JPH0244315B2 - Supagarinn155hosufueetooyobisonoseizoho - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は式〔） で表わされるＮ−〔４−（３−アミノプロピル）ア
ミノブチル〕−２−〔（ｓ）−７−グアニジノ−３−
ホスホヒドロキシヘブタンアミド〕−２−ヒドロ
キシエタンアミド（以下スパガリン−15−ホスフ
エートという。）およびその製造法に関するもの
であり、本発明化合物は顕著な制がん作用を有
し、制がん剤として有用なものである。 本発明者らは、制がん剤の組織的研究におい
て、バチルス属に属する菌株バチルス・ラテロス
ボルスBMG162−aF2（微工研菌寄第5230号）の
培養液中にスパガリン（Spergualin）と命名した
新規の制がん抗生物質BMG162−aF2を発見した
（ジヤーナル・オブ・アンチビオチクス、34巻、
1619頁および1622頁、1981年）。スパリガリンの
化学構造は次式〔〕 で表わされ、その15位の立体配置はＳであり11位
の立体配置はいまだ決定されていない（ジヤーナ
ル・オブ・アンチビオチクス、34巻、1622頁、
1981年）。またこの構造式の化合物は酸アミドと
グリオキシルスプルミジンとの縮合によつても合
成され、得られたエピマーは天然の（−）−スパ
ガリンと非天然の（＋）−スパガリンに分離され
た（ジヤーナル・オブ・アンチビオチクス、34
巻、1625頁）。 本発明者らは、スパガリンの誘導体について種
種研究の結果、上記スパガリンのリン酸エステル
が優れた制がん効果を有することを見い出し本発
明を完成した。 本発明のスパガリンリン酸エステルは天然もし
くは合成によつて得られたスパガリンの１位のア
ミノ基、４位のイミノ基および11位の水酸基を保
護したのち、15位の水酸基をリン酸エステル化
し、続いて保護基を脱離するか、もしくはスパガ
リンの合成における一方の原料（Ｓ）−７−グア
ニジノ−３−ヒドロキヘブタンアミドをリン酸と
反応させ、下記式 で示されるリン酸エステルを得、次いでスパガリ
ンの他方の原料であるＮ−〔４−（３−アミノプロ
ピル）アミノブチル〕−２，２−ジヒドロエタン
アミドと常法により縮合することにより得ること
ができる。 上記の方法における１位のアミノ基、４位のイ
ミノ基および11位の水酸基を保護する保護基とし
ては、従来ペプチド合成などに常用されているア
ミノ保護基を使用しうるが、本発明の式〔〕の
化合物はアルカリおよび酸にきわめて不安定なた
め、常法による加水素分解で容易に脱離できるベ
ンジルオキシカルボニル基やパラメトキシベンジ
ルオキシカルニル基などのアラルキルオキシカル
ボニル基が好ましい。スパガリンにこれらのアミ
ノ保護基を導入するには、公知の方法、例えば活
性エステル法を用いることが有利である。一般に
これらの方法では、スパガリンの有するグアニジ
ン基には反応しない。 本発明の式〔〕における化合物が（−）体
（天然のスパガリンと同様の旋光度をもつもの）
である化合物は（−）−スパガリンの１位のアミ
ノ基、４位のイミノ基を保護し、次いで11位の水
酸基を異性することなく保護した後、リン酸エス
テル化することなく保護した後、リン酸エステル
化することにより得ることができる。11位の水酸
基を異性化することなく、導入することができる
保護基としてはテトラヒドロピラニル基が好まし
い。11位の水酸基を異性化することなく選択的に
テトラヒドロピラニル化するには、無水の有機溶
媒好ましくは無水ジメチルホルムアミド中１〜３
当量の２，３−ジヒドロ−4H−ピランを0.1〜３
当量好ましくは0.2〜１当量の酸触媒例えばパラ
トルエンスルホン酸の存在下で室温で２〜10時間
反応させることによつて行われる。好ましくは２
当量の２，３−ジヒドロ−4H−ピランを0.5当量
のパラトルエンスルホン酸の存在下で７時間反応
させることによつて11位の水酸基を異性化するこ
となく選択的にテトラヒドロピラニル化すること
ができる。この化合物は下記一般式〔〕 （式中R₁は保護されたアミノ基およびR₂は保護
基を示す。） で表わすことができる。例えば、この方法で得ら
れた（−）−１−Ｎ，４−ビス−（ベンジルオキシ
カルボニル）−11−０−テトラヒドロピラニルス
パガリンの11位の立体配置は、その加水素分解に
よるアミノ保護基の脱保護および後述の弱い酸水
解によるテトラヒドロピラニル基の脱離によつて
光学純度の高い（−）−スパガリンが回収された
ことから異性化が起つていないことを確かめた。
なお、テトラヒドロピラニル基はα体とβ体の混
合物である。 リン酸エステル化は、上記のようにして15位の
水酸基を除いて保護されたスパガリンを、例え
ば、無水ピリジンなどの有機溶媒中で、氷冷下１
〜３当量のジフエニルホスホロクロリデートなど
の水酸基の保護されたホスホロクロリネートと反
応せしめて15位の水酸基がジフエニルリン酸エス
テル化された化合物を得る。反応時間は２−６時
間で完結する。次いで、この化合物をメタノー
ル、ジオキサンまたは水などの単独または混合溶
媒中で、パラジウム、白金などを触媒として常法
により接触還元を行なうことにより、リン酸基保
護基であるフエニル基が脱離して15−ホスフエー
トの合成が達成される。この際他の保護基がアラ
ルキルオキシカルボニル基であれば、同時に脱保
護される。アラルキルオキシカルボニル基以外の
保護基の場合には次いでそれらを除去することに
より日的化合物を得ることができる。例えば、11
−０−テトラヒドロピラニル基の除去は、リン酸
基保護基を除去して得られる11−０−テトラヒド
ロピラニルスパガリンの酸付加塩の２当量に、
0.1当量程度のパラトルエンスルホン酸を添加し、
氷冷下撹拌することにより容易に脱離する。反応
時間は５−７時間で充分である。 本発明によるスパガリン−15−ホスフエートは
遊離塩基の状態では不安定なため、通常の方法に
より薬学的に許容できる酸を加えて任意の無毒性
の酸付加塩とすることが好ましい。 酸付加塩としては、塩酸、硫酸、リン酸、ホウ
酸などの無機酸との塩および酢酸、クエン酸、酒
石酸、グルタル酸などの有機酸が用いられる。 本発明化合物において（−）−スパガリン−15
−ホスフエートは特に制がん効果が優れている。 下記に、（−）−スパガリン−15−ホスフエート
の制がん効果を示す。 （−）−スパガリン−15−ホスフエートのマウ
ス白血病Ｌ−1210に対する制がん効果 １群８匹のマエスにマウス白血病L1210細胞
10.5個を腹腔内に接種し、続いで、その当日より
１日１回９日間連続で、生理的食塩水に溶解した
試料を腹腔内に投与し、60日間飼育観察して、延
命率〔Ｔ／Ｃ×100＝（処理群の平均生存日数／無
処理群の平均生存日数）×100〕を求めた。 なお対照群（無投与群）の平均生存日数は7.6
〜8.9日であつた。

【表】

【表】 次に本発明を実施例により説明する。 実施例 １ （−）−スパガリン−15−フオスフエートの合
成 (イ) （−）−１−Ｎ，４−ビス−（ベンジルオキシ
カルボニル）スパガリン： （−）−スパガリンの３塩酸塩3.0ｇ（5.85ミ
リモル）を30mlのメタノールにとかし、トリエ
チルアミン7.2ml（17.6ミリモル）を加え、さ
らにＮ−ベンジルオキシカルボニルオキシコハ
ク酸イミド3.21ｇ（12.9ミリモル）を８mlのジ
オキサンにとかした溶液を加え、室温で３時間
撹拌した。反応液を濃縮乾固し、0.1M塩化ナ
トリウム50mlにとかし、2N塩酸でPH6.5とし、
0.1M塩化ナトリウムで平衡化したCM−セフア
デツクス Ｃ−25（200ml）のカラムにかけ、続
いて0.1Mから0.5M塩化ナトリウム（各1L）に
よるグラジエン溶出を行つた（20mlずつ分画）。
分画34−80を合して濃縮乾固し、10mlのメタノ
ールで３回抽出した。この抽出液をセフアデツ
クス LH−20（200ml）のカラムにかけ、90％
メタノール水で溶出した脱塩した（２mlずつ分
画）。分画51−63を合して濃縮乾固し、無色シ
ラツプ状の（−）−１−Ｎ，４−ビス−（ベンジ
ルオキシカルボニル）スパガリン塩酸塩3.8ｇ
を得た（収率91％）。〔α〕²¹ _D−11゜（cl、水）。 元素分析値：54.95％、H7.25％、N13.83％、
Cl.06％。 C₃₃H₄₉N₇O₈・１／2H₂Oの理論値：C55.26
％、H7.17％、N13.67％、Cl4.94％。 (ロ) （−）−１−Ｎ，４−ビス−（ベンジルオキシ
カルボニル）−11−０−テトラヒドロピラニル
スパガリン： 前項(イ)で得られた（−）−１−Ｎ，４−ビス
−（ベンジルオキシカルボニル）スパガリン塩
酸塩3.45ｇ（4.81ミリモル）を無水Ｈ，Ｎ−ジ
チルホルムアミド30mlにとかし、２，３−ジヒ
ドロ−4H−ピラン0.63ml（9.75ミリモル）とパ
ラトルエンスルホン酸（H₂O）464ml（2.44ミ
リモル）を加え室温で７時間撹拌した。反応後
トリエチルアミン0.33ml（2.44ミリモル）を加
え濃縮乾固した。これをクロロホルム−メタノ
ール−ピリジン−50％酢酸水（240：40：４：
１）の混液で展開するシリカゲル Ｃ−200，
300ｇ）のカラムクロマトグラフイーで精製し
た（20mlずつ分画）。分画66−78を合して濃縮
乾固して、無色シラツプ状の（−）−１−Ｎ−
４−ビス−（ベンジルオキシカルボニル）−11−
０−テトラヒドロニルスパガリン酢酸塩1.07ｇ
を得た（収率26％）〔α〕²² _B−13゜（cl、メタノー
ル）。元素分析値：C56.65％、H7.76％、
N11.75％。 C₃₈H₅₇N₇O₉・CH₃COOH・３／2H₂Oの理
論値：C56・99％、H7.65％、N11.63％。分画
85−92を合して濃縮乾固し、（−）−１−Ｎ，４
−ビス−（ベンジルカルボニル）スパガリン酢
酸塩362mg（収率10％）を回収した。 (ハ) （−）−１−Ｎ，４−ビス−（ベンジルオキシ
カルボニル−11−０−テトラヒドロピラニルス
パガリン−15−ジフエニルホスフエート：前項
(ロ)で得られた（−）−１−Ｎ，４−ビス−（ベン
ジルオキカルボニル）−11−０−テトラヒドロ
ピラニルスパガリン酢酸塩663mg（0.786ミリモ
ル）を無水ピリジン10mlにとかし、氷冷下ジフ
エニルホスホロクリデート0.34ml（1.63ミリモ
ル）を滴加し、４時間撹拌した。反応後0.5ml
の水を加え濃縮乾固した。これを20mlの酢酸エ
チルにとかし、20mlの水で洗浄後、無水硫酸ナ
トリウムで脱水して濃縮乾固した。これをクロ
ロホルム−メタノール−ピリジン−50％酢酸水
（320：40：４：１）の混液で展開するシリカゲ
ル（ワコーゲル Ｃ−200、550ｇ）のカラムク
ロマトグラフイーで精製した（10mlずつ分画）。
分画30−91を合して濃縮乾固し、無色シラツプ
状の表面化合物の酢酸塩437mgを得た。収率51
％ (ニ) （−）−11−０−テトラヒドロピラニルスパ
ガリン−15−ホスフエート： 前項(ハ)で得られた（−）−１−Ｎ，４−ビス
−（ベンジルオキシカルボニル）−11−０−テト
ラヒドロスパガリン−15−ジフエニルホスフエ
ート酢酸塩435mg（0.415ミリモル）を80％メタ
ノール水10mlにとかし、触媒として酸化白金30
mgを加え、水素気流中で室温７時間撹拌した。
触媒を去し、液を濃縮乾固した。これを
0.1M塩化ナトリウム20mlにとかし、lH塩酸で
PH6.4とし、0.1M塩化ナトリウムで平衡化した
CM−セフアデツクス Ｃ−25（スエーデン、
フアルマシア製、20ml）のカラムにかけ、続い
て0.1M−1.0M塩化ナトリウム（各100ml）に
よるグラジエント溶出を行なつた（２mlずつ分
画）。分画36−44を合して濃縮乾固し、５mlの
メタノールで３回抽出した。この抽出液をセフ
アデツクスLH−20−（100ml）のカラムにか
け、90％メタノール水で溶出し脱塩した（１ml
ずつ分画）。分画38−45を合して濃縮乾固し、
無色シラツプ状の表面化合物の３塩酸塩128mg
を得た。収率48％ (ホ) （−）−スパガリン−15−ホスフエート：前
項(ニ)で得られた（−）−11−０テトラヒドロピ
ラニルスパガリン−15−ホスフエート３塩酸塩
112mg（0.175ミリモル）を５mlの水にとかし、
氷冷下パラトルエンスルホン酸（H₂O）3.3mg
（0.017ミリモル）を加え８時間撹拌した。反応
後、1Mアンモニア水でPH6.5とし、0.4M塩化
ナトリウム20mlを加え、0.4M塩化ナトリウム
で平衡化したCM−セフアデツクス Ｃ−25
（20ml）のカラムにかけ、続いて0.4M−1.0M
塩化ナトリウム（各100ml）によるグラジエン
ト溶出を行なつた（２mlずつ分画）。分画46−
59を合して濃縮乾固し、５mlのメタノールで３
回抽出した。この抽出液をセフアデツクスLH
−20（100ml）のカラムにかけ、90％のメタノー
ルで溶出した（１mlずつ分画）。分画41−52を
合して濃縮乾固し、無色シラツプ状の（−）−
スパガリン−15−ホスフエート３塩酸塩１ナト
リウム塩1/2水和物67.7mgを得た。 収率62％ （−）−スパガリン−15−ホスフエート３塩酸
塩１ナトリウム塩1/2水和物は無色シラツプ状で、
明確な融点を測定できない。〔α〕²² _D−8.2（cl、水）
を示し、元素分析値はC32.85％、H6.86％、
N15.7％、Cl16.87％P5.20％でC₁₇H₃₇N₂O₇P・
3HCl・Na・1/2H₂Oの理論値（C32.73％、H6.62
％、N15.72％、Cl17.05％、P4.96％）に一致し
た。前述のシぜリカゲルの薄層クロマトグラフイ
ーで、Rf0.08を示した。 実施例 ２ （±）スパガリン−15−ホスフエートの合成 (イ) （Ｓ）−７−グアニジノ−３−ホスホヒドロ
キシヘプタンアミド： 85％リン酸3.45mlと五酸化リン4.46ｇを混合
し、これに（Ｓ）−７−グアニジノ−３−ヒド
ロキシヘベタンアミド塩酸塩1.0ｇ（4.193ミリ
モル）を少しずつ加えて、よく混合し、五酸化
リンデシケータ中で、３日間保存した。氷水50
mlにあけ、10N−カセイソーダで中和、減圧濃
縮した。得られた油状物を乳針に移しメタノー
ル50mlで撹拌し、生じた白色結晶を更にメタノ
ール50mlで洗浄し、メタノール抽出液を濃縮乾
固して残渣1.69ｇを得た。水10mlに溶かし、
CM−セフアデツクスＣ−25、Na⁺80mlをつめ
た塔（内径20mm）にかけ、水で溶出して、坂口
反応陽性画分を集めた。濃縮乾固後、メタノー
ル５mlで３回抽出し、メタノール抽出液をセフ
アデツクスLH−20 150mlをつめた塔（内径20
mm）にかけ、メタノールで展関して、坂口反応
陽性、ハネス試薬、陽性画分を集め、減圧濃縮
して、シラツプ状の（Ｓ）−７−グアニジノ−
３−ホスホヒドロキシヘブタンアミド、204mg
を得た。（収率17％）、〔α〕²⁵ _D＋4.6゜（cl、H₂O） PMR.（D₂O）δ：1.3〜1.7（CH₂×３）、245（２
−CH₂、ｄ、Ｊ＝６Hz）3.07（NCH₂、ｔ、
Ｊ＝7.0Hz）4.3（CH、ｍ） IR（KBr） 3360、3170、2930、2850、1660、
1440、1400、1165、1070、1020、955、900cm
^-1 ７−グアニジノ−３−ホスホヒドロキシ−ヘ
ブタンアミド204mg（0.723ミリモル）、Ｎ−〔４
−（３−アミノプロピル）アミノブチル〕−２、
２−ジヒドロキシエタンアミド二塩酸塩253mg
（0.867ミリモル）、グルタン酸114mg（0.867ミ
リモル）と、水0.145ml（8.1ミリモル）を混合
し、60℃で24時間加温した。反応液に水５mlを
加え、CM−セフアデツクスＣ−25、Na⁺150
mlをつめた塔（内径20mm）にかけ、続いで、各
1.5の水とlMNaClによるグラジエント溶出
を行つた。（17ml分画）。分画54〜67に溶出され
る坂口反応陽性、ニンヒドリン陽性、ハネス陽
性画分を集め、濃縮乾固後メタノール５mlで３
回抽出した。メタノール抽出液をセフアデツク
スLH−20 150mlをつめた塔（内径20mm）にか
けメタノールで展開した。活性画分を集め、濃
縮乾固して、Ｎ−〔４−３−アミノプロピル）
アミノブチル〕−２−〔（Ｓ）−７−グアニジノ−
３−ホスホヒドロキシヘブタンアミド〕−２−
ヒドロキシエタンアミド塩酸塩の白色粉末128
mgを得た。（収率34％） 〔α〕²⁵ _D＋5.1゜（cl、H₂O） PMR（D₂O）δ：1.3〜1.8（CH₂×₅）、2.0
（CH₂）、2.55（CH₂、ｄ、Ｊ＝６Hz）2.8〜3.4
（NCH₃×５）、4.3（CH、ｍ）5.40（CH） IR（KBr） 3380、2930、2850、1660、1530、
1460、1160、1075、965cm^-1

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 式 で示されるスパガリン−15−ホスフエートおよび
   その塩 ２ 式 で表わされるスパガリンの１位のアミノ基、４位
   のイミノ基および11位の水酸基を保護した後、15
   位の水酸基をリン酸エステル化し、次いで、保護
   基を脱離することを特徴とする下記式 で表わされるスパガリン−15−ホスフエートの製
   造法。