JPS5841356A - 抗原の検定方法および試薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 免疫化学型の検定は急速に臨床診断市場の主要な部門に
なりつ＼ある。現在、比濁法および放射−免疫検定（Ｅ
ＩＡ）は免疫診断学において最良に確立された技術を示
している。酸素増殖免疫検定技術（ＥＭＩＴ）、酵素免
疫検定（ＥＩＡ）および不拘−ケイ光免疫検定の如き新
技術が導入され各様の成功を見ている。これらの検定技
術の多くは放射性同位元素の取扱いに多くの問題が包含
されるためＲＩＡの代替を目的としている。

例えば、メイエル、ジュニア　（ｍａｉｅｒ、Ｊｒ）　
ＫＪ：る米国特許第４，１０４，０２９は化学発光標識
抗原と試料抗原との間に競争反応を起す化学発光検定を
教示している。これらの２種は検定中に存在する抗体に
より与えられた有効な限定された結合点に対して競争す
る。得られる発光は試料中の抗原の量に対し逆の関係に
ある。

他の方法は発光種が光吸収種に密接に接近して光吸収種
の吸光度スペクトルが発光種の発光スＲクトルと重なる
時に生ずる非放射エネルギー移動の概念を使用している
。他の條件では放射体により光の形で放出される光エネ
ルギーのすべては好條件下では代わりに吸収種に移動さ
れる。この條件はエネルギ移動速度が吸収および放射種
の間の距離の６乗に逆比例すること示すフォルスターの
式により示されている（”エネルギー移動と有機光化学
、ｌピー・エーレールメーカース（Ｐ、Ａ。

Ｌｅｅｒｍａｋｅｒｓ）およびニー・ワイスベルガー（
Ａ・Ｗｅｉｓｓｂｅｒｇｅｒ）編集、Ｔｔｃｈｎｉｑｕ
ｅ　ｏｆ　Ｏｒｇａｎｉｃｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　１４巻
、１７−１３２ＰＣ１９６９年）、Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅ
ｎｃｅ　（＝ニーヨーク）参照）。従って放射種および
吸収種はエネルギー移動を与えるよう互に極めて接近す
ることが必要である。

例えばウルマン等による米国特許第３，９９６，３４５
号は抗原とケイ光発光体−消光体との１対を使用する免
疫検定を実施する方法を教示している。放射に際して得
られるケイ光は関心のある成分の量に関連する。ウルマ
ン（Ｕｌ　１ｍａｎ）またはウルマン等による米国特許
第３　、９９８　、９．！１３号、第４．１６０．０１
６号、第４．１７４．３８４号、第４．１６１．５１５
号および第４．１９９，５５９号を包含する問題の件に
密接に関係する多数の特許が発行されている。これらの
特許はすべて伺かの方法においてケイ光消光の概念に関
するものである。ケイ光性消光を包含する類似の方法が
、２論文に記載されている（”ケイ光励起移動免疫検定
、　　”　Ｔｈｅ　ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｂｉｏｌｏ
ｇｉｃａｌ−底叫二二五、２５１巻、１４号、４１７２
−４１７８頁（１９７６年７　月２５日）；および”エ
ネルギー移動免疫検定における標識としてのフルオレス
カミンお一９２頁（１９８０年）参照）。

抗原−抗体反応の特異性はエネルギー移動の要求を満す
ため化学発光種と光吸収様および再放射種とを十分に接
近させるための手段を与えることが現在見出されている
。これは外部励起光源の必要性を除きかつ高感度にする
ことができる。

本発明の１観点は（ａ）吸収体／放射体の複合抗体；化
学発光触媒の複合抗体；および前記の化学発光触媒の複
合抗体の存在において発光の光応答を誘起するのに適し
た化学発光試薬；の各有効量とからなる試薬中に抗原含
有試料を導入し、（ｂ）化学発光の光応答により誘起し
た吸収体／放射体複合抗体から光応答を検出する。こと
を特徴とする抗体に対し多重結合点を有する抗原を検定
するための方法にある。本明細書において”吸収体／放
射体”の用語は光エネルギーを吸収し、異なる波長の光
を発光する種を指す。この用語は特にケイ先回およびリ
ン先回を包含する。またＩ＋化学発光性１＋またはｉ化
学発光ｎの用語は生物発光の密接に関連した現象を包含
する。″抗体１１の用語は抗体類似体を包含する。

化学発光触媒複合抗体および吸収体／放射体複合抗体の
密接な接近のために１個の抗原に結合した時高能率のエ
ネルギ移動が、化学発光触媒から吸収体／放射体まで起
る。吸収体／放射体は吸収された化学発光の光より長波
長の光を発光することによりエネルギーを放散する。故
に、ケイ先回吸収体／放射体の場合にはケイ光はただ抗
原が試料中にある時に実質的に放射される。糸から検出
されたケイ光は光−標識試薬抗体が無制限の量で存在す
る時、試料中の抗原量に関連する。背景の光として試薬
溶液から放射したケイ光の光量は適当な試薬のすべてが
同時に互に極めて密接していることが必要であるため無
視できる。溶液中で化学発光触媒とケイ先回との間の平
均距離は無視できるエネルギー移動が結合位置（表面抗
原）を抗体複合試薬に対し提供する抗原の存在なしに起
こるようなものである。これらの結合点は互に十父に密
接して適当なエネルギーを移動せしめる。

更に特に１本発明の好ましい観点は化学発光補助因子の
生成に触媒反応を及ぼす”化学発光補助因子発生触媒の
複合抗体ガを化学発光試薬中に包含することである。本
明細書においては”補助因子１は発光反応を生成するの
に必要な反応性種であってこ〜に論じた触媒は除外され
る。両触媒は抗原に密接に接近して結合させる抗体に共
役しているため、吸収体／放射体を励起するのに十分な
化学発光の光応答の可能性は光生成反応において必要な
補助因子の局部的発生により増加される。

化学発光試薬中に７化学発光補助因子補集”触媒を包含
することもまた好ましい。この触媒は溶液中に遊離して
残留し抗体と共役しない。抗原−結合試薬の付近に存在
する必要な補助因子および他の試薬のみを有することが
望ましいのでこの触媒は試薬溶液中に一般に存在する特
定の補助因子を除去する作用をする。故にか〜る補助因
子補集触媒は光−生成反応における基本の種を除去する
ことにより背景の光の放射を減少するのを助長する。一
方、抗原近くの補助因子の濃度が、補助因子補集触媒に
対しあまりに高いために感知できる効果を持ち得ないた
め、溶液中の補集触媒の存在は一般に検定に影響しない
。故に、望ましい正の反応が依然起こる。

本発明の更に一つの観点は（ａ）吸収体／放射体の複合
抗原；化学発光触媒の複合抗体；および前記の化学発光
触媒の複合抗体の存在において化学発光の光応答を誘起
するのに適した化学発光試薬；の各有効量からなる試薬
溶液に試料を導入し、かつ（ｂ）化学発光の光応答によ
り誘起された吸収体／放射体複合抗原から光応答を検出
することを特徴とする唯１つの結合点を有する抗原を検
定する方法にある（吸収体／放射体を抗体に取り付は抗
原を化学発光触媒により標識することも適している）。

この観点は試薬溶液が光−標識抗原を含有し、光−標識
抗体に対し光−標識抗原と試料中の抗原との間に競合を
起す点において前記の観点と異なっている。故に、試料
抗原の存在のない場合に発光するある量の第２の光と試
料抗原の存在下に発光するより少量の第２の光とがある
。

本発明の更に一つの観点は開示した方法を実施する際に
有用である本明細書中に記載した試薬である。

本発明の方法を実施する際に、ケイ光またはリン光の励
起性光源と励起する化学発光光源とを共に極めて密接に
接近せしめるため、非常に特異な抗原−抗体反応が利用
される。この原理を利用する目的は与えられた試料中の
抗原を検定するための感度および信頼性の高い方法を確
立することである。抗原−抗体親和性により試料抗原が
存在する時、特徴ある光応答を放射するある必要な反応
物を同伴する。独特の方法を与えることによりこの目的
を達成する手段を与えられる。

第１図に注目すると、特異な代表試料が、試験されて本
発明は更に容易に理解できる。第１図は試薬溶液が検定
される試料と混合の結果として抗原が試薬溶液中に存在
する時に起きる種々の反応を説明している。抗原は種々
の試薬に攻撃する場所を提供している多数の結合点を含
有する。ケイ先回複合抗体（吸収体／放射体複合抗体）
、被ルオキシダーゼ複合抗体（化学発光触媒複合抗体）
およびグルマースオキ７ダーゼ複合抗体（化学発光補助
因子発生触媒複合抗体）が示され、すべてが試薬溶液の
均衡に関して必然的に小空間に結合し濃縮されている。

反応種のこの密接な接近はケイ光発光反応のかなり大き
な可能性を起こす。この特殊な試薬系に対する適切な化
学発光反応は次の通りである。

ｆｉｌ　　グルコース＋Ｑ２１北子テ÷−２Ｈ２０２＋
グルコン酷塩オキ− （２１Ｈ，０２＋ルミノール　＜ｉｖ土−ｙ’−！オキ
ジルミノール十Ｈ２０＋Ｎ２＋　ｈｒ 反応（２）から分るように、過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）と
ルミノールの両者は発光反応を起すためにペルオキシダ
ーゼ触媒と接触せねばならない。このために試薬溶液中
に十分な量の両補助因子（過酸化水素とルミノール）を
たｙ有することである（かつ本発明の範囲内にある）が
、かかる状態は抗原の存在如伺に拘わらず著しい背景の
化学発光の光を放射させる。この背景の光はろ過できる
が、か〜る状態は好ましくない。過量の背景放射を避け
るため、化学発光共因子発生触媒複合抗原（グルコース
オキシダーゼａｔ抗体）が反応溶液中に包含される。こ
れは必要な補助因子（Ｈ２Ｏ２’　）の１種だけが抗原
−結合Ｒルオキシダーゼ触媒の近くに生成されるため化
学発光は単に抗原が存在するときだけに最も起ることを
確実にする。更に発生する不要の機会の化学発光の保証
として第１図に説明した試薬溶液は次の式により一般に
過酸化水素を試薬溶液から除去する化学発光補助因子補
集触媒（カタラーゼ）を含有する。

（３）　　２Ｈ，Ｏ□Ｌ註＝ム２Ｈ２０＋Ｏ□故に、第
１図はいかにグルコースオキシダーゼ。

Ｒルオキシダーゼおよびケイ先回のすべてが複合抗体に
より抗原に結合されることにより相互に接近していかに
保持されるかを示している。・試薬中のグルコースおよ
び酸素はグルコースオキシダーゼに接触して過酸化水素
を生成する。（ルオキシダーゼ触媒に接して発生する過
酸化水素は化学発光の光エネルギー（ｈｖ≦５００　ｎ
ｍ）を放射する試薬中に存在するルミノールと結合する
。しがしながら、抗原にも密接に結合する被ルオキシダ
ーゼおよびケイ先回の密接な接近のためこの放射した光
エネルギーはケイ先回（ｈＹ≦５００ｎｍ）により吸収
されてケイ光の光に変換される。イ６営発光の光はいず
れもろ過され試料中延存在する抗原の量に比例するケイ
光の光を検出器のみが検出できる。

第２図は試料中に存在する抗原がないが第１図と同じ試
薬系を示している。ケイ光の光応答を生成するために必
要な試薬はすべて無差別に溶液中に分散しているので化
学発光の発生の可能性は少なく、特に生成した過酸化水
素を補集するカタラーゼの存在のためそうである。第２
の光放射（ケイ光）発生の機会は励起した化学発光の放
射体がケイ先回に極めて接近して生成されることが必要
なために一眉少ない。それ以外の場合は、エネルギー移
動は検出できるケイ光の応答を完成するには不十分であ
る。

試薬を調製するのに使用される必要な抗体は既知の方法
例えば問題の抗原と共に予め注入された動物の血液から
の抗体の単離〔ヘルマン・エヌ・アイゼｙ　（Ｈｅｒｍ
ａｎ−Ｎ−Ｅｉｓｅｎ）、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ　＊第
１５．１７章、Ｈａｒｐｅｒ　Ｒｏｗ、＝ニーヨーク（
１９７４年）参照〕 または単分枝系（ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ）抗体の安定な
形成体を生成するため抗体形成細胞を骨随腫（ｍｙｅｌ
ｏｍａ）細胞と共に融解する〔アール・エッチ・ケネッ
ト（Ｒ−Ｈ−Ｋｅｎｎｅｔ）およびチー・ジエー。

７７　フカ７−７　（Ｔ−Ｊ−Ｍｃｋｅａｒｎ　（編集
）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、Ｐ
ｌｅｎｕｍ　Ｐｒｅｓｓ、　　ニューヨーク（１９８１
年）参照〕　により得られる。両文献とも本明細書に含
める。

適当な化学発光触媒には次の分離反応により光を生成す
る投ルオキシダーゼ、細菌性ルシフェラーゼ、およびル
シフェラーゼが包含される。

＋Ｈ２０＋Ｎ、　＋ｈｒ （５）　　ＦＭＮＨ，＋Ｏ，＋ＲＣＨ貴１註二二ニョ―
ＦＭＮ　＋　ＲＣＯＯＨ＋　Ｈ，、＋ｈｒ（６）　　ル
シフェリン＋ＡＴＰ　＋０２−はａΣとと２２＝と二五
−オキジルシフェリン＋ＡＭＰ−１−ＣＯ２＋ｐｐ　ｉ
＋ｈビ（式中、　ＦＭＮＨ２は還元されたフラビンモノ
ヌクレオタイドであり、Ｒは約８−１２の炭素を有する
直鎖状炭素鎖であり、ＦＭＮはフラビンモノヌクレオタ
イドゝであり、ＡＴＰはアデノシン三リン酸塩であり、
ＦＭＮはフラビンモノヌクレオタイ［・８であり、ＡＴ
Ｐはアデノシン三リン酸塩であり、ＡＭＰはアデノシン
−リン酸塩であり、ｐｐｉは無機リン酸塩である。

与えられた試薬系に対し特定の吸収体／放射体を選択す
るにあたり、化学発光試薬により生成される化学発光の
スにクトル領域に吸光度を有することが必要である。吸
収体／放射体の発光は効果的に試薬系により放射された
化学発光と区別できる十分長波長であることが好ましい
。例えば第１に話題の２種の化学発光反応は過酸化水素
によるルミノール酸化とアルデヒド酸化である（例えば
インブチルアルデヒドゝおよびプロパツール）。これら
の反応はいずれもペルオキシダーゼにより触媒反応され
る。ルミノール化学発光反応用の適切な吸収体／放射体
にはウロポルフィリンおよびテトラカルボキシフェニル
ポルフィリンの如き遊離塩基のポルフィリン類、マグネ
シウムまたは亜鉛の如き金属を含有する金属ポルフィリ
ン類、ルミノール化学発光の領域（４００および４５０
ｎｍの間）に強い吸光度を生成するのに十分な大きさの
共役環系を有するテトラフェニルカルボキシポルフィリ
ン、ペリレン、アントラセン、７−メチルジベンゾ（ａ
、ｈ）ピレンおよび他の多環芳香族が包含される。吸収
体／放射体は抗体との共役のため容易にスルホン化され
、一般の合成法によるスルホン酸クロリドの生成により
活性化される。

カルボキシル化も必要ならば実施でき、これから生成し
た酸塩化物は抗体に結合するため活性化される。

アルデヒド酸素化から得られる化学発光用の適当な吸収
体／放射体には上記のポリフィリンおよび多核芳香族が
包含される。しかしながら多核芳香族のハロゲン化は化
学発光放射体からエネルギーの有効な移行を与えるため
必要であるがこれは３重励起状態からの放身のためであ
る。有効なハロゲン化多核芳香族の実例は９．１０−ジ
ブロモアントラセン、９−１０−ジブロモ−２，６−ア
ントラセンジスルホン酸、６．１０−ジブロモ−４，９
−ペリレンジカルボン酸塩およびろ、９−または６．１
０−ジブロモにリレンである。もし必要ならば記載した
ようなスルホン化またはカルボキシル化が、一般の合成
法によりこれらの化合物にもまた容易に実施できる。

リン光化合物もまた放射体の６重性能により化学発光ア
ルデヒド系における吸収体／放射体の如く使用できる。

しかしながら、一般にリン光の吸収体／放射体は酸素の
存在で消光への感受性により好ましくない。この種類の
化合物には２．６−ブタジオン％　１−Ｃカルボキシフ
ェニル〕−１，２被／タンジオンおよび１−フェニル−
１，２−プロパンジオンの如きα−ジケトンが包含され
る。

後者の場合に抗体または抗原への結合はフェニル環のス
ルホン酸クロリド、酸クロリドまたはジアゾ活性中間体
による置換により与えられる。

適当な抗体に吸収体／放射体、化学発光触媒および化学
発光補助因子発生触媒を付着させる方法は関連する特異
な種に左右される。例えば９．１゜−ジブロモ−２−ア
ントラセンスルホン酸の如きケイ先回のスルホン酸誘導
体はジクロロエタン中でＰＯＣ，ｌ、による処理によっ
てスルホン酸クロリドゝに変換される。スルホン酸りロ
リ白ま次に水溶液中で抗体のリジン残留物またはＮ−末
端アミノ酸のアミン基に結合する。ジブロモペリレンジ
カルボン酸の如きケイ先回のカルボン酸誘導体は塩化チ
オニルによる処理により酸クロリドに変換できる。酸ク
ロリ白まスルホン酸クロリドと同様の方法で抗体に結合
する。これらおよび他の一般のカップリング方法は文献
で知られている〔例えば本明細書に包含されているエッ
チ・エッチ・ライタＥｎｚｙｍｅｓ、Ａｎｔｉｇｅｎｓ
、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、ａｎｄ　Ｐｅｐｔｉｄｅｓ。

第１章、　Ｍａｒｅｅｌ　Ｄｅｋｋｅｒ＋ニューヨーク
（１９７５年）参照）。抗体の多くのペルオキシダーゼ
複合体は市場で入手可能であり、抗体のアミノ基がシフ
塩基結合を形成して反応する炭水化物残留分のペルオキ
シダーゼの酸化により製造される。これらのシフ塩基は
更にホウ化水素の還元により安定化される。グルコース
と抗体の複合は２官能試薬サクシニミジル４−（Ｎ−マ
レイミド９メチル）シクロヘキサン−１−カルボン酸塩
（本明細書に包含される古物等によるＥｕｒｏｐｅａｎ
　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、第
１０１巻、３９５−３９９頁）の使用が報告されている
。

選択された化学発光触媒複合抗体の存在で光応答を誘起
するために必要な化学発光試薬または補助因子は生物化
学の当業者によりよく証明され。

かつ容易に定量することができる。例えばペルオキシダ
ーゼ化学発光試薬の存在で光−誘起試薬または補助因子
には（１）ルミノールおよび過酸化水素あるいは（２）
アルデヒド９（イソブチルアルデヒドまたはプロピオン
アルデヒドの如き）、溶解酸素。

エタノールおよび／あるいはピロリン酸ナトリウムおよ
び／あるいはリン酸ナトリウムのいずれかが包含できる
。はたるルシフェラーゼの存在では光誘発試薬にはＦＭ
ＮＨ，、長鎖アルデヒド・、および溶解酸素が包含され
る（前記の反応式（４）、（５）および（６）参照）。

検定は光の放射が検出できる透明な壁を有する適当な容
器中で実施できる。検定は便宜上室温で実施するのが好
ましい。一般に、試薬溶液中の各種の試薬の濃度は抗体
複合体に対しては約１０−８−１Ｑ　’Ｍ、　ルミ／　
−／ｌ／使用に対ｔ、テ＆！　１０−３Ｍ、過酸化水素
使用には５Ｘ１ｏ−３Ｍ、アルデヒドが使用された場合
はｉ　ｏ−３−ｉ　０−２Ｍ、ピロリン酸塩が使用され
た場合は１０−２−１０−１Ｍ、リン酸塩が適用された
場合は１０”−１０’Ｍである。

血液または尿の試料の検定用の試薬溶液の１例にはきル
オキダーゼ複合抗体（〜１０’Ｍ）、カルボキシーフェ
ニルポルノイリン複合抗体（〜１０−８Ｍ　）、ルミノ
ール（〜１０−３Ｍ）および過酸化水素（〜５　Ｘ　１
０”　Ｍ　）が包含される。

任意に、試薬溶液はまたグルコースオキシダーゼ複合抗
体（〜１０−８Ｍ）、グルコース（〜１ｏ−３Ｍ）およ
びカタラーゼ（〜１０−６Ｍ　）が包含できる。

更に１つの特定の試薬溶液にはペルオキシダーゼ複合抗
体（〜１０−６Ｍ　）、６．１０−ジブロモペリレン複
合抗体（〜１０　’Ｍ）、イソブチルアル７’　ヒ）”
　（〜５ｘ１０−２Ｍ）、溶解酸素、エタノール、リン
酸ナトリウム、およびピロリン酸塩が包含される。

更に特定の試薬溶液にはほたるルシフェラーゼ複合抗体
（〜１０−８Ｍ　）、ウロポルフィリン複合抗体Ｃ〜１
０−７１１／ｍｌ）、ＡＴＰ（〜ｉ　［１−６Ｍ　）、
ルシフェリン（〜５Ｘ１０−５Ｍ）、Ｍｇ＋２イオン（
〜１０−２Ｍ　）および溶解酸素が包含される。

当業者は説明のために示された前記試料から多くの変化
を行うことができるが本発明の請求の範囲内である。

【図面の簡単な説明】

第１図は試料抗原の存在下で特定の試薬系を使用した本
発明の１実施例である。 第２図は試料抗原がないことを除いて第１図と同じ系で
ある。 特許出願人　スタンダード・オイル・カンパニー纂ｉ図 名漁中どａ給 抵ｌ゛

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １−（ａ）　　吸収体／放射体の複合抗体；化学発光触
   媒複合抗体；および化学発光触媒複合抗体の存在におい
   て光応答の誘起に適した化学発光試薬：とからなる試薬
   溶液に試料を導入し、かつ（ｂ）　　吸収体／放射体複
   合抗体により放射されたいかなる光も検出する。各工程
   からなる多数の結合点を有する抗原を検定する方法。 ２、化学発光試薬が、化学発光補助因子発生触媒の複合
   抗原からなる特許請求の範囲第１項記載の方法。 ６、化学発光試薬が、化学発光補助因子補集触媒からな
   る特許請求の範囲第２項記載の方法。 ４、吸収体／放射体が、ケイ先回である特許請求の範囲
   第１項記載の方法。 ５、　ケイ先回が、ウロポルフィリン、テトラカルボキ
   シフェニルポルフィリン、ペリレン、アントラゼン、７
   −メチルジインゾ（ａ、ｈ）ピレン、９．１０−ジブロ
   モアントラセン、リボフラビン。 ３．９−ジブロモペリレン、６．１０−：）プロモヘリ
   レンおよび６．１０−ジブロモ−４，９−ペリレンジカ
   ルボン酸塩からなる群から選択される特許請求の範囲第
   ４項記載の方法。 ６、吸収体／放射体が、リン光団である特許請求の範囲
   第１項記載の方法。 ７、　リン光団が、２．６−ブタンジオン、１−〔カル
   ボキシフェニル〕−１，２−−＜ンタンジオンおよび１
   −フェニル−１，２−プロペンジオンからなる群から選
   択される特許請求の範囲第６項記載の方法。 ８、化学発光触媒が、深ルオキシダーゼ、細菌性ルシフ
   ェラーゼおよびほたるルシフェラーゼからなる群から選
   択される特許請求の範囲第１項記載の方法。 ９、吸収体／放射体の複合抗体；化学発光触媒の複合抗
   原；および化学発光触媒の複合抗体の存在において化学
   発光の光応答を誘起するために必要な化学発光試薬：か
   らなり、大抗原を検定するための試薬溶液。 １０、化学発光試薬が、化学発光補助因子発生器触媒の
   複合抗体からなる特許請求の範囲第９項記載の試薬溶液
   。 １１、化学発光試薬が、化学発光補助因子捕集型触媒か
   らなる特許請求の範囲第１０項記載の試薬溶液。 １２、ペルオキシダーゼ複合抗体、ウロポルフィリン複
   合抗体、ルミノールおよび過酸化水素からなり、大抗原
   を検定するための試薬溶液。 １６、Ｒルオキシダーゼ複合抗体、リボフラビン複合抗
   体、ルミノール、グルコースオキシダーゼ複合抗体、グ
   ルコース、およびカタラーゼからなり、大抗原を検定す
   れための試薬溶液。 １４、ペルオキシダーゼ複合抗体、ウロポルフィン複合
   抗体、インブチルアルデヒド、溶解酸素およびエタノー
   ルからなり、大抗原を検定するための試薬溶液。 １５、はたるルシフェラーゼ複合抗体、ウロポルフィリ
   ン複合抗原、アデノシン三すン酸塩、ルシフェリン、マ
   グネシウムイオン、および溶解酸素からなり、大抗原を
   検定するための試薬溶液。 １６、吸収体／放射体の複合抗原；化学発光触媒複合抗
   体；および化学発光触媒複合抗体の存在において化学発
   光の光応答を誘起するために必要な化学発光試薬；の各
   有効量からなる、小抗原を検定するための試薬溶液。 １７、化学発光触媒複合抗原；吸収−／放射体複合抗体
   ；および化学発光触媒複合抗原の存在において化学発光
   の光応答を誘起するために必要な化学発光試薬；の各有
   効量からなる、小抗原を検定するだめの試薬溶液。