JPS5810392B2 - Ｏａ↓−７６５３物質 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規な抗生物質に関する。

本発明物質は次の理化学的性質を有する点において特長
付けられる。

（１） 外観及び性状 白色粉末状晶 （２）溶解性 （３）比旋光度 （４）元素分析値 （５）電気泳動法による等電点 ｐＨ５〜６ 測定条件は次の通りである。

即ち予め１１の蒸留水にクエン酸６．００８ｇ、 ＫＨ２ＰＯ４３，８９３Ｓ’、Ｈ３ＰＯ４１，７６９ｒ
及び５・５−ジエチルバルビッル酸５．２６６ｆを溶解
し、０．２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液でｐＨを３．４．
５．６．７及び８に夫々調整した緩衝液と本発明物質を
水に溶解後スポットしたワットマンＮｏ、１ろ紙（ワッ
トマン社製）とを用いて本発明物質を３００■で４時間
電気泳動させその分析図を求める。

結果は第３図に曲線１として示す通りであり、このこと
より等電点がｐＨ５〜６に存在することが判る。

（６）赤外線吸収スペクトル分析（ＩＲ）ＫＢｒ 錠と
してのＩＲ分析図を第４図に示す。

第４図より主な吸収ピークは、３２８０ （Ｓ）、１６
６０（Ｓ）、１６４０（Ｓ）、 １５１５（Ｓ）、１４９０（Ｓ）、 １３９５（Ｓ）、１２３５（Ｓ）、 １１５０（ｍ）、１０６２（Ｓ）及び １０２０１０２０（Ｓ）に認められる。

（７）紫外線吸収スペクトル分析（ＵＶ）（ｔ）ｏ、
Ｉ Ｎ塩酸水溶液を溶媒とし、本発明物質の１ｍｇ／１
０ｒｕｌをセル長１函でＵＶ分析した結果は第５図の通
りである。

該図より２７８（１１）蒸留水を溶媒とし、上記（１）
と同様にＵＶ分析した結果は第６図に示す通りであり、
（１）と収が認められる。

（ｉｉ）ｏ、 Ｉ Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を溶媒と
し、本発明物質の０．５Ｉｎ９／１Ｏ１ｒＬｌをセル長
１ｃＩｒＬで匠分析した結果は第７図の通りである。

が認められる。

（８） 薄層クロマトグラフィー分析（ＴＬＣ）本発
明物質を水に溶解し、メルク社製［シリカゲル６０Ｆ２
５４ Ｊの薄層板を用いたＴＬＣ分析の結果は次の通り
である。

（１）展開溶媒：ブタノール−酢酸−水 （ｉｉ） 展開溶媒ニブロバノール−２Ｎアンモニア
（ｉｉｉ） 展開溶媒：クロロホルム−エタノール−
水（ＩＶ） 展開溶媒：エタノール−水 （９） ペーパークロマトグラフィー分析（ＰＣ）本
発明物質を水に溶解し、ワットマン社製ペーパークロマ
ト紙ワットマン／１６１を用いてＰＣ分析を行なった結
果は次の通りである。

（１）展開溶媒：ブタノール−酢酸−水 （１１）展開溶媒：ブタノール−ピリジン−水α０）本
発明物質を水に溶解し、上記ＴＬＣ分析におけるＴＬＣ
板上で行なった呈色反応の結果は次の通りである。

本発明物質はまたアミノ酸分析及びガスクロマトグラフ
ィー分析の結果より、その構成成分のひとつとしてグル
タミン酸を１雫中に０．５８μモル及ヒクルコースヲｉ
ｙｖ中に０．６４μモル含有していることが認められた
。

本発明物質は、また抗菌作用を有する点において特長付
けられる。

その種々の菌に対する抗菌作用は寒天希釈平板法〔培地
ニハード インフュージョン（栄研化学社製）、インキ
ュベーション：３７℃、１８時間〕により最小発育阻止
濃度（ＭＩＣ） を求めることにより決定される。

決定された結果は下記第１表に示す通りである。

更に本発明物質を体重２０〜２１７のＤＤ系雄マウスを
用いて静脈内投与により、その急性毒性を調べた結果、
１５００ｍｇ／ｋｇの投与量において死亡例は認められ
ず、また全生存例についての剖検の結果各臓器への著明
な影響は認められなかった。

以上の理化学的性質、薬理試験結果並びに後述する本発
明化合物の起源等を総合すると、本発明化合物は、公知
の抗生物質バンコマイシン（Ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ ）
ＣＳｈｉｏｎｏｇｉｓ Ａｎｎ、Ｒｅｐ、、第７巻
第４６５頁（１９５７）、ＡｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓＡ皿
、、１９５７〜１９５８．９０６頁（１９５８）、Ｊｏ
Ｍｅｄ、Ｃｈｅｍ、第８巻第１８頁（１９６５）、Ａｎ
ｔｉｂｉｏｔｉｃｓ Ａｎｎ、、１９５５〜１９５６゜
６０６頁（１９５６）、］に最も近似すると考えられる
。

しかしながらバンコマイシンは後述する通りストレプト
マイセス・オリエンタリス （Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ
）より生産される点、上記各文献に示される通りニンヒ
ドリン呈色反応及びエーリツヒ呈色反応に夫々陰性を示
す点、バンコマイシン塩酸塩としての電気泳動分析の結
果第３図曲線２として示す通りｐＨ７〜８に等電点を有
する点、前述の（８）項（ｉｌ）〜０■の展開溶媒を用
いたＴＬＣ分析の結果、バンコマイシン塩酸塩が第８図
〜第１０図にＡとして示したスポットを有する点（各図
においてＢは本発明物質を水に溶解して上記と一時に展
開した時のスポットを示す）並びに体重２０〜２１ｇの
ＤＤ系雄マウスを用いて静脈内投与により急性毒性試験
を行なった結果ＬＤ５ｏ−４００〜５００ｒｎ９／ｋｇ
を示す点ニオイテ、本発明物質とは明確に区別される。

しかもバンコマイシンは、Ｊ、Ｍｅ４．Ｃｈｅｍ、、第
８巻第１８頁（１９６５）に示される通りその構成成分
としてアスパラギン酸は有するが、グルタミン酸を有し
ておらず、この面からも本発明物質は、該バンコマイシ
ンとは別異の化合物であると同定された。

更に本発明者らは、本発明物質と同様に微生物殊にスト
レプトマイセス属に属する微生物をその起源とする公知
の各種抗生物質と本発明物質とを対比したが上記バンコ
マイシン以外には本発明物質に近似すると考えられる抗
生物質は見い出されなかった。

従って本発明の物質０Ａ−７６５３物質を新規な化合物
と同定した。

本発明の新規な物質０Ａ−７６５３物質は、ストレフト
マイセス バイグロスコピカス （５ｔｒｅｐｔｏ −ｍｙｃｅｓ ｈｙｇｒｏｓｃｏｐ
ｉｃｕｓ ）に属する菌株を利用して製造される。

上記菌株は、本発明者らにより徳島県海部郡日和佐町の
土壌より分離されたものであり、以下に述べる特徴を有
し新しい菌株と同定される。

■ 形態 本菌株をグリセリンーアスノくラギン寒天培地にて２８
℃で１４日間培養した場合の顕微鏡写真（倍率８００倍
）を第１図に、またオートミル寒天培地にて２８℃で１
４日間培養した場合の顕微鏡写真（培率９０００倍）を
第２図に示す。

２等各図より本菌株の胞子形成菌糸は、気中菌糸中に形
成された長い主軸から単純分枝して、末端に２〜３巻の
螺旋形を形成することが判る。

稀に長い主軸を形成せず不規則に複雑分枝している場合
も見られる。

また走査型電子顕微鏡による観察において胞子表面の構
造は平滑で、胞子は円筒形乃至長楕円形であることが認
められた。

胞子の大きさは約０．７〜１．ＯＸｏ、７〜１．６ミク
ロンであり、胞子は通常１５〜４０個の連鎖をなしてい
る。

■ 培養所見 （１）イースト・麦芽寒天培地 （イ）生育良好。

ひどくしわがよる。（ロ）気中菌糸は普通、粉状、カバ
ード タン（ｃｏｖｅｒｔ ｔａｎ、 ２ ｇｅ ）〜
白色。

（ハ）基土菌糸の裏面はライト ウイート（ｌｉｇｈｔ
ｗｈｅａｔ １２ ｅａ ） 。

に）可溶性色素はノ・ニー ゴールド （ｈｏｎｅｙ ｇｏｌｄ １２ ｉｃ ）。

（２）オートミール寒天培地 （イ）生育普通 （ロ）気中菌糸は豊富、粉状、ベージュ （ｂｅｉｇｅ、３ｇｅ）。

その後黒色の湿潤部分が多数生じ全体に広がる。

（／Ｊ 基土菌糸の裏面はライト ベージュ（ｌｉｇｈ
ｔ ｂｅｉｇｅ 、 ３ ｅｃ ）。

に）可溶性色素はノ・ニーゴールド （ｈｏｎｅｙ ｇｏｌｄ、 ２ ｉｅ ）（３）無機塩
・スターチ寒天培地 （（） 生育良好。

（ロ）気中菌糸は豊富、粉状、カバード グレー （ｃ
ｏｖｅｒｔ ｇｒａｙ、２ｆｅ）。

その後黒色の湿潤部分が多数生じ全体に広がる。

（／９ 基土菌糸の裏面はダル ゴールド（ｄｕｌｌ
ｇｏｌｄ、 ２ ｎｇ）。

に）可溶性色素はライト シトロン グレー（ｌｉｇｈ
ｔ ｃｉｔｒｏｎ ｇｒａｙ 、 １ ｅｃ ） 。

（４）クリセリン・アスパラギン寒天培地（イ）生育良
好。

（ロ）気中菌糸は豊富、粉状、ベージュ （ｂｅｉｇｅ、３ ｇｅ ）。

その後黒色ノ湿潤部分が多数生じ全体に広がる。

（ハ）基土菌糸の裏面はゴールド （ｇｏｌｄ 、 １３Ａｌｃ ）。

に）可溶性色素はベール イエロー （ｐａｌｅ ｙｅｌｌｏｗ、 １ ｃａ ）。

（５）ペプトン・イースト・鉄寒天培地 （イ）生育普通。

ややしわがよる。（ロ）気中菌糸は産生じない。

ｅ→ 基土菌糸の裏面はクリーム （ｃｒｅａｍ、 １３Ａｃａ ）。

に）可溶性色素は産生じない。

（６〕 チロシン寒天培地 （イ〕 生育良好。

ややしわがよる。（吻 気中菌糸は豊富、粉状、カバー
ド グレー （ｃｏｖｅｒｔ ｇｒａｙ、 ２ ｆｅ
’）。

その後黒色の湿潤部分が生じ全体に広がる。

（ハ）基土菌糸の裏面はゴールド （に）可溶性色素はノ・ニー ゴールド （ｈｏｎｅｙ ｇｏｌｄ、 ２ ｉｃ ）。

（７）シュークロース・硝酸塩寒天培地 （イ）生育良好。

平坦。（ロ）気中菌糸は産生じない。

（／Ｊ 基土菌糸の裏面はシトロン イエロー（ｃｉｔ
ｒｏｎ ｙｅｌｌｏｗ、 １１ｃ ）。

（に）可溶性色素はカナリヤ イエロー （ｃａｎａｒｙ ｙｅｌｌｏｗｌｌ ｅａ ）。

（８）グルコース・アスパラギン寒天培地印 生育普通
。

仲）気中菌糸は豊富、粉状、カバード グレ１５− （
ｃａｖｅｒｔ ｇｒａｙ、２ｆｅ）。

その後周辺から黒褐色がかった緑色の部分が生じ全体に
広がる。

ｅ→ 基土菌糸の裏面はゴールド （ｇｏｌｄ、１３Ａｌｃ ）。

に）可溶性色素はクリーム（ｃｒｅａｍ、１３１２ ｃ
ａ ）。

（９）栄養寒天培地 （（１）生育普通。

（Ｏ）気中菌糸は産生じない。

（／→ 基土菌糸の裏面はイエロー ティント２！（ｙ
ｅｌｌｏｗ ｔｉｎｔ 、 １ ｂａ ）。

に）可溶性色素は産生じない。

（ＩＩ マレイン酸カルシウム寒天培地（イ）生育普
通。

平坦。（ロ）気中菌糸は産出しない。

（ハ）基土菌糸の裏面はカナリヤ イエロー（ｃａｎａ
ｒｙ ｙｅｌｌｏｗ、 １ ｅａ ）。

（に）可溶性色素は産生じない。

Ｕυ ベネット氏寒天培地 （イ）生育良好。

しわがよる。（ロ）気中菌糸は豊富、粉状、シルバー
グレー （５ｉｌｖｅｒ ｇｒａｙ、 ３ ｆｅ ）。

その後黒色の湿潤部分が生じ全体に広がる。

（／ｊ 基土菌糸の裏面はマスタード （ｍｕｓｔａｒｄ、 ２１ｅ ）。

に）可溶性色素はライト アンティック ゴールド（ｌ
ｉｇｈｔ ａｎｔｉｑｕｅ ｇｏｌｄ１１％ｉｃ ）。

尚上記各培養はすべて２８℃で２１日間で行なつバもの
であり、色の表示はカラー ・・−モ：−マ、：：ユア
ル（Ｃｏ１ｏｒ Ｈａｒｍｏｎｙ Ｍａｎｕａｌ ）〔
コンテイナー コーポレーション オブ アメリカ（Ｃ
ｏｎｔａｉｎｅｒ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ ｏｆＡｍ
ｅｒｉｃａ ） 〕 を参照した。

■ 生理学的性質 （１）至適生育温度 ２′８〜３０℃ （１０℃以下及び４５℃以上で生育せず）（２）至適生
育ｐＨ６，５〜８．５ （ｐＨ４，０以下及びｐＨ１１，０以上で生育せず） （３）ゼラチンの液化 陰性 （４）スターチの加水分解 陽性 （５）脱脂牛乳の凝固 陰性 （６）脱脂牛乳のペプトン化 陽性（酸性）（７）硝酸
塩還元作用 陰性 （８） メラニン様色素の生成 陰性 （９）耐塩性 ７％で生育 １０％で生育せず （１０） 炭素源の利用能 ■ 細胞壁タイプ レチェバリエル（Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｅｒ ）らによる
分類に従う細胞壁タイプは、■型（ＬＬ−ジアミノピメ
リン酸）である。

以上の菌学的性状を基準として本菌株の分類学上の位置
の検索を行なった結果は次の通りである。

トレスナー等ＣＨ，Ｄ、 Ｔｒｅｓｎｅｒ ａｎｄ Ｅ
、 Ｊ。

Ｂａｃｋｕｅ、 Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ
ｏｇｙ、 ４．２４３〜２５０（１９５６）］によれば
、本菌株はストレプトマイセス・バイグロスコピカスに
属するための基本的な三つの特徴即ち胞子形成菌糸は気
中菌糸の長い主鎖から短い側枝として分枝し、末端に２
巻以上の螺旋状を形成すること、気中菌糸の成熟した色
が褐色がかった灰色（ｂｒｏｗｎｉｓｈ −ｇｒａｙ
） であること及びはっきりとした黒い湿潤（１１ｙ
ｇｒｏｓｃｏｐｉｃ ）状態を示すこと、を具備してい
る。

また本菌株は下記各種の文献による検索からもストレプ
トマイセス バイグロスコピカスに属するものと同定さ
れる。

０バー′シーズ・マニュアル・オブ・デイターミネイテ
ィブ・バクテリオロジー第８版（１９７４年）、 ０ワツクスマン著、ジ・アクチノミセーテス（Ｔｈｅ
Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ ）第２巻（１９６１年）
、Ｏインターナショナル・ジャーナル・オブ・システマ
ティツク・バクテリオロジー （Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ
Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ ）
、第１８巻第６９〜１８９頁（１９６８年）、同第１
８巻第２７９〜３９２頁（１９６８年）、同第１９巻第
３９１〜５１２頁（１９６９年）及び同第２２巻第２６
５〜３９４頁（１９７２年）。

従って本菌株を代表的菌株であるストレプトマイセス
バイグロスコピカス（ジャンセン） ワックスマン ア
ンド ヘンリッチ ＣＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃ
ｕｓ （Ｊａｎｓｅｎ ）、Ｗａｋｓｍａｎ ａｎｄ
Ｈｅｎｒｉｃｉ（１９４８〕及びＩＳＰ標準株であるス
トレプトマイセス バイグロスコピカス １５Ｐ５５７
８と比較して下記第２表に示す結果を得た。

尚表中＋は陽性又は利用するを、−は陰性又は利用しな
いを夫々示す。

上記表より本菌株はストレプトマイセス バイグロスコ
ピカス（ジャンセン）と比較して、ゼラチンの液化にお
いて明確に区別される。

また本菌株はシュークロース・硝酸塩寒天培地及び栄養
寒天培地上での気中菌糸着生能がないのに対し上記ジャ
ンセン株は気中菌糸を着生する点においても異なってい
る。

更に本菌株はこれをＩＳＰ標準株と対比すると胞子表面
の状態及び炭素源の利用性において明らかに異なってい
る。

以上の通り本菌株は上記公知のバイグロスコピカス種の
菌とは異なるため、更に前記バーシーズ（第８版）に記
載のバイグロスコピカス種の４種の亜種との比較検討を
行なった。

結果を下記第３表に示す。

尚各亜種の理化学的性状は次の文献によった。

伸種１：ストレプトマイセス バイグロスコピカス サ
ブスピーシーズ アングストミセ ティカス（Ｓ ｔ 、 ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ
５ｕｂｓｐ 。

ａｎｇｕｓｔｍｙｃｅｔｉｃｕｓ ） ザ ジャーナル オブ アンアイバイオティックス シ
リーズＡ （Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ
＋＜ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ 、 Ｓｅｒ 、Ａ ）
第７巻第１１６〜１１９頁（１９５４）。

亜種２：ストレプトマイセス バイグロスコピカニ サ
ブスピーシーズ デコイカス （Ｓｔ 、 ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ ５ｕｂｓｐ
。

ｄｅｃｏｙｉｃｕｓ ） アンティバイオティックス アンド ヶモテラピー（Ａ
ｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ ａｎｄ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａ
ｐｙ ）第９巻第４２７〜４３１頁（１９５７）。

亜種３：ストレプトマイセス バイグロスコピカスサブ
スピーシーズ グレボサス（Ｓｔ。

ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ ５ｕｂｓｐ、 ｇｌｅｂ
ｏｓｕｓ ）ザ ジャーナル オブ アンティバイオテ
ィックス シリーズＡ、第１５巻第２１〜２７頁（１９
６２）。

亜種４：ストレプトマイセス バイグロスコピガス サ
ブスピーシーズ オサマイセテイ カス（Ｓｔ 、ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ ５ｕｂｓ
ｐ。

ｏｓｓａｍｙｃｅｔｉｃｕｓ ） ザ ジャーナル オブ アンティバイオティックス シ
リーズＡ 第１８巻第８２〜８８頁（１９６５）。

尚表中＋及び−は上記第２表と同じ意味を有する。

上記第３表より本菌株は亜種４と対比して炭素源の利用
性において一致するが、メラニン様色素の生成、樹脂孔
のペプトン化及び硝酸塩の還元性において明確に区別さ
れ、また亜種１〜３とは炭素源の利用性において明らか
に区別される。

以上のことより本菌株はストレプトマイセスバイグロス
コピカスに属するが、公知のいずれの種及び亜種に属す
る菌とも区別されることが明白である。

また公知のいかなる種及び亜種に属する菌からも本発明
に係る如き抗生物質が単離された例は認められない。

従って本発明者らは本菌株を新菌株と認め、これをスト
レプトミセス バイグロスコピカス サブスピーシーズ
ヒワサエンシスＦ Ｂ−５（Ｓｔ 、ｈｙｇｒｏｓｃ
ｏｐｉｃｕｓ ５ｕｂｓｐ。

ｈｉ ｗａｓａ −ｅｎｓｉｓ Ｆ Ｂ −５）と命名
し、これを工業技術院微生物工業技術研究所に、微生物
保管委託申請した。

これは微工研菌寄第４５７３号（ＦＥＲＭ−Ｐ Ａ４
５７３）として受託されている。

尚本発明の抗生物質の０Ａ−７６５３物質と最も近似す
ると考えられたバンコマイシンの生産株であるストレプ
トマイセス オリエンタリスは、インターナショナル
ジャーナル オブ システマテイツク バクテリオロジ
ー第１８巻第１５４頁（１９６８年）、及びワックスマ
ン著ジアクチノミセーテス第２巻第２５４頁（１９６１
年）に記載される通り、気中菌糸が螺旋状形態をとらず
、気中菌糸の色がイースト・麦芽寒天培地及びグリセロ
ール・アスパラギン寒天培地において共に白色系統であ
り、また無機塩・スターチ寒天培地においても白色又は
灰色系統であり、更にオートミール寒天培地においては
気中菌糸の着生が微かであることより、本発明で利用す
る微生物とは全（その性状を異にする別異の菌種である
。

本発明の抗生物質０Ａ−７６５３は、上記ストレプトマ
イセス バイグロスコピカス サブスピーシーズ ヒワ
サエンシス ＦＢ−５を培地に培養することにより、そ
の培養物から単離収得される。

上記菌株の、培養は通常の液体培養又は固体培養により
行なわれる。

好ましくは液体培地中での振とう培養又は深部通気攪拌
培養法を採用できる。

培地組成は通常の放線菌の培養に一般に用いられるもの
でよい。

炭素源としては例えばデンプン、グルコース、グリセリ
ン等を、また窒素源としては大豆粉、ペプトン、肉エキ
ス、綿実粉、硫酸アンモン、硝酸ソーダ等の通常の無機
塩等を例示できる。

更に培地には必要に応じ例えば食塩、炭酸カルシウム、
リン酸塩、硫酸マグネシウム等の無機塩を適宜に添加す
ることができる。

培養に際し培地ｐＨは６．５〜７．５に、また培養温度
は２８〜３０℃とするのが好ましく、液体培養において
は、本発明物質の生産蓄積量は培養開始７２時間程度で
略々最大となる。

培養液中に生産蓄積される本発明物質の採取は、該物質
の理化学的性質等を利用する通常の方法に従い実施でき
る。

例えばイオン交換樹脂、シリカゲル、セファデックス（
生化学工業社製品）、活性炭等の数差親和力の差や二液
相間の分配率の差を利用する方法又はこれらの組み合せ
により実施できる。

更に具体的には、上記で得た培養液をろ過もしくは遠心
分離により菌体を除去し、得られる上澄液を活性炭カラ
ムクロマトグラフィー、ダウエックス５０ＷＸ ４ （
Ｄｏｗｅｘ ５０ＷＸ ４ ）カラムクロマトグラフィ
ー、エクテオラセルロースカラムクロマトグラフイー、
ダウエックス５０Ｗカラムクロマトグラフイー及びシリ
カゲルカラムクロマトグラフィーの順に溶出させて、活
性画分を集め溶媒を留去すればよい。

かくして本発明の抗生物質０Ａ−７６５３物質を単離収
得できる。

以下本発明を更に詳しく説明するため実施例を挙げる。

実施例 １ ストレプトマイセス バイグロスコピカス サブスピー
シーズ ヒワサエンシスＦ Ｂ −５株ヲ、デンプン１
％、グルコース０．５％、グリセリン０．５％、大豆粉
０．５％、肉エキス〔和光肉エキス（ながす鯨＋かつお
肉）和光社製〕０．３％、ポリペプトン（大玉栄養化学
社製）０．３％、食塩０．５％、炭酸カルシウム０．３
％及び蒸留水から成るｐＨ７の液体培地に接種し、２８
℃で４８時間培養し、種培養とする。

次に３０１容のステンレススチール製培養槽で種培養と
同じ組成の培地２０１に、前記種培養を１％の割合で接
種し、２８℃で７２時間通気攪拌培養する。

通気量は２０１／分、ベラ回転数は３００回／分とする
。

培養終了後培養液を遠心分離し菌体を除去したのち、ろ
液１８１を活性炭カラムに吸着させ、水洗後２Ｎアンモ
ニア水溶液：メタノール−１：１（Ｖ／Ｖ）１．５Ｊで
溶出する。

溶出液のアンモニア及びメタノールを減圧留去し、残液
を２Ｎ塩酸水溶液でｐＨ＝３に調整したのち、ダウエッ
クス５０ＷＸ４ （Ｎａ十タイプ）に吸着させる。

水洗後０．１モルリン酸緩衝液（ｐＨ＝７．０ ） １
１及び０．１モルカーボネート緩衝液（ｐＨ＝１０．０
）ｌｌ中に１モルのＮａＣ１を溶解させた液でグラディ
エンド（ｇｒａｄｉｅｎｔ ）溶出を行なう。

溶出液の抗菌活性画分を集め、蒸留水で２倍に希釈後２
Ｎ塩酸水溶液でｐＨ＝３に調整したのちダウエックス５
０ＷＸ ４ （ＮＨ，十タイプ）に吸着させる。

水洗後０．１モルアンモニア水溶液５００ｍ１で溶出す
る。

溶出液の抗菌活性画分を集め、アンモニアを減圧除去し
、次いで残液をＩＮ水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ＝８
．０に調整したのち、エクテオラセルロース（Ｃ１−タ
イプ）（ワットマン社製）に吸着させる。

水洗後蒸留水１１及び１モル食塩水溶ｇ！ｉ、１１でグ
ラディエンド溶出を行なう。

溶出液の抗菌活性画分を集め、０．２Ｎ塩酸水溶液でｐ
Ｈ＝３に調整したのち、ダウエックス５０ＷＸ４（ＮＨ
，十タイプ）に吸着させる。

水洗後０． Ｉ Ｎアンモニア水溶液５００７７Ｌｌで
溶出したのち抗菌活性画分を集め、溶媒を減圧下に濃縮
し、シリカゲル〔ワコウゲルＣ２００（和光社製）１３
．（ｌを加え減圧下に乾固する。

次に９０％エタノール水溶液２９ｍ１に懸濁してシリカ
ゲルカラム（ワコウゲルＣ２００）上にのせ９０％エタ
ノール水溶液１００ｍ１で洗浄後、７０％エタノール水
溶液５００ｍ１で溶出する。

溶出液の抗菌活性画分を集め、減圧下濃縮後凍結乾燥し
、白色粉末状晶の本発明物質０Ａ−７６５３物質１ｇを
得る。

得られた０Ａ−７６５３物質の理化学的性質は前述した
通りである。

【図面の簡単な説明】

第１図及び第２図は本発明の０Ａ−７６５３物質を製造
するために用いるストレプトマイセスバイグロスコピカ
ス サブスピーシーズ ヒワサエンシス ＦＢ−５の顕
微鏡写真、第３図は本発明０Ａ−７６５３物質及び対照
物質とするバンコマイシンの電気泳動分析図、第４図は
本発明物質のＩＲ分析図、第５図乃至第７図は本発明物
質のＵＶ分析図、及び第８図乃至第１０図は本発明物質
及びバンコマイシン塩酸塩のＴＬＣ分析図を夫夫示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ （ａ） ０．ＩＮ塩酸水溶液に難溶、メタノー
   ル、エタノール、ブタノール、アセトン及び酢酸エチル
   に不溶、０．ＩＮ水酸化ナトリウム水溶液に可溶で、 （ｂ） 沃素呈色反応、ニンヒドリン呈色反応、モー
   リッシュ呈色反応及びエールリッヒ呈色反応に陽性で、 ０．２１９、水）を示し、 （ｄ） 元素分析における水素、炭素及び窒素の測定
   値がＣ４６，１０％、Ｈ４，４７％及びＨ７，１８％を
   示し、 （ｅ）電気泳動法による等電点がｐＨ５〜６に存在し、 （ｆ）ＫＢｒ錠としての赤外線吸収スペクトル分析にお
   いて、３２８０（Ｓ）、１６６０（Ｓ）、１６４０（Ｓ
   ）、１５１５（Ｓ）、 １４９０（Ｓ）、１３９５（Ｓ）、 １２３５（Ｓ）、１１５０（ｍ）、 １０６２（Ｓ）及び１０２０１０２０（Ｓ）に主な吸収
   を示し、 （ｇ）紫外線吸収スペクトル分析において、０．１ Ｎ
   塩酸水溶液を溶媒として２７８ｍμに、蒸留水を溶媒と
   して２７８ｍμに、及び０． Ｉ Ｎ水酸化ナトリウム
   水溶液を溶媒として２９８ｍμに夫夫極大吸収を示し、 （ｈ） シリカゲル薄層クロマトグラフィー分析にお
   いて、ブタノール−酢酸−水（容積比４：１：１）を展
   開溶媒としてＲｆ＝０、プロパノ−ルー２Ｎアンモニア
   水溶液（容積比７：３）を展開溶媒としてＲｆ＝０、ク
   ロロホルム−エタノール−水（容積比４ニア：２）を展
   開溶媒としてＲｆ＝０．４５及びエタノール−水（容積
   比７：３）を展開溶媒としてＲｆ＝０．８を示し、（ｉ
   ） ペーパークロマトグラフィー分析において、ブタ
   ノール−酢酸−水（容積比４：３ニア）を展開溶媒とし
   てＲｆ＝０．８３及びブタノール−ピリジン−水（容積
   比４：３ニア）を展開溶媒としてＲｆ＝０．７６を示す
   物質であつは、構成成分のひとつとしてグルタミン酸及
   びグルコースを有することを特徴とする０Ａ−７６５３
   物質。