JPS58209986A - 抗生物質ホスホノクロリンおよびその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新抗生物質ホスホノクロリン（ｆｏｓ−ｆｏｎ
ｏａｈｌｏｒｉｎ　）およびその製造法に関するもので
ある。

本発明者らは土壌分離糸状菌　５ＡＮＫ１５６８０株、
５ＡＮＫ１０１８２株、８ＡＮＫ　１０２　Ｂ　２株お
よび５ＡＮＫ１０３８２株がダラム陽性およびダラム陰
性細菌に対して有効な新規抗生物質ホスホノクロリンを
生産することを見い出した。

従ってホスホノクロリンはこれら細菌に起因−するヒト
、動物、又は植物の疾病の予防あるいは治療に用いられ
る。本発明においてはホスホノクロリンの薬理上許容し
うる塩も包含される。

このような塩としてはナトリウム、カリウムのようなア
ルカリ金属塩、カルシウム、マグネシウムのようなアル
カリ土類金属塩、アルミニウム塩などをあげることがで
きる。

ホスホノクロリンを生産する菌株の菌学的性状は次の通
９である。

１）タラロマイセス・フラバノ（Ｔａｌａｒｏｍｙｃｅ
ｓｆｌａｖｕｓ　）　５ＡＮＫ　１５６８０は本発明者
らにより滋賀県犬山郡多賀町で採取した土壌より分離さ
れた子のう菌である。

ＣＹＡ培地上での生育は非常に良好で２５℃、７日でコ
ロニーの径は３３〜３５間に達する。コ　。

ロニー表面は羊毛状で淡橙黄色、裏面は灰黄色を呈する
。子のう果（Ｇｙｍｎｏｔｈｅｃｉａ　）を多数形成す
るが分生子の形成は少い。また、淡黄色の可溶性色素を
産生ずる。子のり果は黄色の菌糸網よシなシ球形で口孔
はなく、径２００〜５００μｍである。子のり果原基は
太くて長い造のり器とそれに巻きついた細い造精器よシ
成る。造のり器の多くはこん棒状で長さ３０〜２００μ
ｍ１径３〜５μｍである。子のうはほぼ球形で無色、８
胞子性、その径は８〜１３μｍで消失性である。子のう
胞子は黄色、楕円形、３．５〜５．５　ｘ　２．５〜３
．０μｍで全体に刺を有する。

分生子柄は滑面で基底菌糸層から発達し、２０〜７０　
Ｘ　１．５〜２．０μｍである。ベニシリは単輪生体ま
たは複輪生体である。メトレは２〜３本群生し、１０〜
１５Ｘ２〜２．３μｍである。フイアライドはペン型で
メトレあた夛２〜５本輪生し、７．５〜１５Ｘ２．Ｏ〜
２．５μｍ″′ｃある。分生子の多くは楕円形、２．０
〜４．ＯＸｌ、５〜２．５μｍ１滑面で連鎖する。

ＣＹＡ培地上、３７℃では２５℃の場合よシ生育はやや
悪く、コロニーの径は３２〜３３隨である。子のう果の
形成は非常に少く、可溶性色素は産生じない。裏面は灰
黄色ないし橙褐色である。

ＣＹＡ培地上、５℃では胞子および分生子は発芽しない
。

ＭＥＡ培地ではＣＹＡ培地上での場合に近似するが、子
のう果の形成はそれより良好であり、可溶性色素を産生
じない。

０２５Ｎ培地では生育は極めて悪く、コロニーの径は７
日間で４〜５朋であり、分生子は形成するが、子のり果
は形成しない。

上記の如き性状を有する菌株につき検索をした結果、Ｊ
、１．Ｐｉｔｔ著、”’　Ｔｈｅ　ｇｅｎｕｌＩＰｅｎ
ｉｃｌｌｌｉｕｍａｎｄ　ｉｔｓ　ｔｅｌｅｏｍｏｒｐ
ｈｉａ　５ｔａｔｅｓ　ｇｕｐｅｎｌａｉｌｌｉｕｍ　
ａｎｄＴａｌａｒｏｍｙｃａｓ”（１９７９年Ａｃａｄ
ｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ発行）に詳細に記載されているタ
ラロマイセス・フラバノの菌学的性状とよく一致した。

従って、５ＡＮＫ１５６８０株をタラロマイセス・フラ
バノ（Ｔａｌａｒｏｍｙｃｅｓ　ｆｌａｖｕＩＩ（Ｋ１
５ｃｋｅｒ　）　５ｔｏｌｋ　ｅｔ　Ｓａｍｓｏｎ）と
同定した。尚、ここで用いた培地の組成、作製法は上記
文献に記載されている。

２）フザリウム・オキシスポラム（Ｆｕｓａｒｌｕｒｒ
＋ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ　）　５ＡＮＫ　１０１８２は秋
田県仙北郡田沢湖町で採取した土壌よシ分離された不完
全菌である。

ポテト・シュークロース寒天培地（以下、ＰＳＡと略記
する）上における生育は良好で２６℃、４日目でコロニ
ーの直径は４．５〜５．０ｃＩｒＬに達する。コロニー
の中心部は淡紫色を呈し、周辺部はほぼ白色、ビロード
状、裏面はクリーム色である。完全世代は観察されない
が、大型分生子および小型分生子を多数形成する。

大型分生子は半透明で鎌形を示し、両側が絹まる。また
、しばしば一端または両端が内側にかぎ形に曲シ、２〜
６隔壁を有する。そのサイズは２隔壁を有するものは２
０〜２８Ｘ４．５〜５．５μｍ、　３隔壁を有するもの
は２５〜３５　ｘ　４．５〜５．０μｍｚ４隔壁を有す
るものは２５〜４０８４．５へ−５，５μｍｓ５隔壁を
有するものは３５〜５０Ｘ４．５〜５．５μｍｓ６隔壁
を有するものは４０〜５０Ｘ４．５〜５．５μｍである
◎ 大型分生子柄は白糸上にメトレまたは面接フイアライド
を形成し、１０〜３０Ｘ３〜５μｍでおる。

小型分生子は無色、長楕円形でやや湾曲するものもあり
、隔壁はなく、５〜１０×３〜５μｍで連鎖することは
ない。

小型分生子柄は気菌糸上に単純なフイアライドを形成し
５〜３０ｘ２．５〜４．５μｍである。

厚膜胞子を多数形成し亜球形、平滑または粗面で８〜１
２μｍである。厚膜胞子はほとんどは頂生じ通常は単生
であるが、まれに２〜３連鎖することがある。

一方、３７℃では生育しない。

上記の如き性状を有する菌株につき検索をした結果％　
ＣＩＢｏｏｔｈ著”　Ｔｈｅ　ｇｅｎｕｓ　Ｆｕｓａｒ
ｉｕｍ“１３０〜１５４頁、１９７１年発行、Ｃｏｍｍ
ｏｎｗｅａｌｔｈ　Ｍｙｃｏｌｏ−ｇｆｃａｌ　Ｉｎ５
ｔ１ｔ、ｕｔｅ、　Ｋｅｙ＋　Ｅｎｇｌａｎｄに詳ａＵ
Ｃ記載されているフザリウム・オキシスポラムの菌学的
性状とよく一致した。従って、５ＡＮＫ１０１８２株を
フザリウム・オキシスポラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍｏｘｙ
ｓｐｏｒｕｍ　）と同定した。

３）フザリウム・アペナセウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍａｖ
ｅｎａｃｅｕｍ　）　９ＡＮＫ　１０２８２は東京都府
中市内で採取した柿の種よシ分離された不完全菌である
。

ＰＳＡ上における生育は良好で２６℃、４日目でコロニ
ーの直径は約５ｃＩｒＬに達する。コロニーは淡赤紫色
を呈し、羊毛状で裏面は赤紫色である。中心部に大を分
生子をよく形成するが小型分生子の形成は全く見られな
い。

大型分生子は半透明で長紡錘形、先端が内側に湾曲し尖
頭状を呈するものが多く、３〜５（６）隔壁を有する。

そのサイズは３隔壁のものが２８〜４５Ｘ３．５〜４．
５μｍ、４隔壁のものが４０〜５０×４〜５μｍ、　５
隔壁を有するものが４５〜６３Ｘ４〜５μｍである。

大型分生子柄はポリプラスチック型とフイア゛ライド型
があり、気菌糸から直接形成される場合と、太いプライ
マリ−分生子柄（径４．５〜７．０μｍ）の先に形成さ
れる場合がある。

厚膜胞子は形成されず、また、完全世代も形成されない
。

一方、３７℃では生育しない。

上記の如き性状を有する菌株につき検索をした結果、　
Ｃ，Ｂｏｏｔｈ著”　Ｔｈｅ　ｇｅｎｕｓ　Ｆｕｓａｒ
ｌｕｍ　’　９１〜９４頁、１９７１年発行、Ｃｏｒｒ
ｕｎｏｎｗｅａｌｔｈ　ＭｙｃｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｓ
ｔｉｔｕｔｅ＋　Ｋｅｗ、　Ｅｎｇｌａｎｄ　　に詳細
に記載されているフザリウム・アペナセウムの菌学的性
状とよく一致した。従って５ＡＮＫ１０２８２株をフザ
リウム・アペナセウム（Ｆｕｇａｒｉｕｍ　ａｖｅｎａ
ａｅｕｍ　）と同定した。

４）フザリウム・トリシンクタム（Ｆｕａａｒｉｕｍｔ
ｒｉｃｉｎｃｔｕｍ　）　５ＡＮＫ　１０３８２は東京
都府中市内で採取した柿のへりよシ分離された不完全菌
である。

ＰＳＡ上における生育は良好で２６℃、４日目でコロニ
ーの直径は約４ｃｒｒＬに達する。コロニーは羊毛状で
中心部が淡紫赤色、周辺はほぼ白色、裏面は赤紫色であ
る。大型分生子は中心部に特に多数形成されるが、小型
分生子はごくわずかに形成されるのみでちる。

大型分生子は半透明、鎌形で（２）３〜４（５）個の隔
壁を有する。大きさは２隔壁を有するものが１５〜２５
Ｘ２．５〜４．５μｍｓ３隔壁を有するも゛のが２０〜
２５Ｘ２．５〜４．５μｍ、　４隔壁を有するものが２
６〜３５ｘ３．０〜４．５μｍｓ５隔壁を有するものが
２６〜３５Ｘ２，５〜４．５μｍである・大型分生子柄
は菌糸上に直接またはメトレを形成したフイアライドか
らなり、１０〜３ｏ×３〜５μｍである。

小型分生子は無色、平滑で連鎖することはなく７．５〜
１５．Ｏｘ５．０〜７．５μｍでほとんどが洋なし型で
あるが、楕円形ないしは亜球形のものも混存する。

小型分生子柄は菌糸上にフィアライドを形成し、５〜２
０Ｘ２．５〜４，５μｍである。

厚膜胞子も完全世代も観察されない。

一方、３７℃では生育しない。

上記の如き性状を有する菌株につき検索をした結果、　
Ｃ，Ｂｏｏｔｈ著＠Ｔｈｅ　ｇｅｎｕ＠Ｆａｓａｒｌｕ
ｍ“８３〜８４頁、１９７１年発行、Ｃｏｍｍｏｎｗｓ
ａｌｔｈ　ＭｙｅｏｌｏｇｌａａｌＩｎｌｌｔｉｔｕｔ
ｅ＋　Ｋｅｗ、　Ｅｎｇｌａｎｄに詳細に記載されてい
るフザリウム・トリシンクタムの菌学的性状とよく一致
した。従って、５ＡＮＫ１０３８２株をフザリウム３ト
リシンクタム（Ｆｕａａｒｉｕｍ　ｔｒｉｃｉｎｅｔｕ
ｍ　）と同定した。

そして５ＡＮＫ１５６８０株、５ＡＮＫ１０１８２株、
５ＡＮＫ１０２８２株および５ＡＮＫ１０３８２株は工
業技術院微生物工業技術研究所に寄託されておシその微
生物寄託番号はそれぞれ第６５３４号、第６５３５号、
第６５３６号および第６５３７号である。

以上ホスホノクロリンの生産菌について説明したが、こ
れら菌類の諸性質は一定したものではなく自然的、人工
的に容易に変化することは周知の通シであ）本発明で使
用しうる菌株はタラロマイセス属またはフザリウム属に
属するホスホノクロリンを生産するすべての菌株を包含
するものである。

更ニタラロマイセス・フラパスの不完全世代はペニシリ
ウム・ダングルディとして周知であシ、マたフザリウム
・アペナセウムの完全世代はジペレラ・アペナセアとし
て周知であるので、これらの菌株も当然ホスホノクロリ
ンを生産し得るものでアシ、本発明のホスホノクロリン
生産菌に含まれる。

本発明における培養は一般微生物における培養方法に準
じて行われ、液体培地中での振盪培養あるいは通気攪拌
培養によるのが好ましい。

培地成分としてはたとえば炭素源としてブドウ糖、マル
トース、シュクロース、マンニット、糖蜜、グリセリン
、デキストリン、゛澱粉、大豆油、綿実油などが、窒素
源としては大豆粉、落花生粉、綿実粉、カザミノ酸、フ
ァーマミン、魚粉、コーン・スチープ・リカー、ペグト
ン、肉エキス、イースト、イースト・エキス、硝酸ソー
ダ、硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウム等が又無機塩
として食塩、燐酸塩、炭酸カルシウム、微量金属塩など
が必要に応じて適宜添加される。液体培養に際してはシ
リコン油、植物油、界面活性剤等が消泡剤として適宜使
用される。培地の−は弱酸性ないし中性附近、培養温度
は２０℃から３０℃、特に２４℃前後が好ましい。培養
の経過に伴って生産されるホスホノクロリンの力価の経
時的変化はプロテウス・ミラビリス（ＰｒｏｔｅｕｌＩ
ｍｉｒａｂｉｌｉｓ　）　５ＡＮＫ　７０４６１を被検
菌としたべ一ノ４−ディスク（東洋科学産業に、に、製
、直径８　ｍｒｔｃ　Ｔｈ１ｃｋ　）検定法により測定
した。通常１２０〜１３０時間の培養でホスホノクロリ
ンの生産量は最高値に達する。主として培養液中の液体
部分に存在するホスホノクロリンは、培養終了後菌体そ
の他の固型部分をけいそう土等を濾過助剤とする濾過操
作、あるいは遠ｌＬ？分離によって除去し、そのろ液あ
るいは上清中から抽出・精製される。ホスホノクロリン
はその物理化学的性状を利用することによυ、たとえば
吸着剤を用いて採取することができる。吸着剤としては
たとえば活性炭、あるいは吸着用樹脂であるアンバーラ
イトＸＡＤ−２、ＸＡＤ−４。

ＸＡＤ−７９（ローム・アンド・ハース社渠）やダイヤ
イオンＨＰ　１０．ＨＰ　２０．ＨＰ　２０ＡＧ、ＨＰ
　５０等（三菱化成工業（株）製）が使用されホスホノ
クロリンを含む液から上記の如き吸着剤の層を通過させ
て含まれる不純物を吸着させて取りのぞくか、ホスホノ
クロリンを吸着させた後、メタノール水、アセトン水、
ｎ−ブタノール水などを用いて溶出する。酸性物質とし
て挙動することを利用して陰又は陽イオン交換体に吸脱
着させて精製することができる。陰イオン交換体として
はＤＥＡＥ−セルロース（ブラウン社製）、ＤＥＡＥ−
セファデックス、ＱＡＥ−セファデックス（ファルマシ
ア社製）、デュオライトＡ−２，Ａ−２（ダイアモンド
・ジャムロック・ケミカル社製）、アンバーライト　Ｉ
ＲＡ−６８（ローム・７７１”・ハース社ａ）　、ダウ
エックス１ｘ４゜２１Ｋ（ダウ・ケミカル社製）等が利
用出来る。

又、陽イオン交換体としてはアンバーライトＩＲＣ−５
０．ダウエックス５０Ｗ等が利用出来る。

また、上記のごとき酸性物質の性質を利用して、ジメチ
ル・ベンジル・セチル・アンモニウムクロライドの如き
４級アンモニウム塩を水と混合しない溶媒、たとえばジ
クロルメタン等に溶解しホスホノクロリンを水溶液から
４級アンモニウム塩として抽出する方法も用いられる。

更にホスホノクロリンを精製するためにはアビセル（旭
化成工業（株）＠製）などのセルロースあるいはセファ
デックスＬＨ−２０（ファルマシア社製）などを用いた
分配カラムクロマトグラフィーやシリカダル、アルミナ
、フロリジルのような担体を用いた吸着カラムクロマト
グラフィー、又は逆相用担体を用いた逆相カラムクロマ
トグラフィー、ホスホノクロリンと混在する不純物との
溶媒に対する分配率の差を利用した抽出法、あるいは向
流分配法などが有効な方法といえる。以上の精製手段を
単独あるいは適宜組み合せ、反復用いることによシホス
ホノクロリンを精製することができる。

そして、このようにして得られたホスホノクロリンは所
望によシ常法に従って薬理上許容しうる塩に変換するこ
とができる。

このようにして得られたホスホノクロリンは次の理化学
的性状を有する。

１）物質の性状：酸性、水溶性の無色油状物質２）　比
旋５’ｅｆ　：　Ｃα）ｊ５ｏ　（Ｃ、０，５６、水）
３）分子式：Ｃ２Ｈ４０４ＰＣｔ（トリメチルシリル誘
導体の高分解能マススペクトル法によシ測定） ４）分子量：１５８（）リメチルシリル誘導体のマスス
ペクトル法によシ測定） ５）紫外線吸収スペクトルニλｍａＸ　ｎｍ（”ＩＪ水
溶液中で測定した紫外線吸収スペクトルは第１図に示し
た通ｐ　２７６　ｎｍ（Ｅ：！＝１９．７）に極大吸収
を示す。

６）赤外線吸収スペクトルニジＫＢｒｃＩｒＬ−１ａｘ ＫＢｒディスクで測定したナトリウム塩の赤外線吸収ス
ペクトルは第２図に示す通シである。

７）核磁気共鳴吸収スペクトル：δ：ｐｐｍＤＭＳＯ−
ｄ６中内部基準にＴＭＳ　（中肉ラメチルシラン）を使
用して測定した核磁気共鳴吸収スペクトル（９０ＭＨｚ
）は第３図に示す通りである。

８）溶解性二 水、メタノールに可溶、アセトン、クロロホルム、酢酸
エチルに不溶。

９）呈色反応： １％モリブデン酸アンモニウム溶液−５０％硫酸、ヨー
ド、グ四モ・クレゾール・グリーンに陽性。

１０）薄層クロマトグラフィー：■（、値０．４６吸着
剤；メルク社製シリカゲルグレート煮５７１５ Ｊｌｆ［媒；　７０％ｎ−グロｉ４ノールー水１１）抗
菌カニホスホノクロリンの種々の微生物に対する最小阻
止ａ度（ＭｆＣ）は第１表に示す通りである。

ディフコ社製普通寒天培地を用いた寒天稀釈法で行い、
３７℃、２４時間培養後にそれぞれの微生物に対するＭ
ｆＣ値を測定した。

エツシエリヒア・コリー　　　　　　　）２００　　　
　　）２０ＯＮＩＨＪ　　ＪＣ−２ エツシエリヒア・コリー　　　　　　　）２００　　　
　　　　　６．２５　　Ａ５ エツシエリヒア・コリー　　　　　＞２００　　　　　
　６．２５ＳＡＮＫ　７２８７５ クレブジ豊う・ニュウモニアエ　　　＞Ｚｏｏ　　　　
　）２００ＰＣＩ　　６０２ クレブシェラ・ニュウモニアエ　　　　２００　　　　
　　　６．２５ＳＡＮＫ　７４９７５ シュードモナス・エルギノーザ　　　）２００　　　　
　２０ＯＮＣＴＣ１０４９０ エンテロバクタ−クロアカニ　　　　　＞２００　　　
　　２００ＳＡＮＫ　　７０１６３ シダラ・フレキシ不り　２ａ　　　　　　）２００　　
　　　　　　３．Ｌ３ザルモネラ・エンテリティアイヌ
　　　　　２５　　　　　　　３．１３セラチア・マル
セスセンス　　　　　＞２００　　　　　１００ＳＡＮ
Ｋ　７３０６０ プロテウス・プルがリス　　　　　　　　　６，２５　
　　　　１．５６ＳＡＮＫ　　７３２６６ プロテウス・ミラビリス　　　　　　　　　１．５６　
　　　　１．５６ＳＡＮＫ　　７０４６１ プロテウス・ミラビリス　　　　　　　　　１．５６　
　　　　３．１３ＳＡＮＫ　　７１８７３ プロテウス・レットゲリ　１６０３　　　１００−２０
０　　　　２００本グルコース−６−リン酸 上記の如きホスホノクロリンの特性を既知抗生物質の諸
性状と比較した結果新規抗生物質と判定された。

１ノ ホスホノクロリンはダラム陽性菌およびダラム陰性細菌
に起因する感染症、例えば敗血症、呼吸器感染症、尿路
感染症などに使用される。

投与形態としては経口または非経口投与である。

経口投与としては、例えば錠剤、カプセル剤、散剤、顆
粒剤であシ、非経口投与としては例えば注射剤である。

注射剤の調製時にはオートクレーブによる滅菌よシもミ
リポアフィルタ−などを用いて除菌するのが好ましい。

投与量は症状、年令、体重その他によシ異なるが、通常
成人に対して１日約２００ｒｎｙ乃至２０００１１１ｙ
を１回または数回に分けて投与するのが好ましい。必要
に応じてこの投与量は更に増減できる。

次に実施例をあげて本発明を更に詳しく説明するが、本
発明はこれらの実施例に限定されるものではない。

実施例１゜ フデリウム・オキシスポラム　５ＡＮＫ　１０１８２株
をマツシュポテト２．５％、シュクロース２．（１、カ
ザミノ酸１，０％、リン酸−カリウム０．５　％　、硫
酸マグネシウム０．２５％（滅菌前２無調整）からなる
培地８０ｍを含む５００ｄ容三角フラスコ（ヘン付）１
０本に°それぞれ一白金耳ずつ接種し２４℃で１２０時
間培養した。この培養涙液６００　ｍｌをダウエックス
ｌ　Ｘ　４　（ｃＨ３Ｃｏｏ−型）４０１ｎ！！ツカラ
ムに吸着させた。カラムと２，５係酢酸で洗浄後、ＰＨ
５，０の２．５係酢酸・ピリジン緩衝液で溶出し活性分
画２００’ｍｌを得た。この活性分画を減圧下濃縮しｐ
［−１３，０に調整後、アンバーライ）　ＣＧ−５０（
Ｈ”型）１００ｍＡ’のカラムに吸着させ、水で展開し
活性分画４５ｄを得た。得られた活性分画を種水酸化す
）　ＩＪウム水溶液で声７．０に調整後、凍結乾燥する
ことによ勺ホスホノクロリンフ　ｍ９を含む粗粉末５５
■を得た。

実施例２゜ タラロマイセス・フラバノ　５ＡＮＫ１５６８０株をマ
ツシュボテ）２．５％、シュクロース２．０チ、カザミ
ノ酸１．０％、リン酸−カリウム０．５％、硫酸マグネ
シウム０．２５チ（滅菌前２無調整）からなる培地８０
Ｆｎｌを含む５００ｄ容三角フラスコ（ヘン付）１０本
にそれぞれ一白金耳ずつ接種し、２２０ｒｐｍの回転振
盪培養機によシ２４℃にて９６時間培養した。この培養
液を同一の培地８０ｒｎｌを含む５００プ容三角フラス
コ（ヘン付）１２５本に５％接種し２２０　ｒｐｍの回
転振盪培養機によ＃）２４℃にて１２０時間培養した。

得られた培養液を合わせ、セライトを加えて沖過し、ｐ
液１０！を得た。このろ液をクロマト用活性炭１にのカ
ラムを通過させ、通過液をダウエックス２１　Ｋ　（Ｃ
Ｈ３ＣＯＯ−型）６００−〇カラムに吸着させた。カラ
ムを２．５％酢酸で洗浄後、ｐＨ５，０の２．５チ酢酸
−ピリジン緩衝液で溶出し活性分画約１７００ｍ／を得
た。この活性分画を減圧下で濃縮し、−酢酸・ピリジン
緩衝液を留去後ダウエックス５０ＷＸ４（Ｈ＋型）２０
０ｍＡ’のカラムニ吸着すせ水で展開し、活性分画１４
ＯＮを得た。更にこの活性分画を減圧下濃縮しアンバー
ライトＣＧ−５０（Ｈ＋型）４００−〇カラムに吸着さ
せ水で展開し活性分画１５０ｍ／４を得た。更に活性分
画を減圧下で濃縮し、ダウエックス５０ＷＸ４（Ｈ＋型
）１！のカラムに吸着させ水で展開し得られた活性分画
８０罰を減圧下濃縮乾固してホスホノクロリン４５０■
を得た。

実施例３゜ タラロマイセス・クラバス５ＡＮＫ１５６８０株を実施
例１と同様に培養し得られた培養涙液３０ｊをダウエッ
クス２１　Ｋ　（ＣＨ，Ｃｏｏ−型）１．８Ａに吸着せ
しめ、２．５係酢酸水で洗浄後、ｐｌ−１５，Ｑの２．
５％酢酸・ピリジン緩衝液で溶出し活性分画として１５
７を得た。この活性分画を減圧下濃縮して酢酸・ピリジ
ン緩衝液を留去した。５００ｍ／に濃縮しダウエックス
５０Ｗｘ４（Ｈ＋型）１０００ｍｌのカラムに吸着させ
、水て展開し活性分画３２７麻を得た。この活性分画を
減圧下濃縮しアンバーライトＣＧ−５０（Ｈ＋型）１０
００ｍＩＶのカラムに吸着後、水で展開し活性分画４４
５ｄを得た。この活性分画を０．０５Ｍ　、　ｐＨ５，
０のトリエチルアミン・酢酸緩衝液で緩衝化したＤＥＡ
Ｅ　−セファデックスＡ−２５１５０ｍＡ！のカラムに
吸着せしめｐＨ５，０の０．０５　Ｍから０．１Ｍのト
リエチルアミン・酢酸緩衝液で順次溶出し５にの活性分
画を得た。更にこの活性分画を減圧下で濃縮し、ダウエ
ックス５０ＷＸ４　（Ｈ＋型）１！のカラムに吸着させ
水で展開し活性分画３００ｍ１を得た。

更にこの活性分画を減圧下で濃縮し、アンバーライトＣ
Ｇ−５０（Ｈ＋型）１ｊのカラムに吸着させ水で溶出し
た。得られた活性分画４２０　ｍｌを減圧下で濃縮乾固
して油状物１．４１を得た。得られた油状物１８５ｍ９
をメルク社製シリカダルプレートＡ５７１５（２０Ｘ２
０ｍ）１０枚に吸着せしめ、７０チｎ−グロパノールー
水で１５ｃＩｒＬ展開させヨードによる呈色反応で一陽
性の部分をかき取り８０循メタノール−水で溶出した。

溶出液を減圧下で濃縮してメタノールｔ−留去後、ダウ
エックス５０ＷＸ４（Ｈ″−型）１ｉのカラ、ムに吸着
させ水で溶出を行いフラクション３３〜３８（分画１０
ｍ／）の活性分画６０ｍ１を集めた。この活性分画を／
２５Ｎ　ＮａＯＨでｐＨ’ｔ７．０に調整し、次いで減
圧下で濃縮し凍結乾燥を行って白色粉末のホスホノクロ
リンのナトリウム塩７Ｌ２ｍｇを得た。

【図面の簡単な説明】

第１図はホスホノクロリンの紫外線吸収スペクトルを示
す。図中、（１ンは０．０１Ｎ塩酸水溶液、（２）はｐ
Ｈ７，Ｑ、（３）は０．０１Ｎ水散化ナトリウム水溶液
を示す。第２図は同物質の赤外線吸収スペクトルを示し
、第３図は同物質の核磁気共鳴吸収スペクトルを示す。 特許出願人　三共株式会社 代理人　弁理士樫　出庄治

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、抗生物質ホスホノクロリンおよびその薬理上許容さ
   れる塩。ここにホスホノクロリンは下記の特性を有する
   。 １）物質の性状：酸性、水溶性の無色油状物質 ２）比旋光度：〔α発５０（Ｃ，０，５６，水）３）分
   子式：Ｃ２Ｈ４ｏ４Ｐｃｔ（トリメチルシリル誘導体の
   高分解能マススペクトル法に より測定） ４）分子量：１５８（）リメチルシリル誘導体のマスス
   ペクトル法によシ測定） ５）紫外線吸収スペクトル：λｍａｘ　ｎｒｎ（”ＩＱ
   Ｉ＋　）水溶液中で測定した紫外線吸収スペク トルは第１図に示した通シ２７６　ｎｍ　（Ｅ　ｔ　！
   ＝１９．７）に極大吸収を示す。 ６）赤外線吸収スペクトルニジＫＢ’ｃｒｒｔ＝ａｘ ＫＢｒディスクで測定したナトリウム塩の赤外線吸収ス
   ペクトルは第２図に示す通シである。 ７）核磁気共鳴吸収スペクトル：δ：ｐｐｍＤＭＳＯ−
   ｄ　６中肉部基準にＴＭＳ　（テトラメチルシラン）を
   使用して測定した核磁気共鳴吸収スペクトル（９０ＭＨ
   ｚ）は第３図に示す通シである。 ８）溶解性： 水、メタノールに可溶、アセトン、り。 ロロホルム、酢酸エチルに不溶。 ９）呈色反応： １ｑｂモリブデン酸アンモニウム溶液−５０％　Ｔｍ　
   Ｗｉｔ　、ヨード、ブロモ・クレゾール・グリーンに陽
   性。 １０）薄層クロマトグラフィー：Ｒｆ値０．４６吸着剤
   ；メルク社輿シリカｒルプレー トＡ　５７１５ 展開溶に；　７０％ｎ−プロノ臂ノールー水２、　タラ
   ロマイセス属またはフザリウム属に属するホスホノクロ
   リン生産菌を培養してその培養物よりホスホノクロリン
   を採取することよｌ）なるホスホノクロリンの製造法。 ここにホスホノクロリンは次の理化学的性状を有する。 ■）物質の性状：酸性、水溶性の無色油状物質 ２）比旋−ｉ［：　（α〕：５０　（Ｃ、０，５６、水
   ）３）分子式：Ｃ２■４ｏ４ＰＣ６（トリメチル−７リ
   ル誘導体の高分解能マススペクトル法に よシ測定） ４）分子ｉＬ：１５８（トリメチルシリル誘導体のマス
   スペクトル法によシ測定） ５）紫外線吸収スペクトル：２ｍ１ｌＸ　ｎｍ（”１ｍ
   ）水溶液中で測定した紫外線吸収スペク トルは第１図に示した通り２７６　ｎｍ（Ｅ：：＝１９
   ．７）に極大吸収を示す。 ６）赤外線吸収スペクトルニジＫＢｒｃＴＩＬ７ｔａｘ ＫＢｒｆイスクで測定したナトリウム塩の赤外線吸収ス
   ペクトルは第２図に示す通りである。 ７）核磁気共鳴吸収スペクトル：δＳｐｐｍＤＭＳＯ−
   ｄ　６中肉部基準にＴＭＳ　（テトラメチルシラン）を
   使用して測定した核磁気共鳴吸収スペクトル（９０ＭＨ
   ｚ　）は第３図に示す通シである。 ８）溶解性二 水、メタノールに可溶、アセトン、ク ロロホルム、酢酸エチルに不溶。 ９）呈色反応； １％モリブデン酸アンモニウム溶液− ５０係　硫酸、ヨード、ブロモ・クレゾール・グリーン
   に陽性。 １０）薄層クロマトグラフイーニＲｆ値０．４６吸着剤
   ：メルク社製シリカｒルグレー ト朧５７１５ 展開溶媒；７０チｎ−ノロパノール−水３、　タラロマ
   イセス属、またはフザリウム属に属するホスホノクロリ
   ン生産菌がタラロマイセス・フラバノ　５ＡＮＫ１５６
   ８０株（倣工研菌寄第６５３４号）、フザリウム・オキ
   シスポラム５ＡＮＫ　１０１８２株（微工研菌寄第６５
   ３５号）、フザリウム・アペナセウム　５ＡＮＫ１０２
   ８２株（微工研菌寄第６５３６号）およびフザリウム・
   トリシンクタム　８ＡＮＫ１０３８２株（微工研菌寄第
   ６５３７号）である特許請求の範囲第２項記載の製造法
   。