JPS5816146B2 - ゲル内沈降反応測定法 - Google Patents
ゲル内沈降反応測定法Info
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- JPS5816146B2 JPS5816146B2 JP9505175A JP9505175A JPS5816146B2 JP S5816146 B2 JPS5816146 B2 JP S5816146B2 JP 9505175 A JP9505175 A JP 9505175A JP 9505175 A JP9505175 A JP 9505175A JP S5816146 B2 JPS5816146 B2 JP S5816146B2
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Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
抗原及び抗体の結合は極めて短時間に行われる。
この結合物は抗原と抗体が最も適した濃度比ゝ最適比“
の状態にある場合、集合して沈降物をつくる。
の状態にある場合、集合して沈降物をつくる。
抗原及び抗体を寒天ゲル等タン白質分子を自由に通過さ
せることのできるゲル内に拡散させゝ最適比“の位置に
おいて出現する沈降物（線）を観察し、以て抗原又は抗
体を測定分析することは免疫学的方法として常用されて
いる。
せることのできるゲル内に拡散させゝ最適比“の位置に
おいて出現する沈降物（線）を観察し、以て抗原又は抗
体を測定分析することは免疫学的方法として常用されて
いる。
例えば免疫電気永動法、オフテロニー法及び一元免疫拡
散法などである。
散法などである。
これらの中でオフテロニー法は特別の。装置が不要なこ
と、操作が簡単なこと１反応時間が短いこと及び沈降線
の形態から抗原（又は抗体）の同定が可能なこと等の利
点をもっている。
と、操作が簡単なこと１反応時間が短いこと及び沈降線
の形態から抗原（又は抗体）の同定が可能なこと等の利
点をもっている。
しかしこの方法は未知濃度の抗原（又は抗体）を分析す
る場合に於て抗原（又は抗体）の過剰又は過少に起因す
る凝陰性を防止するために抗原液（又は抗体液）を数段
階に希釈したものを同時に実施する手数を要すること、
あるいは定量が不可能なことなどの欠点を有する。
る場合に於て抗原（又は抗体）の過剰又は過少に起因す
る凝陰性を防止するために抗原液（又は抗体液）を数段
階に希釈したものを同時に実施する手数を要すること、
あるいは定量が不可能なことなどの欠点を有する。
本発明はオフテロニー法の利点を失うことなく更に前記
の二つの欠点を補うことを特徴としたゲル内沈降反応法
である。
の二つの欠点を補うことを特徴としたゲル内沈降反応法
である。
最も普通に実施されているオフテロニー法は第１・図に
示す如く正六角形の中心及び六個の各頂点を中心とする
孔をゲル層に穿孔する。
示す如く正六角形の中心及び六個の各頂点を中心とする
孔をゲル層に穿孔する。
次にこれら六角形の中心の孔Ａに抗体を注入し、周囲の
六個の孔に被検抗原あるいは既知抗原を含有する標準抗
原を注入し恒湿条件下で一定時間反応させ測定分析する
方法である。
六個の孔に被検抗原あるいは既知抗原を含有する標準抗
原を注入し恒湿条件下で一定時間反応させ測定分析する
方法である。
従ってこの方法は中心の孔（抗体受容孔）と周囲の孔（
抗原受容孔）の間隔が一定である。
抗原受容孔）の間隔が一定である。
オフテロニー法は各孔の位置を正六角形に配置するほか
分析の目的に応じ適宜に孔の配置を変更して実施される
が、いずれの場合も抗原受容孔と抗体受容孔との間隔は
一定であった。
分析の目的に応じ適宜に孔の配置を変更して実施される
が、いずれの場合も抗原受容孔と抗体受容孔との間隔は
一定であった。
しかし本発明では抗原対抗体受容孔を規則的に異なる間
隔に配置することを特徴とする。
隔に配置することを特徴とする。
例えば第２図に示す如く寒天などのゲル層に中心孔Ａ及
びその周囲に各々異なる間隔でＳ、−Ｓ、を穿孔し中心
の孔Ａ（抗体受容孔）に抗体液を周囲の孔Ｓ＋−８ａ（
抗原受容孔）に被検抗原液を注入する。
びその周囲に各々異なる間隔でＳ、−Ｓ、を穿孔し中心
の孔Ａ（抗体受容孔）に抗体液を周囲の孔Ｓ＋−８ａ（
抗原受容孔）に被検抗原液を注入する。
このゲル層を恒湿箱内に置いて一定時間反応させた後、
抗原受容孔と抗体受容孔の間に生じる沈降線の出現がど
の抗原受容孔にまで達したかを観察し、その位置をもっ
て定量値とする。
抗原受容孔と抗体受容孔の間に生じる沈降線の出現がど
の抗原受容孔にまで達したかを観察し、その位置をもっ
て定量値とする。
従って本発明の原理は抗原（又は抗体）がゲル内を拡散
する距離を調節し与えられた距離内において一定時間後
に沈降線が出現することの成否をもって抗原（又は抗体
）の濃度を測定することになる。
する距離を調節し与えられた距離内において一定時間後
に沈降線が出現することの成否をもって抗原（又は抗体
）の濃度を測定することになる。
これは従来から実施されてきた定量免疫電気泳動法及び
−元免疫拡散法等の定量的ゲル内沈降反応法でみられる
ように沈降線の生ずる位置を計測する方法と原理上から
も異なる。
−元免疫拡散法等の定量的ゲル内沈降反応法でみられる
ように沈降線の生ずる位置を計測する方法と原理上から
も異なる。
本発明では抗原受容孔と抗体受容孔の間隔は実験的に最
も定量性の高い組合せを求めることができる。
も定量性の高い組合せを求めることができる。
例えば第２図に示されるように抗原受容孔の縁から抗体
受容孔の縁へ距離を２．０ ｍｍ、３．２ｍｍ、４．２
玉、５．０ ｍｍ及び５．６朋に設定した寒天ゲル層を
用い、血清中α−フェトプロティンをこのタン白質に対
する抗血清を使用し、測定することによって臨床診断の
目的を達することが出来た。
受容孔の縁へ距離を２．０ ｍｍ、３．２ｍｍ、４．２
玉、５．０ ｍｍ及び５．６朋に設定した寒天ゲル層を
用い、血清中α−フェトプロティンをこのタン白質に対
する抗血清を使用し、測定することによって臨床診断の
目的を達することが出来た。
この結果は第５図に示す。
また本発明は第３図に示すような孔を設定すれば抗原（
又は抗体）の同定も可能である。
又は抗体）の同定も可能である。
本発明を用い被検液中の高い濃度の抗原（又は抗体）を
測定する場合、抗原過剰による疑陰性の出現をある程度
まで防止することが可能である。
測定する場合、抗原過剰による疑陰性の出現をある程度
まで防止することが可能である。
例えば第１表に示すように従来から行われていたオフテ
ロニー法（第１図参照）と本発明を用い患者血清中のα
−フェトプロティンの測定を比較した場合、オフテロニ
ー法ではα−フェトプロティン７５μｇ／−以上の濃度
ですでに沈降線は消失し、疑陰性の状態を示す。
ロニー法（第１図参照）と本発明を用い患者血清中のα
−フェトプロティンの測定を比較した場合、オフテロニ
ー法ではα−フェトプロティン７５μｇ／−以上の濃度
ですでに沈降線は消失し、疑陰性の状態を示す。
しかし本発明によればα−フェトプロティンの濃度が１
５０μｇ／−に達するまで疑陰性の出現を防止し得る。
５０μｇ／−に達するまで疑陰性の出現を防止し得る。
また本発明を用い患者血清中のＣ−反応性タン白質の測
定について、従来から実施されているオフテロニー法及
び一元免疫拡散法との測定感度を層性比較すると第２表
に示す如〈従来法と全く差を示さないことも実証された
。
定について、従来から実施されているオフテロニー法及
び一元免疫拡散法との測定感度を層性比較すると第２表
に示す如〈従来法と全く差を示さないことも実証された
。
実施例 １
１．２％寒天ゲル層（高さ１．５ｍｍ）をスライドガラ
ス上に作製し、第３図に示す如く直径３ｒｎ７ｒｔの孔
を穿孔し、抗体受容孔Ａに抗α−フェトプロティン血清
の５〜７μｌを注入、抗原受容孔ｓｔにα−フェトプロ
ティ６０μｇ／−の標準血清を、抗原受容孔８１〜Ｓ４
には同一の患者血清を各々５〜７μｌ注入し、恒湿箱内
室温で４時間反応後出現した沈降線が標準血清との沈降
線と融合（単一の沈降線）し、更に８１〜Ｓ４の抗原受
容孔のどの位置まで出現したかを観察し、例えばＳ３ま
で沈降線が出現した場合３＋の測定値を得る。
ス上に作製し、第３図に示す如く直径３ｒｎ７ｒｔの孔
を穿孔し、抗体受容孔Ａに抗α−フェトプロティン血清
の５〜７μｌを注入、抗原受容孔ｓｔにα−フェトプロ
ティ６０μｇ／−の標準血清を、抗原受容孔８１〜Ｓ４
には同一の患者血清を各々５〜７μｌ注入し、恒湿箱内
室温で４時間反応後出現した沈降線が標準血清との沈降
線と融合（単一の沈降線）し、更に８１〜Ｓ４の抗原受
容孔のどの位置まで出現したかを観察し、例えばＳ３ま
で沈降線が出現した場合３＋の測定値を得る。
実施例 ２
１４２％寒天ゲル層（高さ１．５ｍｍ）をスライドガラ
ス上に作製し、第４図に示す如くの孔を穿孔し、抗体受
容溝Ａに抗Ｃ−反応性タン白質血清の約ｏ、 ｉ ｍｌ
を注入、抗原受容孔８１〜Ｓ５には同一の患者血清を各
々５〜７μｌずつ注入し、恒湿箱内室温で４時間反応後
実施例１と同様にして測定する。
ス上に作製し、第４図に示す如くの孔を穿孔し、抗体受
容溝Ａに抗Ｃ−反応性タン白質血清の約ｏ、 ｉ ｍｌ
を注入、抗原受容孔８１〜Ｓ５には同一の患者血清を各
々５〜７μｌずつ注入し、恒湿箱内室温で４時間反応後
実施例１と同様にして測定する。
実施例１の方法で測定した。
一元免疫散性の測定値は沈降輪の直径（朋）実施例２の
方法で測定した。
方法で測定した。
第１図は従来の実施の方法を示す説明図、第２図及び第
３図は本発明に於ける抗原受容孔に対する抗体受容孔の
位置を示す説明図、第４図は直線抗原受容孔に対する抗
体の位置を示す説明図、第５図は血清中α−フェトプロ
ティンの本発明法による測定値と一元免疫拡散法による
測定値との関係を示す説明図である。
３図は本発明に於ける抗原受容孔に対する抗体受容孔の
位置を示す説明図、第４図は直線抗原受容孔に対する抗
体の位置を示す説明図、第５図は血清中α−フェトプロ
ティンの本発明法による測定値と一元免疫拡散法による
測定値との関係を示す説明図である。
Claims (1)
- １ タン白質分子を自由に拡散させることのできるゲル
層に穿孔した抗原受容孔と抗体受容孔の間隔を、各々異
なるように規則的に配置し、各々の孔に抗原液又は抗体
液を注入し、一定時間反応後に生ずる沈降線を観察する
ことを特徴としたゲル内沈降反応測定方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9505175A JPS5816146B2 (ja) | 1975-08-06 | 1975-08-06 | ゲル内沈降反応測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9505175A JPS5816146B2 (ja) | 1975-08-06 | 1975-08-06 | ゲル内沈降反応測定法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5218815A JPS5218815A (en) | 1977-02-12 |
| JPS5816146B2 true JPS5816146B2 (ja) | 1983-03-29 |
Family
ID=14127246
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9505175A Expired JPS5816146B2 (ja) | 1975-08-06 | 1975-08-06 | ゲル内沈降反応測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5816146B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6058165A (ja) * | 1983-08-01 | 1985-04-04 | センサーメディクス・コーポレーション | 高周波通気装置 |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5838661U (ja) * | 1981-09-10 | 1983-03-14 | 帝人株式会社 | 糸条加工機の断糸管理装置 |
| JPH0281878A (ja) * | 1988-09-19 | 1990-03-22 | Murata Mach Ltd | 自動ワインダーにおける異常警報装置 |
-
1975
- 1975-08-06 JP JP9505175A patent/JPS5816146B2/ja not_active Expired
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6058165A (ja) * | 1983-08-01 | 1985-04-04 | センサーメディクス・コーポレーション | 高周波通気装置 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5218815A (en) | 1977-02-12 |
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