JPS58756A - 多糖類支持体上に抗原および抗体を固定する方法およびこのようにしてえた生成物の免疫学的調剤への使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はリアジン型の又は他のクラス（ＩｇＧ）のある
種の抗体の調剤に有用な、あるいは抗原（特に免疫学的
グロブリン２の調剤ＫＩＶ用な、試剤の”サンドイッチ
法による取得に関する。

血清中に存在する抗体および抗原（たとえば免疫学的グ
ロブリン）の免疫学的測定は主として２つの方法により
行なわれる。

第１の方法によれば、ある抗原に特有の抗体特にアレル
ゲンに特有のリアジンを調剤するために、水不溶性の又
は免疫的吸着剤の支持体が使用され、その上に投与すべ
き抗体ＶＣ％Ｃ約定拮抗する抗原が固定される。第１工
程において、この支持体は投与すべき血清との接触関係
におかれ、支持体上に固定した抗原に″特有の抗体がこ
れと結合する。

洗浄後にこの支持体は、第２工程において、投与すべき
抗体または免疫学的グロブリンに対して特に拮抗する抗
体との接触関係におけれ、そしてこのものは放射性元素
または酵素によって標識されたものである。洗浄後に、
第１の場合（放射性免疫学的試験）においては放射能を
測定し、第８の場合（酵素免疫学的試験ンには支持体上
に固定しｆｃ＃素活素上性度針により測定する。

第８の、いわゆる１サンドイツチ１法によれば、抗原の
役割を果す血清のある種の特定の免疫学的グロブリンを
調剤する友めに、不溶性の支持体が同様に１ｆ！用され
るが、投与すべき免疫学的グロブリン（７ｔとえば全体
の抗−１ｔ）Ｅ’または抗−リアジンまたは抗−ＩｇＧ
つに直接に拮抗する抗体をこの支持体に固定する。この
支持体社次いで投与すべき抗原（全体の抗−１ｆｇ’ま
友は抗リアジンまたは抗−ＩｆｌＧつとの接触関係にお
かれ、抗原は抗体と結合する。

洗浄後に、支持体を上述の如く同じ抗体と接触させるが
、このものは第１の方法において述べたように１　トレ
ーサーとしての役割を果す放射性元素また唸酵累によっ
て標識されたものである。

上記の方法の両者においては、それ故、抗原または抗体
のいづれかを固定させた不溶性支持体が使用されており
、この結合は洗＃によって破壊されないものでなければ
ならず、そして抗原または抗体が対応する抗体または抗
原とそれぞれ結合する能力を保存する鳴のでなければな
らない。

本発明は多ｍ類支持体上に抗原または抗体を固定させる
新規な方法およびこのようにして見られた免疫学的グロ
ブリンの放射性−および酵素−免疫制剤用の試剤に関す
る。

特に本発明はアレルゲンと呼ばれる抗原物質をセルロー
スまたはセルロース誘導体に固定する方法、およびこの
ようにしてえられた試剤？アレルギー性ＩＡ者の血清中
Ｖこ、アレルゲンＷｃ特有の°リアジン”と呼ばれる免
疫学的グロブリンを投与する丸めに使用することに関す
る。

周知技術によれば、多糖類または多糖類の誘導体たとえ
ばセルロース、デキスト２７などによって構成されるデ
ィスク、バンドまたはプレートがしばしば固体の不溶性
支持体として使用される。一般に蛋白質であり従ってア
ミノ基を有する抗原または抗体は、周知の方法（７アー
マシアの仏国特許第１，５８４．５８５号ンにより蛋白
質のアミ７基と（ハロゲン化シアノーグンによる反応に
よってあらかじめ活性化した）支持体のヒドロキシ基と
の間の共有結合の形成によって支持体に結合せしめられ
る。

本発明は支持体上に抗原（アレルゲン）または抗体（免
疫学的グロブリンフを固定する前に、多糖類によって構
成される支持体を活性化するための新規な方法に関する
。

本発明による方法は、それ自体は周知の弐Ｎα１０．の
メタ過沃素酸す）　＋７ウムによる多糖類の鎖の酸化反
応（アルデヒド基の形成を伴なうβ−Ｄ−グルコピラノ
シル環の開裂を起す）Ｋもとづいている。

すなわち、リボースの分岐鎖から形成されているセルロ
ースをメタ過沃素酸ナトリウム触媒で接種するとき、生
ずる部分反応は次の反応式で示される。

このようにメタ過沃素酸塩で活性化した多糖類を式ＲＮ
Ｈ宜のアミンでカプリングすると、次式の不安定なイミ
ン結合が形成される。

ナトリウムポロハイドフイドによる還１元は上記のイミ
ン結合を下記の式のアミン結合に転化することによって
このポリマーを安定化させる。

、に 弐Ｒ賜のアミンは特に蛋白質またはペプチドでありうる
。そして上記の一連の反応は既にカプリング用に使用さ
れていた。たとえば、 レッドやコーパスカルへのニューモココシの多糖類（Ｒ
ａｋｇｒａ　　らのＪ、Ｅａｅｔｇｒｉｏｌ、８８　８
８５゜１９５！ｌ）； レット・コーパスカルへの蛋白； ’７７ｆレッド・コーパスカル抗体へのデキストラン（
Ｓａｒｍｇｒａｏｎらのｌｔｍｓｎｏ　　ｃｈｅｍｉｓ
ｔｒｙ　　８．１６８−８，１９７１）；および ＮＨｗＭをもつ分子、リゾガングリコシドＧＭＩへの多
糖類九とえはセルロース（インステテユートメリオウの
仏画％ｌ［？　７２８１６８号） のカプリングである。

メタ過沃素酸塩による多糖類の活性化、爾後の蛋白質と
のカプリングおよび形成されたイミン結合の還元による
安定化から成る反応が、本発明により、多糖類支持体上
の抗原また社抗体の固定に今や適用された。このものは
次いで免疫学的グロブリン（アレルゲンまたはＩｔｔＧ
に特有のりアジン）の免疫学的測定に使用することがで
きる。

種々のアレルゲン九とえば家のガンとカビ、花粉ダクテ
ル、グランナセアエ、ネコの毛、などを固定したセルロ
ースのディスクがこのよ５Ｋｔ、て本発明によりｖＪ４
製され、そしてこれらのディスクは放射性免疫学的方法
ＣＲＡＳＴ）により、または＃禦免疫学的方法ＣＥＬＩ
Ｓｋ）により、これらのアレルゲンに対して特に西向さ
れたりアジンの血清中の測定に成功裡に使用された。

采発明による免疫学的吸着剤の製造操杵は次のとおりで
ある。

８）活性化 セルロース系支持体（友とえばペーパーディスク）を０
．２ＭのＪＶａ　ＩＯ４溶液とかきまぜながら室温にお
いてセルロース５〜１０Ｆに対して浴液ＩＱＱｉｌの割
合で約２時間接触させる。次いでこの支持体を０．１　
Ｍの炭酸塩緩衝液（ｐＨ９）で洗浄する。

このセルロース系支持体のアルデヒド官能性の出現を次
いでサンプル上のシップ試薬によって制御する（１ｇ色
の外ｍ１．　）。

ｂ）アレルゲンのカプリング 凍結乾燥し九アレルゲンを０．Ｉ　Ｍの炭酸塩緩衝剤Ｃ
ｐＨ９）により所望の濃度にとりあげる。

活性化し九セルロースを密封状態に閉鎖しうるチューブ
に入れ、このアレルゲンを加える。全体を＋４℃から室
温までの温度で８〜１５時間、連続的に回転させながら
、培養する。

１１＋）還元による安定化 粉末状のナトリウムボロハイトライ）’　（Ｎａ　ＢＨ
＊　）　’ｅｆｍ記操作のチューブに直接導入して、溶
液中に０．２　Ｍの最終濃度のＮｃＬＢＨ４を含有させ
る。この操作は水素放出のためアスピレータの存在下で
行なう。この物質を室温で２時間接触させ、次いで支持
体を０．１　ＭＯ脚酸塩緩衝液で洗浄し、２番目にｌＡ
ｆのＮａＣｌで洗浄し、そして８番目にリン酸塩緩衝液
で洗浄してから、調剤用に供する。

次込で支持体を吸着剤用紙上で乾燥して一２５℃で凍結
させて貯蔵する。

本発明の方法によりアレルゲンを固定し九支持体は、従
来の臭化シアノーリン（ＥｒＣＮ）による活性化の周知
の方法によって同じアレルゲンを固定した支持体と比較
することによって、このアレルゲンに特有の血清リアジ
ンの調剤のために有利に使用し５ることが示された。

この目的の几めに、次の２ｓの凍結乾燥アレルゲンを実
例として便用し次。

１ＩＬｌ当り１６７，０００蛋白質窒素率位（ＰＮＵ／
Ｍｌ）の滴定値をもつダクチリスの花粉（以後、ダクチ
リスと呼ぶ）；１　？　９，０００　ＰＮＵ／Ｍｌの滴
定値をもつ家のゴミとカビ（以後、ＰＭＤと呼ぶ）。

これらのアレルゲンの１つを固定したセルロースのディ
スクを、陽性の血清（％に希釈）のプールおよび８種の
陰性対照標準を使用して通常の放射性免疫学的方法（Ｒ
ＡＳＴ）により、特定のリアジンの調剤について分析し
た。使用した対照標準（コントロール）は次のとおりで
ある。

コントロールＨ８Ａ（人間の血清アルブミン）０．１％
；コントロール陰性血清＜３Ａに希釈）；およびコント
ロール試剤（非特定の反応を考慮に入れた、血清なし、
抗ＩｇＥ試剤ありの試剤）。

ＲＡＳＴ試験り常法により行なった。

検討すべきディスクを微量滴定プレートの容器に入れ、
５０声ｊの希釈血清（または対照標準）でおおった。連
続的に水平にかきまぜながら、これらを室温で８時間培
養し、次いでこのディスクをＰＢＳ−トウイーン２０（
４，％）で８回洗浄した。洗浄液を除去し、１１０で標
識した抗−ＩｇＥの２５μｌをそれぞれのディスクに加
えた。このプレートをおおい、室温で一夜培養した。次
いでこのディスクをＰＥ５−トウイーン緩衝液で４回洗
浄し、洗浄液を除いた。

乾燥ディスクをあらかじめ標識し九チューブに入れ、放
射能をガンマ・カウンタで毎分のカラｙ）ｆｆ（Ｃ，ｐ
、ｍ、）　　で読みとった。

２つのバッチのディスク（その一方は周知の方法により
ＥｒＣＮで活性化したものであり、他方は本発明の方法
によりメタ過沃素酸塩で活性化したものである）を同じ
条件で、ただしアレルゲンの濃度を増加させて、すなわ
ち希釈液ｌｄ当り０．５．５．１０．１５．２０．２５
および８０■の凍結乾燥物を用いてカプリングさせた。

これはＰＭＤアレルゲン（１？　９，０００　ＰＮＵ／
１１１　）については希釈剤１ｍｌ当り６０．６４０，
１ｇ９０，２０００．２６００．８２８０および８８０
０．ａｆの理論蛋白質に相当し、ダクチリス・アレルゲ
ン（１６？、０００　ＰＮＵ／Ｍｌ）については希釈剤
ｌ−当り７８　ｓ　ｆ　ｓ　７８８μｆ、ｌ、５６．２
．８５．８．１８．８．９および４．７０ダに相当する
。

カプリング後に、ＢｒＣＮで活性化したディスクの遊離
の反応性の場をアきノ酸混合物（ＥＰＡｕ）で飽和させ
、メタ過沃素酸塩で活性化したディスクを本発明の方法
により地ＢＨ４で還元した。

同じ日に、これらの２つのバッチのディスクについて同
じ血清および同じ抗−ＩＱＥ試剤を用いてＲＡＳＴｉｌ
ａ剤を行なつ九。

後に掲げる第１表は臭化シアノーゲンで活性化し、ＰＭ
Ｄアレルゲンにカップリングさせたディスクについて記
録した結果を示すものである。第１ａ表は陽性血清で制
御したものについてのデータであり、第１ｈ表は陰性血
清またはＨ８Ａで制御し九ものについてのデータである
。試剤の制御はバックグラウンド・ノイズ制御である。

後に掲げるｇｉ表は同じ条件下でメタ過沃素酸塩により
活性化したディスクについて記録し九結果を示すもので
ある。

後に掲げる第８表および第１六はダクチリス・アレルゲ
ンについて見られ九結果を示すものである。第８表はＢ
ｒＣＮで活性化したディスクについてのデータであり、
第４表はメタ過沃素酸塩で活性化したディスクについて
のデータである。

これらの表の検討から次のことがわかる。

本発明によるメタ過沃素酸塩で活性化したディスク（第
２表および第４弄）については、調剤の感度はアレルゲ
ンの濃度の関数として増加し、１当り１５ｑのアレルゲ
ンの濃度（ＰＭＤについては約５５００　ｃμのカウン
ト数そしてダクチリスについては７００００カウント数
に達する）について多少安定化されている。

試剤また社陰性の対照標準はアレルゲンの濃度の関数と
して徐々に展開する。試剤の対照標準の値は陰性の対照
標準の値を越えず、２７０〜Ｂ４ＯＣ−間で変化する。

Ｂ・αで活性化し九ディスク（第１９および第８表）に
ついては、調剤の感度はアレルゲンの濃度の関数として
増加し、ＩＷＬｔ当り１ｏＷ９のアレルゲンのレベルに
達する。試剤の対照標準の感度はアレルゲンの濃度とは
無関係で、メタ過沃素酸塩ディスクについての同じ対照
標準の場合よりも高い。

懸 あらかじめ活性化したディスク上でカプリングさせるべ
きアレルゲンの最適濃度を上記のようにして測定した後
に、あらかじめ活性化したディスクを同じアレルゲンの
同じ濃度で培養し九。すなわち、 ＲＡＳＴ調剤は前述のものと同じプールの陽性血清を用
いて行ない、１シリーズ当り６個の陽性試験および４個
の陰性試験を４回くりかえした。それらの結果を後述の
第５ＷＫ掲げた。これらは、メタ過沃Ｘ＃１塩で活性化
したディスクの感度がＢｒＣＮで活性化したディスクの
感度よりもや＼高く、然もそれぞれの試験内のバラツキ
はこれら２つの固定法について同じであり、再現性は相
互に良好であることを示している。陰性のおよび試剤の
対照標準は低く且つ非常に規則的であり、”バックグラ
ウンド・ノイズ１（対ＪＩ［１ｍ準）は本発明により活
性化したディスクの方が中−低い。

メタ過沃素酸塩によるディスクの活性化の再現性の確認
令バッチのディスクを相互に独立にメタ過沃素酸塩で活
性化し友。ＢｒｃＮで活性化し九バッチは同じ活性化バ
ッチのすべての部分であった。

カプリングをそれぞれのシリーズのディスクにわたって
分布させた単一割合のダクテリスアレルゲン（ｌ　Ｏａ
ｐ／ｄ）およびＰＭＤアレルゲン（１５■／１）から行
なった。

それらの結果を後に掲げる第６六に示した。

これらの結果は、メタ過沃素酸塩に対するディスクの感
度は相互の活性化バッチから変化を受けていないことを
示している。−バッチ内の感度のバラツキはＢｒＣＮデ
ィスクについて記鍮されたものをや＼よく確認した。

然しなから、メタ過沃素酸塩で活性化したディスクにつ
いて、陰性の対照標準は低くて変化し離く、そして試剤
の対照標準は低いバックグラウンド・ノイズを示してい
る。

結論として、本発明によるメタ過沃素酸塩で活性化した
ディスクを用いｆｌ−ＲＡＳＴｍ剤の感度はＢｒＣＮで
活性化したディスクを用いて作った同じ調剤の感度と同
様に良好であり、そしてこれよりや＼高くさえある。

本発明に従うメタ過沃素酸＃ｉによる活性化とカプリン
グは検討したアレルゲンについて全く満足すべきもので
ある。

試剤の対照標準および陰性の対照標準によって与えられ
るバックグラウンド・ノイズは本発明により活性化した
ディスクの場合の方がＢｒＣＮにより活性化したものを
用いた場合よりも低く、従って弱い陽性血清についてよ
り大きい感度を与える。

上記の実験は限られた数のアレルゲンを使用するときの
ＲＡＳＴ中のメタ過沃素酸塩活性化ディスクの好適性を
示すものである。これらの実験において、最大のディス
ク感度に必要な最適濃度のアレルゲンがどのようなもの
であるかが記述されｈ別の実験において、メタ過沃素酸
塩技術によって活性化したディスクが臭化シアノーゲン
技術によって活性化し九ディスクと、次のアレルゲン抽
出物とカプリングさせて、比較された。

家のゴミ ダーマト７アゴイデス　ブチロニジナスネコの毛 ５種のグラミナセアエ カバ材 臭化シアノーグン活性化ペーパーディスクおよびメタ過
沃素酸塩活性化ペーパーディスクを前述の如く上記のア
レルグｙ（約１ａｆ／デイスク）とカプリングさせ次。

臭化シアノーゲンで活性化してカプリングさせたディス
クとメタ過沃素酸塩で活性化してカプリングさせたディ
スクとを直接のＲＡＳＴによって比較した。リン酸塩緩
衝塩水（ｐｂａ）中でＨに希釈した５０ｓｌの人間の血
清をアレルゲンをカプリングさせたディスクで室温にお
いて８時間培養した。

このディスクを次いで１％のトウィーン２０を含むｐｂ
ａを使用して十分に洗浄してから、このディスクに結合
したＩｆＥをｚｌＲｍ抗−１ｆｌＥを使用して測定した
。臭化シアノーグンで活性化したアレルゲンディスクに
結合したＩｇＥの量をメタ過沃素酸塩で活性化したアレ
ルゲンディスクに結合し九ＩＩｇの量と比較した。

これらの結果を後に掲げる第７表〜第１１表に示した結
論として、メタ過沃素酸塩で活性化したペーパーディス
クの感度は、毎分のＩＱＢ抗−ＩＱＢのカウント数で表
現して、広範囲のアレルゲン抽出物を使用したとき、臭
化シアノーグンで活性化したペーパーディスクについて
見出されるのと少なくとも同程度の数種の個々の血清に
対して良好であり、そして時としこれよりも良好である
ことが示された。

更に、一連の試験を本発明により活性化しカプリングし
友ディスクを使用し、アレルゲンに特有のりアジンの調
剤用の酵素免疫学的プロセスにおいて実施した。本発明
の方法によりアレルゲンを固定したディスクをアレルゲ
ンに特有な、調剤されるべきＩＱＫ’を包む血清のプー
ルと接触させ九。これらのＩＱＢ’は、その基質の劣化
中に現われる酵素にカプリングした、アレルゲンのＦｃ
フ２グメントに特有の抗−ＩＱＥと選択的に結合する。

このディスクを次いで消去し、そして液相中の着色した
基質を色度計で読みとる。

同じディスクを用いて行なつ九ＲＡＳＴｗ４剤中と同じ
感度および再現性が本発明によるディスクを用いて行な
ったＥＬＩＳＡ￥ＪＩ４剤について観察された。

本発明に従う方法によって、セルロース支持体特にペー
パーディスクで構成される支持体に血清中に調剤すべき
免疫学的グロブリン（拮抗する抗体を固定させることも
、および見られたディスクをサンドインチ法によってこ
れらの免疫学的グロブリンを、％に：酵素免疫学的に、
測定するために使用して、臭化シアノーグンで活性化し
たディスクを使用することによって見られたものと少な
くとも同等の調剤の感度および再現性を５ることも、可
能である。

本発明により活性化し、抗原または抗体とカプリングさ
せ次セルロース系支持体は、それ故、免疫学的グロブリ
ンの放射性免疫学的調剤用および＃素免疫学的調剤用の
両者に成功裡に使用することができ、然も臭化シアノー
グンを用いる周知の方法によって活性化し九支持よりも
すぐれた性質を示し、且つ非毒性という利点もも友らさ
れる。

第７弄 家のゴミ：毎分当りのカウント数　（、ＩｃｔＥ４合）
１　　　　　　　２７４　　　　　　　　８５０２　　
　　　　２８８０　　　　　　　８１５２８　　　　　
　　２４８　　　　　　　　４５０４　　　　　　　７
８６　　　　　　　８１２２５　　　　　　　１ＪＯ８
６８ ６１７２１，８８８２２ ７１９８４４６ ８２７２４８８ ９１１１２２１０ １０２８６４８４ 第　８　表 １　　　　　　　　２１０　　　　　　　　　　８４８
２　　　　　　　２８８６　　　　　　　　　９８９２
８　　　　　　　　１８６　　　　　　　　　　２２０
４　　　　　　　　２２ｆ！、　　　　　　　　　　　
２２２５　　　　　　　　８７８　　　　　　　　１６
９４６　　　　　　　　２２６　　　　　　　　　．２
９８７　　　　　　１０４６　　　　　　　　８６２０
８　　　　　　　　１９４　　　　　　　　　２４６９
　　　　　　　　　ｇ０８　　　　　　　　　　２０６
１０　　　　　　　２８８　　　　　　　　　８４６第
９表 ネコの毛二ｃ、ｐ０ｍ、（ＩｇＥ結合）１　　　　　　
　３５６　　　　　　　　４９６２　　　　　　　１７
６　　　　　　　　８９２８　　　　　　６５４５　　
　　　　　８９６６４　　　　　　８４８０　　　　　
　１０１２１５　　　　　　　２５０　　　　　　　　
８４６第１０衆 ５１１のグ５イナセアエ：　ｅＪ）、ｍ、　（ＩｇＥ結
合）１　　　　　　　２５０　　　　　　　　８７０ｇ
　　　　　　　　８６０　　　　　　　１２６４８　　
　　　　　８８８　　　　　　　　７８８４　　　　　
　４７４８　　　　　　１１？４ｊａ５　　　　　　　
８１０　　　　　　　　４６０第１１１Ｎ カバ材：　ｃ、ｐ、慣、（１（Ｉｇ結合）１　　　　　
　　　　４８６８　　　　　　　　　５９７６２　　　
　　　　　　４６７１　　　　　　　　　６６６０８　
　　　　　　　　４５５８　　　　　　　　　５９８０
４　　　　　　　　　　　７５４　　　　　　　　　２
２８０特許出願人　　ラボラトワー　デ　スタレジエン
代　　理　　人　　弁理士　　　川　瀬　良　治同　　
　弁理士　　斉　藤　武　彦 手続補正書（方式） 昭和５７年４Ａ２１日 特許庁長官・島　１）春　樹　殿 １、事件の表示 昭和５７年特許顧第４５７２９号 ２、発明の名称 多１ｉｋｅ支持体上に抗原および抗体を固定する方法お
よびこのようにしてえた生成物の免疫学的調剤への使用
３、補正をする者 事件との関係　　特許出願人 名称　ラボラトワー　デ　スタレジェンテサンマンショ
ン新南平台（電話４７６−２５７１）願書に添付の手豊
き明細書 ６、補正の内容

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 Ｌ　対応する抗体および抗原の免疫学的調剤に供する九
   めに不溶性多糖類支持体上に抗原および抗体をそれぞれ
   固定する方法であって； 第１工ｉ！において該支持体を０．２　Ｍのメタ過沃素
   酸ナトリウム溶液と、かきまぜながら、室温においてシ
   ック試薬により試料上に制御されたアルデヒド官能性が
   あられれるまで接触させ： 第２工程において該支持体を、ｐＨ９の０．１　Ｍの炭
   酸塩緩衝液を用いて洗浄した後に、室温における８〜１
   ５時間の培養によって、同じ緩衝液中で希釈した抗原ま
   たは抗体とカプリングさせ； 第８工程において、支持体を含む該溶液に粉末状のナト
   リウムボロハイドライドを０．２Ｍの最終濃度まで添加
   し、これを室温にて２時間培養させ、次いでこの支持体
   を炭酸塩緩衝液でまず洗浄し次に免疫学的調剤に供する
   緩衝液で洗浄してからこの支持体を乾燥する； ことから成ることを％微とする方法。 ２　支持体がセルロースま次はセルロース誘導体によっ
   て構成されそして％にペーパーディスクによって！ｌｔ
   成される特許請求の範囲第１虫記載の方法。 ａ　支持体上に固定される抗原が、家のゴミとカビとの
   混合物、ダクテリス花粉、グラミナセアエの混合物、ネ
   コの毛、またはダーマトファゴイデス・ブチロニジナス
   のようなアレルゲンである特許請求の範囲第１項またＦ
   ｉ＠１１に記載の方法。 表　支持体上にカプリングさせるべきアレルゲンの最適
   濃度が希釈液ＩＩＩ／当り１０〜１５ｍ９の凍結乾燥ア
   レルグｙである特許請求の範囲第１項〜第８項のいづれ
   かに記載の方法。 ＆　調剤すべきグロブリンが拮抗する抗原または抗体を
   特許請求の範囲第１項〜第４項のいづれかに記載の方法
   によって固定し皮多糖類支持体から成る免疫グロブリン
   の放射線−または酵素−免疫学的調剤用の試剤。