JPS584798A - 新規プラスミドおよびそれを使用したインタ−フエロンの製造法 - Google Patents
新規プラスミドおよびそれを使用したインタ−フエロンの製造法Info
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- JPS584798A JPS584798A JP56101330A JP10133081A JPS584798A JP S584798 A JPS584798 A JP S584798A JP 56101330 A JP56101330 A JP 56101330A JP 10133081 A JP10133081 A JP 10133081A JP S584798 A JPS584798 A JP S584798A
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- coli
- plasmid
- gene
- escherichia coli
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-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/70—Vectors or expression systems specially adapted for E. coli
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- Biotechnology (AREA)
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- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は新規プラスミドおよびこれを組込んだ大腸菌を
利用するインターフェロンの製造法゛ に関する。特に
効率のよいインターフェロンの製造法に関するものであ
る。
利用するインターフェロンの製造法゛ に関する。特に
効率のよいインターフェロンの製造法に関するものであ
る。
ノβ
インターフェロンは抗ウィルス作用を伜胞に付与する一
群のタンパク質で、それの産生細胞誘発剤の違いからα
、β、γに大別されている〔小林、インターフェロン−
基礎研究から臨床応用への展望−Ｐ１５〜Ｐ２４．１９
７８年（講談社）〕。
群のタンパク質で、それの産生細胞誘発剤の違いからα
、β、γに大別されている〔小林、インターフェロン−
基礎研究から臨床応用への展望−Ｐ１５〜Ｐ２４．１９
７８年（講談社）〕。
インターフェロンは種々のヒト細胞を培養し、これにウ
ィルス、核酸類似物あるいはバクテリア内毒素などを作
用させて誘発して生産されてきたが、いづれの方法に従
った場合でも生産量は極微量であり、従って効率のよい
生産方法の開発が強く望まれて来た。
ィルス、核酸類似物あるいはバクテリア内毒素などを作
用させて誘発して生産されてきたが、いづれの方法に従
った場合でも生産量は極微量であり、従って効率のよい
生産方法の開発が強く望まれて来た。
最近、遺伝子操作技術を使用して、大腸菌内にヒト−イ
ンターフェロンを産生させる方法に関する報告が数多く
発表されている。これらの報告を詳細に検旧すると、一
部の物はインターフェロンのタンパク質部分に加えてそ
のＮ−末端側に他のタンパク質の一部分が結合したいわ
ゆるキメラタンパク質であったり［Ｎａｇａｔａ、Ｓ。
ンターフェロンを産生させる方法に関する報告が数多く
発表されている。これらの報告を詳細に検旧すると、一
部の物はインターフェロンのタンパク質部分に加えてそ
のＮ−末端側に他のタンパク質の一部分が結合したいわ
ゆるキメラタンパク質であったり［Ｎａｇａｔａ、Ｓ。
ｅｔ、ａｌ、＋Ｎａｔｕｒｅ、 ２８４３１６−３２０
（１９８０１’：ｌ、□！ あるいはシグナルペプチドを含んだｉｔのプロインター
フェロンＣＤｅｒｙｎｃｋ 、Ｒ，ｅｔ 、ａ Ｉ 、
。
（１９８０１’：ｌ、□！ あるいはシグナルペプチドを含んだｉｔのプロインター
フェロンＣＤｅｒｙｎｃｋ 、Ｒ，ｅｔ 、ａ Ｉ 、
。
Ｎａｔｕｒｅ、２８７ １９３〜１９７（１９８０））
である。
である。
□ ２
従ってそれらを人の病気治療に使用することはアレルギ
ー反応などの危険性もあり、好ましくないと思われる。
ー反応などの危険性もあり、好ましくないと思われる。
これらのキメラタンパクあるいはプロインターフェロン
ではなくインターフェロンの真のタンパク質部分の産生
については、α型、β型と１ もに報告されているＣ Ｇｏｅｄｄｌ−ｔＬ、Ｄ、Ｖ、
ｅｔ 、ａｌ、＋Ｎａｔｕｒｅ、２８７ ４１１−４１
６ （１９８０）。
ではなくインターフェロンの真のタンパク質部分の産生
については、α型、β型と１ もに報告されているＣ Ｇｏｅｄｄｌ−ｔＬ、Ｄ、Ｖ、
ｅｔ 、ａｌ、＋Ｎａｔｕｒｅ、２８７ ４１１−４１
６ （１９８０）。
□７
（３）
Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ、Ｔ、ｅｔ、ａｌ、＋ Ｐｒｕｃ
、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、。
、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、。
ｅｔ、ａｌ、＋ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃ１ｄ Ｒ
ｅ５ｅａｒｃｈ、８ ４０５７ −＝２ ４０７４ （１９８０）〕。
ｅ５ｅａｒｃｈ、８ ４０５７ −＝２ ４０７４ （１９８０）〕。
これらの報告を検討すると、種４の前提はあるが大腸菌
１匹当り数十から最高２万分子のインターフェロンが産
生されている。大腸菌１匹当り１万分子のインターフェ
ロンの生産は従来の細胞培養法に比較すると、効率の高
い生産方法ではあるが、１沼中の大腸菌を５×１０１′
とすると培養液１沼当りのインターフェロンの重量はた
かだかＱ、 １〜０．２ 曙と計算され、工業的見地か
らは十分に満足できるものではない。
１匹当り数十から最高２万分子のインターフェロンが産
生されている。大腸菌１匹当り１万分子のインターフェ
ロンの生産は従来の細胞培養法に比較すると、効率の高
い生産方法ではあるが、１沼中の大腸菌を５×１０１′
とすると培養液１沼当りのインターフェロンの重量はた
かだかＱ、 １〜０．２ 曙と計算され、工業的見地か
らは十分に満足できるものではない。
木兄−（はとれら従来の方法を改良すべく倹１討した結
果、効率の良いプロモーターにインターフェロンの遺に
子を結合しこれをコピー数が増加できるプラスミド中に
組みこませることにより新規プラスミｌ゛を得、該プラ
スミドを用いて形質転換大腸菌を作製すると、得られた
組換え大腸菌が効率良くインターフェロンを産生ず（４
） ることを見出した。すなわち本発明は、β−ガラク］・
ンダーゼ遺丙子を下流に結合し大腸菌に組み入れた場合
、大腸菌１匹当り１万分子以上のβ−ガラク］・ンダー
セを産生する効率を持つプロモーターに、インターフェ
ロン構造遺伝子を結合し、該結合物を更にヒートインダ
クション匁社−−・ ゛ でコピー数が増加するプラ
スミドに組み込ませてなる新規プラスミド、および該新
規プラスミドを大腸菌に組み入れ、インターフェロンを
産生する能力を有する大腸菌を製造し、該大腸菌を培養
し、生成した大腸菌からインターフェロンを採取するこ
とを特徴とするインターフェロンの製造方法を提供する
ものである。
果、効率の良いプロモーターにインターフェロンの遺に
子を結合しこれをコピー数が増加できるプラスミド中に
組みこませることにより新規プラスミｌ゛を得、該プラ
スミドを用いて形質転換大腸菌を作製すると、得られた
組換え大腸菌が効率良くインターフェロンを産生ず（４
） ることを見出した。すなわち本発明は、β−ガラク］・
ンダーゼ遺丙子を下流に結合し大腸菌に組み入れた場合
、大腸菌１匹当り１万分子以上のβ−ガラク］・ンダー
セを産生する効率を持つプロモーターに、インターフェ
ロン構造遺伝子を結合し、該結合物を更にヒートインダ
クション匁社−−・ ゛ でコピー数が増加するプラ
スミドに組み込ませてなる新規プラスミド、および該新
規プラスミドを大腸菌に組み入れ、インターフェロンを
産生する能力を有する大腸菌を製造し、該大腸菌を培養
し、生成した大腸菌からインターフェロンを採取するこ
とを特徴とするインターフェロンの製造方法を提供する
ものである。
以下本発明について詳細に説明する。
まず、β−ガラクトンダーゼ遺伝子を下流に結合し大腸
菌に組み入れた場合、大腸菌１匹当り１万分子以−にの
β−ガラクトンダーゼを産生する効率をもつプロモータ
ーについて説明する。
菌に組み入れた場合、大腸菌１匹当り１万分子以−にの
β−ガラクトンダーゼを産生する効率をもつプロモータ
ーについて説明する。
プロモーターとは、ＤＮＡからｍ−ＲＮＡが転写される
場合、この転写を開始するＤＮＡ上の部位を称し、効率
の良いプロモーターはど多量のｒｒ＋−ＲＮＡが合成さ
れるＯ プロモーターの効率を比較するため、我々はβ
−ガラクトシダーゼ遺伝子を用いる方法を採用した。即
ち、プロモーターの下流（３’ １ｇ１１）にβ−ガラ
クトシダーゼの遺伝子を結合したプラスミドを作り、該
プラスミドで形質転換した大腸菌を作り、大腸菌が作る
β−ガラクトシダーゼの活性を測定して、大腸菌１匹当
りに産生されるβ−ガラクトシダーゼの分子数を求め、
該分子数によってプロモーターの効率を判断する方法を
採用した。この分子数が多い物はどプロモーターの効率
が良く、本発明で云うプロモーターとは大腸菌１匹当り
１万分子以上、好ましくは２万分子以上のβ−ガラクト
シダーゼを産生ずる効率を持つプロモーターである。通
常の大腸菌では１匹当りβ−ガラクトシダーゼが約６０
００分子しか産生しないとされているＣＷａｔ＊ｏｎ、
Ｊ、Ｄ、、三浦ほか択遺献子の分子生物学、Ｐ４３４．
第６版、東京化学同人（１９７７））。
場合、この転写を開始するＤＮＡ上の部位を称し、効率
の良いプロモーターはど多量のｒｒ＋−ＲＮＡが合成さ
れるＯ プロモーターの効率を比較するため、我々はβ
−ガラクトシダーゼ遺伝子を用いる方法を採用した。即
ち、プロモーターの下流（３’ １ｇ１１）にβ−ガラ
クトシダーゼの遺伝子を結合したプラスミドを作り、該
プラスミドで形質転換した大腸菌を作り、大腸菌が作る
β−ガラクトシダーゼの活性を測定して、大腸菌１匹当
りに産生されるβ−ガラクトシダーゼの分子数を求め、
該分子数によってプロモーターの効率を判断する方法を
採用した。この分子数が多い物はどプロモーターの効率
が良く、本発明で云うプロモーターとは大腸菌１匹当り
１万分子以上、好ましくは２万分子以上のβ−ガラクト
シダーゼを産生ずる効率を持つプロモーターである。通
常の大腸菌では１匹当りβ−ガラクトシダーゼが約６０
００分子しか産生しないとされているＣＷａｔ＊ｏｎ、
Ｊ、Ｄ、、三浦ほか択遺献子の分子生物学、Ｐ４３４．
第６版、東京化学同人（１９７７））。
従って通常の大腸菌に含まれるプロモーターでは、本発
明にいうインターフェロンを効率良く産生ずることがで
きない。本発明のプロモーターとしては、例えばＴｕＢ
−２プロモーター、ＲｅｃＡプロモータ〜、Ｔｒｐプロ
モーター、Ｌａｃプロモーター等が挙げられる。
明にいうインターフェロンを効率良く産生ずることがで
きない。本発明のプロモーターとしては、例えばＴｕＢ
−２プロモーター、ＲｅｃＡプロモータ〜、Ｔｒｐプロ
モーター、Ｌａｃプロモーター等が挙げられる。
次に、本発明にいうインターフェロン構造遺伝子につい
て説明する。
て説明する。
インターフェロン遺伝子は、プロモータ一部位から始捷
り、その下流（３′例）にシグナルペプチドをコードす
る部位をへてインターフェロンのタンパク質部分をコー
ドする部位が並んでいる。このインターフェロンのタン
パク質部分をコードする核酸配列がここで言うインター
フェロン構造遺伝子と呼ぶものである。
り、その下流（３′例）にシグナルペプチドをコードす
る部位をへてインターフェロンのタンパク質部分をコー
ドする部位が並んでいる。このインターフェロンのタン
パク質部分をコードする核酸配列がここで言うインター
フェロン構造遺伝子と呼ぶものである。
インターフェロン構造遺伝子は、公知のｍ −ＲＮ Ａ
から相補ｔ＝ Ｄ Ｎ Ａを合成する方法、遺伝子ライ
フラリ−から適当なプローベを用いてスクリーニングす
る方法、すでにクローン化されたプラスミドから切出す
方法等により作製されるものである。
から相補ｔ＝ Ｄ Ｎ Ａを合成する方法、遺伝子ライ
フラリ−から適当なプローベを用いてスクリーニングす
る方法、すでにクローン化されたプラスミドから切出す
方法等により作製されるものである。
（７）
この・インターフェロン構造遺伝子を本発明で使明する
効率よいプロモーターの下流に存在する綜訳開始コドン
の直後に結合させる。この結合方法としては酵素を利用
する公知の種々の技術が適用できる。
効率よいプロモーターの下流に存在する綜訳開始コドン
の直後に結合させる。この結合方法としては酵素を利用
する公知の種々の技術が適用できる。
次に、ヒートインダクンヨン１基剣≠章→゛トー吟キで
コピー数が増加するプラスミドについて説明する。
コピー数が増加するプラスミドについて説明する。
ヒートインダクションとは乙Ｏ℃の培養では大腸菌１匹
当りのプラミド数がたかだか数十個であるが培養温度を
３５°〜４２゛Ｃに−［二昇した場合、プラスミドの数
が数十〜数百倍に増加する現膚＋講４ｏ このような性
質を持つプラスミドとしては、例えばｐＲｌ ｄｒｄ
−１９、ｐＢＥＵｌ ７ 、７７−ジとしてはλＰＬの
突然変異株Ｃｌ−８５７７！ｉ：どかあげられる０ （
Ｕｈｌｉｎ、Ｂ、Ｅ、＋ ｅｔ、ａｌ、、Ｍｏｌ。
当りのプラミド数がたかだか数十個であるが培養温度を
３５°〜４２゛Ｃに−［二昇した場合、プラスミドの数
が数十〜数百倍に増加する現膚＋講４ｏ このような性
質を持つプラスミドとしては、例えばｐＲｌ ｄｒｄ
−１９、ｐＢＥＵｌ ７ 、７７−ジとしてはλＰＬの
突然変異株Ｃｌ−８５７７！ｉ：どかあげられる０ （
Ｕｈｌｉｎ、Ｂ、Ｅ、＋ ｅｔ、ａｌ、、Ｍｏｌ。
ｇｅｎ、Ｇｅｎｅｔ、、１６５ １６７−１７９ （１
９７８１などＪ。
９７８１などＪ。
□２
（８）
組みかえ操作後のスクリーニ・／グを容易にするために
ｐＢＥＵｌ７にカナマイシン耐性の性質を付加したプラ
スミドｐＭＫ−１をｐＫＣ７とｐＢＥＵｌ ７ＣＲａｏ
、Ｒ，Ｎ、ｅｔ、ａｌ、、Ｇｅｎｅ、７，７９−８２（
１９７９＋）から作製した物は特に好捷しく用いられる
。このヒートインダクションに匝奔柑キ千４久−丑ゴで
コピー数が増加するプラスミ１゛を該インダクション能
を失なわせしめない制限酵素で切断し、この部ｔｎに効
率の高いプロモーターにインターフェロン構造遺伝子を
結合したＤＮＡ断片を組み込ませることにより本発明の
新規プラスミドが得られる。インダクンヨンがかかるプ
ラスミドの切断には、好捷しくは切断個所がプラスミド
当り１個廃偏限酵素が使用される。また、上記ＤＮＡ断
片を組み込壕せる際には公知の種々の酵素反応が適用さ
れる。
ｐＢＥＵｌ７にカナマイシン耐性の性質を付加したプラ
スミドｐＭＫ−１をｐＫＣ７とｐＢＥＵｌ ７ＣＲａｏ
、Ｒ，Ｎ、ｅｔ、ａｌ、、Ｇｅｎｅ、７，７９−８２（
１９７９＋）から作製した物は特に好捷しく用いられる
。このヒートインダクションに匝奔柑キ千４久−丑ゴで
コピー数が増加するプラスミ１゛を該インダクション能
を失なわせしめない制限酵素で切断し、この部ｔｎに効
率の高いプロモーターにインターフェロン構造遺伝子を
結合したＤＮＡ断片を組み込ませることにより本発明の
新規プラスミドが得られる。インダクンヨンがかかるプ
ラスミドの切断には、好捷しくは切断個所がプラスミド
当り１個廃偏限酵素が使用される。また、上記ＤＮＡ断
片を組み込壕せる際には公知の種々の酵素反応が適用さ
れる。
次に、上記インターフェロン産生にかかる新規プラスミ
ドを大腸菌に組み入れ、インターフェロンを産生ずる能
力を有する大腸菌の製造について述べる。プラスミドを
大腸菌と低温で、ＣａＣｌ、、処理することによりＣＭ
ａ ｎ ｄ ｅ ＃ 、 Ｍ 、 ｅ ｔ 、 ：ａ
ｌ、、 Ｊ、Ｍｏ１．Ｂｉｏｌ、、 ５３． ’Ｉ ５
９ （１９７１］） ］形質転換した大腸菌を得ること
ができる。このようにして得られた形質転換大腸菌の中
からインターフェロン産生能を有する大腸菌を選別し、
該大腸菌を培養し、充分に生育させた後、該大腸菌から
インターフェロンを採取することにより、インターフェ
ロンが製造できる。
ドを大腸菌に組み入れ、インターフェロンを産生ずる能
力を有する大腸菌の製造について述べる。プラスミドを
大腸菌と低温で、ＣａＣｌ、、処理することによりＣＭ
ａ ｎ ｄ ｅ ＃ 、 Ｍ 、 ｅ ｔ 、 ：ａ
ｌ、、 Ｊ、Ｍｏ１．Ｂｉｏｌ、、 ５３． ’Ｉ ５
９ （１９７１］） ］形質転換した大腸菌を得ること
ができる。このようにして得られた形質転換大腸菌の中
からインターフェロン産生能を有する大腸菌を選別し、
該大腸菌を培養し、充分に生育させた後、該大腸菌から
インターフェロンを採取することにより、インターフェ
ロンが製造できる。
本発明で言う効率の良いプロモーターの下流。
にβ−ガラクトノダーゼ遺伝子を結合する一例について
説明する。
説明する。
大腸菌タンパク質延長因子ｔｕｆ Ｂのプロモーターは
すでに宮島らによりプラスミドにクローン化されている
ＣＭｉｙａｊｉｍａ ｅｔ、ａｌ、、ＦＥＢＳＬｅｔｔ
ｅｒ、１０２ ２０７−２１０（１９７７１）ｏこのプ
ラ□ゲ スミドｐＴｕＢ１を大腸菌中で増殖して抽出する。
すでに宮島らによりプラスミドにクローン化されている
ＣＭｉｙａｊｉｍａ ｅｔ、ａｌ、、ＦＥＢＳＬｅｔｔ
ｅｒ、１０２ ２０７−２１０（１９７７１）ｏこのプ
ラ□ゲ スミドｐＴｕＢ１を大腸菌中で増殖して抽出する。
プラスミドＤＮＡ ｐＴｕＢｌを制限酵素ＥｃｏＲＩ
とＨｐａＩで処理する。処理液をアガローズ電気泳動に
かけ、約６ＫｂのＴｕＢ１プロモーターヲ含む断片を単
離する。一方β−ガラクトンダーゼ遺伝子を含むプラス
ミドＤＮＡ ｐＭｃ １４Ｄ３をＥｃｏＲＩとＳｍａｌ
で切断する。処理液を同様に電気泳動分離してβ−ガラ
クトシダーゼ遺伝子を含む９．９Ｋｂの断片を分離する
。精製各断片を混合しＴ−４ＤＮＡＩＪガーゼを作用し
て両者を結合する。得られたプラスミドＤＮＡを大腸菌
ＭＣ１０６１株［：Ｃａ５ａｄａｂａｎ、Ｍ、Ｊ、ｅｔ
、ａｌ、、 Ｊ、Ｍｏ１．Ｂｉｏｌ、＋１３８ １７９
−２０７（１９８０））をＣｏｈｅｎの方法（Ｃｏｈｅ
ｎ 、ｓ違ｔ 、ａ １ 、、 Ｐｒｏｃ 、Ｎａｔ
ｌ 、Ａｃａｄ、＋Ｓｃｉ、、６９ ２１１０−２１１
４（１９７２））に従って形質転換し、ラクトース資化
性およびアンピシリン耐性を指標に、ｔｕｆＢ１プロモ
ーターの下流よりｔｕｆＢ２プロモーターとβ−ガラク
トシダーゼ遺伝子が結合した新規プラスミドｐＴｕＢＬ
２０２も得られるｏ ｐＴｕＢＬ２０２およびｐＴａＢ
Ｌ８で形質転換した大腸菌１０６１株のβ−ガラクトシ
ダーゼ活性をＭｉｌｌｅｒの方法（Ｍｉ Ｉ ｌｅｒ
、 Ｊ、Ｈ，。
とＨｐａＩで処理する。処理液をアガローズ電気泳動に
かけ、約６ＫｂのＴｕＢ１プロモーターヲ含む断片を単
離する。一方β−ガラクトンダーゼ遺伝子を含むプラス
ミドＤＮＡ ｐＭｃ １４Ｄ３をＥｃｏＲＩとＳｍａｌ
で切断する。処理液を同様に電気泳動分離してβ−ガラ
クトシダーゼ遺伝子を含む９．９Ｋｂの断片を分離する
。精製各断片を混合しＴ−４ＤＮＡＩＪガーゼを作用し
て両者を結合する。得られたプラスミドＤＮＡを大腸菌
ＭＣ１０６１株［：Ｃａ５ａｄａｂａｎ、Ｍ、Ｊ、ｅｔ
、ａｌ、、 Ｊ、Ｍｏ１．Ｂｉｏｌ、＋１３８ １７９
−２０７（１９８０））をＣｏｈｅｎの方法（Ｃｏｈｅ
ｎ 、ｓ違ｔ 、ａ １ 、、 Ｐｒｏｃ 、Ｎａｔ
ｌ 、Ａｃａｄ、＋Ｓｃｉ、、６９ ２１１０−２１１
４（１９７２））に従って形質転換し、ラクトース資化
性およびアンピシリン耐性を指標に、ｔｕｆＢ１プロモ
ーターの下流よりｔｕｆＢ２プロモーターとβ−ガラク
トシダーゼ遺伝子が結合した新規プラスミドｐＴｕＢＬ
２０２も得られるｏ ｐＴｕＢＬ２０２およびｐＴａＢ
Ｌ８で形質転換した大腸菌１０６１株のβ−ガラクトシ
ダーゼ活性をＭｉｌｌｅｒの方法（Ｍｉ Ｉ ｌｅｒ
、 Ｊ、Ｈ，。
Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ ｉｎ Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ
Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、Ｐ２Ｓ５−３５５（１９７２）Ｃｏ
ｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏ
ｒｙ ”１で測定する。その結果Ｔｕ−Ｂ２プロモータ
ーを持つｐＴａＢＬ ２０２は大腸菌１匹当り２万分子
のβ−ガラクトシダーゼを産生しＴｕ−Ｂ１プロモータ
ーを持つｐＴａＢＬ８は１ろ００分子のβ−ガラクトシ
ダーゼを産生ずることが解る。
Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、Ｐ２Ｓ５−３５５（１９７２）Ｃｏ
ｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏ
ｒｙ ”１で測定する。その結果Ｔｕ−Ｂ２プロモータ
ーを持つｐＴａＢＬ ２０２は大腸菌１匹当り２万分子
のβ−ガラクトシダーゼを産生しＴｕ−Ｂ１プロモータ
ーを持つｐＴａＢＬ８は１ろ００分子のβ−ガラクトシ
ダーゼを産生ずることが解る。
プロモーター下流にインターフェロン構造遺伝子を結合
する方法を以下に述べる。
する方法を以下に述べる。
ｐＴｕＢＬ２０２ＤＮＡ （約１６Ｋｂ）を制限酵素Ｃ
１ａＩで消化し、アガロース電気泳動でｔｕｆＢプロモ
ータ一部分を含む約１５Ｋｂの断片を単離する。
１ａＩで消化し、アガロース電気泳動でｔｕｆＢプロモ
ータ一部分を含む約１５Ｋｂの断片を単離する。
一方、遺伝子ライブラリーからインターフェロン−βの
Ｎ−末端をコードする合成ヌクレオチド（ドデカマー）
をプローブにしてインター１ 合成ヌクレオチドを用いる方法（Ｇｏｅｄｄ ４ Ｄ、
Ｖ、 、 ｅ ｔ 。
Ｎ−末端をコードする合成ヌクレオチド（ドデカマー）
をプローブにしてインター１ 合成ヌクレオチドを用いる方法（Ｇｏｅｄｄ ４ Ｄ、
Ｖ、 、 ｅ ｔ 。
ａｌ、、 Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃ１ｄ Ｒｅ５ｅａｒｃ
ｈ、 ８．４０５７〜４０７４（１，９８０） ）で切
り出し、約０．８ Ｋｂのインターフェロン構造遺伝子
を得る。
ｈ、 ８．４０５７〜４０７４（１，９８０） ）で切
り出し、約０．８ Ｋｂのインターフェロン構造遺伝子
を得る。
得られた両
断片を混合し、Ｔ４−ＤＮＡＩＪガーゼで結合する。
得られたプラスミド混合物で大腸菌ＭＣ１０６１株を形
質転換する。形質転換株について、それぞれが含有する
プラスミドを単離し、それらの制限酵素切断地図を検討
し、ＴｕｆＢ−２プロモーターの下流にインターフェロ
ン−β−遺云子１個を正しい方向に結合した新規プラス
ミドｐＴＹ−８とインターフェロン遺伝子２個を結合し
たプラスミドｐＴＹ−９を得る。使用するプロモーター
の違いにより使用する制限酵素、手法に若干の修飾を必
要とするが、望ましいプロモーターの下流にインターフ
ェロン遺伝子を結合することができる。
質転換する。形質転換株について、それぞれが含有する
プラスミドを単離し、それらの制限酵素切断地図を検討
し、ＴｕｆＢ−２プロモーターの下流にインターフェロ
ン−β−遺云子１個を正しい方向に結合した新規プラス
ミドｐＴＹ−８とインターフェロン遺伝子２個を結合し
たプラスミドｐＴＹ−９を得る。使用するプロモーター
の違いにより使用する制限酵素、手法に若干の修飾を必
要とするが、望ましいプロモーターの下流にインターフ
ェロン遺伝子を結合することができる。
以下に効率のよいプロモーターの下注にインターフェロ
ン遺伝子を結合したＤＮＡ断片を、ヒートインダクショ
ン ゛ でコピー数が増加するプラス
ミドに組み込ませる方法について説明する。
ン遺伝子を結合したＤＮＡ断片を、ヒートインダクショ
ン ゛ でコピー数が増加するプラス
ミドに組み込ませる方法について説明する。
先にのべたプラスミドｐＭＫ１はＢａｍＨＩ制限酵素切
断部位を１個所持つから、まず、ＢａｍＨＩで処理して
開環した後、アルカリ性ホスファターゼ処理して末端リ
ン酸を除く。一方前述のプラス゛ミドｐ”ｒｙ −ｓ
ＤＮＡ （効率のよいプロモーターＴｕＢ−２＋７）下
流１ｃインターフェロン−β−遺囚子を結合した物を含
むプラスミド）をＢｇｌ［ｌで消化して、ＴｕＢ−２プ
ロモーターとインターフェロン遺伝子を含む断片（１，
１５Ｋｂｌを得る。両者を混合してＴ４−ＤＮＡＩＪガ
ーゼを作用して結合する。得られたプラスミド混合物で
大腸菌ＭＣ１０６１株の形質転換を行ないカナマイシン
耐性を指標に耐性株を単離する。プラスミドを調製し、
制限酵素切断地図を調べて、ＴｕＢ−２プロモーターと
インターフェロン−β−遺敵子が正しい方向に結合した
プラスミドｐＴＹ−５が得られる。このようにして得た
、インダクンヨンでコピー数を増加し、かつ効率のよい
ＴｕＢ−２プロモーターの下流にインターフェロン遺阪
子ヲ結合したプラスミドｐ’ｒｙ−５を含む大腸菌ＭＣ
１０６１株を培養して、ｐＴｙ−５を単離する。
断部位を１個所持つから、まず、ＢａｍＨＩで処理して
開環した後、アルカリ性ホスファターゼ処理して末端リ
ン酸を除く。一方前述のプラス゛ミドｐ”ｒｙ −ｓ
ＤＮＡ （効率のよいプロモーターＴｕＢ−２＋７）下
流１ｃインターフェロン−β−遺囚子を結合した物を含
むプラスミド）をＢｇｌ［ｌで消化して、ＴｕＢ−２プ
ロモーターとインターフェロン遺伝子を含む断片（１，
１５Ｋｂｌを得る。両者を混合してＴ４−ＤＮＡＩＪガ
ーゼを作用して結合する。得られたプラスミド混合物で
大腸菌ＭＣ１０６１株の形質転換を行ないカナマイシン
耐性を指標に耐性株を単離する。プラスミドを調製し、
制限酵素切断地図を調べて、ＴｕＢ−２プロモーターと
インターフェロン−β−遺敵子が正しい方向に結合した
プラスミドｐＴＹ−５が得られる。このようにして得た
、インダクンヨンでコピー数を増加し、かつ効率のよい
ＴｕＢ−２プロモーターの下流にインターフェロン遺阪
子ヲ結合したプラスミドｐ’ｒｙ−５を含む大腸菌ＭＣ
１０６１株を培養して、ｐＴｙ−５を単離する。
このプラスミドｐＴＹ−５で大腸菌ＨＢ−１０１を前述
の方法で形質転換する。形質転換株を１７−ブロス５
ｍｅ中で３０°１晩培養後新らしくｔｏｏｍ６のし一ブ
ロスを加え４２°で４時間培養を続は大腸菌数が４〜８
×１０８匹／ ｒｎｌに達した時点で遠心して集菌する
。菌体をＣｌｅｗｅｌｌの方法ＣＣ１ｅｗｅｌｌ。
の方法で形質転換する。形質転換株を１７−ブロス５
ｍｅ中で３０°１晩培養後新らしくｔｏｏｍ６のし一ブ
ロスを加え４２°で４時間培養を続は大腸菌数が４〜８
×１０８匹／ ｒｎｌに達した時点で遠心して集菌する
。菌体をＣｌｅｗｅｌｌの方法ＣＣ１ｅｗｅｌｌ。
Ｄ、Ｂ、、 Ｊ、Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、１１０６６７−
６７６（１９７２） ）でリゾチーム−界面活性剤で溶
菌し遠心して、インターフェロン抽出液約１．８罰を得
る。抽出液についてインターフェロン活性をＣＰＥ−半
減法［Ｆｉｎｔｅｒ、Ｎ、Ｂ、＋ Ｊ 、Ｇｅｎ、Ｖｉ
ｒｏｌ、＋ ５．４１９−４２５（ｔ９６９）］によっ
て測定する。測定用ヒト細胞はＦＬ−細胞をチャレンジ
ウィルスはＶＳＶを使用する。抽出液１ｍｅ当り２００
０〜５０００単位のインターフェロン活性が認められる
。
６７６（１９７２） ）でリゾチーム−界面活性剤で溶
菌し遠心して、インターフェロン抽出液約１．８罰を得
る。抽出液についてインターフェロン活性をＣＰＥ−半
減法［Ｆｉｎｔｅｒ、Ｎ、Ｂ、＋ Ｊ 、Ｇｅｎ、Ｖｉ
ｒｏｌ、＋ ５．４１９−４２５（ｔ９６９）］によっ
て測定する。測定用ヒト細胞はＦＬ−細胞をチャレンジ
ウィルスはＶＳＶを使用する。抽出液１ｍｅ当り２００
０〜５０００単位のインターフェロン活性が認められる
。
本抽出液について、既に知られている種々の精製法［Ｒ
ｅｇｕｌａｔｐｒｙ Ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｉｎ
ｔｅｒｆｅｒｏｎ７（ Ａｎｎ 、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ Ａｃａｄ 、Ｓｃｉ 、
＋ ６５１］ ３３２−４３１□２ （１９８ｏ）］の組み合せに従って精製し、ヒトの疾患
に利用できるインターフェロン製剤が製造される。
ｅｇｕｌａｔｐｒｙ Ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｉｎ
ｔｅｒｆｅｒｏｎ７（ Ａｎｎ 、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ Ａｃａｄ 、Ｓｃｉ 、
＋ ６５１］ ３３２−４３１□２ （１９８ｏ）］の組み合せに従って精製し、ヒトの疾患
に利用できるインターフェロン製剤が製造される。
以下に本発明の実施例、参考例を記述する。
以下余白
実施例１、 ｐＴｕＢＬ ２０２の合成。
プラスミドＤＮＡ ｐＴｕＢ２ （Ｍｉｙａｊｍａ
ｅｔ。
ｅｔ。
ａｌ、、 ＦＥＢＳ ＬｅＨｃｒ １０２ ２０７
−２１０（１９７７）’ＩＩを８０μｆ ５０７？ＺＭ
Ｔｒｉｓ ＨＣｌｐＨ７，５１０７７１Ｍ ＭｇＣ
ｈ ０．１ Ｍ ＮａＣ１にとかし、１０ユニツトの
Ｅｃｏ Ｒ１を加え６７℃で−りＰ＋２．ｆ：ノＬ２Ａ 晩消化した。常法に従いフェノール４ 抽出法でＤＮＡを抽出した。８０μ７のＤＮＡをＩ Ｇ
ｍＭ Ｔｒｉｓ ＨＣｌｐＨ７，５１０ｍＭ ＭｇＣｈ
１７？ＺＭＤＴＴ溶度にとかし、１０ユニツトのＨｐａ
ｌで３７℃で一晩消化した。一方、β−ガラクトシダー
ゼ遺伝子を含むプラスミドｐＭＣ１４０３（Ｃａｓａｄ
ａｂａｎ ｅｔ、 ａｌ、、 Ｊ、 Ｂａｃｔｅｒｉ。
−２１０（１９７７）’ＩＩを８０μｆ ５０７？ＺＭ
Ｔｒｉｓ ＨＣｌｐＨ７，５１０７７１Ｍ ＭｇＣ
ｈ ０．１ Ｍ ＮａＣ１にとかし、１０ユニツトの
Ｅｃｏ Ｒ１を加え６７℃で−りＰ＋２．ｆ：ノＬ２Ａ 晩消化した。常法に従いフェノール４ 抽出法でＤＮＡを抽出した。８０μ７のＤＮＡをＩ Ｇ
ｍＭ Ｔｒｉｓ ＨＣｌｐＨ７，５１０ｍＭ ＭｇＣｈ
１７？ＺＭＤＴＴ溶度にとかし、１０ユニツトのＨｐａ
ｌで３７℃で一晩消化した。一方、β−ガラクトシダー
ゼ遺伝子を含むプラスミドｐＭＣ１４０３（Ｃａｓａｄ
ａｂａｎ ｅｔ、 ａｌ、、 Ｊ、 Ｂａｃｔｅｒｉ。
１匹３，９７１−９８０ （１９８０））ＤＮＡ １０
μ７を５０ｍＭ Ｔｒｉｓ ＨＣＩ ｐＨ７，５，１
０？７２ＭＭｇＣ１２、０，１Ｍ ＮａＣ１にとかし、
３７℃で４時間Ｚ１ｚ＋２．ｊルへ 消化した。フェノール舛〜ル抽出法でＤＮＡを抽出し、
１０ｔｌ１Ｍ Ｔｒｉｓ ＨＣｌｐＨ８，１０ｆｆ１Ｍ
ＭｇＣ１＋ ２０？？ＺＭ ＫＣＩ １ｍＭＤＴＴ
溶液にとかし、５ユニツトのＳｍａ Ｉを加えて３７℃
で一晩消化した。
μ７を５０ｍＭ Ｔｒｉｓ ＨＣＩ ｐＨ７，５，１
０？７２ＭＭｇＣ１２、０，１Ｍ ＮａＣ１にとかし、
３７℃で４時間Ｚ１ｚ＋２．ｊルへ 消化した。フェノール舛〜ル抽出法でＤＮＡを抽出し、
１０ｔｌ１Ｍ Ｔｒｉｓ ＨＣｌｐＨ８，１０ｆｆ１Ｍ
ＭｇＣ１＋ ２０？？ＺＭ ＫＣＩ １ｍＭＤＴＴ
溶液にとかし、５ユニツトのＳｍａ Ｉを加えて３７℃
で一晩消化した。
制限酸素で消化した試料を０８％アガロース電気泳動に
かけ、それぞれから６ｋｂおよび９．９ｋｂの断片を単
離した。精製単離した両断片をし、２ユニツトのＴ４−
ＤＮＡリガーゼを加え１０℃で１５時間反応後７０℃で
５分間加熱後徐冷した。
かけ、それぞれから６ｋｂおよび９．９ｋｂの断片を単
離した。精製単離した両断片をし、２ユニツトのＴ４−
ＤＮＡリガーゼを加え１０℃で１５時間反応後７０℃で
５分間加熱後徐冷した。
得られた環状ＤＮＡを大腸菌ＭＣ１Ｇ６１株（Ｃａｓａ
ｄａｂａｎ、 Ｃ，Ｍ、、 ｅｔ、 ａｔ、、 Ｊ、
Ｍｏｌ。
ｄａｂａｎ、 Ｃ，Ｍ、、 ｅｔ、 ａｔ、、 Ｊ、
Ｍｏｌ。
Ｂｉｏｌ。１３８．１７９−２０７ （１９８０） ）
にＣｏｈｅｎの方法（Ｃｏｈｅｎ、 Ｓ、 ｅｔ、 ａ
ｌ、、 Ｐｒｏｅ。
にＣｏｈｅｎの方法（Ｃｏｈｅｎ、 Ｓ、 ｅｔ、 ａ
ｌ、、 Ｐｒｏｅ。
Ｎａｔｌ、 Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ、 Ｕ、Ｓ、Ａ、、
６９２１１０−２１１４−一一一ノ ラクトシダーゼ遺伝子の上流にｔｕｆ Ｂ ２プロモー
ターを結合した新規プラスミドｐＴｕＢＬ２０２をスク
リーニングした。
６９２１１０−２１１４−一一一ノ ラクトシダーゼ遺伝子の上流にｔｕｆ Ｂ ２プロモー
ターを結合した新規プラスミドｐＴｕＢＬ２０２をスク
リーニングした。
実施例２． プラスミドｐ’ｒｙ−ｓ、 ｐＴＹ−９
の作成。
の作成。
ｐＴｕＢＬ ２０２ ＤＮＡ １０μＳ’を１０？７
２ＭＴｒｉｓ ＨＣＩ ｐＨ７，５，１［１ｍＭ
ＭｇＣｈ 、１ｍＭＤＴＴ溶液にとかし、９ユニツトの
Ｃ１ａＩを加え３７℃で一晩消化した。アガローズ電気
泳動でＴ ｕ Ｂ −２プロモーターを含むｔ５Ｋｂの
断片を単離した。
２ＭＴｒｉｓ ＨＣＩ ｐＨ７，５，１［１ｍＭ
ＭｇＣｈ 、１ｍＭＤＴＴ溶液にとかし、９ユニツトの
Ｃ１ａＩを加え３７℃で一晩消化した。アガローズ電気
泳動でＴ ｕ Ｂ −２プロモーターを含むｔ５Ｋｂの
断片を単離した。
インターフェロン−βの遺伝子は捷ず遺伝子ライブラリ
ーから合成ヌクレオチド（Ｎ一端トデカマー）を使用し
てＷａｌｌａｃｅ の方法（Ｗａｌｌａｃｅ。
ーから合成ヌクレオチド（Ｎ一端トデカマー）を使用し
てＷａｌｌａｃｅ の方法（Ｗａｌｌａｃｅ。
Ｒ，Ｂ、、 ｅｔ、ａｌ、、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃ１ｄ
Ｒｅ５ｅａｒｃｈ、 ９ 。
Ｒｅ５ｅａｒｃｈ、 ９ 。
−己。
８７９（１９８１））でクローニング後、これをＧｏｅ
ｄｄｌｉ１ らの方法［Ｇｏｅｄｄ ｌ−ｅ、 Ｄ、 Ｖ。、 ｅｔ
、 ａｌ、 Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃ１ｄＲｅｓｅａｒｃ
ｈ、８．４０５７（１９８０））でインターフｘ。
ｄｄｌｉ１ らの方法［Ｇｏｅｄｄ ｌ−ｅ、 Ｄ、 Ｖ。、 ｅｔ
、 ａｌ、 Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃ１ｄＲｅｓｅａｒｃ
ｈ、８．４０５７（１９８０））でインターフｘ。
ン遺伝子約０．８ Ｋｂを得た。両断片をＴ４ＤＮＡリ
ガーゼで結合した〔実験条件、実施例１と同じ〕。得ら
れたプラスミド混合物を用いて大腸菌ＭＣ１０６１株を
形質転換し、形質転換株３６株について、各プラスミド
の制限酸素切断地図を検討した結果、ＩＦＮ−β遺伝子
が正の向きに導入されたｐＴｙ−ｓ、正の向きに二つ首
肩に組み込まれたプラスミドｐＴＹ−９が得られた。
ガーゼで結合した〔実験条件、実施例１と同じ〕。得ら
れたプラスミド混合物を用いて大腸菌ＭＣ１０６１株を
形質転換し、形質転換株３６株について、各プラスミド
の制限酸素切断地図を検討した結果、ＩＦＮ−β遺伝子
が正の向きに導入されたｐＴｙ−ｓ、正の向きに二つ首
肩に組み込まれたプラスミドｐＴＹ−９が得られた。
実施例ろ ｐＴｙ−５の作製。
インダクションがかかり、かつカナマイシン耐性プラス
ミｌ’ｐＭＫＩ ＤＮＡ １０１１ｆ／を１３１？
＋ＭＴｒｉｓ ＨＣＩ ｐＨ７，５，１０？？＋Ｍ Ｍ
ｇＣｌ２ 、５０１７１ＭＮａＣ１１ｍＭ ＤＴＴにと
かし、５ユニツトのＢａｍＨｌで３７℃で一晩消化した
後、実施例１０条件でアルカリ性フォスファターゼ消化
した。
ミｌ’ｐＭＫＩ ＤＮＡ １０１１ｆ／を１３１？
＋ＭＴｒｉｓ ＨＣＩ ｐＨ７，５，１０？？＋Ｍ Ｍ
ｇＣｌ２ 、５０１７１ＭＮａＣ１１ｍＭ ＤＴＴにと
かし、５ユニツトのＢａｍＨｌで３７℃で一晩消化した
後、実施例１０条件でアルカリ性フォスファターゼ消化
した。
一方実施例ろ、で得たｐＴｙ−ｓグラスミ１−ＤＮ Ａ
８μ７を１０？？ＺＭ Ｔｒｉｓ ＨＣＩ ｐＨ７，５
，ＩＣｌｔｌｉＭＭｇＣＩ２． １７７１Ｍ ＤＴＴに
とかし、 ６ユニツｌ−のＢｇｌ ＩＩ を加え３７
℃で一晩消化した。
８μ７を１０？？ＺＭ Ｔｒｉｓ ＨＣＩ ｐＨ７，５
，ＩＣｌｔｌｉＭＭｇＣＩ２． １７７１Ｍ ＤＴＴに
とかし、 ６ユニツｌ−のＢｇｌ ＩＩ を加え３７
℃で一晩消化した。
両者を混合し、Ｔ４１Ｊガーゼを作用させた。
得られたプラスミド混合物を使用して、大腸菌ＭＣ１０
６１株を形質転換し、カナマイシン面ｊ性株を単離した
。そのプラスミドの制限酸素切ｐ Ｔ Ｙ ＝−５で形
質転換した大腸菌）（Ｂ−１０１株を５ ｍｌのし一グ
ロス培養液〔Ｍｉｌｌｅｒ、 Ｊ、Ｈ，。
６１株を形質転換し、カナマイシン面ｊ性株を単離した
。そのプラスミドの制限酸素切ｐ Ｔ Ｙ ＝−５で形
質転換した大腸菌）（Ｂ−１０１株を５ ｍｌのし一グ
ロス培養液〔Ｍｉｌｌｅｒ、 Ｊ、Ｈ，。
Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ ｉｎ Ｍｏ１ｅｃｕｌａ
ｒ Ｇｅｎｅｔｉｓ。
ｒ Ｇｅｎｅｔｉｓ。
ｐ４６１〜４３３（１９７２）〕中６０℃で一晩培養し
た。１００ｍ／７の新しい培養液に移し、４２℃で４時
間更に培養した。菌数が５×１０８に達した所で５．０
０ Ｏｒｐｍ、 １０分遠心して集菌し、Ｃｌｅｗｅｌ
ｌの方法（Ｃｌｅｗｅｌｌ、 Ｄ、 Ｂ、、 Ｊ。
た。１００ｍ／７の新しい培養液に移し、４２℃で４時
間更に培養した。菌数が５×１０８に達した所で５．０
０ Ｏｒｐｍ、 １０分遠心して集菌し、Ｃｌｅｗｅｌ
ｌの方法（Ｃｌｅｗｅｌｌ、 Ｄ、 Ｂ、、 Ｊ。
Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、、 １１０ ６６７−６７６（１
９７２））でリゾチーム・界面活性剤で溶菌した。４０
．００Ｏｒｐｍ、３０分間遠心し、約１．８ ｍｅの抽
出液を得た。インターフェロン活性の測定はｃ ｐ Ｅ
−半減法（Ｎ、 Ｂ、 ＦｉｎｔＦｒ、 Ｊ、 Ｇｅ
ｎ、 Ｖｉｖ’；Ｉｏｇｙ。
９７２））でリゾチーム・界面活性剤で溶菌した。４０
．００Ｏｒｐｍ、３０分間遠心し、約１．８ ｍｅの抽
出液を得た。インターフェロン活性の測定はｃ ｐ Ｅ
−半減法（Ｎ、 Ｂ、 ＦｉｎｔＦｒ、 Ｊ、 Ｇｅ
ｎ、 Ｖｉｖ’；Ｉｏｇｙ。
５ ４１９−４２３（１９６９）の改良法〕に従って、
実施した。ヒト細胞はＦＬ細胞あるいは５４２株、チャ
レンジウィルスにはＶａｓｃｕｌａｒＳｏｍａｄｉｌｉ
ｓ Ｖｉｒｕｓを使用し残存細胞物をクリスタルバイ
オレット染色後比色定量する方法に依った。米国予防衛
生研究所（ＮＩＨ）から入手したインターフェロン−β
の標準品を対照として抽出法の力価を測定した。
実施した。ヒト細胞はＦＬ細胞あるいは５４２株、チャ
レンジウィルスにはＶａｓｃｕｌａｒＳｏｍａｄｉｌｉ
ｓ Ｖｉｒｕｓを使用し残存細胞物をクリスタルバイ
オレット染色後比色定量する方法に依った。米国予防衛
生研究所（ＮＩＨ）から入手したインターフェロン−β
の標準品を対照として抽出法の力価を測定した。
遠心上清に１ｍｇ１す２０００〜５０００単位のインタ
ーフェロン活性が認められた。
ーフェロン活性が認められた。
第１頁の続き
０発 明 者 中村巻成
鎌倉型手広１１１１番地東し株式会
社基礎研究所内
＠発 明 者 太田由己
鎌倉型手広１１１１番地東し株式会
社基礎研究所内
０発 明 者 成戸昌信
鎌倉型手広１１１１番地東し株式会
社基礎研究所内
Claims (2)
- （１） β−ガラクトシダーゼ遺区子を下流に結合し
大腸菌に組み入れた場合、大腸菌１匹当り１万分子以上
のβ−ガラクトシダーゼを産生ずる効率を持つプロモー
ターに、インターフェロン構造遺眠子を結合し、該結合
物を更にヒートインダクンヨン又は薬剤インダクンヨン
でコピー数が増加するプラスミドに組み込ませてなる新
規プラスミド。 - （２） β−ガラクトシダ〜ゼ遺云子を下流に結合し
大腸菌に組み入れた場合、大腸菌１匹当り１万分子以上
のβ−ガラクトシダーゼを産生ずる効率を持つプロモー
ターに、インターフェロン構造遺阪子を結合し、該結合
物を更にヒ〜トインダクション ゛ ゲでコピー数が増加するプラスミドに組み込ませてなる
新規プラスミドを大腸菌に組み入れ、インターフェロン
を産生ずる能力を有する大腸菌を製造し、該大腸菌を培
養し生成した大腸菌からインターフェロンを採取するこ
とを特徴とするインターフェロンの製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56101330A JPS584798A (ja) | 1981-07-01 | 1981-07-01 | 新規プラスミドおよびそれを使用したインタ−フエロンの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56101330A JPS584798A (ja) | 1981-07-01 | 1981-07-01 | 新規プラスミドおよびそれを使用したインタ−フエロンの製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS584798A true JPS584798A (ja) | 1983-01-11 |
Family
ID=14297814
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP56101330A Pending JPS584798A (ja) | 1981-07-01 | 1981-07-01 | 新規プラスミドおよびそれを使用したインタ−フエロンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS584798A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS58141796A (ja) * | 1982-02-18 | 1983-08-23 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | ペプチドの製造法 |
-
1981
- 1981-07-01 JP JP56101330A patent/JPS584798A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS58141796A (ja) * | 1982-02-18 | 1983-08-23 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | ペプチドの製造法 |
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