶の徴候を示し始めるとき；キメリズムのレベルが低下するとき；キメリズムのレベルが予め決めた値より低下したとき；キメリズムのレベルが、ドナーＰＢＭＣ抗原に特異的なモノクローナル抗体での染色がＰＢＭＣに結合しない同位体対照での染色以下であるレベルに達し又はそれより低下したとき（例えば、ドナー特異的モノクローナルが、これらの細胞の１〜２％未満を染色するとき）；又は、一般に、寛容を維持し若しくは移植片の受容を延長させることが必要なときには、造血幹細胞の第２の又はその後の投与量を施与するステップを含むことができる。従って、この発明の方法を、造血幹細胞の１回以上の投与を受けた患者が造血幹細胞のその後の投与を必要としているかどうかを測定し、もし必要であるならば、その患者に造血幹細胞のその後の投与量を施与する更なるステップを含むように改変することができる。ここで言及される任意の方法は、レシピエントにおける抗体の産生、レベル又は活性を阻止する薬剤例えば１５−デオキシスパガリン、ミコフェノレートモフェチル（mofetil）、ブレクィナ（brequinar）ナトリウム、又は類似の薬剤の投与を含むことができる。これらの薬剤の一種以上を、ドナー組織の移植前（例えばドナー組織の移植の１、２若しくは３日前又は１、２若しくは３週間前）に；ドナー組織の移植の時点に；又は、ドナー組織の移植後（例えば、移植片の移植の１、２若しくは３日後又は１、２若しくは３週間後）に投与することができる。この薬剤の投与は、レシピエントが、例えば、移植された臓器の機能低下により、宿主のドナー特異的抗体応答の変化により若しくはドナー抗原に対する宿主リンパ球応答の変化により示される拒絶の徴候を示し始めるとき；キメリズムのレベルが減少するとき；キメリズムのレベルが予め決めた値より添加するとき；キメリズムのレベルが、ドナーＰＢＭＣ抗原に特異的なモノクローナル抗体での染色がＰＢＭＣに結合しない同位体対照での染色以下であるレベルに達し若しくはそれより低下するとき（例えば、ドナー特異的なモノクローナルが、これらの細胞の１〜２％未満を染色するとき）；又は、一般に、寛容を維持し若しくは移植片の受容を延長することが必要であるときに開始することができる。薬剤を投与する期間（又は、患者において臨床的に有効なレベルが維持される期間）は、長期間例えば６月以上又は１年以上でも、短期間例えば１年未満（一層好ましくは、６月以下、一層好ましくは１月以下、更に好ましくは２週間以下）であってもよい。この期間は、一般に、少なくとも約１週間、好ましくは少なくとも約２週間持続する。好適具体例において、この期間は、２週間又は３週間の長さである。好適具体例は、移植片移植の日に開始して約２週間にわたる１５−デオキシスパガリン（６ｍｇ／ｋｇ／日）の投与を含む。ここで言及される方法の幾つかは、抗体例えば前に形成された天然抗体をレシピエントの血液から除去するステップを含む。例えば、幾つかの方法において、ドナー種からの臓器の血液灌流により抗体を除去する。本発明者は、α１−３ガラクトース結合エピトープアフィニティーマトリックス（例えば、アフィニティーカラム形態）が抗体をレシピエントの血液から除去するのに有用であることを発見した。従って、α１−３ガラクトース結合エピトープアフィニティーマトリックス（例えば、マトリックス結合した線形Ｂ型ＶＩ炭水化物）をここで言及される任意の方法に加えることができ、ここで言及される任意の方法において任意の抗体灌流又は除去技術（例えば、臓器灌流）に加えて又は代えて用いることができる。ここで言及される方法の幾つかは、造血幹細胞のレシピエントへの投与を含む。それらの方法の多くにおいて、造血幹細胞を、移植片（同種又は異種移植片）の投与前又は投与時点に投与し、この造血幹細胞の投与の目的は、移植片に対する寛容の誘導である。本発明者は、一種以上のサイトカイン（好ましくは、これらの幹細胞を取り出した種由来のサイトカイン）の投与が寛容を促進し或は移植片の受容を延長することを見出した。従って、この発明は又、前にドナーの造血幹細胞を投与された患者に一種以上のサイトカイン（例えば、ドナー種のサイトカイン）を投与する方法をも含む。理論に拘束されることは望まないが、本発明者は、これらのサイトカイン（特に、ドナー種サイトカイン）は、ドナー幹細胞又はそれらの子孫の細胞の植付け及び／又は機能を促進するものと考える。従って、造血幹細胞の投与を含むここで言及される任意の方法は、更に、サイトカイン例えばＳＣＦ、ＩＬ−３又はＧＭ−ＣＳＦの投与を含むことができる。好適具体例において、このサイトカインは、標的細胞との相互作用において種特異的であるものである。サイトカインの投与は、移植片の移植又は幹細胞の移植の前又は後に開始することができる。この方法は、更に、レシピエントが、例えば移植された臓器の機能低下により、宿主のドナー特異的抗体応答の変化により若しくはドナー抗原に対する宿主リンパ球応答の変化により示される拒絶の徴候を示し始めたとき；キメリズムのレベルが低下したとき；キメリズムのレベルが予め決めた値より低下したとき；キメリズムのレベルが、ドナーのＰＢＭＣ抗原に特異的なモノクローナル抗体での染色がＰＢＭＣに結合しない同位体対照での染色以下であるレベルに達し若しくはそれより低下したとき（例えば、ドナー特異的モノクローナルがこれらの細胞の１〜２％未満を染色するとき）；又は、一般に、寛容を維持し或は移植片の受容を延長することが必要であるときに、サイトカインの第１の又はその後の投与量をそのレシピエントに投与するステップを含むことができる。従って、この発明の方法を、患者がサイトカイン治療を必要としているか否かを決定し、もし必要としているならばサイトカインを投与する更なるステップを含むように改変することができる。サイトカインを投与する期間（又は、臨床的に有効なレベルが患者において維持される期間）は、長期間例えば６月以上若しくは１年以上であっても、又は短期間例えば１年以下、一層好ましくは６月以下、一層好ましくは１月以下、更に好ましくは２週間以下であってもよい。この期間は、一般に、少なくとも約１週間、好ましくは少なくとも約２週間持続する。好適具体例において、レシピエントは、霊長類例えばヒトであり、ドナーは、異なる種からのものであり、例えばドナーはブタであり、ブタＳＣＦを投与し；ブタＩＬ−３を投与し；ブタＳＣＦとブタＩＬ−３の組合せを投与し；ブタ特異的な造血促進因子例えばブタＧＭ−ＳＣＦを、例えば幹細胞の移植後に（例えば、幹細胞の移植の約１月後に）投与する。特に好適な具体例は、シクロスポリン又は類似の薬剤の短期コース（例えば、約１月）、１５−デオキシスパガリン又は類似の薬剤の短期コース（例えば、約２週間）及びドナー特異的なサイトカイン例えばＳＣＦ及びＩＬ−３の短期コース（例えば、約２週間）を組合せる。ブタの移植片及びブタの幹細胞を受けたカニクイザルにおいて、シクロスポリン（１５ｍｇ／ｋｇ／日で２８日間）、１５ −デオキシスパガリン（６ｍｇ／ｋｇ／日で２週間）及び組換えブタサイトカイン（ＳＣＦ及びＩＬ−３、各々１０μｇ／ｋｇ／日（静脈注射）で２週間）を含む処理が有用であることが見出された。投与を、移植片の移植の時点に開始した。（これらのサルは又、−６及び−５日目の３×１００ｃＧｙの全身照射及び幹細胞投与直前のブタ肝臓を用いる血液灌流よりなる調製用養生法も受けた）。抗ＣＤ２抗体（好ましくは、モノクローナル例えばＢＴＩ−３２２又は類似の若しくは重複するエピトープに対するモノクローナル）を、ここで言及される任意の方法における任意の抗Ｔ細胞抗体（例えば、ＡＴＧ）に加えて又はそれに代えて用いることができる。特定のクラスＩ蛋白質の標的細胞をＮＫ細胞の致死作用から防護することについての適合性は、イン・ビトロで、例えばイン・ビトロ致死実験を用いて評価することができる。このアプローチを用いて、所定のクラスＩ蛋白質が標的細胞をＮＫレセプターのスペクトルから防護することのできる程度を評価することができる。このアプローチは又、キメラのクラスＩ蛋白質を、ＮＫ細胞（例えば、種々のＮＫレセプターを有するＮＫ細胞）の攻撃から細胞を防護する能力についてアッセイするためにも用いることができる。この発明の方法において、ヒトのクラスＩトランスジェニックブタを骨髄ドナーとして、ヒトクラスＩ遺伝子を有しないコンジェニックブタを臓器ドナーとして用いることができる。天然のＨＬＡ遺伝子を、この発明の方法において用いることができる。しかしながら、天然のＨＬＡ抗原のアナログをコードするＤＮＡも又、用いることができる。アナログは、天然の蛋白質と、アミノ酸配列において、配列に関係しない部分で、又はこれらの両方で異なってよい。配列以外の改変には、イン・ビボ又はイン・ビトロでの、化学的誘導体化が含まれる。配列以外の改変には、アセチル化、メチル化、リン酸化、カルボキシル化又はグリコシル化の変化が含まれる。好適なアナログは、野生型の配列と、生物学的活性即ちＮＫ細胞媒介の攻撃に対して防護する能力を破壊しない１つ以上の保存的アミノ酸置換又は１つ以上の非保存的アミノ酸置換、欠失若しくは挿入だけ配列が異なるＨＬＡＡ、Ｂ、Ｃ又はＧ抗原（又は、生物学的に活性なその断片）をコードする核酸を含む。保存的置換には、典型的には、１つのアミノ酸の他の似た性質のアミノ酸での置換例えば次のグループ内での置換が含まれる：バリン、グリシン；グリシン、アラニン；バリン、イソロイシン、ロイシン；アスパラギン酸、グルタミン酸；アスパラギン、グルタミン；セリン、スレオニン；リジン、アルギニン；及びフェニルアラニン、チロシン。他の保存的置換は、下記の表から得ることができる。断片又はアナログを、それが標的細胞へのＮＫ細胞媒介の攻撃を阻止し得るかどうかを測定することにより、活性について試験することができる。先ずＫＩＲに結合する能力について候補をスクリーニングし、次いで、標的細胞へのＮＫ細胞媒介の攻撃を阻止する能力についてスクリーニングするのが望ましい。アナログ及び断片を、当業者に公知の方法により生成することができる（例えば、下記のもの）。蛋白質の断片を、幾つかの方法例えば組換えにより生成することができる。ポリペプチドの内部又は末端断片を、そのポリペプチドをコードする核酸の１つ以上のヌクレオチドを一端から（末端断片の場合）又は両端から（内部断片の場合）除去することにより生成することができる。この変異させたＤＮＡの発現は、ポリペプチド断片を生成する。「末端をかじり取る（end-nibbling）」エンドヌクレアーゼでの消化は、従って、断片の配列をコードするＤＮＡを生成することができる。蛋白質の断片をコードするＤＮＡは又、ランダムシェアリング、制限酵素消化又は上記の方法の組合せによっても生成することができる。蛋白質のアミノ酸配列の変異体は、蛋白質又は蛋白質の特定のドメイン若しくは領域をコードするＤＮＡのランダムな突然変異誘発によって調製することができる。有用な方法には、ＰＣＲ突然変異誘発及び飽和突然変異誘発が含まれる。ランダムアミノ酸配列変異体のライブラリーは又、縮重オリゴヌクレオチド配列のセットの合成によっても生成することができる（変異体のライブラリー中の蛋白質をスクリーニングする方法は、この明細書の別の場所に記載してある）。ＰＣＲ突然変異誘発においては、減じたＴａｑポリメラーゼの忠実度を利用して、ランダムな突然変異をクローン化したＤＮＡの断片中に導入する（Leung等1 989,Technique 1:11-15）。これは、非常に強力で且つ比較的早いランダム変異の導入方法である。突然変異を誘発すべきＤＮＡ領域を、ＴａｑＤＮＡポリメラーゼによるＤＮＡ合成の忠実度を減少させる条件下で、例えば５のｄＧＴＰ／ｄＡＴＰ比を用い且つＭｎ²⁺をＰＣＲ反応に加えることにより、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を用いて増幅する。増幅されたＤＮＡ断片のプールを、適当なクローニングベクターに挿入して、ランダム変異体ライブラリーを与える。飽和突然変異は、多数の単一塩基置換のクローン化ＤＮＡ断片への迅速な導入を可能にする（Mayers等、1985,Science 229:242）。この技術には、突然変異の生成（例えば、一本鎖ＤＮＡのイン・ビトロでの化学処理又は照射によるもの）及び相補的ＤＮＡ鎖の合成が含まれる。突然変異頻度は、処理の強さを調節することにより調節することができ、本質的にすべての可能な塩基置換を得ることができる。この手順は、突然変異に対する遺伝的選択を含まないので、中立的置換並びに機能を変える置換の両断片が得られる。点突然変異の分布は、保存された配列エレメントに対して偏っていない。同族体のライブラリーも又、縮重オリゴヌクレオチド配列のセットから生成することができる。縮重配列の化学合成を自動ＤＮＡシンセサイザーにて実施することができ、合成した遺伝子を、次いで、適当な発現ベクター中にライゲートすることができる。縮重オリゴヌクレオチドの合成は、当分野で公知である（例えば、Narang,SA(1983)Tetrahedron 39:3; Itakura等(1981)Recombinant DNA，Pro c 3rd Cleveland Symbos.Macromolecules，編、AG Walton，Amsterdam: Elsevie r 273-289頁; Itakura等(1984)Annu.Rev.Biochem.53:323; Itakura等(1984)Scie nce 198:1056; Ike等(1983)Nucleic Acid Res.11:477を参照されたい）。かかる技術は、他の蛋白質の有向の進化において用いられてきた（例えば、Scott等(19 90)Science 249:386-390; Roberts等(1992)PNAS 89:2429-2433; Devlin等(1990) Science 249:404-406; Cwirla等(1990)PNAS 87:6378-6382;並びに米国特許第５，２２３，４０９号、５，１９８，３４６号及び５，０９６，８１５号を参照されたい）。ランダムでない又は位置指定の突然変異誘発技術を用いて、特異的配列又は突然変異を特定の領域に与えることができる。これらの技術を用いて、蛋白質の公知のアミノ酸配列の残基の例えば欠失、挿入又は置換を含む変異体を造ることができる。突然変異のためにこれらの部位を、例えば（１）先ず保存的アミノ酸で置換してから達成する結果に依って一層激しい選択物で置換し、（２）標的残基を涸渇させ、又は（３）局所的部位に隣接する同じ若しくは異なるクラスの残基を挿入することにより、又は随意の１〜３の組合せにより、個別に又は連続して改変することができる。アラニンスキャニング突然変異誘発法は、突然変異誘発に好適な位置又はドメインである所望の蛋白質のある残基又は領域の同定に有用な方法である、Cu nningham及びWells（Science 244:1081-1085,1989）。アラニンスキャニングにおいて、標的残基の残基又は基が同定され（例えば、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ及びＧｌｕ等の帯電した残基）、中性の又は負に帯電したアミノ酸（最も好ましくは、アラニン又はポリアラニン）により置換される。アミノ酸の置換は、細胞内又は細胞外におけるそれらのアミノ酸と周囲の水性環境との相互作用に影響を及ぼし得る。次いで、置換に対する機能的感受性を示すドメインを、それらの置換の部位に更に又は別の変異体を導入することにより正確にする。従って、アミノ酸配列変異体を導入する部位は、予め決められるが、その変異自体の性質は、予め決める必要はない。例えば、所定部位の変異の性能を最適にするために、アラニンスキャニング又はランダム突然変異誘発を、標的コドン又は領域にて行ない、発現された所望の蛋白質サブユニット変異体を所望の活性の最適の組合せについてスクリーニングする。オリゴヌクレオチド媒介の突然変異誘発は、ＤＮＡの置換、欠失及び挿入変異体を調製するのに有用な方法である。例えば、Adelman（DNA 2:183,1983）を参照されたい。簡単には、所望のＤＮＡを、変異をコードするオリゴヌクレオチドをＤＮＡテンプレートにハイブリダイズさせることにより変化させる（ここに、テンプレートは、所望の蛋白質の変化してない又は自然のＤＮＡ配列を含む一本鎖形態のプラスミッド又はバクテリオファージである）。ハイブリダイゼーション後に、ＤＮＡポリメラーゼを用いて、このテンプレートの完全な第２の相補鎖を合成する（従って、それは、オリゴヌクレオチドプライマーを取込み、所望の蛋白質ＤＮＡ中に選択した変化をコードする）。一般に、少なくとも２５ヌクレオチド長のオリゴヌクレオチドが用いられる。最適なオリゴヌクレオチドは、変異をコードするヌクレオチドの何れかの側のテンプレートに完全に相補的である１２〜１５ヌクレオチドを有する。これは、オリゴヌクレオチドが一本鎖ＤＮＡテンプレート分子に適当にハイブリダイズすることを確実にする。これらのオリゴヌクレオチドは、Crea等（Proc.Natl.Acad.Sci.USA,75:5765[1978]）により記載されたように、当分野で公知の技術を用いて容易に合成される。変異体を調製するための他の方法であるカセット突然変異誘発は、Wells等（Gene，34:315[1985]）により記載された技術に基づいている。その出発材料は、変異させるべき蛋白質サブユニットＤＮＡを含むプラスミッド（又は、他のベクター）である。変異させるべき蛋白質サブユニットＤＮＡ中のコドンを同定する。同定した突然変異部位のそれぞれの側にユニークな制限エンドヌクレアーゼ部位がなければならない。もしかかる制限部位が存在しなければ、それらを上記のオリゴヌクレオチド媒介の突然変異誘発法を用いて生成し、所望の蛋白質サブユニットＤＮＡ中の適当な位置に導入することができる。制限部位をプラスミッドに導入した後に、そのプラスミッドをそれらの部位で切断して線形化させる。これらの制限部位の間のＤＮＡの配列をコードするが所望の突然変異を含む二本鎖オリゴヌクレオチドを、標準的手順を用いて合成する。これらの２つの鎖を別々に合成し、次いで、標準的手順を用いて一緒にハイブリダイズさせる。この二本鎖オリゴヌクレオチドを、カセットと呼ぶ。このカセットは、プラスミッドに直接ライゲートすることができるように、線形化したプラスミッドの両端と比較できる３’及び５’末端を有するようにデザインされている。このプラスミッドは、今や、変異した所望の蛋白質サブユニットＤＮＡ配列を含んでいる。組合せ（combinatorial）突然変異誘発を用いて、突然変異を生成することもできる。例えば、同族体のグループ又は他の関連蛋白質についてのアミノ酸配列を整列させて、好ましくは、可能な最高の相同性を促進する。整列させた配列の所定位置に現われるすべてのアミノ酸を選択して、組合せ配列の縮重したセットを造ることができる。核酸レベルでの組合せ突然変異誘発により、変異体の多彩なライブラリーが生成され、多彩な遺伝子ライブラリーによりコードされる。例えば、合成オリゴヌクレオチドの混合物を酵素的に遺伝子配列中にライゲートして、潜在的配列の縮重したセットが個々のペプチドとして或は縮重した配列のセットを含む一層大きい融合蛋白質のセットとして発現可能であるようにすることができる。生成した変異遺伝子産物をスクリーニングするための種々の技術が、この分野では、公知である。大きい遺伝子ライブラリーをスクリーニングする技術は、しばしば、その遺伝子ライブラリーを複製可能な発現ベクター中にクローン化し、生成したベクターのライブラリーを用いて適当な細胞をトランスフォームし、そして、それらの遺伝子を、所望の活性（例えば、この場合には、ＫＩＲに対する結合）の検出条件下で遺伝子を発現させることを含む。下記の技術の各々は、例えばランダム突然変異誘発技術により造られた多数の配列をスクリーニングするための高スループット分析に従順である。２ハイブリッドアッセイを用いて、ＫＩＲに結合するポリペプチドの断片又はアナログを同定することができる。（ＫＩＲは、餌蛋白質として用いられ、ＨＬＡの変異体のライブラリーは、魚融合蛋白質として発現される。）スクリーニングアッセイへの一つのアプローチにおいて、候補ペプチドは、細胞又はウイルス粒子の表面に表示され、特定の細胞又はウイルス粒子の適当なレセプター蛋白質にこの表示された産物を介して結合する能力を「パニングアッセイ」にて検出する。例えば、遺伝子ライブラリーを、細菌細胞の表面膜蛋白質の遺伝子中にクローン化し、生じた融合蛋白質をパニングにより検出することができる（Ladner等、ＷＯ８８／０６６３０；Fuchs等(1991)Bio/Technology 9:1370 -1371;及びGoward等(1992)TIBS 18:136-140）。類似の様式にて、検出可能に標識されたリガンドを用いて、潜在的に機能的なペプチド同族体を評価することができる。蛍光標識したリガンド例えばレセプターを用いて、リガンド結合活性を保持している同族体を検出することができる。蛍光標識したリガンドの利用は、細胞を視覚的に調べること及び蛍光顕微鏡下で分離することを可能にし、又は、細胞の形態が許す場合は、蛍光活性化セルソーターにより分離することを可能にする。遺伝子ライブラリーを、融合蛋白質として、ウイルス粒子の表面上に発現させることができる。例えば、繊維状ファージシステムにおいて、外来ペプチド配列を感染性ファージの表面に発現させ、それにより、２つの有意の利益を与えることができる。第１に、これらのファージは、１０¹³ファージ／ミリリットルをかなり上回る濃度でアフィニティーマトリックスに適用することができ、多数のファージを一度にスクリーニングすることができる。第２に、各感染性ファージが遺伝子産物をその表面に表示するので、もし特定のファージがアフィニティーマトリックスから低収率で回収されるならば、そのファージを感染の別ラウンドにより増幅することができる。殆ど同じ大腸菌繊維状ファージＭ１３のグループｆｄ及びｆ１は、最もしばしば、ファージディスプレーライブラリーに用いられる。ファージｇIII又はｇVIIIのコート蛋白質の何れかを用いて、ウイルス粒子の最終的パッケージングを破壊することなく融合蛋白質を生成することができる。外来エピトープをｐIIIのＮＨ₂末端に発現させることができ、かかるエピトープを有するファージを、このエピトープを欠く大過剰のファージから回収することができる（Ladner等ＰＣＴ公開ＷＯ９０／０２９０９；Garrard等、ＰＣＴ公開ＷＯ９２／０９６９０；Marks等(1992)J.Biol.Chem.267:16007-16010;Griffit hs等(1993)EMBO J 12:725-734; Clackson等(1991)Nature 352:624-628;及びBarb as等(1992)PNAS 89:4457-4461）。一般的アプローチでは、大腸菌のマルトースレセプター（外側膜蛋白質、ＬａｍＢ）をペプチド融合パートナーとして用いる（Charbit等(1986)EMBO 5,3029-3 037）。オリゴヌクレオチドを、ＬａｍＢ遺伝子をコードしているプラスミッドに挿入して、その蛋白質の細胞外ループの一つに融合したペプチドを生成した。これらのペプチドは、リガンド（例えば、抗体）に結合するのに利用でき、これらの細胞を動物に投与したときに免疫応答を誘出することができる。他の細胞表面蛋白質例えばＯｍｐＡ（Schorr等(1991)Vaccines 91，387-392頁）、ＰｈｏＥ（Agterberg等(1990)Gene88，37-45）及びＰＡＬ（Fuchs等(1991)Bio/Tech 9,13 69-1372）並びに大きい細胞表面構造が、ペプチドディスプレーのためのビヒクルとして働いた。ペプチドを、重合して繊毛（細菌間での遺伝情報の交換のための導管）を形成する蛋白質であるピリンに融合させることができる（Thiry等(19 89)Appl.Environ.Microbiol.55，984-993）。他の細胞との相互作用におけるその役割の故に、繊毛は、細胞外環境へのペプチドの提示のための有用な支持を提供する。ペプチドディスプレーに用いられる他の大きい表面構造は、細菌の動力器官である鞭毛である。ペプチドのサブユニット蛋白質フラジェリンへの融合は、宿主細胞上に多数のペプチドのコピーの密な配列を与える（Kuwajima等(1988) Bio/Tech.6,1080-1083）。他の細菌種の表面蛋白質も又、ペプチド融合パートナーとして働いた。例には、StaphylococcusのプロテインＡ及びNeisseriaの外膜プロテアーゼＩｇＡが含まれる（Hansson等(1992)J. Bacteriol.174,4239-4245及びKlauser等(1990)EMBO J.9、1991-1999）。上記の繊維状ファージシステム及びＬａｍＢシステムにおいては、ペプチドとそれをコードするＤＮＡとの間の物理的結合が、そのペプチドを表面上に有する粒子（細胞又はファージ）内のＤＮＡの包含により生じる。そのペプチドを捕らえることは、その粒子及び内部にＤＮＡを捕らえる。別のスキームでは、ペプチドとＤＮＡの間の結合を形成するのにＤＮＡ結合蛋白質ＬａｃＩを用いる（Cull 等(1992)PNAS USA 89:1865-1869）。このシステムは、ＬａｃＩ遺伝子を含み、その３’末端にオリゴヌクレオチドクローニング部位を有するプラスミッドを利用する。アラビノースにより制御される誘導下で、ＬａｃＩペプチド融合蛋白質を生成する。この融合は、ＬａｃＯオペレーター（ＬａｃＯ）として公知の短いＤＮＡ配列に結合するＬａｃＩの自然の能力を保持する。ＬａｃＯの２コピーを発現プラスミッドに取り付けることにより、ＬａｃＩペプチド融合物は、それをコードするプラスミッドにきつく結合する。各細胞中のプラスミッドは唯一つのオリゴヌクレオチド配列を含み、各細胞は唯一種類のペプチド配列を発現するので、これらのペプチドは、その合成を指令するＤＮＡ配列と特異的且つ安定に結合するようになる。このライブラリーの細胞を穏やかに溶解させ、そのペプチドＤＮＡ複合体を固定化したレセプターにさらして活性ペプチドを含む複合体を回収する。結合したプラスミッドＤＮＡを、次いで、増幅及びＤＮＡ配列決定のために細胞に再導入してペプチドリガンドの正体を決定する。この方法の実際の利用の実例として、ドデカペプチドの大きいランダムライブラリーを作成して、オピオイドペプチドダイノルフィンＢに対して高めたモノクローナル抗体にて選択した。一団のペプチドが回収され、すべてダイノルフィンＢの６残基部分に対応するコンセンサス配列により関連していた（Cull等(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.U .S.A．89-1869）。このスキームは、時々プラスミッド上のペプチドと呼ばれるが、２つの重要な点において、ファージディスプレー法と異なっている。第１に、これらのペプチドは、融合蛋白質のＣ末端に付けられ、遊離のカルボキシ末端を有するペプチドとしてライブラリーのメンバーのディスプレーを生じる。繊維状ファージコート蛋白質ｐIII及びｐVIIIの両者は、それらのＣ末端を介してファージに固定され、ゲストペプチドを外側に伸びるＮ末端ドメイン中に位置させる。幾つかのデザインにおいて、ファージディスプレーされたペプチドは、融合蛋白質のアミノ末端に権利を与えられている（Cwirla等(1990)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.87,6378-6 382）。第２の違いは、ライブラリー中に現実に存在するペプチドの集団に影響を及ぼす生物学的偏りのセットである。ＬａｃＩ融合分子は、宿主細胞の細胞質に閉じ込められている。ファージコート融合物は、翻訳中に細胞質に短時間さらされるが、速やかに内膜を通ってペリプラスムコンパートメント中に分泌され、ファージ粒子へのアセンブリを待つが、それらのＣ末端疎水性ドメインにより膜中に固定されたままであり、ペプチドを含むＮ末端は、ペリプラスム中に突き出ている。ＬａｃＩ及びファージライブラリー中のペプチドは、それらの異なる蛋白質分解活性への露出の結果として有意に異なり得る。ファージコート蛋白質は、ファージへの取り込みの前兆として、内膜を横切る輸送及びシグナルペプチダーゼプロセッシングを必要とする。ある種のペプチドは、これらのプロセスに有害な影響を発揮し、これらのライブラリーで不十分に表現される（Gallop等(199 4)J.Med.Chem.37(9):1233-1251）。これらの特定の偏りは、ＬａｃＩディスプレーシステムでは、要因ではない。組換えランダムライブラリーで利用可能な小さいペプチドの数は、莫大である。１０⁷〜１０⁹の独立のクローンのライブラリーが、常例的に調製される。１０¹¹ の組換え体程の大きいライブラリーが造られているが、この大きさは、クローンライブラリーの実施限界に近い。このライブラリーサイズにおける限界は、無作為化セグメントを含むＤＮＡを宿主細菌細胞にトランスフォームするステップに生じる。この限界を回避するために、ポリソーム複合体における発生期のペプチドのディスプレーに基づくイン・ビトロシステムが、最近、開発された。このディスプレーライブラリー法は、現在利用可能なファージ／ファージミド又はプラスミッドライブラリーより３〜６桁大規模のライブラリーを生成する可能性を有している。その上、これらのライブラリーの構築、ペプチドの発現、及びスクリーニングは、完全に無細胞形式で行なわれる。この方法の一適用（Gallop等(1994)J.Med.Chem.37(9):1233-1251）において、１０¹²のデカペプチドをコードする分子ＤＮＡライブラリーが構築され、イン・ビトロで大腸菌Ｓ３０にて発現されたライブラリーは、転写／翻訳システムを連結した。条件を選択してリボソームをｍＲＮＡ上に引き止めて、ポリソーム中にかなりの割合のＲＮＡの蓄積を引き起こし、ペプチドをコードするＲＮＡと未だ結合している発生期のペプチドを含む複合体を生成する。これらのポリソームは、従来の組換えペプチドディスプレーライブラリーをスクリーニングするのと殆ど同じ方法で、固定化したレセプターにてアフィニティー精製するのに十分なだけ丈夫である。結合した複合体からのＲＮＡを回収して、ｃＤＮＡに変換し、ＰＣＲにより増幅して合成及びスクリーニングの次のラウンドのためのテンプレートを生成する。このポリソームディスプレー法は、ファージディスプレーシステムと結合することができる。数ラウンドのスクリーニングの後に、ポリソームの富化プールからのｃＤＮＡを、ファージミドベクター中にクローン化した。このベクターは、コート蛋白質に融合されたペプチドをディスプレーするペプチド発現ベクターと、ペプチド同定のためのＤＮＡシーケンシングベクターの両者として働く。ポリソーム由来のペプチドをファージ上で発現させることにより、この形式でアフィニティー選択手順を続けるか、又はファージＥＬＩＳＡにおける結合活性について（若しくは、完了ファージＥＬＩＳＡにおける結合特異性について）個々のクローン上のペプチドをアッセイすることができる（Barret等(1992) Anal.Biochem 204,357-364）。活性ペプチドの配列を同定するためには、ファージミド宿主により生成されたＤＮＡを配列決定する。上記の高スループットアッセイに続いて、第２のスクリーニングを行なって、ポリペプチドがＮＫ細胞媒介の攻撃から防護することができるかどうかを測定することができる。この発明の方法において用いるＭＨＣクラスＩ遺伝子により発現される抗原は、配列において、天然のＭＨＣクラスＩ遺伝子と異なってよい。好ましくは、この抗原は、天然のＭＨＣクラスＩ遺伝子由来の配列と少なくとも６０％、８０％、９０％、９５％、９８％又は９９％相同なアミノ酸配列を有する。好適具体例において、この発明の方法で用いるＭＨＣクラスＩ遺伝子により発現される抗原は、アミノ酸配列において、天然のＭＨＣクラスＩ遺伝子と最大で１、２、３、５、１０、１５又は２０残基異なる。他の具体例は、後記の請求の範囲内にある。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＣ１２Ｎ 5/10 Ｃ１２Ｐ 21/02 ＣＣ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ //(Ｃ１２Ｎ 15/09 Ｃ１２Ｒ 1:91） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:91） (72)発明者ダーシモニアン，ハロウトアメリカ合衆国 02181 マサチューセッツ，ウェルズリー，ルイスドライブ３ (72)発明者レガーン，クリスチャンアメリカ合衆国 02161 マサチューセッツ，ニュートン，ディッカーマンロード 140

Claims

【特許請求の範囲】１．ヒトＨＬＡＡ、ＨＬＡＢＬＡＣ又はＨＬＡＧトランスジーンの一つ以上を含む、遺伝子工学処理されたブタ細胞。２．前記のトランスジーンが、反応性グループＩのメンバーであるＨＬＡＣの対立遺伝子をコードする、請求項１に記載の遺伝子工学処理されたブタ細胞。３．前記のトランスジーンが、反応性グループIIのメンバーであるＨＬＡＣの対立遺伝子をコードする、請求項１に記載の遺伝子工学処理されたブタ細胞。４．前記の細胞が、クラスＩＭＨＣ蛋白質を含む第２のトランスジーンを含む、請求項１に記載の遺伝子工学処理されたブタ細胞。５．前記の第１のトランスジーンがグループ１のＨＬＡＣ対立遺伝子を含み、第２のトランスジーンがグループ２のＨＬＡＣ対立遺伝子を含む、請求項１に記載の遺伝子工学処理されたブタ細胞。６．前記のトランスジーンが、クラスＩ蛋白質をコードする遺伝子の第１の対立遺伝子に由来する第１の部分及びそのクラスＩ蛋白質をコードする遺伝子の第２の対立遺伝子に由来する第２の部分を含むキメラのＨＬＡＣクラスＩ蛋白質を含む、請求項１に記載の遺伝子工学処理されたブタ細胞。７．前記のトランスジーンが、７７位にセリンを有し且つ８０位にリジンを有するＨＬＡＣの対立遺伝子を含む、請求項１に記載の遺伝子工学処理されたブタ細胞。８．前記の細胞が、ブタの造血幹細胞である、請求項１に記載の遺伝子工学処理されたブタ細胞。９．ヒトのＨＬＡＡ、ＨＬＡＢ、ＨＬＡＣ又はＨＬＡＧ遺伝子に操作可能に結合されたブタのプロモーターを含む核酸。１０．ＨＬＡＡ、ＨＬＡＢ、ＨＬＡＣ又はＨＬＡＧ遺伝子の一つ以上を含むトランスジーンを含む細胞を有するトランスジェニックブタ。１１．前記のトランスジーンが、反応性グループＩのメンバーであるＨＬＡＣ対立遺伝子をコードする、請求項１０に記載のトランスジェニックブタ。１２．前記のトランスジーンが、反応性グループIIのメンバーであるＨＬＡＣ対立遺伝子をコードする、請求項１０に記載のトランスジェニックブタ。１３．クラスＩＭＨＣ蛋白質を含む第２のトランスジーンを更に含む、請求項１０に記載のトランスジェニックブタ。１４．前記の第１のトランスジーンがグループ１のＨＬＡＣ対立遺伝子を含み且つ第２のトランスジーンがグループ２のＨＬＡＣ対立遺伝子を含む、請求項１３に記載のトランスジェニックブタ。１５．前記のトランスジーンが、クラスＩ蛋白質をコードする遺伝子の第１の対立遺伝子に由来する第１の部分及びそのクラスＩ蛋白質をコードする遺伝子の第２の対立遺伝子に由来する第２の部分を含むキメラのＨＬＡＣクラスＩ蛋白質を含む請求項１０に記載のトランスジェニックブタ。１６．前記のトランスジーンが、７７位にセリンを有し且つ８０位にリジンを有するＨＬＡＣの対立遺伝子を含む、請求項１０に記載のトランスジェニックブタ細胞。１７．ヒトレシピエントにおけるブタからの移植片に対する寛容を誘導する方法であって、下記を含む、該方法：ブタのＭＨＣクラスII抗原をコードするＤＮＡをレシピエント哺乳動物の造血幹細胞に挿入し；該ＭＨＣ抗原をコードするＤＮＡをレシピエント中で発現させ；そして、該移植片をレシピエントに移植し、ここに、該移植片の幾つか又は実質的にすべての細胞は、レシピエントのＮＫ細胞媒介の攻撃を阻害するレシピエント種のクラスＩ遺伝子を発現する。１８．移植片組織が、ＨＬＡＡ、ＨＬＡＢ、又はＨＬＡＣ対立遺伝子の一つ以上を発現する、請求項１７に記載の方法。１９．移植片が、トランスジェニックヒトＨＬＡＡ、ＨＬＡＢ、ＨＬＡＣ又はＨＬＡＧ遺伝子の一つ以上を含むトランスジェニックブタに由来する、請求項１７に記載の方法。２０．ドナーブタから得た移植片に対するヒトレシピエントにおける寛容を誘導する方法であって、下記を含む、該方法：移植片の移植の前又は移植と同時に、レシピエントにブタの造血幹細胞を導入し；そして該移植片をレシピエントに移植し、但し、これらの幹細胞がレシピエントのＮＫ細胞媒介の攻撃を阻害するヒトのクラスＩ遺伝子を発現すること、或は、移植片の細胞の幾つか又は実質的にすべてがレシピエントのＮＫ細胞媒介の攻撃を阻害するヒトのクラスＩ遺伝子を発現することの一方又は両方を仮定する。２１．移植片組織が、ＨＬＡＡ、ＨＬＡＢ、ＨＬＡＣ又はＨＬＡＧ対立遺伝子の一つ以上を発現する、請求項２０に記載の方法。２２．移植片が、トランスジェニックヒトＨＬＡＡ、ＨＬＡＢ、ＨＬＡＣ又はＨＬＡＧ遺伝子の一つ以上を含むトランスジェニックブタに由来する、請求項２１に記載の方法。２３．ブタから得た移植片に対するヒトレシピエントにおける寛容を誘導する方法であって、下記を含む、該方法：移植片の移植の前又は移植と同時に、ブタの胸腺組織をレシピエントに導入し；そして移植片をレシピエントに移植し、但し、この胸腺組織がレシピエントのＮＫ細胞媒介の攻撃を阻害するヒトのクラスＩ遺伝子を発現すること、或は、移植片の細胞の幾つか又はすべてがレシピエントのＮＫ細胞媒介の攻撃を阻害するヒトのクラスＩ遺伝子を発現することの一方又は両方を仮定する。２４．胸腺又は移植片組織の一方又は両方が、ＨＬＡＡ、ＨＬＡＢ、ＨＬＡＣ又はＨＬＡＧ対立遺伝子の一つ以上を発現する、請求項２３に記載の方法。２５．胸腺又は移植片の一方又は両方が、トランスジェニックヒトＨＬＡＡ、ＨＬＡＢ、ＨＬＡＣ又はＨＬＡＧ遺伝子の一つ以上を含むトランスジェニックブタに由来する、請求項２３に記載の方法。２６．ブタの異種移植片組織のヒトによる受容を延長させる方法であって、下記を含む、該方法：レシピエントのＨＬＡＡ、ＨＬＡＢ、ＨＬＡＣ又はＨＬＡＧ表現型又は遺伝子型を測定し；レシピエントのＮＫ細胞に対する保護を与えるレシピエントのＨＬＡを発現するドナー組織を選択しそして該組織をレシピエントに移植する。２７．次を含むトランスジェニックブタのパネル：ヒトのＨＬＡＡ、ＨＬＡＢ、ＨＬＡＣ又はＨＬＡＧ遺伝子の第１の対立遺伝子を有する第１のトランスジェニックブタ、及び該ヒトＨＬＡＡ、ＨＬＡＢ、ＨＬＡＣ又はＨＬＡＧ遺伝子の第２の対立遺伝子を有する第２のトランスジェニックブタ。２８．前記の遺伝子が、ＨＬＡＣ遺伝子である、請求項２７に記載のパネル。２９．前記の第１の対立遺伝子が第１の反応性グループに由来し、前記の第２の対立遺伝子が第２の反応性グループに由来する、請求項２８に記載のパネル。３０．ＨＬＡＡ、ＨＬＡＢ、ＨＬＡＣ又はＨＬＡＧ遺伝子の一つ以上を含むトランスジーンを含む細胞を有するブタの臓器又は組織。３１．前記のトランスジーンが、反応性グループＩのメンバーであるＨＬＡＣ対立遺伝子をコードする、請求項３０に記載のブタの臓器又は組織。３２．前記のトランスジーンが、反応性グループIIのメンバーであるＨＬＡＣ対立遺伝子をコードする、請求項３１に記載のブタの臓器又は組織。３３．クラスＩＭＨＣ蛋白質を含む第２のトランスジーンを更に含む、請求項３０に記載のブタの臓器又は組織。３４．前記の第１のトランスジーンがグループ１のＨＬＡＣ対立遺伝子を含み且つ第２のトランスジーンがグループ２のＨＬＡＣ対立遺伝子を含む、請求項３２に記載のブタの臓器又は組織。３５．前記のトランスジーンが、クラスＩ蛋白質をコードする遺伝子の第１の対立遺伝子に由来する第１の部分及びそのクラスＩ蛋白質をコードする遺伝子の第２の対立遺伝子に由来する第２の部分を含むキメラのＨＬＡＣクラスＩ蛋白質を含む、請求項３０に記載のブタの臓器又は組織。３６．前記のトランスジーンが、７７位にセリンを有し且つ８０位にリジンを有するＨＬＡＣの対立遺伝子を含む、請求項３５に記載のブタの臓器又は組織。