JPS5874619A - リポソ−ム及びその製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はステリルグルコサイド又はステリルダルコサイ
ド関する。ステリルグルーナイド及びステリルグルコサ
イド峰ノバルンテートは植物中に含窒れるので、大豆１
ｍ夷。

ｋ璽コマメ、グレープフルーツ滓など各種の天然材料が
ら。

例えばＴ、　Ｋｉｒｉｂｕｃｂｉ　らの方法（アグリカ
ルテ、ツル、バイオロジカルケミストリー（Ａｇｒｌｃ
ｕｌｔｕｒｓ＋Ｉ　Ｂｉｏｌｏｇｌｃｓ＋１ｃｈ＊ｍ１
ｓｔｒｙΣ■巻８号、ｆｙｏベージ〜〕丁８ページ。

１９６６年）によって主としてβ＝シトステリル”−ｐ
　−Ｄ　−グルクナイト、スチグマステリルーβ−Ｄ−
グルコナイド。

カンペステリルグルツナイドの混合物及びこれらの混合
物の脂肪酸エステルのかたちで抽出分離される。植物材
料からステリルグルコナイドを得るのには、前記の方法
で得られた混合物をアルカリで加水分解する方法がとら
れる。またステリルグルコナイド峰ノパル々テートは、
上記加水分解て゛得られたステリルグルコサイドを原料
とし合成によってパル建チー訃にする方法がとられる。

植物から抽出分離されるステリルグルコサイドの構成比
を一部の材料につき表−１に示す。

表−１ 一方ス？　ＩＪルグルコサイドは、β−７トステロール
、スチグマステロール、カンペステロール、又はこれら
３種の混合物として得られるφ植物ステロールから会知
の合成法（例えば、ケンカルペＢテ（Ｃｈｅｍｌｃｓ＋
Ｉ　ＢｒＩｃｈｔａ＞１０５巻、１０１１７〜１１３１
ページ）によってこれらのグルコナイドを合成する事が
でき、會たこれらのステリルグルコサイドを原料にして
モノパルミテートを合成する事もできるｉステリルグル
コサイドは、ピリジンに溶け、ジオキサンにやや溶けや
すいが、アルーーに類、ケトン類に溶けに（（。

表化水素、含ハロゲン溶媒等一般的な有機溶媒には殆ん
ど不溶であり水にも殆んど不溶である。ステリルグルコ
ナイド類の物理的性質、化学的性質は、ステロール部位
がちがうてもまた植物から抽出される混合物であっても
殆んど差が認められない、一方ステリルダルーナイドモ
ノパ鳶電テートは、無極性接媒に溶はアルコール類にや
や溶けるが水には殆んど不溶である。ステリルグルコサ
イドモノパルミテートの物理的性質、化学的性質も、又
ステ關−ル部位のちがいあるいは植物より抽出された混
合物であっても殆んど差が認められない。

ステリルグルコサイド又はステリルグルコサイドモノパ
ルミテートは、４１会８５４−１１８４９号公報、４１
開昭５３−１０９９！！４号会報に示されているように
、−止血作用、血管補強作用、抗シロツク作用を有し、
Ｉ［薬品として重要な化合物である。これらの化合物は
、その薬層作用から注射剤が望まれるが、前述の如く水
に不溶のため水性の溶媒に溶解して注射剤にするーは不
可能であった。従ってこれらの化合物を注射剤にするた
めに、非水溶媒への溶解や懸濁剤にする方法を試みたが
、前者では注射剤にしばしば用いらレルプ薗ピレングリ
プールやマクロゴールあるいは植物油等に対する溶解性
が低く、所望の談度が得られず、また後者では調製は可
能であるがこれを生体に投与した場合、投与部位からの
化合物の溶出が遅いため一定の薬効が期待できず、いず
れも注射剤として不適当であった。このように。

従来から行なわれている難溶性化合物を注射剤にする手
法では、ステリルグルコサイド又はステリルグル；ナイ
ドモノパルミテートの注射剤を提供する事は不可能であ
り、特殊な技術が必要であった。このような要求に対し
０本発明者らはすでに４１会ＩＩ！＄３−３１２１（１
号公報＃　＊’に昭８１−２０１！＠７号会報等におい
て明らかにしたごとく、親水性の溶媒と可溶化剤を用い
てこれらの化合物を水溶化する方法の一発に成功してい
る。しかしながら、これらの技術をもってしても、なお
。

１）ステリルグルコサイドやステリルグルコサイドモノ
パル電テートの水への親和性は極めて低いため、これら
の化合物の一定量を水溶化するのに比較的大量の溶媒や
外画活性剤を必要とする。

２）加熱滅菌によって界面活性剤が析出しアンプル―に
付着する ３）静注した場合に轟該化合物の薬効は使用する可溶化
剤によって影響を受け、ＨＣＯ−３（登働商標）（ポリ
オキシエチレン（６０４ル）番価化ヒマシ油）など一部
の可溶化剤を除いて薬効が発現しない 等といった改善すべき点を残していた０本発明者らは簡
単に熱滅菌を施すことができ、しかも高い投与量を必要
とする血管補強や抗シ１りの領域に、も適用できる高淡
度の可溶化が可能な組成で、その上静注においても薬効
が一亀に発現する注射液を開発すぺ（鋭意研究の結果、
轟鋏化合物をリポソームに包含させる事によってこれら
の目的が一挙に達成できる事を発見し本発明を完成させ
るに至りた。すなわち０本発明はステリルグルコサイド
及びステリルグルブナイドモノパルζテートの新規な組
成物であるリポソーム及びその製造方法である。

リポソームはそれ自体近年薬物の中ヤリアとしての使用
例が全知の文献にみられ、その構造０組成、製造方法な
どがい（つかの総説に解説されている。

く例えばＴｙｒｅｌｌ、Ｄ、Ｈ，ら著、Ｂｌｏｃｈｌｍ
ｉｃｍ　ａｔ　ＢｌｏｐｈｙｓｌｃｍＡｃｔｓ　ＭＲ４
Ｂ？、　Ｐ、２！Ｉト３Ｇ！　（１９７６）、　Ｐｌｓ
ｎｄｅｒ　ＪＨら着。

ＬＩｆ＠８ｃＩｅｎｃｅ２０（７）　′Ｘｈ、１１０９
〜１０２０（ＩＩ？？）＞−鐵的にリポソームは、ナス
Ｉ１７ツスコにリン脂質のクロロホルムＳ＊をとり、り
ａロホルムを留去して容器−にりｙ脂質の薄膜を形成さ
せ、これに緩衝液などと共に薬物の水溶液を加えたのち
攪拌によってりノ脂質属を容器−からはがす時に形成さ
れる小球体（ベシクル）中に薬物水溶液が包含された形
態をとる。従って、この場合リポソームにとり込まれて
いない薬物をゲル濾過や超遠心によって分離する必要が
あった。更にｔたリポソームは、前記の形態をとる限り
、フリーの薬物と分離精製されても、短期間にリポソー
ム内部の薬物水溶液は外層の水層に拡散してしまうので
、製剤として実用になり難い欠点を有していた。しかし
ながら１本発明者らは鋭意研究によって、ステリルグル
コサイド又はステリルグルブナイドモノパルζテートが
リポソームを構成する脂質と強い親和性を有する事を偶
然にも発見し、この性質を利用すればこれらの化合物を
リポソーム脂質中に包含させることができる事に１１１
両し０本発明を完成した。すなわち本発明は、クロ四ホ
ルムにリン脂質を溶解し、これにステリルグルコナイド
あるいはステ１ルグル＝ナイドモノパル々テートを加え
、必要に応じてコレステロール等の膜安定化剤、あるい
は荷電剤を加えて溶解したのち、りａａホルムを留去し
、これに生理食塩水や緩衝液等を加えて攪拌又は超音波
照射することによって得もれる。ステリルグルコサイド
又はステリルグルブナイドモノパルζテートを脂質中に
含むリポソーム組成と、その製造方法である。

本発明で使用するリン脂質としては、レシチン、スフィ
ンゴリピドホスホグリセライド、ギャングリオサイド等
の天然のリン脂質、あるいはジ２リストイル−、ジ／（
シントイルー。ジステアリル−、ジオレイル−、ホス７
Ｔチジルコリン譬の合成レシチンがあげられ、中でも天
然又は合成のレシチｙが、１１たリポソーム膜の安定化
剤としては、プレスチロール、β−シトステ曹−ル、ス
チグマステロール。

カンペステロールあるいは植物材料から抽出されるステ
ロ−にの混合物があげられ、會た荷電剤としては、陽電
荷を之 与えるものとしてステアリルアｖｙ、陰電荷を与えるも
のとして７オス７１チジン酸、ジセテルリｙ駿があげら
れる。

一方本発明で対象とするステリルダルツナイドとしては
。

β−ｐ）ス４リル−ｐ　−Ｄ　−／ルーナイト、スチダ
マステリルβ−Ｄ−ゲルコサ１ド、カンベステリルβ−
Ｄ−／ルコサイド、コレステリルβ−Ｄ−グルコサイド
、及び植物材料から抽出される上記ステリルグル；サイ
ドを主成分とするステリルグルコサイドの混合物があげ
られ、ステリルグルブナイドモノパルζテートとしては
、前記ステリルグルコナイドの６−！モノパルζテート
が使用される。生薬と脂質成分の比率は、生薬１部（重
量）に対しリン脂質１〜１０部好ｔＬ＜は３〜Ｂ部、ス
テロール類、０．１〜Ｓ部好ましくはＯ，Ｓ〜３部、荷
電剤ｏ、ｏｓ−ａｓ部であり、攪拌又は超音波照射の強
さと時間によってマルチラメラ状のリポソームあ・るい
はエニラメラ状のリポソームが得られる。

本発明で得られるステリルグルコサイド又はステリルグ
ルブナイドモノパルζテートを包有するリポソームは非
経口投与で利用され９次の如き利点を有する。

１）主薬１部（重量）に対し、３〜５郁（重量）という
少３）上記割合で生薬含量数パー七ントの注射液の調整
が可能になり、止血のみならず高い投与量を必要とする
血管補強、抗ジーツクの領域の治療に対応できる注射液
の提供が可能である。

３）本発明の組成は静脈投与でも確実な薬層作用が発現
する・ ４）加熱滅菌が容重に行なえる。

以上の利点の他に０本リポソームをＮ１ガスと共にアン
プルに充填し、線光下に保存すれば、室温で少なくとも
２年は外観的にも含量的にも安定であるというすぐれた
性質を有する。

以下に代表的な実施例をあげ本発明を異体的に説明する
。

実施例１ Ｓ・―のナスｍ７ラスプに卵黄レシチンｚｏｑをとり、
タロロホルム！ｍ＆：＠解した。これにβ−シトステリ
ル−ｐ−Ｄ−ダルブナイドｓｗＩ／１．：Ｉレスチロー
ル３岬を−えて溶解したのち、ＳＯ′ｏの水浴上でロー
タリーエバポレーターな用いてクロロホルムを留去した
。残渣にＮ、メスを１０分間吹きつけたのち、真空乾燥
量中で６時間乾燥し、これに生理食塩水１！−を加えプ
トプ飄−讐波ホ毫ゲナイず−（超音波工１１Ｒ２Ｓ　Ｋ
Ｈｚ、Ｉ　Ｓ　ＯＷ）　ｒＮ自ｔｊＸ気Ｒ下８５ｋｎａ
＊ｑゲナイズＶ、淡黄色のほぼ澄−な筐を得た。これを
電すポフフイルター０８タイプで無菌２遍を行なつたと
ころ、Ｐ液中には濾過前の９９．６％のβ−シトステリ
ル１−Ｄグルコサイドが検出された。Ｐ箪はＮ、ガスと
共に９９１のアンプルに充填し、オートクレーブ中で１
２０ｖ２０分間の滅菌を行った。滅菌によって主薬や脂
質の析出は認められなかった。またこの注射液は、１１
光下に保存したところ、室温で２年以上異物の析出や主
薬の含量低下は認められなかった。この注射液及びこの
注射液の組成から生薬を抜いたブランクの注射液を、１
群１０匹のマウスに静注し１尾端１３−ところをメスで
切断して水中につけ止血までの時間を観−する本橋らの
方法（東京尊慮医科大学雑誌）Ｓ（５）１０６１１１＜
ｉｌｌ！！１）＞）によって０本注射液の静注における
薬理活性を観察した結果０表−２に示すようにブランク
群の平−止血時間が１４．７±０６８２分であったのに
対し、０．２ｑ／＃の投与群では１２．３±０．２７分
で止血し、Ｐ＜０．０１の水準で有意差が認められ１本
注射液の静注での有効性が証明された。

実施−２″ ｓ〇−のナスｌ１７ラスコにジパルミトイルレシチン２
０１ＩＰ。

β−シＦステリルーβ−Ｄ−グルーサイド毫ノバル電テ
ート１０１９、ｆレスチロール５１９をクロロホルム３
−に濤解し。

クロロホルム３０℃の水溶上でロータリーエバポレータ
ーを使用して減圧留去した。この残漬に穐ガスを１０分
間吹きつけ、更に真空乾燥機中で６時間乾燥した。０れ
にｐＨ６，３等すン酸緩衝Ｉｍ（リン酸三ナトリウム１
．１１Ｌ　　リン酸二水素ナトリウム６４Ｆ、及び食塩
５．ＩＰを注射用蒸留水に溶かして１／にしたもの）Ｓ
−を加え、プ四−プ臘超音波ホ毫ゲナイザーで３分間ホ
モゲナイズし、やや白濁したリポソーム液を得た。これ
をミリポアフィルタ−ＨＡタイプで濾過したところ、Ｆ
ｌ中には１９．２４のβ−シトステリル１−Ｄ−グルコ
すイド峰ノパルζテートが含まれていた。Ｐ箪はＮ５ｔ
Ｉスと共にアンプルに充填し、オートクレー　。

プで１１０ｔ１２０分間の高圧蒸気減菌を施した。この
注射液の静注による薬理効果を表−３，ム２に示す。

実施例３ ！！０１１ｊのナス履フラスコにジオレイルフォスツデ
チジルコリン４ｑ、ジパルイトイルフ看スフアテジルプ
リン４キをとり、クロロホルム２−に溶解し、これにコ
レステリルβ−Ｄ−グルコナイド３ｑ及び＝レスチロー
ル１ｑを加えて溶解したのち、Ｓｅｔ＋の水浴上で一一
タリーエパポレーターを用いてり窒ロホルムを減圧留去
した。以下実施例１と同様の操作でコレステリルβ−Ｄ
−グルコナイド３岬を含むリポソーム液９１を得た。

、この注射液の薬理活性を表−２，１３に示す。

実施例４ ５０−のナス１１フラスコにジパルミトイルレシチン１
５１９をとり、クロロホルム２−に溶解し、これにスチ
グマステリルβ−Ｄ−グルコサイドｓｗｇ及びスチグマ
ステロール６キステアリルア建ン１１１ＩＩを加えて溶
解したのち、３０℃水浴上でエバポレーターを用いてク
ロロホルムを留去した。

以下実施例２と同じ操作でスチグマステリルβ−Ｄ−グ
ルコナイド５ｗＩ／Ｉを含む陽電荷をもったリポソーム
液１ｓｌｌｊを得た。この注液の薬理活性を表−２，１
４に示す。

実施例Ｓ 実施例４のステアリルアセン１ｑの代りにジセチルリン
酸１１１９を加えて例４と同様の操作でスチグマステリ
ルβ−り一グルコナイド１啼を含む陰電荷をもったリポ
ソーム液５ｄを得た。この注射液の薬理活性を表−２，
崖Ｓに示す。

実施例６ １００−のナス１１７ツスコに卵黄レシチンｚｅｏｑを
とり。

これにクーロホルム５１１／を加えて溶解し１次いでダ
イズより抽出したステリルグルコナイドｓｏｑ及びコＶ
ステｉｔ　−ル２ｓｗＩを加えて溶解したのち、Ｓｅｔ
＋の水浴上でロータリーエバポレーターを用いてクロロ
ホルムを減圧留去した。

この残漬にＮ、　ｇａｓを１０分間吹きつけたのち、真
空乾燥機で６時間乾燥した。これに実施例２で使用した
リン酸緩貴ＩＩ！！１１１加え、プローブ麗超音波ホ篭
グナイず−でＮ、気流下Ｓ分間ホモゲナイズし、やや白
濁したリボソーム液を得た。これをミリポアフィルタ−
ＨＡタイプで濾過した。この時Ｆ＊には９８．２４のス
テリルグルコナイドが含まれていた。以下実施例１と同
様の操作でステリルグルコナイドＳＯｑを含むｓｍｌの
リボソーム液を得た。この注射液の薬ｍ＊性を表−雪、
崖６に示す。

実施例１ １００−のナス瀧フラスフに卵黄レシチン２００１９を
とり。

これにクロロホルム５ＩＩ７を加えてＩＩ鱗し１次いで
ｍ夷から抽出したステリルグルコナイドの篭ノパル擢テ
ートを６０岬とコレステロールＳＯキを加えて溶解し、
以下実施例６と同じ操作でａ１１抽出ステリルグル：ｙ
？イドモノパル書グチ−！！０１９を含むリポソーム＊
Ｓ−を得た。

この注射液のａｍ活性を表−２，１フに示す０表−２の
結果より本発明の実施例の組成は静脈内投与で薬層活性
を示す事が明らかである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１１ステ９にダルフナイド及びステリルグルツ！イド
   毫）ｊ（ルミチー艷の１種又は２種以上を有効成分とし
   て含有すると（２１単一ラメツ状の特許請求の範ｓｇｉ
   ＊記載のリポソーム＝（３）多層ラメラ状の特許請求の
   範囲第１項記載のＩＪポンーム。 （４１有効成分が脂質中η含有されている。特許請求の
   範囲１１１項から第３項重でのいずれか辷記載のリポソ
   ーム、　　　　゛（５）脂質が天然の又は合成のホスフ
   ァチジルプリンである。ＪＩ許請求の１１８５１１項か
   ら第４項までのいずれかに記載のリポソーム、　　′ （６）天然の本スフ１チジルプリンが卵黄レシチンであ
   る特許請求の範１１１１！ｉ項記載のリポソーム。 （））合成のホスファチジルーりンが、ジ電すスジイル
   本スフデチジルプリン、ジバル擢トイルホスフＴチジル
   プリン、ジステアリルホスフデチジルコリｙ及びジオレ
   イル本スフ１チジルプリンのうち少なくともひとつであ
   る特許請求の範囲第１項記載のリポソーム。 （８）ｌポソーム安定剤としてステ９−ルを含有してな
   る。４１許請求の範囲第１項からＩＩＴ項會でのいずれ
   かに記載のリポソーム。 （９）ステロールがコレステロール、β−シトステロー
   ル、スチグマステロール、及びカンペステロールのうち
   少な（ともひとつである、特許請求の範囲第８項記戦の
   リポソーム自（至）陽電荷を与える物質を含むことを特
   徴とする特許Ｉ！囲落第１項ら第９項重でのいずれかに
   記載のリボソー▲。 Ｉ陽電荷を与える物質がステアリールアミンである特許
   請求の範Ｉ！ｌ纂１０項記一のりポＩ−▲。 ＠陰電荷を与える物質を含むことを特徴とする．＊許請
   求の範囲第１項から第９項までのいずれかに記載のリポ
   ソーム。 １１３ｌｋ電荷を与える物質がホスファチド酸又はジセ
   チルリン酸である．特許請求のＩＩｓ菖１ｚ項記載のリ
   ボノー▲●匝ステリルダルコナイドが．βーシトステリ
   ルーβ−Ｄ−グルコナイド，スチグマステリルーβ−Ｄ
   −グルプナイド。 のモノバル々テートである．４１１許請求の範囲第１項
   から纂　、ｌｓ項重でのいずれかに記載のリポソーム。 四脂質、及び必要に応じてステロール並びに荷電剤を含
   むクロロホルム溶液に、ステリルグルコサイド及びステ
   リルダルｓｆイド峰ノパルζテートの１種又は３種以上
   を溶解し。 ついでクロロホルムを留去して容器騰に脂質膜を形成さ
   曽。 これに媒体を加えて攪拌し又は超音波照射を行うことを
   特徴とする。リポソームの製造方法。