JPS5818379A - Ｂｎ−１０３ｃ物質及びその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新抗生物質ＢＮ−１０３Ｃ物質ならびにその製
造法に関する。すでに本発明者らによりバチルス　プミ
ルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｐｕｍｉｌｕｓ）に属するＢ
Ｎ−１０３株が新規有用な抗生物質ＢＮ−１０６物質を
生産することは見出されている。

（特開昭５Ｏ−６９２９５） （ＢＮ−１０３物質） その後、培養液の組成について詳細に検討ｌ〜たところ
主成分のＢＮ−１０３物質以外にＢＮ−１０３Ｂあるい
は ＢＮ−１０５０物質が存在Ｉ−５これらに培養条件によ
って生成比が異なることが明らかとなった。

ＢＮ−１０３Ｂ物質ならびにＢＮ−１０３Ｃ物質の理化
学的性質ならびに化学構造式は下記の如きであることか
ら、培養液からそれぞれを精製単離する方法以外に、相
互に化学的変換を行うことが可能なら収率良く、目的物
質を製造できると考え、種々検討を行い、その方法を確
立した。

ＢＮ−１０３Ｂ物質 （１）形状：斜状結晶 （２）融点＝１３７〜１４５℃（分解）（３）溶剤に対
する溶解性：メタノール、エタノールに易溶、クロロホ
ルム、酢酸エチ ル、ベンゼンに難溶 （４）比旋光度： 〔α）　２３’　−１０６，ｊ　（濃度０５％、メタノ
ール）（５）紫外部吸収スペクトル： ０、　Ｉ　Ｎ塩酸及び中性水： ２４７ｍμ（Ｅ’％　１４７．１　） １ｍ ３１５ｍμ（Ｅ”　　１０３．２） ｃｒｎ ０．１Ｎ苛性ソーダー： ２４７ｍμ（肩） ３４８ｍμ（Ｅ”　　１２０．４） ｔＭ （６）光外部吸収スはクトル： 第１図に示す通りである。

（力　呈色反応 ニンヒドリン試薬、過マンガン酸カリ ウム試薬に陽性、モーリッシュ試薬に 陰性 （３） （８）元素分析 炭素５４．１６係、水素６７２％、 窒素６．６３％ （９）分子量 ４２４（質量分析） （１１分子式 ％式％ αυ　化学構造式 ＢＮ−１０りＣ物質 （１）　　形状：白色粉末 （２）融点：１３０．５〜１３２．６８Ｃ（３）溶剤に
対する溶解性：メタノール、エタノ−ｋＶ＃ｔｍ、クロ
ロホルム、酢酸エチル、ベンゼン、ヘキサンＫＪｔ９！ （４）比旋光度： （４） 〔α）Ｄ−８１，６（濃度０５チ、メタノール）（５１
紫外部吸収スペクトル： ０、ＩＮ塩酸及び中性水： ２４７ｍμ（Ｅ”　１５８．８） １ｏπ ３１５ｍμ（Ｅ１係　１０２４） １ｍ ０、ＩＮ苛性ソーダ一二 ２４７ｍμ（肩） ３４８ｍμ（Ｅ”　　１１０．０） １ｍ （６）光外部吸収スはクトル： 第２図に示す通シである。

（力　呈色反応 ニンヒドリン試薬、過マンガン酸カリ ウム試薬に陽性、モーリッシュ試薬に 陰性 （８）元素分析 炭素５９６４饅、水素６７５％、 窒素７．０４チ （９）分子量 ４０６（質量分析） ００　分子式　　　　Ｃ２ｏＨ２６Ｎ２０゜（１１）化
学構造式 ％式％ １０６Ｂ物質、ＢＮ−１０３Ｃ物質）は抗炎症剤、抗潰
瘍剤などの医薬として有用であるほかに、医薬の中間体
としても有用である。

ＢＮ−１０３関連物質はＢａｃｉｌｌｕｓ　ｐｕｍｉｌ
ｕｓＢＮ−１０６株を好気的条件下で培養することによ
って得られるＢＮ−１０３物質、ＢＮ−１０３Ｂ物質、
ＢＮ−１０３Ｃ物質であるが、それらの物質相互間の化
学変換が可能である。

すなわち、下記に示す反応式に示すようにＢＮ−１０６
物質、ＢＮ−１０３Ｃ物質あるい１ｄＢＮ−１０５関連
物質の混合物を水酸化ナトリウム、炭酸水素ナトリウム
などでｐＨ８〜１０とし、室温あるいは６７℃に２〜６
日放置したのち中和し、反応液をダイヤイオンＨＰ　−
２０のような吸着樹脂を用いて精製することによってＢ
Ｎ−１０３Ｂ物質を得ることができる。

ＢＮ−１０６−Ｂ物質を乾燥した有機溶媒たとえばアル
コール類に溶解して、酸性したのち、溶媒を留去するか
、あるいは、トリフロロ酢酸を加え、５℃放置後、トリ
フロロ酢酸を減圧下で濃縮除去することによって、ＢＮ
−１０！Ｉｃ物質を得ることができる。

ＢＮ−１０３物質への変換はＢＮ−１０３Ｃ物質を固体
の状態か、あるいは乾燥ベンゼンに溶解し、０℃として
、液体アンモニアを加え５０〜１２０分間反応させたの
ち、得られた反応液を精製して行った。

かくの如き、化学的変換で得られた各物質は、第１表に
示すような抗菌活性を示すほか、下記の方法で試験した
浮腫抑制作用で１．ＢＮ−１０３物質は高い値を示し、
医薬及びその原料として有効であることが判明した。

（７） （８） （９） （１０） 浮腫抑制試験 ウィスター系雄性ラット（体重１５０ｇ前後）を１群５
匹用い、試験物質を動物の体重に対しＢＮ−１０３物質
を１０〜５０　ｍｙ／ｋｇ宛、経口投与］７た。試料投
与した１時間後に１％カラゲニン生理食塩液をＱ、　１
ｍＡ！右側足岨皮下に注入し起炎した。起炎６時間後に
足前容積を測定し、薬剤無投与群の容積の増加に対する
薬剤投与群の容積の増加の比から浮腫抑制率を算出した
。

第２表 次にＢＮ−ＩＤ３Ｃ物質の培養による製造法について説
明する。本発明のＢ’Ｎ−１０！Ｉｃ物質に、バチルス
属に属するＢＮ−１０３０物質生産菌を栄養培地に培養
し、培養物中に抗生物質ＢＮ−１０３Ｃ物質を生成蓄積
せしめ、該培養物から単離することによって製造するこ
とができる。

バチルス属に属するＢＮ−１０５Ｃ物質生産菌株として
は、たとえばバチルス・プミルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　
ｐｕｍｉｌｕｓ　）　　Ｂ　Ｎ　−１０３株（Ｆ’ＥＢ
Ｍ−Ｐ　　Ｎ１２２６８）などがあげられる。バチルス
・プミルスＢＮ−１０３株の菌学的性質及び培養法は特
開昭５０−６９２９５に明記されている。

培養物中に生成蓄積されたＢＮ−１０３Ｃ物質はイオン
交換樹脂、活性炭、マクロポーラス系樹脂等を適宜組み
合せて精製することができる。

以下に本発明の実施例を挙げてさらに具体的に説明する
が、これらは単なる例示であって、なんら本発明を制限
するものでない。

実施例１ ブイヨン寒天培地に２８℃、４０時間培養したＢａｃｉ
ｌｌｕｓ　ｐｕｍｉｌｕｓ　　ＢＮ　−１０３、Ｆ　Ｂ
　ＲＭ　−Ｐ　　Ｎｎ２２６８をグ２コースｔＯチ、乾
燥プイヨｙｔＯ％（ｐＨ７ｏ）ｏｉ体培ＭＬ１．５１Ｖ
Ｃ接ｍシ。

２８℃で２４時間振盪培養し、その培養液を種母とする
。グルコース３％、大豆粉１．５％、肉エキス０．６％
、ペプトン０５％、ＮａＣＡ！　０．５　％、ＣａＣＯ
５０，２５％　（ｐＨ７，０）の組成からなる液体培地
６０１に種母を接種し、２８℃で４０時間通気攪拌培養
を行った。（５０１ジャーファーメンタ−２基使用）培
養後、濾過し、涙液４５／を陽イオン交換樹脂アンバー
ライトＩＩＬＣ−５０（Ｈ型）の塔（６））を通過させ
、有効成分を吸着させたのち、樹脂を水洗した。次いで
０，２Ｎ塩酸−アセトン（１：１）の混液で溶離し、得
られた溶離液２４１を減圧下で７１−１で濃縮した。こ
の溶液を活性炭の塔（１１）を通過させ、有効成分を活
性炭に吸着させる。活性炭を水洗後、０．２Ｎ塩酸、ア
セトン（１：１）の混液で溶離し、これを減圧下で１．
５１まで濃縮した。これをダイヤイオンＨＰ　−２０の
塔（３０ＱｍＪ）を通過させ、有効成分を吸着させた。

これを水洗後、５０チアセトン溶液で溶離し、得られた
溶離液を減圧下で濃縮し、アセトンを除去後、凍結乾燥
し、４．５ｐの粗粉末を得た。

この粗粉末１ｇを少量の水に溶離し、セファデックスＧ
−１０の塔（３００ｍｌ）にかけ、ｊＱｍｌづつ分画を
行い、水で溶出したフラクション陽４０〜４５を濃縮し
て約１６５１ｎ９のＢＮ−１０３Ｂ物質を得た。

０、２　Ｍ食塩溶液で溶出したフラクションＮｉ１９３
〜１０５をダイヤイオンＩ−Ｉ　Ｐ　−２０を用い脱塩
後、濃縮して約４０６■のＢＮ−１０３物質を得た。

また０、２Ｍ食塩溶液で溶出したフラクション陽１１１
〜１２０をダイヤイオンＨＰ　−２０を用い脱塩後、濃
縮して約６８ｍ９のＢＮ−１０３Ｃ物質を得た。

実施例２ 実施例１で得られた約４０６ｍ＆のＢＮ−１０３物質を
１０１１Ｉｌの０，１Ｍ炭酸水素ナトリウム溶液（ｐＨ
８，３）に溶解し、３７℃、２日間放置したのち、ダイ
ヤイオンＨＰ−２０の塔（２０１１１７）を通過させ、
目的物質を吸着させたのち、水洗した。

次に５０チアセトン溶液で溶離したのち、溶離液を濃縮
し、アセトン除去し、凍結乾燥し約３５０■のＢＮ−１
０３Ｂ物質を得た。

実施例６ 実施例１で得られた約６８ＩＱのＢＮ−１［１５−Ｃ物
質を５ｒｎｌの０．１　Ｍ炭酸水素ナトリウム溶液（ｐ
）Ｉ　Ｂ、　３　）　Ｋ溶解し、３７℃、２日間放置し
たのち、ダイヤイオンＨＰ−２０の塔（１ｏｎ／）を通
過させた。塔を水洗したのち、５０９６アセトン溶液で
溶離し、アセトン除去を行い凍結乾燥し約５０ｍｇのＢ
Ｎ−１０３Ｂ物質を得た。

実施例４ 実施例１で得られた粗粉末１ｇを２０ゴの０１Ｍ水酸化
ナトリウム（ｐｉ（１２，４）に溶解し、室温、８時間
放置したのちダイヤイオンＨＰ　−２０の塔（４０１ｎ
／）を通過させ、目的物質を吸着させたのち、水洗した
。５０％アセトン溶液で溶離し、アセトンを除去し、凍
結乾燥を行い約７２０ｍ９のＢＮ−１０３Ｂ物質を得た
。

実施例５ 実施例２で得られた６５０■のＢＮ−１０３Ｂ物質を乾
燥したのち、あらかじめ氷冷したトリノロロ酢酸５ｍ／
を加え５℃に２時間放置した。次いで反応液を濃縮した
のち、少量のメタノールに溶解し、セファデックスＬＨ
−２０でカラムクロマトグラフィーを行った。得られた
フラクションについてクロロホルム−メタノール（４：
１）の展開溶媒でＴＬＣを行い、Ｒｆｏ、５９にニンヒ
ドリン試薬に陽性のフラクションを集め、減圧下で濃縮
したのち、ジオキサンに溶解し凍結乾燥して約２１０１
ｎ９のＢＮ−１０３Ｃ物質を得た。

実施例６ 実施例５で得られた２１０Ｔｎ９のＢＮ−１０３−Ｃ物
質に２０ｄノの液体アンモニアを加え０℃、２時間放置
した。液体アンモニアを除去したのち、少量の水に溶解
し、ダイヤイオンＨＰ−２０（２０ｄ）のカラムを通し
、目的物質を吸着させた。これを水洗後、５０％アセト
ン溶液で溶離し、アセトン除去し凍結乾燥により約１５
０■のＢＮ−１０３物質を得た。

【図面の簡単な説明】

第１図はＢＮ−１０３Ｂ物質の赤外部吸収スペクトルを
示し、第２図はＢＮ−１０３Ｃ物質の赤外部吸収スＲク
トルを示す。 代理人　弁理士　戸　１）親　男 第１頁の続き ［相］発　明　者　湯田康勝 浦和市文蔵１８５６ ・老父　明　者　西沢宣典 相模原車乗林間２−１６−５ （塑合　明　者　井上重治 横浜市緑区つつじケ丘１６−２ 手絖袖正簀 昭オ［１５６年１０月２０日 特許庁長官殿 １、事件の表小 昭和５６年特許願第１１５１７５号 ２、発明の名称 ＢＮ−１０５Ｃ物質及びその製造法 ６補正をする者 事件との関係　特許出細入 ４、代理人 住　所　〒１０５東京都港区虎）門二丁目１９番１４号
６、補正の対象 明細費 Ｚ補正の内容 （１）明細書３負１行に“斜状結晶”とあるのを、「針
状結晶」と補正する。 （２）明細書４頁下から５行に“１３０．５〜１３２．
６℃”とあるのを、ｒ１３Ｑ、５〜１５２．６℃（分解
）」と補正する。１ （５）明細書７頁１２行から１３行にわたり“固体の状
態か、あるいは乾燥ベンゼンに溶解し、０°Ｃとして、
′とあるのを、［固体の状態で、０℃として、ｊと補正
する （４）明細書９頁の表の上欄に“（ｎａｇ／ｉｎＪ　）
”とあるのを、［（ｍｃｇ／ｍＡ’　）　Ｊと補正する
。 （５）明細書１０頁の表の上欄に“（ｎｅｇ／ｍｌ　）
”とあるのを、ｒ　（ｍｃｇ／ｍｌ　）と補正する。 （６）明細書１１頁４行に“ＢＮ−１０５物質を”とあ
るのを削除する。 （７）明細書１６頁１４行“酸、アセトン”とあるのを
、「酸−アセトン」と補正する。 （８）明細書１４頁１行に“溶離”とあるのを、「溶解
」と補正する。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）下記構造式を有するＢＮ−１０３Ｃ物質。
2. （２）バチルス属に属するＢＮ−１０５Ｃ物質生産菌を
   培養し、培養物からＢＮ−１０３Ｃ物質を採取すること
   を特徴とするＢＮ−１０５Ｃ物質の製造法。