JPS5847499A - 生体液中の成分の測定方法 - Google Patents
生体液中の成分の測定方法Info
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- JPS5847499A JPS5847499A JP14456881A JP14456881A JPS5847499A JP S5847499 A JPS5847499 A JP S5847499A JP 14456881 A JP14456881 A JP 14456881A JP 14456881 A JP14456881 A JP 14456881A JP S5847499 A JPS5847499 A JP S5847499A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は生体液中の成分、すなわち基質まえは酵素活性
を主としてレドックス反応を使用して測定するに当ｐ共
存する妨害物質なＮ−エチル−Ｎ−スルホゾロビル−ｍ
−トルイジノ（以下ＮＢＰＴという）の特異な性質を利
用して除去する方法に関する。さらに詳しくは生体液中
の成分の測定にレドックス反応を適用し定量的に生成す
る過酸化水素を、ペルオ命シ〆−ゼの存在下、４−アミ
ノアンチピリンあるいは３−メチル−２−ベンゾチアゾ
リノンヒドラゾン（以下ＷＩＴＨという）とＩＡＢＰＴ
との酸化縮合による発色に基づき比色定量することによ
り検体中の目的成分を測定する方法において検体中に共
存する妨害物質が反応の過程で過酸化水素を生成し、そ
の過酸化水素が目的成分の測定結果に誤差を生じる虞の
ある場合、ＥＢＰＴの特性すなわち酸化縮合の相手方（
この場合４−アミノアンチピリンあるいはＭＢＴＩＩ）
が存在しない場合ベルオキシ〆−ヤの存在下過酸化水素
によＩｙｇａｐ丁自身が変化すると同時に存在する過酸
化水素を消尽すること、しかも変化し丸物質が無色であ
ること、更にＥＢＰＴは水溶性のため濁りを生じな゛い
こと（トルイジンは一般的に難溶性で濁る）ことを利用
して予め妨害物質を除去した後検体中の成分を正確に測
定する方法に関する。
を主としてレドックス反応を使用して測定するに当ｐ共
存する妨害物質なＮ−エチル−Ｎ−スルホゾロビル−ｍ
−トルイジノ（以下ＮＢＰＴという）の特異な性質を利
用して除去する方法に関する。さらに詳しくは生体液中
の成分の測定にレドックス反応を適用し定量的に生成す
る過酸化水素を、ペルオ命シ〆−ゼの存在下、４−アミ
ノアンチピリンあるいは３−メチル−２−ベンゾチアゾ
リノンヒドラゾン（以下ＷＩＴＨという）とＩＡＢＰＴ
との酸化縮合による発色に基づき比色定量することによ
り検体中の目的成分を測定する方法において検体中に共
存する妨害物質が反応の過程で過酸化水素を生成し、そ
の過酸化水素が目的成分の測定結果に誤差を生じる虞の
ある場合、ＥＢＰＴの特性すなわち酸化縮合の相手方（
この場合４−アミノアンチピリンあるいはＭＢＴＩＩ）
が存在しない場合ベルオキシ〆−ヤの存在下過酸化水素
によＩｙｇａｐ丁自身が変化すると同時に存在する過酸
化水素を消尽すること、しかも変化し丸物質が無色であ
ること、更にＥＢＰＴは水溶性のため濁りを生じな゛い
こと（トルイジンは一般的に難溶性で濁る）ことを利用
して予め妨害物質を除去した後検体中の成分を正確に測
定する方法に関する。
本発明でいうレドックス反応で過酸化水素を生成する反
応を利用する最も簡単なものには酵素ダルコースオキシ
ダーゼを用いるグルコースの測定方法、あるいは酵素ウ
リカーヤを用いる尿酸の測定方法がある。を九一方目的
の成分に何らかの処理を施ζし例えけ酵素を作用してレ
ドックス反応の基質に導き、次いで酸化酵素を用いて過
酸化水素を生成しこれを比色定量する方法がある。この
場合反応の途中に種々の中間体を経て最後にレドックス
反応が行なわれることが多いのでそれだけ検体中に共存
する妨害物質の影響を受は島い。
応を利用する最も簡単なものには酵素ダルコースオキシ
ダーゼを用いるグルコースの測定方法、あるいは酵素ウ
リカーヤを用いる尿酸の測定方法がある。を九一方目的
の成分に何らかの処理を施ζし例えけ酵素を作用してレ
ドックス反応の基質に導き、次いで酸化酵素を用いて過
酸化水素を生成しこれを比色定量する方法がある。この
場合反応の途中に種々の中間体を経て最後にレドックス
反応が行なわれることが多いのでそれだけ検体中に共存
する妨害物質の影響を受は島い。
例えば（１）トリグリセライドの測定は次の反応によシ
行なわれる。
行なわれる。
ダリセロール十Ｎ肋咳
ダリセロールキナーぜ
ダリセーール＋ム’ｒｐ−一−−−−カー一→グリセロ
ールー３−リン酸＋ムＤＰ ジヒドロキシアセトン−モノリン酸エステル＋Ｈ＝Ｏ＝ 上記原１１に、よるトリダリセライド測定においては検
体中のグリセロールが測定値に正誤差を与える仁とは明
らかである。因に人血清中には約０．１ｗｍ・ノ／ｌの
グリセロールが含まれてお〉トリオレイン換算的８１１
１９／ｄ４に相当するが時には（例えば透析患者血清）
さらに高くなることもある。また（２）トランスアミナ
ーゼ（Ｇｏ〒、ＧＰＴ＞活性測定は次の反応にょ）行な
われる。
ールー３−リン酸＋ムＤＰ ジヒドロキシアセトン−モノリン酸エステル＋Ｈ＝Ｏ＝ 上記原１１に、よるトリダリセライド測定においては検
体中のグリセロールが測定値に正誤差を与える仁とは明
らかである。因に人血清中には約０．１ｗｍ・ノ／ｌの
グリセロールが含まれてお〉トリオレイン換算的８１１
１９／ｄ４に相当するが時には（例えば透析患者血清）
さらに高くなることもある。また（２）トランスアミナ
ーゼ（Ｇｏ〒、ＧＰＴ＞活性測定は次の反応にょ）行な
われる。
ＧＰＴ
ＯＦＴ：ＤＬ−アラニン＋！−ケトダルタール酸−−−
ラピルビン酸十Ｌ−グルタミン酸 ピルビン酸＋０・＋リン酸 ″″″″酸オキ′ダー７
アセチルリン酸＋Ｃｏ ＊ ＋ Ｈｚ Ｏ＊ＧＯＴ：Ｌ
−アス・譬うギン酸＋α−ケトダルタール酸（１Ｇ？オ
キゾロ酢酸＋Ｌ−グルタミン酸 ピルビン酸＋ＣＯ畠 ピルビン酸＋０３＋リン酸−ドーーーと１−４＝艷ｙ／
＝」へ−アセチルリン酸十〇（ｈ ＋ ＨｚＯ雪これら
の場合検体中のピルビン酸が測定値に正誤差を与える。
ラピルビン酸十Ｌ−グルタミン酸 ピルビン酸＋０・＋リン酸 ″″″″酸オキ′ダー７
アセチルリン酸＋Ｃｏ ＊ ＋ Ｈｚ Ｏ＊ＧＯＴ：Ｌ
−アス・譬うギン酸＋α−ケトダルタール酸（１Ｇ？オ
キゾロ酢酸＋Ｌ−グルタミン酸 ピルビン酸＋ＣＯ畠 ピルビン酸＋０３＋リン酸−ドーーーと１−４＝艷ｙ／
＝」へ−アセチルリン酸十〇（ｈ ＋ ＨｚＯ雪これら
の場合検体中のピルビン酸が測定値に正誤差を与える。
因に人血清中のピルビン酸は通常約０，１鵬鵬・ｌ／ｌ
であるが病的にはさら−に増加することがある。ま九（
３）−一アミラーゼ活性測定は次の反応によシ行なわれ
る。
であるが病的にはさら−に増加することがある。ま九（
３）−一アミラーゼ活性測定は次の反応によシ行なわれ
る。
α−アオラーゼ
修飾ｒングン ダルコースグリコアミ
２−ゼ グルコース十〇、−ど４２Ｌ二Ｘ＃＋ＶＩ−＊老ダルコ
ン酸＋Ｈバｈ 上記原理によるカーアミラーぜ活性の測定においては検
体中のグルコースが正誤差を与えることになる。因に人
血清中のグルコースは約ｆＪｍ鵬・ｌ／ｌであるが病的
には非常に増加することがある。
２−ゼ グルコース十〇、−ど４２Ｌ二Ｘ＃＋ＶＩ−＊老ダルコ
ン酸＋Ｈバｈ 上記原理によるカーアミラーぜ活性の測定においては検
体中のグルコースが正誤差を与えることになる。因に人
血清中のグルコースは約ｆＪｍ鵬・ｌ／ｌであるが病的
には非常に増加することがある。
以上の例のほかアシルＣ・−Ａシンセターゼ、ミオキナ
−髪、ピルビン酸オキシ〆−ゼを組合−え遊離脂肪酸の
測定の場合のピルビン酸、あるいはホス本す／譬−ゼー
Ｄ１コリンオキシＩ−ヤを組合せ九リン脂質測定の場合
のコリン等の妨害物質の影響な＊！Ｉ）除く丸めに本発
明方法は有効であに、さらに今後開発される測定方法へ
の適用も充分考えられる。
−髪、ピルビン酸オキシ〆−ゼを組合−え遊離脂肪酸の
測定の場合のピルビン酸、あるいはホス本す／譬−ゼー
Ｄ１コリンオキシＩ−ヤを組合せ九リン脂質測定の場合
のコリン等の妨害物質の影響な＊！Ｉ）除く丸めに本発
明方法は有効であに、さらに今後開発される測定方法へ
の適用も充分考えられる。
従来これら妨害物質の影響を堆夛除くためには目的の成
分に直接反応する酵素あるいは基質を除い九条件でそれ
以外は全く同じ方法で測定する屑繭検体盲検値を測定し
これを全体の測定値から差引くことが一般に行なわれて
いる。しかしこれは操作、計算が煩雑であ）さらに神度
４劣る。を九他の方法としては始めに目的の成分に変化
を与えない条件で共存する妨害物質を消尽し生成する過
酸化水素をカタラーゼを加えて除去し次いでカタラーゼ
阻害剤を加えた後目的成分の測定反応を実施する方法が
あるが、この場合にはカタラーゼ阻害剤を必要とし試薬
組成、操作が複雑となるばかにでなくカタラーゼ阻害剤
であるシアンナトリウムは公害上問題があＣｔ九アジ化
ナトリウムは酸性条件下でアジ化水素を発生する等の障
害がある。
分に直接反応する酵素あるいは基質を除い九条件でそれ
以外は全く同じ方法で測定する屑繭検体盲検値を測定し
これを全体の測定値から差引くことが一般に行なわれて
いる。しかしこれは操作、計算が煩雑であ）さらに神度
４劣る。を九他の方法としては始めに目的の成分に変化
を与えない条件で共存する妨害物質を消尽し生成する過
酸化水素をカタラーゼを加えて除去し次いでカタラーゼ
阻害剤を加えた後目的成分の測定反応を実施する方法が
あるが、この場合にはカタラーゼ阻害剤を必要とし試薬
組成、操作が複雑となるばかにでなくカタラーゼ阻害剤
であるシアンナトリウムは公害上問題があＣｔ九アジ化
ナトリウムは酸性条件下でアジ化水素を発生する等の障
害がある。
本発明者等はこれら従来技術の欠点を取除く丸め種々研
究し、ＲＡＰＴの特性すなわち１ｃＪｉ！ＰＴは酸化縮
合の相手方が存在しないときはベルオギシダーゼの存在
下、過酸化水素を消尽してそれ自身が発色することなく
変化するという知見に基づき研究を重ねた結果本発明を
完成した。
究し、ＲＡＰＴの特性すなわち１ｃＪｉ！ＰＴは酸化縮
合の相手方が存在しないときはベルオギシダーゼの存在
下、過酸化水素を消尽してそれ自身が発色することなく
変化するという知見に基づき研究を重ねた結果本発明を
完成した。
本発明は生体液中の成分すなわち基質または酵素活性の
測定にレドックス反応を適用し定量的に生成する過酸化
水素をペルオキシダーゼの存在下、酸化縮合によ〉発色
する発色剤によシ比色定量することにより検体中の目的
の成分を測定する方法において、始めに全試薬の中、目
的の成分に直接作用する基質あるいは酵素および４−ア
ミノアンチピリンあるいはＭＢＴＨを含むものとＥＳＰ
Ｔおよびペルオキシダーゼその他を含むものとに分け、
後者の試薬を用い予め検体中に共存する妨害物質を除去
することを特徴とする生体液中の成分の測定方法を提供
する。本発明の方法により検体中の妨害物質の影響を受
けないかつ正確な生体液中の成分の測定が可能となる。
測定にレドックス反応を適用し定量的に生成する過酸化
水素をペルオキシダーゼの存在下、酸化縮合によ〉発色
する発色剤によシ比色定量することにより検体中の目的
の成分を測定する方法において、始めに全試薬の中、目
的の成分に直接作用する基質あるいは酵素および４−ア
ミノアンチピリンあるいはＭＢＴＨを含むものとＥＳＰ
Ｔおよびペルオキシダーゼその他を含むものとに分け、
後者の試薬を用い予め検体中に共存する妨害物質を除去
することを特徴とする生体液中の成分の測定方法を提供
する。本発明の方法により検体中の妨害物質の影響を受
けないかつ正確な生体液中の成分の測定が可能となる。
次に試験例によシ本発明の詳細な説明する。
試験例１．妨害物質としての過酸化水素の除去効果：
１、試薬
（１） ベルオキシダーゼ ０．０１ ｑ／ｄ１
８ Ｐ Ｔ １．０ ｍｍｏｇ／ｌを含
む０．１ ｍａｉｌ／ｌ リン酸緩衝液（ｐＨ６，８
）Ｃ２）４−アミノアンチピリン ０．８ ｒｍ ｍｏ
ｌ／１を含む０．１ ｍｍｌｙタ リン酸緩衝液（ｐｆ
１６．８）Ｌｌｌ定 ０ ＝ １．０ ｍｍ＠ｊ／ｊ ＨＩＯｓ ｍ液の系列
の夫々０．０２−ン採シこれに試薬（１） １．５ ｓ
ｇを加え３７℃、５分間加温後試薬（２） １５ ｍを
加えこれにさらにＯ〜１．０ ｍｍｏｊ／ｊ ＨｓＯｓ
嬉液の系列を夫々０．０２−加えＳ分間放置後波長５５
０ ｎｍで吸光度を測定する。
８ Ｐ Ｔ １．０ ｍｍｏｇ／ｌを含
む０．１ ｍａｉｌ／ｌ リン酸緩衝液（ｐＨ６，８
）Ｃ２）４−アミノアンチピリン ０．８ ｒｍ ｍｏ
ｌ／１を含む０．１ ｍｍｌｙタ リン酸緩衝液（ｐｆ
１６．８）Ｌｌｌ定 ０ ＝ １．０ ｍｍ＠ｊ／ｊ ＨＩＯｓ ｍ液の系列
の夫々０．０２−ン採シこれに試薬（１） １．５ ｓ
ｇを加え３７℃、５分間加温後試薬（２） １５ ｍを
加えこれにさらにＯ〜１．０ ｍｍｏｊ／ｊ ＨｓＯｓ
嬉液の系列を夫々０．０２−加えＳ分間放置後波長５５
０ ｎｍで吸光度を測定する。
その結果を表ＩＫ示す、数値は吸光度を表わす。
上表から４−アミノアンチビリ／を加える前に存在し走
過酸化水素はペルオキシＩ−ぜ、１ｅ８Ｐ’ｒにより完
全に除去され、後の過酸化水素の測定に全く影響を与え
ていないことが明らかである。
過酸化水素はペルオキシＩ−ぜ、１ｅ８Ｐ’ｒにより完
全に除去され、後の過酸化水素の測定に全く影響を与え
ていないことが明らかである。
試験例４妨害物質としてのグルコースの除去効果：
１、試薬
（１）ムタロター” １０ Ｕ／ｍｅダル
コースオキＶ ／ −４１２Ｘ １ Ｇ’ Ｕ／ｓＩｔ
ベルオキシダー−ｋ” ２Ｘ１Ｇ’Ｕ／ｍｇ ８
Ｆ Ｔ １．０鵬馳・Ｌ
９を含むホウ酸緩債液 （ｐ１１６．５）伐） ４−ア
ミノナンチビリ／ ９４ｍｍｅｊ／ｊを含むホウ酸緩
債液 （り１６．３） 、Ｌ 測定 上記試薬を用いて次の三つの試験を行 なった。
コースオキＶ ／ −４１２Ｘ １ Ｇ’ Ｕ／ｓＩｔ
ベルオキシダー−ｋ” ２Ｘ１Ｇ’Ｕ／ｍｇ ８
Ｆ Ｔ １．０鵬馳・Ｌ
９を含むホウ酸緩債液 （ｐ１１６．５）伐） ４−ア
ミノナンチビリ／ ９４ｍｍｅｊ／ｊを含むホウ酸緩
債液 （り１６．３） 、Ｌ 測定 上記試薬を用いて次の三つの試験を行 なった。
（１） ／ Ａ コ−ス標準液０〜４００ｗ／ａｌの
一系列および３例の血清の夫々２０声Ｉを採シ試薬（１
）２−を加え３７℃、５分関放置後試薬儲）２−を加え
さ５らに３７’０．１０分間放置後波長５５０ ｎｎａ
で吸光度を測定する。
一系列および３例の血清の夫々２０声Ｉを採シ試薬（１
）２−を加え３７℃、５分関放置後試薬儲）２−を加え
さ５らに３７’０．１０分間放置後波長５５０ ｎｎａ
で吸光度を測定する。
儲） 上記グルコース標準液系列および血清の夫々２０
μｌを採ｐ試薬（１）２−および試薬（２） ２−を同
時に加え混合し３７℃、１０分間放置後波長５５０ ａ
ｒｍで吸光度を測定する。
μｌを採ｐ試薬（１）２−および試薬（２） ２−を同
時に加え混合し３７℃、１０分間放置後波長５５０ ａ
ｒｍで吸光度を測定する。
（３）グルコース標準液１００ダ／ａｔｚ。
ｊ１７を採シこれに試薬（１）２−を加え３７℃、５分
間放置後試薬＠２−を加 えさらに上記グルコース標準液系列お よび血清の夫々２０μｌを加え３７℃、ｌＯ分間放置後
波長５５ Ｑ ｎｍで吸光度を測定する。
間放置後試薬＠２−を加 えさらに上記グルコース標準液系列お よび血清の夫々２０μｌを加え３７℃、ｌＯ分間放置後
波長５５ Ｑ ｎｍで吸光度を測定する。
上記三つの測定結果を次の表２に示す。
数値は吸光度を表わす。
茨 ２
上表から次のことがいえる。
測定（１）からグルコース社員度の如何に拘らず試薬（
１）で処理することにょシ除去できることが、ｉ九測定
０）からは試薬（１）、試薬伐）を混合して用いる仁と
にょ〕グルコースの種々の崇度における測定が可能であ
ることが％を丸測定（３）から−は試薬（１）で最初に
存在するグルコースを予め除去し九後同じ反応液に試！
［＠を７１イて種々の濃度のグルコースの測定が可能で
あることが明らかである。しかも測定（２）と測定０）
の結果が測定誤差範囲で一致していることは最初に存在
する妨害物質としてのグルコースな本発明の方法で除去
しても後のグルコースの測定に何ら影響を与えないこと
が判明し丸。
１）で処理することにょシ除去できることが、ｉ九測定
０）からは試薬（１）、試薬伐）を混合して用いる仁と
にょ〕グルコースの種々の崇度における測定が可能であ
ることが％を丸測定（３）から−は試薬（１）で最初に
存在するグルコースを予め除去し九後同じ反応液に試！
［＠を７１イて種々の濃度のグルコースの測定が可能で
あることが明らかである。しかも測定（２）と測定０）
の結果が測定誤差範囲で一致していることは最初に存在
する妨害物質としてのグルコースな本発明の方法で除去
しても後のグルコースの測定に何ら影響を与えないこと
が判明し丸。
試験例１訪害物質としてのピルビン酸の除去効果：
１、試薬
（１） ｆアミンピロホスフェート ０．８ ｍｍｏ
／／７Ｎａ３ＨＰＯａ １０ ｒｍ
ｖｍｏｌ／ＩＪ４ｆｆ、 ：ｌｏ
ｍｍｏｊ／ｊＩＣ８Ｐ？ １
．０ｍｎｍｏνｊイルオキシダーゼ ０．０１
■／−ピルビン酸オキシ〆一ぜ ７ Ｕ／ｍを含
む０．１ ｍｏｌ／ｌジメチルグルタレート緩衝液（ｐ
ｉ１７．２） ＠ ４−アミノアンチピリン ０．８ｍｍｏｊ／Ｊを含
む０．１ ｇａｏｌ／ｌジメチルグルタレート緩債液（
ｉ）Ｊｉ７．２） ２− 測定 上記試薬を用いて二つの試験を行なっ 九。
／／７Ｎａ３ＨＰＯａ １０ ｒｍ
ｖｍｏｌ／ＩＪ４ｆｆ、 ：ｌｏ
ｍｍｏｊ／ｊＩＣ８Ｐ？ １
．０ｍｎｍｏνｊイルオキシダーゼ ０．０１
■／−ピルビン酸オキシ〆一ぜ ７ Ｕ／ｍを含
む０．１ ｍｏｌ／ｌジメチルグルタレート緩衝液（ｐ
ｉ１７．２） ＠ ４−アミノアンチピリン ０．８ｍｍｏｊ／Ｊを含
む０．１ ｇａｏｌ／ｌジメチルグルタレート緩債液（
ｉ）Ｊｉ７．２） ２− 測定 上記試薬を用いて二つの試験を行なっ 九。
α） ピルビン酸標準液０．１ ｍｍｅｊ／ｊ、 １．
Ｏｖｍｍｏｌ／ｌおよび１５例の血清の夫々２０μＩ
を採り鱗薬（１） １．５−を加え３７℃、５分間放置
後試薬（２）１．５ ＩＩｇを加えさらに３７℃％１ｏ
分関放置後試 薬ｆ２ンクを対ＷＲｋ波長５５０ ｙａｒｎで吸光度を
測定する。
Ｏｖｍｍｏｌ／ｌおよび１５例の血清の夫々２０μＩ
を採り鱗薬（１） １．５−を加え３７℃、５分間放置
後試薬（２）１．５ ＩＩｇを加えさらに３７℃％１ｏ
分関放置後試 薬ｆ２ンクを対ＷＲｋ波長５５０ ｙａｒｎで吸光度を
測定する。
偉）上記ピルビン酸標準液および血清の夫々２０μノに
試薬（１） １．５−と試薬Ｑ）１．５−を同時に加え
混合し３７℃。
試薬（１） １．５−と試薬Ｑ）１．５−を同時に加え
混合し３７℃。
１０分間放置後試檗プ２ンクを対１１に波畏５５ Ｏｍ
ｔａで吸光度を測定する。
ｔａで吸光度を測定する。
上記二つの測定結果を次？表３に示す・数値は吸光度を
表わす。
表わす。
上表からピルビン−についても試験例１、意とｐｆ１ｍ
本発明が有効であることが明らかである。
本発明が有効であることが明らかである。
試験例４．妨害物貿としてのグリセロールの除去効果：
ｌ、 試薬
（１） グリセロールキナーゼ １３Ｕ／ｊ
Ｌ−グリセロール−３−リン酸酸化酵素 １３００ Ｕ
／Ｊペルオキシダーゼ ３Ｘ１０番Ｕ／ＩＩア
テノシントリ７オスフェー） ０．４ ｍ ｍ＠ｌ
／ＩＥ８ＰＴ １．Ｏｍｍ＊
ｊ／Ｊ４ａ禽 ２ ｒｍｒ
ｍｏｌ／１トリトンに−１００１１１／１ を含む１００ ｍｎ＋ｅｊ、々トリスー塩酸緩衝液（ｐ
Ｈ７，０゜ （２）４−アンノアンチ♂すｙ Ｏ，８ｒｍｍ
＠ｌ／１トリトンＸ−Ｚｏｏ １ １／
／１を含む１００ ｍｍｏｌ／ｌ ）リス−塩酸緩衝液
（ｐＨ７，０） ２ 測定 上記試薬を用いて次の三つの試験を行なった。
Ｌ−グリセロール−３−リン酸酸化酵素 １３００ Ｕ
／Ｊペルオキシダーゼ ３Ｘ１０番Ｕ／ＩＩア
テノシントリ７オスフェー） ０．４ ｍ ｍ＠ｌ
／ＩＥ８ＰＴ １．Ｏｍｍ＊
ｊ／Ｊ４ａ禽 ２ ｒｍｒ
ｍｏｌ／１トリトンに−１００１１１／１ を含む１００ ｍｎ＋ｅｊ、々トリスー塩酸緩衝液（ｐ
Ｈ７，０゜ （２）４−アンノアンチ♂すｙ Ｏ，８ｒｍｍ
＠ｌ／１トリトンＸ−Ｚｏｏ １ １／
／１を含む１００ ｍｍｏｌ／ｌ ）リス−塩酸緩衝液
（ｐＨ７，０） ２ 測定 上記試薬を用いて次の三つの試験を行なった。
（１） グリ七ロール標準液０−１０００１１ｆｌ／
４１ （）リダリセツィドー算）の系列の夫々２０ Ａ
Ｉを採シ、試薬（１） １．５−を加え３７℃、５分間
放置後、試薬 （２） １．５−を加えさらに３７℃、１０分間放置後
波長５５０ ａｍで吸光度を測定する。
４１ （）リダリセツィドー算）の系列の夫々２０ Ａ
Ｉを採シ、試薬（１） １．５−を加え３７℃、５分間
放置後、試薬 （２） １．５−を加えさらに３７℃、１０分間放置後
波長５５０ ａｍで吸光度を測定する。
（２）上記ダリセロール°標準液系列の夫々２０μｌを
採シ試薬（１） １．５ ｍおよび試薬（２） １．５
−を同時に加え混合し、３７℃、１０分間放置後波長５
５ Ｑ ｎｍで吸光度を測定する。
採シ試薬（１） １．５ ｍおよび試薬（２） １．５
−を同時に加え混合し、３７℃、１０分間放置後波長５
５ Ｑ ｎｍで吸光度を測定する。
（３） グリセロール標準液１００ダ／ｄｌ（トリグ
リ竜ライ）°換算）２０μｌを採りこれに試薬（１）
１．５−を加え３７℃、５分間放置後試薬（２） １．
５ ｍを加えさらに上記グリセロール標準液系列を加え ３７℃、１０分間放置後波長５５０ｍｍで吸光度を測定
する。
リ竜ライ）°換算）２０μｌを採りこれに試薬（１）
１．５−を加え３７℃、５分間放置後試薬（２） １．
５ ｍを加えさらに上記グリセロール標準液系列を加え ３７℃、１０分間放置後波長５５０ｍｍで吸光度を測定
する。
上記三つの測定結果を第１ＩＩに示す。
１１１１図から次のことがいえる。
一定（１）からグリセロールは議変の如何に拘らず試薬
（１）で処理することにより除去できることが、また測
定（２）からは試薬（１）、試薬（２）を混合して用い
ることによシグリセロールの種々の濃度における測定が
可能であることが、また測定（３）からは試薬（１）で
最初に存在するグリセロールを予め除去した後同じ反応
液に試薬Ｑ）を用いて種々の濃度のグリセロールの測定
が可能であることが明らかである。しかも測定（２）と
測定（３）の結果が測定誤差範囲で一致していることは
最初に存在する妨害物質としてのグリセロールを本発明
の方法で除去しても後のグリセロールの測定に何ら影響
を与えないことが判明した。
（１）で処理することにより除去できることが、また測
定（２）からは試薬（１）、試薬（２）を混合して用い
ることによシグリセロールの種々の濃度における測定が
可能であることが、また測定（３）からは試薬（１）で
最初に存在するグリセロールを予め除去した後同じ反応
液に試薬Ｑ）を用いて種々の濃度のグリセロールの測定
が可能であることが明らかである。しかも測定（２）と
測定（３）の結果が測定誤差範囲で一致していることは
最初に存在する妨害物質としてのグリセロールを本発明
の方法で除去しても後のグリセロールの測定に何ら影響
を与えないことが判明した。
次に実施例によシ本発明をさらに詳細に説明する。
実施例１．血清中のトリグリセ２イドの測定１、試薬
（１） グリセロールキナーゼ １３Ｕ／ｊ
Ｌ−グリセロールニ３−リン酸酸化酵素１３００．０／
Ｊ ペルオキシダーゼ ３Ｘ１０’ Ｕ／ｊアデ
ノシントリフォスフニー） ０．４ ｍｍｏｊ／
ｊＥ８Ｐ丁 １．０ ｍｍ＠ｊ／７
棒αｓ ２ ｍｍｏＪ
ｆ／ｊトリト／１−１００ １ １／１を含む
１００ ｍｍｏｊＬタトリスー塩酸緩衝液（ｐＪＩ７．
０） 偉） リ／＃−ゼ（す４ｆロテインリ／臂−ゼ作゛用
を有する） ５Ｘ１Ｇ’Ｕ／ｊ４−アミノア
ンチピリン ０．８ ｒａｗｅｓｔ／１トリトンＸ−１
００１９７１ を含む１００ ｒｍｒｎ＊ｌ／ｌ ） ！Ｊ ス−塩１
１緩衝液（ｐＨ７，０） ２、、測定 検体血清２０μ！に試薬（１） １．５−を加え３７℃
、５分間加温し血清中に存在する妨害成分である遊離ダ
リセーロールを消去する。この場合妨害物質の大部分は
遊離グリセロールであるがその他ダリ女ロールキナーヤ
以下の反応に関与する総ての血清副反応も消去される。
Ｌ−グリセロールニ３−リン酸酸化酵素１３００．０／
Ｊ ペルオキシダーゼ ３Ｘ１０’ Ｕ／ｊアデ
ノシントリフォスフニー） ０．４ ｍｍｏｊ／
ｊＥ８Ｐ丁 １．０ ｍｍ＠ｊ／７
棒αｓ ２ ｍｍｏＪ
ｆ／ｊトリト／１−１００ １ １／１を含む
１００ ｍｍｏｊＬタトリスー塩酸緩衝液（ｐＪＩ７．
０） 偉） リ／＃−ゼ（す４ｆロテインリ／臂−ゼ作゛用
を有する） ５Ｘ１Ｇ’Ｕ／ｊ４−アミノア
ンチピリン ０．８ ｒａｗｅｓｔ／１トリトンＸ−１
００１９７１ を含む１００ ｒｍｒｎ＊ｌ／ｌ ） ！Ｊ ス−塩１
１緩衝液（ｐＨ７，０） ２、、測定 検体血清２０μ！に試薬（１） １．５−を加え３７℃
、５分間加温し血清中に存在する妨害成分である遊離ダ
リセーロールを消去する。この場合妨害物質の大部分は
遊離グリセロールであるがその他ダリ女ロールキナーヤ
以下の反応に関与する総ての血清副反応も消去される。
次に試薬Ｃ２） １．５ ｍ１ｇ４加え混合し３７℃。
１０分間放置後波長・５５０ ａｒｍで吸光度を測定す
る。この方法では血清中に通常存在する遊離グリセロー
ルの少くとも ２０倍、量すなわち２４ｍｔｓｌ／ｌ （）リダリセ
ライド１８００ダ／ａｔ相当）まで消去できるので日常
の臨床検査では特別の操作を加えるととｋ〈血清中のト
リグリセライドの定量が可能である。
る。この方法では血清中に通常存在する遊離グリセロー
ルの少くとも ２０倍、量すなわち２４ｍｔｓｌ／ｌ （）リダリセ
ライド１８００ダ／ａｔ相当）まで消去できるので日常
の臨床検査では特別の操作を加えるととｋ〈血清中のト
リグリセライドの定量が可能である。
透析患者血清４６例を用い（１）本発明方法（前処理を
行ない遊離グリセロールを消去して中性脂肪を測定する
方法）偉）無処理の方法（前処理を行なわないで遊離グ
リセロールと中性脂肪を測定する方法）（３）別処理方
法（偉）無処理の方法から遊離グリセロールを別Ｋｍ定
して差し引く方法）とを比較した結果は第２図及び第３
図の通シである。
行ない遊離グリセロールを消去して中性脂肪を測定する
方法）偉）無処理の方法（前処理を行なわないで遊離グ
リセロールと中性脂肪を測定する方法）（３）別処理方
法（偉）無処理の方法から遊離グリセロールを別Ｋｍ定
して差し引く方法）とを比較した結果は第２図及び第３
図の通シである。
第２図で相関は次のとおりで６る：
ａＳ式 ｙ ＝ １．３５ ｘ ＋１０２相関係数 Ｂ
＝０．９６６ Ｊｉｌａ図で相関は次のとおシである：回帰式 Ｆ”０
．９９３Ｃ−１３ ４！関係数Ｒ−０，９９９ 無処理の方法は、検体２０ ｓｌを採シ、試薬（１）
１．５−と試薬（２） １．５−を同時に混合し、３７
℃、ｌＯ分間放置後波長５５０ｓｕ＋ａで吸光度を測定
する。
＝０．９６６ Ｊｉｌａ図で相関は次のとおシである：回帰式 Ｆ”０
．９９３Ｃ−１３ ４！関係数Ｒ−０，９９９ 無処理の方法は、検体２０ ｓｌを採シ、試薬（１）
１．５−と試薬（２） １．５−を同時に混合し、３７
℃、ｌＯ分間放置後波長５５０ｓｕ＋ａで吸光度を測定
する。
遊離グリセロールのみを測定する方法
は試薬（１） １．５−と試薬伐）からりΔ−ゼのみを
除いた試薬１．５−を同時に混合し、３７℃、１０分間
放置後波長５５０ ａｍで測定する。
除いた試薬１．５−を同時に混合し、３７℃、１０分間
放置後波長５５０ ａｍで測定する。
以上のことから、本発明法は、無処理
とは第２図のように一致しないが、別処理の方法とは第
３図のように、非常によく一致することが明らかである
。
３図のように、非常によく一致することが明らかである
。
実施例２
血清中のα−アミラーゼの活性測定法
１、 試薬
（１） グルコアミラーゼ １５Ｕ／ｓｇダ
ルコースオキシダーゼ ２ ｘ １ Ｇ’ １３７ｗ
ｔ３７ｗｔペルオキシダー ＩＯＵ／ｍムタロター
ゼ ＩＯＵ／ｄＥｓＰＴ
２ｍｍｅｊ々にα ８Ｑｍ
ｍ＊ｊ／７Ｃａ （４７ｍ ｍａｌ／１ を含む４０ｗａｍ・ｎホウ酸緩衝液 （ｐｌａ、５） ０）４−７ミノアンチピリン ０４ｍｍｏνＩ修飾デ
ンプン ５ ― を含む２００ ｍｍｏｌ／ｌマレイン酸緩倚液（ｐｉ１
６．３） （３） クエン酸 ０．６ｍｍ・ツカを
含む水溶液 ２ 測定 ２例の検体２０ｓｌｌ／Ｃｓゲルコール標準液０〜４０
０１１９／４１ ｆ）系列１ｋ ２０ ｓｌさらに採り
、試薬（１）２−を加え、３７℃、Ｓ分間加温し、検体
中および添加したグルコ゛−スを消去する。次に試薬（
２）２−を加え【温合し％３７℃で正確に１０分間加温
後、試薬（３）を１ｍｇ加えた後、波長６５ Ｏｎｖｍ
で吸光度を測定する。
ルコースオキシダーゼ ２ ｘ １ Ｇ’ １３７ｗ
ｔ３７ｗｔペルオキシダー ＩＯＵ／ｍムタロター
ゼ ＩＯＵ／ｄＥｓＰＴ
２ｍｍｅｊ々にα ８Ｑｍ
ｍ＊ｊ／７Ｃａ （４７ｍ ｍａｌ／１ を含む４０ｗａｍ・ｎホウ酸緩衝液 （ｐｌａ、５） ０）４−７ミノアンチピリン ０４ｍｍｏνＩ修飾デ
ンプン ５ ― を含む２００ ｍｍｏｌ／ｌマレイン酸緩倚液（ｐｉ１
６．３） （３） クエン酸 ０．６ｍｍ・ツカを
含む水溶液 ２ 測定 ２例の検体２０ｓｌｌ／Ｃｓゲルコール標準液０〜４０
０１１９／４１ ｆ）系列１ｋ ２０ ｓｌさらに採り
、試薬（１）２−を加え、３７℃、Ｓ分間加温し、検体
中および添加したグルコ゛−スを消去する。次に試薬（
２）２−を加え【温合し％３７℃で正確に１０分間加温
後、試薬（３）を１ｍｇ加えた後、波長６５ Ｏｎｖｍ
で吸光度を測定する。
この方法では、血清中に通常存在する
ダルコースの少なくとも５倍量すなわち約３０ ｒｍｒ
ｍ＊ｌ／ｌｌまで消去できるので、日常の臨床検査では
、特別の操作を、加えることなく血清中のα−アミラー
ゼ活性測定が可能である。
ｍ＊ｌ／ｌｌまで消去できるので、日常の臨床検査では
、特別の操作を、加えることなく血清中のα−アミラー
ゼ活性測定が可能である。
表 ４
以上のことから、検体中のダルコースに影響２れずＫａ
−アミラーヤ活性を測定可能である。
−アミラーヤ活性を測定可能である。
以上述べた通シ本発明方法は血清中の目的成分の測定に
本来必要な試薬のみを用い【予め妨害物質を除去するこ
とができ、−それ以外の特別の試薬あるいは４Ｉ別の繰
作によって共存Ｉゐ妨害物質な除去・を為ことなく、嚢
九検゛体ブランクを求めて妨害物質の影譬な除去する等
の余分の操作も行なわすに簡単かつ精度よぐ４目的成分
を測定することができるもので日常の臨床検査に当って
極めて有用である。
本来必要な試薬のみを用い【予め妨害物質を除去するこ
とができ、−それ以外の特別の試薬あるいは４Ｉ別の繰
作によって共存Ｉゐ妨害物質な除去・を為ことなく、嚢
九検゛体ブランクを求めて妨害物質の影譬な除去する等
の余分の操作も行なわすに簡単かつ精度よぐ４目的成分
を測定することができるもので日常の臨床検査に当って
極めて有用である。
第１図はグリセロール標準液と吸光度との関係を示すグ
ラフであり、第２図は別処理の方法によるトリグリセラ
イド測定と無処理の方法によるトリグリセライド測定と
の相関を示すグラフであり、第３図は本発明方法による
トリグリセ２イド測定と別処理の方法によるトリグリセ
２イド測定との相関を示、すグラフである。 第１図 グりぞＵ−ルア釆揮ノ箋＝ｍｇ／ｄｉ （）リグＩ把
ライト４更〕争２第２図 １ｑス％Ｊ’ｌｄ沃、 ″トリグリでライト・・ｍｇ／
ｄｌ第３図
ラフであり、第２図は別処理の方法によるトリグリセラ
イド測定と無処理の方法によるトリグリセライド測定と
の相関を示すグラフであり、第３図は本発明方法による
トリグリセ２イド測定と別処理の方法によるトリグリセ
２イド測定との相関を示、すグラフである。 第１図 グりぞＵ−ルア釆揮ノ箋＝ｍｇ／ｄｉ （）リグＩ把
ライト４更〕争２第２図 １ｑス％Ｊ’ｌｄ沃、 ″トリグリでライト・・ｍｇ／
ｄｌ第３図
Claims (1)
- 生体液中の成分の測定にレドックス反応を適用し生成す
る過酸化水素をイルオキシダーゼの存在下、酸化縮合に
より発色する発色剤により比色定量することにより目的
成分を測定する方法において全試薬を目的成分に直接作
用する基質又は酵素および４−アミノアンチピリンある
いは３−メチル−２−ベンゾチアゾリノンヒドラゾンを
含むものと、Ｎ−エチル−Ｎ−スルホプロピル−ｔｍ−
）ルイジン及びベルオキシダーゼを含むその他のものと
に分け、後者の試薬を用い予め検体中に共存する妨害物
質を除去することを特徴とする生体液中の成分の測定方
法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14456881A JPS5847499A (ja) | 1981-09-16 | 1981-09-16 | 生体液中の成分の測定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14456881A JPS5847499A (ja) | 1981-09-16 | 1981-09-16 | 生体液中の成分の測定方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5847499A true JPS5847499A (ja) | 1983-03-19 |
Family
ID=15365241
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP14456881A Pending JPS5847499A (ja) | 1981-09-16 | 1981-09-16 | 生体液中の成分の測定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5847499A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60228963A (ja) * | 1984-04-27 | 1985-11-14 | Yatoron:Kk | ビリルビンの干渉を回避して行なう生体成分の測定方法 |
| WO2000043537A1 (en) * | 1999-01-20 | 2000-07-27 | Kyowa Medex Co., Ltd. | Method for quantitating triglyceride in lipoprotein |
-
1981
- 1981-09-16 JP JP14456881A patent/JPS5847499A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60228963A (ja) * | 1984-04-27 | 1985-11-14 | Yatoron:Kk | ビリルビンの干渉を回避して行なう生体成分の測定方法 |
| WO2000043537A1 (en) * | 1999-01-20 | 2000-07-27 | Kyowa Medex Co., Ltd. | Method for quantitating triglyceride in lipoprotein |
| US6811994B1 (en) | 1999-01-20 | 2004-11-02 | Kyowa Medex Co., Ltd. | Method for quantitating triglycerides in lipoproteins |
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