JPS58117457A - 尿素用分析素子 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は一般に分析化学、特に流体中の予め定められた
特定成分を分析するための分析素子に関し、更に詳しく
は生物学的流体試料中の尿素および尿素誘導体を分析す
るための定量分析素子に関する。

従来、流体試料中の検体成分を分析する方法は多数開発
がなされてきたが、それらは大別して溶数円での反応系
と固相の反応系の二種類に分けられる。

！液系における分析反応（以下クエットψケミストリイ
ーと略す）は、用手法と呼はれる全く機械を用いない分
析方法から、近年病院の臨床検査尾等において多用され
ている自動定量分析装置まで多く知られている。

このうち特に自動定量分析装置は、血液等の分析に有用
に用いられている。

例えば、米国特許＠２，７９７，１４９号に記載された
連続流れ分析に基づく分析装瞳は、この代表的なもので
ある。

これらは流体１料、希釈剤および分析試薬を混合し分析
装置内へ移送し分析反応および定量測定を付なうという
ものである。

しかしながら、このような連続分析装置は複雑かつ高価
であり、熟韓した操作技術を必要とし、また分析操作の
後には必らず繰返し洗浄操作が必要とされ、これを行な
うに祉多大な時間と努力を浪費し、かつ、とれらのｊ）
［Ｋ必然的に＠境汚染を起こすという欠点を有する。

一方、固相の分析反応ｃ以下、ドライケミストリイーと
略す）を用いる分析法も広範に用いら１ている。

例えば、米国特許第３，０５０，３７３号あるいは同第
３，０６１，５２３号等に記載の如く、１紙のｙ口き吸
水性担体に試薬溶液を含浸させ、乾燥して作られるもの
である。

こｎらは一般に分析試麓紙、を九は単に試験片上に流体
試料を滴下するか、または流体試料中へ試験片を１９．
ａさせ、試験片の色変化または濃度変化を肉眼判定か、
または反射濃度計により測定し、流体試料中の特定成分
の濃度レベルを決定するものである。

これらの試験片は、その取扱いが藺便であり、かつ直ち
に結果が得られるので有用であるが、その構成上から半
定量または定性分析の愉域にとどまっているものでおる
。

前述の如き従来の分析方法に対して、操作法の測置なド
ライケミストリイーを用い、かつ高い定鎗性を有するも
のとして、特公昭５３−２１６７７号に記載の如き面像
分析要素が提案されている。

これは光透過性、液体不浸透性支持体上の一側圧位置し
、ｍ体試料中の成分と反応する少なくとも一層の試薬を
含み、かつ親水性コロイドからなる少なくとも一層の試
薬層と、該試薬層の該支持体とは反対側に位置し、流体
試料中の成分を該試薬層へ透過させる少なくとも一層の
非繊維質多孔＋ｔ＋　ａ：体層とを有する血液分析ｌ！
素である。

また、このような分析素子において尿素を分析するため
の分＃素子としては、特開昭５２−３４８８号に記載さ
れている。即ち、光透過性、液体不浸透性支持体上に第
二試薬層、障壁層および第一の試薬層をノー次ｌｋ設し
た構成を有するものであり、第一の試薬Ｎ１ＩＦｉ親水
性バインダーおよび第一の試薬であるウレアーゼから成
り、障壁層はアンモニアを実質的に透過し、かつ妨害物
質が実質的に浸透不可能であるいわゆる半透膜からなり
、Ｉ！に第二の試薬層は疎水性バインダーおよび第二の
試薬であるｐＨ指示薬を含有するものである。

上記構成によれば、流体試料中の尿１ｇは第一の試薬層
においてフレアーゼによりアンモニアと炭酸ガスに分解
され、障壁ノーにおいてアンモニアのみを透過させ、第
二の試薬層においてｐＨ指示薬を変色させるというもの
である。

かかる多層構成を有する分析素子の製造において、塗布
、乾燥の工程を繰返上し行ない層を積層する方法が一般
的である。従って、２回以上の塗布乾燥工程が必要であ
り、かつ疎水性バインダーから成る層の上に直接親水性
バインダ一層を塗設した際、両層間の接着性が弱く、し
ばしば剥離を起こす事が知られており、との両層間に更
に下塗り層または中間層と呼ばれる接着補助層を少なく
とも一層設けねばならない。このため上記多層分析素子
の製造は、その製造面で著しく複雑なものとなる欠点を
有している。更にＰＨ１１指示薬は光遇光性が大きく、
発色の経時安定性が劣る事が知られている。この事は上
記素子の精度に劣るしい影響を及ぼすという欠点も有し
ている。

一方、特開昭５６−７０４６０号明細１１ＦＫは、別の
態様の尿素分析用分析素子の開示がなされている。

即ち、試薬層である親水性バインダー中にレーキ色素前
駆体が含有され、かつフレアーゼが該試薬層または該試
薬層に隣接する層に含有し、レーキ金属塩を該試薬層ま
たは該試薬層に隣接する層に含まれるというものである
。

これは尿素をウレアーゼによってアンモニアと炭酸ガス
に分解し、　がっ、　生成したアンモニアによりレーキ
色素前駆体とレーキ金属塩を反応せしめ呈色させるとい
うものである。

しかしながら、レーキ金属塩を形成する長周期律表中の
璽Ａ、ＩＢ、ＩＢ、ｆｆＡ、ＩＶＢ、ＶＩＡ、■Ａ　お
よび■族に層する金属は、その多くがイオンの状態で９
レアーゼの活性を著しく阻害するという欠点を有してい
る亭が知られている。更に前記特許にも共通する事であ
るが、酵素であるウレアーゼは成膜の乾燥工程における
温度上昇によって失活する危険をいつもはらんでいると
いう欠点を有している。

本発明者ら拡、鋭意検討を重ねた結果、下記構成を有す
る分析素子を用いる事により上記欠点を克服する事が可
能となった。

即ち、本発明の分析素子は光透過性、液体不浸透性支持
体と、流体試料中の成分と反応する少なくとも一種の試
薬を含有する少なくとも一層の試薬層と該試薬層の該支
持体とは反対側に位置し、該流体試料中の成分を該試薬
層中へ透過させる少なくとも一層の展開層を有する分析
素子において該試薬層に下記一般式（ＩＪで表わされる
ナフチルアミン化合物、Ｏ−７タルアルデヒドおよびｍ
分体酸化物質の各々を閤−または互いに隣接する複数の
試薬層に含有する事を特徴とする。

一般式　（ＩＪ ＨＲ。

＼／ 式中、Ｒ９は脂肪族炭化水素残基を表わし、脂肪族炭化
水素残基としては飽和、不飽和、直鎖、分岐のものの−
ずれでもよく、詳しくはアルキル基（例えばメチル基、
エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチルｆｉ、
ｔ−ブチル基、イソブチル基、ドデシル基、オクタデシ
ル基等）、アルケニル＆（例えばアリル基、オクテニル
基等）等があり、アルキル基として好ましくは炭＄ｍ子
数１〜１０のもの（例えばメチル基、エチル基、イソプ
ロピル基、イソブチル基、インオクチル基、２−エチル
ブチル基、２−メチルオクチル基等）であり、轡にエチ
ル基が好ましい。更に上記の脂肪族炭化水素残基は蓋換
基を有していてもよく、置換地としては、例えば・・ロ
グン原子（例えば塩素原子、フッ素原子）、ニトロ基、
シアノ基、ヒドロキシ基、ケト基、カルボキシル基、ス
ルホ基、アミノ基（例えば、アミノ、アルキルアミノ、
ジアルキルアミノ、アニリノ、Ｎ−アルキルアニリノ）
、フルキル基（飼えば、メチル、プロピル、イソフロビ
ル、ｔ−ブチル、・オクタデシル、シアノアルキル、ハ
ロアルキル、アルアルキル）％ｌｋ’ｆニル基、アリー
ル基（例えば、フェニル、トリル、アセチルアミノツェ
ニル、４−ラウロイルア建ノフェニル、エトキシフェニ
ル）、ヘテロＷａ基。

アルコキシ基（例えば、エトキシ、フェノキシ、メトキ
シ、テトラデシルオキシ）、アリールオキシ基（例えば
、フェノキシ、２．４−ジ−ｔ−アミルフェノキシ、ｐ
−ｔ−ブチルフェノキシ、４−ドデシルオキシフェノキ
シ、４−ヒドロキシ−３−ｔ−ブチルフェノキシ、４−
ヒドロキシ−５−ｎ−ブチルフェノキシ）、アリールチ
オ基、アミド基（例えば、アセトアミド、メタンスルホ
ンアミド、ｐ−ドデシルベンゼンスルホンアミド）、カ
ルバモイル基（例えば、Ｎ−ＴＪ−カルボキシメトキシ
フェニルカルバモイル、Ｎ、Ｎ−ジヘキシルカルバモイ
ル、Ｎ−ベンジルカルバ七イル、Ｎ−エチルカルバモイ
ル、Ｎ−メトキシエチルカルバモイル）、スルファモイ
ルｆｉ（Ｍｌｆ、　Ｎ　、　Ｎ−ジエチルスルファモイ
ル）、アルキルスルホニル基、アリールスルホニルＭＪ
ｆｒＲえり、、ベンゼンスルホニル、ｍ−クロロベンゼ
ンスルホニル）、アシル基（例えば、アセチル、ｐ−ク
ロロベンゾイル、ベンゾイル）、アシルオキシ基（例え
ば、アセチルオキシ、ｍ−りＣ１０ベンゾイルオキシ）
、アシルオキシカルボニル基およびアルコキシカルボニ
ル：４（ＴｈＪ、ｔｔｆ、Ｎ−１）キシエチルカルバモ
イル゛メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、メト
キシカルボニル、トリエトキシカルボニル）、アリール
オキシカルボニル基（例えば、フェノキシカルボニル、
ｐ−ニトロフェノ中ジカルボニル）、アリールチオカル
ボニルｆｉ　（ＮＪえば、フェニルチオカルボニル）、
イきド基（例えば、サクシンイミド、オクタデシルサク
シンイミド）が挙けられる。

前記一般式１旬で表わされる本発明に係るす７チルアミ
ン化合物のうち好ましいものは下記一般式１式％ 一般式　（ＩＪ 式中、Ｒ８は脂肪族炭化水素残基を、ＲｓＦｉ水素原子
ま九社脂肪族炭化水素残基を、２は２価の脂肪族炭化水
素基を表わす。

Ｒ１およびＲ１の脂肪族炭化水素残基は前記一般式（Ｉ
ＪにおけるＲ１と同義である。　２の２価の脂肪族炭化
水素基は、飽和、不飽和、直鎖、分岐のもののいずれで
もよく、詳しくはフルキレン基（例えば、メチレン基、
エチレン基、プロビレ／基、イソプロピレン基、ブチｖ
ｙ基、ｔ−ブチレン基、インブチレン基、ドデシレン基
、オクタデシレフ基等）、アルケニレン基（例えば、ア
リレン基、オクテニレン基等）等であり、好ましくは炭
素原子数２へ４のフルキレン基であり、エチレン基が特
に好ましい。更ＫＺは前記一般式（ＩＪのＲ，で用いる
ことのできる置換基により置換されてもよい。

以下に本発明に係る化合物の代表的具体例を示すが、本
発明に用いられる化合物は、これに限定されるものでは
ない。

本発明は尿素およびその誘導体が、Ｎ−（１−ナフチル
）−Ｎ’−ジエチルエチレンジアミンおよびＯ−フタル
アルデヒドにより発色するという反応にもとすいている
。この反応は特開昭５５−６９０３８号に記載されてい
る。上記特許ではＩＮ塩酸中で３７℃、１５分間インキ
島ベートする事で良好な発色を呈し、定量を行なう事が
可能である。

しかしながら、通常、塩酸の如き低分子量酸物質を高＃
ｊｆ：で乾燥した皮膜に添加する事は不可能である。

これらの欠点に対して重合体酸物質を用いる事により、
乾燥状態においてバインダーに影響を与えず、かつ流体
試料がＩｆ１開し喪際にＷＩ性を呈するという好ましい
ものでめる。

本発明の１合体酸物質を構成するエチレン性不飽和酸の
単量体としては、少なくとも１つのスルホ基、カルボキ
シル基、若しくはホスホノ基を有するものが挙げられる
。

カルボキシル基、若しくはスルホ基を有するものの中で
も好ましいのは、１乃至２個のカルボキシル基、若しく
はスルホ基を有するものであり、特に下記一般式［１１
Ｋより表わされる単量体が好ましい。

一般式　園 素原子またはアルキル基を、Ｒ６は水素原子またはまし
いのは、スルホフェニル基、スルホアルキルオキシカル
ボニル基（このアルキル基は炭素原子数１乃至４のもの
が好ましい）、スルホアルキルＲ１におけるアルキル基
は置換基を有してもよく、好ましい置換基としては、ア
ルコキシカルボニル基、カルボキシル基を挙けることが
できる。

好ましいアルキル基としては、メチル基、炭素原子数１
乃至４のアルコキシ基を含むアルコキシカルボニルメチ
ル基、カルボキシメチル基が挙けられる。

八として表わされるアルコキシカルボニル基としては、
炭素原子数２乃至５のものが好ましい。

一般式高によ４表わされる単量体としては、列えば、ア
クリル酸、メタクリル酸、イタコン酸、イタコン酸モノ
アルキルエステル（好ましくは炭素原子数１乃至４のア
ルキルエステル、１１えはイタコン酸モノメチル、イタ
コン酸モツプチル）、マレイン酸モノエステル（好まし
くは、炭素原子数１乃至４のアルキルエステル、例えは
マレイン酸七ツメチル、マレイン酸モノブチル）、スチ
レ７スにホン酸、ア／　ＩＪロイルオキシアルキルスル
ホン酸（列えば、アクリロイルオキシプロピルスルホン
酸、γりＩＪ　Ｏイルオキシエチルスルホンｆｌり、メ
タクリロイルオキシアルキルスルホン酸（例、ｔはメタ
クリロイルオキシプロピルスルホン酸、メタクリロイル
オキシブチルスルホ７ｍ）、アクリルアミドアルキルス
ルホン酸（例えば２−アクリルアミド−２−メチルエタ
ンスルホン酸、２−アクリルアミド−２−メチルブタン
スルホンｉ！ＩＮ）、メタクリルアミドアルキルスルホ
ン酸（例えば２−メタクリルアミド−２−メチルエタン
スルホン酸）を挙けることができる。

本発明の重合体酸物質を構成するエチレン性不飽和酸の
うちホスホノ基を有する単量体の中でも好ましいのは、
１個のホスホノ基を有するものであり、待に下記一般式
＠）で示されるものである。

一般式　叫 〔式中、Ｒ１は水素原子またはメチル基を、　ＲａＦｉ
戻素原子数２乃至１０の脂肪族炭化水素基または（−Ｒ
，。−〇＋ｎＰ＋。−を表わし、Ｒｏ。は炭素原子数　
２乃至６の脂肪族炭化水素基を表わし、Ｒ・は水素原子
、アルカリ全域または−ＮＭ、基を表わし、　ｎは１乃
至５の整数である。〕 Ｒ６またはＲ＃により表わされる脂肪族炭化水素基とし
てはアルキレン基が好ましく、このアルキレン基は分岐
でもよいし、また塩１ｇＩＩＡ子の如きノ１０グン原子
、エトキシ基の如き低級アルコキシ基、フェニル基の如
きアリール基を置換基として有していてもよい。

一般式ＦＪで示される単量体の例としては、例えば、２
−７クリロイルオキシエチルホス７！−ト、ｌ−メチル
−２−アクリクイルオキシエチルホス７エート、２−ア
クリロイルオキシエトキシエチルホスフェート、４−ア
クリロイルオキシブチルホスフェート、２−メタクリロ
イルオキシエチルホス７アート、ｌ−メチル−２−メタ
クリロイルオキシエチルホスフェート、ｉ−ｐクロメチ
ル−２−メタクリロイル−キシエチルホスフェート、２
−メタクリロイルオキシエトキシエチルホスフ、−ト％
４−メタクリロイルオキシブチルホスフェートを挙ける
ことができる。

前記重合体酸物質を構成するエチレン性不飽和＃１ｓｔ
体は、単独で、ま九は二種以上を共重合させて更には他
の共重合可能なエチレン性不飽和単を体と共重合させる
事も可能である。

本発明の重合体酸物質を構成する他の共重合可能なエチ
レン性不飽和単量体としては、例えば、エチレン性不飽
和ニトリル類、スチレン類、エチレン性不飽和酸エステ
ル類、共役ジエン類、エチＶン酸不飽和酸ア建ド類、ビ
ニル異ｍ積化合物、架橋性単量法を挙ける事が出来る。

エチレン性不飽和ニトリル類としては、下記一般式［Ｖ
Ｊで示されるものを、好ましいものとして挙げることが
できる。

〔式中、Ｒ１１およびＲＩＩ　　は水素原子または・−
ログン原子を、Ｒ１，は水素原子、・１０グン原子、ア
ルキル基、アルコキシ基、アルコキシル基、アシルオキ
シ基、アリール基、シアノ基またはカルノくモイル基を
表わす。〕 Ｒ１１およびＲＩＩ　　として好ましいものは、水１ｇ
ｇ子およびフッ素原子であり、特に水素原子が好ましい
。Ｒ４として表わされる／１０グン原子としては、フ？
１ｇ原子、塩素原子、臭素原子を挙げることができる。

Ｒ１１として表わされるアルキル基としては、炭素原子
数１乃至５の低級アルキル基が好ましく、例えばメチル
基、トリフルオロメチル基、エチル基、１ａｏ−プロピ
ル基、ｎ−プロピル基、７ｆＬｎ−アミル基を挙げるこ
とができるｅＲ＋ｓｌとして表わされるアルコキシ基と
しては、炭素原子数１乃至３のものが好ましく、列えば
メトキシ基を挙けることができる。Ｒ工として表わされ
るアシルオキシ基としては、炭素原子数２乃至４のアル
キルカルボニルオキシ基が好ましく、例えばアセトキシ
基を亭げることができる。ＲＩＩとして表わされるアリ
ールｉ：ｉとしては、フェニル基（？：。

のフェニル着は１１遺基としてシアノ基、塩素原子のク
ロきハロゲン原子、メチル基の如き低級アルキル基、メ
トキシ基のｐＯき低級アルコキシ基を有していてもよい
）が好ましく、例えばフェニル基、メトキシフェニル基
、メチルフェニル基、クロロフェニル基、シアノフェニ
ル基を挙げることができる。ＲＩＩの中でも好ましいの
は、水素原子、・１０グア１１子またはアルキル基であ
り、水素原子が特に好ましい。

一般式（ＩＶＩにより示される具体的な単量体としては
、以Ｆのものを挙げることができる。

アクリロニトリル、メタクリロイルリル、α−クロルア
クリロニトリル、α−ブロムアクリロ品トリル、α−フ
ルオロアクリロニトリル、α−クロル−β−ジツルオロ
ー７／リロニトリル、α−・トリフルオロメチルアクリ
ロニトリル、α−エチルアクリロニトリル、α−イング
ロビルアクリロニトリル、α−ｎ　−フロビルアクリロ
ニトリル、α−ｎ−７きルアクリロニトリル、α−メト
キシアクリロニトリル、α−アセトキシアクリロニトリ
ル、α−７エニルノ°クリロニトリル、α−シアノフェ
ニルアクリロニトリル、α　クロルフェニルアクリロニ
トリル、α−メチルフェニルアクリロニトリル、α−メ
トキシフェニルアクリロニトリルおよびシアン化ビニリ
デン。

スチレン類としては、下に一般式（■ｊで示されるもの
を好ましいものとして挙げることができる。

一般式　圓 〔式中、Ｒ４は水１ｇＩＩＡ子、Ｉ・ログン鳳子すたは
アルキル基を表わし、Ｒゆ　は水素原子、／〜ログン原
子、アルキル基、アルコキシ基、シクロアルキル基、ア
ルコキシカルボニル基、アシルオキシアルキル基を表わ
し、ｍは１乃至５の整数である。〕Ｒ１４で表わされる
アルキル基としては、炭素原子数１乃至２のものが好ま
しい。

Ｒ４で表わされるアルキル基としては、炭素原子１巧至
６のものが、アルコキシル基としては、炭′Ｉｇ原子ａ
１乃至４のものが、シクロアルキル基としては炭素原子
数５乃至６のものが、アルコキシカルボニル基のアルキ
ル基としては、炭素原子数１乃至２のものが、アシルオ
キシアルキル基のアシル基としては、炭１ｇ原子数２乃
至３のものが、アシルオキシアルキル基のアルキル基と
しては、炭素原子数１乃至２のものが好ましい。ｍは、
好ましくはｌ乃至２である。

一般式ｔＶｌ）で示されるスチレン類の具体的なものと
しては、次のものが挙けられる。

スチレン、ｐ−メチルスチレン、α−メチルスチレン、
ｐ−クロルスチレン、アークロルメチルスチレン、ｍ−
クロルメチルスチレン、ｍ−ｆｉｆメチルスチレン−エ
チルスチレン、ｐ−エチルスチレン、２．５−ジメチル
スチレン、３．４−ジメチルスチレン、３．ｓ−ジエチ
ルスチレン、ｍ−１６Ｏ−プロピルスチレン、ｐ−１ａ
ｏ−プロピルスチレン、ｐ−ブチルスチレン、ｍ−ｔ−
ブチルスチレン、ｐ−へキシルスチレン、ｐ−シクロへ
キシルスチレン、ｍ−メトキシスチレン、４−メトキシ
−３−メチルスチレン、ｐ−エトキシスチレン、３．４
−ジメトキシスチレン、ｍ−クロルスチレン、３．４−
ジクロルスチレン、３．５−シクロルスチレ７　ｍ−フ
ロムスチレン、ｐ−ブロムスチレン、３．５−ジブロム
スチレン、４−フルオロ−３−ト！Ｊフルオロメチルス
チレ７．２−フロム−４−１７フルオロメチルスチレン
、ｐ−メトキシカルボニルスチレン、ｐ−アセトキシメ
チルスチレン。

エチレン性不飽和醸エステル類としては、エチレン性不
飽和カルボン酸エステル類が好−＊Ｌ＜。

一般式　園 〔式中、’＋１　は水Ｊｌｌ［子ｔたはメチル基を表わ
し、Ｒ＋ｔはアルキル基またはフェニル基を表わｔ〕該
アルキル基としては、炭素原子数１乃至８のもの、特に
１乃至４のものが好ましい。

一般式（■ｊで示されるものとしては、例えば次のもの
が早げられる。

アクリル酸メチル、アクリル酸エチル、アクリルｒｙ−
ｎ−ブチル、アクリルｆｉｌ　−ｎ−７’　ｏ　ヒル、
アクリル＃ｌ−１ｓｏ−ブチル、アクリル酸−Ｂｅｃ　
−ブチル、アクリル酸−２−とドロキシエチル、アクリ
ル酸−２−ヒドロキシプロピル、アクリル酸−２−エチ
ルヘキシル、アクリル酸ヘキシル、アクリル喰−２−フ
ェノキシエチル、アクリル酸−２−クロルエチル、アク
リル酸−ジメチルアミノエチル、アクリル酸ベンジル、
アクリル酸シクロヘキシル、アクリル鍍フェニル、アＩ
Ｉ）ｋｒｌ−２＝ヒドロキシプロピル、アクリル酸テト
ラヒドロフルフリル、アクリル酸−２，３−ジヒドロキ
シプロピル、メタクリル酸メチル、メタクリル酸エチル
、メタクリル酸−ｎ−ブチル、メタクリル酸プロピル、
メタクリルｉ！１−２−ヒドロキシエチル。

メタクリル酸−２−ヒドロキシプロピル、メタクリル酸
イソブチル、メタクリル酸アセトキシエチル、メタクリ
ル酸ジメチルアミノエチル、メタクリル酸クロルベンジ
ル、メタクリル酸オクチル、メタクリル酸エチルフリル
、メタクリル酸フェニルを挙げることが出来る。

共重合可能な共役ジエン単量体として本発明において好
ましいのは、下記一般式圃によ軽表わされる単量体であ
る。

一般式　晴 ◆ 〔式中、ＲＳＳ乃至Ｒ１，はそれぞれ水素原子、・・ｐ
グン原子、アルキル基、アリール基、シアノ基または−
ｃ　ｏ　ＯＲ，、基（Ｒ，はアルキル基を表わす）を表
わす。〕 ＲＩ８乃至Ｒ７，とじて表わされるハロゲン原子として
好ましいのは、４素原子ま九は臭素原子である。

Ｒ１，乃至Ｒ１４で表わされるアルキル基は、好ましく
は低級アルキル基であり、％に＊＊原子数１乃至４の低
級アルキル基が好ましい。その中でもメチル基が％に好
ましい。またへ８乃至Ｒｕで表わ芒れるアルキル基は置
換基を有してもよいが、好ましくは無置換のものである
。

Ｒ４乃至Ｒ，で表わされるアリール基として好ましいの
はフェニル基であり、該フェニル基は置換基を有しても
よい。好ましい置換基としては、ノ＼ロケン原子（好ま
しくは塩素原子、臭素原子）アルキル基（好ましくは炭
素原子数１乃至３のものであり、特にメチル基が好まし
い）を挙げることができる。

以上Ｒ１，乃至Ｒ，として各種の原子および基を等けた
が、その中でも好ましいのは水素原子、ノーログン原子
またはアルキル基である。

また、前記一般式嘱により表わされる単量体の全炭素原
子数については、好まし−の杖４乃至１２のものであり
、更に好ましくは４乃至９．特に好ましくは４乃至６の
ものである。また”ＩＩＩ乃至−寡の少なくとも２つは
水１ｇ原子であることが好ましいＯ 一般式（ＩＪにより表わされる単量体の列としては以下
のものを挙げることができる。

１．３−ブタジェン、アルキル（好ましくは炭素原子数
１乃至４の低級アルキル）置換１，３−ブタジェン（例
えば、インプレン、１．３−ペンタジェン、２−エチル
−１，３−ブタジェン、２−ｎ−プロピル−１，３−ブ
タジェン、２−　ｎ　−）゛チルー１．３−ブタジェン
、２，３−ジメチル−１，３−ブタジェン、２−メチル
−１，３−ペンタジェン、４−メチル−１，３−ペンタ
ジェン等）、アリール（好ましくはフェニル）置換１゜
３−ブタジェン（例えば１−フェニル−１，３−ブタジ
ェン、２−フェニル−１，３−ブタジェン１−（ｐ−ク
ロルフェニル）−１，３−ブタジェン、１−フェニル−
２−カルＭｌ　ト’Ｆシー１　、３−ブタジェン％　２
−ｐ−１リルー１．３−ブタシェフ等）、・・ログン（
好ましくはクロル、ブロム）置換１．３−ブタジェン（
例えば、１−クロル−１，３−ブタジェン、２−クロル
−１，３−ブタ／エン、１−ブロム−１，３−ブタジェ
ン、２−ブロム−１，３−７’タジエン、１．１−ジク
ロル−１，３−ブタジェン、２，３−ジクロル−１゜３
−プタジエ／、２．３−ジブロム−１，３−）゛タジエ
ン、１，１．２−１’リクロル−１，３−ブタジェン等
）、１，１，２．３−テトラクロル−１，３−ブタジエ
ンシアノ置換１．３−ブタジェン（（Ａえは、１−シア
ノ−１，３−ブタジェン、２−シアノ−１，３−ブタジ
ェン等）が挙げられる。

エチレン性不飽和酸アミド類としては、アクリルアミド
、メタクリルアミドを挙げること−４にできアクリルア
ミド類としては、例えばアクリルアミド、ジアセトンア
クリルアミド、メチロールアクリルアミド、メチルアク
リルアキト°を挙けることができる。

メタアクリルアミド類としては、例えばメタアクリルア
ミド、ベンジルメタアクＩＪルアミド°を挙げることが
できる。

ビニル異節環化合物としては１例えばＮ−ビニルピロリ
ドン、Ｎ−ビニルイミダゾール、ビニルピリジン類（例
えば、４−ビニルビ１ノジン、２−ビニルピリジン等）
を挙けることカニできる。

架橋性檗量体としては、例えはジビニルベンゼン　エチ
レングリコールジメタアク１ル−ト、トリメチロールプ
ロノくントリアクＩル−ト、ペンタエリトリットトリメ
タアクリレートを挙けることができる。

本発明の真合体酸物質を構成するエチレン性不飽和酸単
量体またはエチレン性不飽和醪単量捧および他のエチレ
ン性不飽和単量体力ｉらなる重合体は前述の種々の単量
体を組合わせる◆により容易に得られるが、好ましく鉱
エチレン性不飽和ｗ本量体を約５重量ノく−セント乃至
１００重量Ｉく−セント、他のエチレン性不飽和単量体
を０重量パーセント乃至約郭重１パーセントを有する重
合体であり、更に好ましくはエチレン性不飽和酸単量体
を約８重量パーセント乃至１００重量パーセント、他の
エチレン性不飽和酸単量体を０重量パーセント乃至約蛇
重量パーセントである。

次に本発明の重合体酸物質の具体例を示すが、本発ＩＩ
ＪＬＪはこれらＫよって何ら限定されるものではない。

剥示重合体酸 （１）　　ポリアクリル酸 （２）　　ポリメタクリル酸 （３）　　イタコン酸−スチレン共重合体（重量％　５
０＝５０） （４）　　アクリル酸−アクリル酸ブチル共重合体（重
量％　７５　：　２５　） （５）　　アクリル酸−塩化ビニリデン共重合体（重量
％　８０：２０） （６）　　エチレン−マレイン酸モツプチル共重合体（
重量％　５０：５０） （７）　　スチレン−マレイン酸モツプチル共重合体（
重量％　５０：５０） （８）　　マレイン酸モノブチル−メチルエチルケトン
共重合体　　　　（重量％　５０：　５０）（９）　　
マレイン酸モノブチルーインブチレ／共重合体　　　　
　　　Ｃ重量％　５０：５０）（１０）　　メタアクリ
ル酸−ジビニルベンゼン（重量％９８：２　　） （１１）　　アクリル酸−スチレン−ジビニルベンゼン
（重量％９０：８：２） （１２）ポリスチレンスルホン酸 （１３）　　ポリアクリルアミド−２−メチルエタンス
ルホン酸 （１４）　　ポリメタアクリロイルオキシプロパンスル
ホン酸 （１５）　　スチレンスルホン酸−スチレン共ｕｅｓ（
重量％　（資）；２０） （１６）　　スチレンスルホン［−ジビニルベンゼン共
重合体　　　　　　（重量％　９０　：　ｔｏ　＞（１
７）　　アクリルアミド−２−メチルエタンスルホン酸
−アクリル酸ブチル−スチレン 共重合体　　　　　（重量％１５：８０：５）（１ｇ）
　　メタアクリロイルオキシプロ、パンスルホン１１−
２．３−ジメチル−１，３−ブタジェ／−７クリロニト
リル共重合体 （重量％８　：　７５　：　１７　） （１９）　　スチレンスルホン酸−塩化ビニリチン（重
量％　７５　：２５　） （加）　メタアクリロイルオキシプロパンスルホン酸−
メタアクリル酸メチル （重量％　５０：５０） （２１）　　ポリ２−７クリロイルオキシエチルホス７
エート （２２）　　ポリ２−メタアクリロイルオキシエチルホ
スフェート （２３）２−７クリロイルオキシ工チルホスフエートー
アクリル酸メチル共重合体 （重量％　８０：２０） （２４）　　４−メタクリロイルオキシブチルホス７エ
ートースチレンージビニルベンゼン共重合体　　　　　
　　　（重量％５０：４５：　５）（２５）２−メタク
リロイルオキシエトキシエチルホス７エートーアクリル
酸エチル−７クリロニトリル共重合体 （重量％１５　：　７０　：　１５　）更に市販の権限
および弱酸性カチオンイオン交換樹脂も用いる事ができ
る。例えばアンバーリスト１５、アンバーライトＣＧ−
５０、アンバーライトＩＲＣ−５０（商品名Ｒｏｈｍ　
＆　ＦＩｏｓｓ製）を挙げる事ができる。これらの樹脂
をそのまま、あるいは粉砕して用いる事が出来る。

上記の重合体酸物質は、通常のラジカル覆合、例えば溶
極重合、乳化重合、懸濁重合等を適宜用いる事により容
易に合成する事が可能である。また酸部分を高分子反応
によりて導入または変換する事も可能である。

本発明の重合体酸物質は流体試料適用時に層内のｐＨが
約１乃至約４になる程度に存在すれば良い。

本発明の試薬層は、親水性高分子物質をパインダーとし
て用いる事が可能である。例えばゼラチン、フタル化ゼ
ラチンの如きゼラチン誘導体、ポリビニルアルコール、
ポリビニルピロリドン、ポリアクリルアミド、ポリメタ
アクリルアミド、更にカルボキシメチルセルロースナト
リヮム塩、ヒドロキシエチルセルロース等のセルロース
誘導体等が好ましい。

特ニフタル化ゼラチン、ポリビニルアルコール、ヒドロ
キシエチルセルロース等が有用に用いる事がで倉る。

更に本発明の電合体酸物質をそのままバインタ゛−とし
て用いる事も可能である。

上記バインダーから成る試薬層に本発明に係るナフチル
アミン化合物、Ｏ−７タルアルデヒドおよび本発明に係
る重合体酸物質を同一の壜または別々の層に分けて含有
する事ができる。

例えば、支持体上に重合Ｆ＊酸物質の層（但しバインタ
ーは、あってもなくても良い）およびナフチルアミン化
合物、０−７タルアルデヒドヲ含有する層を順次積層し
てもよい。また別の態様では支持体上にナフチルアミン
化合物、Ｏ−７タルアルデヒドを含有する層および重合
体酸物質の層（１旦しバインダーは、あってもなくても
良い）を順次積層する事も可能である。

巣に前述の三つの試薬を隣接する三つの層にそれぞれ分
離して含有する事も可能である。この時０−フタルアル
デヒドを含Ｍする層はポリ（メタアクリロニトリル）、
セルロースアセテートブチラード等も有用に用いる事が
可能である。

当然の事ながら上記試薬層には、分析反応を行なう上で
付加的な物質、例えば界面活性剤、保恒剤等を添加する
事も可能である。

本発明の試薬層は、他の層も含めて本発明の支持体上に
、例えば浸漬塗布法、エアーナイフ法、カーテン塗布法
または米国特許第２，６８１，２９４号明細書に記載の
如きホッパーを用いる押し出し塗布法等各禰の塗布法で
塗布する事が可能であり、・所望により二層または、そ
れ以上の層を米ＩｆｊＩ４！許第２，７６１，７９１−
ｊ＋お！び英国４Ｉ＃’ＦＩＩ　ｓｓｒ＊ｏ９５号明細
書に記載の方法で同時に塗布する事も出来る。

更に本発明の試薬層の乾ｖｋ温度は任意に選択する拳が
出来る。例えば室温乃至約ｌＯＯ℃まで広範なｒ１ｍ＆
範囲で用いられる。

本発明の分析素子に係る前記の液体不浸透性の光透過性
支持体（以下、本発明に係る支持体と略す。）は、液体
不浸透性で、かつ光透過性であれば、その種類を問わな
いが、例えば酢酸セルロース、ポリエチレンテレフタレ
ート、ポリカーボネート、またはポリスチレンのような
種々の重合体材料が、この使用目的に適する。この場合
の上記支持体の厚さは任意であるが、好ましくは約５０
ｔクロンから２５０ミクロンである。また、本発明に係
る支持体の観察側の一側面は、その目的に応じ任意に加
工することは可能である。更に試薬層を積層する側の支
持体面Ｋ、場合によフては光透過性のＦ黴り層を使用し
て試薬層と支持体との接着性を改良する事が出来る。

本発明に係る展開層は、特公昭５３−２１６７７号に記
載された性能、即ち（１）一定容量の流体試料を単位面
積当り一定容量を試薬層に均一に配布し、（２）流体試
料中の分析反応を阻害する物質または要因を除去し、（
３）分光光度分析を行なう際に支持体をへて透過する測
定光を反射するバタクグラウンド作用を行なう機能を有
するものであれば、任意に選択する事が出来る。従って
、本発明に係る展開層は、上記３つの機能を全て行ない
得るが、また３つの機能を適宜分離し、各機能毎に別の
層を使用することも可能である。更に、３つの機能のう
ち、２つの機能を有する層と、残りの他の機能を有する
層を組み合わせ使用することもできる。

例えば、同上特許記載の二酸化チタンおよび二酢酸セル
ロースから成るブ２！シェボリマーと呼称される非繊維
多孔質媒体の展開層、　特開昭５６−２４５７６号、特
願昭５６−１３２０３号および特願昭５６−６５４４６
号等に記載の繊維構造展開層が挙げられる。特に上記繊
維構造展開層は血球部分もすみやかに移送する事が可能
な素材として。

時に有用である。

本発明の分析素子は種々の異なる配置のうち、任意の一
つをとることが可能でおる。　更に本発明の試薬層と各
種の槙能層、試薬含有層および部材１例えば、米国特許
＠３，９９２，１５８号記載の試薬層、反射層、下塗り
層、同第４，０４２゜３３５号記載の放射線ブロッキン
グ層、　　同第４．０６６．４０３号記載のバリヤ一層
、　　同第４．１４４，３０６号記載のレジストレージ
１７層、同第４，１６６．０９３号記載のマイグレーシ
冒ン阻ＩＥ層、同ｗＪ４，１２７，４９９号記載（７）
　シフ　ｆ　Ｖ−シ璽ン層、０開昭５５−９０８５９号
記載の清掃層および米国特許第４，１１０，０７９号記
載の破壊性ボウド状部材等を任意に組合わせて、本発明
の目的に合わせた分析素子を構成することが可能である
。

前記層の製造および前記層の本発明の分析素子への組み
込み法は、前記特許に記載の方法と同じであるか、また
は類似である。前記特許には、このような層製造に使用
可能な有用な材料にりいても記載されている。

待に有用な層として、放射線ブロッキング層を挙げる事
が出来る。上記層は、例えば二酸化チタン、硫酸バリウ
ム等の白色顔料の微粉末を少量の親水性ポリマーと媒体
中に分散したものを塗布して成る層であり、特に全血を
用いた場合、赤血球の吸収を隠ペイし、かつ、白色パッ
クラウンドをよりよく形成する事が可能である。上記層
は通常展開層と試薬層の間に設けられるが、更に複数の
試薬層の中間に設ける事も可能である。

本発明の分析素子は、反射分光光度測定により比色定量
が可能である。即ち、４６５　ｎｍにおける反射吸光度
を測定する事で尿素およびその誘導棒の濃度レベルを決
定する事ができる。更に、５２０μｍ　　Ｋおける吸光
度の増加を測定する事により初速変法による定量も可能
である。

以上のように構成された本発明の分析素子は、□展開層
側から流体試料を供給した後、試薬層の分析反応を透明
支持体側から観察し、反射濃度を測定し、得られた測定
値を予め作製しておいた検量線にあてはめる事で未知被
検物質の量を決定する事が出来る。

本発明の分析素子に適用される流体試料の量は任意に定
めることができるが、好ましくは約父μｌから約５μＪ
であり、ｊ！に好ましくは約加μノから約５μｍである
。通常約ｔｏμノの流体試料を適用するのが好ましい。

本発明の分析素子は種々の流木試料中に存在する尿素お
よびその誘導体を定量分析する事が、可能であるが、例
えば臨床化学の分野に有用に用いられ、特に生物学的ｆ
ｌＬ体試料、例えば、血液（金属、血清、血清）、尿、
髄液中の尿素およびその誘導体の分析に用いられる。

以下に実施例を挙げて本発明を更に具体的に貌明するが
、これによって本発明の実施態様が限定されるものでは
ない。

冥施例−１ 透明な厚さ１８０μの下引き済ポリエチレンテレフタレ
ート支持体上Ｋ、下記組成の試薬層を塗布した。

（１１試薬層とし フタル化ゼラチン　　　　　　　　２１．５　＃置体発
明のナフチルアミン 例示化合中（５）　　　　　　　１．５，９汐Ｏ−フタ
ルアルデヒド　　　　　２．３ｇ汐アンバーリストー１
３ （ロームエンドハースｌ［］ （スルホン酸型　イオン変換樹脂）：（・ＩＩ／−ポリ
オキシエチレン ラウリルエーテル　０．５１汐 から成る乾燥膜厚約２５キクロンの層 更に試薬層の上に下記組成の繊維構造展開層を積層し、
尿素分析粗分素子とした。

（２）繊維展開層として 粉末１紙（Ｃ） （東洋ｆ紙■３００メツシュ以上）　　９１１／ｒｒｒ
スチレン−グリシジルメタアクリレート共重合体　（重
量比９０：１０’）　　１３．９１汐オクチルフエノキ
シ ポリエトキシエーテル 商品名ＴｒｉＴｏｎＸ−１００ （Ｒｏｈｍ　＆　Ｍａｓｓ製）　　３．１５．９／？か
ら成る乾燥膜厚約１６０ミクロンの繊維展開層上記の分
析素子に檀々の尿素の濃度レベルのワシ血清アルブミン
水溶＠（３％）を１０μｍ展開層に滴ドし、１０分間３
７℃でインキ瓢ベートした後、３９５　ｎｍ　　で反射
濃度を測定したところ、反射濃度と尿素の濃度レベル関
に良好な相関を示した。

実施例−２ 透明な膜厚的１８０μのポリエチレンテレフタレート支
持体上に丁記の層を順次塗布し、尿素分析用分析素子ｆ
ｌ）〜（２）を作製した。

１）　　　ｊβぺこ薬ノ橿−１（ｌ） 脱イオン化７タル化ゼラチン　　ｌｏ、ｏ、９／ｍ”本
発明のナフチルアミン 例示化合物 （化合物は下記表−ＩＫ示す）　　１．５＆／ｄポリオ
キシエチレン ラワリルエーテル　　０．２９汐 から成る乾燥膜要約１０μの試薬層（υ２）試薬層（２
） 脱イオン化フタル化ゼ２チｙ　　　１０．０９／ｒｒ？
Ｏ−７タルアルデヒド　　　　　　２．３ｇ汐ポリオキ
シエチレン ラワリルエーテル　　０．３５＃汐 本発明の重合体酸物質 （重合体は下記表−１に示す）　　３．８１１／ｒｌか
ら成る乾燥膜厚約１６ミクロンの試薬層（２）（３）繊
維展開層 粉末Ｐ紙（Ｃ） （東洋１紙ｉｍ　３００メッシ、砒）　９１　ｇ汐スチ
レン−グリシジル メタアクリレート　　１３．９汐 オクチルフ凰ノキシ ボリエ）會ジエーテル （商品名ＴｒｉｔｏｎＸ−１００ Ｒｏｈｍ　＆　Ｈａａｅ　＄１）　　　　３−１５１／
ｆから成る乾燥膜要約１６０μの繊維展開層。

但し、本発明の重合体酸物質は下記表−１に表　　−１ 上記１２檜類の尿素分析用分析素子に、種々の尿素纜度
レベルを有する血清をｔＯ＃−１展開層上に滴ｆＬ、３
７℃、ＩＯ分関（ンキ晶ページ廖ンを行なったｌｉｔ　
４９５　ｎｍ　　で反射濃度を測定したところ、各々の
分析素子は、尿素濃度と反射濃度の関に良好な相関があ
った。

代理人　桑　１　義　美 手続補正書 １．　１’ｌの人手 昭）ｔ＋　５６　＋１：、特許願第１９９３５５　　号
２　発明の名杓・ 尿素用分析素子 ３　補＋ｌｉをする者 事件との関係　特許出願人 住　所　　東京都新宿区西新宿１丁目２６番２＋；名　
称　（＋２７）小西六写真工業株式会社代表取締役　川
　本　信　彦 ４代理人 〒１９１ 届　所　　東京都］１野市さくら町１番地小西六写真工
業株式会社内 ６、補正の対象 明細書の「発明の詳細な説明」の欄 ７、補正の内容 発明の詳細な説明を以下の如く補正する。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）　　光透過性、液体不浸透性の支持体と、流体試
   料中の成分と反応する少なくとも一種の試薬を含有する
   少なくとも一層の試薬層と、該試薬層の該支持体とは反
   対側に位置し１ｍｉ体試料中の成分を該試薬層へ透過さ
   せる少なくとも一層の展開層を有する分析素子において
   、該試薬層に下記一般式（ＩＩで表わされるナフチルア
   ミン化合物、６−７タルアルデヒドおよび重合体酸物質
   め各々を同一、または互いに隣接する複数の試薬層に含
   有する事を特徴とする尿素および尿素誘導体用分析素子
   。 （式中、Ｒ１は脂肪族炭化水素残基を表わ−ｔ）（２）
   ナフチルアミン化合物が下記一般式側で表わされる事を
   特徴とする特許請求の範囲第（１）項記載の尿素および
   尿素誘導体用分析素子。 一般式　ｍ （式中、Ｒ１および２は脂肪族炭化水素残基を表わし、
   Ｒ３は水１ｇ原子もしくは脂肪族炭化水素残基を表わす
   。）