JPS58113754A - 人工担体の製造方法 - Google Patents
人工担体の製造方法Info
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- JPS58113754A JPS58113754A JP20986881A JP20986881A JPS58113754A JP S58113754 A JPS58113754 A JP S58113754A JP 20986881 A JP20986881 A JP 20986881A JP 20986881 A JP20986881 A JP 20986881A JP S58113754 A JPS58113754 A JP S58113754A
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- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/544—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being organic
- G01N33/548—Carbohydrates, e.g. dextran
-
- G—PHYSICS
- G03—PHOTOGRAPHY; CINEMATOGRAPHY; ANALOGOUS TECHNIQUES USING WAVES OTHER THAN OPTICAL WAVES; ELECTROGRAPHY; HOLOGRAPHY
- G03C—PHOTOSENSITIVE MATERIALS FOR PHOTOGRAPHIC PURPOSES; PHOTOGRAPHIC PROCESSES, e.g. CINE, X-RAY, COLOUR, STEREO-PHOTOGRAPHIC PROCESSES; AUXILIARY PROCESSES IN PHOTOGRAPHY
- G03C1/00—Photosensitive materials
- G03C1/005—Silver halide emulsions; Preparation thereof; Physical treatment thereof; Incorporation of additives therein
- G03C1/04—Silver halide emulsions; Preparation thereof; Physical treatment thereof; Incorporation of additives therein with macromolecular additives; with layer-forming substances
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
定などに広く利用しうる新規な人工担体の製造方法の改
良に関する。抗原、抗体反応を利用する臨床検査等の分
野において、抗原まだは抗体をある適当な大きさの粒子
を担体とし−てそれに吸着もしくは結合させ、それ゛ぞ
れに対応する抗体または抗原の存在によってこの感作さ
れだ担体の凝集を起させる方法は間接受身凝集反応と呼
ばれている。
良に関する。抗原、抗体反応を利用する臨床検査等の分
野において、抗原まだは抗体をある適当な大きさの粒子
を担体とし−てそれに吸着もしくは結合させ、それ゛ぞ
れに対応する抗体または抗原の存在によってこの感作さ
れだ担体の凝集を起させる方法は間接受身凝集反応と呼
ばれている。
そして、この間接受身凝集反応は被検液中の抗体や抗原
を高感度に検出できるので、いろいろの疾患の血清学的
診断に広く用いられている。
を高感度に検出できるので、いろいろの疾患の血清学的
診断に広く用いられている。
この反応に用，いられる担体としては、ポリスチレンラ
テックス、カオリン、炭末などの非生物学的粒子と、動
物赤血球、細菌菌体のような生物学的粒子とがあ・る。
テックス、カオリン、炭末などの非生物学的粒子と、動
物赤血球、細菌菌体のような生物学的粒子とがあ・る。
一般に非生物学的粒体の担体は、化学的に安定で、それ
自身抗原活性を有しないなどの利点はあるが、抗原ある
いは抗体が密に吸着されにくいという欠点がある。たと
えば、保存のために凍結乾燥すると抗原や抗体が担体か
ら遊離してしまうのである。そのために、やむなく液体
中で冷暗所に保存するという手段がとられているが、そ
の結果長期間保存することができない。また、非生物学
的担体のうち、炭末とカオリンは一定の大きさの粒子を
選出することが困難であ抄、ポリスチレンラテックスは
反応の媒質として望ましい中性域では非特異凝集である
自然凝集をおこす危険がある。
自身抗原活性を有しないなどの利点はあるが、抗原ある
いは抗体が密に吸着されにくいという欠点がある。たと
えば、保存のために凍結乾燥すると抗原や抗体が担体か
ら遊離してしまうのである。そのために、やむなく液体
中で冷暗所に保存するという手段がとられているが、そ
の結果長期間保存することができない。また、非生物学
的担体のうち、炭末とカオリンは一定の大きさの粒子を
選出することが困難であ抄、ポリスチレンラテックスは
反応の媒質として望ましい中性域では非特異凝集である
自然凝集をおこす危険がある。
一方、生物学的担体である動物赤血球や細菌菌体はそれ
ぞれの大きさが一定であるという利点はあるものの、生
物の種類によって粒子の大きさは定まっており、目的に
応じた任意の大きさの粒子を得ることはできなり０たと
えば、動物赤血球は大きさの一定した最も入手しゃすい
担体であるが、血球表面に固有の抗原を有しており、抗
体との間で非特異凝集反応である交差反応を起こして目
的とする凝集反応に誤まりを与える可能性がある。
ぞれの大きさが一定であるという利点はあるものの、生
物の種類によって粒子の大きさは定まっており、目的に
応じた任意の大きさの粒子を得ることはできなり０たと
えば、動物赤血球は大きさの一定した最も入手しゃすい
担体であるが、血球表面に固有の抗原を有しており、抗
体との間で非特異凝集反応である交差反応を起こして目
的とする凝集反応に誤まりを与える可能性がある。
さらに、赤血球の生物学的、化学的および物理的特性値
が動物の個体間でばらついてしまって常に一定品質の血
球を入手することが難しいという欠点がある。
が動物の個体間でばらついてしまって常に一定品質の血
球を入手することが難しいという欠点がある。
本発明者らはこれらの欠点のないすぐれた担体を開発す
べく種々検討の結果、ゼラチン、水溶性□ 多糖類、およびポリメタリン酸ナトリウムを含み、水と
アルコール等の混合物を溶媒とする溶液を攪拌下で一調
整することによって粒子を析出させ、この粒子をアルデ
ヒド系架橋剤で処理して不溶化すれば、従来の欠点を尽
く解消したすぐれた担体が得られることを見出し、この
内容を既に特許出願した。この方法においては生成した
粒子の凝集を防止するために一調整後に界面活性剤を添
加していたが、本発明者らはその後さらに研究を進めた
結果、界面活性剤を一調整前に添加すれは担体の収量が
大巾に増加することを見出し、これに基いて本発明を完
成する忙到った。、ｔなわち本発明は、ゼラチン、水溶
性多糖類、ポリメタリン酸ナトリウム、親水性有機溶媒
、および水を含み、温度がゼラチンのゲル化温度以上で
ある溶液を、攪拌しつつ酸を加えてｐＨ２，５〜６．０
に調整し、その後アルデヒド系架橋剤を作用せしめて不
溶化する人工担体の製造方法において、前記の一調整を
行なうまえに陰イオン系または非イオン系の界面活性剤
を前記溶液に含有させておくことを特徴とする人工担体
の製造方法に関するものである。
べく種々検討の結果、ゼラチン、水溶性□ 多糖類、およびポリメタリン酸ナトリウムを含み、水と
アルコール等の混合物を溶媒とする溶液を攪拌下で一調
整することによって粒子を析出させ、この粒子をアルデ
ヒド系架橋剤で処理して不溶化すれば、従来の欠点を尽
く解消したすぐれた担体が得られることを見出し、この
内容を既に特許出願した。この方法においては生成した
粒子の凝集を防止するために一調整後に界面活性剤を添
加していたが、本発明者らはその後さらに研究を進めた
結果、界面活性剤を一調整前に添加すれは担体の収量が
大巾に増加することを見出し、これに基いて本発明を完
成する忙到った。、ｔなわち本発明は、ゼラチン、水溶
性多糖類、ポリメタリン酸ナトリウム、親水性有機溶媒
、および水を含み、温度がゼラチンのゲル化温度以上で
ある溶液を、攪拌しつつ酸を加えてｐＨ２，５〜６．０
に調整し、その後アルデヒド系架橋剤を作用せしめて不
溶化する人工担体の製造方法において、前記の一調整を
行なうまえに陰イオン系または非イオン系の界面活性剤
を前記溶液に含有させておくことを特徴とする人工担体
の製造方法に関するものである。
本発明に使用するゼラチンは通常は市販品をそのまま用
いればよい。市販品のなかでは酸性ゼラチンが好ましい
。
いればよい。市販品のなかでは酸性ゼラチンが好ましい
。
水溶性多糖類は増粘剤または糊料として使用しうるもの
であり、多糖類の誘導体および塩も含まれる。例として
は、アラビアゴム、カルボキシメチルセルロース、アル
ギン酸ナトリウム、寒天、カラダーナンなどを挙げるこ
とができるが、特にアラビアゴムが好適である。
であり、多糖類の誘導体および塩も含まれる。例として
は、アラビアゴム、カルボキシメチルセルロース、アル
ギン酸ナトリウム、寒天、カラダーナンなどを挙げるこ
とができるが、特にアラビアゴムが好適である。
ポリメタリン酸ナトリウムは化学式（ＮａＰｏ５）ｎで
表わされる物質であり、たとえば四メタリン酸ナトリウ
ム、ヘキサメタリン酸ナトリウムの如きものである。
表わされる物質であり、たとえば四メタリン酸ナトリウ
ム、ヘキサメタリン酸ナトリウムの如きものである。
親水性有機溶媒としては、低級アルコール、たと、ｔｔ
ｆ／チルアルコール、エチルアルコール、クロビルアル
コール等、およびア七トンなどを用いることができる。
ｆ／チルアルコール、エチルアルコール、クロビルアル
コール等、およびア七トンなどを用いることができる。
そのほかのものとしては、担体を着色する場合には、着
色剤を粒子形成前に溶液に加えておくのがよい。着色を
必要とする例としては、本発明品を間接受身凝集反応の
担体として用いる場合を挙げることができる。すなわち
、本発明品は通常は無色不透明であるところから、これ
を着色することによって凝集像の判定を容易にすること
ができる。着色剤としては、たとえば食用赤色３号、ロ
ーダミン、ローズベンガル、／メソ−３Ｒ，ｙｌ？ルド
ーＳ１フクシン、エオシン、および二ミートラルレッド
などの赤色色素、あるいはクリスタルバイオレット、ト
ルイジンブルーおよびメチジ／ブルーなどの青色色素等
を用いうる。しかしながら、リアクティ！・レッド、ダ
イレクト・ブルーなどの反応性染料で着色すれば色落ち
しないことから、反応性染料が特に好適である。着色剤
以外にも目的に応じ種々の物質を添加してもよいことは
いうまでもない。
色剤を粒子形成前に溶液に加えておくのがよい。着色を
必要とする例としては、本発明品を間接受身凝集反応の
担体として用いる場合を挙げることができる。すなわち
、本発明品は通常は無色不透明であるところから、これ
を着色することによって凝集像の判定を容易にすること
ができる。着色剤としては、たとえば食用赤色３号、ロ
ーダミン、ローズベンガル、／メソ−３Ｒ，ｙｌ？ルド
ーＳ１フクシン、エオシン、および二ミートラルレッド
などの赤色色素、あるいはクリスタルバイオレット、ト
ルイジンブルーおよびメチジ／ブルーなどの青色色素等
を用いうる。しかしながら、リアクティ！・レッド、ダ
イレクト・ブルーなどの反応性染料で着色すれば色落ち
しないことから、反応性染料が特に好適である。着色剤
以外にも目的に応じ種々の物質を添加してもよいことは
いうまでもない。
一調整前の溶液におけるこれら各物質の濃度としては、
ゼラチ１０．０１〜２−程度、好ましくは０．０５〜１
．０％程度、水溶性多糖類０．０１〜２チ程度、好まし
くは０．０５〜１．０’ｊ程度、そして親水性有機溶媒
は４〜２５容量優程度である。／’Ｊメタリン酸ナトリ
ウムはゼラチン乾燥重量の３〜１５％程度を含有させる
ようＫするのがよい。各物質はこれらの濃度範囲におい
て、所望の粒子の粒径および物性に応じて適宜定めれば
よい。着色剤を添加する場合には、゛通常は０．００５
〜０．５チ程度であるが、反応性染料を用すればゼラチ
ン乾燥重置の１〜５チ程度で足りる。
ゼラチ１０．０１〜２−程度、好ましくは０．０５〜１
．０％程度、水溶性多糖類０．０１〜２チ程度、好まし
くは０．０５〜１．０’ｊ程度、そして親水性有機溶媒
は４〜２５容量優程度である。／’Ｊメタリン酸ナトリ
ウムはゼラチン乾燥重量の３〜１５％程度を含有させる
ようＫするのがよい。各物質はこれらの濃度範囲におい
て、所望の粒子の粒径および物性に応じて適宜定めれば
よい。着色剤を添加する場合には、゛通常は０．００５
〜０．５チ程度であるが、反応性染料を用すればゼラチ
ン乾燥重置の１〜５チ程度で足りる。
本発明においては、このような溶液に一調整前にさらに
陰イオン系または非イオン系の界面活性剤を含有させる
ところに特徴がある。
陰イオン系または非イオン系の界面活性剤を含有させる
ところに特徴がある。
陰イオン系界面活性剤の例としては、アルキルスルホコ
ハク酸、アルキルスルホマレイン酸、アルキル硫酸ニス
プル、ポリオキシェチレンアルキルエーテル硫酸エステ
ルなど、そして非イオン系界面活性剤の例としては、ポ
リオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキ、シェチレ
／アルキルエーテル、、ｔ？ｌＪオキンエチレンアルキ
ルフェニルエーテル、ポリエチレングリコール脂肪酸エ
ステルなどを挙げることができる。界面活性剤は粒子の
凝集を防止する目的で添加するのであるが、陽イオン系
の界面活性剤では粒子の凝集を防止することができない
ので本発明の対象外である。声調整前の容液における濃
度としては、陰イオン系界面活性剤の場合は０．００１
〜０．０１％程度、非イオン系界面活性剤の場合は０．
０１〜０．１チ程度で凝集防止効果が得られる。溶液を
冷却すればもっと低い濃度で凝集を防止することができ
る。
ハク酸、アルキルスルホマレイン酸、アルキル硫酸ニス
プル、ポリオキシェチレンアルキルエーテル硫酸エステ
ルなど、そして非イオン系界面活性剤の例としては、ポ
リオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキ、シェチレ
／アルキルエーテル、、ｔ？ｌＪオキンエチレンアルキ
ルフェニルエーテル、ポリエチレングリコール脂肪酸エ
ステルなどを挙げることができる。界面活性剤は粒子の
凝集を防止する目的で添加するのであるが、陽イオン系
の界面活性剤では粒子の凝集を防止することができない
ので本発明の対象外である。声調整前の容液における濃
度としては、陰イオン系界面活性剤の場合は０．００１
〜０．０１％程度、非イオン系界面活性剤の場合は０．
０１〜０．１チ程度で凝集防止効果が得られる。溶液を
冷却すればもっと低い濃度で凝集を防止することができ
る。
このような溶液を調製する過程は問うところではなく、
例えば各々を温水に溶解してから混合してもよく、各々
を一緒に溶解してもよい。しかしながら、各物質の溶解
を容易忙するために親水性有機溶媒はあとから加えるの
がよく、また水溶性多糖類には不溶成分も少量含まれて
いることが多いところから、別途に溶解して添加するの
がよい。
例えば各々を温水に溶解してから混合してもよく、各々
を一緒に溶解してもよい。しかしながら、各物質の溶解
を容易忙するために親水性有機溶媒はあとから加えるの
がよく、また水溶性多糖類には不溶成分も少量含まれて
いることが多いところから、別途に溶解して添加するの
がよい。
一方、ゼラチンは等電点以下の−゛では水溶性多糖類と
反応して白濁を生ずるので酸性ゼラチンを用いる場合に
はアルカリを加えて溶液の−を少なくともその付近Ｋま
で高めておくのがよい。しかしながら、とΩ白濁は生じ
た後でもアルカリを添加することによって消すことがで
きる。いずれにせよ、溶液は酸の添加を開始するまえＫ
は白濁のなハ状態にしておかなければならない。
反応して白濁を生ずるので酸性ゼラチンを用いる場合に
はアルカリを加えて溶液の−を少なくともその付近Ｋま
で高めておくのがよい。しかしながら、とΩ白濁は生じ
た後でもアルカリを添加することによって消すことがで
きる。いずれにせよ、溶液は酸の添加を開始するまえＫ
は白濁のなハ状態にしておかなければならない。
溶液の温度はゼラチンのｒル化温度以上でなけれげなら
ない。この温度はゼラチンの濃度等によって異なるが通
例２５〜３０℃程度である。良好な粒子形成の観点から
特に３５〜５０℃程度がよい。
ない。この温度はゼラチンの濃度等によって異なるが通
例２５〜３０℃程度である。良好な粒子形成の観点から
特に３５〜５０℃程度がよい。
次に、この溶液を攪拌しながら酸を加えて−２，５〜６
．０に調整する。この工程は粒子を生成させるところで
ある。均一な粒子を形成させるために、３５〜５０ Ｕ
Ｋ加温を続け、適度に攪拌しながら酸を滴下していくの
がよい。ｐＨ２，５〜６．０の範囲における至適の−は
原料溶液の組成および目的とする粒径によって異なるの
で予め実験を行なって定めるのがよい。たとえば得られ
た粒子を抗原感作用担体に用いる場合には２〜１０μ程
度の粒径にするのがよく、その場合至適の−は４．０〜
５．５の範囲にある。との−調整釦使用する酸は特に限
定されるものではなく無機酸でも有機酸でもよいが、な
るべくおだやかなものがよく、たとえば酢酸などが好適
である。
．０に調整する。この工程は粒子を生成させるところで
ある。均一な粒子を形成させるために、３５〜５０ Ｕ
Ｋ加温を続け、適度に攪拌しながら酸を滴下していくの
がよい。ｐＨ２，５〜６．０の範囲における至適の−は
原料溶液の組成および目的とする粒径によって異なるの
で予め実験を行なって定めるのがよい。たとえば得られ
た粒子を抗原感作用担体に用いる場合には２〜１０μ程
度の粒径にするのがよく、その場合至適の−は４．０〜
５．５の範囲にある。との−調整釦使用する酸は特に限
定されるものではなく無機酸でも有機酸でもよいが、な
るべくおだやかなものがよく、たとえば酢酸などが好適
である。
本［程で生成した粒子は系の温度をゼラチンのデル化温
度以下に下げても消失しないので母液との平衡関係はな
い。また、ゼラチンと水溶性多糖類との混合比にもよる
が、粒子はほとんどの場合正に帯電しており、その表面
にはポリメタリン酸イオンが配向していていわゆる電気
二重層を形成している。そして、このことが粒♀の安定
な分散を促しているのである。
度以下に下げても消失しないので母液との平衡関係はな
い。また、ゼラチンと水溶性多糖類との混合比にもよる
が、粒子はほとんどの場合正に帯電しており、その表面
にはポリメタリン酸イオンが配向していていわゆる電気
二重層を形成している。そして、このことが粒♀の安定
な分散を促しているのである。
酸の添加後は生成した粒子の凝集を防止するために速か
に粒子分散液を冷却するのがよい。そして、液温か１０
℃以下になったところでアルデヒド系架橋剤を添加して
粒子を不溶化する。この架橋剤の添加量はゼラチン乾燥
重量の０，１〜２００チ程度であり、添加後は一夜程度
放置して架橋反応を充分に行なわせる。架橋剤の例とし
ては、グルタルアルデヒド、ホルムアルデヒド、グリオ
キザール、クロトンアルデヒド、アクロレイン、アセト
アルデヒドなどを挙げることができるが、特にグルタル
アルデヒドが好適である。
に粒子分散液を冷却するのがよい。そして、液温か１０
℃以下になったところでアルデヒド系架橋剤を添加して
粒子を不溶化する。この架橋剤の添加量はゼラチン乾燥
重量の０，１〜２００チ程度であり、添加後は一夜程度
放置して架橋反応を充分に行なわせる。架橋剤の例とし
ては、グルタルアルデヒド、ホルムアルデヒド、グリオ
キザール、クロトンアルデヒド、アクロレイン、アセト
アルデヒドなどを挙げることができるが、特にグルタル
アルデヒドが好適である。
アルデヒド系架橋剤で処理後は粒子を遠心分離等で回収
して、必要により洗浄する。洗浄は粒子分散のために用
°いた界面活性剤と同じものを同濃度で含む水で２〜３
回行なえばよい。
して、必要により洗浄する。洗浄は粒子分散のために用
°いた界面活性剤と同じものを同濃度で含む水で２〜３
回行なえばよい。
このようにして得られた担体を種々の用途に供すればよ
いが、架橋が不充分な場合には塩類溶液中で膨潤するこ
とがある。そこでこのような用途に用いる場合にはアル
デヒド系架橋剤で処理して膨潤を防止するのがよい。例
えば、抗原を感作する場合にはリン酸緩衝液中で行なう
ので、赤血球を固定化する条件でホルマリン処理する。
いが、架橋が不充分な場合には塩類溶液中で膨潤するこ
とがある。そこでこのような用途に用いる場合にはアル
デヒド系架橋剤で処理して膨潤を防止するのがよい。例
えば、抗原を感作する場合にはリン酸緩衝液中で行なう
ので、赤血球を固定化する条件でホルマリン処理する。
この処理によって膨潤を防止するとともにホルマリンの
殺菌効果によって長期間の保存に耐える担体が得られる
。
殺菌効果によって長期間の保存に耐える担体が得られる
。
本発明の担体は抗原、抗体、酵素などを巾広く固定する
ことができる。たとえば、抗原とか抗体を感作する場合
には動物赤血球を担体として行な最もすぐれているとさ
れていた一物赤血球と同等な性能を有し、さらに化学的
、物理的に均質かつ安定であり、抗原活性がなく任意の
粒径のものを容易かつ安価に大量生産できるなど動物赤
血球にない幾多の利点を有するものである。そして、本
発明は先願発明に比し、界面活性剤の添加時期を変える
ことによって担体の収率を大巾に高めている。
ことができる。たとえば、抗原とか抗体を感作する場合
には動物赤血球を担体として行な最もすぐれているとさ
れていた一物赤血球と同等な性能を有し、さらに化学的
、物理的に均質かつ安定であり、抗原活性がなく任意の
粒径のものを容易かつ安価に大量生産できるなど動物赤
血球にない幾多の利点を有するものである。そして、本
発明は先願発明に比し、界面活性剤の添加時期を変える
ことによって担体の収率を大巾に高めている。
以下、実施例及び担体の使用例を示す。なお、本明細書
において、チは特に記載がなければ重量％を表わしてい
る。
において、チは特に記載がなければ重量％を表わしてい
る。
実施例１
等電点がＰＨ９であるゼラチン４ｔを４０℃の温水に１
００１／になるように溶解し、１０チの水酸化ナトリウ
ム溶液を用いてｐＨ９に調整した。アラビアゴム４ｔを
１００ｍ／になるように水に溶解し、不溶物をｒ別しだ
後４０℃に加温した。
００１／になるように溶解し、１０チの水酸化ナトリウ
ム溶液を用いてｐＨ９に調整した。アラビアゴム４ｔを
１００ｍ／になるように水に溶解し、不溶物をｒ別しだ
後４０℃に加温した。
このようにして得られたゼラチン溶液５９ｍ／とアラビ
アゴム溶液５０１／を混合し、この混合液をあらかじめ
４０℃に加温した３０容量係のメチルアルコール溶液３
０．０ ＩＩ／に注ぎ入れ、よく攪拌した。これに１０
チヘキサメタリン酸ナトリウム溶液１．６ＩＩ７！、１
チアルキルスルホマレイン酸（商品名デモールＥ、）溶
液２Ｉ１１１１および１チダイレクトブルー溶液５ ｍ
ｌを加えてよく攪拌した。
アゴム溶液５０１／を混合し、この混合液をあらかじめ
４０℃に加温した３０容量係のメチルアルコール溶液３
０．０ ＩＩ／に注ぎ入れ、よく攪拌した。これに１０
チヘキサメタリン酸ナトリウム溶液１．６ＩＩ７！、１
チアルキルスルホマレイン酸（商品名デモールＥ、）溶
液２Ｉ１１１１および１チダイレクトブルー溶液５ ｍ
ｌを加えてよく攪拌した。
次いで、４０℃に保ちながら１０容量チの酢酸′溶液を
滴下してｐ）１４．８に調整し、粒子を生成させた。
滴下してｐ）１４．８に調整し、粒子を生成させた。
この−調整によって得られた粒子分散液を水冷して５℃
にしてからゲルタールアルデヒド１．３２を加え、よく
攪拌後との温度で一夜静置した。それからこの粒子分散
液を２００ Ｏｒｐｍで１０分間遠心分離して粒子を４
レツトとして回収した。この粒子を０．００５％デモー
ルＥ溶液に懸濁して遠心分離する洗浄操作を３回繰返し
てから、４容量チホルマリン溶液に分散し、５℃で１週
間放置した。
にしてからゲルタールアルデヒド１．３２を加え、よく
攪拌後との温度で一夜静置した。それからこの粒子分散
液を２００ Ｏｒｐｍで１０分間遠心分離して粒子を４
レツトとして回収した。この粒子を０．００５％デモー
ルＥ溶液に懸濁して遠心分離する洗浄操作を３回繰返し
てから、４容量チホルマリン溶液に分散し、５℃で１週
間放置した。
本例で得られた担体粒子は７．７？であり、千の７５ｍ
が３〜６μの範囲にあった。
が３〜６μの範囲にあった。
実施例２
３ｏ容ｔｓのメチルアルコール溶液のカワリニにして担
体粒子を調製した。但し、酢酸を滴下して調製したーは
４４９であった。こうして得られた担体粒子は７．８ｔ
であり、その７０％が７〜１１μの範囲にあった。
体粒子を調製した。但し、酢酸を滴下して調製したーは
４４９であった。こうして得られた担体粒子は７．８ｔ
であり、その７０％が７〜１１μの範囲にあった。
実施例３
下記の点を除いて実施例１と同様にして担体粒子を調製
した。
した。
すなわち、まずアラビアゴム４ｔのかわりにカルデキシ
メブルセルロース１ｔを、そして３０容量チのメチルア
ルコール溶液のかわりに３０容量チエチルアルコール溶
液を用いた。それから、添加量についても、ゼラチン、
１０ ％へキサメタリン酸ナトリウム溶液、１チデモー
ルＥ、溶液、１ｅｓダイレクトブルー溶液、およびグル
タルアルデヒドをいずれも４分の１にした。また、−も
４．８から４．６にした。
メブルセルロース１ｔを、そして３０容量チのメチルア
ルコール溶液のかわりに３０容量チエチルアルコール溶
液を用いた。それから、添加量についても、ゼラチン、
１０ ％へキサメタリン酸ナトリウム溶液、１チデモー
ルＥ、溶液、１ｅｓダイレクトブルー溶液、およびグル
タルアルデヒドをいずれも４分の１にした。また、−も
４．８から４．６にした。
このようにして得られた担体粒子は３．８ｔであり、そ
の９０％が１〜２μの範囲にあった。
の９０％が１〜２μの範囲にあった。
実施例４
下記の点を除いて実施例１と同様にして担体粒子を調製
した。
した。
すなわち、ゼラチン溶液を５０ｍ１から４０ｍ１にし、
アラビアゴム溶液を５０１ｎｌから６０ｍ１に変えた。
アラビアゴム溶液を５０１ｎｌから６０ｍ１に変えた。
それから、１・０チヘキサメタリン酸ナトリウム溶液を
ｌ、 ５ ｙｓｌから１．２ ｍｌに、１チダイレクト
プルー溶液を６ ｙｓｌから４．８ｍｌに、そしてグル
タルアルデヒドを１．３２から１．ＯｙＫそれぞれ変え
た。
ｌ、 ５ ｙｓｌから１．２ ｍｌに、１チダイレクト
プルー溶液を６ ｙｓｌから４．８ｍｌに、そしてグル
タルアルデヒドを１．３２から１．ＯｙＫそれぞれ変え
た。
また、酢酸滴下終了−を４．６とした。
本例で得られた担体粒子は６．４２であり、その９０チ
が１〜２μの範囲にあった。
が１〜２μの範囲にあった。
実施例５
下記の点を除いて実施例１と同様にして担体粒子を調製
した。
した。
すなわち、ゼラチン溶液を５０ｍ１から６０ｄにしアラ
ビアゴム溶液を５０ｍ１から４０ｒｎｌに変えた。
ビアゴム溶液を５０ｍ１から４０ｒｎｌに変えた。
それから、１０％へキサメタリン酸ナトリウム溶液をｌ
、 ５ ｔｔｒｌから２ｍｌに、１係リアクテイブレツ
ド６履ｔを１チダイレクトブル−７．２ ｍｌに、そし
てグルタルアルデヒドを１．３２から１．８２にそれぞ
れ変えた。ｉた、酢酸滴下終了−を４．８とした。
、 ５ ｔｔｒｌから２ｍｌに、１係リアクテイブレツ
ド６履ｔを１チダイレクトブル−７．２ ｍｌに、そし
てグルタルアルデヒドを１．３２から１．８２にそれぞ
れ変えた。ｉた、酢酸滴下終了−を４．８とした。
本例で得られた担体粒子の収量は８．６ｆであり得られ
た粒子の７５チが３〜６μの範囲にあった。
た粒子の７５チが３〜６μの範囲にあった。
使用例１
実施例１で得られた担体粒子を、下表 に示す濃度のタ
ンニン酸を含むＰＨ７，２のリン酸塩緩衝生理食塩水（
以下、ＰＢＳと略記する。）中に粒子濃度が２．５チに
なるように分散し、３７℃で１５分間加温した。粒子を
遠心分離して生理食塩水で充分洗浄した。
ンニン酸を含むＰＨ７，２のリン酸塩緩衝生理食塩水（
以下、ＰＢＳと略記する。）中に粒子濃度が２．５チに
なるように分散し、３７℃で１５分間加温した。粒子を
遠心分離して生理食塩水で充分洗浄した。
梅毒病原体トレポネーマ・バリーダム（以下、ＴＰと略
記する。）菌体をＰ）（６，４のＰＢＳ中に浮遊させ超
音波で菌体を破壊してＴＰ抗抗原色した。
記する。）菌体をＰ）（６，４のＰＢＳ中に浮遊させ超
音波で菌体を破壊してＴＰ抗抗原色した。
前記のタンニン酸処理粒子をＰＢＳに５％の濃度に分散
し、この分散液を下表に示す倍数で希釈したＴＰＰ原液
と等容づつ混合した。混合液を３７℃で４０分間加温し
て、粒子に、ＴＰ抗原を感作した。
し、この分散液を下表に示す倍数で希釈したＴＰＰ原液
と等容づつ混合した。混合液を３７℃で４０分間加温し
て、粒子に、ＴＰ抗原を感作した。
ＴＰＰ原感作粒子を遠心分離して−６，４のＰＢＳで充
分洗浄し、分散用メディウムに濃度が５−になるように
分散した。
分洗浄し、分散用メディウムに濃度が５−になるように
分散した。
このようにして得られたＴＰＰ原感作粒子分散液を用い
、マイクログレート法で梅毒陽性血清と反応させたとこ
ろ下表に示す如き結果が得られた。
、マイクログレート法で梅毒陽性血清と反応させたとこ
ろ下表に示す如き結果が得られた。
なお、対照としてヒツノ赤血球を担体に用いた場合の結
果もあわせて下表に示す。
果もあわせて下表に示す。
使用例２
実施例１で得られた担体粒子をタンニン酸１０ｐｐｍを
含む−７，２のＰＢＳ中に粒子濃度が２．５チになるよ
うに分散し、３７℃で１５分間加温した。
含む−７，２のＰＢＳ中に粒子濃度が２．５チになるよ
うに分散し、３７℃で１５分間加温した。
粒子を遠心分離して生理食塩水で充分洗浄し、ｌチにな
るようにｐＨ７，２のＰＢＳ中に分散した。一方、高純
度に精製したストレプトキナーゼをｐＨ７，２のＰＢＳ
Ｋ １２８ ＵＡＩになるように溶解した。
るようにｐＨ７，２のＰＢＳ中に分散した。一方、高純
度に精製したストレプトキナーゼをｐＨ７，２のＰＢＳ
Ｋ １２８ ＵＡＩになるように溶解した。
タンニン酸処理粒子分散液４ ｍｌとストレプトキナー
ゼ溶液４ ｍｌとを混合し、３７℃で３０分間加温した
。その後、粒子を遠心分離してｐＨ７，２のＰＢＳで洗
浄し、粒子濃度１％になるようにｐＨ７，５のゼラチン
緩衝液に分散した。なお、ゼラチン緩衝液はゼラチン５
１．塩化ナトリウム１０１、およびリン酸カリウム１３
．６１を１！に溶解したものである。
ゼ溶液４ ｍｌとを混合し、３７℃で３０分間加温した
。その後、粒子を遠心分離してｐＨ７，２のＰＢＳで洗
浄し、粒子濃度１％になるようにｐＨ７，５のゼラチン
緩衝液に分散した。なお、ゼラチン緩衝液はゼラチン５
１．塩化ナトリウム１０１、およびリン酸カリウム１３
．６１を１！に溶解したものである。
この粒子分散液のストレプトキナーゼ活性は約６０Ｕで
あったので、溶液中の酵素の約１２チが粒子に固定され
たことになる。
あったので、溶液中の酵素の約１２チが粒子に固定され
たことになる。
酵素活性の測定方法は次のように行なった。すなわち、
酵素溶液または粒子分散液０．２５ ｍｌにヒトプラズ
マＱ、 ｌ ｔｎｌおよびトロンビン溶液０．０５ ｍ
ｌを加えて３７℃で３０分間加温した。トロンビン溶液
は５００単位のトロンビンをホウ酸緩衝液で８０倍に希
釈したものである。酵素活性は、線装置を阻止するスト
レプトキナーゼの最大希釈倍数で示した。
酵素溶液または粒子分散液０．２５ ｍｌにヒトプラズ
マＱ、 ｌ ｔｎｌおよびトロンビン溶液０．０５ ｍ
ｌを加えて３７℃で３０分間加温した。トロンビン溶液
は５００単位のトロンビンをホウ酸緩衝液で８０倍に希
釈したものである。酵素活性は、線装置を阻止するスト
レプトキナーゼの最大希釈倍数で示した。
特許出願人 富士臓器製薬株式会社
代理人 弁理士 １）中 政 浩
Claims (1)
- ゼンチノ、水溶性多糖類、ポリメタリン酸ナトリウム、
親水性有機溶媒、および水を含み、温度がゼラチ／のケ
゛ル化温度以トである溶液を、攪拌しつつ酸を加えてｐ
Ｈ２，５〜６ｏに調整し、その後アルデヒド系架橋剤を
作用せしめて不溶化する人り担体の製造方法において、
前記の一調整を行なうまえに陰イオン系または非イオン
系の界面活性剤を前記溶液に含有させておくことを特徴
とする人工担体の製造方法。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20986881A JPS58113754A (ja) | 1981-12-28 | 1981-12-28 | 人工担体の製造方法 |
| EP19820301235 EP0062968B2 (en) | 1981-03-18 | 1982-03-11 | Support material for use in serological testing and process for the production thereof |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20986881A JPS58113754A (ja) | 1981-12-28 | 1981-12-28 | 人工担体の製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58113754A true JPS58113754A (ja) | 1983-07-06 |
| JPS6332147B2 JPS6332147B2 (ja) | 1988-06-28 |
Family
ID=16579958
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP20986881A Granted JPS58113754A (ja) | 1981-03-18 | 1981-12-28 | 人工担体の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS58113754A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2010084626A1 (ja) * | 2009-01-20 | 2010-07-29 | ベックマン コールター，インコーポレイテッド | 抗血小板抗体の存在を検査する方法 |
-
1981
- 1981-12-28 JP JP20986881A patent/JPS58113754A/ja active Granted
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2010084626A1 (ja) * | 2009-01-20 | 2010-07-29 | ベックマン コールター，インコーポレイテッド | 抗血小板抗体の存在を検査する方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6332147B2 (ja) | 1988-06-28 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| EXPY | Cancellation because of completion of term | ||
| S199 | Written request for registration of transfer of right |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313199 |
|
| R370 | Written measure of declining of transfer procedure |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R370 |