JPS589068A - エストリオ−ル−１６α−グルクロニドの免疫化学的測定法 - Google Patents
エストリオ−ル−１６α−グルクロニドの免疫化学的測定法Info
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- JPS589068A JPS589068A JP10713081A JP10713081A JPS589068A JP S589068 A JPS589068 A JP S589068A JP 10713081 A JP10713081 A JP 10713081A JP 10713081 A JP10713081 A JP 10713081A JP S589068 A JPS589068 A JP S589068A
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- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/74—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving hormones or other non-cytokine intercellular protein regulatory factors such as growth factors, including receptors to hormones and growth factors
- G01N33/743—Steroid hormones
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は工□ストリオールー１６α−グルクロニ上゛の
免疫化学的測定法に関するものである。さらに詳しく紘
１体液あるいは排出液中のニストリゝオールー１６α−
グルクロニド（以下、Ｅ、−１６α−Ｇと称する）をラ
テックス凝集阻止反応を用いて特異的に測定する方法に
関するものである。
免疫化学的測定法に関するものである。さらに詳しく紘
１体液あるいは排出液中のニストリゝオールー１６α−
グルクロニド（以下、Ｅ、−１６α−Ｇと称する）をラ
テックス凝集阻止反応を用いて特異的に測定する方法に
関するものである。
ステロイドホルモンの一種であるエストロゲン（卵黄ホ
ルモン）は１性腺や副腎皮質で主にエストロンやエスト
ラジオール−１７β、！： して産生分泌され１肝臓に
おいてニス） ＩＪオールに変換）不活性化されて１さ
らにグルクロン酸１硫酸などの抱合を受けて１尿中から
体外へ排出される。また１妊娠婦人では妊娠の週数が増
すに従って胎児胎盤系において１エストリオールが大量
に合成され翫母体肝臓で抱合を受けた後、尿中から体外
へ排出される。特に妊娠時では合成分泌されるエストリ
オール社〜非妊娠時の約ｉ、ｏｏｏ倍にも違し１尿中エ
ストリオールの大部分は１６α水酸基にグルクロン酸の
結合し九ヘ−１６α−Ｇである。したがって妊娠過程、
）特に妊娠後期の胎児および胎盤の異常の診断には、尿
中のＥ、−１６α−Ｇの測定が重要とされている。
ルモン）は１性腺や副腎皮質で主にエストロンやエスト
ラジオール−１７β、！： して産生分泌され１肝臓に
おいてニス） ＩＪオールに変換）不活性化されて１さ
らにグルクロン酸１硫酸などの抱合を受けて１尿中から
体外へ排出される。また１妊娠婦人では妊娠の週数が増
すに従って胎児胎盤系において１エストリオールが大量
に合成され翫母体肝臓で抱合を受けた後、尿中から体外
へ排出される。特に妊娠時では合成分泌されるエストリ
オール社〜非妊娠時の約ｉ、ｏｏｏ倍にも違し１尿中エ
ストリオールの大部分は１６α水酸基にグルクロン酸の
結合し九ヘ−１６α−Ｇである。したがって妊娠過程、
）特に妊娠後期の胎児および胎盤の異常の診断には、尿
中のＥ、−１６α−Ｇの測定が重要とされている。
本発明は１人および哺乳動物の体液１または排出液中に
微量に存在するＥ、−１６α−Ｇを免疫化学的に高感度
でＡしかも特異的１かつ簡便１迅速に測定することを目
的とする免疫化学的測定法を提供するものである。
微量に存在するＥ、−１６α−Ｇを免疫化学的に高感度
でＡしかも特異的１かつ簡便１迅速に測定することを目
的とする免疫化学的測定法を提供するものである。
従来馬用いられているエストリオール（以下１鳥と称す
）の分析化学的測定方法としては１一般に体液中に存在
する鳥−１６α−Ｇをβ−ガラクトシダーゼなどの酵素
により加水分解し１Ｅ。
）の分析化学的測定方法としては１一般に体液中に存在
する鳥−１６α−Ｇをβ−ガラクトシダーゼなどの酵素
により加水分解し１Ｅ。
を遊離させた後１各種クロマトグラフィーによシ単離定
量した値より、加水分解処理前に単離定置した値を差し
引いた値から間接的に定量しているが１これらの操作は
繁雑で１かつ長時間 〜を要する上に１クロマトグラフ
イー処理によって１かなりの部分が吸着剤に吸着され１
回収庫が悪く１微量のＥビ４６ａ−Ｇが測定できない１
などの問題点がある。また１免疫化学的測定方法として
従来用いられていた凝集阻止反応を利用したＥ、の測定
法は、 Ｅ、−１６α−Ｇを特異的に測定できなかった
。すなわち）従来法に使用するハプテン抗原は、 Ｅ８
＋ １６α−Ｇ−蛋白複合体１あるいはＥ、−１６，１
７−ジサクシネートー蛋白複合体の混合酸無水物法での
合成によるものを用いていた。
量した値より、加水分解処理前に単離定置した値を差し
引いた値から間接的に定量しているが１これらの操作は
繁雑で１かつ長時間 〜を要する上に１クロマトグラフ
イー処理によって１かなりの部分が吸着剤に吸着され１
回収庫が悪く１微量のＥビ４６ａ−Ｇが測定できない１
などの問題点がある。また１免疫化学的測定方法として
従来用いられていた凝集阻止反応を利用したＥ、の測定
法は、 Ｅ、−１６α−Ｇを特異的に測定できなかった
。すなわち）従来法に使用するハプテン抗原は、 Ｅ８
＋ １６α−Ｇ−蛋白複合体１あるいはＥ、−１６，１
７−ジサクシネートー蛋白複合体の混合酸無水物法での
合成によるものを用いていた。
これら、はステロイドのＤ環を介して、蛋白と結合させ
たもので）これによって常法によシ哺乳動物を免疫して
得た抗血清は、穐あるいは４−１６α−ＧのＤ環特異性
が著しく低い抗体しか得られなかった。これらハプテン
抗原）および抗体を使用した凝集阻止反応系では１エス
トロン（以下゛０・２称す）、゛あ′″１”−Ｘ）５９
＊−−１７β（以下Ｓ鳥と称す）などもへあるいは鳥−
１６α−Ｇと同様に測定し、てしまうので１必然的にＥ
、、−１６α−Ｇのみを特異的に測定することはできな
かった。
たもので）これによって常法によシ哺乳動物を免疫して
得た抗血清は、穐あるいは４−１６α−ＧのＤ環特異性
が著しく低い抗体しか得られなかった。これらハプテン
抗原）および抗体を使用した凝集阻止反応系では１エス
トロン（以下゛０・２称す）、゛あ′″１”−Ｘ）５９
＊−−１７β（以下Ｓ鳥と称す）などもへあるいは鳥−
１６α−Ｇと同様に測定し、てしまうので１必然的にＥ
、、−１６α−Ｇのみを特異的に測定することはできな
かった。
本発明者らの一人である南原利夫は１先に放射免疫分析
法（Ｒａｃｌｉｏ Ｉｍａｚｎｏ Ａｓａｙ ：以下、
ＲＩＡと称す）を用゛−るち測定用の抗体作製用抗原
について特許出願した（特願昭５２−２６５０９）。さ
らにＲＩＡを用いるＥ、−１６α−Ｇ測定法についても
報告した （Ｔ、−一エ２Ｍ、−助一、Ｔ、論ね、Ｔ。
法（Ｒａｃｌｉｏ Ｉｍａｚｎｏ Ａｓａｙ ：以下、
ＲＩＡと称す）を用゛−るち測定用の抗体作製用抗原
について特許出願した（特願昭５２−２６５０９）。さ
らにＲＩＡを用いるＥ、−１６α−Ｇ測定法についても
報告した （Ｔ、−一エ２Ｍ、−助一、Ｔ、論ね、Ｔ。
ＣｈＪｄｏｏ ： Ｐｒｅｐａｚａｔｉａｎば−１ｆｉ
ｏ ａｎｔｉｓｅｎｉ ｔｏ ｅｓｔｒｉｏｌ １６
ｇｌｕ−ｃｒｃｎｉｄｅ ｂｙ ｉｍｏｕｎｏｚａｔｉ
ａｎ ｗｉｔｈ ８−胸ａｔｔａａｈａｉ ｔｏ ｐｒ
ｏｔｅｉｎｔｈｒｏｔ＄ ｐｏｅｉｔｉｃｒｍ ｉｎ
ｒｉｎｇ Ａ 、 、ｒ 、 ｂ 、 Ｄ％ 、、 １
．５５〜６１１９７ｇ）。しか−Ｌ、 ＲＩＡでは放射
性同位元素を使用するため九その取扱いには高度の知識
と技術が要求され１さらに特殊な設備１および測定簿器
が必要となるなど１簡便性に欠けていた。−上記の様な
１従来の測定方法における種々の欠点を解決するため、
本発明者らは鋭意研究ゼ重ねた結果１人および哺乳動物
の体液島および排出液中に極微量に存在するＥ、 −１
６α−Ｇを高感度に、かつ迅速１簡便に測定する方法を
見し出し１本発明を完成した。
ｏ ａｎｔｉｓｅｎｉ ｔｏ ｅｓｔｒｉｏｌ １６
ｇｌｕ−ｃｒｃｎｉｄｅ ｂｙ ｉｍｏｕｎｏｚａｔｉ
ａｎ ｗｉｔｈ ８−胸ａｔｔａａｈａｉ ｔｏ ｐｒ
ｏｔｅｉｎｔｈｒｏｔ＄ ｐｏｅｉｔｉｃｒｍ ｉｎ
ｒｉｎｇ Ａ 、 、ｒ 、 ｂ 、 Ｄ％ 、、 １
．５５〜６１１９７ｇ）。しか−Ｌ、 ＲＩＡでは放射
性同位元素を使用するため九その取扱いには高度の知識
と技術が要求され１さらに特殊な設備１および測定簿器
が必要となるなど１簡便性に欠けていた。−上記の様な
１従来の測定方法における種々の欠点を解決するため、
本発明者らは鋭意研究ゼ重ねた結果１人および哺乳動物
の体液島および排出液中に極微量に存在するＥ、 −１
６α−Ｇを高感度に、かつ迅速１簡便に測定する方法を
見し出し１本発明を完成した。
本発明は−１８−１６’ａ−Ｇにのみ特異的に反応する
抗体を得るために、 Ｆ、−１６α−ＧのＡ環の２λま
たは４位にマンニッヒ反応により抗原蛋白を結合させた
複合体を６ケ月以上Ｓ２週間間隔で哺乳動物に免疫して
得たものと１ノーブテン抗原とを公知の方法でラテック
ス粒子に感作して得られるラテックス懸濁液を用い九Ｆ
ｌ、−１６α−Ｇを特異的に測定する為迅速１かつ簡便
な免疫化学的測定法である。
抗体を得るために、 Ｆ、−１６α−ＧのＡ環の２λま
たは４位にマンニッヒ反応により抗原蛋白を結合させた
複合体を６ケ月以上Ｓ２週間間隔で哺乳動物に免疫して
得たものと１ノーブテン抗原とを公知の方法でラテック
ス粒子に感作して得られるラテックス懸濁液を用い九Ｆ
ｌ、−１６α−Ｇを特異的に測定する為迅速１かつ簡便
な免疫化学的測定法である。
本発明に用いる抗体について１さらに詳細に述べれば為
前述のＲＩＡに用いた抗体と本発明に使用する抗体では
九抗体価の面で著しく［■１Ｒ工Ａに用いた抗体を本発
明の免疫化学的測定法に適応させることは困難であった
。すなわち後述の参考例１．によるマイクロタイター法
による抗体価は、 ＲＩＡに用いた抗体の場合は１ ：
２００〜１：４００ で充分であるのに対して）本
発明に適応するに足る抗体価は１：１６０９〜１：６４
００であ１１、ＲＩＡの場合の４〜３２倍の抗体価が必
要であった。本発明に使用す１蛋白は・抗原性を有する
蛋゛白であればよく・好ましくは牛血清アルブミン（以
下１ＢＡＡと称す））人血清アルブミン（以下、 Ｈ８
Ａと称す）蔦卵白アルブミン（以下、 ＥＡと称す）１
牛血清ｒ−グロブリン（以下、 ＢＧＧと称す）１およ
びウサギ血清アルブミン（以下５Ｒ８Ａと称す）が良好
な結果を示す。
前述のＲＩＡに用いた抗体と本発明に使用する抗体では
九抗体価の面で著しく［■１Ｒ工Ａに用いた抗体を本発
明の免疫化学的測定法に適応させることは困難であった
。すなわち後述の参考例１．によるマイクロタイター法
による抗体価は、 ＲＩＡに用いた抗体の場合は１ ：
２００〜１：４００ で充分であるのに対して）本
発明に適応するに足る抗体価は１：１６０９〜１：６４
００であ１１、ＲＩＡの場合の４〜３２倍の抗体価が必
要であった。本発明に使用す１蛋白は・抗原性を有する
蛋゛白であればよく・好ましくは牛血清アルブミン（以
下１ＢＡＡと称す））人血清アルブミン（以下、 Ｈ８
Ａと称す）蔦卵白アルブミン（以下、 ＥＡと称す）１
牛血清ｒ−グロブリン（以下、 ＢＧＧと称す）１およ
びウサギ血清アルブミン（以下５Ｒ８Ａと称す）が良好
な結果を示す。
次に４−１６α−Ｇ抗体、およびＥｓ−・１６α−Ｇ−
蛋白複合体を感作させる担体については１一般に免疫化
学的凝集阻止反応に多く使用されている担体葛例えばポ
リスチレンラテックス粒子１各゛種動物血球）細菌１お
よびベントナイトなどがあげられるが、これら各種の担
体を使用し、Ｅｓ−１６α−Ｇの測定試薬を製造する場
合、および体液あるいは排出液中のＥ、−１６α−Ｇを
測定した場合の種々の条件についての長所と欠所とを比
較した結果を第１表に示した。この成績によるとポリス
チレンラテックス粒子は翫 ａ）製造時のロフト差が小さく１製造に適している。
蛋白複合体を感作させる担体については１一般に免疫化
学的凝集阻止反応に多く使用されている担体葛例えばポ
リスチレンラテックス粒子１各゛種動物血球）細菌１お
よびベントナイトなどがあげられるが、これら各種の担
体を使用し、Ｅｓ−１６α−Ｇの測定試薬を製造する場
合、および体液あるいは排出液中のＥ、−１６α−Ｇを
測定した場合の種々の条件についての長所と欠所とを比
較した結果を第１表に示した。この成績によるとポリス
チレンラテックス粒子は翫 ａ）製造時のロフト差が小さく１製造に適している。
ｂ）被検体の鳥−１６α−Ｇを測定する場合〜血液を用
いた場合でも為反応の訪客％あるいは促進がなく１尿を
用いた場合と同様に測定できる。
いた場合でも為反応の訪客％あるいは促進がなく１尿を
用いた場合と同様に測定できる。
Ｃ）測定に要する時間が最も短かく１２〜３分間の短時
間で、測定可能である。
間で、測定可能である。
ｄ）後述の実施例３．に示す如く１定量反応が容易に為
かつ正確１簡便に実施できる。
かつ正確１簡便に実施できる。
抗Ｅ、 −１６α−Ｇ抗体の製造
製造例１．ｔ７） Ｅ、 −１６ａ−Ｇ−ＢＳＡ ２ｍ
ｇを１ｍＡ’の生理食塩水に溶解しへ同量のフロイント
の完全アジ−パントで乳化し１成熟家ウサギの足泣皮内
”および背部皮肉へ注射した。投与は２週間間隔で行な
い２α月後よシは１α月間隔とした。抗血清力価はＥ、
−１６α−Ｇ−Ｒ８Ａ感作ラテックス粒子を用いたマ
イクロタイター法で行ない３α月目に２，０００倍に達
した。抗血清の採取は抗原投与後）１０α月目に行なっ
た。抗体は含有するＢＳＡ抗体の吸収を行なった後１硫
酸アンモニウムを用いる塩析法にて精製し１抗鳥−１６
α−Ｇ抗体とＬ７た。
ｇを１ｍＡ’の生理食塩水に溶解しへ同量のフロイント
の完全アジ−パントで乳化し１成熟家ウサギの足泣皮内
”および背部皮肉へ注射した。投与は２週間間隔で行な
い２α月後よシは１α月間隔とした。抗血清力価はＥ、
−１６α−Ｇ−Ｒ８Ａ感作ラテックス粒子を用いたマ
イクロタイター法で行ない３α月目に２，０００倍に達
した。抗血清の採取は抗原投与後）１０α月目に行なっ
た。抗体は含有するＢＳＡ抗体の吸収を行なった後１硫
酸アンモニウムを用いる塩析法にて精製し１抗鳥−１６
α−Ｇ抗体とＬ７た。
製造例３゜
Ｅｊ−１６α−Ｇ−Ｒ３Ａ感作ラテックス懸濁液の製造
製造例１． ノＥ、−１６ａ−Ｇ−Ｒ８Ａ ２■を０．
２−Ｔ−ルアンモニウム緩衝液（ｐＨ８，２）の４ｍｌ
に溶解し、とれを５％濃度の粒子径０．９０Ｐラテック
ス懸濁液２ｍｌに添加し、３７℃で１時間反応させた後
、４．００Ｏｒ、ｐ、ｍ、で２０分間遠心し）上清を捨
て為沈澱を該緩衝液５０ ｍｌに懸濁して１さらに同条
件で遠心しＡこの操作を２回繰り返した後Ａ沈澱を１％
ＢＳＡを含む該緩衝液１００ｄに懸濁して、Ｅｓ−１６
α−Ｇ−Ｒ８Ａ感作ラテ−ツクスの０．１４懸濁液を得
た。
２−Ｔ−ルアンモニウム緩衝液（ｐＨ８，２）の４ｍｌ
に溶解し、とれを５％濃度の粒子径０．９０Ｐラテック
ス懸濁液２ｍｌに添加し、３７℃で１時間反応させた後
、４．００Ｏｒ、ｐ、ｍ、で２０分間遠心し）上清を捨
て為沈澱を該緩衝液５０ ｍｌに懸濁して１さらに同条
件で遠心しＡこの操作を２回繰り返した後Ａ沈澱を１％
ＢＳＡを含む該緩衝液１００ｄに懸濁して、Ｅｓ−１６
α−Ｇ−Ｒ８Ａ感作ラテ−ツクスの０．１４懸濁液を得
た。
製造例４゜
Ｅ、−１６α−Ｇ−Ｒ８Ａ感作ラテックス懸濁液の製法
製造例１．のＩ、 −１６α−Ｇ−Ｒ３ＡＩ■を０．２
モルアンモニウム緩衝液（ｐＨ８，２） ４ｍｌに溶解
し、これを５％濃度の粒子径０．４８．ｐラテックス懸
濁液２ｍｌに添加し、３７℃で１時間反応させた後、４
．００Ｏｒ 、 ｐ 。
モルアンモニウム緩衝液（ｐＨ８，２） ４ｍｌに溶解
し、これを５％濃度の粒子径０．４８．ｐラテックス懸
濁液２ｍｌに添加し、３７℃で１時間反応させた後、４
．００Ｏｒ 、 ｐ 。
−ｍ、で２０分間遠心し１上清を捨て）その沈澱を１％
ＢＳＡを含む該緩衝液１０ ｒｔｒｌに懸濁して、 Ｅ
、 −１６α−Ｇ−Ｒ８Ａ感作ラテックスの１％懸濁液
を得た。
ＢＳＡを含む該緩衝液１０ ｒｔｒｌに懸濁して、 Ｅ
、 −１６α−Ｇ−Ｒ８Ａ感作ラテックスの１％懸濁液
を得た。
製造例５゜
抗Ｅ、−１６α−Ｇ抗体感作ラテックス懸濁液の製造
製造例２．で得た抗Ｅ、 −１６α−Ｇ抗体を０．２５
％濃度に０．２モルアンモニウム緩衝液にて溶解して
１０ｍ／とじ為これを粒子径０．４８Ｈのラテックス粒
子の２９６懸濁液５０ ｍｌに添加して）３７℃で１時
間反応した。反応終了後、４．００Ｏｒ、ｐ、ｍ、で２
０分間遠心し１上清を捨て、その沈澱を５％ＢＳＡを含
む該緩衝液１００ ｍｌに懸濁し）抗鳥−１６α−Ｇ抗
体感作ラテックスの１９６懸濁液を得た。
％濃度に０．２モルアンモニウム緩衝液にて溶解して
１０ｍ／とじ為これを粒子径０．４８Ｈのラテックス粒
子の２９６懸濁液５０ ｍｌに添加して）３７℃で１時
間反応した。反応終了後、４．００Ｏｒ、ｐ、ｍ、で２
０分間遠心し１上清を捨て、その沈澱を５％ＢＳＡを含
む該緩衝液１００ ｍｌに懸濁し）抗鳥−１６α−Ｇ抗
体感作ラテックスの１９６懸濁液を得た。
製造例６゜
抗Ｅ、 ＋ １６α−Ｇ抗体感作ラテックス懸濁液の製
法 製造例２．で得た抗Ｅ、 −１６α−Ｇ抗体を０．４０
９６濃度に０．２モルアンモニウム緩衝液にて溶解して
１０ ｍｌとし、これに粒子径０．３１Ｐのラテン２フ
１粒子の２％懸濁液５０ ｍｌに添加して５０℃で１時
間反応した。反応終了後、 １０．０００ｒ、ｐ、ｍ、
１１０分間遠心し）上清を捨て、その沈澱を１ ％ＢＳ
Ａを含む該緩衝液１，０００ ｍｌに懸濁し）抗Ｅ、
−１６α−Ｇ抗体感作ラテックスの０．１％懸濁液を得
た。
法 製造例２．で得た抗Ｅ、 −１６α−Ｇ抗体を０．４０
９６濃度に０．２モルアンモニウム緩衝液にて溶解して
１０ ｍｌとし、これに粒子径０．３１Ｐのラテン２フ
１粒子の２％懸濁液５０ ｍｌに添加して５０℃で１時
間反応した。反応終了後、 １０．０００ｒ、ｐ、ｍ、
１１０分間遠心し）上清を捨て、その沈澱を１ ％ＢＳ
Ａを含む該緩衝液１，０００ ｍｌに懸濁し）抗Ｅ、
−１６α−Ｇ抗体感作ラテックスの０．１％懸濁液を得
た。
試験例１゜
マイクロタイター法による抗体の特異性の確認
常法により為抗血清０ 、０．２５ Ｒ／を１各濃度の
各スーテロイドを含゛む０．２モルアンモニウム緩衝液
０．０２５＊／にて倍々希釈し１その各０．０２５＋／
に）製造例３．にて得ｉ Ｅ、 −１６α−ＧｗＲ８Ａ
感作ラテックス懸濁液０，０２５Ｉ＋７！を添加し１各
濃度の各ステロイド存在下での該抗血清の凝集反応を調
べた。
各スーテロイドを含゛む０．２モルアンモニウム緩衝液
０．０２５＊／にて倍々希釈し１その各０．０２５＋／
に）製造例３．にて得ｉ Ｅ、 −１６α−ＧｗＲ８Ａ
感作ラテックス懸濁液０，０２５Ｉ＋７！を添加し１各
濃度の各ステロイド存在下での該抗血清の凝集反応を調
べた。
第２−に、その凝集の認められる抗血清の最高希釈倍数
を示した。
を示した。
第２表
本発明におけるＥ、 −１６α−Ｇ−ＲｓＡ感作ラテッ
クスと抗Ｅ、−１６α−Ｇ抗体の反応は、Ｅ、−１６α
−Ｇによってのみ阻、害されて）抗Ｅ、 −１６α−Ｇ
抗体がＥ、−１６α−Ｇ以外のステロイドとはほとんど
反応しないことを示している。
クスと抗Ｅ、−１６α−Ｇ抗体の反応は、Ｅ、−１６α
−Ｇによってのみ阻、害されて）抗Ｅ、 −１６α−Ｇ
抗体がＥ、−１６α−Ｇ以外のステロイドとはほとんど
反応しないことを示している。
試・験例２゜
男子尿を用いたステロイド添加回収試験Ｅ、−１６α−
Ｇおよび２．飄鳥 ％ Ｅ８ ｔ−それぞれ男子尿に添
加して調製した試料を１０．２モルアンモニウム緩衝液
（ｐＨ８，２）Ｋて希釈した０、０２５ｍ／と１該緩衝
液０．０２５ｍＡ！、さらに製造例１．のＩ、−１６α
−Ｇ−Ｒ８Ａのｉ ｐ９／ＩＩＩｔ該緩衝液溶液０．０
２５ｍ／をスライド上にて混合し、これに製造例５．の
抗鳥−１６α−Ｇ抗体感作ラテックス懸濁液０．０２５
ｍ／を加えて混和し九３分後に肉眼で凝集の有無を判定
した。これを第３表に示す。また−従来法の一つ７ｓる
に、−１６α−Ｇ−Ｂ８Ａ （または−Ｒ８Ａ ）を混
合酸無水物法で結合させ１補乳動物に免疫して得た抗体
の感作ラテックス懸濁箪とＥ、 −１６α−Ｇ−Ｒ８Ａ
とによって同試料を測定したものを第４表に示す。
Ｇおよび２．飄鳥 ％ Ｅ８ ｔ−それぞれ男子尿に添
加して調製した試料を１０．２モルアンモニウム緩衝液
（ｐＨ８，２）Ｋて希釈した０、０２５ｍ／と１該緩衝
液０．０２５ｍＡ！、さらに製造例１．のＩ、−１６α
−Ｇ−Ｒ８Ａのｉ ｐ９／ＩＩＩｔ該緩衝液溶液０．０
２５ｍ／をスライド上にて混合し、これに製造例５．の
抗鳥−１６α−Ｇ抗体感作ラテックス懸濁液０．０２５
ｍ／を加えて混和し九３分後に肉眼で凝集の有無を判定
した。これを第３表に示す。また−従来法の一つ７ｓる
に、−１６α−Ｇ−Ｂ８Ａ （または−Ｒ８Ａ ）を混
合酸無水物法で結合させ１補乳動物に免疫して得た抗体
の感作ラテックス懸濁箪とＥ、 −１６α−Ｇ−Ｒ８Ａ
とによって同試料を測定したものを第４表に示す。
本発明＼従来法とも１その測定感度をＩ、−１６α−Ｇ
１ｐ９／ｍ／として１判定基準は次の様にした。
１ｐ９／ｍ／として１判定基準は次の様にした。
−二明らかな凝集像（１，−１６α−Ｇが測定感度以下
を示す） ＋：完全な凝集阻止像（測定感度以上のＥ、 −１６α
−Ｇを試料中に含んでいる） 第３表 第４表 本発明の方法では１添加されたＥ、−１６α−Ｇのみが
正確に測定されている。。
を示す） ＋：完全な凝集阻止像（測定感度以上のＥ、 −１６α
−Ｇを試料中に含んでいる） 第３表 第４表 本発明の方法では１添加されたＥ、−１６α−Ｇのみが
正確に測定されている。。
本発明の方法で、Ｅ、−１６α−Ｇ−Ｒ８Ａ感作２ゲツ
クスと抗１ｉｉ、−１６α−Ｇ抗血清゛または抗モー１
６α−Ｇ抗体感作ラテックスとも一１６α−Ｇ−Ｒ８Ａ
、またはＥ、−１６α−Ｇ−Ｒ８Ａ感作ラテックスと
抗Ｅ、−１６ａ−Ｇ抗体感作ラテックスの組合せによる
測定試薬などが可能であるが１その測定感度を任意の値
に調整することができる。例えば、Ｅ、−１６α−Ｇ−
Ｒ８Ａあるいは抗鳥−１６α−Ｇ抗体のラテックスへの
感作量を変える、または抗Ｅ、−１６α−Ｇ抗血清の濃
度やも一１６α−Ｇ−Ｒ８Ａ溶液の濃度を変えるなどに
よって感度調整が可能である。
クスと抗１ｉｉ、−１６α−Ｇ抗血清゛または抗モー１
６α−Ｇ抗体感作ラテックスとも一１６α−Ｇ−Ｒ８Ａ
、またはＥ、−１６α−Ｇ−Ｒ８Ａ感作ラテックスと
抗Ｅ、−１６ａ−Ｇ抗体感作ラテックスの組合せによる
測定試薬などが可能であるが１その測定感度を任意の値
に調整することができる。例えば、Ｅ、−１６α−Ｇ−
Ｒ８Ａあるいは抗鳥−１６α−Ｇ抗体のラテックスへの
感作量を変える、または抗Ｅ、−１６α−Ｇ抗血清の濃
度やも一１６α−Ｇ−Ｒ８Ａ溶液の濃度を変えるなどに
よって感度調整が可能である。
実施例１゜
妊婦尿中鳥−１６α−Ｇの測定
妊娠後期婦人法３検体を０．２モルアンモニウム緩衝液
でそれぞれ２５．５０．１００．２００．３００１倍に
希釈して１その０．０２５ｍｊと該緩衝液０．０２５
ｍｌに１製造例２．の抗Ｅ、−１６α−Ｇ抗血清０．０
２５ｍ１を混和し）これに製造例４．０Ｅ、−１６α−
Ｇ−Ｒ８Ａ感作ラテックス懸濁液０．０２５ｍを加えて
スライド上で３分間反応後為凝集像の判定を肉眼で行な
った。本実施例において社１測定試薬の感度を０．２Ｐ
９ ／履ｌの４−１６α−４Ｇまで凝集が阻止できるよ
う調整して用いた。判定基準は試験例２．と同様にして
１行ない１その測定結果は第５表に示す如くであった。
でそれぞれ２５．５０．１００．２００．３００１倍に
希釈して１その０．０２５ｍｊと該緩衝液０．０２５
ｍｌに１製造例２．の抗Ｅ、−１６α−Ｇ抗血清０．０
２５ｍ１を混和し）これに製造例４．０Ｅ、−１６α−
Ｇ−Ｒ８Ａ感作ラテックス懸濁液０．０２５ｍを加えて
スライド上で３分間反応後為凝集像の判定を肉眼で行な
った。本実施例において社１測定試薬の感度を０．２Ｐ
９ ／履ｌの４−１６α−４Ｇまで凝集が阻止できるよ
う調整して用いた。判定基準は試験例２．と同様にして
１行ない１その測定結果は第５表に示す如くであった。
第５表
実施＠２゜
妊婦血中鳥−１６α−Ｇの測定
妊娠婦人の末梢血（血ｔ）６検体を０．２モルアンモニ
ウム緩衝液で為それぞれ５ ％ １０ Ｓ２０ 、３０
．４０曳５０ 、６０倍に希釈して）その０．０５＊／
と１製造例４．０Ｅ、−１６α−Ｇ−Ｒ８Ａ感作ラテッ
クス懸濁液０．０２５１１１／、および製造例５．の惇
４−１６α−Ｇ抗体感作ラテックス懸濁液０．０２５＋
＊／をスライド上で十分混合し１３分間反応後１肉眼で
凝集像を判定した。本実施例の判定試薬の感度は、０．
００１）１９／” （１ｎ９ ／ ＋ａ／）に調整した
。その測定結果は第６表に示す如くであった。
ウム緩衝液で為それぞれ５ ％ １０ Ｓ２０ 、３０
．４０曳５０ 、６０倍に希釈して）その０．０５＊／
と１製造例４．０Ｅ、−１６α−Ｇ−Ｒ８Ａ感作ラテッ
クス懸濁液０．０２５１１１／、および製造例５．の惇
４−１６α−Ｇ抗体感作ラテックス懸濁液０．０２５＋
＊／をスライド上で十分混合し１３分間反応後１肉眼で
凝集像を判定した。本実施例の判定試薬の感度は、０．
００１）１９／” （１ｎ９ ／ ＋ａ／）に調整した
。その測定結果は第６表に示す如くであった。
第６表
実施例３゜
妊婦血中も一１６α−Ｇの測定
製造例６．で調製した抗Ｅ、 ＋ １６α−Ｇ抗体感作
ラテックス試薬１．０−に妊婦血清０．１−を加えよく
混合し電光路幅０．４ｃｍのセルに入れ１次いで製造、
例１．で製造した４−１６α−Ｇ−Ｒ８Ａ Ｏ，１ｍｌ
を加えよく混合し１波長６００ｍｐ〜１２００ｍＦの範
囲の一定波長の光を照射しつつ散乱光の強度１または吸
光度を経時的に測定し１一定時間当りの散乱強度の変化
率−％または吸光度の変化率を求める。
ラテックス試薬１．０−に妊婦血清０．１−を加えよく
混合し電光路幅０．４ｃｍのセルに入れ１次いで製造、
例１．で製造した４−１６α−Ｇ−Ｒ８Ａ Ｏ，１ｍｌ
を加えよく混合し１波長６００ｍｐ〜１２００ｍＦの範
囲の一定波長の光を照射しつつ散乱光の強度１または吸
光度を経時的に測定し１一定時間当りの散乱強度の変化
率−％または吸光度の変化率を求める。
上記の方法と同様に１濃度概−知のモー１６α−Ｇ溶液
を使用し作製した検量線よシ妊婦血中のも一１６α−Ｇ
量を測定した。
を使用し作製した検量線よシ妊婦血中のも一１６α−Ｇ
量を測定した。
ここに結果の一例として為測定温度３７℃１測定波長６
５０ ｍＨにおける吸光度変化で求めた検量線（第１図
）と１それより求めた妊婦血中４−１６α−Ｇ量を第７
表に示した。なお）第７表には比較のため従来の放射性
免疫学的分析、（Ｒ工Ａ）法（採択光輝）田中東−１大
久保正１南原利夫１第３回生体成分分析化学シンポジュ
ーム、１２４〜１２７．１９７７ ）による測定結果も
あわせて示し、た。
５０ ｍＨにおける吸光度変化で求めた検量線（第１図
）と１それより求めた妊婦血中４−１６α−Ｇ量を第７
表に示した。なお）第７表には比較のため従来の放射性
免疫学的分析、（Ｒ工Ａ）法（採択光輝）田中東−１大
久保正１南原利夫１第３回生体成分分析化学シンポジュ
ーム、１２４〜１２７．１９７７ ）による測定結果も
あわせて示し、た。
第７表
第１図は本発明の方法によシ濃度概知のＥ、−１６α−
Ｇ溶液を使用し作製した検量線を表わしλ縦軸は１分間
当りの波長６５０ ｍｐにおける吸光度の変化（Δ０、
Ｄ、）を１横軸はＦ、−１６ａ−Ｇ量（ｎｇ／ｍＯを示
す。 特許出願人 栄研化学株式会社 第１図 ２５ ５０ ７５ １°ｏＥ、−１６ｆｆ−Ｇ
量（ｎｇ／＊／）
Ｇ溶液を使用し作製した検量線を表わしλ縦軸は１分間
当りの波長６５０ ｍｐにおける吸光度の変化（Δ０、
Ｄ、）を１横軸はＦ、−１６ａ−Ｇ量（ｎｇ／ｍＯを示
す。 特許出願人 栄研化学株式会社 第１図 ２５ ５０ ７５ １°ｏＥ、−１６ｆｆ−Ｇ
量（ｎｇ／＊／）
Claims (1)
- エストリオール−１６α−グルクロニドと蛋白とをマン
ニッヒ反応にて結合させたエストリオール−１６α−グ
ルクロニド−蛋白複合体を哺乳動物に免疫して得られた
抗体と１該複合体の各々をラテックス粒子に感作したも
のを用いて１体液あるいは排出液中のエストリオール−
ｔｅａ−グルクロニドを測定することを特徴とする免疫
化学的測定法
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10713081A JPS589068A (ja) | 1981-07-10 | 1981-07-10 | エストリオ−ル−１６α−グルクロニドの免疫化学的測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10713081A JPS589068A (ja) | 1981-07-10 | 1981-07-10 | エストリオ−ル−１６α−グルクロニドの免疫化学的測定法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS589068A true JPS589068A (ja) | 1983-01-19 |
Family
ID=14451257
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10713081A Pending JPS589068A (ja) | 1981-07-10 | 1981-07-10 | エストリオ−ル−１６α−グルクロニドの免疫化学的測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS589068A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8308354B2 (en) | 2006-10-05 | 2012-11-13 | Toshiba Mitsubishi-Electric Industrial Systems Corporation | Mechanism of monitoring unit of electric rotating machinery and monitoring method of electric rotating machinery |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS4849918A (ja) * | 1971-10-26 | 1973-07-14 | ||
| JPS50123819A (ja) * | 1974-03-14 | 1975-09-29 | ||
| JPS5341420A (en) * | 1976-09-29 | 1978-04-14 | Mochida Pharm Co Ltd | Immunochemically measuring methoa of hapten |
| JPS53112864A (en) * | 1977-03-10 | 1978-10-02 | Eiken Chemical | Novel sterold compound process for preparing same and antigen for making antic body for measuring estrogen with radio immunoassay method comprising same |
| JPS548715A (en) * | 1977-06-21 | 1979-01-23 | Morinaga Milk Industry Co Ltd | Production of latex particles sensitive to steroid serum albumin composite |
-
1981
- 1981-07-10 JP JP10713081A patent/JPS589068A/ja active Pending
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS4849918A (ja) * | 1971-10-26 | 1973-07-14 | ||
| JPS50123819A (ja) * | 1974-03-14 | 1975-09-29 | ||
| JPS5341420A (en) * | 1976-09-29 | 1978-04-14 | Mochida Pharm Co Ltd | Immunochemically measuring methoa of hapten |
| JPS53112864A (en) * | 1977-03-10 | 1978-10-02 | Eiken Chemical | Novel sterold compound process for preparing same and antigen for making antic body for measuring estrogen with radio immunoassay method comprising same |
| JPS548715A (en) * | 1977-06-21 | 1979-01-23 | Morinaga Milk Industry Co Ltd | Production of latex particles sensitive to steroid serum albumin composite |
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|---|---|---|---|---|
| US8308354B2 (en) | 2006-10-05 | 2012-11-13 | Toshiba Mitsubishi-Electric Industrial Systems Corporation | Mechanism of monitoring unit of electric rotating machinery and monitoring method of electric rotating machinery |
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