JPS58201721A - オゾン不活性化微生物含有ワクチン及びその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （発明の背景） （発明の分野） 免疫系は広範囲の侵入微生物に応答する。しかしながら
哺乳動物の免疫系の応答は比較的緩慢であるため、侵入
微生物が定着し、そして病症を惹起せしめる場合がある
“。°この病症には宿主の機能が再生不可能に破壊さ□
れるもめが合まれる。侵入微生物に対する応ｉが、宿主
を゛侵入微生物に特異的な抗臘に暴露することにより非
゛常に促進されることが見出された。しかし、微生物に
関連する抗原を免疫系がその後に生きた微生物に暴露さ
れた場合に該免疫系が効果的に活性化されるように免疫
素を十分に活性化する形で投与することは困難である。

他の問題点は、相補作用の可能性を排除する稚児全圧微
生物を不活性化してしまうとと、及び不活性化処理の結
果として毒性成分が生成すること又は該処理によっても
毒性成分が残留し続けることである。

ワクチン製造のための１″：）の方法は天然の微生物を
不活性化することである。天然の！生物の不活性化にお
いては、残存微生物が宿主中で増殖し、保役されるべき
宿主に病気を惹起することがないように完全に不活性化
することが必要である。さらに、天然抗原に対する抗原
応答を活性化することを保証するために、不活性化され
た微生物はその免疫原性形態を保持していなければなら
ない。

さらに、強力な液禄免疫応答番保証するために免疫原性
緊張（ｉｒｒｔｎｕｎｏｇｅｎｉａ　’ｓｔｒｅｓｍ　
）を保持していることが望ましい。

以下余白 （先行技術の要約） デソラレンス（Ｐｓｏｒａｌｅｎｓ　）は米国特許第４
．１２４，５９８号及び第４，１９６，２８１号明細書
においてワクチンとしての微生物の不活性化を教示して
いる。はルトン（ＢＯＩ・ｔｏｎ　）等は、Ｂａｃｔｅ
ｒｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ　（１
９８０年）１６７：２８０において、Ａｍｅｒｉｃａｎ
　５ｏｃｉｅｔｙ　ｏｆＭｉａｒｏｂｉｏｌｏｇｙにお
いて発行されたｒ　Ｂｉｏｌｏｇｉ、ｃａｌＥｆｆｅｃ
ｔｓ　ｏｆ　０ｚｏｎ＠Ａ＠ｒｏｓｏ１ｍ　ｏｎ　Ｆｉ
ｖｅ　Ｇｒｏｕｐｓ　ｏｆＡｎｉｍａｌ　Ｖｉｒｕｓａ
ｍ、Ｊと題する報告の要約を公表している。オゾン不活
性化に関する多くの理論が報告されている。例えば、チ
ャン（Ｃｈａｎ　、）等（１９７７年）　Ｊ、Ｂｉｏｌ
、Ｃｈｅｍ、２５２　：、８５３７〜８５４１、ｖイナ
ース（Ｍａｉｎｓ、ｒｓ　、、）等（１９７７年）　Ｅ
ｎｖｉｒｏｎＲｅｓ、１４：９９〜１１２、及びフリー
マン（Ｆｒｅｅｍａｎ　）等（１９７９年）　Ａｒｃｈ
、Ｂｉｏｃｈａｍ。

Ｂｉｏｐｈｙｍ、１９７：２６４７２７２を参照のこと
。さらに９イルスのオゾンによる不活性化は、ケラセル
（Ｋｅｓｓｅｌ　）等、　８ｏｃ、ｆｏｒ　Ｅｘｐ、Ｂ
ｉｏｌ、Ｍａｄ、Ｐｒｏｃ。

（１９４３年）５３ニア１〜７３、及びカッツェネルソ
ン（Ｋａｔｚｅｎｅｌｓｏｎ’　）及びビダーマン（Ｂ
ｉｄｅｒｍａｎｎ　）　＋　Ｗａｔｅｒ　Ｒｅ５ｅａｒ
ｃｈ（１９７６年）１０：６２９〜６３１にも記載され
ている。

（発明の要約） 微生物、特にウィルスを、ワクチンを製造するために該
ウィルスを不活性化するのに十分な時間オゾンにより処
理する。次に不活性化された微生物を常法に従って製剤
化し、そして宿主に投与する。ワクチンは免疫系を活性
化し、その後生きた微生物に感染しないように宿主を保
護する。

（具体的態様） ワクチンを製造し、そして生きた微生物による感染から
宿主を保護するためにワクチンを使用する方法とそのた
めの組成物が提供される。生きた微生物が不活性化され
る条件下で、適当な媒体中で該微生物をオゾンで処理す
ることによりワクチンを製造する。そして処理された微
生物を貯蔵、特に低温において貯蔵し、文は凍縮乾燥す
ることにより、その免疫原性の保持を保証する。使用に
先立つ゛て、不活性化された微生物を常法に従って製剤
化し、そして種々の方法により宿主に投与する。生きた
微生物の侵入に際して強力な免疫応答を得るために、適
当な場合には追加の投与又は補助投与（ｂｏｏｓｔ＠ｒ
　５ｈｏｔ　）　ｆ行うこともできる。

広範囲の種類の微生物を、種々の効果を伴って種々の程
度に不活性化することができる。これらの微生物にはウ
ィルス、細菌、糸状菌、及びとれらに類するものが含ま
れる。微生物、例えばウィルスには広範囲の哺乳動物、
特にヒト及び牛、豚。

馬及び羊のごとき家畜に特異的なものが含まれる。

特に重要なものはウィルスであり、これには脂質二重膜
のエンベロープを有するものと有しないものの両者が含
まれる。エンベロープを有するウィルスの中６’ｌｔ、
インフルエンザＡウィルスのごときオルソミキソウイリ
デア（Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａａ）に属するも
の、水痘性口内炎ウィルスのごときラブドピリデア（Ｒ
ｈａｂｄｏｖｉｒｉｄａｅ　）に属するもの、伝染性子
ライソトラケイティスウィルスのごときヘルペスウイリ
デア（Ｈｅｒｐａｓｖｉｒｉｄａｅ　）に属するもの、
並びにノそラミキソウィリデア（Ｐａｒａｍｙｘｏ　−
ｖｉｒｉｄａｅ　）、トガウィリデア（Ｔｏｇａｖｉｒ
ｉｄａｅ　）、コロナウィリデア（Ｃｏｒｏｎａｖｌｒ
ｉｄａｅ　）、及びレオウイリデア（Ｒｅｏｖｌｒｉｄ
ａｅ　）　Ｋ属するものが含まれる。

エンベロープを有しないウィルスはオゾンによる不活性
化に対してより大きな耐性を有するようであり、従って
二重膜を与えるためにウィルスをリポゾーム中に導入す
る必要がある。脂質二重膜被覆を得るために種々の組成
物をリポゾームｒ（導入する方法は文献中でよく知られ
ている。ウィルス粒子を細胞組織培養から分離し、そし
て、親油性及び両親媒性化合物例えば燐脂質、例えばホ
スファチジルコリン、ホスファチノルエタノールアミン
、ホスファチジルセリン、ホスファチノン酸等によりエ
ステル化された炭素原子数１０〜２０個の脂肪族カルメ
ン酸、スピンがミニリン、カルディオリピン、コレステ
ロール、レシチン及びがラクトセレブ四サイド等と混合
する。リポゾームの調製法については例えばペムラ（Ｖ
ｅｍｕｒａ　）及びキンスキー（Ｋｉｎａｋｙ　）　Ｂ
ｉｏｃｈｅｍｉ＠ｔｒｙ　（１９７２年）１１：４８５
、並びにシックス（Ｓｉｘ　）等前記文献１２：４０３
を参照のこと６ 広範囲の細菌、特にストレプトコッカス（５ｔｒｅｐｔ
ｏｃｏｃｕｓ　）、スタフ４　’Ｏコツカス（５ｔａｐ
ｈｙｌ。

ｅｏｅｅｕ！ｌ　）、ヘモフィルス（Ｈａｅｍｏｐｈｉ
ｌｕｍ　）、ナイゼリア（Ｎａｌｓｓｅｒｉｍ　）、？
ルデテラ（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌｍ　）、コリネバクテリ
ア（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｓｒｉａ　）、リステリア（
Ｌｉ５ｔｅｒｌａ　）、サルモネラ（８ａ１ｍｏｎｅｌ
１ｍ　）シダラ（ＳｈＬｇａｌｌｍ　）、エセリヒア（
Ｅａａｈｅｒｉｃｈｉａ　）、ビブリオ（Ｖｉｂｒｌｏ
　）、バクテロイデス（Ｂａｃｔｅ−ｒｏｉｄｅａ　）
、ミコバクテリア（Ｍｉｃｏｂａｃｔｅｒｉａ　）等の
細菌も又オゾンにより不活性化することができる。さら
に、マイコプラズマ、クラミゾイア及び糸状菌をオゾン
で不活性化して死菌ワクチンを製造することができる。

オゾンにより微生物を不活性化する際には、形態、特に
抗原認識部位に有意な変化を与えることなく不活性化を
完成しなければならない。そうでなければ、ワクチンは
自然の又は野性タイプの微生物への応答を促進するのに
効果的でない抗原決定部位に免疫応答するようになるで
あろう。

まず、ウィルスを適当な培地に増殖せしめる。

病原体の性質に応じて、微生物を増殖せしめるために種
々の栄養培地及び種々の技法を用いる。ウィルスについ
ては、ウィルスは通常適当な組織培養中で比較的低い増
殖度例えば０．０１〜Ｉ　Ｐｆｕ（ゾラク形成単位）／
細胞で増殖せしめる。そして微生物を細胞砕片から分離
し、活性ウィルスを力価測定し、そして使用のために貯
蔵し又は直接使用する。

細胞もしくはウィルス感染細胞又はウィルス懸濁液をオ
ゾン不活性化装量に移す。オゾン含有気体と不活性化す
べき微生物との間に大きな接触表面積を供する種々の不
活性化装置を使用することができる。気体と液との間に
実質的な接触を供する方法を用いる。

不活性化装置は、微生物分散体の薄層、特に表面が常に
更新されるような薄層を維持し、液のすべてがオゾン流
と直接接触することを保証するような手段を有する。こ
の型の暴露は回転する容器、例えは円筒形のビンのごと
き回転ビンを用いて達成するのが便利である。

ビンは、暴露中低速で、一般には約０，１〜約２０ｖ分
の速度で回転せしめるのが便利である。

この暴露により、オゾンはビン表面のほとんど全面にわ
たって液の薄Ｓｔ−形成している試料と反応する。オゾ
ン源を使用し、オゾンは例えば空気のごとき加湿された
気体流を含有する酸素中に希釈して使用する。一般にオ
ゾン濃度は約０．Ｏ５ｐｐｍ〜約１０ｐｐｍ、さらに一
般的には１〜５　ｐｐｍに保持する。流速は、一般には
約０．５〜１０１／分、さらに一般的には約１〜ｓ　１
１５＞、好ましくは約３〜６ｖ分とする。

他の不活性化装置は、攪拌された栄養培地中機生物懸濁
液の中に小泡すなわち微小気泡を分散せしめる。栄養培
地中にオゾン含有気泡の連続流を作り出すために７リツ
トデイ不り又は他の分散手段を使用するのが便利である
。気泡による攪拌に加えて機械的攪拌を使用することも
できる。他の条件は前記の条件と同様である。

オゾン不活性化法においては、各種の培地を用いること
ができる。代表的な培地には、イーグル（Ｅａｇｌｅ　
）の最少必須培地、及びドルベコ（Ｄｕｌｂｅ、ｃｅｏ
、）の変形最少必須培地が含まれる。さらに、上記の培
地には約１〜５襲の牛胎児血清。

緩衝剤及び抗生物質、例えば５〜２０ｍＭのヘペス（Ｈ
ＥＰＦＳ　）緩衝剤及び２５〜７５μｇ／ｆｎｌのゲン
タマイシンのごときアミノグリコシドを含有せしめるこ
ともできる。

オゾン不活性化容器に導入する微生物懸濁液の容置は、
容器が平均的に覆われるものとして、液層の厚さが約２
ｆｌｌｌｌ＋、好ましくは約１ｍ＋より小さくなる量と
する。つ、イルスの場合、ウィルスの濃度は一般に約１
０７〜１０”　Ｐｆｕ７ｆｎｌ、好ましくは１０８〜１
０”　Ｐｆｕ７４＋１とする。細胞の場合、適当な栄養
培地に約１０６〜１０１°細胞／ｌの濃度で細胞を接種
し、オゾン暴露に先立って、この培地中で増殖せしめる
。

暴露時間は、微生物固有の性質、気体流中のオゾンの鼠
、微生物のオゾンに対する感受性、及び（１１） 温度に依存して広範囲に変化せしめる。この時間は、微
生物の形態に有意な変化を与えることなく該微生物の完
全な不活性化を保証するのに十分な程度とする。この時
間は、一般に約１時間以上であって約９６時間を越えな
い程度であり、一般には約１２時間〜７２時間の範囲と
する。各微生物について最適時間を実験的に決定する。

低温又は高ｍを使用することができ、一般には約ｌＯ〜
５０℃の範囲とし、さらに一般的には約２０〜４０℃と
し、好ましくはやや高温、すなわち約３０〜４０℃とす
る。

微生物をオゾンに暴露した後、不活性化された微生物を
常法に従って分離する。暴露された微生物をビンから取
り出し、これを任意の便利な分離技法、例えば穏和な遠
心分離により分離する。次に、不活性化が完全であるか
否かを検定するため微／ｌ物にスクリーニングする。こ
れに代えて、放射能で標識した栄養源を用いて放射能で
標識された栄養源が微生物中に取り込まれるか否か全測
定することもできる。一旦微生物の全体的な不活性（１
２） 化が完成した後、ワクチンとして投与するための適当な
剤形に製剤する。

ワクチンは、固形剤又は液剤として、エアゾルとして、
及びこれらに類するものとして、種々の方法で製剤化す
ることができる。これらに代えて、ワクチンを鼻咽頭に
投与する場合に噴霧剤として投与することもできる。

投与方法及びワクチン投与する宿主に応じて、不活性化
された微生物の投与量を広範囲に変える。

ウィルスの場合、例えばマウスに対する一投与祉を１０
６〜１０’　Ｐｆｕとすることができ、より大きな動物
には体重に応じて量を多くする。但し直線的な比例関係
はない。すなわち、ヒトに対しては１０〜１００倍の範
囲で投与量を多くする。

宿主、病原体、投与方法及びオゾンで不活性化された病
原体を入れる媒体に依存して、病原体の量を広範囲に変
える。注射の場合には、０．０５１ＲＡ’〜２ｒｕｌｆ
注射する。異なる病原体は特定の生物学的試験に基づく
異なる単位で測定する。過敏性を調べる試験においては
１：１００及び１：１０に希釈して用いる。投与量は一
般に成人の場合約１０６個〜１０　細微生物の範囲で変
化し、小人の場合は前記の半分量とする。それぞれの微
生物についての最適量は実験的に決定する。

−回投与又は複数回投与を行う。複数回投与を行う場合
は、通常的２〜８週間間隔、さらに一般的には約３〜６
週間間隔に行う。

次に、この発明をさらに詳細に説明するために例を記載
するが、これによってこの発明の範囲を限定するもので
はない。

（実験） オゾン暴露系：暴露系は細胞培養物又はウィルス懸濁液
を長時間にわたりオゾンに暴露することができるように
設計し、そして構成した。この系は、２個のオゾン暴露
容器と１個の制御容器を有する。系の非生物的構成材料
とオゾンとの反応を防止するため、オゾンと接触する材
料にはすべて不活性材料であるガラス、テフロン、又は
ステンレス鋼を使用した。圧縮空気（３，５ｋｌｌＡｄ
　）を１４１　ｇＡｄに設定した圧力調整器を通し、そ
して２つの限界濾過器〔（ンシル・ぐニア州、ビッソプ
ルグ、ミーン・セフティ−・アプリアンシス（Ｍｌｎｅ
　５ａｆｅｔｙ　Ａｐｐｌｉａｎｃｅｓ　）社〕を直列
に通して系に導入する。各限外濾過器は、直径０．３１
Ｉｒｎの粒子を９９．９９％Ｆ去する効率を有し、そし
て追加の木炭要素を収容している。２個の調節弁を使用
してオゾン含有ｌｔヲ調節しながら、約２’ｐｐｍのオ
ゾンを系に導入し、そして濾過空気と混合した。

気体の主流を、加湿バブラー、ローラー装置及び逐次抜
取装置を収容した３７℃の定温器に導いた。

各暴露容器を通過する気体の流速は、逐次抜取装置の周
囲に放出することにより一定に維持した。

暴露すべき生物学的材料は殺菌した１　１　ｃｍ×２９
ｃｍの珪硼酸ガラス製ローラービン〔ニュ、−ツヤーソ
ー州、ニュー・プルンスウィック、ニュー・ブルンスウ
イック・サイエンティフィッｌ　（ＮｅｗＢｒｕｎｓｗ
ｌｃｋ　５ｃｉｅｎｔｉｆｉｃ　）製〕〔パイトン（Ｖ
ｉｔｏｎ　）シールを伴う特別に機械仕上げしたローラ
ーキャラ７°を装着したもの〕に入れた。暴露中ビンｅ
　１．５　＠／＊の速度で回転せしめ、オゾンとピンの
ほとんどの表面にわたって液の薄層のみからなる試料と
を反応せしめた。オゾンｍｅは、暴露容器に入る直前と
該容器から出る直後において測定した。気体は、オゾン
測定の前又は下流のローターメーターに入る前に水浴中
で冷却することにより除湿した。

オゾンの発生と監視ニオシンは、サンダー（５ａｎｄｅ
ｒ　）モデル■オゾナイザ−〔西独、オスターペルク（
Ｏａｔｅｒｂｅｒｇ　）、ニドウィン・サンダー・エレ
クトロアパラテパウ（Ｅｒｖｒｉｎ　５ａｎｄｅｒＥｌ
ｅｋｔｒｏａｐｐｒａｔ’ｅｂａｕ　）　Ｇ、ｍ、ｂ　
、Ｈ社〕を有する静電気アーク放電により医薬品銘柄の
酸素中で発生せしめ、定電圧供給装置により調節した。

オゾン濃度は流速３ｖ分において測定した。

ウィルスの増殖と力価検定：動物ウィルスは３７℃にお
いて、ローラー培養において増殖した感受性細胞（下記
）の単層中で増殖せしめた。ウィルスの調製には、非必
須アミノ酸（ＤｇＭＡ）を補充したドルベコの変形イー
グル最少必須培地、又はイーグルの最少必須培地（ＭＥ
Ｍ　）を使用して行った。いずれの培地にも１２．５μ
ｇＡｌのデンタマイシン、１２．５ｍＭのＨＥＰＥＳ緩
衝液、及び１％（Ｄ牛脂光血清（Ｆｅ２　）　［Ｖ−Ｔ
、　ｏ−がン（Ｌｏｇａｎ　）、ステライル・システＪ
Ａ　（５ｔａｒｔｌｅ　Ｓｙｓｔｅｍｓ　）製〕を含有
せしめた。感染細胞及び上清液を集め、そして−７０℃
で貯蔵し、その後細胞片が除去されるまでツルパル（５
ｏｒｖａｌｌ　）　ＧＳＡ　ｏ−ターを用いて４℃にて
２０分間、１０ｋｖ分で遠心分離した。こうして得た上
澄液はオゾンに暴露するまで一７０℃にてアリコートと
して貯蔵した。

インフルエンザＡウィルス（ＷＥＡＮ　株）　ハマディ
ンーダービー（Ｍａｄｌｎ−Ｄａｒｂｙ　）牛腎臓（Ｍ
ＤＢＫ　）細胞中で増殖せしめた。細胞に、細胞当り０
．０１プラグ形成単位（ｐｆｕ　）の強度で感染せしめ
、そして２７時間培養した・ ウィルス懸濁液のオゾンへの基ｍ：上記の細胞培養／ウ
ィルス暴露系全使用してウィルス懸濁液をオゾンに暴露
した。暴露すべきウィルス懸濁液のアリコー）１５０ｍ
ｌを、特に設計したキヤツジを装着した珪硼酸ガラス製
ローラー培養ビン３本に入れた。このビンを暴露系に接
続し、そして３７℃において１．５Ｖ分の速度で回転せ
しめ、加湿した気体（オゾン０．６４　ｐｐｍ　）を６
１７’ｉ＋の速度でビン中を通した。オゾンは回転して
いる培養ビンの表面に薄層をなして懸濁しているウィル
スと反応した。懸濁液を７２時間にわたって暴露した。

不活性化処理したワクチンの効果を見るため、６３匹の
マウスを使用し、はぼ同数ずつの４群に分けて試験を行
った。オゾン不活性化インフルエンザウィルスを生理的
に許容される緩衝媒体中に入れて調剤し、そして種々の
方法で投与した。次に試験区分と結果を示す。

７週令のスイスークェブスター雌マウス６３匹をおよそ
同数ずつ４群に分けた。媒体としては５　Ｘ　１０’Ｐ
ｆｕ／ｂ、２Ｊｉ含有する、５　％　Ｆｅ２　ｔ−伴う
組織培養培地を使用した。

第１群（１５マウス）：オフ５．ン不活性化インフルエ
ンザウィルスワクチン０．２　ｍｌを皮下投与した。

第２群（１５マクス）：ワクチン０．２−を皮下投与し
、さらに最初のワクチン注射から２週間後０．２Ｈのワ
クチンを補助投与した。

第３群（１５マウス）：０．１ｍＡ’のワクチンを鼻内
投与した。

第４群（１８マウス）二対象詳であってワクチン投与し
なかった。

ワクチンを投与して３週間後、−すべての群にインフル
エンザウィルスのエアゾルを投与した。インフルエンザ
ウィルスを投与後毎日死亡率と臨床的症状を記録した。

結果を次の第１表に示す。

第１表 死亡マウス／使用マウス死亡率（チ） 第１群　　　　０／１５　　　　　　０第２群　　　　
２／１５　　　　　１３第３群　　　　０／１５　　　
　　　０第４群　　　１３／１８　　　　　７０この発
明會さらに説明するためにさらに拡張した試験を行った
。試験においては、１００週令雌スイスーウェブスター
マウス１４０匹を同数の２群に分け、第１群には０．２
　ｍｌのワクチン（上記）（１９） を皮下投与し、第２群には０．２−の偽薬（オゾン処理
に用いた媒体）を皮下投与した。第１群のマウス２匹か
らワクチン投与後０．６．１２．２０日０に採血し、そ
して−緒にした血清を、８０チゾラク減少法により抗体
中和検定（、ＮＡ）を行った。

２１日１に、両群をインフルエンザのエアゾル（２Ｘ　
１０’　、Ｐｆｕ、４ｊ’　）に暴露した。ウィルスを
投与した後１．２．４．６．８及び１２日０に各群から
マウス４匹ずつを取り出し、それらの肺會集めてウィル
ス力価検定を行、い、血清を一緒にしてＮＡ検定を行っ
た。各群の４０匹ずつのプラスは死亡率試験のために飼
育し続けた。次の第２表及び第３表に結果を示す。。

第２表 （２０） ・第　３　表 １　　　９．４Ｘ１０’　　　　３．６Ｘ１０’２　　
１．１刈０’　　　　１．０Ｘ１０’６　　　　　　　
＜１０’　　　　　３．７Ｘ１０’８　　　　　　（１
０２９，５Ｘ１０’１２　　　　　　（１０２３，０Ｘ
１０２箒４表 ０ ０ ３０ ２０　　　　　１　：　１２８ （インフルエンザ投与後） １　　　　　　　　　　１：３２　　　　　　０２　　
　　　　　　　　１：１２８　　　　　０６　　　　　
　　　　　１：５１２　　　　１：８第２表は、ワクチ
ンがインフルエンザウィルスの投与に対して有効である
ことを示している。第３表はワクチンを投与したマウス
の肺ホモデネート中のインフルエンザウィルス力価が、
感染後１日〜８日の間、対照マウスに比べて約２〜４桁
低いことを示している。第４表は、インフルエンザワク
チンを皮下投与した後の第１群及びインフルエンザウィ
ルスをエアゾル投与した後の両群の血清中和力価（８０
チプラグ減少）を示す。このデータは、ワクチンを投与
した動物はワクチン投与後２日で高い中和抗体応答を有
すること、そして特に重要なことに、これらの動物はウ
ィルス投与後早い時間から高い抗体力価を有することを
示している。ワクチンを投与したマウスにおいて中和抗
体力価が高いことは肺においてウィルス力価が低いこと
と対応しており、そして、この結果としてマウスはウィ
ルス感染に対して保膜され、そして死亡率が低下する。

上記の結果から、オゾン不活性化法は、広範囲の種類の
病原体に対して哺乳動物を免疫するための効果的な方法
であることが明らかである。微生物をオゾンで不活性化
する方法は、不活性化のために微生物を精製する必要が
ないという点において大きな利点を有する。その上、最
終製品の中に不活性化薬剤が残留することがない。この
不活性化された微生物は、冷蔵、凍結条件下で又は凍結
乾燥粉末として長期間にわたり貯蔵することができる。

この不活性化は、制御された条件下で、実質上確実な効
果を伴って大殿且つ容易に行うことができる。技法が簡
単であり再現性が容易に得られ、そして同一の装置で広
範囲の微生物を扱うことができる。

以上、この発明を例を用いて詳細に記載したが、これは
この発明の理解に資するためのものであって、これらの
方法の変法もこの発明の範囲に入ることはいうまでもな
い。

以下余白

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、生理的に許容される担体中にオゾンで不活性化した
   免疫応答を惹起するのに十分な鎗の微生物を含んで成る
   哺乳動物象疫用ワクチン。 ２、前記微生物がウィルスである特許請求の範囲第１項
   記載のワクチン。 ３、前記ウィルスがインフルエンザウィルスで弗る特許
   請求の範囲第２項記載のワクチン。 ４、前記微生物が細菌である特許請求の範囲第１項記載
   のワクチン。　　　　　　　　　　　、５、病原体含有
   液とオゾン含有気体との間の接触面積を大きく維持しな
   がら、穏和全温度において、該病原体を不活、性化する
   のに十分な時間、該病原４’を該オゾン含有気体に暴露
   し、不活性化された該病原体會分離し、そしてこれを免
   疫応答を惹起せしめるのに十分な量生理的に許容される
   媒体中に含有せしめて製剤することを含んで成るワクチ
   ンの製造方法。 ６、穏和な温度において、病原体を不活性化するのに十
   分な時間、薄層状の液媒体中の病原体をオゾン含有気体
   に暴露し、不活性化された該病原体を分離し、そしてこ
   れを免疫応答を惹起せしめるのに十分な量生理−に許容
   される媒体中に含有せしめて製剤することを含んで成る
   ワクチンの製造方法。 ７、前記の薄層を、前記の液媒体としての栄養培地を少
   量収容した円筒形容器をゆっくりと回転せしめることに
   よって形成し、そしてオゾン含有気体中のオゾン濃度が
   約０．ｌｐｐｍ〜約１０　ｐｐｍである特許請求の範囲
   第６項記載の方法。　　　　８、前記の暴露を約り０℃
   〜約５０℃の温度範囲において行う特許請求の範囲第７
   項記載の方法。 ９、前記の病原体がウィルスである特許請求の範囲第６
   項又は第７項記載の方法。 １０、前記のウィルスがインフルエンザウィルスである
   特許請求の範囲第９項記載の方法。 １１４前記の病原体が細菌である特許請求の範囲“：：
   ＝１；：・二：ニ：’：：：７＊［＃’に＊？ｉ＆！（
   ｌｓ’するのに十分な時間、攪拌された液媒体中の病原
   体をオゾン含有小気泡の、流れに暴露し、不活性化され
   た該病原体を分離し、そしてこれを免疫応答を惹起せし
   めるのに十分な量生理的に許容される媒体中に含有せし
   めて製剤することを含んで成るワクチンの製造方法。