JPS582749A - アフイニテイ−クロマトグラフイ−用吸着体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はアフィニティークロマドクラフィー用吸着体に
関する。

本明細書において、アミノ酸、ペプチド、保護基、活性
基、その他に関し略号で表示する場合ＩＵＰＡＣ，ＩＵ
Ｂの規定或いは当該分野における慣用記号に従うものと
し、その例を次に挙げる。またアミノ酸などに関し光学
異性体がありうる場合は、特に明示しなければＬ体を示
すものとする。

Ａｒｙ毒アルｆニン Ａｘｎ　：アスパラｆシ Ｓｔｒ　：ｔす。

Ｇｌｎ−ジルタミン Ｎｅｔ’、メチ才二シ Ｌｔｕ　：０イシシ Ｐ杓　：フェニルアラニル Ｔ１．：チロシン Ｇｌｆ　　：グリシゝ Ｚ　：カルボベシリ士シ基 Ｓ□　：コハク酸イ三ド基 Ｔａｓ　　：戸−トルエシスルホニル基Ｂ、、：第３級
ブト牛ジカルボニル基 インターフエ０シは生体細胞がウィルス感染を受けた時
に産生ずる抗ウイルス性糖蛋白質であり、これを利用し
てウィルス性疾患を予防乃至治療することが注目されつ
つある。而してヒトのインターフエロンはα型インター
フエ；計シ（ＬｚｕζｏｃｙｔｚｚＩｎｔｅｒｆｅｒｏ
ｎ　　ＩＩＬ−戸ｈｅｒ　　ｂｌａｓｔａｉｄ　　Ｉｎ
ｔｅｒｆｅｒｏｎ　　）　　。

β型イ、、　ターフＩ　Ｏン（Ｆｉｂｒｔｒｂｌａｓｔ
　Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ）及びγ型イシターフエ□　ｙ
　（Ｉｍｍｕｎｅ　Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ）の混合物で
あることが今日までた解明されている。

しかしながら斯かるヒトのインターフエロンを単一な型
の糖蛋白質にまで精製する技術は未だ開発されてい危い
。

本発明の目的はヒトのインターフエロンよりβ型イシタ
ーフエ０シを単離精製することにある。

即ち本発明は、一般式 ％式％ 〔式中Ｒ１ｇｌ水素原子、Ｈ−Ｐｋｔ−基、Ｈ−Ｌｚｕ
−β型イシターフエ０ンのＮ末端ペプチドと担体との複
合体からなるヒトβ型インターフェロン抗原　　　　“
を哺乳動物体に投与して得られるしトβ型イシターフエ
０シ抗体を不溶性支持体上に固定化してなることを特徴
とするアフィニティークロマドタラフィー用吸着体に係
る。

本発明のアフイニテイク０マドグラフィー用吸着体を使
用すれば、ヒトのイシタ〜フエ０シよりしトβ型インタ
ーフエ０シを単離精製することができる。即ちしトのイ
ンターフエロンよシしトβ型イシターフエ０シのみを選
択的に吸着し得、またヒトβ型インターフェロンが吸着
されたアフィニテイクＯマドグラフィー用吸着体からの
ヒトβ型インターフェロンの脱離を緩和な条件下簡易な
操作で行なうことができ、それ故ヒトβ型イシターフエ
０シ活性を失活させることなく、しかも高純度のヒトβ
型インターフェロンを定量的に得ることができる。

本発明のアフイニテイク０マドグラフィー用吸着体は下
記に示す方法により製造される。即ち上記一般式（１）
で表わされるぺづチドをパラテンとして用いることによ
り、八づテシー担体結合試薬の存在下に担体と反応させ
てぺづチドー担体複合体からなるヒトβ型インターフェ
ロン抗原を製造し得、次にこのしトβ型イシターフエ０
ン抗原よりヒトβ型インターフェロンに対して特異的反
応性を有するしトβ型イシターフエ０シ抗体を製造し得
、さらにこのしトβ型インターフエ０ン抗体をアフィニ
ティークロマドグラフイーの吸着体に含有させることに
より本発明の吸着体が製造される。

本発明で用いられる一般式（１）のペプチドは新規化合
物であシ、斯かるペプチドは以下の方法によって製造で
きる。

一般式（１）のペプチドは、ペプチド合成の常套手段で
製造し得る。固相合成法、液相合成法のいずれによって
もよいが、液相合成法が有利な場合が多い。そのような
ぺづチド合成の手段は、たとえば“ＴＡ／　Ｐｔ戸ｔｌ
ｔｉｅｓ”、第１巻（＋９６６）。

５ｔｈｒ”ｔｉｔｔｒ　ａｎｄ　Ｌｕｈｋｔ著、　Ａｃ
ａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ　、　ＮｚｔｕＹａｒｄ　、
　Ｕ、Ｓ、Ａ、あるいは“ペプチド合成”東屋ら著、丸
善株式会社（１９７５年）に記載されており、たとえば
アジド法、り０ライド法、酸無水物法、混酸無水物法、
ＤＣＣ法、活性エステル法）例えば戸−ニト０フェニル
エステル法１Ｎ−しド０＋シコハク酸イミドエステル法
１シアノメチルエステル法等１．ウッド９Ｔド試薬Ｋを
用いる方法、カルポジイミダリール法、醸化還元法、Ｄ
ＣＣ／アディティブ（例ＨＯＮＢ、　ＨＯＢｔ、　ＨＯ
５ｓｔ　）　　法などがあげられる〇 一般式（１）のペプチドは、一般のポリペプチドの合成
法、例えば末端アミノ酸に順次１個づつアミノ酸を縮合
させる所謂ステラづワイズ法為数個のフラグメントに分
けてカップリンクさせていく方法等に従い容易に製造で
きる。より詳細には上記ペプチドは、その結合の任意の
位置で２分される＋１ ２種のフラグメントの一方に相当する反応性カルボキシ
ル基を有する原料と、他方のフラグメントに相当する反
応性アミノ基を有する原料をペプチド合成の常套手段で
縮合させ、生成する縮合物が保護基を有する場合、その
保護基を常套手段で脱離させることにより製造し得る。

一般式（１）のペプチドを製造する反応工程でアルギニ
ンは通常保護しておくのが望ましい場合が多く、最終工
程としてはペプチドの構成アミノ酸残基の少なくとも一
つが保護された保護ぺづチドから保護基をすべて脱離す
ることにより製造しうる場合が多い。

原料の反応に関与すべきでない官能基の保護及び保護基
、並びにその保護基の脱離、反応に関与する官能基の活
性化などもまた公知のものあるいは手段から適宜選択し
得る。

原料のアミノ基の保護基としては、例えばカルボベ、ン
リ＋シ、ｔｉｒｅ−プチルオ士ジカルボニル−ｔａｒｔ
−アミ４１士ジカルボニル１イソボルニルオ士ジカルボ
ニル、ｔ−メト牛シベンジルオ士ジカルボニル−％２−
り０ル一ベシジルオキシカルボニル１アタマシチルオ士
シカルボニル−ト１ノフルオ０ア七チル為フタリル為ホ
ルミル１０−二トＯフェニルスルフェニル１ジフェニル
ホスフィノチオイルなどが挙げられる。カルボキシル基
の保護基としては、例えばアル牛ルエステル（例メチル
、エチル島づ０じル１ブチル、　ｔａｒｔ−づチルなど
のエステル基）１ベシジルエステＪし基−戸−二ト０ベ
ンジルエステル基Ｓｌ’−メト牛ジベンジルエステル基
１７１−りＯルベシジルエステル基−ベシズじドリルエ
ステル基、カルボベンリ＋シしドラシト基、ｔＩｒｔ−
プチルオ十ジカルボニルしドラシト基、トリチルしドラ
シト基等が挙げられる。

アルｆニンのタアニジノ基の保護基としては、例えばニ
ド０基、トシル基、戸−メト士シベ：Ｊｔ！ジスルホニ
ル基、カルボベンリ＋シ、イソボルニルオ士ジカルボニ
ル、アタマンチルオ士ジカルボニル等が挙げられる。ま
た、そのクアニジノ基は酸（例、ベンゼンスルホン厳島
トルニジスルホン酸、塩酸、硫酸など）塩の形で保護し
てもよい。

メチオニンはスルホ＋サイドの形で保護しておいてもよ
い。原料のカルボ＋シル基の活性化されたものとしては
、例えば対応する酸り０ライド、酸無水物又は混合酸無
水物、アジド、活性エステル（メチルアルコール１エチ
ルアルコール、ベンジルアルコール１ペンタク００フエ
ノール１戸−二ト。つエノール、ｙ−ｅＦａ＋シサクシ
ンイ！ド１Ｎ−しド０十ジベンズトリアリール−％Ｎ−
しド０＋シー５−ノルボルネン−２，３−ジカルボ士シ
イ三ド等とのエステル）等が挙げられる。ペプチド結合
形成反応は縮合剤（例：ジシク０へ士ジルカルボジイミ
ド、カルポジイミダリール等のカルボシイ三ド試薬、テ
トラエチル上０ホスフイト）の存在下に実施し得る場合
がある。

上記一般式（１）で表わされるぺづチドはより具体的に
は以下に示す方法に従い製造される。即ち一般式（１）
のペプチドのうち、Ｒが水素原子を示すぺづチドは下記
（１）に従い製造され、ＲがＨ−Ｐｋｚ　−暮を示すペ
プチドは下記（ＩＩ）に従い製造され、ＲがＨ−Ｌ　ｚ
　ｕ　−Ｇ　／　ｙ　−Ｐ　Ａ　ｚ−基を示すべづチド
は下記（２）に−基を示すぺづチドは下記（転）に従い
製造され１またＲがＨ−Ｍｅ　ｌ−５ｔｙ−Ｔｙｒ−Ａ
ｘｎ−Ｌｉｕ−Ｌｚｕ−Ｇｌ　ｙ　−Ｐｈｚ−基を示す
ペプチドは下記（７）に従い製造される。

（１）　　Ａ−Ｌｇ　ｕ−Ｇｌ　ｎ　−Ｂ（２） （４） Ｈ−Ｌｚｕ−Ｇｌ　ｎ−Ａｒｙ−５ｚｒ−５ｅｔ　−０
Ｎ（１）　　　　　　　　　　　　　　ＣＨ−Ｌｚｕ−
Ｇｉｎ−Ａｒｙ−５ｅｒ−５ｚｒ−ＯＮ（ｌｌ）Ｃ Ｈ−Ｐｈｚ−Ｌｔｕ−Ｇｌｎ−Ａｒｙ−５ｔｒ−５ｚｒ
−ＯＮＨ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ　−Ｐｈｚ　−Ｌｅｕ−Ｇｌ
ｎ−Ａｒ（１−５ｔｒ−５ｔｒ　−ＯＨＡ−Ｔｙｒ−Ａ
’ｘｎ−Ｌｚｕ−Ｌｚｕ−Ｇｌ　ｙ−Ｐｋｔ−Ｌｔｕ−
Ｇｌｎ　−Ｃ Ｈ−Ｔｙｒ　−Ａｓｎ−Ｌｅｕ　−Ｌａｙ　−Ｇｌｙ　
−Ｐｋｚ　−Ｌｔｕ−Ｇｌｎ−Ａｒｙ−５ｔｙ　−５ｐ
ｙ　−０Ｈ（７）Ｈ−Ｔ　ｙ　ｒ−Ａｓ　ｎ−Ｌｘ　ｕ
−Ｌｘ　ｕ−Ｇｌ　ｙ−ＰＡ　ｔ−１、。−Ｇｌｎ−Ａ
ｒｇ−５ｅｔ−５ｅｔ−ＯＲＰｈｚ−Ｌｔｕ−Ｃ；Ｉｎ
−Ａｒｇ−５ｅｔ−５ｔｒ−ＯＲＨ−Ｎｅｔ−５ｚｒ−
Ｔｙｒ−Ａｚｎ−Ｌｚｕ−Ｌｔｕ−Ｇｌｙ−Ｐｋｔ−Ｌ
ｘｕ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−５ｅｔ−５ｔｒ−ＯＲ（上記（
１）〜（Ｖ）において、Ａはアミノ基の保護基、Ｂは水
酸基又はカルボ中シル基の活性基ＳＣはアル平ニジのク
アニジノ基の保護基をそれぞれ示す０）Ｉｔペプチド（
２）とペプチド（３）との反応は、溶媒の存在下に行な
うことができる。溶媒としては、ぺづチド縮合反応に使
用し得ることが知られているものから適宜選択でき、例
えば無水または含水のジメチルホルムアミド１．ジメチ
ルスルホ牛シト、じリジン１り００ホルムＳ”ｌオ牛サ
シ）ジグ０ルメタン１テトラしドロフラン１酢酸エチル
１Ｎ−メチルじ０リドン）へ十寸メチルリン酸トリアミ
ド或いはこれらの混合溶媒等が挙げられる。ペプチド（
３）とペプチド（２）との使用割合としては特に限定さ
れず広い範囲内で適宜選択することができるが、通常前
者に対して後者を等量〜５倍量、好ましくは等量〜１．
５倍量使用するのがよい。反応温度はペプチド結合形成
反応に使用され得ることが知られている範囲から適宜選
択され１通常的−４０〜約６０℃、好ましくは約−２０
〜約４０℃の範囲から、適宜選択される。反応時間は一
般に数分〜３０時間程度である。

ぺづチド（５）とアミノ酸（６）との反応、ぺづチド（
８）とべづチド（９）との反応、ペプチドＱｌ）とペプ
チド（２）との反応及びペプチドＱ４とべづチドＱｆ９
との反応はいずれもペプチド（２）とペプチド（３）と
の反応と同様にして行なうことができる。゛ 上記縮合反応終了後、得られるペプチド（４）のＡ及び
Ｃの保護基は常法により離脱できる。斯かる方法として
は例えば液体アシ上ニア中での金属ナトリウムによる還
元方法を挙げることができる。

金属ナトリウムは、反応溶液がパーマネントブルーに３
０秒〜ｌＯ分間程度呈色しているような量で用いられる
。この還元は通常−４０〜−７ｅｔ程度にて行なわれる
。

ぺづチド（７）、ぺづチドＱＯ１ぺづチド（至）又Ｇま
ペプチドα６からの保護基Ａ及びＣの除去＆ま、ペプチ
ド（４）から保護基Ａ及びＣを除去する方法と同様にし
て行なわれる。

上記（１）において用いられるぺづチド（唱ま例えＧｆ
下記に示す方法により製造される。

Ｈ−５ｚｒ−ＯＲ” （至） Ａ−５ａｙ−Ｂ　　　　　　　　　Ａ−５ａｙ−５ｔｒ
−ＯＲ”Ｑη　　　　　　　　　　　　　　ａ嗜Ｈ−５
ｔｒ−５ｔｒ　−ＯＲ” （ホ） Ａ−Ａｒｙ−５Ｉｒ−５ｌｒ　−ＯＲ工翰 Ａ−Ａｒｑ−５ｚｒ−５ｚｒ−ＯＨ ・翰 （３） 〔上記においてＲｉ　　は低級アル牛ル基を示す。

ＪＸＢ及びＣは前記に同じ。〕 アミノ酸α力とアミノ酸（至）との反応１ま前記ぺづチ
ド（２）とペプチド（３）との反応と同様にして行なう
ことができる。

ペプチド翰のＡの保護基は常法番こより離脱できる。斯
かる方法としては、例え１還元的方法（例式ラジウム、
ｌ〜ラジウム黒等の触媒を用しする水素添加、液体アン
モニア中金属すトーノウムによる還元）Ｓアシドリシス
（例トリフルオロ酢酸、弗化水素、メタンスルホシ酸、
臭化水素酸等の強醗によるアシドリシス）等が挙げられ
る。例えば触媒を用いる水素添加の場合には、水素圧１
気圧、０〜４０℃にて行なうことができる。触媒の使用
量は通常１００１１１〜１ｆ程度でよく１一般に１〜４
８時間程度で反応は終了する。またアシドリシスの場合
には無溶媒下通常０〜３０℃程度、好ましくは０〜２０
°Ｃにて行なわれ、一般に１５分〜１時間程度で反応は
終了する。酸の使用量としては原料化合物に対し通常５
〜１０倍量程度とするのがよい。また液体アシモニア中
金属ナトリウムによる還元については既に上記で述べた
条件を採用できる。

ぺづナト翰とアミノ酸（ハ）との反応は前記ペプチド（
２）とペプチド（３）との反応と同様にして行なうこと
ができる。

ペプチド■を加水分解してペプチド（至）を得る反応は
例えに塩酸、硫酸等の鉱酸、水醸化ナトリウム、水酸化
カリウム等のアルカリの存在下水、メタノール１エタノ
ール、ジオ士サン等の溶媒中にて行なわれる。該反応は
通常２０〜５０℃にて３０分〜３時間程度で行なわれる
。

ペプチドに）から保護基Ａを除去する方法としては、例
えばパラジウム、パラジウム黒等の触媒を用いる水素添
加、アシドリシス等の方法を挙げることができる。これ
らの方法の条件としては既に上述した条件をいずれも採
用できる。

上記（ＩＩ）において用いられるぺづチド（５）はぺづ
チド（４）から保護基Δを除去することにより製造され
る。また同様にして上記（２）において用いられるペプ
チド（８）はぺづチド（７）から保護基Ａを除去するこ
とにより製造され、上記（転）において用いられるぺづ
チドａ１はペプチドα１から保護基Ａを除去することに
より製造され、上記（９）において用いられるペプチド
ａ４はぺづチド（至）から保護基Ａを除去することによ
り製造される。ペプチド（４）、ペプチド（７）、ペプ
チドα呻及びペプチド（２）から保護基Ａを除去する方
法としては例えばパラジウム１パラジウム黒等の触媒を
用いる水素添加、アシドリシス等を挙げることができる
。これらの方法の条件としては既に上述した条件をいず
れも採用できる。

上記（転）において用いられるペプチド（ロ）は例えば
下記に示す方法により製造される０ Ｈ＝Ｌｚｕ−ＯＨ工 （２） Ａ−Ａｘ　ｎ−Ｂ　　　　　　　　　　　　Ａ−Ａｘ　
ｎ−Ｌｘ　ｕ−ＯＲ工■　　　　　　　　　　　　　　
　　（ホ）−−−ｍ−ｔＨ−Ａ　ｘ　ｎ　−Ｌ　ｚ　ｕ
　−０７？工酷 曽 ↓ Ａ−Ｔｙｒ−Ａｓｎ−Ｌｘｕ−ＯＨ （２） 〔上記においてＲ”、滅Ｂ　及びＣは前記に同じ。〕？
・アミノ酸−とアミノ酸に）との反応及びぺづチド勃と
アミノ酸（２）との反応はいずれも前記ペプチド（２）
とペプチド（３）との反応と同様にして行なうことがで
きる。ペプチド（ホ）から保護基Ａを除去するには前記
ペプチドＱ（Ｉから保護基Ａを除去する方法をいずれも
適用できる。またペプチド翰を加水分解してペプチド曽
を得る反応゛は前記ペプチド四を加水分解してぺづチド
（至）を得る反応と同様の条件下に行なうことができる
。

ぺづチド四からペプチド斡を得る好ましい方法として例
えば混合酸無水物法、アジド法等を挙げることができる
。

混合酸無水物法では、適当な溶媒中塩基性化合物の存在
下アル牛ルハ０カルボン酸を用いて行なわれる。使用さ
れるアル＋ルハ０カルボン酸としては例えばり００蟻酸
メチル１プ〇七蟻酸メチル為り００蟻醗エチル１プｏＶ
、蟻酸エチル為りｏｏ蟻酸イソブチル等が挙げられる。

また塩基性化合物としては例えばトリエチルアミン、ト
リメチルア三シ為ピリジシ１．；メチルアニリシ１Ｎ−
メチルモルホリシ、１．５−ジアザピシクｏ　（４１３
ｔ　ｏ　）ノネ：Ｉ−５（ＤＢＮ）、１，５−ジアザじ
シフｏ　（５１４−Ｏ〕ウンデｔシー５　（ＤＢＵ）、
１．４−ジアザじシフＯ（２，２，２）オクタシ（ＤＡ
ＢＣＯ）　等の有機塩基、炭−カリウム、炭酸ナトリウ
ム、炭酸水素カリウム１炭醗水素ナトリウム等の無機塩
基が挙げられる。用いられる溶媒は混合酸無水物法に慣
用の溶媒がいずれも使用可能であり、具体的には塩化メ
チレジ１りｏｏホルム１シダｏｏエタン等のＩＳ　Ｏゲ
シ化炭化水素類１ベンセシ、トルエン、十シレシ等の芳
香族炭化水素類１ジエチルエーテル）テトラしド０フラ
ジＳ、；メト牛シエタシ等のエーテル類Ａ酢酸メチル１
酢酸エチル等のエステル類１Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムア
ミド為ジメチルスルホ士シト）へ牛すメチルリン酸トリ
ア三ド等の非づ０トシ性極性溶媒などが挙げられる。該
反応は−２０〜１００℃好ましくは一２０〜５０℃にお
いて行なわれ、反応時間は一般に５分〜１０時間好まし
くは５分〜２時間である。

アジド化法では、まず活性化されたカルボ士シル基、例
えばメチルアルコール為エチルアルコール、ベンジルア
ルコール等のアルコールで活性化されたカルボ牛シル基
にしドラ、；ン水和物を適当な溶媒中にて反応させれば
よい。用いられる溶媒としては例えばジオ十サン１ジメ
チルホルムア三ド、ジメチルスルホ＋シト又はこれらの
混合溶媒等を挙げることができる。しドラジン水和物の
使用量としては活性化されたｈルボ十シル基に対して通
常５〜２０倍モル量、好ましくは５〜１０倍モル量とす
るのがよい。該反応は通常ζ５０°Ｃ以下、好ましくは
一２０〜＼５０″Ｃにて行なわれる。

斯くして末端アミノ酸のカルボ＋シル基部分がしドラジ
ンで置換された化合物（しドラジン誘導体を製造し得る
。末端アミノ酸のカルボ牛シル基部分がアジドで置換さ
れた化合物は酸の存在下適当な溶媒中上記で得られるし
ドラジン誘導体と亜硝酸化合物を反応させることにより
製造される。酸としては通常塩酸が用いられる。溶媒と
しては例えばジオ＋サン、ジメチルホルムアミドＳジメ
チルスルホ＋シト又はこれらの混合溶媒等が挙げられる
。また亜硝酸化合物としては例えば亜硝酸ナトリウム、
亜硝酸イソアミル、塩化ニド０シル等を挙げることがで
き、斯かる亜硝酸化合物をしドラジン誘導体に対して通
常等上ルー２倍モル量、好ましくは等七ル〜１．５倍ｔ
ル量用いるのがよい。

該反応は通常−２０〜０°Ｃ１好ましくは−２０〜−１
０℃にて行なわれ、一般に５〜１０分程度で反応は終了
する。

上記のようにして製造された一般式（１）のペプチドは
反応混合物からぺづチドの分離手段例えば抽出、分配、
ｈラムダ０マドグラフイー等により単離精製される。

ＲＩＡ法において用いられる標識抗原の製造原料である
標識ぺづチドは上記で製造されるぺづチドに（，１等の
放射性ヨードを導入することにより製造される。該放射
性ヨードの導入は通゛常のヨード化法、例えばり０う三
ンＴを用いる酸化的ヨード化法（Ｆ、　Ｍ、Ｈｕｎｔｅ
ｒ　ａｎｄ　Ｆ、Ｃ０Ｇｒｚｔｎａｓｏａｄ　；　Ｎａ
ｔｕｒＩ、　１９４．　Ｐ４９５（１９６２）、Ｂｉｏ
ｃｋｚｍ、１０ｇ９．　Ｐ　１１４（１９６３）参照〕
により行なわれる。例えば上記ヨード化法は、適当な溶
媒例えば０．２Ｍリン酸緩衝液（ＰＨ−７，４）等の溶
媒中、り０う三ンＴの存在下室温付近にて１０〜３０秒
程度で行なわれる。用いられるペプチド、放射性ヨード
及びり０う三ンＴの使用割合としては、例えばチロシン
に放射性ヨードを１個導入する場合には、ぺづチド中に
含まれ″るチロシン分子１ナノ七ルに対して放射性ヨー
ドを１三りｆユーリー程度、り０う三ンＴをｌＯ〜１０
０ナノｔル程度用いるのがよく、またチロシンに放射性
ヨードを２個導入する場合には、ぺづチド中に含まれる
チロシン分子１ナノ七ルに対して放射性ヨードを２ミリ
士ユーリー程度、り０う三ンＴを１０〜１００ナノ七ル
程度用いるのがよい。斯くして製造される放射性ヨード
により標識化されたペプチドは通常の分離手段例えば抽
出、分配、カラムク０マドクラフイー、透析等により単
離精製される。

このようにして得られるペプチドは必要ならば凍結乾燥
させて保存しておくこともできる。

本発明方法においては、ハプテンとして上記一般式（１
）で表わされるペプチドを使用する。

八つテンに結合される担体としては、通常抗原の作成に
当り慣用される高分子の天然若しくは合成の蛋白質を広
く使用でき、例えば馬血清アルジミン、牛血清アルブミ
ン、ウサｆ血清アルプ三ン、人血清アルづ三ン１しツジ
血清アルブミン等の動物の血清アルプ三ン類、馬面清ジ
０プリシ、牛血清ジ０プリシ）ウサ千血清り０プリシ、
人血清り０プリン、ヒツジ血清ｌ）ｏづリン等の動物の
血清グ０プリシ類１馬チ０グ０プリシ１牛チ０グ０プリ
ン為ウサ４ｆｏジ０プリン、人チ０夕０づリン、しツジ
チ０り０プリン等の動物のチ０り０づリン類１馬へｒニ
ジ０じシ、牛へ七ジ０づリン１ウサｆへＶ：りＯプリン
、人へ七り０プリン）しツジヘ℃り０プリン等の動物の
へｒ：り０プリン類、動物のへ七シアニン類１回虫より
抽出された蛋白質（アスカ−リス抽出物、特願昭５４−
９２７８１号参照）、ポリリジン１ポリグルタミン酸１
リジシークルタエシ讃共重合９体、リジシ又はオルニチ
ンを含む共重合体等を挙げることができる。　　　　　
　　Ｂアスカ−リス抽出物について以下に詳述する。

アスカ−リス抽出物は、ブタ回虫（Ａｚｃａｒｉｚｚｕ
ｕｍ　）　　の粉砕物より通常の蛋白抽出法に従い抽出
される。抽出溶媒としては例えば水、生理食塩水、５０
％メタノールまたはエタノール水溶液、中性付近の緩衝
液等の公知の各種蛋白抽出溶媒を使用でき、特に生理食
塩水を用いるのが好ましい。

上記抽出物は、より具体的には、例えば次の如くして製
造される。即ちブタ回虫の内容物を除去し、生理食塩水
で洗浄後、抽出を容易とするため好ましくは細断し、該
細断物を例えば生理食塩水等の蛋白抽出溶媒中に添加し
、ホモジネートしながら抽出する。この抽出は通常低温
下において行なわれ、好ましくは約２〜１０℃で有利に
行なわれる。

かくして得られる抽出液を次いで遠心分離し、上清を採
取し透析液透析液を凍結乾燥するか又は更に上記透析液
を再度遠心分離し、上清を採取し、浮遊物を除去後凍結
乾燥することによって１目的とするアスカ−リス抽出物
が製造される。これは更に必要に応じて通常の蛋白精製
手段例えば透析法、ゲル濾過法、吸着法、り０マドグラ
フ法等により精製後、本発明に利用することができる。

また本発明に用いるアスカ−リス抽出物は、例えばＪ、
Ｉｍｍｕｎｏ、ＩＩｌ、２６０〜２６８（１９７３）、
Ｊ、Ｉｍｍｕｎ、。

１２２．３０２〜３０８（１９７９）、Ｊ、Ｉｍｍｕｎ
、、　９８゜８９３〜９００（＋９６７）及びＡｍ、Ｊ
、Ｐｋｙｘｉａｌ、。

１９９．５７５〜５７８（、＋９６０）に記載されたも
のまたはこれらを更に精製したものであってもよい０ハ
づテン−担体結合試薬としては通常抗原の作成に当り慣
用されているものを広く使用でき、具体的にはアミノ基
とアミノ基とを架橋結合させる、例えばタリオ士す−ル
、マロンジアルデヒド、クルタールアルデヒド、スクシ
シアルデヒド、アジポアルデしド等の脂肪族ジアルデヒ
ド類、チオール基とチオール基とを架橋結合させる）例
えばＮ、”　−’　−フエ：１７　：Ｊ　、７　？　Ｌ
’　イＥ　）　％　７ｖＩ”　−”　−’：フェニレシ
ジマレイ三ミドのシマレイミド化合物、″ｐ三ソノ基チ
オール基とを架橋結合させる、例えばメタマレイミドベ
シリイルーＮ−ヒト０牛シスクシンイミドエステル５４
−（マレイ三トメチル）−シフ０へ士サンー１−カルボ
＋シル−ｙ−しド０牛シスクシンイミドエステル等のマ
レイミドカルボ牛シルーＮ−ｅＦｏ＋シスクシンイ三ド
エステル化合物１ア三ノ基とカルボ士シル基とをアミド
結合させる通常のペプチド結合形成反応に用いられる試
薬、例えばＮ、Ｎ−シシク０へ士ジルカルボシイミド、
Ｎ−エチル−Ｎ′−ジメチルアエノカルボジイミド、ｌ
−エチル−３−ジイソづ０ピルアエノカルボジイ三ド、
ｌ−シフ０へ牛シル−３−（２−ｖ：ルホリニルー４−
エチル）カルボシイミド等のカルボシイミド類等の脱水
縮合剤を挙げることができるが、さらには−一ジアリニ
ウムフェニル酢酸等のシアリニウムアリールカルポジ酸
類と通常のべづチド結合形成反応試薬、例えば上記脱水
縮合剤とを組み合わせたものも使用可能である。

本発明の抗原は上記ハづテンと担体とを八づテ８〜９の
緩衝液中で０〜４０℃好ましくは室温付近で行なわれ、
約１〜２４時間、好ましくは３〜５時間で反応は完結す
る。上記において用いられる代表的緩衝液としては、次
のようなものを例示できる。

０．２Ｎ水醗化ナトリウム−０，２Ｍホウ醗−０．２Ｍ
塩化カリウム緩衝液、 ０．２Ｍ炭酸ｆト＠Ｊ’）Ｌ−０，２Ｍ＊’）ｍ−０，
２Ｍ塩化カリウム緩衝液、 ０．０５Ｍ四ホウ醗ナトリウムー０．２Ｍホウｌ？−０
，０５ＭＮ化ナトリウム緩衝液、 ０．１Ｍリン醗二水素カリウムー０．０５Ｍ西ホウ酸ナ
トリウム緩衝液 上記においてハプテン、八づテン−担体結合試薬及び担
体の使用割合は適宜に決定できるが、通常ハプテンに対
して担体を２〜６倍重量好ましくは３〜５倍重量、及び
ハづテシー担体結合試薬５〜１０倍七ルとするのがよい
。上記反応によりハづテン−担体結合試薬を仲介させて
担体とハプテンとが結合した本発明のペプチド−担体複
合体がら成るヒトβ型イシターフエ０シの抗原が収得さ
れる。反応終了後得られる抗原は常法に従い、例えば透
析法、ゲル濾過法、分別沈殿法等により容易に単離精製
できる。また該抗原は通常の凍結乾燥法により保存でき
る。かくして得られる本発明の抗原は、通常蛋白質１ｔ
ルに対しペプチドが平均５〜２０ｖニル結合したもので
あり、いずれも引き続き再現性よく、シトβ型インター
フエ０ンに対する特異性の高い抗体の作成を可能とする
ものであるが、特に上記蛋白質に対するぺづチドの結合
上ル比が１：８〜１５のものは、特異性が一層高く高力
価、高感度の抗体を作成し得るものであり好ましい。

上記で得られる抗原による抗体の作成に当っては、常法
に従い抗原を哺乳動物に投与し、生体内に産生される抗
体を採取する方法を採用できる。

抗体の製造に供せられる哺乳動物としては特に制限はな
いが、通常兎や℃ル七ットを用いるのが望ましい。抗体
の産生に当っては、上記により得られる抗原の所定量を
生理食塩水で適当濃度に希釈し、フ０イ、ドの補助液（
Ｃｏｍｐｌｅｔｅ　Ｆｒｚｕｎｄ’ｚＡｄｊｕｖａｎｔ
　）　　と混合して懸濁液を調整し１之を哺乳動物体に
投与すればよい。例えば兎に上記懸濁液を皮肉注射（抗
原の量として０．５〜５１１ｑＩ／回）し、以後２週間
毎に２〜１０ケ月好ましくは４〜６ケ月間投与し免疫化
させればよい。抗体の採取は、上記懸濁液の最終投与後
抗体が多量産出される時期、通常上記最終投与１〜２週
間経過後、免疫化された動物から採血し、之を遠心分離
後血清を分離採取することにより行なわれる。殊に本発
明方法によれば、用いる抗原の特殊性に基づいて、常に
安゛定してしトのβ型イシターフエ０シに対して非常に
優れた特異性を有し、高力価、高感度の抗体を再現性よ
く収得できる利点がある。

上記で得られるヒトβ型イシターフエ０シを不溶性支持
体上に固定化するに際しては、従来公知の生体物質の固
定化方法をいずれも使用でき、これらのうちでも臭化ジ
アジ活性化多糖体性を使用するのが好適である。この臭
化ジアジ活性化多糖体性は不溶性支持体を臭化ジアジで
処理し、′次いで得られる活性化物を生体物質と緩和条
件下にカ　　　９゛ツプリシクさせ、生体物質を固定化
する方法である。不溶性支持体を臭化ジアジで処理する
に当っては、例えば水酸化ナトリウム、炭酸水素ナトリ
ウム等の塩基性化合物を用いてｌ’Ｈ１１〜１２に保ち
室温下水、アセトニトリル等の溶媒中にて約１〜１２分
間程度処理すればよい。不溶性支持体に対する臭化ジア
ジの使用量としては通常およそ等門量とするのがよい。

ここで不溶性支持体とじては、生体物質一般に対する非
特異的吸着が低く、高い多孔性を有し、緩和条件下に生
体物質を固定化し得る官能基を有し、しかも化学的・物
理的に十分安定なものであれば従来公知の不溶性支持体
をいずれも使用でき、例えばア三ノエチルセル〇−ス、
カルボ士ジメチルセル０−ス、プ〇七アｔチルセル０−
ス、戸−アニリノセル０−ス等のセル０−ス糸支持体、
セファデックス、ＣＭ−セファデックス（ファルマシア
社製）等の架橋ダ十ストラシ系支持体、ｔフチ０−スフ
Ｂ１セファ０−フ４８ 等のツガ０ース糸支持体等を挙げることができる。

斯くして得られる臭化ジアジ活性化支持体を”ヒトβ型
インターフエ０シ抗体とカッブリジグさせるに際しては
、例えばヒトβ型イシターフェ０シ抗体に対して臭化ジ
アジ活性化支持体を３０〜８０倍重量用い、適当な溶媒
、例えば０．１　’ｔニル戻戻水水素ナトリウム　０．
５　１ニル塩化ナトリウム含有、１３Ｈ８．４＞水溶液
中、通常０〜４０℃程度、好ましくは２〜８℃にて約１
０〜２０時間反応させればよい。このようにして本発明
のアフィニティークロマドクラフィー用吸着体が製造さ
れる。この吸着体は適当な溶媒、例えば生理食塩水中に
て保存され得る。

また上記で得られるヒトβ型イシターフエ０ン抗体は、
上記の通り殊に優れたしトのβ型インターフエ０シ特異
性を有するものであり、斯界で要望されているＥＩＡ法
によるしトのβ型イシターフェ０シの定量を高精度をも
って可能とする有用なものである。また該抗体は、これ
に酵素または螢光物質で標識することによってエンザイ
ムイムノアツセイ（ＥＩＡ）法、フ０−レツｔシスイム
ノアッｔイ（ＦＩＧ）法等に使用できる。さらに該抗体
は公知の不溶化させる物質と反応させて不溶化抗体とす
ることもできる。

、　　　”−″ 以下本発明を更に詳しく説明するための参考例及び実施
例を挙げるが、本発明はこれに限定されるものではない
。

尚参考例におけるＲｆ値はシリカゲル上の薄層り０マド
タラフイーにて下記混合溶媒を用いて測定したものであ
る。

Ｒｆ　　・・・１−ブタノール−酢酸−水（４：１：５
）■ Ｒｆ　　・・・１−ブタノールーヒリジンーｇ［−水（
１５：１０：３：１２） 〈ペプチドの合成〉 参考例！ ず梗 Ｚ−５ｔｒ−５ｔｒ　−ＯＭｚ　ｆ）製造Ｚ−！ｙｒ−
ＮＨＮＨ２５，Ｑ　６ｆを５０ｍ１のジメチルホルムア
ミドおよび６．６６＋ｗｌの６　Ｎ　−ＨＣＩ　／　、
；オ＋サンに溶解し、−１５℃に冷却後イソアミルすイ
トライト２．６８ｓ＋ｊを加え、５分間攪拌する。

次いで５．６０ｇ／のトリエチルアミンを加えて中和す
る。この溶液をＨ−５ｚｒ−ＯＭｚ−ＨＣＩ３，１１　
ｆとトリエチルアミン２．８０ｇ＋／を含有する３０耐
のジメチルホルムアミド溶液に加え、４℃で２０時間攪
拌する。ジメチルホルムアミドを留去し、得られた残留
物を酢酸エチルで抽出し、水洗後芒硝で乾燥する０酢酸
エチルを留去後）エーテルを加え結晶化し、再沈殿を酢
酸エチル−エーテルで行ない、Ｚ−５ｚｒ−５ｚｒ　−
Ｏｕｇ　　３．７５　ｆを得る。

Ｒｆ値＝０．６今、Ｒｆ値：０．７？ 元素分析値（ＣＬ５Ｈ２゜Ｎ２０７として）ＣＨＮ 計算値（％”）　　５２，９４　　５．９２　　８．２
３実測値（幻　５２．６７　　５，８９　　８．３５参
考例２ Ｚ−Ａｒｑ（Ｔａｇ）−５ｚｒ−５ｔｒ−ＯＭｚの製造
Ｚ−５ｔｒ−５ｔｒ　−０ｕｔ　　２．５　ｆを５０ｍ
１のメタノール及び７．３４ｇ／のＩ　Ｎ　−ＭＣＩに
溶解し、５００哩のパラジウム黒の存在下２０℃、水素
圧１気圧で接触還元を行ナイ、Ｈ−５ｚ　ｒ−５ｚ　ｒ
　−０Ｍｇ　を得るＯＲｆ値？０．０８ Ｚ　’、−Ａｒｇ（Ｔｏｓ　）　−ＯＨ３，３９９を４
０ｍ１のテトラしドロフラン及び０．７５ｍ＋／のＮ−
メチル七ルホリシに加え、−１５℃に冷却後０．９７−
のイソプチルク００ホルメイトを加え３０秒間激しく攪
拌する。

上記テｆｌ　ラｈルＨ−５ｐｙ−５ｉｒ−Ｏｈｈ、ＨＣ
Ｉ　Ｓ＝；　メチルホルムアミド２ｏ寓／及びトリエチ
ルアミンＬＯ３ｍｌを加えて１分間攪拌し、次いでｏ　
’ｃで５分間、４０℃で２分間、室温で１５分間それぞ
れ攪拌する。テトラしドロフラン及びジメチルホ′ルム
アミドを留去後酢醗エチルで抽出し為ＩＮ−りＩシ酸で
３回、次いで水で５回洗浄後芒硝で乾燥する。溶媒を留
去し、メタノール−酢酸エチル、エーテルで再沈殿を行
ない、Ｚ−Ａｒｙ（Ｔａｘ　）−５ｅｔ−５ｚｒ　−Ｏ
ｕｇ　　３，６５９を得る。

Ｒｆ　　値：　０．５　Ｉ、Ｒｆ”値：０．７３元素分
析値（’２５１Ｈ３６Ｎ６’□。Ｓとして）ＣＨ’　　
　＃ 計算値（％）　　５１．６８　５．８８　　Ｊ２．９Ｊ
実測値（％）５１，６２　５．８２　１２．７３参考例
３ Ｚ−Ａｒｇ（Ｔａｘ　）−５ｔｒ−５ｔｙ　−ＯＨＣ７
）製造Ｚ−Ａｒｇ（Ｔａｘ）　−５ｅｒ−５ｔｒ−Ｏｕ
ｇ　　３，５　ｆをメタ）−ル５０ｍ１及び水ＩＣ）ａ
ｔに溶解し、ｌ　Ｎ　−ＮａＯＨ８，０６＋ｗ／を加え
、室温下に４５分間攪拌し、次いでＩ　Ｎ−ＭＣＩ　７
．２４簿ｌを加えて中和し、メタノールを留去後ｎ−ブ
タノールで抽出する。水洗後ｎ−ブタノール及び水を留
去し、残渣にエーテルを加え結晶化し、メタノール−酢
酸エチルより再沈殿を行ない、Ｚ−Ａｒ　ｇ　（ＴＯｘ
　）−５ｔ　ｒ−５ｔ　ｒ　−ＯＲ２，６Ｑｆを得る。

Ｒｆ値：０．２Ｂ、Ｒｆ　Ｉｔ値；０．５７元素分析値
（Ｃ２ワＨ３６Ｎ６０工。Ｓ・％Ｈ２０として）ＣＨＮ
　　　　　　　　イ窄 計算値（％）　　５０，２２　５．７７　１３．０２★
測値（幻　５０．２今　５．６２　１３．２０参考例４ Ｈ−Ａｒｙ（Ｔａｘ）−５ｚｒ−５ｅｒ−ＯＨの製造Ｐ
ｄ存在下２０℃、常圧にて接触還元してＨ−Ａｒｇ（Ｔ
１７ｓ　）−８Ｉｒ−５ｔｙ−ＯＲを得る。

Ｒｆ値：０．０３４ 参考例５ ２−Ａｒｇ−Ｌｔｕ−ＯＥＩ　（７）製造Ｚ−Ａｘｎ　
−ＯＮ　　５．３２ｆｔｔテト５シトＯ”）ラン６０ｍ
＋Ｚ％ジメチルホルムア！ド１０鱈ｌ及びＮ−メチルセ
ルホリシ２．０＋１１Ｉｔに溶解し、イソプチルク００
ホルメイト２．６４１１１　Ｓ／／−Ｌｘ　ｕ−ＯＥ　
／　−ＥＣ１３，９１Ｆ及びトリエチルアミン２．８０
ｇ／を含む４Ｃ）ｔｌのジメチルホルムアミド溶液を用
い、参考例２の方決に準じて反応を行なう。溶媒を留去
後１モルクエン酸水溶液を加え、沈殿物を炉取、水洗、
減圧乾燥して、酢酸エチルにて再結晶してＺ−Ａｚｎ−
Ｌａｗ−ＯＥｔ　　６．　ｌ　ｌを得る。

Ｒｆ値：０．７１、Ｒ１値：　ｏ、ｓ　Ｏ元素分析値（
Ｃ２♂２９Ｎ３０６として）ＣＨＮ 計算値（％）　　５８．９５　７．１７　１０．３１実
測値（％）　　５８，９９　７．２３　１０．２６参考
例６ Ｚ−Ｔｙｒ−Ａｓｎ−Ｌｚｕ−ＯＥｔの製造Ｚ−Ａｚｎ
−Ｌｔｕ−ＯＥ１３．Ｑ　ｌ　ｆをメｕｌ）−７１１５
０ゴ及びＩ　Ｎ　−ＭＣＩ　７．４　ｍｌに溶解し、パ
ラジウム黒５００４の存在下室温、常圧にて接触還元を
行ない、Ｈ−Ａｘ　ｎ−Ｌｇ　ｕ−ＯＥＩ　−ＨＣｌを
得る。

Ｒｆ値：０．２６ 上記”Ｃ’　得うｈ　６　Ｈ−Ａｘ　ｎ−Ｌｔ　ｂ−Ｏ
Ｅｌ−ＥＣＪ　ｆｔ　＝、　、！チルホルムアミド５ｏ
Ｍｔ及びトリエチルアミン１．０３＊／に溶、解し、次
ニ２−Ｔ　ｙ　ｒ−ＯＮＮＳ　　３．３５　ｆを加え、
室温下に２０時間放置する。ジメチルホ沈殿してＺ−Ｔ
ｙｒ−Ａｚｎ−Ｌｔｕ−ＯＥｔ　３．５８　ｆ　’ｌｔ
得；Ｓ。

Ｒ／値：０．７３、Ｒ／値：０．８２ 元素分析値（Ｃ２９Ｈ３５１Ｎ４０１！ｌとして）ＨＮ 計算値（％＞　　６１．０４　６．７１　９．８２実測
値（％）　　６０，８４　６，７０　９．３９参考例７ Ｚ−Ｔｙｒ−Ａｚｎ−Ｌｔｕ−ＮＨＮＨ２ノ製造Ｚ−Ｔ
ｙｒ−Ａｘｎ−Ｌｔｕ−ＯＥｔ　２，７３　ｆをｊ９）
−Ｌノールにて洗浄してＺ−Ｔｙ　ｒ−Ａｘ　ｎ−Ｌｔ
　ｕ　−ＮＨＮＨ２３，１０ｆを得る。

Ｂｔ　Ｉ値：０．５６、　Ｒｆ］１値：０．７５元素分
析値−（Ｃ２７Ｈ３６Ｎ６０７として）ＣＨＮ 計算値（％）　　５８，２６　６．５２　１５．１０実
測値（％）　　５７，９１　６．５６　１５．１２実施
例１ （ａ）　　Ｂｏｃ−Ｌｔｕ−Ｇｉｎ−Ａｒｙ（Ｔａｘ）
−５ｔｙ−５ｉｒ　−０１１の製造 ＢｏＣ−Ｌｔｕ−Ｇｉｎ　−ＯＨＱ、ｇ　４　ｆをテト
ラしドロフラン３Ｃ）ｍｌ及びＮ−メチル七ルホリン０
．２４ｍ１に溶解し、イソづチルクロ０ホルメイト０．
３１履Ｉを用い、参考例２の方法に準じて行なう。テト
ラし酸で洗浄後ブタノールを留去し、メタノール−酢酸
エチルで再沈殿してＢａｔ−Ｌｔｕ−Ｇｉｎ−Ａｒｇ（
Ｔａｘ）−５ｉｒ−５ｚｒ　−ＯＨ１，５４ｊ’ヲ得ル
。

Ｒｆ値：０．１８、Ｒｆ値：０．５７ 元素分析値（Ｃ３５Ｈ５７Ｎ９０．、Ｓ−Ｈ２Ｏトリ−
ｃ　）ＣＨＮ 計算値（％）　　４８．７７　６．９０　１４．６２実
測値（％）　　４８．７６　６．６１　１４．７８（ｂ
）　　Ｈ−Ｌｔｕ−Ｇｉｎ−Ａｒｙ−５ｚｒ−５ｔｒ−
ＯＨノ製造Ｂｏ　ｃ−Ｌｚ　ｕ−Ｇｌ　ｎ−Ａｒｑ　（
Ｔｏ　ｚ　）−５ｔ　ｒ−５ｔ　ｒ　−０Ｈ１，５０ｆ
を１０＊／のトリ’７　ＪＬ、オ０酢酸中１５分間室瀉
で放置して脱Ｂａｔ化し、乾燥エーテルを加えて結晶化
し、Ｈ−Ｌｚｕ−Ｇｉｎ−Ａｒｙ（Ｔａｘ）ＬＳｚｒ　
−５ｔｒ−ＯＲを得る。Ｒｆ値：０．０４上記で得られ
るＨ−Ｌｔｕ−Ｇｌ　ｎ’−Ａｒｇ（Ｔａｘ　）、−５
ｚｒ−５ｚｒ−ＯＮを液体アンモニア２５ｍ１に溶解し
・金属すトリウムのタルを加える。反応液が青色を呈し
たとき、乾燥塩化アン七ニウム１ｇを添加し、次いでア
ンモニアを留去する。残渣を５０％酢酸に溶解し、セフ
ァデックスＧ−１０（２，２Ｘ８５１、溶出液５０％酢
酸）、さらにＬＨ−２０（２，２Ｘ８０α、溶出液０．
００１　Ｎ−ＨＣｌ　）にてゲＪＩＦ濾過し、精製して
Ｈ−Ｌｚｕ−Ｇｌ　ｎ−Ａｒｆ−５ｉｒ　−５ｚｒ−Ｏ
Ｈを得る。

Ｒｆ値：　０．０＋、　Ｒｆ値：０．３４（ｃｖ）　　
：　−４２，５°ＣＣＯ，２５０，０，００１Ｎ−ＭＣ
Ｉ　）元素分析値（Ｃ２３Ｈ４，Ｎ９０９．４　Ｎ２０
．　、ＣＨ，Ｃ０ＯＨとして）ＣＨＮ 計算値（％）今１．６０　７．６８　１７．４６実測値
（％）　　４１．２０　７．９３　１７．９１実施例２ （ａ）　　Ｚ−Ｐｋｔ−Ｌｔｕ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ（Ｔａ
ｘ）　−５ｅｔ−５ｔｒ　−ＯＮの製造 実施例１）”ｔ’得られるＨ−Ｌｚｕ−Ｇｌ　ｎ−Ａｒ
ｙ（Ｔｔｙｚ　）−５ｔｙ−５ｔｒ　−ＯＮ　　をジメ
チルホルムアミド３０ゴ及びトリエチルアミン０．２４
　ｇ／に溶解し、次いでＺ−Ｐｋｖ　−０ＮＨ５Ｑ、　
７７　ｆを加え、室温で２０時間放置する０ジメチルホ
ルムアミドを留＊後残渣をブタノールにて抽出し、２％
酢酸で洗浄する。ブタノール層を濃縮し、エーテルを加
えて結晶化し、得られた結晶を戸数し、熱エタノールよ
り結晶を洗浄してＺ−Ｐｋｅ−Ｌｚｕ−Ｇｉｎ−Ａｒｇ
（Ｔｏｅ）−５’Ｊｒ　−５ｚｒ−ＯＮ　１．４０　ｇ
を得る。

Ｒｆ値：０．２２、Ｒｆ値：０．５９ 元素分析値（Ｃ４７Ｈ６４Ｎ工。Ｏ工４Ｓ−Ｎ２０とし
て）ＣＨＮ 計算値（％）　　５４，１２　６．２８　１３．４３実
測値（％）　　５４，４２　６．３８　１３．８４（ｂ
）　　Ｈ−Ｐｋｚ−Ｌｔｕ−Ｇｉｎｌ−Ａｒｙ−５ｔｒ
−５ｚｒ−ＯＲの製造 Ｚ−Ｐｈｚ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ（Ｔａｘ）−５ｚ
ｒ−５ｚｒ−ＯＮ２０ＩＩｆを液体アシ七ニア中金厨ナ
トリウム片にて実施例１（ｂ）と同様の方法で脱Ｚ化、
脱Ｔｅｒａ化し、ｔファｙ”７クスＧ−１９、（２，２
Ｘ８５ｃＩＩＩ、溶出液１０％酢酸）、さらにＬＨ−２
０（２，２Ｘ　８０ｎｌｓ　　　　　’溶出液０．００
１　＃　−ＨＣＯによるゲル濾過で精製してＩＩ−Ｐｋ
ｔ−Ｌｅｓｔ−Ｇｉｎ−Ａｒｙ−５ｅｔ、−５ｚｒ　−
ＯＨｌ’　２岬を得る。

Ｒｆ値：　０．０１　、Ｒｆ”値：０．３５（ａ）　　
　ニー３７．３６Ｃ００，２４９，０，００１Ｎ−Ｈ（
４） 元素分析値（Ｃ３２Ｈ５２Ｎ工。Ｏ工。・７　Ｎ２０．
ＣＨ，Ｃ００Ｎとして） ＨＮ 計算値（％）　　４４．２４　７．６４　１５．１７実
測値（％）　　４４．２７　　？、１０　１５．６０実
施例３ （ａ）　　Ｚ−Ｌｚｕ−Ｇｌｙ−Ｐｋｚ−Ｌｚｕ−Ｇｉ
ｎ−Ａｒｙ（’ｒｙｚ）　−５ｚｒ−５ｚｒ−ＯＨの製
造 Ｚ−Ｌ　ｚ　ｕ　−Ｇ　ｌ　−ｙ　−ＮＨＮＨ２Ｑ、　
３９　ｆをジメチルホルムア三ド５　ｍｌ及び６　Ｎ　
−ＨＣ１／″：１１士サン０．５８ｄに溶解し１イソア
ミルナイトライド０−１５ｇ／ｓトリエチルア三シ０．
４９ｗｔ１及びＨ−Ｐｋｅ−Ｌｔｕ　−Ｇｌｎ−Ａｒｙ
（Ｔａｘ）−５ｔｒ−８ｔｒ　−ＯＨｌ、Ｑ　Ｑ　ｆの
ジメチルホルムアミド３０ｇ／溶液を用いて参考例■と
同様に反応を行ない、さらにＺ−Ｌｅｓｔ−Ｇｌｙ　Ｎ
３を当量加えて４℃にて２０時間反応を行なう。ブタノ
ールで抽出し、２％酢酸で洗浄後ブタノール及び酢酸を
留去し、エーテルを加えて結晶化する。

結晶を枦取して熱メタノールにて結晶を洗浄し、Ｚ−Ｌ
ｚｕ−Ｇｌｙ−Ｐｈｚ−Ｌｚｕ−Ｇｌ　ｎ−Ａｒｇ（Ｔ
ａｘ　）−５ｚ、ｒ−５ｚｒ　−ＯＨＯ，６５ｆを得る
。

Ｒ／値ｉ０．１９、Ｒｆ値：０．６０ 元素分析値（Ｃ５５Ｈ７８１′１．２’よ、Ｓ、Ｎ２０
として）ＣＨＮ 計算値（％）　　５４，４４　６．６４　１３．８５実
測値（％）　　５４．７４　６．６ｊ１３．９８（ｂ）
　　Ｈ−Ｌｔｕ−Ｇｌｙ−Ｐｋｚ−Ｌｚｕ−Ｇｉｎ−Ａ
ｒｙ−５ｉｒ−５ｚｒ−ＯＨの製造 Ｚ−Ｌｔ　ｕ−Ｇｌ　ｙ　−Ｐｈ　ｔ−Ｌｔ　ｕ−Ｇｌ
　ｎ−Ａｒ　ｑ　（Ｔｏ　ｚ　）−５ｔ　ｒ−５ｔｒ　
−ＯＨ’ｌ　Ｑ　１１５１を実施例１（ｂ）と同様の方
法で脱Ｚ化、脱Ｔｏｓ化し、ｔファデックス（１；−１
０′″＝（２，２Ｘ８５ｃＩＩＩ、溶出液１０％酢酸）
、さらにＬＨ−２０Ｃ２，２×８０ＣＩＩｌ、溶出液０
．０ＯＩＡ’−ＨＣｌ）によるゲル濾過で精製してＨ−
Ｌｔｕ−Ｇｌｙ−Ｐｈｔ−Ｌｔｕ−Ｇｌｎ−Ａｒｙ−５
ｚｒ−５ｚｒ−ＯＨｌ　ｌ　ｑを得るＯ Ｒｆ値：　０．０１、Ｒｆ値：０．４０〔山〕２０ニー
２７．６°ＣＣＯ，２２８，０，００１Ｎ−ＭＣＩ　）
元素分析値（Ｃ４゜Ｈ６６Ｎ工、Ｏ工、・６　Ｈ２０，
ＣＨ３ＣＯ０Ｈとして） ＣＨＮ 計算値（％）　　４６．９２　７．６８　１５．６３実
測値（％）　　４６．８９　７．２５　１５．５１実施
例４ （ａ）　　／／−Ｔｙｒ−Ａｚｎ−Ｌｔｕ−Ｌｔｕ−Ｇ
ｌｙ−Ｐｋｔ−Ｌｚａｚ　−Ｇｌ　ｎ−Ａｒｙ（Ｔａｘ
　）−５ｔｒ−５ｅｔ−ＯＲの製造Ｚ−Ｌｚｕ−Ｇｌ　
ｙ−Ｐｈｚ−Ｌｅｕ−Ｇｌ　ｎ−Ａｒｇ（Ｔａｘ　）　
−５ｚｒ−５ｚｒ　−ＯＨ６００ｑを）９）−ＪＬＩ５
０ｍ１／及び１０％酢酸１０　ｍｌに溶解しパラジウム
５００１１ｇの存在下室温常圧下にて接触還元を行ない
Ｈ−Ｌｚｕ−Ｇｌ　ｙ−Ｐｋｚ−Ｌｔｕ−Ｇｌ　ｎ−Ａ
ｒｙ（Ｔａｘ　）−５ｚｒ−５Ｉｒ　−ＯＨを得る。　
Ｒｆ値：Ｏ，Ｉｇ Ｚ−Ｔｙｒ−Ａｘｎ−Ｌｚ（、ｕ−ＮＨＮＨ２４２Ｑｑ
ｌをジメチルホルムアミド５ＩＩｄ及び６Ｎ　＋＋　Ｈ
ＣＩ　／ジオ＋寸ン　　７”０．３７ｍに溶解し、イソ
ア三ルナイトライト０、、ＩＯｇ／及び）　！Ｊ　工ｆ
　Ｊｌ／　７　Ｅ　：／　０．．３１　ｍｌ　ヲ用い、
参考例１の方法に準じてアジド体を生成させ、この溶液
をＨ−Ｌｔｕ−Ｇｌ　ｙ−Ｐｋｚ−Ｌｚｕ−Ｇｌ　ｎ−
Ａｒｙ（Ｔａｓ　）−５ｚｒ−５ｔｒ−ＯＨのへ＋サメ
チ１１．リン酸トリア三ドＩＯｇ／とジメチルホルムア
ミドＩｏＩＩ／の混合溶液に加え、４℃にて２０時間攪
拌する。ジメチルホルムアミドを留去して、残渣をブタ
ノールで抽出し、２％酢酸で洗浄後ブタノールを留去Ａ
ｒｙ（Ｔｏｓ　）−５ｔ、ｒ−５ｚｒ−ＯＨヲメタ）　
−ＪＬ、　３０　、／及び１０％酢酸１０＋／に溶解し
、室温、常圧にてパラジウムの存在下に接触還元した後
ｔファデックスＧ−２５（３ＸＩ２０３、溶出液５０％
酢酸）にてゲＬ　ｉｌ）”ｉ過してＨ−Ｔｙｒ−Ａｓｎ
−Ｌｚｕ−Ｌｚｕ−Ｇｌ　ｙ　−Ｆｉｒｅ−Ｌｚｕ−Ｇ
ｌ　ｎ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ　）−５ｉｒ−５ｅｔ−ＯＨ６
５０岬を得る。

Ｒｆ値：０．０５、Ｒｆ値：０．５３ 元素分析値（Ｃ６６Ｈ９８Ｎ♂６０工、Ｓ・２Ｈ２０と
して）ＣＨＮ 計算値（％）　　５３，２８　６．９１　１５．０６実
測値（％”）　　５３，１０　６．４３　１４．８４（
ｂ）　　Ｈ−Ｔｙｒ−Ａｓｎ−Ｌｚｕ−Ｇｌｙ−Ｐｈｉ
−Ｌｔｕ−Ｇｉｎ−Ａｒｑ、−５ｔｒ−５ｚｒ−ＯＨ（
Ｄ製造 上記（ａ）で得られるＨ−Ｔｙｒ−Ａｓ　ｎ−Ｌｚｕ−
Ｌｚｕ−Ｇｌ　ｙ−Ｐｈｔ−Ｌｔｕ−Ｇｌ　ｎ−Ａｒｑ
（Ｔｏｓ　）−５ｔ　ｒ−５ｚｒ　−ＯＲ・を実施例ｔ
　＜ｂ＞と同様の方法で脱Ｔｏｓ化し、ｔファデックス
Ｇ−１０（２，２Ｘ８５ｃＩＩＩ、溶出液１０％酢酸）
、さらニＬＨ−２０（２，２Ｘ８０ＣＭ％０．００１　
Ｎ−ＭＣＩ　＞によるゲル沖過で精製してＨ−Ｔｙｒ−
Ａｓｎ−Ｌｚｕ−Ｃ１ｙ−Ｐｈｉ−Ｌｚ、ｕ−Ｇｌｎ−
Ａｒｙ−５ｔｒ−５ｔｒ−ＯＨ９ｑを得る。

ＲｙＩ値　：　　０．０＋Ｓ　Ｒ１”値　：０．４２〔
出）　　　ニー２４．３°ＣＣＯ，０７８、Ｏ，０ＯＩ
Ｎ−１１ＣＩ　）元素分析値（Ｃ５９Ｈ９２Ｎ□。Ｏ工
、、　１５　Ｒ２０，ＣＨ３ＣＯ０Ｈとして） ＣＨＮ 計算値（％）　　４５．０１　　？、８０　１３．７７
実測値（％）　　４５．２１　７．３１　１４．２２実
施例５ （ａ）　　Ｚ−Ｍｚｌ−５ｔｒ−Ｔｙｒ−Ａｓｎ−Ｌｔ
ｕ−Ｌｔｕ−Ｇｌｙ　−Ｐｈｇ−Ｌｔｕ−Ｇｌ　ｎ−Ａ
ｒｑ（Ｔａｘ　）−５ｔｒ−５ｚｒ−ＯＨの製造 Ｚ−Ｍ、１−５ｔ’ｒ−ＮＨＮＨｌ　５９　ｑ／をジメ
チＪＬ、ホルムアミド５　ｍｌ及び６Ｎ、ＨＣ４／ジオ
＋サン０．２１Ｍ／に溶解し、イソア三ルナイトライト
０．０５５ｍ１及゛びトリエチルアミン０．１７ｇ／を
用いて参考例１の方法に準じてアジド体を生成させ、次
いでこの溶液をＨ−Ｔｙ　ｒ−Ａｓ　ｎ−Ｌｘ　ｕ−Ｌ
ｘ　ｕ−Ｇｌ　ｙ−Ｐｋｔ−Ｌｘ　ｕ　−Ｇｌｎ−Ａｒ
ｇ（Ｔａｘ）−５ｔｙ−５ｚｒ−ＯＨ３Ｑ　Ｑ　Ｉｌｇ
、ジメチルホルムアミド５　ｍｌ　及びへ十すメチルリ
ン酸トリアミド５譚ｌの混合溶液に加え、４°Ｃにて２
４時間攪拌する。さらにＺ−Ｎｅｔ−５ｅｔ−ＮＨＮＨ
２ヲ３１８１１ｖ加え、４°Ｃにて７２時間攪拌する。

実施例４（ａ）と同様にして精製を行ない、Ｚ−Ｈｚ　
ｔ　−５ｔ　ｒ−Ｔｙｒ−Ａｚｎ−Ｌｚｕ−Ｌｔｕ−Ｇ
ｌ　ｙ−Ｐｋｚ−Ｌｚｕ−Ｇｌ　ｎ　−Ａｒｙ（Ｔｏｓ
）−５ｔｒ−５ｚｒ−ＯＮを得る。

（ｈ）　　Ｈ−Ｍｅｔ−５ｚｒ−Ｔｙｒ−Ａｓｎ−Ｌｚ
ｕ−Ｌｚｕ−Ｇｌｙ　−Ｐｋｚ−Ｌｘ　ｕ−Ｇｌ　ｎ−
Ａｒｇ−５ｔ　ｒ−５ｔ　ｒ　−ＯＮ　（７）製造上記
（ａ）で得られるＺ−Ｈｚ　１−５ｔ　ｒ−Ｔｙ　ｒ−
Ａｘ　ｎ−Ｌｘ　ｕ＝Ｌｚ　ｕ−Ｇｌ　ｙ−Ｐｉｔ−Ｌ
ｘ　ｕ−Ｇｌ　ｎ−Ａｒｇ、（Ｔｏ　ｘ　）−５ｔ　ｒ
　−５ｚｒ　−ＯＲを実施例１　（ｂ）と同様の方法で
脱Ｚ化、脱Ｔａｘ化を行ない、ｔファデックスＧ−２５
Ｃ３Ｘ１２（１１１、溶出液５０％酢酸）、さらにＬＨ
・−２０（２Ｘ８５ｃ！ＩＩ、溶出液０．００１Ｎ−Ｈ
ＣＩＩ　）にて精製し、Ｈ，−Ｍｅ　ｔ−５ｔｒ−Ｔｙ
ｒ−Ａｘｎ−Ｌｚｕ−Ｌｚｕ−Ｇｌ　ｙ−Ｐｈｔ、−Ｌ
ｚｕ−Ｇｌｎ−Ａｒｙ−５Ｉｒ−５ｔｒ−ＯＨＩ　Ｉ　
９ｑを得る。

Ｒｆ値：　０．０１、Ｒｆ値：　０．４５（ｄ、）２０
　：　　−１５，７°（ＣＱ、２５今、０．００１Ｎ−
ＭＣＩ）元素分析値（Ｃ６７Ｈ工。６Ｎ工８’２゜Ｓ、
　５　Ｒ２０，ＣＨ３ＣＯ０Ｈとして） ＣＨＮ 計算値（％）　　４９．７５　７．２６　１５．１３実
測値（％）　　４９．８０　６．９２　１４．９１アミ
ノ酸分析値 Ａｌｌ：　　０．９５、Ｓｔｒ：３．１５、Ｇｌ　ｎ　
：　１．０３、Ｍｅｔ：　０．９２、Ｇｌｙ：１．０５
、Ｌｚｕ：３．０８、ＴＦｒ：　　１．００、Ｐｈｉ　
：Ｑ、　９８、Ａｒｔ：０．９６く抗原の製造〉 実施例６ 上記実施例Ｉ　Ｃｂ）で得られるペプチド（以下「ぺづ
チドＡ」と略記する）ｌｏＩｌＦ及び牛血清アルづミシ
（以下「ＢＳＡ」と略記する）５０ｇＩｇを酢酸アｙｆ
ニウム緩衝液（０，Ｉｖニル、／’Ｈ７，０）　２ｍｌ
にとかす。この溶液に０．１ｔルのタルタールアルヂし
ド溶液０．１１ｇ／を加え、室温で５時間攪拌する。そ
の後反応混合物を４８時間、４°Ｃで水１４で透析する
。透析中５回水を交換する。その後、ぺづチドー蛋白質
複合体を含有する溶液を凍結乾燥してしトβ型インター
フエ０ン抗原（以下「抗原Ｉ」と略記する）４５ＩＩＩ
Ｉを得る０実施例７ 上記実施例２（ｂ）で得られるペプチド（以下「ペプチ
ドＢ」と略記するン５呼及びＢ５Ａ２５ｑ／を酢酸アン
モニウム緩衝液（０，１ｔル、戸＃７．０）２　ｍｌに
とかす。この溶液に０．１モルのタルタールアルデヒド
溶液０．１１ｇ／を加え、室温で５時間攪ドー蛋白質複
合体を含む溶液を凍結乾燥してしトβ型インター２工０
：Ｊ抗原（以下「抗原罵」と略記する）２３Ｗを得る。

実施例８ 上記実施例３（ｂ）で得られるぺづチド（以下「ペプチ
ドＣ」と略記する）４ｑ及びＢ５Ａ１５ｑを酢酸アシ七
ニウム緩衝液（０，１ｔル、戸／／７．０）２漏ｌにと
かす。この溶液に０．１七ルのタルタールアルデヒド溶
液０．１１ｇｔを加え、室温で５時間攪拌する。その後
反応混合物を４８時間、４℃で水２で透析する。透析中
５回水を來換する。その後、ペプチド−蛋白質複合体を
含む溶液を凍結乾燥してヒトβ型インターフエ０ン抗原
（以下「抗原璽」と略記する）１７岬を得る。

実施例９ 上記実施例４（ｂ）で得られるペプチド（以下「ぺづチ
ドＤ」と略記する）今ダ及びＢ５Ａ１２ｑ／を酢酸アシ
七ニウム緩衝液（０，１’Ｅル、ｐＨＴ、０）２１１ｊ
に溶かす。この溶液に０．１モルのタルタール　　オ。

アルデヒド溶液０．１１−を加え、室温で５時間攪拌す
る。その後反応−合物を４８時間、４℃で水１ｇで透析
する。透析中５回水を交換する。その後、ペプチド−蛋
白質複合体を含む溶液を凍結乾燥してヒトβ型イシター
フエ０ン抗原（以下「抗原■」と略記する）１４ダを得
る。

実施例１０ 上記実施例５（ｂ）で得られるペプチド（以下「ぺづチ
ドＥ」と略記する）８１１ｊｇ及びＢ５Ａ１２ｑ／を酢
酸アンモニウム緩衝液（０，ｌ七ル為戸Ｈ７，Ｏ）２　
ｍｌに溶かす。この溶液に０．１七ルのりルタールアル
デヒド溶液０．１１ｇ／を加え、室温で５時間攪拌する
。その後、反応混合物を４８時間、今°Ｃで水１１で透
析する。透析中５回水を交換する。その後、べづチドー
蛋白質複合体を含む溶液を凍結乾燥してヒトβ型インタ
ーフエ０ン抗原（以下「抗原Ｖ」と略記する）３１岬を
得る。

実施例１１ ぺづチドＥ８■及びＢ５Ａ２５ｑ）を水４ｓ＋／ニ溶解
する。この溶液にジシク０゛へ＋シルカーネジイミド（
ＤＣＣ）を加え１室温で５時間攪拌する。

次に反応混合物を水２１用い４℃にて４８時間要して透
析する。透析中５回水を交換する。その後ペプチド−蛋
白質複合体を含む溶液を凍結乾燥してヒトβ型インター
フエ０シ抗原（以下「抗原■」と略記する）２９岬を得
る。

く抗体の製造〉 実施例１２ 実施例６で得られる抗原Ｉ　２５０μｆを１．５ｍ＋１
の生理食塩水に溶解後２にフロイシドの補助液１．５ｍ
ｌを加えて調製した懸濁液を、４羽の兎（２，５〜３．
Ｏｋｇ）に皮下投与し、２週間毎に６回同量投与する。

更にその後１カ月毎に３回、最初投与した量と同量ｅ投
与する。最終投与後７日経過してのち試験動物から採血
し、遠心分離して抗血清を採取し、本発明のしトβ型イ
シターフェ０シ抗体（以下「抗体！」と略記する）を得
る。

実施例１３ 実施例７で得られる抗原ＩＩ　　２５μｆを１．５ｓ／
の糟理食塩水に溶解後之にフロイシドの補助液１．５ｓ
／を加えて調製した懸濁液を、４羽の兎（２，５〜３、
０　ｋｇ　）に皮下投与し、２週間毎に６回同量投与す
る。更にその後１カ月毎に３回、最初投与した量と同量
を投与する。最終投与後７日経過してのち試験動物から
採血し、遠心分離して抗血清を採取し、本発明のしトβ
型イシターフエＯシ抗体（以下「抗体■」と略記する）
を得る。

実施例１４ 実施例８で得られる抗原ＩＩＩ　　２５μｆを１．５ｓ
／の生理食塩水に溶解後之にフロイシドの補助液１．５
ｓ／を加えて調製した懸濁液を、４羽の兎（２，５〜３
．０＃）に皮下投与し１２週間毎に６回同量投与する。

更にその後１カ月毎に３回、最初投与した量と同量を投
与する。最終投与後７日経過してのち試験動物から採血
し、遠心分離して抗血清を採取し、本発明のしトβ型イ
シターフエ０ン抗体（以下「抗体■」と略記する）を得
る。

実施例１５ 実施例９で得られる抗原Ｎ　　２５μｆを１．５ｓ／の
生理食塩水に溶解後之に７０インドの補助液１．５ｓ／
を加えて調製した懸濁液を、４羽の兎（２，５〜３．０
＃）に皮下投与し、２週間毎に６回同量投与する。更に
その後１カ月毎に３回１最初投与した量と同量を投与す
る。最終投与後７日経過してのち試験動物から採血し、
遠心分離して抗血清を採取し、本発明のヒトβ型イシタ
ーフエ０ン抗体（以下「抗体■」と略記する）を得る。

実施例１６ 実ｉ例１０ｒ１１６ｔ１４抗原Ｖ　　２５１ｔｆｌｔｔ
１．５ｓ／の生理食塩水に溶解後之に７０インドの補助
液１．５ｓ／を加えて調製した懸濁液をＳ４羽の兎（２
，５〜３．０　ｋｇ　）に皮下投与し、２週間毎に６回
同量投与する。更にその後１カ月毎に３回、最初投与し
た量と同量を投与する。最終投与後７日経過してのち試
験動物から採血し１．遠心分離して抗血清を採取し、本
発明のしトβ型イシターフエ０シ抗体（以下「抗体■」
と略記する）を得る。

実施例１７ 実施例１１で得られる抗原■を用い、上記実施例１２と
同様に処理すると、高力価でヒトβ型インターフエ０ン
に特異性を有する抗体（以下［抗体Ｙ」と略記する）が
得られる。

実施例１８ ０標識ペプチドの製造 （１）　　／／−Ｍｅｔ−５ｔｒ−Ｔｙｒ−Ａｓｎ−Ｌ
ｚｕ−Ｌｔｕ−Ｇｌｙ　−Ｐｈｅ−Ｌａｗ−Ｇｌ　ｎ−
Ａｒｇ−５ｔｒ−５ｚｒ−ＯＲをり０ラミシＴを用いる
方法で標識化する。

即ち上記へプチド５μｆの０．２ｔルのリシ酸塩緩衝液
（戸Ｈ７，４）　２０μｌに〔１２５夏）　Ｎｏ　（Ｍ
ＥＮ）ｌマイク０＋ユーリーの０．２５ルリシ酸塩緩衝
液を加え・次にりＯラＥ　ｙ　７３．５　＊／ｍｌｏ　
Ｏ，２’ｅ　Ｌリシ酸塩緩衝液２０μｌを加える。室温
で２０秒間放置して２．４岬／ゴの０．２ルリシ酸塩緩
衝液のメタ重亜硫酸ナトリウム（＃　ａ２　ｓ２　ｏ５
　　）の５０μ１０１２Ｍリシ酸塩緩衝液を加えること
で反応を終わらせる。反応混合物をディージ（ＤＥＡＥ
）−七ファデックスＡ−２５のカラム（１，ＯＸ３（１
ｍ）にかける（溶出液０．１％ＢＳＡ及び０．Ｏ１％＃
ａ７”３　　を含む０．１七ルトリスー塩醗緩衝液、戸
Ｈ８，６）。第１フラクシヨンをイオン交換り０マドシ
ラフイーで精製して　　Ｉで標識された上記ぺづチドを
得る。

（２）　　Ｈ−Ｍｅｔ−５ｚｒ−Ｔｙｒ−Ａｚｎ−Ｌｚ
ｕ−Ｌｔｓｉ−Ｇｌｙ　−Ｐｋｔ−Ｌｚｕ−Ｇｌ　ｎ−
Ａｒｇ−５ｔ　ｒ−５ｔ　ｒ−ＯＮをり０ラミシＴを用
いる方法で標識化する。

即ち上記ペプチド５μｆの０．２七ルのリン酸塩緩衝液
（／／／７．４）２０μｌに（１）ＪＶａ（ＭＥＮ）１
？イクＯ牛１１Ｊ−の０．２１ｍルリン削塩緩衝液を加
え、次にり６ラミシＴ３．５Ｗ／ゴの０．２七ルリン酸
塩緩衝液２０μｌを加える◎　室温で２０秒間放置し寸
。

２、、４ｓｆ／鱈ｌの０．２Ｍリン酸塩緩衝液のメタ重
亜硫酸ｔトリ、ｌ’）＆、（ＮＬ！Ｓ、、０５）　（Ｄ
　５０　ｐ　ｌ　０．２　Ｍ　！Ｊ　：／酸塩緩衝液を
加えることで反応を終わらせる。反応混合物を５ｐ−ｐ
ファデックスＣ−２５のカラム（１，ＯＸ３（１ｍ）に
かける（溶出液５０ミリｔルリン醗塩緩衝液）０第４フ
ラクシヨンが１２５　Ｉ　　で標識された上記へづチド
のフラクションである。

０℃価の測定 上記で得られる抗体の力価を次の通り測定する。

即ち抗体をそれぞれ生理食塩水で１０％　１０２．１０
’、１０　．１０　　・・・・倍に希釈（イニシャル）
し１こ工２５ れらの夫々１００゛μ４に、！　　標識ペプチド（上記
で得られる標識ペプチドを約１万ｐｐｍになるように希
釈したもの）　Ｏ，Ｉ　ｍｌ及び０．１七ルリン酸塩緩
衝液（ｐＨ−７，４）　（０，１％、ＢＳＡ、　Ｑ、１
５モル塩化ナトリウム及び０．０１％ＮａＮ３　　を含
む〕０．２ｇ／を加え、４℃で２４時間イン士ユベート
し、工２５ 生成した抗体と１　　標識抗原との結合体を、ヂ＋スト
ランー活性炭法及び遠心分離法（４℃、１５分間、３０
００　ｒｐｌｐｌ　）により未反応（結合し２５ ない）Ｉ　　標識ペプチドから分離し、その放射線をカ
ウントし、各希釈濃度における抗体のｌ標識ペプチドと
の結合率（幻を測定する。縦軸に工２５ 抗体のｌ　　標識ペプチドとの結合率（％）及び横軸に
抗体の希釈倍率（イニシャル濃度）をとり、各々の濃度
において結合率をづ０ツトする。結合率が５０％とな、
る抗体の希釈倍率即ち抗体の力価を求めると各々次の通
りである。

抗体　　　　力価 抗体Ｖ　　　　５２０００ 抗体Ｖｌ　　　　１０００００以上 Ｏ抗体のしトβ型イシターフエ０シ特異性試験供試試料
として各種濃度のしトβ型インターフェロン（東京都総
合臨床研究所製、比活性３Ｘ１０６Ｕ／ＷＩＩプロテイ
ン）−、シトβ型インターフエ０ンの第１〜１３番のべ
づチド鎖及びしトロ型インターフエ０ン（林原研究所製
、Ｌ−戸ｈａｂｌａｚｌａｉｄ　ＩｎｔＩｒｆｅｒｅｓ
　、　　Ｌｅｔ、Ｎｏ、８００９２８　）を使用する。

また標準希釈剤として０．１％ＢＳＡ。

０．１５ｅＬＮａＣ６及び０．０１％のＮａＮ５　を含
む、０．１モルリン酸ナトリウム緩衝液（戸＃７．４）
を使用する。

各々の試験管に、標準希釈剤０−２　ｍｅ　ｓ供試試料
０−　Ｉ　ｍｌ　％実施例１６で得られる抗体Ｖ　Ｏ，
ｌ　ｍｌ　（カニ２う 価５２０００）及びｌ　　標識ペプチド（上記で得られ
る標識ペプチドを約１７ｊｒｐｍになるように希釈した
もの）　０．１　ｄを入れ、４°Ｃで４８時間イン士ユ
ベートした後、ノーマルヒツジ血清（ｎｔｙｒｍａｌ　
５ｈｅｅｐ　ｓｌｒｕｍ　）　　を０．１　ｍｌ加え、
次いでデ＋ストラシで被膜した活性炭の懸濁液０．５　
ｍｌを加え、４°Ｃで３０分間放置し、次に４℃、３０
００ｒｐｍの条件下に３０分間遠心分離を行ない、抗体
工２５ とｌ　　標識ペプチドとの結合体及び未反応（結２５ 合しない）ｌ　　標識ぺづチドを分離し、その放射線を
カウントし、用いた抗体の力価に相当する結合率（Ｂｏ
　）　　を１００％′として、各供試試料の濃１２５′
　　　　　　□ 度及び希釈率における抗体と１　　標識ペプチドとの結
合体■の百分率を求める。得られる結果を第１図に示す
。第１図中縦軸は結合％（Ｂ　／　Ｂ　。

Ｘ１００）を、横軸は供試試料（しトβ型インターフエ
０ン第１−第１３番ペプチド鎖、ヒトβ型インターフエ
０シ及びしトｄ型イシターフエ０ン）の濃度を示す。ま
た該図において曲Ｓ（イ）はしトβ型インターフェ０ン
の第１−１３番のペプチド鎖を、曲線Ｏはしトβ型イシ
ターフエ０ンを、曲線０９はしトη型インターフエ０ン
を夫々示す。第１図より抗体Ｖは、ヒトｄ型イシターフ
エ０シに対する反応性としトβ型イシターフェ０ンに対
する反応性において明確に区別される曲線を示し、この
ことよりヒト品型インターフェ０ンとは３．７×１０　
ユニット／譚ｊまで、交叉しない特異性の高い抗体であ
ることが判る。

また上記と同様にして抗体■についてもヒトβ型イシタ
ーフエ０シ特異性試験を行なう。得られる結果を第２図
に示す。

第２図は抗体■の特異性を示すグラフである。

第２図中縦軸は結合９６ＣＢ／ＢＯ×１００　）　　を
、横軸は供試試料（ヒトβ型イシターフエ０シ第１〜１
３番ぺづチド鎖、しトβ型インターフエ０シ及びヒトα
型イシターフエ０シ）の濃度を示し、また曲線に）はヒ
トβ型イシターフェ０シの第１〜１３番のべづチド鎖を
、曲線（へ）はヒトβ型イ、ターフエ０シを、曲線（へ
）はヒトα型インターフエ０シを夫々示す。

また各々の試験管に前記で述べた標準希釈剤Ｑ、２ｇ１
１実施例２．３及び今で得たべづチド０．１ｍｌ、抗体
Ｖ又１ｄＭＯ，Ｉｍ及び１２５１　標識ペプチド０．１
ｇ＋／を入れ、前記と同じ条件で反応させる。しトβ型
イシターフェ０シ第１〜１３番のペプチド鎖から得られ
た抗体Ｖ又は■としトβ型イ７シターフエ０シ第１−１
３番のペプチドとの結合反応性を１００％としたときの
、それぞれのペプチドの結合形を第１表に示す。

第　　１　　表 ０感度測定 各々の試験管に、標準希釈剤０．２１ｄｌニドβ型イン
ターフエ０ン第１−１３番ペプチド鎖０．１ｇ／、実施
例１６で得られる抗体■又は実施例１７で得られる抗体
ＭＯ，Ｉｇ／及び■１２５標識ペプチド（上記で得られ
る標識ペプチドを約１万ｔｐｍになるように希釈したも
の）Ｏ，Ｉ＋ｗｌを入れ、４°Ｃで４８時間イシ＋ユベ
ートした後、ノーマルヒツジ血清を０．１　ｍ加え、次
いでヂ＋ストランで被膜した活性炭の懸濁液０．５ｗｌ
を加え、４°Ｃで３０分間放置し、次に４°ＣＣ１３０
００ｒｐの条件下に３０分間遠心分離を行ない、抗体と
１１２５標識ペプチドとの結合体及び未反応（結合しな
い）ｌ　　標識べづチ２５ ドを分離し、その放射線をカウントし、用いた抗体の力
価に相当する結合率（Ｂｏ　）を１００％として、各供
試試料の濃度及び希釈率における抗体と１１２５標識□
ペプチドとの結合竺■の百分率を求める。得られる結果
を第３図に示す。第３図中縦軸は結合％（−Ｂ／Ｂｏｘ
ｌＱＯ）を、横軸はヒトβ型イシターフエ０シ第１〜１
３番ぺづチド鎖の濃度を示す。原図において曲線（ト）
は抗体■を用いたもの、曲線（イ）は抗体■を用いたも
のである。

第３図よシ明らかなように最小検出感度は抗体■で１３
ヒコグラム／　ｍ　ｓ抗体■で５ヒコクラム／　ｗｅで
ある。

く吸着体の製造〉 実施例１９ （、ａ）実施例１６で得られる抗体Ｖ　　０．７４ｍ１
を蒸留水　２．２６ｍ１に溶解し、次いで飽和硫酸アシ
七ニウム水溶液３　ｇ／を加え、４°Ｃにて３時間放置
する。次に蒸留水３　＠／を加え、４℃で３時間放置−
ｔ−ル。４℃−ｔ’１５分間遠心分離（３５００ｒｐＨ
１）し、沈殿物を蒸留水に溶解し、抗体水溶液８　ｄ　
　　ゞ゛を得る（　０Ｄ２１９０＝　１　、１５７　）
。次に蒸留水で３回透析し、さらに０．５　Ｍ食塩含有
０．１Ｍ炭酸水素すトリウム（ｐＨ８，４）で透析して
、抗体水溶液７震ｌを得る（ＯＤ２８０＝０．９２３）
。

（ｂ）乾燥臭化ジアジ活性化セファ０−ス４Ｅ　　１ｇ
を＆Ｉ三りＭ塩酸水溶液２００ゴで洗浄後、０．５Ｍ食
塩含有０．１Ｍ炭酸水素ナトリウム３０ｖｚｌ及び上記
（ｄ）で得られる透析後の抗体水溶液７ｍｌを加え、室
温で２時間イシ千ユベートする。

クラスフィルターで濾過し、得られるゲルを１Ｍ七ノエ
タノールア三シーＣＬ（戸Ｈ８，３６）４０ｍｌに溶解
し、室温で２時間イシ＋ユベートする。０．５Ｍ食塩を
含有するＯ、１Ｍ７ｔデート緩衝液ＣＩ’Ｈ４，Ｏ＞で
循環洗浄し、次いで０．５Ｍ食塩含有０．１　Ｍボレイ
ト緩衝液で４回洗浄する。生理食塩水中で懸濁させてし
トβ型イ、ターフエ０シーｔファ０−ス４Ｂ吸着体を得
る。

尚ガラスフィルターで沖過した炉液３５ｇｔの０Ｄ２８
０は０．００４　であり、抗体は殆んどｔノア０−ス４
Ｂに固定化されていることがわかる。

実施例２０ （ａ）　　実施例１−２で得られる抗体１　０．７４１
を蒸留水　２．２６ｇ／に溶解し、次いで飽和硫酸アン
モニウム水溶液３　ｍｌを加え、今°Ｃにて３時間放置
する。次に蒸留水３　ｍｌを加え、４℃で３時間放置す
る。４℃で１５分間遠心分離Ｃ３５００ｒｌ’Ｗ１）し
、沈殿物を蒸留水に溶解し、抗体水溶液８ｄを得る（　
０Ｄ２８ｏ＝　１．１５４　）。次に蒸留水で３回透析
し、さらに０．５　Ｍ食塩含有０．１　Ｎｐ酸水素ナト
リウム（戸Ｈ８，４）で透析して、抗体水溶液７　ｍｌ
を得る（　ＯＤ２＆、　＝　０．９２１　）。

（ｂ）乾燥臭化ジアジ活性化セファＤ−ス４Ｂ　　Ｉｆ
をｌ＼１ミリＭ塩酸水溶液２００　ｍｌで洗浄後、０．
５Ｍ食塩含有０．Ｉ　Ｍ炭酸水素ナトリウム３０ｍ１及
び上記（ａ）で得られる透析後の抗体水溶液７ＩＩｌを
加え、室温で２時間イシ＋ユベートする。

クラスフィルターで濾過し、得られるゲルを１Ｍｖ：）
工９）−１ｖアＥ：／−ＣＬ　（ｆｉＨ８，３６）４０
ｍｌに溶解し、室温で２時間イシ＋ユベートする。０６
５Ｍ食塩を含有する０、１　Ｍアセテート緩衝液ＣＩ）
Ｈ４，Ｏ＞で循環洗浄し、次いで０．５Ｍ食塩含有０．
１　Ｍボレイト緩衝液で４回洗浄する。生理食塩水中で
懸濁させてヒトβ型イシターフエ０シーｔファ０−ス４
Ｂ吸・１着体を得る。

尚ガラスフィルターで濾過した炉液３５ｍ１の０Ｄ２８
１Ｏは帆００４であり、抗体は殆んどセファ０−ス４Ｂ
に固定化されていることがわかる。

実施例２１ （２）　　実施例１３で得られる抗体ＩＩ　　Ｏ，７４
ｍ／を蒸留水　２．２６ｇ／に溶解し、次いで飽和硫酸
アシをニウム水溶液３　ｍｌを加え、４℃にて３時間放
置する。次に蒸留水３　ｍｌを加え、４°Ｃで３時間放
置する。４°Ｃで１５分間遠心分離（３５００ｒｐｌし
、沈殿物を蒸留水に溶解し、抗体水溶液８　ｍｌを得る
（　０Ｄ２８０．＝　１．１５５　）。次に蒸留水で３
回透析し、さらに０．５Ｍ食塩含有０．１Ｍ次酸水素ナ
トリウム（戸＃８．４）で透析して、抗体水溶液７　ｍ
ｌを得る（ＯＤ２８０＝０．９２１）。

Ｃｂ）乾燥臭化ジアジ活性化セファ０−ス４ＢＩｆ↑９ を１６１三りＭ塩酸水溶液２００１１で洗浄後、０．５
Ｍ食塩含有０．１Ｍ炭酸水素ナトリウム３０ｍ１及び上
記（，２）で得られる透析後の抗体水溶液７１ｊを加え
、室温で２時間イシ＋ユベートする。

グラスフィルターで濾過し、得られるゲルを１Ｍｖ：）
工９）　　ＬＥＥ：／−ＣＬ（／’＃８．３６’）４０
ｍｌに溶解し、室温で２時間イン＋ユベートする。０．
５Ｍ食塩を含有する０、１　Ｍ　”Ｐ　ｔテート緩衝液
（７＃４．０）で循環洗浄し、次いで０．５Ｍ食塩含有
０．Ｉ＃ボレイト緩衝液で４回洗浄する。生理食塩水中
で懸濁させてヒトβ型イシターフエ０シーｔファ０−ス
４Ｂ吸着体を得る。

尚ガラスフィルターで濾過した炉液３５１の０Ｄ２８ｏ
は帆００４であシ、抗体は殆んどセファ０−ス４Ｂに固
定化されていることがわかる。

実施例２２ （ａ）実施例１４で得られる抗体璽　０．７４　ｓｌを
蒸留水　２．２６■ｌに溶解し、次いで飽和硫酸アシを
ニウム水溶液３　ｍｌを加え、４℃にて３時間放置する
。次に蒸留水３　ｍｌを加え、４℃で３時間放置する。

４℃で１５分間遠心分離（３５００１ハ０し、沈殿物を
蒸留水に溶解し、抗体水溶液８　ｍｌを得る（　０Ｄ２
８０＝　Ｉ　、ｉ　５６　）。次に蒸留水で３回透析し
、さらに０．５Ｍ食塩含有０．ＩＭｐ酸水素ナトリウム
（−Ｈ８，４）で透析して、抗体水溶液７１ｊを得る（
　ＯＤ２＆）＝０．９２２　）。

（ｂ）　　乾燥臭化ジアジ活性化セファ０−ス４Ｂ　　
ＩＩを一１三りＭ塩酸水溶液２００　ｍｌで洗浄後、０
．５Ｍ食塩含有０．Ｉ　Ｍ炭酸水素ナトリウム３０ｍ１
及び上記（ａ）で得られる透析後の抗体水溶液７ｍｌを
加え、室温で２時間イシ＋ユベートする。

グラスフィルターで濾過し、得られるゲルを１Ｍ５ノエ
タノールア三シーＣＬ（ｐＨ８，３６）４０ｍｌに溶解
し、室温で２時間イシ十ユベートする。０．５Ｍ食塩を
含有する０、１　Ｍアセテート緩衝液ＣＩ’Ｈ４，Ｏ）
で循環洗浄し、次いで０．５Ｍ食塩含有Ｏ，＋　Ｕボレ
イト緩衝液で４回洗浄する。生理食塩水中で懸濁させて
しトβ型イシターフエ０シーｔファ０−ス４Ｂ吸着体を
得る。

尚ガラスフィルターで濾過ＬｆｃＦ液３５１１／の０Ｄ
２８０は０．００４であり、抗体は殆んどｔファＤ−ス
４Ｂに固定化されていることがわかる。

実施例２３ （ａ）実施例１５で得られる抗体Ｗ　　０．７４ｍ１を
蒸留水　２．２６ｇ＋／に溶解し、次□いで飽和硫酸ア
シ七ニウム水溶液３　ｍｌを加え、４℃にて３時間放置
する。次に蒸留水３　ｍｌを加え、４°Ｃで３時間放置
する。４°Ｃで１５分間遠心分離Ｃ３Ｃ５５０Ｏｒｌ）
し、沈殿物を蒸留水に溶解し、抗体水溶液８　ｍｌを得
る（　ｏｎ２８０＝　１．！５３　）。次に蒸留水で３
回透析し、さらに０．５Ｍ食塩含有０．１　Ｍ炭酸水素
すトリウム（ｐＨ８，４＞で透析して、抗体水溶液７　
ｍｌを得る（ＯＤ２８ｏ＝０．９２０）。

（ｂ）乾燥臭化ジアジ活性化セファ０−ス４Ｂ　　Ｉｆ
をへ１三りＭ塩酸水溶液２００禦ｊで洗浄後、０．５Ｍ
食塩含有０．１Ｍ炭酸水素すトリウム３０ｍ１及び上記
（ａ）で得られる透析後の抗体水溶液７ｄを加え、室温
で２時間イン＋１ベートする。

クラスフィルターで濾過し、得られるゲルを１Ｍ七ノエ
タノールアミシーＣＬ（戸＃８．３６　）４０　ｗｅに
溶解し、室温で２時間イン＋１ベートする。ｏ、５Ｍｆ
ｋ塩を含有する帆ＩＭアセテート緩衝液＜１’Ｈ４，ｏ
＞で循環洗浄し、次いで０．５Ｍ食塩含有０．１　Ｍボ
レイト緩衝液で４回洗浄する。生理食塩水中で懸濁させ
てじトβ型イシターフエ０シーセファ０−ス４Ｂ吸着体
を得る。

尚ガラスフィルターで濾過した炉液３５ｍ１の０Ｄ２８
０は０．００４であり、抗体は殆んどセファロース４Ｂ
に固定化されていることがわかる。

実施例２４ （ａ）　　実施例！７で得られる抗体■０．７４ｖｔｌ
を蒸留水　２．２６ｇ／に溶解し、次いで飽和硫酸アシ
七ニウム水溶液３　ｍｌを加え、４℃にて３時間放置す
る。次に蒸留水３ｆＩｔを加え、４℃で３時間放置する
。４℃で１５分間遠心分離Ｃ３５００ｒｆｉｔＰＩ）し
、沈殿物を蒸留水に溶解し、抗体水溶液８　ｍｌを得る
（ＯＤ２８ｏ＝　１．１５８　）。次に蒸留水で３回透
析し、さらに０．５Ｍｆ＆塩含有０．１＃戻酸水素ナト
リウム（−Ｈ８，４＞で透析して、抗体水溶液７　ｍｌ
を得る（　０Ｄ２８０＝０．９２４　）。

（ｂ）　　乾燥臭化シアン活性化セファ０−ス４Ｂ　　
ＩＦを入１ミリＭ塩酸水溶液２００　ｍｌで洗浄後、０
．５Ｍ食塩含有０．Ｉ　Ｍ炭酸水素ナトリウム３０ｍ１
及び上記（ａ）で得られる透析後の抗体水溶液７■ｔを
加え、室温で２時間イン＋１ベートする。

クラスフィルターで濾過し、得られるゲルを１’ｖ：）
エタ）　　ＩｔｉＰＥ：１−ＣＬ　（／／／８．３６　
　）４−Ｏｓ＋ｌに溶解し、室温で２時間イシ＋ユベー
トする。０．５Ｍ食塩を含有する０、Ｉ　Ｎアセテート
緩衝液（１）／／４．０）で循環洗浄し、次いで０．５
Ｍ食塩含有０．１　Ｍボレイト緩衝液で４回洗浄する。

生理食塩水中で懸濁させてしトβ型イシタ−フェロシー
セファ０−ス４Ｂ吸着体を得る。

尚カラスフィルターで濾過した炉液３５ｙｘｌの０Ｄ２
８０は０．００４であり、抗体は殆んど℃フッ０−ス４
Ｂに固定化されていることがわかる。

実施例２５ セル０−ス（東洋０！／Ａ２）を０．５ｃＩＲ角に切シ
、１ｆ程度秤量する。このセル０−スを臭化ジアジｒｙ
の水１００ｍ１溶液に入れ、戸Ｈを１１．０〜１１．５
に保つように水酸化ナトリウム溶液を加え、室温で６〜
８分活性化を行なう。活性化を終えたのち、ガラスフィ
ルターで反応液を除きメ冷′し九＼０．５Ｍ食塩含有０
．５Ｍ炭酸水素ナトリウム緩衝液（ｐＨ８，４）で数回
洗浄し、洗浄後同緩衝液中に浮遊させ、実施例１９（ｄ
）と同様にして得られる抗体水溶液（□Ｚ）２８０＝０
．９１８　）を加え、実施例＋９（ｂ）と同様に処理し
てヒトβ型インターフエ０ンーｔル〇−ス吸着体を得る
。尚ガラスフィルターで濾過した炉液の０Ｄ２８ｏＯ１
００４であり、抗体は殆んどセル０−スに固定化されて
いることがわかる。

実施例２６ 架ｌｌデ十ストラン（セファデックスＧ−２５）ＩＦを
水Ｉｏｎｌに懸濁させて架橋デ＋ストラン水速度を高め
て臭化ジアジのアセトニトリル溶液Ｃ２ｆ／ゴ）を５０
０μｌ一度に加え、さらに激しく１〜２分間攪拌後ガラ
スフィルター上で反応液を除去する。ａ、５Ｘ＊塩含有
０．１　Ｍ炭酸水素すトリウム緩衝液（戸Ｈ８，４）で
数回洗浄し、洗浄後同緩衝液中に浮遊させ、実施例１９
（ａ）と同様にして得られる抗体水溶液（０Ｄ２８ｏ＝
０．９２１　）を加え、実施例＋９（ｂ）と同様に処理
してヒトβ型イシターフエ０シー架橋ダ十ストラシ吸着
体を得る。

尚４ガラスフイルターで濾過ルた炉液の０Ｄ２８ｏは０
．００４であり、抗体は殆んど架−チ＋ストランに固定
化されていることがわかる。

実施例２７ しトβ型イシターフエ０シ（東京都臨床医学総合研究所
、０Ｄ２８０＝　１１．８　）　０．５１１（蛋白質５
．９１Ｆ）を生理食塩水に溶解し、次にこの溶液を実施
例１９（ｂ）で得られるしトβ型イシターフエ０シーｔ
ファ０−ス４Ｂ吸着体を用いたアフィニティークロマド
グラフイーに充填し、　０．１５　Ｍ食塩含有０．１　
Ｍリシ酸塩緩衝液（戸＃７．４）で溶出する。

ＯＤ　　＝　０．０００２になったところで０．５Ｍ＊
塩含有８０ ０．５・Ｍ酢酸緩衝液（戸Ｈ２，５）で溶出して精製し
トβ型イシターフエ０シを上記吸着体より分離する。

アフィニティークロマドグラフ前のヒトβ型イシターフ
エ０シの換算ＯＤ値（ＯＤ２８゜＝１のときの蛋白質を
１ＩＩＩＩとしたときの値、以下同じ）は５．９であシ
、またヒトβ型イシターフエ０シ免疫反応においては１
３２４０戸ｆ／ｌｌｔ、　１．５　Ｘ　１０ユニツト／
岬という活性を示すのに対し、アフイニテイーク０マト
ジラフ後のしトβ型イシターフエ０シの換算ＯＤ値は０
．０５９であり、またヒトβ型イシターフエ０ン免疫反
応においては＋２０５０戸ｆ／ｍｅ、１．３７ｘｌＯ６
ユニツト／ｑ　という活性を示す。

従って比活性についてはアフィニティークロマドグラフ
前は２．５４　Ｘ　Ｉ　０５１．ニット／ＩＩｇでちゃ
、一方アフィニティークロマ”トタラフ後・°は°２　
、３′２ξ×１０７ユニツト／ＩＩｇという　９１．３
倍に相当する値を示す。

以上の結果よシ本発明の吸着体の使用によシ、ヒトβ型
イシターフエ０シを一段階で９１倍以上に精製し得、ま
た回収率もほぼ定量的であることがわかる。

また実施例２０〜２６で得られる本発明の吸着体を用い
、上記と同様にアフィニティークロマドグラフしたとこ
ろ、上記同様良好な分離・精製能を示す。

【図面の簡単な説明】

第１図及び第２図は本発明抗体の特異性を示すグラフで
ある。第３図は本発、、明・：抗体についてのしトβ型
インターフエ０シ第１〜１３番のペプチド鎖の濃度と結
合％との関係を示すグラフである。 （以　上） 代理人　弁理士　三　　枝　　英　　二＋ｌ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 ■　一般式 〔式中Ｒは水素原子、Ｈ−Ｐｈｔ−基、／／−Ｌｔｕ−
   Ｇｌｙ−Ｐｈｔ−基、Ｈ−Ｔｙｒ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｌ
   ｔｕ−Ｇｌｙ　−Ｐｋｔ−基又はＨ−Ｍｅｔ−５ｔｒ−
   Ｔｙｒ−Ａｘｎ−Ｌｚｕ　−Ｌｚｕ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−
   基を示す。〕で表わされるヒトβ型インターフェロンの
   Ｎ末端ペプチドと担体との複合体からなるヒトβ型イン
   ターフェロン抗原を哺乳動物体に投与して得られるしト
   β型インターフエ０シ抗体を不溶性支持体上に固定化し
   てなることを特徴とするアフィニティー