JPS59157017A - 静脈投与用γ−グロブリン製剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はポリエチレングリコール分画法によって製造さ
れた静脈投与用γ−グ四プリン乾燥製剤の経時安定性を
高めた改良製剤に関する。

ポリエチレングリフール（ＰＥＧと略記する）は、蛋白
質の沈澱剤や安定化剤として広く利用されている物質で
あり、毒性が極めて少ないことから医薬りん造にも用い
られている。例えば、〆ルソンらは血漿にＰＥＧをある
濃度になるように添加し、析出した蛋白を分離すること
により血！蛋白質の精製を行っている（米国特許第３４
１５８０４％号）。血！蛋白製剤は上述のようなＰＥＧ
分画法によって得たものを凍結乾燥したものであるが、
この凍結乾燥製剤を用時に注射蒸留水に溶解する場合、
速やかに溶解しないことがある。

本発明者らは、かかる観点から種々研究を重ねてきたと
ころ、ＰＥＧが溶解速度に彫物を与えており、かつその
夾雑含有量が特定ａ以下の場合に乾燥製剤の水溶解性が
改善されて速やかに水に溶解することを見出し、この新
知見に基づく血漿蛋白質製剤の製造方法（特願昭５８−
８９１１号）＼ を提案した。先行発明の要旨はＰＥＧ分画法によって製
造された血漿蛋白質よりなる血漿蛋白乾燥製剤において
、この製剤を水に溶解して蛋白濃度を５〜２０ｗ／ｖ％
としたときにＰＥ０８度が０．０５Ｗ／Ｖ％以下となる
ように、乾燥処理に先立ってＰＥＧを除去しておくので
ある。

本発明はこの先行発明の改良であり、ＰＥＧをほとんど
除去したγ−グロブリン製剤において、その乾燥製剤の
経時安定性を高めるためにグルコースを添加するのであ
る。

本発明におけるｒ−グロブリンはＰＥＧ分画法によって
製造したものを用い、そのＰＥＧを乾燥処理に先立って
ほぼ完全に除去しておく。ＰＥＧによるγ−グロブリン
の製法としては例えば４Ｗメｖ％、’ｃ゛−５　Ｗ／Ｖ
　’Ｅ、１２　Ｗ／Ｖ　％　ｆ）　Ｐ　Ｅ　Ｇ　ヲＪＥ
Ｉ　次ｋｌ−添加する方法（特開昭５３−２０４１Ｆｔ
号）があるが、本発明はこの製法に限られるものではな
く、広くＰＥＧを利用したγ−グロブリンの製剤を使用
できる。

本発明でいうＰＥＧは血漿分画に利用されるものであり
、それは通常・平均分子量３０００〜２００００のもの
である。ＰＥＧの除去処理後の夾雑含有社は、この製剤
を水に溶解して蛋白濃度を５〜２０Ｗ／Ｖ　％としたと
き、ＰＥＧ濃度が０．０５　Ｗ／Ｖ　％以下となる髄で
ある。夾雑ＰＥＧ１１は例えば高速液体クロマトグラ凶
表や検出感度のより優れた比色法を用いて測定する。比
色法はＰＥＧがバリウム及びヨウ素と結合してＢａｒｉ
ｕｍ−Ｊｏｄｉｎｅ複合体を作り、それが５３５謂帯に
吸収を持つことを利用する〔マイクロ　ヘミカル　ジャ
ーナル（Ｍｌｃｒｏｃｈｅｍｌｃｓｉｌ　　Ｊｏｕｒｎ
ａｌ　）　２０１９０〜１９２．　（１９７５）　）。

夾雑ＰＥＧの除去はその血漿蛋白質に対して例えばアル
コール分画し、塩析し又は非極性のスチレンジビニルベ
ンゼン系等の合成吸着剤で処理することにより行なう。

前二者は処理後、分画に用いた無機塩アルコールを再度
凍結乾燥又は透析等Ｇ夾雑血漿蛋白質を１〜１０　Ｗ／
Ｖ％濃度に含む水溶液に０．０４〜０．７５モル濃度の
中性塩（例えば塩化ナトリウム、塩化マグネシウム）を
加え、これにエタノール５〜４０　Ｖ／Ｖ％を加えてｐ
Ｈ５〜８、温度０〜−１０℃で３０分〜２４時間処理し
、生じた沈澱を回収する。その後所望により透析を行な
って塩濃度を調整する。塩析法はＰＥＧ夾雑血漿蛋白質
を１〜１０　Ｗ／Ｖ％濃度に含む水溶液を調整し、これ
に硫安を１０〜７０％飽和に加えてｐＨ５〜７、温度２
０〜０℃で３０分〜２４時間処理し、生じた沈澱を回収
する。その後所望により透析を行なって塩濃度を調整す
る。

合成吸着剤による処理法は非極性のスチレンジビニルベ
ンゼン共重合体を用い、このものハ微粒子表面で疎水性
であり、市販品としてノ・イボ−ラスポリマー（三菱化
成工業）、ＷＡＺＩ（三菱化成下ｕ）、７／パライトＸ
　Ａ、Ｄ　（Ｒｏｈｍ　ａｎｄ　Ｈａａｓ社）等がある
。この合成吸着剤は好ましくは１０〜７０Ｗ／Ｖ％（７
）ｆｆｌ／　−＃Ｓ０．０５〜１．０Ｎ（７）塩噸又は
水酸化ナトリウムで洗浄して用いる。吸着処理はバッチ
法又はカラム法で行ない、ＰＥＧ夾雑の血？蛋白質含有
水溶液をそのまま接触させ、接触によりＰＥＧが合成吸
着剤に吸着されて水溶液画分から除去される。

このようにしてＰＥＧを除去したγ−グロブリン溶液を
常法に従って除菌濾過した後、安定剤としてグルコース
を蛋白濃度５〜２０　Ｗ／Ｖ％に対して１〜１０　Ｗ／
Ｖ％になるように添加し、凍結乾燥を行って乾燥製剤と
する。この製剤は包装単位に従って５００〜１００００
ｆＦｌｆのｒ−グロブリンを含むように分注し、高温を
避けて貯蔵し、使用に際して注射用蒸留水で溶解して静
脈投与される。投与緻は通常成人に対して１回にｒ−グ
ロブリンとして５００〜３０００＃、小児に対しては１
回にグロブリンとして２５０〜１５ｏｏｆＩＶＩである
。

安全性試験として急性毒性実験を行ない、製剤の１０％
液をマウスの尾静脈がら総量ｇ、　ｓ　略伝と１、０ｍ
ｅ７．を２群５匹ずつに投与し、７日間観察したが異常
は認めなかった。

本発明による静脈投与用γ−グロブリン製剤は、酵素的
分解又は化学的修飾を受けたγ−グロブリンを含まず、
実質的に自然界に存在する形のものであるから、血中内
半減期が長く、抗原性の問題もなく、シかも溶解性に優
れ、経時安定性が高い等の効果があり、静注用γ−グ四
プリン製剤として極めて有益である。

以下に実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本
発明がこれに限定されるものではない。

実施例 ポリエチレングリコ−ルナ４０００を用いて分画された
静脈投与用γ−グロブリン（麻疹抗体価９．２ＩＵ／１
００■、抗補体価１５）を、塩化ナトリウム０．５％を
含む０．０２Ｍ　、　ｐＨ７，０＋７）酢酸緩衝液ニ５
　Ｗ／Ｖ　％濃度になるように溶解する。この溶液中に
は分画に用いたポリエチレングリコール１４０００が０
．２％ｖ／ｖ％の濃度で混入していた。ノ＼イボ−ラス
ポリマーＨＰ２０を１０００ｒｎｌ’のカラムに充填し
、γ−グ・ロブリン溶液６０００ｔｎｅを流下・サセに
・γ−グロブリンを含む両分をプールする。このｒ−グ
ロブリン画分中にポリエチレングリコ−＃＃４０ｏｏは
検出されなかった。プールしたｒ−グロブリン溶液にグ
ルコースを２　Ｗ／Ｖ％濃度になるように添加し、凍結
乾燥する。その１０１００Ｏを１５−の注射用蒸留水に
溶かしたところ、ただちに溶解した。

又乾燥製剤を３０℃で５か月間保存したが、抗体価の減
少、抗補体価の上昇はなかった。

実験例 ＰＥＧ分画法によって得たｒ−グロブリンの５％溶液１
００ｍ＋’にグルコースを０．１，０．５，１，３．１
０Ｗ／Ｖ％濃度となるように添加し、これを凍結乾燥し
て２乾燥製剤を製する。γ−グロブリン溶液は麻疹抗体
価が９１０／　　　で、抗補価が１５を示し、１００　
ｍｇ ポリエチレングリコールは比色法によって検出されなか
った。

この乾燥製剤を３０℃で５日間無菌的に保存し、さらに
５か月間無菌的に保存し−でそれぞれの麻疹抗体価と抗
補体価を測定した。その結果は次表に示す通りであり、
いずれの場合も有０の効果が認められた。

なおこの実験において麻疹抗体価はへマグルチネーショ
ン　インヒビシ日ン　テスト（ＨｅｍａｇｇＩｕｔｊｎ
ａｔｉｏｎ　　Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　　Ｔｅ５ｔ　）
法により一（ＩＪ定し、国際φ位（Ｉ　Ｕ／ｌ＜）Ｏｍ
ｙ　）で表わした。又抗補体価はカバットとマイヤーの
方法〔エクスペリメンタル　イムノケミストリ（Ｅｘｐ
ｅｒｉｍｅｎｔａｌＩｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　
）　、　２２５　、　（１９６１）　）及び西岡、１罐
１Ｈの方法〔免疫の生イＬ学、１０３．昭４６（共布出
版）〕により測定した。すなわち試料を加えることによ
って１００単位の補体が何単位に減少するかを測定し、
その減少単位を抗補体価として表わした。

手　　続　　補　　正　　書 昭和５８年３月２９日 特許庁長官　若　杉　和　夫殿 １、事件の表示　特願昭５８−８１４６０号２、発明の
名称　静脈投与用ｒ−グロブリン製剤３、補正する者 事件との関係　出　願　人 株式会社ミドリ十字 ４、代理人 明＃１ｌｌｌジの発明の詳細な説明の欄７、補、ｉＦの
内容

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. ポリエチレングリコール分画法によって製造された静脈
   投、！７川γ−グロブリン乾燥製剤のポリエチレングリ
   コール含有量が、この製剤を水に溶解して蛋白濃度を５
   〜２０　Ｗ／Ｖ％としたときにポリエチレングリコール
   濃度が０．０５　Ｗ／Ｖ％以下となるγ−グロブリン乾
   燥製剤において、乾燥製剤の経時安定剤としてグルコー
   スを１〜１０　ｗ、’ｖ％含有させることを特徴とする
   静脈投与用γ−グロブリン製・剤。