JPS58219189A - スパガリン−１５−ホスフエ−トおよびその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は式（１） で表わされるＮ−（４−（３−アミノプロピル）アミノ
ブチル）−２−（（”）−”−グアニジノ−３−ホスホ
ヒドロキシヘプタンアミド〕−２−ヒドロキシエタンア
ミド（以下スパガリン−１５−ホスフェートという。）
およびその製造法に関するものであり、本発明化合物は
顕著な制がん作用を有し、制がん剤として有用なもので
ある。

本発明者らは、制がん剤の組織的研究において、／ｅチ
ルス属に属する菌株バチルス・ラテロスボルスＢＭＧ１
６２−ａＦ２（微工研菌寄第５２３０号）の培養液中に
スパガリン（Ｓｐｅｒｇｕａｌｉｎ）　　と命名した新
規の制がん抗生物質ＢＭＧ１６２−ａＦ２を発見した（
ジャーナル・オプ・アンテピ゛オテクス、３４巻、１６
１９頁および１６２２頁、１９８１年）。スパガリンの
化学構造は次式（ＩＩ）で表わされ、その１５位の立体
配置はＳであり１１位の立体配置はいまだ決定されてい
ない（ジャーナル・オプ・アンチビオチフス、３４巻、
１６２２頁、１９８１年）。またこの構造式の化合物は
酸アミドとグリオキシリルスプルミジンとの縮合によっ
ても合成され、得られたエピマーは天然の（→−スパガ
リンと非天然の（ト）−スパガリンに分離されｆｃ（ジ
ャーナル・オブ・アンチビオチフス、３４巻、１６２５
頁）。

た制がん効果を有することを見い出し本発明を光合成に
よって得られたスパガリンの１位のアミン基、４位のイ
ミノ基および１１位の水酸基を保護したのち、１５位の
水酸基をリン酸エステル化し、続いて保Ｗ！ｉ基を脱離
するか、もしくはスパガリンの合成における一方の原料
（Ｂ）　　’７−ゲアニジノー３−ヒドロキシヘプタン
アミドをリン酸と反応させ、下記式 で示されるリン酸エステルを得、次いでスパガリンの他
方の原料であるＮ−（４（３−アミノプロピル）アミノ
ブチル）−２，２−ジヒドロエタンアミドと常法により
縮合することにより得ることができる。

上記の方法における１位のアミノ基、４位のイミノ基お
よび１１位の水酸基を保護する保護基としては、従来ペ
プチド合成などに常用されているアミノ保護基を使用し
うるが、本発明の式（１）の化合物はアルカリおよび酸
にきわめて不安定なため、常法による加水素分解で容易
に脱離できるペ　　　　　□ンジルオキシカルボニル基
やバラメトキシベンジルオキシカルニル基などの７２ル
キルオキシカルボニル基が好ましい。スパガリンにこれ
らのアミノ保Ｍ基を導入するには、公知の方法、例えば
活性エステル法を用いることが有利である。一般にこれ
らの方法では、スパガリンの有するグアニジン基には反
応しない。

本発明の式（１）における化合物が（→体（天然のスパ
ガリンと同様の旋光度をもつもの）である化合物は（→
−スパガリンの１位のアミノ基、４位のイミノ基を保護
し、次いでｌ１位の水酸基を異性化することなく保護し
た後、リン酸エステル化することにより得ることができ
る。１１位の水酸基を異性化することなく、導入するこ
とができる保護基としてはテトラヒドロピラニル基が好
まシイ。

１１位の水酸基を異性化することなく選択的にテトラヒ
ドロピラニル化するには、無水の有機溶媒好ましくは無
水ジメチルホルムアミド中１〜３当量の２．３−ジヒド
ロ−４Ｈ−ピランを０．１〜３当蓋好ましくは０．２〜
１当量の酸触媒例えばパラトルエンスルホン酸の存在下
で室温で２〜１０時間反応させることによって行われる
。好ましくは２当量の２．３−ジヒドロ−４Ｈ−ピラン
を０．５当量のパラトルエンスルホン酸の存在下で〒時
間反応させることによって１１位の水酸基を異性化する
ことなく選択的にテトラヒドロピラニル化することがで
きる。この化合物は下記一般式（［［ｌ）（ Ｃ式中Ｒ１は保護されたアミノ基およびＲ２１［護基を
示す。） で表わすことができる。例えば、この方法で得らｔＬｌ
’ｃ（→−１−Ｎ、４−ビス−（ベンジルオキシカルボ
ニル）−１１−０−テトラヒドロピラニルスパガリンの
１１位の立体配置は、その加水素分解によるアミノ保護
基の脱保護および後述の弱い酸水解によるテトラヒドロ
ピラニル基の脱離によって光学純度の高い（→−スパガ
リンが回収されたことから異性化が起っていないことを
確かめた。なお、テトラヒドロピラニル基はα体とβ体
の混合物である。

リン酸エステル化は、上記のようにして１５位の水酸基
を除いて保護されたスパガリンを、例えば、無水ピリジ
ンなどの有機溶媒中で、水冷下１〜３当量のジフェニル
ホスホロクロリデートなどの水酸基の保護されたホスホ
ロクロリデートと反応せしめて１５位の水酸基がジフェ
ニルリン酸エステル化された化合物を得る。反応時間は
２−６時間で完結する。次いで、この化合物をメタノー
ル、ジオキサンまたは水などの単独または混合溶媒中で
、パラジウム、白金などを触媒として常法により接触還
元を行なうことによし、リン酸基保護基であるフェニル
基が脱離して１５−ホスフェートの合成が達成される。

この際他の保護基がアラルキルオキシカルボニル基であ
れば、同時に脱＆［される。アラルキルオキシカルボニ
ル基以外の保護基の場合には次いでそれらを除去するこ
とにより目的化合物を得ることができる。例えば、１１
−０−テトラヒドロピラニル基の除去は、リン酸基保護
基を除去して得られる１１−０−テトラヒドロピラニル
スパガリンの酸付加塩の２当量に、０．１当量程度のパ
ラトルエンスルホン酸を添加し、水冷下撹拌することに
より容易に脱離する。

反応時間は５−７時間で充分である。

本発明によるスパガリン−１５−ホスフェートは遊離塩
基の状態では不安定なため、通常の方法により薬学的に
許容できる酸を加えて任意の無毒性の酸付加塩とするこ
とが好ましい。

酸付加塩としては、塩酸、硫酸、リン酸、ホウ酸などの
無機酸との塩および酢酸、クエン酸、酒石酸、グルタル
酸などの有機酸が用いられる。

本発明化合物において（→−スパガリンー１５−ホスフ
ェートは特に制がん効果が優れている。

下記Ｋ、（→−スパガリンー１５−ホスフェートの制が
ん効果を示す。

（→−スハカリンー１５−ホスフェートのマウス白血病
Ｌ−１２１０に対する制がん効果１群８匹のマウスにマ
ウス白血病Ｌ１２１０細胞１０．５個を腹腔内に接種し
、続いて、その当日　　　□。

より１日１回９日間連続で、生理的食塩水に溶解　　　
゛した試料を腹腔内に投与し、６０日間飼育観察して、
延命率（Ｔ／Ｃｘ　１００＝（処理群の平均生存日数／
無処理群の平均生存日数）　ｘｌ　ＯＯ）を求めた。

なお対照群（無投与群）の平均生存日数は７．６〜８．
９日であった。

次に本発明を実施例により説明する。

実施例１ （→−スパガリンー１５−７オスフエートの合成（イ）
　（→−１−Ｎ、４−ビス−（ベンジルオキシカルボニ
ル）スパガリン： （→−スパガリン３塩酸塩３・０ｐ（５，８５ミリモル
）を３０ｆｆｉ／のメタノールにとかし、トリエチルア
ミン７・２＠１（１７，６ミリモル）を加え、さらにＮ
−ベンジルオキシカルボニルオキシコノ）り酸イミド３
．２１１（１２，９ミリモル）を８　ｍｌのジオキサン
にとかした溶液を加え、室温で３時間攪拌した。反応液
を濃縮乾固し、０・１Ｍ塩化ナトリウム５０ｍ１にとか
し、２Ｎ塩酸でｐＨ６・５とし、０・１Ｍ塩化ナトリウ
ムで平衡化したＣＭ−セファデックス■Ｃ−２５（２０
０＃１１）のカラムにかけ、続いてＯ，１Ｍから０．５
Ｍ塩化ナトリウム（各ＩＬ）によるグラジエン溶出を行
った（２Ｏｔｘｌずつ分画）。

分画３４−８０を合して濃縮乾固し、ｌ　Ｏｍｌのメタ
ノールで３回抽出した。この抽出液をセファデックス■
ＬＨ−２０（２００＠ｌ）のカラムにかけ、９０％メタ
ノール水で溶出し脱塩した（２ｍｌずつ分画）。分画５
１−６３を合して濃縮乾固し、無色シララフ状の（→−
１−Ｎ、４−ビス−（ベンジルオキシカルボニル）スパ
ガリン塩酸塩３．８ｔを得た（収率９１チ）。〔α）　
Ｄ−，１１０（Ｃｌ、水）。

元素分析値ｊｃ５４．９５％、Ｈ’ｉ’、２５％。

Ｎ１３．８３チ、Ｃ１５，０６％。

Ｃ３３Ｈ４９Ｎ７０８．ＨＣｌ・ｌ／２Ｈ２０の理論値
。

Ｃ５５，２６％、Ｈπ１７％、ＩＪ１３．６７％、Ｃ１
４，９４チ。

（ロ）（→−１−Ｎ、４−ビス−（ヘンシルオキシカル
ボニル）−１，１−０−テトラヒドロピラニルスパガリ
ン： 前項（イ）で得られた（→−１−Ｎ、４−ビス−（ベン
ジルオキシカルボニル）スパガリン塩酸塩３．４ｆｉｐ
（４，８１ミリモル）を無水１（、Ｎ−ジメチルホルム
アミド３０．１にとかし、２，３−ジヒドロ−４Ｈ−ピ
ラン０．６３　＃＋Ｊ　（９，７５ミリモル）とパラト
ルエンスルホン酸（Ｎ２０　）４６４＋＋ｙ（２，４４
ミリモル）を加え室温で７時間攪拌した。反応後トリエ
チルアミン０．３３　＃Ｉ／　（２，４４ミリモル）を
加え濃縮乾固した。これをクロロホルム−メタノール−
ピリジン−５０％酢酸水（２４０：４０：４ｊｌ）の混
液で展開するシリカゲル（ワ＝−ゲル■　Ｃ−２００，
３０Ｏｆ）のカラムクロマトグラフィーで精製した（２
０ｍｌずつ分画）゛＝分画６６−’１８を合して濃縮乾
固し、無色シラツブ状の（→−１−Ｎ４−ビスー（ヘン
シルオキシカルボニル）−１１−〇−テトラヒドロピラ
ニルスパガリン酢酸塩１．０７ｔを得た（収率２６％）
〔α）Ｂ−１３゜（ｃ　ｌ、　　メタノール）。元素分
析値：Ｃ５６・６５チ、Ｈ’ｉ’、’ｉ’６％、Ｎ１１
．７５チ。

Ｃ３８Ｈ，Ｎ７００．　ＣＨ３ＣＯ０Ｈ、３／２Ｈ２０
、（Ｄ　ｍ論値二〇５６．９９％、Ｈ７，６５％、ＮＩ
Ｌ６３チ。分画８５−９２を合して濃縮乾固し、０−１
−Ｎ、！−ビスー（ベンジルオキシカルボニル）スパガ
リン酢酸塩３６２　＋＋ｙ　（収率１０％　）を回収し
た。

（ハ）Ｈ−Ｉ　　Ｎ、！−ビスー（ベンジルオキシカル
ボニル）１１−０−テトラヒドロビラニルスハｆｊ　Ｉ
Ｊ　７−１５−　’）フェニルホスフェート：前項（ロ
）で得うれた（→−１−Ｎ、！−ビス−（ベンジルオキ
シカルボニル）−１１−０−テトラヒドロピラニルスパ
ガリン酢酸塩６６３１Ｉ９（０，７８６ミリモル）を無
水ピリジンｌＯ＃Ｉｅにと、かし、水冷下ジフェニルホ
スホロクロリデートＱ、３４＃Ｉｅ（１，６３ミリモル
）を滴加し、４時間攪拌した。

反応後０．５　、ｌの水を加え濃縮乾固した。これを２
０ｍ１の酢酸エチルにとかし、２０ｄの水で洗浄後、無
水硫酸ナトリウムで脱水して濃縮乾固した。

こレヲクロロホルムーメタノールーピリジン−５０％酢
酸水（３２０；４０＋４：１）の混液で展開するシリカ
ゲル（ワコーゲル■Ｃ，−２００５０２）のカラムクロ
マトグラフィーで精製した（１０ｄずつ分画）。分画３
０−９１を合して濃縮乾固し、無色シラツブ状の表記化
合物の酢酸塩４３７■を得だ。収率５１チ に）（→−１１−０−テトラヒドロピラニルスパガリン
−１５−ホスフェート： 前項（ハ）で得られた（→−１−Ｎ、４−ビス−（ベン
ジルオキシカルボニル）−１１−０−テトラヒドロスパ
ガリン−１５−）フェニルホスフェート酢酸塩４３５■
（０，４１５ミリモル）を８０％メタノール水１０ｇ６
にとかし、触媒として酸化白金３０■を加え、水素気流
中で室温７時間攪拌した。

触媒を戸去し、ｐ液を濃縮乾固した。これを０．１Ｍ地
化ナトリウム２０ｆｉ／にとかじ、ｌＮ塩酸でｐＨ６，
４とし、０．１Ｍ塩化ナトリウムで平衡化したＣ１・−
セファデックス■Ｃ−２５（ユエーデン、ファルマシア
製、２０ａｅ）のカラムにかけ、続いて０．１　Ｍ　−
１，０Ｍ塩化ナトリウム（各１００　ｄ　）によるグラ
、ジエント溶出を行な、つた（２ｍｌずつ分画）。

分画３６−４４を合して濃縮乾固し、　５ｍｌ’のメタ
ノールで３回抽出した。この抽出液をセファデックスＬ
Ｈ−２０（ｌｏｏｍ／）のカラムにかけ、９０チメタノ
ール水で溶出し脱塩しだ（３−ｍｅずつ分画）。分画３
Ｂ−４５を合して濃縮乾固し、無色シラツブ状の表記化
合物の３塩酸塩１２８■を得た。収率４８％ に）（→−スパガリンー１５−ホスフェート：前項に）
で得られた（−）−１１−０−テトラヒドロピラニルス
パガリン−１５−ホスフェート３塩酸塩１１２！Ｗ（０
，１７５ミリモル）を５　ｍｌの水にとかし、水冷下パ
ラトルエンスルホン酸（Ｎ２０　）３．３　ｔｒｙ　（
０，０１’７ミリモル）を加え８時間攪拌した。反応後
、１Ｍアンモニア水でｐＨ６，５とし、０．４Ｍ塩化ナ
トリウム２０ｍ１を加え、０．４Ｍ塩化ナトリウムで平
衡化したＣＭ−セファデックス■Ｃ２５（２０ａｔ　）
のカラムにかけ、続いて０．４Ｍ−１，０Ｍ塩化ナトリ
ウム（各１ｏ　Ｏｍｌ　）によるグラジェント溶出を行
なっだ（２ｍｌずつ分画）。

分画４６−５９を合して濃縮乾固し、５　ｍｌのメタノ
ールで３回抽出した。この抽出液をセファデックスＬＨ
−２０（ｌｏｏｓｌ）のカラムにかけ、９０％メタノー
ル水で溶出した（１ａｇずつ分画）。

分画４１Ｌ５２を合して濃縮乾固し、無色シラツブ状の
（→−スパガリンー１５−ホスフェート３塩酸塩１ナト
リウム塩７水和物６’７．７ｗｉを得た。

収率６２チ （→−スパガリンー１５−ホスフェー）　３塩酸塩ｌナ
トリウぞ塩７水和物は無色シラツブ状で、明確な融点を
測定できない。〔α〕Ｄ−８・２°（ｃ’１゜水）を示
し、元素分析値はＣ３２・８５チ、Ｈ６，８６チ、Ｎ１
５．’ｉ’１％、Ｃ１１６，８７％、Ｐ５．２０％テＣ
１７Ｈ３７Ｎ２０７Ｆ　、３ＨＣ１、Ｎａ　＋　ｙ　Ｈ
２０の理論値（Ｃ３２，’７３％、Ｈ６，６２チ、Ｎ　
　ｌ　　５．、’７　２　　％　、　　Ｃ１ｌ　　）、
０５　％　、　Ｐ４．９６　　％　）に一致した。前述
のシリカゲルの薄層クロマトグラフィーで、Ｒｆｏ、０
８を示した。

（ト）スパガリン−１５−ポスフェートの合成（イ）　
（ｓ）　−７−ｙアユジノ−３−ホスホヒドロキシヘプ
タンアミド： ８５チリン酸３．４５ｍ１と五酸化リン４・４ａｙを混
合し、これに（θ）−７−グアニジノ−３−ヒドロキシ
へベタンアミド塩酸塩１．０ｐ（４，１９３ミリモル）
を少しずつ加えて、よく混合し、五酸化リンデシケータ
−中で、３日間保存した。氷水５０ｍ１にあけ、ｌ０Ｎ
−カセイソーダで中和し、減圧濃縮した。得られた油状
物を乳針に移しメタノール５０ｍ１で攪拌し、生じた白
色結晶を更にメタノール５０ｆｆｉ／で洗浄し、メタノ
ール抽出液を濃縮乾固して残渣ｌ・６９１を得た。水１
０．／に溶かし、ＣＭ　−セフ　７　テックスｃ　−２
５、Ｎａ８０ｇ／をっめた塔（内径２０　ｔｎｍ　）に
かけ、水で溶出して、坂口反応陽性画分を集めた。濃縮
乾固後、メタノール５　ｍｌで３回抽出し、メタノール
抽出液ヲセ７ア　　　□デックスＬＨ−２０１５０ｍ／
をっめた塔（内径２０　ｍｍ　）にかけ、メタノールで
展開して、坂口反応陽性、ノ・ポス試薬、陽性画分を集
め、減圧濃縮して、シラツブ状の（ｓ）　−７−グアニ
ジノ−３−ホスホヒドロキシへブタンアミド、２０４ｑ
をｉ＊。

（収率１７チ）、（ａ）　Ｄ　＋　”°（ｃ　ｌ　、　
Ｈ２０）７−グアニジノ−３−ホスホヒドロキシ−ヘプ
タンアミド２０４＋＋ｖ（０，７２３ミリモル）、Ｎ−
（４（３−アミノプロピル）アミノブチル〕−２，２−
ジヒドロキシエタンアミドニ塩酸塩２５３＋＋ｙ　（０
，８６７ミリモル）、ゲルタン酸１１４４（０，８６’
７ミリモル）と、水０．１４５Ｎ６（８・１ミリモル）
を混合し、６０℃で２４時間加温した。

反応液に水５＃！／を加え、ＣＭ−セファデックスＣ−
２５，Ｎａ＋１５０ＨＩをつめた塔（内径２０ｍｍ）に
かけ、続いて、各１・５ｔの水と１ＭＮａｃｌによるグ
ラジェント溶出を行った。（１’ｉ’　ｍｅ分画）。

分画５４〜６７に溶出される坂口反応陽性、ニンヒドリ
ン陽性、・・ネス陽性画分を集め、濃縮°乾固後）　ｌ
　／　−ル５　ｍｌで３回抽出した。メタノール抽出液
をセファデックスＬ　Ｈ−２０１５０Ｍ／をうめた塔（
内径２０闘）にかけメタノールで展開した。活性画分を
集め、濃縮乾固して、Ｎ　　（４−３−アミノプロピル
）アミノブチル）−２−（（Ｓ）−７−グアニジノ−３
−ホスホヒドロキシへブタンアミドツー２−ヒドロキシ
エタンアミド塩酸塩の白色粉末１２８■を得た。（収率
３４％）（α）％７−１−５．１’　（０１，Ｈ３Ｏ）
ＰＭＲ（Ｄ２Ｑ）Ｊ　＋１．３−１８（ＣＨ２Ｘ５）、
２．０（ＣＨ２）、２．５５（ＣＨ２，ｄ、Ｊ＝６Ｈ２
）ｚｅ−ｓｔ　（Ｎ　ＣＨ３Ｘ５）＋　４＋３　（ＣＨ
，ｍ）、５．４０　（ＣＨ）ＩＲ（ＫＢｒ）　３３Ｂ０
．２９３０．２Ｂ５０．１６６０．１５３０．１４６０
．１１６０．　ｌＯ’ｉ’５゜１ ９６５６．ｎ 特許出願人　　微生物化学研究会

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）式 で示されるスパガリン−１５−ホスフェートおよびその
   塩
2. （２）式 で表わされるスパガリンの１位のアミン基、４位のイミ
   ノ基および１１位の水酸基を保護した後、１５位の水酸
   基をリン酸エステル化し、次いで、保護基を脱離するこ
   とを特徴とする下記式で表わされるスパガリン−１５−
   ホスフェートの製造法。