JPS5835155A - ヒトリムホブラストイドインターフェロンのｃ末端ペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規なしトリム本プラストイドインターフエＯ
ンのＣ末端ペプチド及びそＯＩＩ導体に関する。

本明細書Ｋかいて、ア；ノ酸、ペプチド、保護基、活性
基、その他に関し略号で表示する場合ＩＵＰＡＣ％ＩＵ
Ｂの規定或い嬬轟鋏分野に七ける慣用記号に従うものと
し、その例を次に挙げる。ま九アミノ酸表どに関し光学
異性体かあ）うる場合は、４１に明示しなければ１体を
示す％Ｏとする。

Ｓａｙ　：セリル Ｌ−酪：０イシン Ｔｈｒ　：スレオニン ｊ＃ｓ　：アスバ５４ン ０１絡：クルクミン ＧＪ酪：クルタニシ蒙 Ａｒｃ　：アルずニン Ｌｙｅ　：リジシ Ｔｙｒ　：チ０シシ ＯＢχＬ：ベンジルオ十シ基 Ｚ　：カルポベシリ中シ基 ａｓ　：　Ｎ−ヒト０＋シコハク酸イミド基Ｔｏｚ　：
　ｐ　−）ルエシスル木ニル基１３ｏｃ　：第３Ｒ″′
ｊト＋ジカルボニル基イシターフエ０シは、生体の細胞
がウィルス感染を受けた時に産生ずる抗ウイルス性糖蛋
白質乃至は蛋白質であり、その利用によればウィルス性
疾患の予防ｔたは治療が可使であるとされ、近年注目を
集めつつある。現在解明されているヒトのインターフェ
ロンは、β型イシターフェ０シ（Ｆｉｈｒｏ　ｂｌａｓ
ｔ　ｉｎｔａｒｆｇｒｏｎ　）、α型イン５１−　フＸ
Ｏシ（Ｌｅｕｃｏｃｙｔｅｓ　１ｎｔｅｒｆｅｒｅｓ　
、　Ｌｙｗｎｐｈｏ　ｂＬａｚｔｏ讃１ｎｔｅｒｆｅｒ
ｏｎ　）及びγ型イシターフエロン（１１ＩＵＩＬｕｎ
ｔｉｒｓｔｔｒｆａｒｏｎ　）に分類される。しかしな
がらこれらのインターフェロンを単一な糖蛋白質乃至は
蛋白質にまで精製する技術は未だ確立されていないのが
現状である。

本発明者らはヒトのα型インダーフエ０シに対して特異
的に反応する抗体を利用すれば、抗原−抗体反応によっ
てヒトα型インターフェロンを精製出来ると考え、この
着想から感度よくヒトα型インターフェロンを選択し、
該インターフェロンに対して特異的反応性を示す抗体を
得るぺ〈鋭意研究を進めてきた。その過程において、ヒ
トα型インターフェロンの１種であるしトリム本づ５ス
トイドインターフエ０シのＣ末端ペプチド鎖を有するあ
る種のべづチドを合成し、これをハづテンとして抗原を
合成した所、該抗原からヒトα型インターフェロンに対
し特異的反応性を有する所望の抗体が収得できることを
見い出した。本発明はこの新しい知見に基づき完成され
たものである。

即ち本発明は、一般式　　□ Ｒ−ＧＺｕ−５ａｙ−Ｌａｕ−Ａｒｇ−５ａｙ−Ｌｙｅ
　−ＧＺｕ　　　（１）〔式中Ｒは水素〜原子、Ｈ−Ｔ
ｋｒ　−Ａｓｓ−Ｌａｕ−ＧＺｕ基、ｎ−５ａｙｎ−５
ａｙ−Ｌａｕ−５ａｙ−Ｔｋｒ−Ａｚｎ−Ｌａ基、又は
Ｈ−Ｔｙｒ−５ａｙ−Ｌｌに一５ａｙ−Ｔｈｒ−ＡＪＰ
ｔｓ−Ｌａｕ　−ＧＺｕ基を示す。〕 で表わされるヒトリムホづ５ストイドイシターフエＯン
のＣ末端ぺづチド及びそＯ誘導体に係る。

本発明の上記一般式（１）で表わされるぺづチドは従来
合成され九例はない０これは入手容易な市販のアミノ酸
を利用して、簡単な操作で容易に合成できることは勿論
のこと、特定のアミノ酸配列を有しており、認識部位が
明−確々一定の抗原を大量に製造できる。しかも上記べ
づチドをハプテシとして得られる抗原からは、天然のａ
型イシターフエＯンを抗原とする場合に比し、大量にし
かも常に安定して、ヒトα型インターフェロンに対し特
異性の高い抗体を得ることができる。従って該抗体はこ
れを例えばアフイニテイーク０マトク５フィー用担体と
結合させて誼り０マトク５フに利用してヒトα型インタ
ーフェロンの精製に利用できる。

本発明の上記一般式（１）で表わされるペプチドは、ヒ
トリムホブ５ストイドイシターフエ０ンのＣ末端ぺづ予
ド鎖に相当するべづチド又はそＯＩＩ導体である。これ
は通常のペプチド合成法、具体的には、「ザ　ペプチド
（Ｔｈｅ　ｐｇｐｔｉｔＬｇｚ　）　Ｊ第１巻（１９６
６年）　（Ｓｃｈｒ７ｚｄｇｒ　ｇｓｄ　Ｌｕｈｋｇ著
、　Ａｃａｄｔｗｘｉｅｐｒｅｓｓ　、　Ｎｅｗ　Ｙｏ
ｒｈ　、　Ｕ、　Ｓ、　Ａ、　）あるいは「ぺづチド合
成」〔東屋ら著、丸善株式会社（１９７５年）〕に記載
される如き方法に従い、たとえばアジド法、り０ライド
法、酸無水物法、混酸無水物法、ＤＣＣ法、活性エステ
ル法（Ｐ−二ト０フェニルエステル法、Ｎ−七ド０＋シ
コ八り酸イエドエステル法、シアノメチルエステル法郷
）、ウッドワード試薬Ｋｔ射いる方法、カルボシイ！タ
リール法、酸化還元法、Ｉ）ＣＣ／アダイテイプ（ＨＯ
ＮＥ％ＨＯＢｔ。

Ｈ２Ｓｘ）法などによシ製造できる。上記方法にお一般
のポリペプチドの合成法に従い、例えば末端アミノ酸に
順次１個づつアミノ酸を縮合させる所謂ステップクイズ
法によ〕、又は数個のフ５クメシト忙分けてカッブリ、
７ジさせていく方法により製造される。よシ詳細には上
記ペプチドは、その結合の任意の位置で２分される２種
のフうクメントの一方に相当する反応性カルボ牛シル基
を有する原料と、他方の７５グメシトに相当する反応性
アミノ基を有する原料とを、べづチド合成の常套手段で
縮合させ、生成する縮合物が保護基を有する場合、その
保護基を常套手段で脱離させることによ）製造し得る。

上記本発明ぺづチドの合成反応工程でり！；シは通常保
護しておくのが望ましい場合が多い。また上記反応の最
終工程では、通常ペプチドの構成アミノ酸残基の少なく
とも一つが保護された保護べづチドからすべての保護基
を脱離する。更に上記合成反応工程では、反応に関与す
べきでない官能基は、通常の保護基によ〕保護され、反
応終了後肢保護基は脱離される。また反応に関与する官
能基は、通常活性化される。之等各反応方法は一公知で
あり、それに用いられる試薬等も公知のものから適宜選
択し得る。

アミノ基の保験基としては、例えばカルボベシリ士シ、
ｔａｒｔ−プチルオ中ジカルボニル％ｔａｒｔ　−アミ
ルオ中ジカルボニル、イソボルニルオ士ジカルボニル、
Ｐ−メト十シベ：Ｊ、；ルオ十ジカルボニル、２−り０
ルーベンジルオ中ジカルボニル、アタマ、１７チルオ＋
ジカルボニル、トリフルオロアセチル、フタリル、ホル
！ル、Ｏ−ニド０フエニルスルフエニル、ジフェニル本
スフイノチオイルなどが挙げられる。カルボ牛シル基の
保護基としては１例えばアル＋ルエステル（例メチル、
エチル、づ０ピル、ブチル、　ｔａｒｔ−ブチルなどの
アル中ルエステル）、ベンジルエステル、Ｐ−二トロベ
ンジルエステル、Ｐ−メト十ジベンジルエステル、Ｐ−
り０ルベシジルエステル、ベシズしドリルエステル、カ
ルボベシリ中ジヒドラジド、　ｔａｒｔ−プチルオ中ジ
カルボニルしドラシト、トリチルしドラシト等を形成し
得る基を例示できる。

アルｆニンのクアニジノ基保護基としては、例えばニド
０、トシル、Ｐ−メト＋シベシゼンスルホニル、カルボ
ベシリ＋シ、イソボルニルオ中ジカルボニル、アタマシ
チルオ中シカルボ；ル等が挙げられる。また、そのタア
ニジノ基社適当な酸例えばベシゼシスルホシ酸、トルエ
ンスル本シ酸、塩酸、硫酸などの塩の形で保護してもよ
い。

スレオニジ及びセリンの水酸基線、例えばエステル化ｔ
ｉはエーテル化によって保護することができるが必ずし
も保護する必要はない。このエステル化に適する基とし
ては、例えばアセチル等の低級アルカノイル、ベンゾイ
ル等の７０イル、ペンリイルオ士ジカルボニル、エチル
オ中ジカルボニル等の炭酸から誘導される基等が挙げら
れる。

またエーテル化に適する基としては、例えばベンジル、
ナト５ヒト０ピ５ニル、ｔａｒｔ−ブチル等である。

カルボ中シル基の活性化されたものとしては、例えば対
応する酸り０５イド、酸無水物又は混合酸無水物、アジ
ド、活性エステル（メチルアルクニル、エチルアルコー
ル、ベンジルアルコール、ベンタクＯＯフェノール、Ｐ
−ニトロフェノール、Ｎ−しド０＋シサクシシイエド、
Ｎ−しドロ中ジベンズトリアリール、Ｎ−しドロ中シ”
−５−ノルポルネジ−２，３−ジカルボ＋シイ三ド等と
のエステル）等が挙げられる。尚ペプチド結合形成反応
は、縮合剤例えばジシク０へ中ジルカルボジイミド、カ
ルボシイ″ｉタリール等のカルボシイミド試薬やテトラ
エチル上０ホスフイト等の存在下に実施し得る場合もあ
る。

上記一般式＋１）で表わされる本発明ぺづチドは、Ｒで
示される基の種類に応じて、よシ具体的には以下に示す
（Ｉ）〜痘の方法に従い製造される。

ＣＩ〕Ｒが水素原子を示す場合 譬 Ａ−Ｌｙｅ−Ｂ　　（ｚｌ ↓ 暑 Ｈ−Ｌｙｅ−ＧＬｕ　−ＯＨ（６） Ａ−５ａｙ−Ｂ　　　　（ｌｉ） ↓　ヵ Ａ−５−ｒ−Ｌｙｅ−ＧＬｕ−ＯＨ（７）↓ 曇 Ｈ−５ａｙ−Ｌｙｅ−ＧＬｕ−ＯＨ（８）↓ Ｈ−Ａｒｇ　−Ｓｕｒ　−Ｌｙｅ　−ＧＬｓｂ　−ＯＨ
（１１）↓　Ａ−５ａｙ−Ｌａｗ−Ｂ　　＄埠辛Ａ−５
ａｙ−Ｌａｗ−Ａｒｇ−５ａｙ−Ｌｙｅ　−ＧＪｓ　−
ＱＨ０１↓　　　　　　　。

Ｈ−５ａｙ−Ｌｇｓ　−Ａｒｇ−５ａｙ−Ｌｙｅ　−（
Ａｍ−ＯＨ０４−ＯＨ輌 ↓ Ｈ−Ｇｈｂ−５ａｙ−Ｌｔｓ−Ａｒｇ−５ａｙ−Ｌｙｅ
−ＧＬｕ−ＯＨｆｉｔ（ 尚上記ぺづチドｏ＃”　ａ下記によシ製造される。

Ａ−５ａｙ−Ｂ　　（６） ↓　　Ｈ−Ｌ−μ−Ｆ１４１ Ａ−５ａｙ−Ｌａｓ−Ｆ　　Ｇ１１ｌ ↓ Ａ−５ａｙ−Ｌａｗ−Ｂ　　・埠毫 （Ｉ［）　　ＲがＨ−Ｔｈｒ　−Ａｓｓ　−Ｌｇｍ　−
ＧＬｕ基を示す場合Ｈ−ＧＬルーＦ　輌 ↓　　Ａ−Ｌａｕ−Ｂ　　６＄１ Ａ−Ｌａｕ−ＧＬｎ−Ｆ　　＠ ↓ Ｈ−Ｌａｗ−ＧＺｓ−Ｆ　　Ｕ ↓　　Ａ−Ａ翔−Ｂ　＠ Ａ−Ａｓｓ−Ｌｔｕ−Ｇｉｎ−Ｆ　　ｇｌ↓ Ｈ−Ａｓｓ−Ｌａｗ−Ｇｉｎ−Ｆ　　ｆ１４↓　　Ａ−
Ｔｈｒ−Ｂ　　翰 Ａ−Ｔｋｒ−Ａｚｎ−Ｌａｇ−ＧＺｓ−Ｆ　　　＠↓ Ａ−Ｔｈｒ−Ａｓｓ−Ｌｇｕ−ＧＬｎ−Ｂ　　　（！Ｉ
−Ｇｌｕ−ＯＨ＠ Ａ−Ｔｋｒ−Ａｓｎ−Ｌａｗ−Ｇｉｎ−ＧＬｍ−５ａｙ
−Ｌａｕ−Ａｒｇ−５ａｒ−Ｌｙｅ−Ｇｈｂ−ＯＨ＠↓ Ｈ−Ｔｈｒ−Ａｓｈ−Ｌａｗ−Ｇｉｎ−ＧＬｔＬ−５ａ
ｙ−Ｌａｗ−Ａｒｇ−５ａｙ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−ＯＨｆ
Ｊ４１　ＲがＨ−Ｅａｒ−Ｌａｗ　−５ａｙ−Ｔｈｒ−
Ａｓｓ−Ｌａｗ　−ＧＬｎ基を示す場合 Ａ−Ｌａｗ−Ｂ　　９ｃ４ ↓　Ｈ−５ｅｒ−Ｆ　　いり Ａ−Ｌｇｕ−５ａｒ−Ｆ　　（３１ ↓ Ｈ−Ｌ−μｍ５ａｒ−Ｆ　　＠ ↓　Ａ−５ｅｔ−Ｂ　　（６１ Ａ−５ａｒ−Ｌｇｗ−５ａｒ−Ｆ　　＠４↓ Ａ−５ａｙ−Ｌａｗ−５ａｒ−Ｂ　　（ａｆ９Ｈ−Ｔｈ
ｒ　−Ａｓｓ−Ｌａｗ　−Ｇｉｎ　−ＧＬｕ　−↓　５
°′−”“−Ａｒｇ　−Ｓａｙ　−Ｌｙ″−Ｇｔ“蕃 −ＯＨ＠ Ａ−５ａｙ−Ｌａｓｈ−５ａｒ−Ｔｋｒ−ＡＪ＋ｓ−Ｌ
ａｗ−ＧＪｓ　−ＧＬｕ−５ａｒ−５ａｙ−Ｌｙｅ−Ｇ
Ｔｏ　−ＯＮ　（１？）ｅｓｔ−ｌ Ｈ−５ａｙ−Ｌａｗ−５ａｙ−Ｔｈｒ−Ａｓｈ−Ｌａｕ
−ＧＬｔＬ−ＧＬｕ−５ａｙ−Ｌｇｕ−Ａｒｇ−５ａｙ
−Ｌｙｅ−０１話−０Ｈ１４因　ＲがＨ−Ｔｙｒ−５ａ
ｙ−Ｌｍｕ−５ａｙ−Ｔｈｒ−Ａｚｎ　−ＬｇｗＬ−に
ＧＬｎ基を示す場合 Ａ−５ａｙ−Ｌｔｕ−５ａｙ−Ｆ　　＠４↓ Ｈ−５ａｙ−Ｌａｕ−５ａｙ　−７１１４↓　Ａ−Ｔｙ
ｒ−Ｂｆ Ａ−Ｔｙｒ−５ａｙ−Ｌａｗ−５ａｙ−Ｆ　　Ｇ１１ｌ
↓ Ａ−Ｔｙｒ−５ａｒ−Ｌａｗ−５ａｒ−Ｂ　　ＵＡ−Ｔ
ｙｒ−５ａｒ−Ｌｇｓ−５ａｙ−Ｔｈｒ−Ａｓｈ　−Ｌ
ａｗ　−Ｂ− ↓ Ｈ−Ｔｙｒ−５ａｙ−Ｌａｗ−５ａｒ−Ｔｈｒ−Ａｓ％
−ＬｇｕＧ１％−ＱＨ＠！４ 〔ヨ記（Ｉ）〜（５）において、Ａはアミノ基の保護基
、Ｂは水酸基又はカルボ中シル基の活性基、Ｃはアルイ
ニンのクアニジノ基の保護基、Ｄはリジンのｅ−アミノ
基の保護基、Ｅはクルタ″−シ酸の１−カルボ中シル基
の保護基及びＦはカルボ中シル基の保護基を示す。〕 上記においてＡの好ましいものとしては、Ｂｏｃ。

ＺｌＰ−メト＋シベシジルオ中ジカルボニル基等を、Ｂ
の好ましいものとしては、Ｎ−しドロ士シサクシシイミ
ド、Ｐ−ニド０フエニルエステル尋の活性エステル残基
、イソプチルオ士ジカルボニル基等の混合酸無水物残基
、アジド等を、Ｃの好ましいものとしては、ニド０、ト
シル等を、Ｄの好ましいものとしては、トシル等を、Ｅ
の好ましいものとしては、ベシジルオ中シ醇を、またＦ
の好ましいものとしてはアル牛ルエステル残基、ｔａｒ
ｔ−ブト中ジカルボニルしドラ！；ド等を夫々挙げるこ
とができる。

上記方法〔Ｉ〕においてアミノ酸（２）とアミノ酸（３
）との反応は、溶媒の存在下に行なうことができる。

溶媒としては、べづチド縮合反応に使用し得ることが知
られている各種のもの例えば無水または含水のジメチル
ホルムアニド、ジメ予ルスルホ＋シト、ピリジシ、り０
０本ルム、ジオ中サシ、ジク０ルメタシ、テトラしド０
フ５シ、酢酸エチル、Ｎ−メチルビＯリドン、へ士すメ
チルリシ酸トリアミド或いはこれらの混合溶媒等を用い
得る。アミノ酸（３）とアミノ酸（２）との使用割合と
しては、特に限定されず広い範囲内で適宜選択すること
ができるが、通常前者に対して後者を等量〜５倍量、好
ましくは等量〜１．５倍量使用するのがよい。反応温度
はべづチド結合形成反応に使用され得ることが知られて
いる範囲、通常約−４０〜約６０℃、好ましくは約−２
０〜約４０℃の範囲から適宜選択される。反応時間は一
般に数分〜３０時間程度である。

方法〔Ｉ〕におけるぺづチド（５）とアミノ酸（６）と
の反応、べづチド（８）とアミノ酸（９）との反応、べ
づチド（１１）とアミノ酸０乃との反応、べづチド・萄
とア三ノ酸岐との反応及びアミノ酸（６）とアミノ酸−
との反応は、上記アミノ酸（２）とアミノ酸（３）との
反応と同様にして行なうことができる。また方法（Ｈ）
におけるアミノ酸輌とアミノ酸Ｉｎとの反応、ペプチド
回とアミノ酸（財）との反応、ぺづチド輛とアミノ酸（
至）との反応及びぺづチド（財）とべづ予ド四との反応
、方法［］Ｋおけるアミノ酸つ鴫とアミノ酸口０との反
応、ペプチド−とアミノ酸（６）との反応及びべづチド
瞥とペプチド（至）との反応、並びに方法［１）におけ
るべづチド翰とアミノ酸−との反応及びぺづチド咄とべ
づチドーとの反応も亦上記と同様にして行ない得る。

上記各反応により得られるべづチド（４）、（７）、叫
、０３、（Ｉ尋、−１（２）、弼、四、（財）、図、−
及び！４３の有する保護基Ａの離脱反応は、常法により
行なわれる。該方法としては、例えげ還元的方法（例バ
５ジウム、バ５ジウム黒等０触媒を用いる水素添加、液
体アンでニア中金属ナトリウムによる還元）、アシドリ
シス（例トリフルナ０酢酸、弗化水素、メタシスルホシ
酸、臭化水素酸等の強酸によるアシドリシス）等が挙げ
られる。

上記触媒を用いる水素添加は１例えば水素圧ｌ気圧、０
〜４０℃にて行ない得る。触媒の使用量は、通常１００
ｓｖ−１ｆ１１度でよく、一般に１〜４８時間程度で反
応は終了する。また上記アシドリシスは、無溶媒下、通
常０〜３０’Ｃｍ度好ましくは０〜２０℃にて約１５分
〜１時間程度を要して行ない得る＠酸の使用量は原料化
合物に対し通常５〜ｌＯ倍量程度とするのがよい。更に
上記液体アンでニア中金属ナトリウムによる還元は、反
応溶液がパーマネシトづルーに５０秒〜ｌｏ分間程度呈
色しているような量の金属ナトリウムを用い、通常−４
０〜−７０℃程度にて行ない得る。

ｔたべづチドーの保護基ＣＣ’）及びべづチド幀、四、
（財）及び−の保護基（Ｄ）、べづチド（４）及び（６
）の保護基（Ｅ）並びにぺづチドー、−１（転）及び鵠
の保護基ＣＦ＞は、夫々上記還元的方法によって、同様
に脱保護することができる。

上記方法（Ｉ）乃至（５）に利用されるアミノ酸（！）
。

（３）、（６）、（９）、鋼、呻、翰、□□□、翰、卸
、−及び瞥は、公知の市販品でよく、またぺづチド０２
、ガ、瞥及び（６）は公知の市販品又は混合酸無水物法
、アジド化法等により得られるものを利用できる。

上記混合酸無水物法は、適当な溶媒中塩基性化合物の存
在下、アル中ルハ０カルボン醗、例えばり００蟻酸メチ
ル、づ０℃蟻酸メチル、りｏｏ蟻酸エチル、プＯＥ蟻酸
エチル、りｏｏ蟻酸イソづチル等を用いて行なわれる。

塩基性化合物としては、例えばトリエチルア三シ、トリ
メチルアミシ、ピリジン、ジメチルアニリン、Ｎ−メチ
ルアルコール、１，５−ジアザピシクｏ　（４，３，０
）ノネン−５（ＤＢＮ）、１．５−ジアザピシク［）　
Ｃ５，４，０］ウシヂセシー５ＣＤＢＵ）、！、４−じ
アザピシクＯ（２，２，２）オクタシ（ＤＡＢＣＯ）等
の有機塩基や炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素
カリウム、炭酸水素ナトリウム等の無機塩基を使用でき
る。また溶媒としては、混合酸無水物法に慣用の各種溶
媒、具体的には塩化メチレン、クロ０ホルム・ジグ００
エタシ等のハ０ゲシ化畿化水素類、ベシゼシ、トルエン
、中シレシ等の芳香族炭化水素類、ジエチルエーテル、
テトラしドロワ５シ、じメト＋シエタン等のエーテル類
、酢酸メチル、酢酸エチル等のエステル＠、　Ｎ、Ｎ−
ジメチルホルムアニド、ジメチルスルホヤシト、へ＋サ
メチルリン酸トリアミド等の非プロトシ性極性溶媒など
を使用できる。反応は通常−２０〜１００℃好ましくｔ
ｉ−２０〜５０℃において行なわれ、反応時間は一般に
５分〜ｌＯ時間好ましくは５分〜２時間である。

またアジド化法は、まず活性化されたカルボ＋シル基、
例えばメチルアルコール、エチルアルコール、ペシジル
アルコール等のアルコールで活性化されたカルボ＋シル
基にしドラジシ水和物を適当な溶媒中にて反応させるこ
とによシ行なわれる。

溶媒としては例えげジオ十サン、ジメチルホルムアミド
、ジメチルスルホヤシト又はこれらの混合溶媒等を使用
できる。ヒドラジシ水和物の使用量は、活性化されたカ
ルボ＋シル基に対して通常５〜２０倍℃ル量好ましくは
５〜１０倍モル量とするのがよい。反応は通常５０℃以
下、好ましくは一２０〜３０℃にて行なわれる。斯くし
て末端アミノ酸のカルボ＋シル基部分がヒドラジルで置
換された化合物（しドラ！；ン誘導体）を製造し得る。

末端アミノ酸のカルボ＋シル基部分がアジドで置換され
た化合物は、酸の存在下、適当な溶媒中、上記で得られ
るしドラジン銹導体と亜硝酸化合物を反応させることに
より製造される。酸としては通常塩酸が用いられる。溶
媒としては例えばジオ十サン、ジメチルホルムアミド、
ジメチルスルホヤシト又はこれらの混合溶媒等を使用で
きる。また亜硝酸化合物としては例えば亜硝酸ナトリウ
ム、亜硝酸イソアミル、塩化ニド０シル等を使用するこ
とができる。斯かる亜硝酸化合物は、しドラジシ誘導体
に対して通常等上ル〜２倍ｔル量好ましくは等℃ルー１
．５倍モル量用いられる。反応は通常−２０−０℃、好
ましくは−２０〜−１０℃にて行なわれ、一般に５〜１
０分程度で反応は終了する。

前記方法（ＩＩＩ　Ｋおけるペプチド−は、ぺづチド０
呻の保護基（Ａ）及び（Ｅ）を脱離するととによ〕、ま
た前記方法ｌにおけるべづチドーは、べづチド四の保護
基（Ａ）を脱離することによシ夫々収得できる。之等の
脱保護基反応は、上述した方法に従えばよい。

上記のようにして製造された一般式（１）のべづチドは
反応混合物からペプチドの分離手段例えば抽出、分配、
力５ムク０マトタ５フィー等によシ単離精製される。

かくして本発明の一般式（１）で表わされる合成ペプチ
ド即ちしトリシホプラストイドインターフエ０シのＣ末
端ペプチド及びその誘導体を得る。

かくして得られる合成ペプチドは、これＫ１１２５、Ｉ
　等の放射性ヨードを導入するととＫよ）、ラジオイム
　アッセイ法ＣＲＩ、４法）において用いられる標識抗
原の製造用原料である標識ペプチドとして利用できる。

上記放射性ヨードの導入は、通常のヨード化法、例えば
り０ラミシＴを用いる酸化的３−ド化法ＣＦＭ、　Ｈｕ
＊ｔｇｒ　ａｒＬｄ　ｐ、Ｃ６Ｇｒｅｅｎｗｏｏｄ　　
；　　Ｎａｔｕｒｅ　　、　　ｌ　９４　　、　　ｐ４
９５　　（重　９６２　）、Ｂｉａｃｈｍ＊、　Ｊ、　
８９　、　Ｐ　１１４　（１９６３）　参照）等によシ
行なわれる。具体的には例えば適当な溶媒例えば０．２
Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ＝　７．４　）等の溶媒中、り０
ラミンＴの存在下室温付近にて１０−！Ｓｏ秒程度で行
なわれる。べづチド、放射性ヨード及びり０５ΣンＴの
使用割合は、例えばチロシン当り放射性ヨード１個を導
入する場合には、ペプチド中に含まれるチロ５３分子１
ナノｔルに対して放射性ヨードを１ミリ士ユーリー程度
、り０ラミンＴを１０〜鳳００ナノモル程度用いるのが
よく、またチ０シシ当）放射性ヨード２個を導入する場
合には、ぺづチド中に含まれるチロ５３分子１ナノモル
に対して放射性ヨードを２ミリ士ユーリー程度、り０５
ミシＴを１０〜１００ナノモル程度用いるのがよい。斯
くして製造される放射性ヨードによ）標識化されたペプ
チドは、通常の分離手段例えば抽出、分配、力５ムク０
マドクラフィー、透析等によシ単離精製される。このよ
うにして得られるべづチドは必要ならば凍結乾燥させて
保存しておくこともできる。

また上記一般式（１）で表わされる本発明の合成べづ予
ドは、ヒトα型イシターフエ０シ抗原の製造用へ′づテ
ンとして利用できる。

以下上記しトａｌｌイシターフエ０シ抗原の製造方法に
つき詳述する。

ヒトｔｇｌｌｉイシターフエ０ン抗原は、本発明のペプ
チドの少なくとも１種を八づテンとし、これをハプテン
−担体結合試薬の存在下に、適当な担体と反応させるこ
とによ）製造される。

上記方法においてハプテンに結合される担体として社、
通常抗原の作成Ｋｌ！Ｄ慣用される高分子の天然着しく
け合成蛋白質を広く使用できる・咳担体としては、例え
ば馬血清アルジミン、牛血清アルづ！ニジ、ウサ甲血湾
アルづミン、人血清アルジミン、しツジ血清アルプ！シ
臀の動物の血清アル″ｊ！ン類、馬血清グロブリン、牛
血清グ０づリン、ウサｆ血清グ０プリシ、人血清り０づ
リン、ヒツジ血清夕０づリン尋の動物の血清ジ０づリン
類、馬チ０り０づリン、牛チ０りＯプリン、ウサｆチ０
り０プリシ、人チロジ０づリン、ヒツジチ０り０プリシ
等の動物のチ０り０づリン類、馬へモジ０プリシ、牛へ
モジ０プリシ、ウサ甲へｔり０プリン、人へ七ＩｊＯプ
リシ、ヒツジへＶニゲ０づリン等の動物のへＶ：り０プ
リシ類、動物のへｔシアニン類、回虫よシ抽出された蛋
白質（アスカ−リス抽出物、特開昭５６−１６４１４号
公報、Ｊ。

ハＬ”ｆ＆、、　１１１　、２６０〜２６８（１９’ｌ
）、Ｊ。

Ｉ講寓ｔ＆１＆−，１２２，３０２〜３０８（１９７９
’）、Ｊ。

Ｉｙａｍｕｎ、、　９８　、８９３〜９００（１９６７
）及びＡｓ。

Ｊ、ｐｈｙｚｉａｌ、、１９９．５７５〜５７８（１９
６０）に記載されえものまたはこれらを更に精製したも
の）％ポリリジシ、ポリグルタエン酸、リジシークルタ
エシ酸共重合体、リジシ又紘オルニチシを含む共重合体
等を挙げることができる。

ハづテシー担体結合試薬としては、通常抗原の作成に当
シ慣用されているものを広く使用できる。

具体的にはアミノ基とアミノ基とを架橋結合させる、例
えばクリオ士す−ル、マ０シジアルデヒド、クルタール
アルデヒド、スクシシアルデヒド、アジボアルデしド等
の脂肪族ジアルダしド類、チオール基とチオール基とを
架橋結合させる、例えばｘ、ｐｆ−ｏ−フエニレ：、Ｉ
シマレイミド、Ｎ、Ｎ’−富一フエニレ：Ｊシマレイミ
ド勢のシマレイミド化合物、アミノ基とチオール基とを
架橋結合させる、例えばメタマレイ！ドベ：、Ｉ％Ｊイ
ル−Ｎ−しドロ中シスクシンイ！ドエステル、４−（マ
レイミドメチル）−シフ０へ中サンー１−カルボ＋シル
−ｙ−しドロ士シスクシジイミドエステル等のマレイミ
ドカルボ＋シル−Ｎ−しドロ＋シスクシンイミドエステ
ル化合物、アミノ基とカルボ＋シル基とをアミド結合さ
せる通常のべづチド結合形成反応に用いられる試薬、例
えばＮ、Ｎ−ジシク０へ士ジルカルボシイ！ド、Ｎ−エ
チル−’　−”；　）予ルア三ノ力ルポジイニド、ｌ−
１予ルー３−ジイソづ０ピルアミノカルボジイミド、！
−シク０へ中シル−３−（２−モルホリニルー４−エチ
ル）カルボジイミド等のカルボジイミド類等の脱水縮合
剤を挙げることができる。また上記ハプテシー担体結合
試薬としては％Ｐ−シアリニウムフェニル酢酸等のシア
リニウムアリールカルポジ酸類と通常のべづチド結合形
成反応試薬、例えば上記脱水縮合剤とを組み合わせたも
のも使用可能である・上記抗原の製造反応は１例えば水
溶液もしくはｐＨ７〜ｌＯの通常の緩衝液中好ましくは
ｐＨ８〜９の緩衝液中で、０〜４０℃好ましく社室温付
近で行なわれる。該反応は通常約１〜２４時間好ましく
は３〜５時間で完結する。上記において用いられる代表
的緩衝液としては、次のものを例示できる。

０．２　Ｎ水酸化ナトリウム−０，２Ｍホウ酸−０，２
Ｍ塩化カリウム緩衝液、 ０．２Ｍ炭酸ナトリウム−０，２Ｍホウ酸−０，２Ｍ塩
化カリウム緩衝液、 ０．０５−Ｍ四ホウ酸ナトリウム−０，２Ｍホウ酸−０
、０５Ｍ塩化ナトリウム緩衝液、 ０．１Ｍリン酸二水素カリウム−０，０５Ｍ四ホウ酸ナ
トリウム緩衝液 上記においてハプテン、ハプテン−担体結合試薬及び担
体の使用割合は、適宜に決定できるが、通常ハプテンに
対して担体な２〜６倍重量好ましくＵ３〜５倍重量、及
び八づテン−担体結合試薬を５〜１０倍ｔル程度用いる
のがよい。上記反応によシバづテン−担体結合試薬を仲
介させて担体とハづテシとが結合したべづチドー担体複
合体から成るヒトα型イシターフエ０シ抗原が収得され
る。

反応終了後得られる抗原は常法に従い、例えば透析法、
ゲル濾過法、分別沈殿法等により容易に単離精製できる
。また該抗原は通常の凍結乾燥法により保存できる。

かくして本発明のしトａ’ｌｌｌイシターフエロシのＣ
末端べづチド及びその誘導体の少なくとも１種と、担体
との複合体から成るヒトα型イシターフエロシ抗原を得
る。該抗原性、通常蛋白質ｌｖニルに対しべづチドが平
均５〜２０モル結合したものであシ、いずれも引き続き
再現性よく、しトα型インターフエ０シに対する特異性
の高い抗体の作成を可能とするものである。特に上記蛋
白質に対するペプチドの結合モル比がｌ：８〜１５のも
のは、特異性が一層高く高力価、高感度の抗体を作成し
得るものであり好ましい。

上記で得られる抗原による抗１の作成は、以下の如くし
て行なわれる。即ち上記抗原を哺乳動物に投与し、生体
内に産生される抗体を採取することによシ行なわれる。

抗体の製造に供せられる哺乳動物としては、特に制限は
ないが、通常兎や七ル七ットを用いるのが望ましい。抗
体の産生に当っては、上記により得られる抗原の所定量
を生理食塩水で適当濃度に希釈し、フロイシドの補助液
（Ｃｏｗｇｐｌａｔｇ　Ｆｒｇｕｎｔｌ’５Ａｄｊｕｖ
ａ蕗ｔ　）と混合して懸濁液を調整し、之を哺乳動物体
に投与すればよい。例えば兎に上記懸濁液を皮肉注射（
抗原の量として０．５〜５ＷＩＩ／回）し、以後２週間
毎に２〜１０ケ月好ましくは４〜６ケ月間投与し免疫化
させればよい。抗体の採取は、上記懸濁液の最終投与後
抗体が多量産出される時期、通常上記最終投与１〜２週
間経過後、免疫化された動物から採血し、之を遠心分離
後血清を分離採取することによ）行なわれる。上記によ
れば、用いる抗原Ｏ特殊性に基づいて、ヒトα型インタ
ーフエ０シに対して優れた特異性を有し、高力価、高感
度の抗体を収得できる。

かくして得られるヒトα蓋イシターフエ０シ抗体は、例
えばこれをＥＸＡ法に利用してヒトα型イシターフエ０
．７の定量を高精度をもって可能と−する。また該抗体
は、とれを酵素または螢光物質で標識することによって
エンザイムイムノアフｔイ（ＥＸＡ）法、フＯ−レツセ
シスイムノアツセイ（ＦＩＡ）法等に使用できる。さら
に該抗体は公知の不溶化させる物質と反応させて不溶化
抗体とすることもできる。

以下本発明を更に詳しく説明するため、本発明ペプチド
、これを利用した抗原及び該抗原からの抗体の製造例を
挙げるが、本発明はこれに限定されるものではない。

尚各製造例におけるＲｆ＠Ｆｌシリカゲル上の薄層り０
マドタラフイーにて下記混合溶媒を用いて測定したもの
である０ ｘｔｌ・・・ｌ−ブタノール−酢酸−水（４：１：５）
ｘｔＭ・・・１−ブタツール−ピリジシー酢酸−水（１
５目０：３：１２） 〈べづ予ドの合成〉 製造例　１ １、　　Ｚ−Ｌｙｅ（Ｔｏｐ）　−ＧＬｕ（ＯＢｚＬ）
−０１ｈＬ　（Ｄ製造Ｈ−ＧＬｕ（ＯＢｚＬ　）−０Ｂ
ｚＬ　−７’６＃　４．　ｌ　ｇ　ｙをジメチルホルム
アヱドＣＤＭＰ）３０Ｗｄに溶解し、トリエチルアミン
（ＴＥＡ）１．２１Ｗｄを加え、攪拌下冷却する。一方
Ｚ−Ｌｙｅ（Ｔｏｅ）−ＯＨ４，３５ｆをテトラしドロ
フラジＣＴＨＦ）３０−に溶解し、Ｎ−メチル上す本リ
シ０．９８−を加え一１５℃に冷却し、攪拌下り００蟻
酸イソづチル１．２７１１１を滴下する。

滴下３０秒後肢液に上記で調製した冷ＤＭＦ溶液を加え
、この混合液を０℃下に５分間、次いで４０℃の水浴中
で１分間、更に１５℃下に３０分間攪拌する。反応液よ
、ｊｊ）ＴＨＦ及びＤＭＦを減圧留去し、残渣を酢酸エ
チルで抽出する。抽出液をＩＮクエン酸、飽和食塩水、
飽和炭酸水素ナトリウム水溶液及び飽和食塩水で順次洗
浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、酢酸エチルを留去
する。

得られる油状残渣にエチルエーテルを加えて固化させ、
これを酢酸エチル−エーテルよ〕再沈殿させて目的物５
．３７Ｆを得る。

Ｒｆ”＝０．９６ Ｒｆ＝０．９０ 元素分析値（Ｃ４ｏ４５Ｎ３０９Ｓとして）計算値（＊
）　　Ｃ６４，５９Ｈ６，１０Ｈ５，６５実測値（１）
　　（’６４．１３　　Ｈ５，’９５　　ｆｆ５．６３
２（ａ）、Ｈ−Ｌｙｅ（Ｔｏｓ）−ＧＬｕ−ＯＨの製造
Ｚ−Ｌｙｅ（Ｔａｇ）−ＧＬｗ（ＯＢｚＬ）−０ＢｚＬ
　５．２１　ｔをメタノール８０ｗｔと１０チ酢酸２０
１４との混液に溶解し、バラ、；ラムブラック少量を加
え１２　ガス導入下１夜攪拌する。反応終了後触媒を吸
引濾過により炉去し、Ｖ液を減圧蒸留し、残渣を水に注
ぎ凍結乾燥して目的物を得る。

Ｒｆ　篇０．２９ Ｒｆ”＝０．５２ ２（Ａ）、　　Ｚ−５ａｔ−Ｌｙｅ（Ｔａｐ）　−〇Ｌ
ｕ−０Ｈ（Ｄ製造Ｚ−５ａｔ−！’ＩＩＩ）Ｉｌ１２２
−１３　ｆをＤＭＦ２０−に溶解し、６Ｎ塩酸／ジオ十
サン４．２０１１４を加え、−１５℃に冷却し、攪拌下
皿硝酸イソアミル１．１３−をえる。反応液がヒドラジ
ドテスト隘性になった後ＴＥＡ３．５３−の冷ＤＨ！　
１．２０ｍ溶液を少量宛滴下し中和させる・このアジド
を含む溶液を、上記（α）で得たＨ−Ｌｙｅ　（１０１
）　−Ｇｈｂ　−ＯＨ及びＴＥＡ　１．９６ｄＯ冷ＤＭ
Ｆ溶液に加え、混合液を一１Ｏ〜−１５℃下２時間、次
いで４℃下２０時間攪拌する。

ＤＭＦを減圧留去し、残渣を酢酸エチルで抽出し、酢酸
エチル層をＩＮクエン酸及び飽和食塩水で洗浄し、無水
硫酸ナトリウムで乾燥後、酢酸エチルを減圧留去する。

得られる残渣にエチルエーテルを加えて固化させ、酢酸
エチル−エーテルより再沈殿させて、目的物４．１４ｆ
を得る。

Ｒｆ−０，６４ Ｒｆ＝０．６５ 元素分析値（Ｃ２９Ｉ３，７ｖ４０１．５−５４１２０
として）計算値（＊）　　Ｃ５２，８０Ｈ５，９６Ｈ８
，４９実測値Ｃ％’）　　（：’５２．８７　　Ｈ５，
６９Ｈ８，４６’）（ａ）、　　Ｈ−！５ｒ−Ｌｙｅ（
Ｔｏｐ）　−（Ａｍ−ＯＨ（）製造Ｚ−５ｇｒ−４ｙ＃
（７’ａｚ）　−ＧＺｍ　−ＯＨ４，０’＄　ｆをメタ
ノール６０−と１０チ酢酸４Ｑｓｌとの混液に溶解し、
パラジウムブラック少量を加え１２ガス導入下１夜攪拌
する。反応終了後触媒を吸引濾過により炉去し、Ｆ液を
減圧蒸留し、残渣を水に注ぎ凍結乾燥して目的物を得る
。

ＲｆＩ冨０．２３ Ｒｆ　軍０．４８ ３（ｂ）、　　Ｚ−、ｌｒｇ（ＮＯ２）−５ａｙ−Ｌｙ
ｅ（Ｔｏｐ）−ＧＬＫ−ＯＨの製造 上記（−）で得九Ｈ−５ａｙ−Ｌｙｅ（Ｔｏｅ）　−Ｇ
Ｌｖｂ−ＯＨをＤＭＦ　２０１１ｊに溶解し、ＴＥＡ　
１．７４ｍを加え、攪拌下冷却する。一方Ｚ−Ａｒｇ（
ＮＯ２）−ＯＫ　２．４１　ｆをＴＨＩ’　２０ＩＬ／
に溶解し、Ｎ−メチルモルホリシ０、７０　ｉｄを加え
一１５℃に冷却し、攪拌下り００蟻酸イソブチル０．８
６−を滴下する。滴下５０秒後骸液に上記で調製した冷
ＤＭＦ溶液を加え、この混合液を０℃下に５分間、次い
で４０℃の水浴中で菖分間、更に１５℃下に３０分間攪
拌する。

反応液よりＴＨＦ及びＤＭＩ”を減圧留去し、残渣を２
９ｇ酢酸飽和づタノールで抽出する。抽出液をルーづタ
ノール飽和の２−酢酸で５回洗浄し、減圧蒸留し、水に
置き変えて酢酸を留去し、更にメタノールに置き変えて
水を留去する。得られる油状残渣にエチルエーテルを加
えて固化させ、とれ゛を酢酸エチル−メタノールよ〕再
沈殿させて目的物４．０９ｆを得る。

Ｒｆ　　諺０．４２ Ｒｆ”＝０．６５ 元素分析値（Ｃ３５ＩＩ、９Ｎ９０□４Ｓ　−５４Ｈ２
０トＬ　−７”　）計算値（％）　　０４８．８３に５
．８５　　ｆｆ１４．６４実測値（−）　　Ｃ４９，２
２Ｈ６，０５＃１４．１１４、　　Ｚ−５ａｙ−Ｌａｗ
−ＮＨＮＨ２の製造Ｚ−５ｅｔ−ＮＩＩＮＨ２２−５４
ｆ　ｔ　Ｊ）　Ｍ　７２０　ｍに溶解し、６Ｎ塩酸／ジ
オ十サシ５．００−を加え、−１５℃に冷却し、攪拌下
皿硝酸イソアミル１．３４ｍを加える。反応液がしドラ
、；トチスト陰性になった後ＴＥＡ４．２０１１１Ｋ）
冷１）ＭＰ　１．４Ｑｗｌ溶液１少量宛滴下し中和させ
る。このアジドを含む溶液を、Ｈ−Ｌｍ　ｕ　−□Ｃ’
２Ｈ−ｓ　・ＨＣｔｌ　−９６ｆ及びＴＥＡ　１．４０
ｄの冷ＤＩ！溶液１５ｍに加え、混合液を一菫〇〜−１
５℃下２時間、次いで４℃下２０時間攪拌する。ＤＭＦ
を減圧留去し、残渣を酢酸エチルで抽出し、酢酸エチル
層をＩＮクエン酸、飽和食塩水％降和炭酸水素ナトリウ
ム水溶液及び飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸ナトリ
ウムで乾燥後、酢酸エチルを減圧留去する。得られる残
渣に石油エーテルを加えデカシテーシ３シにょシ洗浄す
る。

油状や質をデシケータ−内で減圧乾燥し、乾燥物をメタ
ノール５０Ｗｌｌに溶かし、水冷下１００チヒドラジン
ｌ水和物２．５０１１４を加え、室温下２０時間放置し
、メタノールを減圧留去する。残渣にエチルエーテルを
加えて固化させ、これをダシケータ−内で乾燥後、水洗
濾過して過剰のしドラジンｌ水和物を除去し、メタノー
ル−酢酸エチルから再沈殿させて、目的物２．６８ｆを
得る。

Ｒｆ”＝０．７３ Ｒｆ−０，７６ 元素分析値（Ｃ工、１２６Ｎ、へとして）計算値（９Ｇ
）　　Ｃ５５，７３Ｈ７，１５Ｎ１５．２９実測値（チ
）　　Ｃ５５，７２Ｈ７，ＯＩ　　Ｎ１５．４２５（ａ
）、　　Ｈ−Ａｇ−５ａｙ−Ｌｙｅ（Ｔｏｐ）　−Ｇｌ
ｓ−ＯＨの製造Ｚ−Ａｒｃ（ＮＯ２）−５ａｙ−Ｌｙｅ
（Ｔａｘ）−ＧＬｕ−ＯＨ２，０Ｏｆをメタノール３０
ゴと５０％酢酸′３０１との混液に懸濁し、パラジウム
ブラック少量を加えＨ２ガス導入下３６時間攪拌する。

反応終了後触媒を吸引濾過によシＦ去し、Ｆ液を減圧蒸
留し、残渣を水に注ぎ凍結乾燥し、１８時間後再度水に
溶かして凍結乾燥して目的物を得る。

Ｒ７”＝０．０５ Ｒｆ−０，４１ ５（Ａ）、　　Ｚ−５ａｙ−Ｌｇｕ−Ａｒｇ−５ａｙ−
Ｌｙｅ（Ｔａｘ）　−ＧＬｕ　−ＯＨの製造 Ｚ−５ａｙ−Ｌａｗ−ＮＨＮＨ２１−０５ｆ　ｔ−ＤＨ
Ｆ　ｌ　５１Ｒ１に溶解し、６Ｎ塩酸／！；オ中サン１
．４１１１１を加え、−１５℃に冷却し、攪拌下皿硝酸
イソアニル０．３８ｄを加える。反応液がしドラ！；ト
チスト陰性になった後ＴＥＡ　１．１８Ｍ１の冷１）Ｍ
Ｐｏ、４０耐溶液を少量宛滴下し中和させる。このアジ
ドを含む溶液を、上記（４１）　”ｔ’得たＨ−Ａｒｃ
−５ａｙ−Ｌｙｅ（Ｔｅａ）　−ＧＬｕ　−ＯＨ及びＴ
ＥＡｏ、６６−の冷ＤＭＦ溶液１０−に加え、混合液を
−１０〜−１５℃下２時間、次いで４℃下２０時間攪拌
する。ＤＭＦを減圧留去し、残渣を水飽和のルーブタノ
ールで抽出し、づタノール層をルーブタノール飽和水で
５回洗浄し、減圧留去する。得られる残渣にエチルエー
テルを加えて固化させ、メタノール−酢酸エチルより再
沈殿させて、目的物１．９２ｆを得る。

Ｒｆ”＝０．３３ Ｒｆ”−０，６９ 元素分析値（Ｃ，、、Ｈ，６Ｎ工。Ｏ□５Ｓ・２Ｈ２０
として）計算値Ｃｔｓ）　　Ｃ５０，６６Ｈ６，７６＃
１３．４３実測値（チ）　　Ｃ５０，５７Ｈ６，５１Ｎ
１３．３４６（ａ）、　　Ｈ−５ａｙ−Ｌｇｕ−Ａｒｇ
−５ａｙ−Ｌｙｅ（Ｔｏｐ）−ＧＬｕ　−ＯＨの製造 Ｚ　−Ｓａｔ　−Ｌａｗ−Ａｒｇ−５ａｙ−Ｌｙｅ　（
ＴＯｚ　）　−ＧＬｕ−ＯＨ１，８４ｆをメタノール３
Ｑｉｄと１〇−酢酸３０ｗＬｌとの混液に懸濁し、パラ
ジウムブラック少量を加えＨ２ｆＪス導入下１３時間攪
拌する。反応終了後触媒を吸引濾過によシＦ去し、ｒ液
を減圧蒸留し、残渣を水に注ぎ凍結乾燥して目的物を得
る。

Ｒ／１＝０．０９ Ｒｆ＝０．５３ ６（４，Ｅｏｃ−ＧＬｕ（ＯＢｚｌ）　−５ａｙ−Ｌｇ
ｕ−Ａｒｇ−５ａｙ　−Ｌｙｚ　（Ｔｏｐ　）−ＧＬｕ
−ＯＫの製造上記（α）で得たＨ−Ｓａｙ　−Ｌａｗ　
−Ａｒ！１−　Ｓａｙ　−Ｌｙｅ（ｒｏｔ　）−Ｇｈｂ
−ＯＨｔ−ＤＭ　Ｆ　２０　ｗｌに溶解し、Ｔ１１Ａ０
．５１ｄを氷冷下に加え、更にＢｅｅ−Ｇｌｕ（ＯＢｚ
Ｌ　）−ＯＮＨ５０，９５Ｆを加え、混合液を室温下２
４時間攪拌する。ＤＭＦを減圧留去し、残渣を水飽和□
ｓ−ブタノールで抽出し、づタノール層をルーブタノー
ル飽和の水で５回洗浄する。プタノ−−ル層を減圧留去
し、得られる残渣にエチルエーテルを加えて固化させ、
メタノール−酢酸エチルより再沈殿させて、目的物１．
７０ｆを得る。

Ｒｆ−０，４２ Ｒｆ＝０．６０ 元素分析値（Ｃ５，１８□Ｎよ、０１８Ｓ・２Ｈ２０と
して）計算値（Ｉｔ）　　（１’５１．８２　　Ｈ６，
９７＃１２．５５実測値Ｃ’ｌｌ）　　Ｃ５１，２７Ｈ
６，５８Ｎ１２．４７７（ａ）、Ｈｏｅ　−ＧＺａ−５
ａｙ−Ｌａｗ−Ａｒｇ−５ａｙ−Ｌｙｅ（Ｔｏｙ）−Ｇ
Ｚ瓢−ＯＨの製造 Ｂｏｃ−ＧＬｕ（ＯＢｚｌ）−５ａｒ−Ｚｇｕ−Ａｒｇ
−５ａＴ−Ｌｙｅ（Ｔｏｐ）−Ｇｌｕ−ＯＨｌ　５０　
”ＦをＪ５）−Ｌ３０１１１１と１０％酢酸３０１１Ｉ
との混液に溶解し、パラジウムブラック少量を加えＨ２
ガス導入下１８時間攪拌する。反応終了後触媒を吸引濾
過によ）Ｐ去し、Ｆ液を減圧蒸留し、残渣に水を注ぎ凍
結乾燥して目的物を得る。

７（Ａ）、　　Ｈ−ＧＬＷＬ−５ａＴ−Ｌａｗｓ−Ａｒ
！ｌ−５ａｙ−Ｌｙｅ（Ｔａｘ）　−Ｇｈｈ−ＯＨの製
造 上記（ｇ）　テ得たＢｏｃ−Ｇｌｓ−５ａｙ−Ｌａｗ−
Ａｒｇ−５ａＴ−Ｌｙｅ（Ｔａｐ）−ＧＬｕ−ＯＫをＴ
ＨＦに溶解し、室温で１５分間放置する。無水エーテル
約３０−を加え、析出物を炉遇し、無水エーテルで洗浄
後、水酸化カリウム−五酸化リシを入れ九デシケーター
内で減圧乾燥して、目的物を得る。

７（Ｃ）、　　Ｈ−ＧＬｕ−５ａｙ−Ｌａｗ−Ａｒｇ−
５ｅｔ−Ｌｙｅ　−ＧＬｕ　−ＯＨの製造 上記（ｂ）−ｔ’得たＨ−ＧＬｕ−５ａｙ−Ｌａｗ−Ａ
ｒｇ−５ａｙ−Ｌｙｅ（７’ａ、ｙ）−（ｄｕ−ＯＨを
、予め金属ナトリウムで乾燥した液体アシ七ニアに溶解
し、攪拌下に金属ナトリウムの小片を溶液が青色を３０
秒〜１分間保つまで加える・更に結晶Ｍ１１．ｃｔを加
え、過剰のナトリウムを中和し、室温でアシ七ニアを完
全に蒸発留去後、溶出液に５０＊酢酸を用いたセファデ
ックスＧ−２５ゲルによりゲルー過して、目的物（本発
明べづチド）５８ｗｆＩを得る。これを「べづチドＡ」
と呼ぶ。

Ｒｆ−０，０４ Ｒｆ　窩０．３４ 元素分析値（Ｃ３４Ｉ６１Ｎ□１０１４・Ｃ２４０２・
３Ｈ２゜として） 計算値（％）　　Ｃ４４，９５Ｈ７，４４Ｎ１６．０２
実測値（チ）　　Ｃ４５，０５ＨＬＩＩＮ１５．８４８
（α）、　　Ｈ−ＧＬｎ−ＮＨＮＨＢｏｃの製造Ｚ−（
Ｊｓ−ＮＨＮＨＢｏｃ　１６．　ＯＯｆをメタノール　
！００ｄに懸濁し、パラジウムブラック少量を加えＨ２
ガス導入下１８時間攪拌する。反応終了後触媒を吸引濾
過により炉去し、ν液を減圧蒸留し、残渣をデシケータ
−内で減圧乾燥して目的物を得る。

Ｒｆ−０，３７ Ｒｆ＝０．５８ ３（Ａ）、　　Ｚ−Ｌａｗ−ＧＺｓ−ＮＨＮＨＢａａの
製造上記（α）で得たＨ−ＧＺ　Ｆ＆−ＮＨＮＨＥｏ　
ｃをＴＨＦ　５０ＩＬ／に溶解し、水冷下Ｚ−ＬａＫ−
ＯＮＭＳ　５．５１１を加え、室温下１８時間攪拌する
。ＴＨＦを減圧留去し、残渣を酢酸エチルで抽出し、酢
酸エチル層をＩＮクエン酸、飽和食塩水、飽和縦酸水素
ナトリウム水溶液及び飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫
酸ナトリウムで乾燥後、酢酸エチルを留去する＠得ら目
的物６．０４Ｆを得る。

Ｒｆ”＝０．８１ Ｒｆ＝０．８６ 元素分析値（Ｃ２４Ｉ３７Ｎ、０７として）計算値（％
）　　Ｃ５６，７９Ｎ７．３５　　Ｎ１３．８０実測値
（＊）　　Ｃ５６，６７＃７．１５　　Ｎ１３．７５９
（ａ）、　　Ｈ−ＬａＫ−ＧＺｎ−ＮＨＮＨＢｏｃＯ製
造Ｚ−Ｌａｇ−（ｄ絡−ＮＨＮＨＢｏｃ　２−７９　ｆ
をメタノール８０−に懸濁し、パラジウムブラック少量
を加えＨ２ガス導入下３２時間攪拌する。反応終了後触
媒を吸引濾過により炉去し、Ｆ液を減圧留去し、残渣を
デシケータ−内で減圧乾燥して、目的物を得る。

Ｒｆ”−０，３３ Ｒｆ”＝０．６６ −に溶解し、攪拌下冷却する。一方Ｚ−Ａｓｎ−ＯＨ１
，６１ｆをＴＥ１０１−に溶解し、Ｎ−メチルモルホリ
ン０．６２　ｉｌを加え一１５℃に冷却し、攪拌下り０
０蟻酸イソブチル０．８０　ｉｌを滴下する。滴下″３
０秒後肢液に上記で調製した冷ＤＭＦ溶液を加え、この
混合液を０℃下に５分間、次いで４０℃の水浴中で１分
間、更に１５℃下に３０分間攪拌する。反応液よりＴＨ
Ｆ及びＤＭＦを減圧留去し、残液を酢酸エチルで抽出す
る。抽出液をｌＮクエン酸、飽和食塩水、飽和炭酸水素
ナトリウム水溶液及び飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫
酸ナトリウムで乾燥後、酢酸エチルを留去する。得られ
る油状残渣にエチルエーテルを加えて固化させ、メタノ
ール−酢酸エチルで再沈殿させて目的物２．５５ｔを得
る。

Ｒｆ＝ｏ、６３ Ｒｆ＝０．７７ 元素分析値（Ｃ２８Ｈ４３Ｎ７０９として）計算値（チ
）　　Ｃ５３，１０Ｈ６，９７Ｎ１５．７７実測値（チ
）　　Ｃ５３，６７Ｈ６，６３Ｎ　１５．６８１０　（
ａ）、　　Ｚ　−Ｔｈｒ　−０ＮＨ５の製造Ｚ−Ｔｈｒ
　−ＯＨ１−２８９をＴＨ１３０Ｔｌｌに溶解し、これ
にＮｉ２　Ｏ，５８ｔを加え、氷冷し、次いでＮ、Ｎ−
ジシク０へ士ジルカルボジイミド（ＤＣＣ）１．０５ｆ
を加える。この混合液を４℃で２４時間攪拌し、析出物
を炉去し、Ｆ液を減圧留去し、残渣にエチルエーテルを
加え、デカンテーション洗浄する。得られる油状物質を
ダシケータ−内にて減圧乾燥して目的物を得る。

１０（Ａ）、　　Ｈ−Ａｓｎ−Ｌａｗ−Ｇｉｎ−ＮＨＮ
ＨＢｏｃの製造Ｚ−Ａｚｎ−Ｌａｗ−Ｇｉｎ−ＮＨＮＨ
Ｂｏｃ　２．４３　ｆをメタノール８０−に懸濁し、パ
ラジウムブラック少量を加え、ＩＩ２Ｉ２カス導入１蒔
８ 後触媒を吸引濾過によりｌ夫し、Ｆ’＊を減圧留去し、
デシケータ−内で減圧乾燥して目的物を得る。

Ｒｆ　＝０．３１ Ｒｆ　　−０．６４ ＩＱ（Ｃ）、Ｚ−Ｔａｒ−Ａｌｍ−Ｌａｗ−Ｇｌｍ−Ｎ
ＨＮＨＢｏｔの製造上記（りで得たＨ−Ａｓ　５ｓ−Ｌ
ｘａｘ−Ｇｌ　ｓｘ　−ＮＨＮＨＢｏ　ｃをＤＭＦ３、
０ｍＫｍ解し、この溶液に上記（ａ）で得た：Ｔ；ーＴ
ＩＩｒ−ＯＮＮＳのＤＭＦ’ｌＱｙ溶液を氷冷下に加え
、混合液を室温下１８時間攪拌する，ＤＭＦを減圧留去
して得られた残渣にｌＮクエン酸を加えて固化し、メタ
ノール−酢酸エチルよル再沈殿させて、目的物　２．１
２　ｆを得る。

− Ｒｆ”−０，８２ Ｒｆ＝Ｏ，”１９ 元素分析値（’３２Ｈ５゜Ｎ８０ｉｉとして）計算値（
ｓ）　　Ｃ５３，１８Ｈ６，９７Ｎ１５．５０実測値（
チ）　　Ｃ５２，８５Ｈ６，９５Ｎ　１５．２８１１（
α）、　　Ｚ−Ｔｈｒ−Ａｚｎ−Ｌｇｗ、−ＧＬｓ　−
ＮＨＮＨ２Ｏ製造Ｚ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｌｇｕ−Ｇｌｎ
−ＮＨＮＨＢｏｃ　０．９１　ｆをＴＦＡ８−に溶解し
、室温下１５分間放置する。

無水エーテル８０−を加えて析出物をすばやく濾過し、
無水エーテルで洗浄後、水酸化カリウム−五酸化リンを
入れ九デシケーター内で減圧乾燥して目的物を得る。

Ｒｆ＝０．３４ １１（Ａ）、　　　Ｈ−（Ａｍ（ＯＥｚＺ）−５ａｒ−
１ａｙ−Ａｒｙ−５ａｒ−Ｌｙｅ（７’＊Ｉ）　−ＣＩ
、ｍ−ＯＨの製造ＢａＣ−ＧＺｕ（ＯＢｚｌ　）−５ａ
ｙ−Ｌａｗ　−Ａｒｇ−５−ｒ−Ｌｙｅ（Ｔｏｅ）−Ｇ
Ｌｖｌ、−ＯＨｌ−００ｆ　ｔＴ　ＦＡ　８−に溶解し
、室温下１５分間放置する。無水エーテル８０−を加え
て析出物をすげやく濾過し、無水エーテルで洗浄後、水
酸化カリウム−五酸化リンを入れたデシケータ−内で減
圧乾燥して目的物を得る。

Ｒｆ”＝０．２４ Ｒｆ”＝０．４４ １１（Ｃ）、　　　Ｚ−ＴｈデーＡｚｎ−１ａｙ−にＡ
ｎ−ＧＺｕ（ＯＢｚＺ）−５ａｙ−Ｌａｗ−Ａｒｇ−５
ａｒ−Ｌｙｅ（ｒａｔ）　−ＧＬｕ−ＯＮの製造上記（
α）で得たｚ−ｒ五デーＡ椙−（、ａｗ−ＧＬルーＮＨ
ＮＨ２をＤＭＦ　１０−に溶解し、６Ｎ塩酸／ジオ中サ
シ０、６３　ｍを加え、−１５℃に冷却し、攪拌下皿硝
酸イソアミル０．１７５１４を加える。反応液がヒドラ
ジドテスト隘性になった後ＴＥＡ０．５３１１１の冷Ｄ
Ｍ１０．４０１溶液を少量宛滴下し中和させる。

このアジドを含む溶液を、上記＜ｈ＞で得たＨ−ＧＬｕ
（ＯＢｚｌ）−５ａｒ−Ｌａｗ−Ａｒｇ−５ａｙ−Ｌｙ
ｅ（Ｔｏｐ）−ＧＬｕ−ＯＨ及びＴＥＡｏ、２４Ｎｌ（
Ｄ冷ＤＭＦ溶液１０ｍ１７に加工、混合液を−ＩＯ〜−
１５℃下２時間、次いで４℃下１８時間攪拌反応させる
。さらに上記（−）と同様にしてＺ−Ｔｈｒ　−Ａｓｓ
−Ｌｅｔｓ　−に１ｎ−ＮＨＮＨＢａｃ　１．１６　ｆ
をＴＦＡで処理して得た反応物を上記反応混合物に加え
２４時間同温度下に攪拌反応させる。ＤｋｌＦを減圧留
去し、残渣を水飽和のルーブタノールで抽出し、亀−ブ
タノール飽和の水で５回洗浄し、減圧蒸留する。残渣に
エチルエーテルを加えて固化させ、メタノール−酢酸エ
チルよ）再沈殿させ更に熱メタノールで洗浄して、目的
物を得る。

３１　（ｄ）、　　Ｈ−Ｔｈｒ−Ａｚｒｂ−Ｌａｗ−（
Ｊｓ−ＧＬｂ−５ａｙ−Ｌａｗ　−Ａｒｇ−５ａｙ−Ｌ
ｙｅ（Ｔａｐ）　−Ｇｌｓ−ＯＨＯ１１造上記（Ｃ）で
得たＺ　−Ｔｈｒ　−Ａｓｓ　−１ａｙ　−Ｇｉｎ　−
ＧＺＷＬ（□ＢｚＺ）−５ａｙ−Ｌｇｕ−Ａｒｇ−５ａ
ｙ−Ｌｙｅ（Ｔｏｅ−ＧＬｕ−０１１をメタノール５Ｑ
＋ｗｊ及び３〇−酢１ｔ５Ｑｄとの混液に懸濁させ、パ
ラジウムブラック少量を加え、Ｈ２ガス導入下１８時間
攪拌する０反応終了後触媒を吸引濾過によシｖ去し、Ｆ
液、を減圧濃縮し、メタノールを完全に留去後、得られ
る濃縮液を、５０％酢酸を溶出液とするセファダツクス
ａ−２５によりゲル濾過して、目的とする）５クシヨン
を集め凍結乾燥して目的物？４０ｖを得る。

Ｒｆ”　＝　０．１７ Ｒｆ＝０．３５ 元素分析値（Ｃ６６Ｈ９９Ｎ□７０２３・Ｃ２Ｈ，０２
・２Ｈ２０として） 計算値（チ）　　Ｃ４８，９１Ｎ７．０８　　＃１５．
６４実測値Ｃｆｐ）　　Ｃ４８，８２Ｈ６，６３Ｎ１５
．７４１２、　　Ｈ−Ｔｈｒ−Ａｓｓ−Ｌａｗ−Ｇｉｎ
−ＧＬｕ−５ａｙ−Ｌａｓｈ　−Ａｒｇ　−５ａｒ−Ｌ
ｙｅ　−Ｇｌｍ　−ＯＨＯ製造Ｈ−Ｔｈｒ−Ａｓｓ−Ｌ
ａｗ−ＧＺｓ−ＧＬｕ−５ａｙ−Ｌａｗ−Ａｒｃ　−５
ｅｒ−Ｌｙｅ（Ｔａｘ）−Ｇｌｗ−ＯＨ５１，Ｏ”９を
、予め金属ナトリウムで乾燥した液体アンモニアに溶解
し、攪拌下に金属ナトリウムの小片を溶液が青色を３０
秒〜１分間保つまで加える。更に結晶ｍ４ｃｔを加え、
過剰のナトリウムを中和し、室温でア：Ｊｒ：ニアを完
全に蒸発留去後、溶出液に５０９１酢酸を用いたｔファ
デックスＧ　−２゛５ゲルによ）ゲル炉遇して、目的と
するフラクションを集め、これを濃縮後水を加えて凍結
乾燥して、目的物（本発明ペプチド）３２１１９を得る
。これを「べづチドＢ」と呼ぶ。

Ｒｆ”＝０．０１ Ｒｆ＝０．３７ 元素分析値（’５３Ｈ９３７１ｉｉ？’２□・Ｃ２４０
・３Ｈ２０として） 計算値（チ）　　Ｃ４６，５Ｔ　　Ｎ７．３２　　Ｎ１
６．７９実側値（％）　　Ｃ４６，１０Ｈ６，９８＃１
６．８２１３１．Ｚ−Ｌａｇ−５ｅｔ−ＯＣＨ，の製造
Ｎ　−５ａｒ−０ＣＲ３・ｌＩＣｌ−１−８１ｆ　ＯＤ
　Ｍ　７２５　Ｍに溶解し、ＴＥＡｌ、６２ｍ１を加え
一１０℃に氷冷する。攪拌下Ｚ　−Ｌａｗ　−０ＮＨ５
４−２１ｆを加え、室温で１８時間攪拌を続ける。ＤＭ
Ｆを減圧留去し、残渣を酢酸エチルで抽出し、酢酸エチ
ル層を水洗し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、酢酸エチ
ルを減圧留去する。得られる残渣にエチルエーテルを加
えて固化させ、酢酸１予ルーエーテル、より再沈殿させ
て、目的物２．６８ｆを得る。

７＃−ｏ、ｇｔ Ｒｆ−０，８２ 元素分析値（’１６’２６Ｎ２’６として）計算値（＊
）　　Ｃ５９，００Ｍ　７．１５　　Ｎ　７．６５実測
値（チ）　　（’５８．６２　　Ｎ７．０３Ｎ７．６５
３４（ａ）、　　Ｈ−Ｌａｗ−５ｉｒ−ＯＣＨ３・ＨＣ
ｌ（Ｄ製造Ｚ−Ｌａｗ−５ａｒ−ＯＣＨ，４，２０ｔを
メタノール４０−とＩＮ塩酸１１．４６ｍとの混液に懸
濁させ、パラジウムブラック少量を加え、１２ガス導入
下１８時間攪拌する。反応終了後触媒を吸引濾過によシ
Ｐ去し、Ｐ液を減圧蒸留し、更に水を加え減圧蒸留する
操作を３回繰返す。残渣を五酸化リシを入れた１デシケ
ータ−内で減圧乾燥して目的物を得る。

Ｒｆ　　−０，３８ １４（Ａ）、　　Ｚ−５ａｙ−Ｌａｗ−５ｅｔ−ＯＣＨ
３の製造Ｚ−５ｇｖ−ＮＨＮＨ２３−１９ｆ　ｔ　Ｄ　
Ｍ　Ｆ　２５−に溶解し、０ＮＨＣ１／ジオ＋サシ６．
３０−を加え、−１５℃に冷却し、攪拌下皿硝酸イソア
ミル１．６９−を加える拳反応液がしドラシトテスト陰
性になった後ＴＥ、４５．２９Ｎｌの冷ＤＭ１１．７６
ｉ１ｊ溶液を少量宛滴下し中和させる。このアジドを含
む溶液を、上記（α）で得たＨ−Ｌａｕ−５ａｒ−ＯＣ
Ｈ３・ＨＣＬ及びＴＥＡｌ、　６０　ＴＩｄの冷ＤＭＦ
溶液２０ｗ１に加え、混合液を−１０〜−１５℃下２時
間、次いで４℃下１８時間攪拌する。ＤＭＦを減圧留去
し、残渣に水を加えて固化させ、メタノール−酢酸エチ
ルより再沈殿させて、目的物４．１１Ｆを得る。

Ｒｆ”−０，７６ Ｒｆ冨０．７９ 元素分析値（Ｃ２□Ｈ３□Ｎ３０８として）計算値（％
）　　Ｃ５５，６２Ｈ６，８９Ｈ９，２”１実測値（％
）　　Ｃ５５，４８Ｈ’６．９２　　＃９．１８１５、
　　Ｚ−５ａｙ−Ｌｇｗ−５ａｒ−ＮＨ２Ｈ２Ｆ）製造
Ｚ−５ａｒ−Ｌａｗ−５ｕｒ−ＯＣＨ３２，００ｆ　ｔ
メタノール４Ｑｉ１に溶解し、氷冷下１００チＮＨ２Ｎ
Ｈ２・Ｈ２Ｏ１、ｌＯ−を加え、室温で１８時間放置す
る。反応終了後、溶媒を減圧留去し、エーテルを加えて
固化させ、過剰のＮＨ２ＮＨ２・Ｈ２０を水を加えて除
去し、メタノール−酢酸エチルより再沈殿させて目的物
１．９１Ｆを得る。

Ｒｆ−０，４３ Ｒｆ＝Ｏ，’１３ 元素分析値（Ｃ２ｏＨ３１Ｎ５０７として）計算値Ｃ％
）　　Ｃ５２，９７Ｈ６，８９Ｎ１５．４４実測値（％
）　　Ｃ５２，８５ｆ６．７０　　ＡｒＮ２．４４１６
（ｇ）、　　Ｚ−５ａｙ−Ｌａｗ−５ａｙ−Ｔｈｒ−Ａ
ｚｎ−Ｌａｗ−ＧＺＢ−ＧＬｔｂ−５ａｙ−Ｌａｗ−Ａ
ｒｇ−５ａｙ−Ｌｙｅ　（Ｔａｐ）−ＧＬｔｂ　−ＯＨ
ｏ＃！造 Ｚ−５ａｙ−ＬａｔＬ−５ｕｒ−ＮＨ２Ｈ２７０，４２
１１ｆをＤＭＦ　５ｄに溶解し、６Ｎ塩酸／ジオ士サシ
のＤＭ１１０倍希釈液０．７８　ｍｌを加え、−１５℃
に冷却し、攪拌下皿硝酸イソアミルのＤＩＩＰ　１０倍
希釈ＩＩＯ，２０ｄを加え、反応液がしドラシトテスト
陰性になったｓ、ＴＥＡＯＤＭＦ　Ｉ　０倍希釈液０．
６５ｓｌｔ少量宛滴下し中和させる。この７ジドを含む
溶液を、上記１１（４で得たＨ−Ｔｈｒ　−Ａｓｓ−Ｌ
ａｗ−Ｇｊｓ−ＧＬｕ　−５ａｒ−Ｌａｗ−Ａｒｇ−５
ｅｔ−Ｌｙｅ（Ｔｏｚ）　−ＧＬｎ−ＯＨ１５１”１と
ＴＥＡ（ＤＤＫＦ　ｌ　０倍希釈液０．２９　ｉｌの冷
ＤＭＦ５ｄ溶液に加え、混合液を−１０−一１５℃下２
時間、次いで４℃下１８時間攪拌する。更にＺ−５ａｒ
−Ｌａｗ−５ａｙ−ＮＨ２Ｈ２１１７−３６＊を加え、
２４時間反応させる。

ＤＭＦを減圧留去し、残渣を水飽和のルーづタノールで
抽出し、港−ブタノール飽和の水で１０回、更に酪−づ
タノール飽和の２９Ｇ酢酸で５回洗浄し、減圧濃縮し、
水を加えて更に減圧濃縮し、完全にルーブタノールを留
去後、凍結乾燥する。

これを酢酸工ｆルーエーテルで再沈殿させて目的物を得
る。

１６（ｂ）、　　Ｈ−５ａｙ−Ｌａｗ−５ａｒ−Ｔｈｒ
　−Ａｚｎ−Ｌａｗ−ＧＬｎ　−ＧＬｕ　−Ｓａｙ　−
Ｌｇｕ−Ａｒｇ　−Ｓｔｙ　−Ｌｙｅ　−に２１ｍ　−
ＯＨの製造 Ｚ−５ｅｔ−Ｌａｗ−５ａｙ−Ｔｈｒ−Ａｚｎ−Ｌａｗ
−Ｇｌｓ−ＧＬｕ　−５ａｒ−Ｌａｗ−Ａｒｇ−５ｅｔ
−Ｌｙｅ（Ｔｅａ）−ＧＬｕ−ＯＨ１５０”１を予め金
属ナトリウムで乾燥した液体アシ上ニアに溶解し、攪拌
下金属ナトリウムの小片を溶液が青色を３０秒−１分間
保つまで加える。更に結晶ｍ４ｃｔを加え、過剰のナト
リウムを中和し、室温でアシモニアを完全に蒸発後、溶
出液に５０％酢蒙を用いたｔファデックスＧ−２５ゲル
によシゲルー過して、フラクションを集めこれを濃縮後
水を加えて凍結乾燥して、目的物（本発明べづチド）９
４ｑを得る・これを「ペプチドＣ」と呼ぶ。

Ｒｆ”＝０．０２ Ｒｆ−０，３９ 元素分析値（Ｃ６５Ｍ、２♂′２゜’２６・Ｃ）、０２
・Ｒ２０として） 計算値（優）　Ｃ４８，１９Ｍ　７．２４　　Ｎ　１６
．７８９ｉ！１１１１１　（＊）　Ｃ４７，９３Ｎ　６
．９３　　Ｎ　１６．４９１７　（ａ）、　Ｚ−Ｔｙｒ
−０５厘０製造Ｚ−Ｔａｒ−ＯＲ１，０４１ｔ　Ｔ　Ｈ
Ｆ　’Ｓ　Ｏｓ／に溶解し、Ｎ−しドロ中シサクシシイ
！！Ｆ０．３８Ｆを加え、水冷後更にＤＣＣ０１６８ｆ
を氷冷下に加え、混合物を斗°Ｃで１８時開成拌する。

析出物を吸引濾過により除き、炉液を減圧濃縮し、残渣
にエチルエーテルと石油エーテルとを加えてデカシテー
ショシ、乾燥して目的物を得る。

ＩＴ　（屹Ｈ−５ｚｒ−Ｌｅｇ−５１Ｆ　−０ＣＲ，Ｏ
製造参考側１４（ｊ）で得たＺ−５ｚｒ−Ｌｔｗ−５ｔ
ｙ−ＯＣＲ３１，ＱＱｆをメタノール２０ｍ／と１０％
酢酸２０−にミーし、パラジウムブラック少量を加え、
ＩＩ２ガス導入下１４時間攪拌する。反応終了後触媒を
吸引濾過によ多枦去し、炉液を減圧濃縮後水を加えて凍
結を蜂して目的物を得る。

Ｒ１−０，３５ Ｒｆ　　−０，６５ １７（ｔ）、　Ｚ−’Ｉ”ｙｒ−５ｅｒ−Ｌｔト５ｅｔ
−ＯＣＲ，の製造上記（＃）で得九Ｈ−５Ｉｒ−Ｌａｗ
−！ｙｒ　−ＯＣＨ，をＤＭＦ１０１１／に漕解し、ｒ
ｘΔ　０．３１　ｓ／を氷冷下に加え、こｏｗ液に上記
（７Ｉ）で得たＺ−Ｔｙｒ−０５ｗの冷りＭＦｇ液を攪
拌下に加える。混合液を室温下１８時間攪拌し、ＤＭＦ
を減圧留去し、残渣に水を加えて固化させ、メタノール
−エーテル次いでメタノール−酢酸エチルから再沈殿さ
せて目的物　１．０８　ｆを得る。

Ｒｆ”　−０，７８ Ｒｆ　　−０，８２ ７ｓ素分析値（’３ｏｊ／ａＯＮｍ’！Ｏとして）計算
値（＊）　　Ｃ５８，４３Ｍ　６．５４　　Ｎ　９．０
９実測値（％）　　Ｃ５８，１４Ｍ　６．５８　　Ｎ　
９．１６１７　（４２−Ｔｙｒ−５ａｙ−Ｌｅｓｓ−５
ａｙ−ＮＨＮＨ２Ｏ製造Ｚ−Ｔｇｒ−５ｕｒ−Ｌａｗ−
５ｚｒ−ＱＣＩ３１．ＱＱ　ｌをメタノールに溶解し、
水冷下１００４　ＮＨ２ＮＨ２・Ｈ２Ｏ０−８２＊音知
え、室温で１８時間腋装する。メタノールを減圧留去し
、Ｍ＆ＩＣエチルエーテルを加えて固化させ、水洗によ
り過剰のＮｉ１２Ｎｉ１２・Ｒ２０を除夫し、メタノー
ル−エーテルで再沈殿後熱メタノールで洗浄して目的物
　０．８１　ｆを得る。

Ｒｆ　　−０，４５ Ｒｆ　　−０，７６ 元素分析値（Ｃ２９’＆。Ｎ６０．として）計算値（財
）Ｃ５６，４８ｆ　６．５４　　Ｎｏ、６５！Ｉ！潟値
−Ｃ５６，１２Ｎ　６．５７　　Ｎ　１５．５８１ｇ　
（ａ）、Ｚ−Ｔｙｒ−５ｅｔ−Ｌｅａｓ−５ｚｒ−Ｔａ
ｒ−Ａｊｍ−Ｌｅｓｔ−Ｇｌｇ−Ｇｌｍ−５ｌｒ−Ｌｚ
ｍ−１ｒｇ−５ｅｔ−Ｌｙｚ（Ｔａｘ　）−Ｇｉｇ　−
０ＨＯ製造 Ｚ−Ｔｙ　ｒ−５ａｙ−Ｌｅｇ−５，ｙ−ＮＨＮＨ２今
２．３ｑをＤＭＦ今一に層解し、６Ｎ樵酸／ジオ千サン
のＤＭＦｌＯ倍希釈ｉ１０．３４−を加え、−１５℃に
冷却し、攪拌下Ｉｋ硝硝酸イソアシルＤＭｌ　１０＠希
釈液０．０９−を加え、反応液がしトうジシテスト陰性
になった後、１１ｚＡｏＤＭ！１０倍希釈＊０．２９ｇ
を少量ずつ滴下し中和させる。このアジＦを含む＊＊を
、Ｈ−Ｔｈｅ−Ａｘ　ｍ−Ｌｚ　譚−Ｇｌ　ｍ−１；１
ｓ−５＃Ｆ　−Ｌｔ−−Ａｒｔｌ−５ａｙ−Ｌｙｓ　（
Ｔｏｙ　）−Ｇｈｂ−ＯＨ５０−ＯＱとＴＥＡのＤＭｌ
ｌ　０倍希釈液０．１０の冷ＤＭＦ４１４溶液に加え、
混合液を−１０〜−１５℃下２時間、次いで４℃下１８
時間攪拌する。更ｔｃｌ−Ｔｙｒ−５ａＴ−ＬルーＳげ
−ＮＨＮＨ２４２，３Ｗを加え２４時間反応させる。Ｄ
ＭＦ′に減圧留去し、残渣を水飽和Ｏ襲−づタノール３
ＱＭｌで抽出し、抽出液をルーづタノール飽和水で１０
回、次いで烏−ブタノール飽和の２−酢酸で５回洗浄す
る。有機層を集め減圧濃縮し、酪−ブタノールを留去後
、凍結乾燥し、酢酸エチル−エーテルで再沈殿させて目
的物を得る。

１８（Ａ）、　　Ｈ−Ｔｙｒ−５ａｒ−Ｌａｗ−５ｅｔ
−Ｔｈｒ　−ｊ＃ｓ−Ｌｇｕ　−Ｃｄｘ−ＧＬｕ−５ａ
ｒ−Ｌａｗ　−Ａｒｇ　−Ｓａｙ　−Ｌｙｅ−ＧＬｕ　
−ｏｎ　６１１造 上記（＠）で得たＺ−Ｔｙｒ−５ａｙ−ＬａＫ−５ａｙ
−Ｔｈｒ　−Ａｓｘ−Ｌａｗ−ＧＬｎ−Ｇｌｕ−５ａｒ
−Ｌｇｓ−Ａｒｇ−５ｉｒ−Ｌｙｅ（Ｔｏｐ）−ＧＺｕ
−ＯＨを予め金属ナトリウムで乾燥した液体アシ七ニア
に溶解し、攪拌下金属ナトリウムの小片を溶液が青色を
３０秒〜１分間保つまで加える。

更に結晶ＮＨ４Ｃ２を加え、過剰のナトリウムを中和し
、室温でアシ七ニアを完全に蒸発後、溶出液に５〇−酢
酸を用いたセファダツクスＧ−２５ゲルによりゲル濾過
して、フタクシヨシを集め目的物（本発明ペプチド）３
３ｑを得る。これを「ペプチドＤ」と呼ぶ。

Ｒｆ”＝０．０２ Ｒｆ＝０．３５ 元素分析値（Ｃ７４Ｈ工２３Ｎ２□０２８・Ｃ２Ｈ４０
２・４Ｈ２０として） 計算値（チ）　　Ｃ４７，７１ｆ７．３０　　Ｎ１５．
７９実測値（％）　　Ｃ４７，３２Ｈ７，２４Ｎ　１５
．８２〈抗原の製造〉 製造例　１ べづ誉ドＯ合成製造例７（Ｃ）で得たべづチドＡの５ｑ
及び牛血清アルプ工シ（以下「ＢＳＡ」と略記する）の
１５岬を酢酸アシ七ニウム緩衝液（０，エチル、ｐｆ７
．０）２−にとかす。この溶液に０．１モルのクルター
ルアルダヒト溶液０．１１Ｗｔを加え、室温で５時間攪
拌する。その後反応混合物を４８時間、４℃で水１ｔで
透析する。透析中５回水を交換する。その後、ペプチド
−蛋白質複合体を含有する溶液を凍結乾燥してヒトα型
イシターフ工０シ抗原（以下「抗原Ｉ」と呼ぶ）１５ｑ
を得る。

この抗原■は、Ｂ５Ａｌ’ｅルに対してぺづチドＡが平
均１０℃ル結合し九ものである。尚このペプチドＡとＢ
ＳＡとの結合率は、得られる抗原Ｉを更にセファデック
スＧ−５０Ｃ溶出液：生理食塩水、検出：Ｏｊ）２８０
ｓｍ、流出速度：３−７時間、分取量：１ｙｄずつ）で
ゲル濾過した際、未反応ＢＳＡ及びペプチドＡＯ存在は
認められないことよシ、該ゲルＶ過によってＢＳＡに結
合したべづチドＡの７５クシヨシと他Ｏ生成体（ぺづチ
ドＡの２量体）のフタクシヨシとを分離し、ベプーチド
２量体の標準濃度の検量線を作成して、上記２量体の量
を求め、これを出発原料として用いたペプチドＡの量か
ら差し引いた値がすべてＢＳ４に結合しているとして求
めたものでおるｅ以下の抗原製造例によ〕得られる各抗
原について亀岡様である。

製造例　２ べづチド合成製造例１２で得九ペプチドＢの５岬及びＢ
ＳＡの５ｑを酢酸アシ七ニウム緩衝液（０，１ｖ：ＪＬ
、、ｐＨ７，０）２ｄＫ、！：がｆ。ｅｏ浴溶液０．１
！ニルのクルタールアルダヒト溶液０．１１ＷＪを加え
、室温で５時間攪拌する。その後反応混合物を４８時間
、４℃で水ｉｔで透析する。透析中５回水を交換する。

その後、べづチドー蛋白質複合体を含む溶液を凍結乾燥
してヒトα型イシターフエ０シ抗原（以下「抗原■」と
呼ぶ）９ｑを得る。

得られた抗原■は、Ｂ５Ａｌモルに対してペプチドＢが
平均９Ｖｌニル結合したものである。

製造例　５ ペプチド合成製造例１６（Ａ）で得たべづチドＣの５ｑ
及びＢＳｊ１２５Ｗ９を水４１に溶解する。この溶液に
ジシク０へ士シルカーポジイミド（ＤＣＣ）２００１１
ｆを加え、室温で５時間攪拌する。次に反応混合物を水
２ｔを用い４℃にて４８時間要して透析する。透析中５
回水を交換する。その後べづチドー蛋白質複合体を含む
溶液を凍結乾燥してヒトα型イシターフエ０ジ抗原（以
下「抗原■」と呼ぶ）２８ｑを得る。

得られ九抗原■は、Ｂ５ｌ１七ルに対してべづチドＣが
平均１２Ｖニル結合したものである。

製造例　４ ペプチド合成製造例１　ｇ　（Ａ）で得たべづチドＤの
４岬及びＢＳＡの２０ｑを酢酸アシ七ニウム緩衝液（０
，１モル、ｐＨ７，０）２ｄＫ溶かす、この溶液ＫＯ，
１ｔルのタルタールアルデヒド溶液０．１１−を加え、
室温で５時間攪拌する。その後反応混合物を４８時間、
４℃で水１ｔで透析する。透析す５回水を交換する。そ
の後、ペプチド−蛋白質複合体を含む、溶液を凍結乾燥
してヒトａ型イシターフエ０ン抗原（以下「抗原■」と
呼ぶ）２：２ｖを得る。

得られた抗原■は、ＢＳＡＩＶニルに対してべづチドＤ
が平均９Ｖニル結会したものである。

〈抗体の製造〉 抗原の製造例３で得た抗原■の１００μｆを１．５−の
生理食塩水に溶解後、之にフロイシドの補助液１．５　
ｄを加えて調製した懸濁液を、７羽の兎（２，５〜３．
０〜）に皮下投与し、２週間毎に６回同量投与する。更
にその後１カ月毎に３回、最初投与した量と同量を投与
する。最終投与後７日経過してのち試験動物から採血し
、遠心分離して抗血清を採取して、ヒトα型インターフ
エ０シ抗体（以下「抗体■」と呼ぶ）を得る。

製造例　２〜４ 抗原Ｏ製造例１，２及び４で得た抗原１．ＩＩ及び■を
用い、上記製造例１と夫々同様にしてヒトα型インター
フエ０シ抗体（抗体Ｉ％亘及び■）を夫々得る。

０標識ペプチドの製造 Ｈ−Ｔｙｒ−５ａｙ−Ｌａｗ−５ａｙ−Ｔｈｒ−Ａｚｎ
−Ｌａｗ−Ｇｉｎ−ＧＪｍ−５ａｙ−Ｌａｗ−Ａｒｇ−
５ａｔ−ＬｙＪ−ＧＬｕ−ＯＮ即ちペプチドＤをり０う
！ンＴを用いる方法で以下の通り標識化する。

即ち上記ぺづチド５μｆの０．５モルのリン酸塩緩衝液
（Ｆ＃７．０）２０μｔｙｃｙα［１２５ｒ　）（ｃａ
ｒｒｔｅｒ　ｆｒａｇ　Ｎ、　Ｅ、Ｎ、　）　ｌマイク
ロ＋ユーリーの０．５　’Ｅルリン酸塩緩衝液を加え、
次にり０５ミシＴ７０＋ｗ／ｍｊの０．５　Ｖ：ルリシ
酸塩緩衝液２０μｔを加える。室温で３０秒間攪拌して
６０！／１１１７のメタ重亜硫酸ナトリウム（Ｎａ２Ｓ
２０５）の０．５Ｍリシ酸塩緩衝液５０μｔを加えるこ
とで反応を終わらせる。次いで反応液に１−の冷沃化ナ
トリウム水溶液１００μｔを加え、反応混合物をｔファ
デックスＧ−２５のカラム（１，Ｏｘ　３０５１１）に
かけ（溶出液０．２５％ＢＳＡ％　ｌＯ罵Ｍ　ＥＤＴＡ
及び’　０２　Ｓ　ＮａＮ３を含む０．０５ｔルリシ酸
塩緩衝液、ｐ　Ｈ７，４）　ｓ　１２５Ｉで標識された
ぺづ予ドＤを得る。

０力価の測定 上記で得られる抗体の力価を次の通り測定する。

即ち抗体なそれぞれ生理食塩水で１０，１０２．１０３
．１０′″、ｌｏ５・・・・倍に希釈（イニシャル）し
、これらの夫々！００μｔに、１１”標識ぺづ予ド（上
記で得られる標識べづチドを約９５００ＣＰｗＬになる
ように希釈したもの）Ｑ−１ｍ？及び０．０５七ルリン
酸塩緩衡液（Ｐ　Ｈ＝　７．４　）　、＜　０．？、、
５チＢＳＡ％ｌＯｗｈＭＥＤＴＡ及び０．０２１　ＭＩ
ＥＮ、″を含む１０．２１１１１７を加え、４℃で２４
時間イシ牛ユペートし、生成した抗体と１１２５標識抗
原とＯ結合体を、ヂ＋ストうシー活性炭法及び遠心分離
法（４℃、３０分間１３０００ｒＪｌ１ｍ）に！Ｄ未ｆ
ｆ応（結＆Ｌ４イ）１１２’標識ぺづチドから分離し、
その放射線をカウントし、各希釈濃度における抗体のＩ
ｌｌ識ぺづ予ドとの結合率（−）を測定する。縦軸に抗
体ＯＩ　　標識べづ予ドとの結合率（−）及び横軸に抗
体Ｏ希釈倍率（イニシャル濃度）をと９、各々Ｏ１＃１
度において結合率をづＯッ卜する。結合率が５０％とな
る抗体の希釈倍率即ち抗体の力価を求める。その結果抗
体■の力価は、５００００であった。

０抗体のヒトα型イシターフエ０ン特異性試験供試試料
として各種濃度のしトβ型インターフエＯシ（東京都総
合臨床研究所製、比活性３×１０　Ｕ／ｗｅプ０テイシ
）、ペプチドの合成製造例１６　（Ａ）で得たぺづ予ド
Ｃ即ちヒトα型イシターフ工０シのべづチド鎖及びヒト
α型インターフエ０ン〔林原研究所製、リム本プ５スト
イドインターフエＯシ〕を使用する。また標準希釈剤と
して０．２５５１　Ｂ　Ｓ　Ａ１５ｍＭ　ＥＤＴＡ及び
０．０２１０！ＩｈｔＮ３を含む０．０５′ｅルリン酸
塩緩衝液（ｐＨ７，４）を使用する。

各々の試験管に、標準希釈剤０．２ｍ１．供試試料０．
１／、抗体の製造例３で得た抗体■のｏ−ｔｙ及び１１
２５榔識べづチド（上記で得られる標識べづチドを約２
８００ｅｐｗ、になるように希釈したもの）０．１１１
７を入れ、４℃で７２時間イシ＋ｌベートした後、ノー
マルブタ血清（ｎｏｒｗ、ａＬ　ｐａｒｅｉｎｇ　ｚａ
ｒ＊ｓｓ＋　）を０．１−加え、次いでヂ中ストランで
被膜した活性炭の懸濁液０．５−を加え、４℃で３０分
間放置し１次に４℃、３０００ｆ７ｍＯ条件下に３０分
間遠心分離を行ない、抗体と■　標識ペプチドとの結合
体及び未反応（結合しない）Ｉ　標識べづチドを分離し
、その放射線をカウントし、用いた抗体の力価に相当す
る結合率ＣＢＯ）を１００−とじて、供試試料の濃度及
び希釈率における抗体と１１２５標識べづチドとの結合
体（Ｂ）の百分率を求める。得られる結果よシ抗体■は
、ヒトａ型イシタ−フエ０ンに対する反応性とヒトβ型
インターフエ０シに対する反応性において明確に区別さ
れ、このことよシβ厘イシターフエ０シに低交叉性の、
特異性の高い抗体であるととが判る。

また抗体１．ＩＩ及び■についても同様の試験を行なっ
た結果抗体■と略々同様にヒトα型イシターフエ０シに
対し特異性の高い抗体であるこ・之が確認され九。

（以　上） ５０７−

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 ■　一般式 ％式％ 〔式中Ｒは水素原子、Ｈ−Ｔｈｒ−Ａｚ路−Ｌａｗ−Ｇ
   Ｌ＊基、Ｈ−５ａｙ−Ｌａｍ−５ａｗ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ
   −Ｌａｗ−Ｇｉｎ基又１１　Ｍ−７’ｙｙ−５ａｒ−Ｌ
   ａｗ−５ａｙ−Ｔｈｒ−Ａｚｎ−Ｌａｗ　−ＧＬｎ基を
   示す。〕 で表わされるしトリム本プラストイドイシターフエ０シ
   のＣ末端ペプチド及びその誘導体。