JPS5823699A - 新規なイソシアネ−ト - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は生物学的流動体などにおける各種化合物の分析
、さらに詳しくは問題とする化合物と反応してたとえは
放射能標識によるような標識を受入れ５る誘導体を生成
することができるｉ＃現なイソシアネート、およびその
ような４１１１ｆａされた誘導体を使用する分析方法に
関する。

たとえば投与計画を監視し、ホルモンレベルを監視し、
最近の摂取をチェックしまたは生物利用性、吸収、分解
もしくは分泌の薬理学的力学を追跡するというような各
種の臨床目的のためＫは、種々の薬剤などをナノモル（
ｎａｎｏｍｏｌａｒ　）またはピコモル（ｐｉｃｏｍｏ
ｌａｒ　）の程度まで測定することが極めて有利である
。公知のように、放射免侵測定によりこの種の分析を達
成することができる。

分析を行なうためには、計容しうる装置または系は抗血
清、測定すべき化合物の標準、測定すべき化合物の放射
能標識した誘導体、緩衝剤、およびしばしと置換剤（ｄ
ｉｓｐｌａｃｉｎｇ　ａｇｅｎｔ　）　　を含まねばな
らない。公知のように、抗血清は、たとえば測定すべき
化合物に相当するー・ブテン−蛋白質複合体（免疫原）
を接種して免疫にした動物を出血させることＫより製造
される（典型的には、「抗原」と名付けられる）。

公知のように、一般に、放射免侵測定の１ｆｊｉ術は、
抗血清における抗体上の結合個所に対する放射舵礫繊抗
鳳と未標識抗原との閣の競合なＩＩＩＪ足する。

公知量の測定すべき抗原および放射能標識した同族体を
抗血清に加えることＫより、結合もしくは遊離抗原対抗
原ｍ度に関する投与応答曲線が作られる。この免佼検景
を行なった後、未知の濃度を５１１１屋川の標準投与一
応答曲線と比較することができる。この種の測定に対す
る決足的なことは、非放射性抗原と有効に競合する放射
性抗原の存在である。したがって、＃Ｉ定の酸大の精度
、感度、特異性および再埃性を得るには、精製されかつ
十分に特性化された合成の放射性抗原が必要とされる。

感度とは抗原（すなわち、測定されるホルモン、薬剤な
ど）の最小濃度に対応する測定技術の性能のことである
。最大感度は、遊離の放射能標識された抗原を無視する
ことができかつ未標識抗原の濃度がゼロに°近ずくとき
に得られる。合成の放射能１１１した抗原が純粋なもの
でありかつ分析せんとする抗原とよく一致している場合
、放射兜佼欄だは最高の感度と特異性とを示す。

したがって、満足し５る放射性抗原を合成することが成
るガイドラインとなる。最小濃度の一生物を萼する純粋
な試薬な使用すべきである。さらに、ハプテンまたは抗
原の最少限の構造的変化しかもたらさないような、抗原
またはＩ・ブテンを転移させない高収率かつおだやかな
反応が望ましく・。

さらに、放射能追跡子と元々の７・ブテンもしくは抗原
との、結合試薬（たとえば抗体）に対する親和性の差を
最小にして、有効な競合的−１１定か口丁熊となるよう
な誘導化学を使用することが望ましく・。

＃ｊ定されるノ・ブテンもしくは抗原の悼識化は、公昶
のようにＣ１４またはＨ３によって達成す゛ることがで
きる。しかしながら、この技術によって標識されたノ・
ブテンもしくは抗原に関する分析は遅くかつ退屈なもの
であり、一般にｆ体シンチレーション法によってのみ達
成することかできる。したがって、たとえば１１２５の
ような沃素放射四位祐本によって放射能標識することが
望ｆしく・。し力・しながら、興味ある大抵の化合物は
こσ）技術によって４１Ｉｌｌｌ＃することができず、
した〃１つ℃沃素−受容基と反応させねばならない。芳
４Ｍ族塘２よび複素環、とくに手軽なｔ換に関して活性
化したもの、は２檜の化合物を結合させて沃素標識を受
入れうる誘導体を与えるための好適な成分である。この
理由から、チロシンメチルエステルとチラミン（両者と
も活性フェノール性ヒドロキシル基を含有する）か、後
に放射能標識され５る誘導体を与えるために使用されて
きた。

標識されたステロイドを作るために従来使用されていた
慣用方法の一つは、ステロイドをクロロホルメートまた
はサクシニル、マロイル、フマロイルもしくはフタロイ
ルエステルまたは無水物で処理して先づ中間何加葡を生
成せしめ、次いで沃素受答体と反応させる・ことである
。この方法は、文献（Ｕｌｉｖｅｒ　ｅｔ　ａｌ、、　
Ｊ、Ｃ１１ｎｉｃａｌ　Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ。

Ｖｏｌ、Ｃ７，第１０６５貞（１９，６８））に記載さ
れており、人間におけるジギトキシンの放射免役測定に
使用するためろ一〇−スクシニルジギトキシケニンチロ
シンメチルエステルおよびその対応するｌ　誘導体が製
盾された。この糧の方法はさらに米国特ｉｆＦ第５，８
１０，８６６号にも示されておす、シキトキシゲニンが
スクシニル、ｉロイル、フマロイルもしくはフタロイル
基によってチロシン、４−ヒドロキシフェニルグリシン
、３−ヒドロキシトリプトファン、トリプトファンおよ
びヒスチジンの誘導体に結合される。

そのような誘導体の製造は数ケ月もか〜ることかある。

別の技術が１９７４年１月１０日出願のドイツ出願第２
．５５１．９２２号に記載されている。この方法におい
ては、先ず末端ジギトキンース堀を開環させそして過沃
素酸塩でジアルデヒドにまで酸化させることにより放射
能標識させた１４橿の心臓グリコシドの誘導体が示され
ている。次いで、このジアルデヒドは、たとえばＬ−チ
ロシンメチルエステル塩ｉ１２塩のような試薬と結合さ
せる。次いで、得られる付加物を硼水素化す）　ＩＪウ
ムで処理して、末端シュガー壌における残存ヒドロキシ
ル基を還元し、そして付帯的にエステル１に：ｌ１１２
化して酸にｊる。次いで、この付加物は芳香康堀上で放
射性沃素化することができる。この方法は厄介であり、
檀々な中間段階で副生物を生じ、さらに比較的強力な試
薬を使用するという傾向がある。

さらにもう一つの技術が１９７５年１０月１６日出願の
南アフリカ特肝出ｍ第７３−８３１２号に示されている
。この結合技術は、カルボキシメチルオキシムを最初に
生成させることにより、たとえばテストステロンのよう
なステロイド性ケトンを用いて使用することができる。

次いで、たとエバチロシンメチルエステルのような沃１
ｇ受容体を塩化メチレン中でトリエチルアミンの存仕下
に、タトエばＮ、Ｎ−ジシクロへキシルカルボシイメト
のような典型的なカルボジイミドと反応させて、元々の
〇−カルボキシメチルオキシムのチロシンメチルエステ
ルアミドを作る。

したがって、本発明の目的は、臨床的に興味ある化合物
に容易に結合して、放射能標識によるような標識を受入
れうる誘導体を与えることができるような＃現なインシ
アネートを提供することである。

さらに不発明の目的は生物学的に、臨床的にまたはその
他で興味ある化合物に関する新規なカルバメートおよび
尿素誘導体を提供することであるＯ関連する一層特定的
な目的は、放射能標識を受入れうるそのような誘導体を
提供することである。

さらに本発明の目的は、臨床的に興味ある分子なたとえ
ば蛋白質、酵素、ポリペプチド、ガラス玉、炭水化−、
プラスチック品などのような興味ある基質に結合させる
のに有用なカルレノ（メートまたは尿素生成せしめ５る
カップリング剤を提供することである〇 さらに目的は、試薬として本明細書中に６己−械する放
射Ｎｌ！標威したカルバメートもしくは尿素な使用する
放射測定方法を提供することである。

さらに本発明の目的は、手軽なかつ緩和な化学反応によ
って臨床的に興味ある化合物との付加物を形成するよう
な新規なカップリング剤を提供することにある。

さらにもう一つの目的は、本発明の新規なカップリング
剤と臨床的もしくはその他で興味ある化合物との間の付
加物を＃成せしめることであり、＼ この方法は合成の広ざ、反応の容易さ、手順の蘭−さ、
および副生物を比較的に含有しないことを特徴とする。

さらに本発明の目的は、たとえば競合的結合剤を用いる
放射免疫測定、免疫測定および非免疫に基づく技術の信
頼性を改善する、ＩＩＩされた誘導体を提供することで
ある。

本開明のその他目的および利点は、以下の詳細な記述、
ならびに放射能標識源として本発明の放射性沃素化ジギ
オキシン誘導体を使用して得た典型的な投与一応答曲線
を示す唯一の図面から明白になるであろう。

本開明は檀々な変更および選択しうる態様を取りうろが
、本明細書においては好過態殊について詳細に記載する
。しかしながら、本発明な物足の開示形帖に限定するこ
とは意図しないということを了解すべきである。むしろ
、本明細書中に開示した本発明の思想および範囲に入る
全ての変形および態様を網羅することが意図される。た
とえば、本発明を放射免役測定技術によって行なわれる
測定に関連して記載するが、本発明は同様な原理に関′
係する如何なる種類の測定に使用するにも同等に適用で
きるということを認めるべきである。さらに、大抵の蛋
白質および多くのペプチドはそこに沃素受容体を結合さ
せることなしに放射性沃・素化させることができるか、
より大きな特異的活性をもたらすように蛋白質もしくは
ペプチドに対して追加的に沃素受答個所を加えるため、
本発明の新規カップリング剤を用いることが有利である
。

さらに、放射能沃素化工程においてしばしば用いられる
強力な酸化および還元条件が蛋白質の構造または性質に
対して悪影響を有する場合は、本発明の新規カッ、プリ
ノブ剤を予備的に放射性沃素化し、次いでこれを必要に
応じて積設した後に化学的に緩和な条件の下で蛋白質も
しくはペプチドと反応させることが望ましい。また、同
様な考朧を、たとえばビールス、細菌、細胞などのよう
な大きな蛋白質含有体にも適用することができる。

一般に、本発明は、新規イソシアネートが臨床的もしく
はその他興味ある化会＠によるそのようなインシアネー
トの誘導体を生成せしめるようにインシアネート基以外
のａ！能的反応性基を本質的に封鎖する技術により、放
射能標識によるような４１ＩＩＩ＆を受入れうろことが
知られている部分を含有する化合物、たとえばチラミン
およびチロシンから作られ５るという発見に基づいてい
る。次いで、得られた誘導体は、適当に封鎖解除した後
に、容易に標識化しそして信頼性ある正確かつ感度のよ
い測定を与えるたとえば放射免疫測定のような技術にお
いて使用することができる。

本発明によれば、封鎖解除の後に１興味ある基質に対す
る標識もしくは結合のいずれかを受入れうる反応性基を
与えるように機能する封鎖部分を含有した新規インシア
ネートが提供される。新規インシアネートの使用は、従
来技術に優る明確な利点を与える。何故なら、誘導体を
生成せしめる反応は簡潔であり、本質的におだやかであ
り、そして興味ある化合物の構造変化をはとんと伴なわ
ないからである。

イソシアネートの封鎖された機能的反応性基は、意図す
る用途によって左右されるであろう。たとえば、臨床的
もしくはその他興味ある化合物との放射性沃素化された
付７Ｊ］物を最終的に生成させるためにイソシアネート
を使用する場合は、機能的反応性基はもちろん放射性沃
素化を受入れるべきであるか或いは放射性沃素化しうる
部分を活性化すべきである。この目的には、チラミンま
たはＬ−≠ロジンメチルエステルのいずれかに基づくイ
ンシアネートを用いるのが好ましい。これらの種類にお
いては、公知のようＫｐ−ヒドロキシル基が環を活性化
させ、放射性沃素化を可１４１　［ｊる。

しかしながら、所望ならば使用するインシアネートは、
機能上の観点から、放射性沃素化を受入れる部分もしく
は反応性基を含有する任意のインシアネートであっても
よい。したがって、たとえばオレフィン（たとえはアリ
ルアミン）のような不飽和化合物に基づくインシアネー
トを使用することも本発明の範囲内である。アセチレン
も恐らく使用することができるであろう。別の群の有用
なイソシアネートはたとえはカテコールアミンのヨ５１
ｇヒドロキシル含有のアミンから誘導することができる
。別の有用なｉａ類はフランス時奸第２，２６６，８８
８号に開示されており、このインシアネートは下記式 〔式中、ｎは１〜５の整数であり、ｋＬｌおよび）Ｌ２
はメチル、エチル、メトキシ、エトキシまたはハロゲン
であることができる〕 を有する部分（ｍｏｉｅｔｙ　）　　を含有する。その
他の有用な種類は４−ヒドロキシフェニルグリシン、５
−ヒドロキシトリプトファン、トリプトファンおよびヒ
スチジンから誘導され、たイソシアネートを包含する。

さらに別の有用なイソシアネートは放射性沃素化しうる
複素環化合物、たとえけヒスタミン、イミダゾール、イ
ンドール、シトシン、ピリミジン、アデニンおよびアデ
ノシンから誘導することができる。

、その他の用途のためには、光を吸収し、吸収光（たと
えは螢光もしくは燐光）１に発しまたはレーザー光を出
しうるインシアネートを使用することが望ましいであろ
う。この種のインシアネートは２つの方法で製造するこ
とができる。たとえば、それ自体で光を吸収し５る部分
（たとえばチラミン）、吸収光を発しうる部分（たとえ
ばパイレンもしくはナフタリン）またはレーザー光を出
しうる部分（たとえばローダミン６Ｇ＞を有するインシ
アネートを製造することができる。また、インシアネー
トを部分から直＃に作ることができない場合には、その
ような部分と反応し５る基をもったインシアネートを使
用することができる。この関係で、有用なイソシアネー
トの例を１−トリフルオロアセトアミド−６−アミノヘ
キサンから誘導することができる。インシアネートの反
応および適当な封鎖解除の後、イソシアネート付加物を
もう一つの興味ある部分と反応させることができる。成
る場合には、たとえイソシアネートを部分から作りうる
としても、先ず最初にインシアネートを作り、次いでこ
れを部分と反応させることが望ましい。例として、これ
はインシアネートと反応させる興味ある化合物と部分と
の間に間隔を置くのに有用であろう。

有用なイソシアネートは、放射性であってもなくてもよ
い金属イオンとのキレートを作りうる部分からも作るこ
とができる。代表的な例はエチレンジアミンテトラ酢酸
またはエチレントリアミンペンタ酢酸から誘導されたイ
ソシアネートを包含する。キレート基は、イソシアネー
ト物質を生存せしめうるように適当に封鎖されるべきで
ある。

別の種類の有用なイソシアネートは、放射性核種を含有
する部分から誘導することができる。例として　５ｅ７
５−セレフメチオニンから誘導されたインシアネートを
使用することができる。

さらにもう一つの使用しうる種類のイソシアネートは、
電子スピン共鳴スペクトルによって検出しうる部分から
誘導することができる。たとえｄ。

有用なインシアネートは式 ％式％ の基を含有する部分から誘導することができる。

スピン標識部分を含有する別の有用なインシアネートは
、遊離基＝４−アミノ−２，２，６，６−チトラメチル
ビペリジノキシを用いて作ることができる。

インシアネートを興味ある（典型的には不Ｉｔ４性）基
質に或いは興味ある化合物に結合させ５る反応性基（イ
ソシアネト基以外）をもった部分を含有するイソシアネ
ートを使用することも、本発明の範囲内である。興味あ
る基質の例はガラス玉、デキストラン、セルロ°−スま
たは各棟のプラスチックを包含する。適当なカップリン
グ部分を有するインシアネートの例はｂ　ｔ　（Ｏｈ　
ｔ　）　ｓ　　（式中、Ｏｈ　ｔはエトキシ基を表わす
〕から誘導することができる。

酵素、ビールス、蛋白質または細胞に結合させるのに適
するイソシアネートは一８Ｒ，−ＣＯ２ｉ（またはアミ
ン基な含有する部分から誘導することができる。

明らかなように、イソシアネートの製造の隙に所望の反
応性基を生存させ°るためには、その反応性基を適当に
封鎖または保護する必璧がある。

本発明において有用なインシアネートは、望ましくは、
本明細臀中に記載したヘダヤ等（）ｉｅｄａｙａｅｔａ
ｌ　）　　の出ｊａによる方法にしたがって製造するこ
とができる。一般に、これは適当な第一級アミンからカ
ルバミン酸塩を作り、次いで反応させてイソ、シアネー
ト先駆′４１！ＪＩＸとしての対応するハロシリルカル
バメート、を生成せしめることを包含する。

次いで、ハロシリルカルバメートをおだやかに加熱して
、インシアネートを生成させる。

これらインシアネートの生成は室温乃至１５０℃の温度
範囲で行なうことができ、副生成物を最少限にするには
約３０〜約６０℃の範囲の低い温度が好適である。反応
は、非極性溶媒またはたとえば第三級アミンのような極
性溶媒の存仕下で行なうことができる。この方法のより
詳細な記載はヘダヤ等の出願になされており、その開示
を参考のため本例＃１１１１！ｌ中に記載する。

重合、内部環化またはインシアネート合成において望ま
しくない銅生物を生成するその他反応を防ぐために封鎖
が必要とされる場合には、ヘダヤ等の出願に記載された
交換法を利用するのが好適である。この方法は、本来、
アミンの反応性官能基の封鎖を達成するものである。チ
ラミンからの対応する封鎖インシアネートの生成は封鎖
作用を示す。以下に示すよ５に、）＋７アルキルシリル
カルバメートはチラミンと二酸化縦索およびハロシラン
との反応によって生成され、反応は溶媒としてのトリエ
チルアミンの中で行なわｉ、る。

上記から判るように、トリアルキルシリルカルバメート
の生成はチラミンのヒドロキシル基の封ｍｖもたらす。

次いで、トランス−シリル化反応によってハロシリルカ
ルバメートを生成せしめ、次いで加熱することによりイ
ンシアネートを生成させる。この反応順序を下ｍｌに示
す。

上記の説明において封ｇｌｉＡ基はトリメチルシロキシ
であるが、これは率に説明としての詠である。

特定のシロキシ封鎖基は、交換法においてシリルカルバ
メートを生成させるために使用したシリル化剤の有機部
分に依存する。概念的には、この有機部分は、シリルカ
ルバメートの生成、続いてトランス−シリル化および対
応するイソシアネートへの転化を可能にする任意のもの
であってよい。

代表的かつ有用な有機部分は、炭素原予約１０１＠まで
を含有する低級アルキル、たとえばジメチル、メチルエ
チルまたはメチルプロピルを包含する。脂環式基たとえ
ばシクロペンチル、シクロヘキシルまたはシクロヘプチ
ルも使用することができるが、炭素原子約１０個もしく
はそれ以下を含有すべきである。さらに、縦素原子約１
０個までを含有するアリールおよびアルカリール基も使
用することができる。適する例はフェニル、トリルおよ
びキシリルを包含する。さらに、炭素原子約１０個まで
を含有するアラルキル基、たとえはベンジルも使用する
ことができる。これら部分のいずれも１個もしくはそれ
以上の・・ロゲン原子で置換することができる。炭素原
予約１０＠もしくはそれ以下を有する有機部分の使用は
限足条件でなく好適条件であるということを了解すべき
そある。

入手性および価格がしばしば特定の使用シランな支配す
る。別の考ｌはインシアネートへの転化の容易さであり
、より大きくかつより嵩高い有機分子は簡便さの低い転
化を与えるであろう。

したがって、チラミンに基づくイソシアネートについて
は、構造式は下記の−Ａ９である：〔式中、にはシリル
化剤に関して記載した有機部分の任意のものであってよ
い〕。

また、社は率一部分でもまたは混合部分（たとえｄ−１
ｅｒｔ、−ブチルジメチル）でもよい。Ｌ−チロシンメ
チルエステルに基づくイソシアネートについては、対応
する構造式は下記の通りである。

〔式中、Ｒは上記に屋義した遡りである〕。

同様にエタノールアミンから誘導されたインシアネート
については、構造式は次の造りである。

を鳥、ｂｉＯ−（Ｃ＆″１２）２Ｎ＝Ｃ＝０明らかなよ
うに、シランの代りに鋤、ゲルマニウム、チタン、ｗ４
または懺黄の試薬を使用する場合、珪素も同様に封鎖基
に２いて交換されるであろう。

大抵の場合、チラミン（ついて浦じたように、交換法の
使用は十分な封鎖を与えるが、この欅の封鎖が不十分で
あるような状況も存在する。たとえば、アミノ基を封鎖
しようとする場合、これは交換法によって行なうことも
できるが、得られるインシアネートを臨床上またはその
他興味ある化合物と反応させるとき、尚早の封鎖解除（
たとえば加水分解によるような）が起こり、望ましくな
い副反応をもたらすことがある。これは、比較的嵩高い
封鎖基を与えるようなシリル化剤を選ぶことにより、威
いは反応榮件を変えることにより、恐らく回避すること
ができるであろう。また、他の公知の封鎖技術な用いる
こともできる。たとえは、反応性基は、トリフルオロア
セタミド基を用いることＫよって封鎖できるであろう。

次いで、インシアネートは、もちろんイソシアナト基と
反応しうる任意の興味ある化合物と反応させることがで
きる。典型的には、たとえが古典的な意味において活性
水素基を含有する任意の化合物をインシアネートに結合
させることができる。

たとえばヒト゛ロキシル、アミン、スルフヒドリルまた
はカルボキシル基を含有する任意の化合物を用いること
ができる。公知のように、多数の蛋白買、アミノ酸、ポ
リペプチド、酵素、ステロイド、薬剤、ニコチン誘導体
、殺虫剤、各種の天然産品、植物性および動物性ホルモ
ン、ビールス、ポリアミン、細菌の菌体およびその他の
代謝歳物は、インシアナト基と反応し５る基を含有する
。臨床上またはその他興味ある化合物の特定例はアンギ
オテンシン■および■、ジゴキシン、ジギトキシン、ジ
ゴキシゲニン、ジヒドロテストステロン、テストステロ
ン、アルドステロン、コルチゾール、エストロン、エス
トラジオール、エストリオール、ゲンタマイシン、ペニ
シリン、テオフィリンおよヒ１１α−ヒドロキシ−プロ
ゲステロンを包含する。

本発明は、インシアナト基と反応しうる基を含有しない
興味ある化合物に関しても使用できるということを認め
るべきである。これは、そのような反応性基を組入れる
ように化合物を変化させる　５ことを必要とする。たと
えば、先ず６−アミノニコチンを作り、次いでこれを所
望のイソシアネートと反応させることＫより、ニコチン
を用いることができる。得られる付加物は、ニコチンの
温蔵に使用するのに適した同族体である。

興味ある付加物もしくは誘導体のインシアネート化−合
物は、一般に、イソシアネートの反応に対して公知であ
る工程条件を用いて製造することができる。したがって
、たとえ＃ｉ溶媒（必要ならば）の中での室温乃至１５
０℃の範囲の温度における反応によって付加物を作るの
が適している。また、所望ならばウレタンの生成に有用
であることが知られている数種の触媒のうち任意のもの
を使用することができる。例として、有用な゛種類の触
媒は第三級アミン、有機酸とたとえばアルカリ金属のよ
うな種々な金属との塩などを包含する。有用な溶媒の代
表的な例はピリジン、ホルムアミド、テトラヒドロフラ
ン、トリエチルアミン、ジメチルホルムアミド、エーテ
ル、塩化メチレンなどを包含し、ピリジンが好適である
。

（使用する場合）＃！媒の量は所望のま〜に変えること
ができ、しばしば最初にそれを使用する際の目的によっ
て決定される。使用する反応体の相対的箪も同僚に所望
のま〜に変えることができ、そして反応体の一方を少過
剰で用いても何らの悪影響を及ぼさない。反応体の一方
を化学量論量よりも少なく使用すれば予測される造りに
、収量が減少する傾回がある。

明らかなように、選択される条件は、興味ある化合物の
構造が劣化しないかまたはさもなくば悪影響を受けない
ことを確保するような条件くすべきである。この理由で
、できるだけ緩和な条件を用いることが好ましい。

゛興味ある多くの化合物は、イソシアナト基と反応しう
る基を１＠より多（含有する。したがって、これにより
１棟類より多くのものが生成されるであろう。このこと
は、特定技術を用いて最小にすることができ、また回避
することさえできる。この目的のため、および本発明の
一局向によれば、反応は光促進させることができる。公
知のように、他の技術では合成できないウレタンを製造
し５るためには、フェロセンを伴なう四塩化炭素の中で
反応を行なうことができる。

たとえば、ジゴキシンは６個のヒドロキシル基を有する
。従来の研究が示唆するところでは、１５位の炭素原子
にあるヒドロキシル基が最も反応性大であり、１２位の
炭素原子にあるヒドロキシル基がそれに続く。光促進を
用い食い場合、チラミンに基づくイソシアネートとジゴ
キシンとの反応生成物の分析は、ジゴキシンカルバメー
トの混合ｗＪ（一方の種類は１５位の炭素原子における
尿素結合を有し、そして他方の′ｓ１＠は１５位と１２
位との内炭素原子におけるカルバメート結合を有する）
の存在と一致する。光促進された反応を用いれば、１５
位の炭素原子に尿素結合をもった構造と一致する唯一の
種類のみが生ずる、ということが見出された。

概念的に、光促進反応は、興味ある化合物の反応性基が
ジゴキシンのヒドロキシル基に類似した大きさの種々の
相対的反応性を有する場合にも同様に、唯一の種類をも
たらすであろう。さらに詳しく１１光促進された反応は
、他の基の反応性に比べて最も反応性の大きい基に対し
反応の力学を十分に向上せしめ、一種類のみの生成を可
能にするということが理論化されている。

また、全ての反応性基を封鎖し、次いで所望の個所を選
択的に封鎖解除することにより、特定所望のｆ＠類を与
えることも可能である。さらに詳しくは、例として１７
β−エストラジオールを用いる場合、２個のヒドロキシ
ル基のそれぞれを、トリメチルシリル−Ｎ、Ｎ−ジメチ
ルカルバメートとの反応によりトリメチルシリル基で封
鎖することができる。１７−封鎖基を完全に保ちながら
５−トリメチルシリル基を選択的に除去するためには、
たとえばメタノールのような公知のＭＩｉｌｌＩ解除剤
を用いかつ核磁気共鳴スペクトルで監視することにより
、粗生成物を選択的に封鎖解除させることができる。次
いで、この中間体を１９Ｔ望のインシアネートと反応さ
せ、続いて望まない反応個所を封鎖解除させることがで
きる。

さらに、所望に応じて、反応が１檀類よりも多くのもの
を与える場合には、慣用の分離技術（たとえば薄層クロ
マトグラフィー）を用いて所望の種類を率ｌＩＭするこ
とができる。再結晶化なども用いることができる。

上記の記述から明白なように、イソシアネートの反応性
部分を封鎖する必要がある場合は、封鎖解除するｉｌｌ
に所望の付加物本しくは誘導体を生成させるのが好まし
い。公知のように、封鎖解除はたとえば水性メタノール
などのよ５な椙々の浴剤を用いて適当に達成することか
できる。次いで、封鎖解除された反応性基を用いて、付
加物を興味ある基質またはその他物質と結合させること
かでさる。

標識された部分または標識を受入れうる部分を含有する
不発明のインシアネートは、興味ある化合物の存在を定
量測置するため、競合結合に関する幾つかの公知技術の
いずれにも有利に使用することができも使用する特定イ
ンシアネートは、もちろん、選択技術によって必要とさ
れる標誠の撞１ｊｉ１に依存するであろう。選択する技
術は、主として、必要とする結果により決定されるであ
ろう。

たとえば、臨床的または生物学的に興味ある化合物につ
いて一般的に云えるように、最大感度が望まれる場合の
化合物の足置的存在を決定するために使用するときは、
放射免侵舗ｊ定および放射性沃素化した種類を使用する
ことが好ましい。

興味ある誘導体のインシアネート化合物の放射能！ａ繊
は幾つかの公知技術のいずれかによって行なうことがで
きる。たとえば放射性沃素化された誘導体は、次の方法
の一つによって製造することができる：ハンターーグリ
ーンウッドのクロラミｙＴ法（Ｎａｔｕｒｅ、　ＶＯｌ
、１９４　ｔ　Ｐ　４９５（１９６２）〕；セスカ・グ
ロスミュラーおよびルンドビストの沃素モノクロライド
法（ＡｃｔａＷｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｉａ、　Ｖｏｌ
、　６４　、　ｐｌ　１２〜１２５（１９７０））；カ
ランセル、ラナーデ、ボッ力、ライレットおよびジギリ
オの同位元素交換法［Ｊ、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ　５ｃ
ｉｅｎｃｅｓ、　Ｖｏｌ、５７　、　ｐｌ　６５７（１
９６８））ｊならびにベニシおよびローザの電解的沃素
化法（Ｊ　、Ｎｕｃｌｅａｒ　Ｂｉｏｌ、＆　Ｍｅｄｉ
ｃｉｎｅ。

ｖＯｌ、１５．ｐ６４（１９６４）〕。放放射性沃素化
としては工　を用いるのが望ましい。しかしながら、た
とえば１１２３、■１２９または１１３１のような他の
放射性同位元素も同様に使用することができる。

次いで、放射能標識した誘導体を、必要に応じて慣用の
公知技術により単一種類を単離するために精製すること
ができる。たとえば当分野で公知のようＫ、生成された
ま〜の放射性沃素化された誘導体はモノ−およびジーイ
オド橿の混合物から成っており、そして単一種類を単離
することが有用であろう。

本発明の誘導体は極めて有用かつ良く時性化された化合
物であり、このものは最高の正確さ、積度、感度、特異
性および再現性を可能にする。たとえば、合成の種類に
応じ、純粋な試薬を副生物の最小濃度を以て生成させる
ことができ、そして誘導体を生成するおだやかな反応は
本発明のインシアネートと結合させる臨床化合物の転移
の可酢性を最小にする。さらに、誘導化化学は、放射能
追跡子および原ハプテンもしくは抗原の紹せ試楽に対す
る親和性の差を最小に１、したがって効果的な競合測定
が可能になる。

かくして明らかなように、本発明の一局面は、本発明の
付加物を用いて興味ある化合物の競合的結合放射測定を
行なう方法である。公知のように、これは単位時間当り
の壊変対興味ある化合物の濃度に関する検量曲線を作成
することを含む。これは、（１１興味ある化合物に対し
て特異的な一足数の結合餐所（たとえば抗体）、（２１
一定量の放射能標Ｒ（７０または放射能追跡子、および
（３）変動型の純粋な標準比較化合物、を先す反応させ
ることを含む４段階の方法によって作成することができ
る。初めの段階で標準をそれぞれ希釈するため、遊離の
撞銅を結合４１１類から分離する。分離は、任意の過当
技術を用いて達成することができる。多くのそのような
技術、たとえば電気泳動クロマトまたは微粒炭素、イオ
ン交換樹脂、セルロースもしくはシリカにおける鉄層と
ポ出、が卸られている。過当な放射能ｉｔ数器を用い、
各反応もしくは希釈における結合フラクションまたは遊
離フラクションの準位時間当りの壊変を測定する。次い
で、単位時間当りの壊変対純粋な比較化合物の濃度に関
する標準曲線を作成することができる。

次いで、試料中の興味ある化合物につい−、準位時間当
りの壊変を、この試料を競合的結合条件Ｋかけることに
よって決定する。これは、標準曲線を作成する際に使用
したのと同じ一般的手法を用いて得られる。かくして、
同じ数の結合個所および標準曲線を作成するために使用
したのと同一の一定量の放射能計数器を試料と反応させ
る。結合した種類から遊離した檀頑な分離した後、以前
に使用した放射能計数器を用い、標準曲−を作成するの
に使用したのと同じフラクションについて単位時間当り
の壊変を決定する。

標準曲線を用いることにより、興味ある化合物の濃度は
、試料について予め決定した単位時間当りの壊変に対応
する濃度である。

以下の実施例は本発明を例示するものであり、本発明を
限足するものではない。

置載 以下の実施例において使用する下記の名称、記号、用飴
２よび略字は示した意味を有する。

ｍｏｌ　　　モル ｄ　　　　ミリリットル ｂｐ　　　　沸点 ｙ　　　グラム ｐｐｍ　　　パーツ、パー、ミリオン ｍ　　　マルチプレット ｑ　　　クワルテット Ｊ　　　カップリング恒数 ｔ　　　　トリプレット ｄ　　　ダブレット Ｓ　　　シングレット ）１ｚ　　　ヘルツ ｅＶ　　　　エレクトロン・ボルト 到達した長さの割付。

実施１１１ この実施例は２−　（４’−ヒドロキシフェニル）エチ
ルアミン（俗名−チラミン）からのインシアネートの合
成を例示し、このものは臨床上興味ある化合物に結合せ
しめて、封鎖解除後に放射性沃素化させうる部分を導入
することができる。

還流凝縮器、気体導入口、および磁気攪拌機を備えかつ
乾燥窒素の陽圧下に保った２、５０１１１７の三首フラ
スコに、乾燥テトラヒドロフラｙ１ｏｏａｔｚ、チラミ
ンｔ４９（α０１モル）およびトリエチルアミン塩酸塩
を装填した。次いでトリメチルクロロシラン五〇−を室
温にて、攪拌下に３０分間かけて両虎した。その後、注
射針を逼して二酸化炭素を反応混合物中に４時間ゆっく
り吹込み、その間混合物を還流させた。次いで二酸化炭
素の導入を止め、そして注射器により四塩化珪素ｔ５ｉ
ｕをゆっくり加えた。さらｔ／Ｃ５０分間加熱した後、
反応混合物を冷却させ、そしてトリエチルアミン塩酸塩
をｆ過によって除去した。次いで、浴媒を３５℃にて減
圧（１２トール）下Ｋ［去し、そして得られた油状物を
８８〜９０’Ｃ（α０５トール）で蒸留して、２−（４
’−）リメチルシロキシフェニル）−エチルイソシアネ
ートを無色液体とじて得た。

この新規化合物の赤外スペクトルは五３９．４．４１、
＆１７および６５８μに吸収帯を示した。

ＣＩ）ｃ１３中のＮＭ）ｔスペクトルはδ７．０８およ
び４７７　（Ａ２Ｂ２ｑ、　４　、　Ｊ＝＆４　Ｈｚ　
、それぞれ芳香族３１−　、　ｓ　ｌ−およびＺ＋−、
６１−プロトン）、五４３（ｔ　、　２　、　Ｊ　＝４
６　Ｈｚ　、　−ＣＨ２Ｃｌ（２−Ｎ　）、２．７９（
ｔ　、　２　、Ｊ＝Ａ４Ｈ２ｔ−０Ｈ２ＣＨ２Ｎ）オヨ
ヒａ２ｓｐｐｍ　（ｓ　、　９、−０８ｉ’（ＣＨ３）
３）　Ｋ吸収を示した。

質量スペクトルは一／、　２５５に分子イオンを示し、
１７９．１６３．１０７および７５に追加ピークを示し
セして１６五３に準安定ピークを示した。

実施例２ この実施例は、封鎖解除後に放射性沃素化し５る化合物
であるメチル−２−イソシアナト−３−（４’−ト！Ｊ
メチルシロキシフェニル＞−−ｙロビオネート（俗名−
封鎖−Ｌ−チロシンメチルエステルイソシアネート）の
合成を例示する。実施例１に示した一般的十順に従う。

乾燥テトラヒドロフラン２０〇−甲［１＆濁させたＬ−
チロシンメチルエステル９．７５　ｇ（α０５モル）ト
トリエチルアミン４５ｉ１（α３０モル）との攪拌混合
物に、乾燥二酸化縦索の流れを吹込んだ。３０分後、ト
リメチルクロロシラン２０耐（１１６モル）をゆっくり
加え、そして二酸化炭素を連続して吹込みながら混合物
を４時間還流させた。次いで反応混合物を室温まで冷却
させ、二酸化炭素の吹込みを止め、四塩化珪素８．５ｇ
（６，０１１Ｊ、１α０５モル）をゆっくり加え、そし
て混合物を室温で２０分間攪拌した。

その後、混合物を１時間還流させ、次いで室温まで冷却
し、そしてｔｅｒｔ−ブチルアルコール５０ｉＱ７ｙｏ
えた。次いで混合物を室温で５０分間攪拌した。次に、
混合物を窒素下でｆ１過し、ｆ過ケーキを乾燥Ｔ）ｆＦ
ｌ−で洗浄しそして合したｒ液を減圧１ＩＩＩＡシ、短
絡カラムを用いて蒸留した。

１００〜１４５℃（（ＬＯ５箇）で集めた留分を再蒸留
して、メチル−２−イソシアナト−３−（４’−トＩＪ
メチルシロキシフェニル）−プロピオネ−）ａ８．９（
３９饅）を粘稠な無色の油状物として得た。沸点１３９
〜１４０℃（０，１■）；赤外に−ス・スメア）　３．
　ｓ　ｓ、４．４５（Ｎ＝Ｃ＝０）、５．７３（エステ
ルＣ＝０）、６２２．６．６４．１α９および１１８μ
；　ＮＭＲ（ＣＣＩ４）δ７．００および＆７０Ｃｈ２
に３２Ｑ、４．Ｊ＝８．６Ｈ１，それぞれ芳香族゛５′
−１５′−および２１−１６′−プロトン）、４１０　
（ｔ　、１　、Ｊ＝＆ＯＨｚ、−ＣＨ，−Ｃ）ｌ−）、
五６６　（ｓ　’ｔ　５、−０Ｃｆ（３）、２．９１（
ｄ、２．Ｊ＝　４　Ｄ　Ｈ２Ｉ　−ＣＨ２−ＣＨ−）お
よびｌ　２２　ＰＩ）ｍ　（ｓｔ’　ｖ　ＣｃＨ５）ｓ
ｂｉ−）　；質量スペクトル（７ｏｅＶ）ｍ／ｅ（相対
強度）２９３（５）、２７８（１５）、２５０（１）、
２５４（２，５）、２１８　（ＣＬ７５）、１７９（１
００）、１６３（２，３）、１４９（２）、１０７（２
）、および７５（４０）。

実開１ この実施例は、封鎖解除後に放射性沃素化を受入れ５る
別の化合物であるメチル−２−イソシアナト−５−（４
’−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシロキシフェニル）−プ
ロピオネートの合成を例示する。

大体において、実施例１および２０手顧に従つた。乾燥
テトラヒドロフラン１００１甲に、Ｌ−チロシンメチル
エステル８．０９（０，０４モル）ヲ加えた。この攪拌
反応混合物の中に乾燥二酸化炭素のゆっくりした流れを
６０分間吹込苑、その間トリエチルアミン５０１を楢加
した。次いで、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルクロロシラン
１５ｇ（α、１モル）を加え、そして反応混合物を還流
下に４時間加熱した。冷却後、四塩化珪素８．５１１（
６，ｏｄ、０．０５モル）を加え、その後に反応混合物
を６０分間攪拌しそして還流下にさらに、１時間加熱し
た。次いでｔｅｒｔ−ブチルアルコール５０１を加えて
シリルクロライドを全て分解させそして攪拌をさらに３
０分間続けた。

＃記実施ｆｌｌＫ記本したように、反応混合物を１過、
洗浄会よび凝縮した後、沸点１８０℃（ａＳトール）の
無色のイソシアナト）２．７ｇ（収率２０％）を単離し
た。赤外吸収ピーク（スメア）は五３８．４．４４．５
．７１．４１７および６．５６μに見られた。ＮＭｉ（
スペクトル（ＣＩ）ＣＩ、）は１７．１５および４８Ｍ
（Ａ２Ｂ２ｑ、４ｔＪ＝８．６Ｈｚ　、それぞれ芳香族
６１−１５′−および２１−１６′−プロトン）、４、
２６　（ｔ　、　１．　Ｊ　＝　＆　ＯＨｚ　、　−Ｃ
Ｈ２ＣＨ−）、５、　Ｂ　３　（ｓ　、　３．−ＵＣｋ
４ｘ、　）、ＬＯ８（ｄ、２．Ｊ＝＆ＯＨ２，−ｃＨ２
ｃＨ−）、Ｉ０５（Ｓ、９゜−Ｃ（ＣＨ，）５）および
α２６　ｐｐｍ　（’　ｔ　６　ｔ−８ｉ（ｃＨ，）２
）　　におけるシグナルが特徴であった。

質量スペクトルはｍｙ’ｅ　５５５，２７８．２５０．
２３６．２２１．２０５．１７２．７３および５７にピ
ークを示した。

実施例４ この実施例は、上記した交換法による２−トリメチル−
シロキシエチルイソシアネートの合成を例示する。

菫索下に、乾燥’ｒＨＦ　１ｏ　ｏ　ｍ中に浴解させた
エタノールアミン＆１ｐ（０，１モル）トトリエチルア
ミン１００ＩＬｌを二酸化縦木ガスで処理してカルバミ
ン酸塩を缶底させた。次いでトリメチルクロロシラン２
４継（α２モル）を注射器で加え、そして混合物を還流
）に２時間加熱した。この時点で二酸化炭素ガス処理を
止め、次いで反応混合物を冷却し、ｆ過しそして洗浄し
た。シリルカルバメートを含有するｒｔおよび洗液を初
めのフラスコに戻した。

混合物が攪拌されている間に、四基化珪素１，２ｄ（０
０５モル）を１５分間かけて一加した。次いで、反応混
合物を一晩攪拌し、濾過し、減圧凝縮し、蒸留して、沸
点２９℃（０口２■）の２−トリメチルシロキシエチル
イソシアネートを得た。

赤外に−ト・スメア）はＩ４２．４．４２　（Ｎ＝Ｃ＝
０　）、ＥＬＯ（ＴＭＳ　）、？、　０１ＩＱ、６７お
よび１１９５μを示した。ｃｔ＞ｃｔ、甲のＮＭＫスペ
クトルはδＡ７１　（ｔ　、　２　、Ｊ＝５．０１（Ｚ
　）、五２８（ｔ　、　２　、Ｊ＝５．ＯＨｚ　）およ
びα１ｓｐｐｍ（ｓ。

９　ｇ　ｂｔ−（ＣＨ５）５　）　Ｋ　Ｗｉｔ　収ヲ示
シタ。

実施例５ この実施？１１は、下記式 ％式％（ フェニル）−エト−１−イル〕）−力ルバミルジギトキ
ソイル−（１−＋４）−（Ｊ−β−ジギトキソシルー（
１→４）−β−ジギトキソスー１−イル〕＝１２β、１
４β−ジヒドロキシ−５β−カルド−２０（２２）−エ
ノリド、俗名−１５’−（チロシンメチルエステル）−
カルバミルジゴキシンの合成を例示する。

ジゴキシン（結晶）α３００１１（＆８４Ｘ１０−’モ
ル）と、実施例２０方法で作ったメチル−２−インシア
ナト−５−（４’−トリメチルシロキシフェニル）−プ
ロピオネートα１２２ｇ（′！Ｌ８４Ｘ１０−４モル）
との混合物を乾燥ピリジン３−中に＃！解させそして４
５〜５０℃にて６日間攪拌した。

次いでピリジンを室温で減圧除去し、メタノール５１を
加えそして混合物を６０分間攪拌した。次いで、メタノ
ールの容積を減・圧下で約１ｄＫ減少せしめた。粗反応
生成’ｍを、１０嘩メタノール−酢酸エチル溶剤系を用
いて、シリカゲル（２０Ｘ４ ２０Ｘ２０ｍグレコート薄層板）上で調製薄層クロマト
グラフィー（以後、ｔｌｃと云う）Ｋかけた。

展開させた後、３つの主要パン？＞よび１つの小バンド
が短波長（２５４ｎｍ）紫外ランプの下でｔｌｃ板上に
観察された。これらバンドを一連の褐黒色スポットとし
て可視化させるに、ガラス切りを用いてｔｌｃ板の両垂
直端からｔ５Ｘ２０ｃＩＬのストリップを注意深く切り
取り、該ストリップに濃硫酸のエアロゾルを軽く噴霧し
そしてスポットが明確となるまで１００℃にて加熱した
。次いで、このストリップとｔｉｃ板残部との直接的比
較を、バンド位置の代用手段として使用した。全てのバ
ンドを板から掻き取り、１０９６メタノールー塩化メチ
レンで溶出させそして俗剤を室温くて減圧除去した。

最初の主要バンド、ｔｔｆα６５（より正確に他の３つ
の成分と比較するため、相対移動率を１とする）は、融
点２４１〜４℃の白色固体α１２０Ｉｉ（４０％）を含
有していた。この物質は標準試料との比較によりジゴキ
シンと同定された。

第二のバンド（小）、ａ（ｆ　　α７（相対移動率ｔ０
７）は痕跡＃（〈ｃＬｏｏｌｇ）の未開ずの無色固体を
含有し、このものはそれ以上特性化しなかった。

第三のバンド（主要）、Ｒｉ　　α７６（相対移動率ｔ
１７）は０．０５７ｇ（１５％）の６β−〇−〔０−β
−（６β−０−（’Ｎ−（１−カルボメトキシ−２−（
４’−ヒドロキシフェニル）〕−〕エトー１−イル−カ
ルバミルジゴキシル）−（１→４）−〇−β−ジギトキ
ンシルー（１→４）−β−ジギトキソスー１−イル〕−
１２β、１４β−ジヒドロキシ−５β−カルドー２０（
２２）−エノリドをガラス状の無色固体として与えた。

融点２１５〜２２０℃（分′Ｓ）；紫外最大（Ｃｔ（、
ＯＨ）　２２２　ｎｔｎ　（ａ　１１．９５０　）およ
び２７５ｎｍ　　（’ｇ＄８７０）を赤外（ＫＢｒ　）
ｔ　２．９９（−ＯＨ）　、五５０．５．７８（ラクト
ンＣ＝０）、５．８５（エステルＣ＝０）、６．１９、
α６５．６９５．７．２７．７．５５．７．９６、α２
０、α６５．９．２２．９４１．９．８６．１ｔ５６．
１１０１、１２２６、および１２．５４　＃　；　ＮＭ
）ｔ　（５０％ｃ１）ＣＩ５−７セ）ｙ−ｄ６）　　６
７．７３（ｓｔｌを芳香族−〇Ｈ）、α９７および４　
ｙ　ｏ　＜　Ａ２Ｂ２ｑｔ　ａ　ｔ　Ｊ＝８、６　）ｉ
ｚ　、　　それぞれチロシンｓ＋−，ｓ＋−おヨヒ２１
−１６′−プロトン）、５．９１　（”ｖ　１　ｔプロ
トン−Ｃ＝ＣＨ−）、５．７４　（ｓ　、　５　、　ｘ
ｘチル−ＯＣＨ，入ｏ、　９５　（Ｓ　、　５　、１９
−ＣＩ、入および［１８５ｐｐ”　（’　＊　３　ｔ　
１　Ｂ−ｃＨ５人俗名：１ｓ’−（’ｒＭＥ　）　カル
バミルジゴキシン。

第四のバンド（主要）、ｔｔｆ　　α７９（相対移動率
ｔ２２）は１０６７ｇ（１６チ）の３β−〇−〔０−β
−（３β−〇−（Ｎ−（１−カルボメトキ”−２−（４
’−ヒドロキシフェニル）−エト−１−イル〕）−カル
バミルジゴキシル゛）−（１→４）−〇−β−ジギトキ
ソシルー（１→４）−β−ジギトキソスー１−イル〕−
１２β−〇−（Ｎ−（１−カルボメトキシ−２−（４’
−ヒドロキシフェニル）−エト−１−イル〕−力ルバミ
ル）−１４β−ヒドロキシ−５β−カルドー２゜（２２
）−エノリドをガラス状の無色固体とじて合材した。融
点２２０〜４℃（分鴫）；紫外最大（ｃＨ−，０１４）
　２２２　ｎｒｎ　（ｔ　２２．０５０　）、および２
７３ｎｍ（ε１１，５４０）；赤外（鼎ｒ）五ｏ１（ｏ
ｉ−ｉ　）、　五４７．５．７８　（ラフ）ｙｃ＝０　
’）、５、８２　（エステルＣ＝０）、＆１シ、６．６
５．６．９５．７．２８．７．５５、７．９　５、８．
１９．８５８．８．８７、９１７、９．４０、９８６、
１　αｏ　５．１ｔ５２．１ｔ８９．１２１２、および
１２．４５ｐ　；　ＮＭ）Ｌ　（６０ＭＨｚ　＊　　５
０　％　Ｃ，ｔ）ＣＩ、−アセトン−ｄ６）　ａ　Ｚ　
６１　（’　ｓ　’　＊芳香族−叩）、７．０６および
６．７ｓ（Ａ２Ｂ２ｑ　、４　、Ｊ＝８．６ｌ−１ｚ　
、チロシン５ｌ−１５′−および２１−１６′−プロト
ン）、７．０２および４７８（Ａ２Ｂ２Ｑ　、４　、Ｊ
＝８．６Ｈｚ。

チロシン５１−１５′−および２１−１６１−プロトン
）、７．０２および４７８（Ａ２Ｂ２ｑｔ　４　、Ｊ＝
ａ、６Ｈｚ　Ｉチロシンｓ＋−１５′−２よび２１−１
６１−プロトン）、５．９１（８，１、ラクトン−Ｃ＝
■−）、１７５（’Ｉ”？エステルー（ＪｃＨ３）、α
９５（Ｓ、５゜１９−　ｃＪ（３）、およびα［５ｐＰ
ｍ（８１５、１８−■ｓ　）　ｐ　ＮＭＲ（２２０ＭＨ
ｚ　ｓ　１）ＭｂＯ−ｄ６）　Ｊ７、５７　（Ｓ　、　
１　、芳香族−■入７．０５および６９９　（Ａ２Ｂ２
ｑ　、　４　、Ｊ＝８．０Ｈｚ、　　それぞれチロシン
６１−１５１−および２１−１６′−プロトン）、６．
６６オよび＆６４　（Ａ２Ｂ２Ｑ　、　４　、Ｊ＝＆Ｏ
Ｈｚ。

それぞれチロシン３１−１５′−および２１−１６１−
プロトン）、５．９０（Ｓ、１．ラクトン−朗＝田−）
、５．６１（ｓ、３．工ｘチルαΣ、入　α６０（８゜
１、エステルＵＣＨ，）、０．８４（Ｓｅ２，１９−田
、）およびαｙ　＜Ｓ　ｐｐｍ　（ｓ　、　ｓ　、　１
ｓ−田、）、俗名：１２．１５’−（ジｒＭｎ　）−カ
ルバミルジゴキシン。

実施例６ ゛使い捨てｔ５ＩＩ７容マイクロ試験管中のメタノール
２０μｌ　に溶解させた沃化す）　ＩＪウムー１１２５
１１液２．０ミリキユーリー、ｐＨ７，ｓのα５モル燐
酸カリウム緩衝液２５μ！　および１５’−（ＴＭＮ）
−カルバミルジゴキシン２μｙ　の混合智に、ｐＨ７，
５のα０５Ｍ燐＃Ｒ緩衝漱２０μ！　中に溶解させたク
ロラミンＴ（Ｎ−クロロ−ｐ−トルエンスルホ／アミド
、ナトリウム塩三水和物）５０μ９　を一度に加えた。

正確に２０秒後、ｐ）１７．５の００５モル燐酸カリウ
ム緩衝ｇ２０μｌ　中に溶解させたメタ電亜硫酸ナトリ
ウム１００μｇ　を加えて反応を終了させた。

反応混合物の試料１μｌ　を分析用シリカゲルｔｌｃ板
（５Ｘ２０Ｘ（１０２５ｃｍ）ＩＣ７）［ｉｊこＬ、ソ
シて残りを６ｘ１２Ｃ１Ｋの帯状で製造用シリカゲルｔ
ｉｃ板（２ｏ、Ｘ２ｏＸＱ、２ｃ＋＋ｔ）に板の下端か
ら２傭の線のところで施こした。板を１５分間風乾させ
、次いで１０嘩メタノール−クロロホルム１６剤系を用
いて溶剤前線が各版の頂部に達するまで展開させた。板
を３０分間風乾させ、次いで薄い透明なポリエチレン族
に包み、そしてＸ−＠フィルムおよび放射様クロマトグ
ラム走査器を用いて分析し、板上の放射性バンドを位置
決定およびｉｎした。

各板は典型的にはＳつの放射性バンド（分析用ｔｉｃ　
板上のスポット）を示した。原点、すなわちｉｔｆ　　
α０にｊ？けるバンドは典型的には２００μＣ１（ＩＩ
！放射能の１０−）を含有し、これは未反応■１２５　
　に相当した。

主豐バンド、）ｔｆｏ、２８（製造用ｔｉｃ　）および
０．３５（分析用ｔｉｃ　）は１６００μＣｉ（＃放射
能の８０％）の３β−〇−〔０−β−（３β−０−（Ｎ
−（１−カルボメトキシ−２−（４’−ヒドロキシ−３
１−（１１２５）−イオドフェニル）−エト−１−イル
〕−カルバミルジギトキソシル）−（１→４）−〇−β
−ジギトキソシル−（１→４）−β−ジギトキソスー１
−イル〕−１２β、１４β−ジヒドロキシ−５β−カル
ドー２０（２２）−エンリド（俗名：　１５’−（ＴＭ
Ｅ）カルバミルジゴキシン−１１２５）を含有した。こ
のバンドを製造用ｔｉｃ板から掻き取り、底部にガラス
ウール栓が取付けられた１５Ｘ０．９ｃＩＩＬガラスカ
ラムに移し、そして１廐を１０％メタノール−クロロホ
ルム［ｌＪ系６０１Ｌｌで溶出させた。合した溶出液を
乾燥窒素流下で蒸発乾固させ、残留物な無水エタノール
Ｑ、５１１ｔＥｌｐ［溶解させ、２０Ｘ２０Ｘ０．０２
５ｍの分１析用ｔｌＣ板に施こしそして１０−メタノー
ルークワロホルム浴剤系大用いて展開させた。次いで、
ｔｉｃ板を風乾させ、薄い透明なポリエチレン族で包み
、そしてＸ−線フイルムを用いるオートラジオグラフィ
ーによって分析し、板上の放射性ノクンドを位置決足し
た。１５’−（’ｒＭＥ）カルノ（ミルジゴキシン−１
１２５に相当する放射性バンドをｔｉｃ板から掻き取り
、底部にガラスウール栓が取付けられている１５Ｘ０．
９ｃＭのガラスカラムに移し、６１が施こされたカラム
に対し１０％メタノール−クロロホルム溶剤５０１を用
いてシリカゲルから溶出させた。溶出液全部を乾燥窒素
流下で蒸発せしめ、そして残留物を無水エタノール１紅
中に溶解させた。シリカゲル上の薄層クロマトグラフィ
ー（５Ｘ２０ＸＱ、０２５ＣＩ１１）は、１０チメタノ
ールークロロホルム溶剤系を用いて、一つの均一なスポ
ットの存仕を示した。−２０℃に貯蔵した梢製物質は数
カ月の間安定であった。

第三のバンド（小）、ｉｔｆ　　α６４（製造用ｔｌｃ
）および０．４５Ｃ分析用ｔｌｃ　）は６００μＣ１（
総放射能の１５チ）の６β−ｕ−（ｕ−（６β−〇−〔
べ−（１−カルボメトキシ−２−（４’−ヒドロキシー
リ、５＋　−（１１２５）−シイオドフェニル〕）−エ
トー１−イル〕−力ルバミルジギトキソシル）−（１→
４）−〇−β−ジギトキンシルー（１→４）−β−ジギ
トキソスー１−イル〕−１２β。

１４β−ジヒドロキシ−５β−カルドー２０（２２）−
エノリト責俗名１５’−（ＴＭｎ）カルノ（はルジゴキ
シンージーＨｊ２５）を含有した。このノ（ンドを製造
用ｔｉｃ板から掻き取り、底部にガラスウール栓が取付
けられた１５Ｘ０．９ｃｓｃのガラスカラムに移し、そ
して１０チメ゛タノールークロロホルム浴剤系で溶出さ
せた。合した溶出液を乾燥窒素流下で蒸発乾固さ砺、残
留物を無水エタノールｃＬｓｄ中に溶解させ、−２０℃
で貯蔵した。

実施＠７　　“ この実施例は、１７β−０−（Ｎ−（２−（４’−ヒド
ロキシフエニル）−エチル〕）−カルノ（ミルアンドロ
スト−４−エン−５−オン、俗名１７−（チラミン）カ
ラミルテストスデロン、すなわち式 の化合物、の合成を例示する。

これは、塩化メチレン５ｄ中においてテストステロン０
．２５ｐを２−　（４’−トリメチルシロキシフェニル
）エチルイソシアネート（実施例１１Ｃおいて製造）α
２４ｐと６日間反応させることにより、実施例５と同様
にして製造した。溶媒を蒸発させて、粗生成物を得た。

メタノールを用〜・て封鎖基を除去し、次いで同じ溶媒
から結昂化させて、融点２４４〜６℃の主題の化合物１
１００ｇを得た゛。５％メタノール−クロロホルム浴剤
系を用（・’）；ｙシ’）　ｔ２ケル上ｆ）　ｔｉｃ　
（２０Ｘ　ｓ　Ｘ　Ｑ、０３，２５ｃｍ＆）は、この化
合物につ＞−て）Ｌｆ　　α４６・を示した。

、ｊ’）化合物は赤外スペクト４ル（ＫＢｒ　）を特徴
とし、五Ｑ５（０）ｉ入　α４０．５．９２　（カルノ
くメートカルボニル）　１．ｉ”ｏ’　２　（ビニルカ
ルボニル）、６．２０（芳香族）、＆６０．６９０．７
．９０．８．１０．９５２．９９０．１ｔ６０および１
１９８μに吸収を示した。

６０チＣＦ３Ｃ０２Ｈ−ＣＤＣＩ　３におけるＮＭＲス
ペクトルはδ７．２６（Ｓｔｌ、芳香族０）１　’）、
７．ＯＢおよび６．８２　（Ａ２Ｈ２ｑ、　４　、Ｊ＝
８．４Ｈ２、それぞれチラミン５ｌ−１５１−および２
１−１６′−プロトン）、５．９６（Ｓ、１．−田イー
人　ｔ２５（８，３゜１ｑ　−ＣＨ３）およびα８６１
）Ｉ）ｍ　（Ｓ　ｔ　５　ｓ　１８−Ｃ）ｌ、　）　に
おいてシグナルを示した。

元素分析： 計算１１ＬＣ７４，４６％、Ｈ＆２５％、６５１％実測
値　（”７４．３５チ、）１Ｂ、０５チ、Ｎ易チ。

実施例８ この実施例は、式 を有する２ｌ−０−（Ｎ−（２−（４’−ヒドロキシフ
ェニル）−エチル〕）−力ルバミルフレクネー４−エン
−１１β、１７α−ジオール−５，２０−ジオン、俗名
−２１−（チラミン）カルバミルコルチゾールの合成を
例示する。

ピリジン２紅甲においてコルチゾール０．１５０＃ヲ２
−　（４’−）リメチルシロキシフェニル）エチルイソ
シアネート１２４０ｇと呈温で４時間反応させた。溶媒
を減圧蒸発させかつメタノールによって對鎖基を開裂さ
せた後、カルバメートを２０チメタノールークロロホル
ム浴剤系によるシリカゲル上での製造用ｔｌｃ　（ｌｔ
ｆ　　α６３）によって単離した。

この化合物の赤外スペクトル（ＫＢｒ　）は次のバンド
を特徴とする：２．９Ｂ（ヒドロキシル）、＆４２．５
．８０　（カルバメートＣ＝０）、５．８５（Ｃ２−Ｄ
Ｃ＝Ｏ）、６０４（ビニルＣ＝０）、６．６２、＆８８
．７．０５．７．２０．７．５５．７．９０．８．１０
．８．５２．８８０．８９５．９．４５．９．７０．１
１５５．１２．０５．１２．８０．および１４．７０声
。

５０　％ＣＩ）ＣＩ、　−ＤＭＳＯ−ｄ６にオ［ルＮＭ
Ｒ＆１．６７．５５（’ｖ１ｓ芳香族ＯＨ′）、７．０
２および６、７５　（Ａ２Ｈｚｑｓ　４９　Ｊ　””　
８．２　Ｈｚ　、　　それぞれチラミンＳ＋−１５１−
および２１−１６１−プロトン）、５．６３（８，１，
−田（）、１．４４（Ｓｔ５ｔ１９−　Ｃ１−１６）、
およびα８９　ｐｐ”　（’　、５　ｔ　１８−　ＣＨ
３）においてシグナルを示した。

実施例９ この実施例は、式 を有する３−Ｏ−（Ｎ−（２−（４’−ヒドロキシフェ
ニル）−エチル）−カルバミルエストラ−１４５凹−ト
リエン−１７−オン、俗名−６−（チラミン）カルバミ
ルエストロンの１＃造を示す。

実施例５に記載したのと同じ一般的方法においてこれを
、トリエチルアミン３ｉＬｌ、ジオキサンα５１Ｌｌお
よび触媒としてのトリフェニルホスフィンα口５０ｇの
混合物中に１１１解させたエストロンα１９０７７と２
−（４’−トリメチルシロキシフェニル）エチルイソシ
アネート１３６０Ｍとかも会成しそして７０℃に２４時
間味った。溶媒を減圧蒸発させ、次いでメタノールによ
って到鎖基を除去した後、２％メタノール−クロロホル
ム解剤糸を用いるシリカゲル上での製造用ｔｉｃ　（２
０Ｘ２０×（ｌＬ２ｃＩＬ板）によって主題の化合物を
単離した。

赤外スペクトル（スメア）は、３．０３（ヒドロキシル
）、五４５．５．８２　（巾広カルボニル）、＆２２、
＆６８．６９３．７．４０．８．２０，９．５０．１２
．２０および１五５０μにバンドを示した。

ＮＭＲスペクトル（ＣＩ）Ｃ１３）　ハ、ａ　７．１５
　（ｍ　ｅ８、芳香族プロトンおよび芳香族Ｏｉ（）お
よび［ｌＬｓ５ｐｐｍ（ｓ　、　５　？　１８−ＯＨ，
）＆ｃｙいてシグナルを示した。

実施例１０ この実施例は、式 を有する３β−〇−〔０−β−（５β−０−（Ｎ−［２
−（４’−ヒドロキシフェニル）ニド−１−イル〕）−
カルバミルジゴキシル）−（１→４）−〇−β−ジギト
キソシル−（１→４）−β−ジギトキソスー１−イル〕
−１２β１．１４β−ジヒドロキシ−５β−カルドー２
０　（２２，）−エンリド、俗名−１５’−（チラミン
）カルバミルジゴキシンの製造を示す−。

ジゴキシン（結晶）（Ｌ２００ＩＩ（２，５６Ｘ１０−
’モル）と、実施例１の方法で作った２−（４’−）リ
メチルシロキシフェニル）エチルイソシアネート１０６
１０６ｌ、５６Ｘ１０　　モル）との混合物を乾燥ピリ
ジン３１中に溶解させそして４５〜５０℃で７日間攪拌
した。次いでピリジンを室温で減圧除去し、メタノール
５１１Ｊ）ｋ７Ｊ１えそして混合物を５０分間攪拌した
。次いでメタノールの容積を減圧下でｆＪ１ＷＬＩＫ減
少させそして粗生成物を１０％メタノール−酢酸エチル
齢剤系によるシリカゲル上での製造用薄鳩クロマトグラ
フィーにかけた。展開後、ｔｉｃ板上には２５４ｎｍ（
ｇ外）光の下で２つの主要バンドおよび未反応ジゴキシ
ンに対する１つのバンドが観察された。

第一のノ゛（ンド、Ｒｆ　　α４４は［Ｌ０５０ｇの１
５１−（チラミン）カルバミルジゴキシンを含有した。

赤外スペクトル（１Ｇ３ｒ　）を特徴とするこの誘導体
は次のバンドを示した：２．９５（ヒドロキシル）、五
４５．５．８０（巾広カルボニル）、６．１８、＆６３
．６９０．７．２Ｂ、８．５５、＆８５．９３５．９．
８５．１ｔ５０．１２．１０および１五７５μ。

５０−Ｃ□ｌ）Ｃ盈、−アセトン−ｄ６におけるＮＭ）
Ｌスペクトルは、δ７．５５　（Ｓｇ　１　を芳香族０
１−１　）、７．０５および４７９　（Ａ２Ｂ２ｑｓ　
４　、　Ｊ　＝　８．４　Ｈｚ　。

それぞれチラミン５１−１５′−および２１−１６′−
プロトン）、＆９０（＄９１９ラクトンＣ＝＝＝（刃−
）、０、９　ｓ　（ｓ　、　ｓ　ｔ　１９−　Ｃ）ｉ、
　）、オヨヒ０．．８５ｐｐｍ　（ｓ　、　Ｓ　ｇ　１
８−田、）においてシグナルを示した。

第二の主要バンド、Ｋｆ［Ｌ５５はｏ、　０５０　ｇの
１２．１５’−（ジチラミン）−カルノ（ミルジゴキシ
ンを与え、そしてこれはａ　７．７　Ｓ　（’　ｖ　１
　ｓ芳香族ＯＨ）、　７０８およびｉ　７６（Ａ４Ｂ４
ｑ、　ｓ、　Ｊ＝　８．６　Ｈｚ　１　　それぞれチラ
ミン３１−１５′−および２１−１６′−プロトン）、
５．８６（ｄ、１．ラクトｙＣ＝ＣＨ）、　０．９３（
ｓ　、３．１９−ＣＲ２）オヨびαａ　３　ｐｐｍ　（
ｓ　、　５．１ｓ　−ＣＲ３）におけるバンドによりＮ
Ｍ）ｔスペクトル（ｓｏ％ｃＤｃ１３−アセトン−ｄ６
）　　を特徴とする。

実施例１１ この実施例は、文献（Ｂｒｕｎｎｅｒ　ｅｔ　ａｌ、、
　Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ　ｔｈｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　５
ｏｃｉｅｔｙ、　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｍｍｕｎｉｃ
ａ−ｔｉｏｎｓ、　ｐａｇｅ　２５５　（１９７４）　
）に記載されたような光促進反応を用いた１５’−（チ
ラミン）カルバミルジゴキシンの製造を示す。

脱ガスした四塩化炭素１００ＪＩＪ中に懸濁させたジー
ｆｔシｙα１００ｐ（ｔ２８Ｘ１０−’モ／Ｉ／）Ｋ、
２−’（４’−）　ＩＪメチルシロキシフェニル）エチ
ルイソシアネート０．０５２ｇＣ１５６Ｘ１０−’モル
）とフェロセンα００５．９（ｔｓＩＸｌｏ−５モル）
とを加えた。反応混合物を、タングステンに」からの光
の下に絶えず裏山させながら室温で１２時間攪拌した。

溶媒を減圧下に除去しそして得ろねた残留物をメタノー
ル中に俗解させてトリメチルシリル封鎖基を除去した。

実施例１０と同様に製造［ｔｌＣＩＣよって粗生成物を
精製し、１５’−（チラミン）カルバミルジゴキシンα
０２５ｇを得た。１２．１５’−（ジチラミン）カルバ
ミルジゴキシンは全く検出されなかった。

実施例１２ この実施例は、式 を有する３β−０−（Ｎ−（２−（４’−ヒドロキシフ
ェニル）−二・チル〕）−カルバミル−１２β。

１４β−ジヒドロキシ−５！−カルドー２０　（２２）
−エンリド、俗名−６−（チラミン）カルバきルジゴキ
シゲニンの合成を示す。

実施例５に記載したのと同じ一般的手順を用い、乾燥ピ
リジン２　ｉｘｌ中においてジゴキシゲニンα１００＆
を２−（４’−）リメチルシロキシフェニル）−エチル
イノシアネートα２２０７７ト８０℃で２４時間反応さ
せた。次いで溶媒を減圧除去しそして残留物をメタノー
ルで処理してトリメチルシリル封鎖基を除去した。１０
％メタノール−酢酸エチル溶剤系を用いるシリカゲル上
での製造用ｔｌｃによって粗製化合物をｎ製し、主題の
化合物（にｆ　α５７　）　０．０２５　ＩＩを得た。

この化合物の赤外スペクトル（１Ｇ３ｒ　）は五〇〇（
ヒドロキシル）、！Ｌ４Ｂ、５．８５　（巾広カルボニ
ル）、＆２０、＆６２、＆９２．７．０５．７．４０．
７．９５．８．２０、＆５５．９０５、ｔ７２．１［Ｌ
ｌｏ、ＩＱ、５０および１２．００μに吸収を示した。

メタノール−ｄ４におけるＮＭＫスペクトルは１７．８
８（８，１，芳香′１！１ｃＯＨ）、７．０５および＆
７０（Ａ２ｔ３２ｑ、　４　、　Ｊ＝８．２　Ｈ２、そ
れぞれチラミンｓｌ−、ｓｌ−および２１−　、　、ｓ
ｌ−プロトン）、５．８５（Ｓ、１．ラクトンＣ＝朗入
　０．９６（Ｓ、３゜１ｑ　−Ｃｋ４Ｓ）および０．８
５　ｒ）ｐ”　（Ｓｔ　５　ｔ　１８−ＣＲ２）　にお
いてシグナルを示した。

実施例１３ この実施例は、式 を有する２　１−（Ｊ−（Ｎ−（１−カルボメトキシ−
２−（４’−ヒドロキシフェニル）−エチルＪ）−カル
バミルプレグナー４−エン−１１β、１７α−ジオール
−５，２０−ジオン、俗名−２１−（チロシンメチルエ
ステル）カルバミルコルチゾールの合成を例示する。

実施例５の記載と同じ一般的手順を用い、乾燥ピリジン
５−中においてコルチゾールα３６２ｇをメチル−２−
インシアナト−５−（４’−）リメチルシロキシフェニ
ル）プロピオネ−）（１２９７ｙと室温にて４日間反応
させた。溶媒を減圧除去した後、粗製反応混合物をメタ
ノール中に溶解させて封鎖基を除去しそして５０％クロ
ロホルム−アセトン溶剤系を用いるシリカゲル上での製
造用薄層クロマトグラフィによってＷＩＩ＃シ、主題の
化合物（ｌ（、ｆ　　α６４）０．４４５．９を得た。

赤外スペクトル（ＫＢｒ　）の特性化は、！ｗＯＯ（ヒ
ドロキシル）、５．４８．５．８２　（巾広カルボニル
）”−，４０５（ビ＝　ルカ／Ｉ／　ホニｐｙ　）、６
．６５．６９８．７．５５．７．９０．＆２０，９．０
５．９４８．１０．６０．１α９３．１．ｉ、１０，１
ｔ５５．１ｔ８５．１２．００，１２．４８．１２．８
０および１五６５μにバンドを示した。

ｓ　ｏ　％　Ｃ１）Ｃム、ｓ　−７セト／　−ｄｂ　［
ｋ　ｌ　６　ｔＮｚｖＫ　スペクトルハ、δ７．６６（
ｓ、１．芳香族Ｕ）ｉ　）、１０５およヒ＆７５（Ａ２
Ｂ２ｑ？４．Ｊ＝ｉ３．４ｆ（Ｚ。

それぞれチロシンｓ＋−１５′＝および２１−１６′−
プロトン）、５．ｌ５５（Ｓ、１．い切）、α７５（’
　　ｓ　５　　＊−慎娶ｓ）、ｌ４６（ｓ　　、　ｓ　
、　１ｑ−Ｃｋｊ３）Ｐよび０．９３Ｄｐｍ（Ｓ、３．
１８−ｃＨ５）においてシグナルを示した。

実施例１４ この実施例は、式 を有する１７β−０−（Ｎ−（１−カルボメトキシ−２
−（４１−ヒドロキシフェニル）−エチル〕）−カルバ
ミルアンドロスト−４−エン−６−オン、俗名−１７−
（チロシンメチルエステル）カルバミルテストステロン
の合成を例示する。

実施例５の記載と同＊［Ｌ、て、乾燥ピリジ／６１中に
おいてテストステロンα２００ｐをメチル−２−インシ
アナト−５−（４’−）リメチルシロキシフェニル）プ
ロピオネートα２８０１７と５０℃にて４日間反応させ
た。次いでＳＳＶ減圧除去しそして侍られた残留物をメ
タノールで処理してトリメチルシリル封鎖基を除去した
。１０％メタノール−酢酸エチル溶剤系を用いるシリカ
ゲル上での製造用ｔ１ｃによって精製し、主題の化合物
（）ｉｆ　　０．６８＞［１，０６５１／な得た。

赤外スペクトル（１Ｇ３ｒ　）は２．９９（ヒドロキシ
ル）、五４０．５．８５　（巾広カルボニル）、６．１
９（ビニルカルボニル）、６６８、α９５．７．４２．
７．９０．８．５０．９４５．１ｔ５５．１２．１０゜
１２．５０および１２．９０μにおいて吸収を示した。

ＮＭｋ　スペクト＃（ＣＤＣＩ、）はδ７．２６（’ｗ
１を芳香族０）ｌ）、６９８および６．７３　（Ａ２Ｂ
２ｑｔ　４　ｔＪ＝８．６Ｈｚ、それぞれチＣ１シフ　
５’−１５′−および２１−１６１−プロトン）、５．
７５（’ｓ１ｓいり入ｈ　７５　（ｓ　、　ｓ　、　０
ｃｌｌｌｌ、）、ｌ１６（Ｓ、３．１９−リ、）、およ
びａ７６ｐｐｍ（ｓ、５．１ａ−切、）においてシグナ
ルをボした。

実施例１５ この実施例は、式 を有する６β−０−（Ｎ−［１−カルボメトキシ−２−
（４’−ヒドロキシフェニル）−エチル〕）−カルバミ
ル−１２β、１４β−ジヒドロキシ−５β−カルドー２
０（２２）−エンリド、俗名−６−（チロシンメチルエ
ステル）カルバミルジゴキシゲニンの合成を示す。

実施例５に記載した通りの御飯的手順を用い、乾燥ピリ
ジンｔ５−中のジゴキシゲニン０．１００ｇとメチル−
２−インシアナト−５−（４’−）リメチルシ日キシフ
ェニル）−プロビオネート［ＬＯｓ　５ｇとの混合物を
７０℃で６日間攪件した。

次いで溶媒を減圧除去し、粗生成物をメタノール中に俗
解させてトリメチルシリル封鎖基を除去し、次いで５嘩
メタノール−酢酸エチル溶剤糸を用いるシリカゲル上で
の製造用ｔｉｅにかけた。主題の化合物（Ｋｔ　０．６
０　）　　の収敏０．０２９９が得られた。

この化合物の赤外スペクトルは５．　ＯＯ（ヒドロキシ
ル）、６４５．５８０（巾広カルボニル）、＆２０、＆
６５．７．００．７．３８．７．９５．８．２０．９５
５．９８０および１２．００μにバンドを示した。

５０チＣ１）ＣＩ、−アセトン−ｄ６におけるＮＭＫス
ペクトルはδ孟５１（Ｓ、１．芳香族０）（）、７、０
５　オよび４７９　（Ａ２Ｂ２Ｑｌ　４．　Ｊ　＝８．
６Ｈ１。

それぞれチロシン３′−、ｓｌ−および２１−　、６＋
−プロトン）、５．９３（Ｓ＊１＊ラクトンＣ甥）、五
７５（Ｓ、３，０Ｃ）ｉ５）、０゜９７（８，３，１９
−切、）および［Ｌｓ６ｐｐｍ（ｓ　、　ｓ　、　１ａ
−Ｑ−１３）においてシフナルな示した。

実施例１に の実施例は、３β−０−〔０−β−（３β−〇−（Ｎ−
（１−カルボメトキシ−２−（４’−ヒドロキシフェニ
ル）〕−〕エトー１−イル−カルバミルジキトキソシル
）−（１→４）−〇−β−ジギトキソシル−（１→４）
−β−ジギトキソスー１−イル〕−１４β−ヒドロキシ
−５β−カールドー２０（２２）−エンリド、俗名−１
５’−（チロシンメチルエステル）カルバミルジギトキ
シン、すなわち次式 を有する化合物、の合成を示す。

実施例５の一般的手順に従い、乾燥ピリジン２．５１１
Ｌｌ中のジギトキシンα２００ｇとメチル−２−インシ
アナト−３−（４’−）リメチルシロキシフェニル）−
プロピオネート０．１００．９との混合物を５０℃で５
日間反応させた。次いで、溶媒を減圧下に除去しそして
粗製反応混合物をメタノールで処理して封鎖基を除去し
た。１０％メタノール−酢酸エチル溶剤系を用いるシリ
カゲル上での製造用ｔｉｃ　ＩＣよって粗生成物を梢製
し、主題の化合物（ｔｌｆ　　（１７１）［Ｌ１３４ｐ
を侍だ。

赤外スペクトルは２．９５（ヒドロキシル）、五４２．
５．８５（巾広カルボニル）、６２０．６．６５．６９
５．７．５５．７．９５．８．２８．８．６５．８．９
０．９４０（巾広）、１ｔ６０および１２．２０μにバ
ンドを示した。

ＮＭＩ（スペクトル（５０％Ｃ１）Ｃ１３−アセトン−
ｄ６）はδ７．７１　（Ｓ　、　１　、芳香族０す）、
＆９６およびｔ６３（Ａ２Ｂ２ｑｓ４．Ｊ＝ａ、ｓＨｚ
　、そわぞｔｔｒ。

シン５＋−、ｓｌ−および２１−　、６＋−プロトン）
、５．７８　（Ｓ　、　１　、５ｊ　トッキ傳）、５．
６１（Ｓ。

３ｔ　ＱＣ）ｉ３）　、０．８５　（ｓ　、　５　、１
９−　ＣＦ１３）　オよびα７３　ｐｐｍ　（ｓ＊　５
　ｔ　１８−切、）においてシグナルを示した。

実施例１７ この実施例は、式 を有する３−Ｏ−（Ｎ−（１−カルボメトキシ−２−（
４’−１：）”ロキシフェニル）−エチル〕）−カルバ
ミルエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−
オン、　俗名＝３−　（チロシンメチルエステル）カル
バミルエストロンの合成を例示する。

実施例５０記畝と同じ一般的方法において、乾燥ピリジ
ン５１１１中のエストロンＱ、２００．ｌｉｔとメチル
−２−インシアナト−６−（４’−トリメチルシロキシ
フェニル＞−フロビオネートｏ、２５ｏｇとの混合物を
６０℃で５日間反応させた。溶媒を減圧除去した後、粗
製反応混合物をメタノール中に浴解させて封鎖基を除去
した。５チメタノールークロロホルム溶剤系を用いるシ
リカゲル上での製造用ｔｉｃによって精製し、主題の化
＠物（ＲｆＱ、６Ｂ）α０７９Ｉを得た。

この化合物の赤外スペクトルは、３．００（ヒドロキシ
ル）、五４２．５．７８（巾広カルボニル）、＆２５、
＆６５．６９５．７．３５．７９５．８．２２．８．５
０．９５３．１０．０口、１［Ｌ９５．１２．００およ
び１２．９０μにバンドを示した。

ＣＬ）ｃ１３ニオはルＮＭＲハδ＆　８５Ｃ”　ｔ　７
　を芳香族プロトン）、１６６ｃｓ９５，０Ｃ）ｉ、）
、およびａ　８１　ｐＩ）ｍ　（Ｓ　、　３　、１８−
　Ｃ１ｉ、　）　　においてシグナルな示した。

実施例１８ この実施例は、式 を有する３−０−（Ｎ−［：　１−カルボメトキシ−２
−（４’−ヒ）”ロキシフェニル）））−カルバミル−
１７β−ヒドロキシエストラ−１，５，５（１０）−ト
リエン、俗名−６−（チロシンメチルニス１ル）カルバ
ミルエストラジオールの合成を例示する。

反応性１７β−ヒドロキシル基を先ず最初にトリメチル
シリル（’Ｉ’Ｍｂ）基で封鎖する。

１７β−エストラジオ−ルミ、２７２ｐとトリメチルシ
リル−Ｎ、Ｎ　−ジメチルカルバート２ｄ（過剰）との
混合物を室温で１時間ｆｊｔ押し、円ヒドロキシル基を
ＴＭＳ基で封鎖した。次いで：未反応のトリメチルシリ
ル−Ｎ、Ｎ−ジメチルカルバメートを室温減圧下で除去
した。

１７−　ＴＭＳ基を無傷に保ちながらｓ−ＴＭＳ基を選
択的に除去するために、粗製反応混合物を５〇−メタノ
ール−もクロロホルム浴ｆｉ４０１１１７中に俗解させ
そして浴液を２時間還流させた。６−ヒドロキシル基の
選択的封鎖解除はＮＭ）ｔスペクトルにより次のように
して嫉視した。３，１７−ジ（１’Ｍｓ　）−置換誘導
体（Ｃｉ）Ｃ１３溶剤）においては、５−および１７−
　ＴＭＳ基に対応する２つの強度の等しい鋭いシングレ
ットが１８−メチル基シグナルのそれぞれ３０および５
８．６１−１１　　フィールドのところに出現した。封
鎖解除が進行するにつれ、３０１ム２フイールドにおけ
るシグナル（５−’１”ＭＳ　）か消失し、−万５８．
６　）１ｚ　　フィールドにおけるシグナルは不変の１
〜留まった。次いで＃媒を室温で減圧下に除去し、６−
ヒドロキシ−１７−ＴＭＳ　−封鎖化合物を得た。

次いで、この中間体の全量を乾燥ピリジン４ａ中におい
てメチル−２−イソシアナト−３−（４’−１ｃｒｔ−
フチルジメチルシロキシフェニルノープ゛ロビオネー）
　Ｑ、４００．９と室温にて５日［ｌ１１反応させる。

次いで、溶媒を減圧下で除去し、そして得らハた粗生成
物を１０チメタノールークロロホルム浴剤系によるシリ
カゲル上での製造用ｔｌｃ［よって精製し、５−Ｏ−（
Ｎ−（１−カルボメトキシ−２−（４’−ｔｅｒｔ−ブ
チルジメチルシロキシフェニル）−エチル〕）−力ルハ
ミル−１７β−トリメチルシロキシエストラ−１，５，
５（１０）−トリエンを純粋な化合物、にｆ　Ｃ０６、
として得た。

シリル封鎖基を両方とも除去するため、ジオキサン５Ｉ
Ｌｌ中［８解させたこの化合物αｏａｏ、ｙ。

メタノール１１Ｌｌ、および蒸留水１ｙａｉ中に溶解さ
せた”ｔトラエチルアンモニウムフルオライド０．２０
０ｇの混合物を室温で２日間攪件した。次いで、溶媒を
室温にて減圧Ｆに除去し、得られた固体を蒸留水で洗沖
しそして減圧下で乾陣させて、純粋な主題の化合物を得
た。

純粋な化合物の赤外スペクトル（スメア）は五〇〇（ヒ
ドロキシル）、工４２、＆９０（巾広カルボニル）、６
２６．６．６８．６９５．７．４２．８．２２．９４５
．１ｔ５０．１２．２０および１２．９０μにバンドを
示した。

ＮＭＲスペクトル（アセトン＝ｄ６）はδ＆８５（ｍ、
７．芳香族プロトン）、５．６６（Ｓ＋３ｖ（ＪＣ）１
３）　オヨびＱ、　７６　ｐＰＩｎ　（Ｓ　、　３　、
１８−　Ｃ１ｊ、　’）においてシグナルを示した。

実施例１９ この実施例は、式 を有する５−Ｏ−（Ｎ−［１−カルボメトキシ−２−（
４’−ヒドロキシフェニル）〕）−〕カルバミルー１６
α、１７β−ジヒド四キシエストラ１゜５．５（１０）
−）リエン、俗名−３−（チロシンメチルエステル）カ
ルバミルエストリオールの合成を示す。

反応性１６α−および１７β−ヒドロキシル基を先ずト
リメチルシリル（’ｒＭｓ）基で封鎖する。

この目的で、エストリオールα２８８ｇとトリメチルシ
リル−Ｎ、Ｎ−ジメチルカルバメート２１（過剰）との
混合物を５０℃で２時間攪拌し、３個のヒドロキシル全
てＹ　’ｒＭ８基で封鎖した。次いで未反応のトリメチ
ルシリル−ｆ’Ｊ、Ｎ−ジメチルカルバメートを室温減
圧下で除去した。

１６−および１７−７ＭＳ基を無傷に保ちながら、３−
　’ｒＭｓ基を選択的に除去するため、粗製反応混合物
を５０９６メタノールークロロホルム浴＄４０１中Ｋ１
１ｌ、Ｐｓさせ、そしてその溶液を４時間還流させた。

３−ヒドロキシル基の選択的側鎖解除はＮＭ）ｔスペク
トルによって次のように監視した。３゜１６．１７−）
す（ＴＭＳ）−置換誘導体（Ｃ１）ＣＩ。

溶剤）Ｋおい１は、Ｓ−７ＭＳ基および一致した１６−
１１７−１”Ｍ８基に対応する２つの相対強度１：２の
鋭いシングレットが１８−メチル基シグナルのそれぞれ
３ＩＩＬ・６および５　＆　６　）１ｚ　　フィールド
に出現した。封鎖解除が進行するにつれ、５α６）１ｚ
　　フィールドにおけるシグナル（５−’ｌ’Ｍｓ　）
は消失し、−万３　＆　６　）１ｚ　　フィールドにお
けるシグナルは不変のま〜留まった。次いで、＃媒を室
温減圧下で除去し′″Ｃ５Ｃ５−ヒドロキシー１６，１
フージＳ）−封鎖化合物０．４３４１！（ＬＯＸｌｏ−
３モル）を得た。

次に、この中間体の全量［Ｌ４５４ｐを乾燥ビリジ１５
１１Ｌｌ中においてメチル−２−イソシアナト−５−（
ａ’−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシロキシフェニル）−
プロピオネートｔ４７，９（５，０Ｘ１０　モル）と６
４℃で３日間反応させた。次いで減圧−トに溶媒を除去
し、そして得られた粗生成物を１０チメタノールー塩化
メチレン浴剤糸によるシリカゲル上での製造用ｔｉｃに
よつ’Ｃｎ製し、６−Ｏ−（Ｎ−（１−カルダン）　＃
シー　２−　（４’−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシロキ
シフェニル）−エチル〕）−カルバミルー１６α、１７
β−ビス−トリメチルシロキシエストラ−１，３，５（
１０）−）ジエンα０６０１’ｌｔ１．純粋な化合響、
ｔｔｆ　　α５、として得た。

両方のシリル到鎖基を除去するため、ジオキサン１０１
Ｌｌ中に８％させたこの化合物ｏ、ｏ６ｏ、ｙと蒸留水
０５鯰中に溶解させた六トラエチルアンモニウムフルオ
ライドα１５０ＩＩとの混合物を室温で１日間攪拌した
。次いで浴媒を室温減圧下で除去し、得られた固体を蒸
留水で洗浄しそして減圧下で乾燥させて純粋な主題の化
合物′を得た。

この化合物の赤外スペクトル（スメア）は五〇〇（ヒド
ロキシル）、１４４．５．９０（巾広カルボニル）、６
２２、＆６８、＆９５．７．３７．＆１５、＆５２．９
．４５．１α９５．１２．１５および１２．７５μにバ
ンドを示した。

ＮＭＲスペクトル（アセトン−ｄ６）はδａｏ。

（Ｓ、１．芳香族０旦）、４６４（ｍ、７．芳香族プロ
トン）、五７０　（ｓ　ｔ　５１　ＱＣ）ｌ、　）　　
およびａ　８１　ｐｐｍ（’　＊　３＊　’　８−傳、
）においてシグナルを示した。

実施例２０ この実施例は、式 を有する１１α−０−（Ｎ−（１−カルボメトキシ−２
−（４’−ヒドロキシフェニル）−エチル〕）−カルバ
ミルプレグナー４−エン−ｇ、２ｏ−ジオン、俗名〜１
１−（チロシンメチルエステル）カルバミルプロゲステ
ロンの合成を示す。

実施例５の記載と同じ一般的十順を用い、１１α−ヒド
ロキシプロゲステロ／αｉ　６６１１Ｃ５Ｘ１０−４モ
ル）を乾燥ピリジン４ｄ中においてメチル−２−イソシ
アナト−５−（４’−）リメチルシロキシフェニル）−
プロピオネート０．２００７７（６Ｘ１０　　モル）と
６０℃にて３日間反応させた。溶媒を減圧除去し、そし
て粗製反応混合Ｃｆ！ＩＪをメタノール中に溶解させて
トリメチルシリル基な除去した。１０チメタノールー酢
酸エチル溶剤系を用いるシリカゲル上での製造用ｔｌｃ
により精製して、主題の化合物（Ｒｆ　　［１７１）０
．２０７１ｉを得た。

赤外スペクトル（ＫＢｒ　）は五１０（ヒドロキシル）
、！Ｌ５０．５．８０　（巾広カルボニル）、ａＯＯ１
６，６５、＆９８．７．４５．８．２５．９．５５およ
び１２．００μにバンドを示した。

ＮＭＩ′ｔスペクトル（Ｃ１）ＣＩ、、　）は６６．９
８（ｍ、５゜芳香族プロトンおよび切入　５．７６（Ｓ
＊１＊Ｃり式）、１７　Ｂ　（’　ｔ　Ｓ　ｓ　Ｏ□ｓ
入２．１１　（Ｓ。

３　、　ＣＬＩＩＩ、Ｃ＝０　）、ｔ　２５　（Ｓ　、
　５　、１９−　Ｃ）ｉ５）および（Ｌ７０ｐｐｍ（Ｓ
　、　５　、１８−Ｃす３）においてシグナルを示した
。

実施＠２１ この実施例は１、式 を臂する俗名６−（ＴＭＥ）ウレイドニコチン、すなわ
ちニコチン同族体を行なうのに適したニコチン同族体−
イソシアネート付加物、の合成を例示する。

６−アミノニコチン［１２８０ｇ（０，００１５８モル
）とメチル−２−インシアナト−ｓ　−（ａ’−トリメ
チルシロキシフェニル）−プロピオネート（実施例２の
方法で製造）　ｏ、ｓ　ｏ　ｏ　＆　（０，００１７モ
ル）との混合物を乾燥ピリジン５１中に溶解させそして
室温で一晩攪拌した。次いでピリジンな室温で減圧除去
しそしてメタノール５−を加え、そして混合物をさらに
６０分間攪件した。

次いで、反応混合物を約１Ｋｌまで減圧＃縮しそして２
０％メタノール−酢酸エチル浴剤系を用いるシリカゲル
上での製造用ｔｌｃ　（２０Ｘ　２０　Ｘ（Ｌ２信板）
にかけ、主題の尿素にｆ　α２６を侍た３、この化合物
は赤外スペクトル（１Ｇ３ｒ　）を特徴としそして五１
、五２（出入　５．８（エステルカルボニル）、５９８
（尿素カルボニル）、＆２、＆５．６５．６７．８，２
および１２．００ＡＫ＃収を示した。Ｑ、　Ｉ　Ｎ　Ｎ
ａ０）（Ｋおける紫外吸収スペクトルは２８６ｎｍ（ｇ
９５４０）および２５’７ｎｍ（６５５，１００）に最
大を示した。１）ＭＳＯ−ｄ６におけるＮＭＲｙ、ベク
トルは、δ９．５６Ｃ５，１，Ｎ）ｉ）、８８０（巾広
’　ｔ　ｉ　＋　ＮＨＣＨＬ　８．４１　（Ｓ　、　１
　。

０す）、７．７７　（ｍ　、　２　、２−および４−プ
ロトン入６９８および６．６６　（Ａ２Ｈ２（１９４、
Ｊ＝９．０Ｈｚ。

チロシンｓ＋−、ｓｌ−および２１−　、．５１−プロ
トン）、４．５０（Ｓ、１．チロシン―田、）、工６１
（Ｓ。

３１　Ｃ０２Ｃ１−１，入および２．０９　ｐｐｍ　（
８ｔ　５　＊Ｎ（Ｊ（、）　　Ｋおけるバンドを特徴と
する。

冥ＩＩ＠−ガ−２−２ この実施例は、式 を有する俗名２−（’Ｉ’Ｍｊ！ｉ）ウレイドニコチン
化合物、すなわちニコチンＩＪｊ１定を行なうのに有用
な別のニコチン同族体−イソシアネート付加物の製造を
例示する。

２−アミノニコチンα２９０．ｌｉ’とメチル−２−イ
ンシアナト−５−（４’−）リメチルシロキシフェニル
）−プロピオネート（実施例２の方法で製造）（１５０
０ｇとの混合物を乾燥ピリジン５ＷＬｌ中に溶解させそ
して室温で一晩攪拌した。溶媒を至温で減圧除去し、次
いでメタノールを加えそして反応混合物をさらに３ｏ分
間攪拌した。次いでメタノールを減圧除去しセして粗反
応生成物をアセトンから結晶化させて主題の化合物を融
点２０５〜６℃（分Ｓ＞の固体として得た。

この化合物は、１５−メタノール−塩化メチレン溶媒系
を用いるシリカゲル上での薄層クロマトグラフィーＫか
けたときＫｆ　　α７７を示した。

Ｑ、　Ｉ　Ｎ　Ｎａ０）１Ｋｉ？ける案外吸収スペクト
ルは、２８６１１ｍ（ε４４４ｏ）および２５７ｎｒｎ
（ｇ２ｔ８００）に最大４彷した。この化合物の赤外ス
ペクトル（ＫＢｒ　）　ハｌ　５、五５、α７５（Ｃ０
２Ｃ）１．入６０８．４３２、α５２．４９７．４．４
５．８．３０．１ｔ９４．１２．４５および１２．９０
μにおけるバンドを特徴とする。ＤＭＳＯ−ｄ６におけ
るＮＭ）ｔスペクトルｉまδ１（１５２（８゜１、　ｔ
ＮＨ）、９．７０　（巾広ｄ　、　１　、Ｊ＝８．０Ｈ
ｚ　。

岬−ＣＨｃＨ門人ｑ、　２　ｙｓ　（ｓ　、　１．−ｏ
）ｉ）　＊　ａ　ｏ　。

（ｄ　、　１．Ｊ＝４．９）１ｚ　、　６−プロトン）
、７．５５（ｄ　、　１　　、Ｊ＝７．０Ｈｚ　、　４
−プロトン）、７．０１および４６８（Ａ２Ｈ２ｑ、４
　、Ｊ＝８．１Ｈｚ、それぞれチロシン５’−，５’−
＆よび２１−６１−プロトン）、ｈｑｌｃｍ、１．５−
プロトン）、４．５０　（ｍ　ｔｌ、チロシン爬−ｃＨ
２）、ｈ　６４　（ｓ　、　５　、ｃｏ２ｃＢ３）、２
．９５（ｍ、２．チロシン田虫、）および１１３ｍ）Ｐ
ｍ（Ｓ、３．Ｎ−リ、）Ｋ′Ｊ？けるシグナルを特徴と
する。

実４例２３ この実ＩＭ例は、放射免侵温蔵技術による血清中のジゴ
キシンレベルの温蔵における本発明の使用を示す。

ジゴキシン標準および検体を、兎で生成させたジゴキシ
ン抗佃清における限られた数の結合個所に対し、別々の
試料源においてモノ沃素化１５’−（ＴＭＥ）カルバミ
ルジゴキシン−１１２５（実施例６に示したようにして
１１！！遺したジゴキシン−１ｉ２５）と競合さ−せた
。保温後、反応混合物をセファデックスＧ２５の微細な
カラム（１’ｈａｒｍａｃｉａ　ＦｉｎｅＣｈｅｍｉｃ
ａｌ　Ｃｏｍｐａｎｙ　）　　に移し、そこで複合ジゴ
キシンを遊離ジゴキシンから分離させた。この免役反応
は次のよりな平倒として示すことができる。

ジゴキシン−１１２５＋血清ジゴキシン＋抗−ジゴキシ
ン＝（抗−ジゴキシ／・　ジゴキシン−１１２５）　４
　　（抗−ジゴキシン・血清ジゴキシン）＋ジゴキシン
ー■　＋ジゴキシン 上記で生成させた保温混合物をセファデックスＧ−２５
カラム上に入れ、そして溶出液ｔ７ｄ部を施こし、＊＋
ｍおよび未標識の抗原を吸着させそしてｍｓおよび未＊
＊の複合物を浴出させ、次のような結果を得た。

溶出液中： （抗−ジゴキシン・ジゴキシン−Ｉ　　）＋Ｃ抗−ジゴ
キシン・ジゴキシン） カラム上： ジゴキシン−■１２５＋ジゴキシン ピペットーＡ／−カル−セル（ｐｉｐｅｔｔｏｒ　ｃａ
ｒｏｕｓｅｌ）の＊Ｗおよび遠心分離器模型の実験室用
自動分析系を下記の詳細な手順において使用した。ジゴ
キシ７０．０１０ｇを９５ｑｂエタ／−ル５　ｏｙ中に
溶解シテシコキシン保存溶液を調製した。その１酎を凍
結貯蔵した。ジゴキシン保存溶ｌｌ１１１１１をＳ酸塩
緩衝液で１００１に希釈して、中間標準液を得た。燐酸
塩緩衝液は燐酸−水素二カリウ′ム１４９２ｇ、燐酸二
水素ナトリウム（１２７６ｊｉおよび塩化ナトリウム８
．７６　、ｌｉｔを蒸留脱イオン水７５０ｄ中に溶解し
、ｐＨ’１７．４１Ｃ調整し、次いで蒸留脱イオン水で
８０　（ＢＡ’４で希釈することによって１１ｉＩ製し
た。中間標準液は２．０μｇ／１１４１を含有した。中
間１１１＄ｇ１００μｌ　を論酸塩緩衝液９９縦に加え
て作った作業悔準液は２　Ｑ　ｎ／／ｍｌを貧有した。

保存＃液および中間浴液は使用するまで凍結保存するこ
とができる。標準液は２α０、Ｉ　Ｑ、０　。

５．０、五〇、ｚＯｌｌｏ、α４およびＣＬ　Ｏｎ、％
Ｊ、４４を含有するように作った。２５０　Ａｌ　　の
偉＊　Ｓ−よび未知検体をａ５ＩＬｔ容試料コツプに入
ｎ１次いでこれをピペットール・カル−セルに入れた。

１：２５００タイターの兎抗血清α５Ｎを２％子牛血清
アルブミン（ＢＳＡ　）　／燐酸塩緩衝液塩（Ｐｋ３Ｓ
　’）浴液でＩＱ、０ｊｌ１７に希釈することにより、
抗血清の保存溶液を作った。

最終的作業希釈（タイター）は１　：４６．ＯＤＤであ
り、その２００μｊ　を１試料当りに便用した。

ヒペットールを供給するための試薬ボート（１５−）を
ピペットール中に置き、そこに抗血清試薬（Ｉ　Ｑｉｕ
）、実施例６のようにして作ったジゴキシｙ−１（２ｉ
１）およ７）　Ｐｋ３Ｓ洗ｇ（５ａ７）＆入ｎた。試料
容景は、５０μｌ　を与えるようにｉ￥ｔｉした。試料
十洗液容量は９９μ１１に与えるように針量した（　Ｓ
　ｏ　ｐｉ　　ＫＭ＋ａ　９　ｔｔｌ　　ＰＢＳ　ａ’
ｌｆｔ　）。

ピペットールは、抗血清試薬２υ０．１７　　と放射性
抗原（ジゴキシン−１１２５）　５０　Ａｌ　　トを与
えるように設定した。移動円板にピベットールを取付け
、試験管（１５Ｘ１２５１１１１、キンプルａ　ｓ　ｏ
　ａ　２　）３０本をインキュベーター／セパラードの
試験管リング中に入れ、そして操作する標阜と未知検体
（通常２反復操作とする）との数を等しくするのに足り
る数のセファデックスｕ−２５カラムを試験管中に置い
た。系にＰＨ８緩衝液を注入し、インキュベーターを１
５分インキュベーションに設定し、そして舒出各景をｔ
７ｊｌｌＪＫ設定した。

ピペットールが抗血清、標準液、未知検体および放射性
ジゴキシン−１１２５を移動円板の内−および外１１１
１＋コンパートメントに供給するサイクルを完了したと
き、移動円板を取外し、それぞれの容器に各種の浴液が
保持されるよう任意しなからインキュベーター／セパレ
ーターに入れた。インキュベーター／セパレーターにス
イッチヲ入し、約１６分間（ｊなわち、インキュベーン
３フ１５分とセファデックスカラムの浴出１分）操作し
た。

インキュベーションの間の回転はｆｌｌｏｏｒｐＩｎで
あり、移動円板の個々の内ａｍ分から該円板の個々の外
一部分へと抗血Ｙ＃２００μ！　を移動させ、そこには
未知または標準の抗原浴＃５０μノ　をビペットールに
よって入れである。１５分間インキュベートした後、溶
出とゆすぎのため一１転を２０゜ｒｐｍｉ（増大させた
。未反応抗体、血清および抗原−抗体複合物はポリスチ
レン系セファデックスビーズの微細なビーズを通して洗
浄され、試験管の底部に入り、そして一方！Ｓ識および
未標識の遊離抗原はビーズの孔隙中に拡散して減速し、
カラム上に留る。試験管の底部の溶出液のみが計数器に
入るように作られた、３０位置のうち３位置を１分間で
１囲に計数するシンチレーション計数益す全試料の計数
のため使用した。したがって、５０本の試験を順次計数
するには約１２分を必要とする。焼付は能力を有する小
型コンピューターを用いて、６０位置を通じてのサイク
ルが完了した後のデータを焼付ける（１０囲、１囲に３
位１１）。

有効の焼付けは抗血清のバッチについての投与−比容曲
線を与えた。何故なら、造営は５０位置のうちの１８位
ｔが標準液で満たされ、そして１２位置が未知検体で満
たされるからである。典型的には、４〜６＠の未知検体
を二反覆で試験した。

０、８〜２．４　ｎ／ｉ／ｍｌの範囲かつｔ４±α４　
ｎｇ／ｌｅｌの平均値のジゴキシンが非毒性の患者につ
いて見出された。毒性の患者についての平均値は！に、
３±ｔ　５　ｎ、９／−であり、範囲は２１〜８．７　
ｎｌ／寥であった。

典型的な４ＩＡｆｓ曲線を唯一の図面に示す。これから
判るように、本発明は十分な感度を与える。

実施例２４ この実施例は、放射免疫測定技術を用いる、血清中のコ
ルチゾールレベルの測定における本発明誘導体の使用を
例示する。

血清ｏ７２　ｍ中のコルチゾール抗血清ナ、ｐＢ８．６
の［１０５Ｍバルビタール緩衝液中の１１％メタノール
０．８１によりコルチゾールを非特異的結合蛋白質から
抽出しそして６０℃で５０分間加熱することによって予
備処理した後に測だした。実施例２５におけると同じ装
置および同じ齢出カラムを使用したが、齢出剤容重は’
Ｌ４Ｍに減らした。使用した他の試薬は、αｏｂＭす）
　ＩＪウムパルビタール緩衝液中の０．１チゼラチンよ
り成るゼラテ／バルビタール緩衝液；コルチゾール；０
．１％ゼラチンパルビタール緩衝液（１）Ｈ８，６，０
，０５Ｍ　’）中１：１ｔｏｏｏＫ希釈された羊（Ｓ−
１１４）のコルチゾール抗血清であった。コルゾールの
作業標準は１６ｎ、！Ｔ＋１５０μｌ　であった。抗血
清および試料容量は、こへでも２００μｌ　および５０
μｌであった。インキュベーション時間は５０分間に延
長しそして分離時間は１５分間に延長した。

２１−　（’ｌ’Ｍｈｉ）カルバミルコルチゾール−１
放射能標識の試料（ｔＳμＣ１／α５鹸エタノール）を
０１％ゼラチンバルピタール緩衝剤で希釈して１８〜２
　Ｑ、Ｄ　００　Ｃ１）ｍを与えた。この＊繊源は、さ
らに１：１０に希釈した際、すなわち測建東件下で約ｔ
　８００　ｃｐｍの際、ｓｏ：ｓｏの結合／遊離の比を
与えることが判った。

同１１１Ｋして、２１−（チラミン）カルバミルコルチ
ゾール−■１２５放射能砿＃Ｉｌｔ源は１分間８９５カ
ウントにおいて１：２の結合／遊離の比な与えることが
判った。

【図面の簡単な説明】

図面は典型的な標準曲線を示す。 代理人の氏名　　倉　内　基　弘 同　　　　　　　寅　　橋　　　　　　喚ジコ゛牛シン
＊１／ｓｌ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 ｉｌｌ　　構造式 ％式％ 〔式中、Ｒはそれぞれ炭素原子約１０＠以下を有する低
   級アルキル、！＃Ｉｆ１４式基、アリール、アルカリー
   ルおよびアラルキルより成る騨から選択される一員であ
   り、セしてＰは式 ％式％ より成る群から選択される基である〕 を有するインシアネート。 （２）　　に１が式 の基である特許請求の範ＦＩ５藁１項記棋のインシアネ
   ート。 ｉ３１　　Ｒ’が式 の基である特許請求の範ｔ！Ａ第１項記載のインシアネ
   ート。 ｔ４１　　ｆｔ’が式 ％式％） の基である特許請求の範囲第１項記載のインシアネート
   。 （５１ｔａ＋率位時間当りの崩壊対興娠ある化合復の一
   度の検量ｌＩＩ線を、該化合物もしくはその同族体と式 〔式中、Ｒはそれぞれ炭素原子約１０−以下な有する低
   級アルキル、＃環式基、アリール、アルカリール、およ
   びアラルキルより成る群から選択される一員である〕 より成る群から選択されるイソシアネートとの反応生成
   物のヒドロキシル誘導体の放射性沃素化誘導体を使用す
   ることによって作成し、 （ｂｌ臨床試料中の興味ある化合物の単位時間当りの崩
   壊を、該試料を競合的結合条件Ｋかけることによって測
   定し、そして （ｅ）該検量曲線から、興味ある化合物の濃度を読み取
   る ことを特徴とする臨床試料中の興味ある化合物の競合的
   結合放射側足を行なう方法。