JPS59167520A - 新規プラスミノ−ゲンアクチベ−タ誘導体およびその製造法ならびにそれを含有する医薬品 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は化学修飾された人由来で抗原性の８　　　　　
ないプラスミノーゲンアクチベータおよびその製造法な
らびにそれを含有する医薬品に関する。

特に、人由来で抗原性のないプラスミノーゲンアクチベ
ータのアミノ酸側鎖にカンプリング剤を介して、分子量
２００〜２へ０００のポリプロピレングリコールが結合
してなる新規プラスミノーゲンアクチベータ誘導体およ
びその製造法ならびにそれを含有してなる血栓溶解剤、
血栓形成阻止剤に関する。

大組織中には、線溶酵素プラスミンを賦活化する物質が
種々仰られている。その中でも代表的なものが、腎組織
で生成され、尿中に排泄されるプラスミノーゲンアクチ
ベータ、すなわちウロキナーゼである。ウロキナーゼは
、ヒト尿よりの分離・精製、組織培養あるいは遺伝子操
作などによって得られる。現在繁用されている線溶酵素
賦活化剤としては、溶血性連鎖球菌由来の蛋白およびヒ
ト尿由来の酵素であるウロキナーゼがあげられるが、抗
原性の観点より、ヒトに対して抗原性のないヒト尿由来
のウロキナーゼが臨床上好んで使用されている。ヒト尿
由来のウロキナーゼには、高分子ウロキナーゼ（分子量
５４，０００）と低分子ウロキナーゼ（分子ｉ３３，０
００）が存在するといわれている。また、ウロキナーゼ
は近年血栓溶解剤、もしくは制癌剤との併用剤として用
いられその臨床使用量は年々増大している。

しかしながら、ウロキナーゼは酵素であるが故にウロキ
ナーゼを含む原料、例えば尿よりの抽出・分離・精製過
程での失活、製剤化時の凍結乾燥操作での失活、ウィル
ス不活化のだめの加熱処理時の失活、また臨床使用時点
滴ビン中にウロキナーゼを希釈添刀日し、室温上長時間
希薄状態で放置することによる失活等の物理的不安定さ
を有している。これらの物理的不安定さは、ウロキナー
ゼを工業的に製造、製剤化する時、あるいは実際に臨床
上使用する時の大きな問題点の１つとなっている。物理
的不安定さを改良する１つの方法としてヒトアルブミン
を添加する方法がとられているが、かかる方法は抗原性
のないグロブリン分画を含まない純粋なアルブミンを得
ることが困難であること、かかるアルブミンは高価とな
ること、またウロキナーゼの安定化のために添加したア
ルブミンを一緒に６０℃、１０時間加熱処理するという
ウィルス不活化の条件下ではアルブミンとウロキナーゼ
の複合生成物ができること、また安定剤の添加により凍
結乾燥時の失活はある程度防ぐことはできたとしても、
実際臨床使用時の失活を防ぐことはできないなど、何ら
抜本的な解決とはなっていなかった。

更にウロキナーゼの生理活性は生体に投与した際、血中
に存在する加水分解酵素阻害物質（ａ２−　ｍａｃｒｏ
ｇｌｏｂｕｌｉｎ　＋α２−　ｐｌａｓｍｉｎ　１ｎｈ
ｉ−ｂｉｔｏｒ　ｅｔｃ　）により急速に阻害を受け、
またウロキナーゼ自身の代謝速度も非常に高く、結果と
してウロキナーゼの血中半減期は数分と極めて短い。こ
の血中半減期が短いという欠点全解決する手段は、これ
まで全く提供されていない。

本発明者らは、上記の欠点を克服したヒト由来で抗原性
のないプラスミノーゲンアクチベータの新規な誘導体を
見いだすべく検討した結果、物理的に安定で、かつ血中
阻害物質による阻害をうけにくく血中半減期の延長した
新規プラスミノーゲンアクチベータ誘導体を見いだし、
本発明を完成した。

従って、本発明の目的は医薬として有用な新規プラスミ
ノーゲンアクチベータ誘導体を提供することにある。

他の目的は、これらの新規プラスミノーゲンアクチペー
タ誘導体を製造する方法を提供することにある。

更に他の目的は、新規プラスミノーゲンアクチベータ誘
導体を含有してなる医薬品を提供することにある。

本発明でいう人由来で抗原性のないプラスミノーゲンア
クチペータには、ウロキナーゼだけでなく、各種組織由
来のもの、たとえば、腎組織、血管壁、黒色腫など由来
のものが含まれる。また、これらのプラスミノーゲンア
クチベータは、由来組織培養さらには遺伝子操作によっ
て得られるものも含まれ、これらの手技によって得られ
るアクチベータの分子量に制限されるものでもない。例
えば、人尿由来のブラスミノーゲンアクチベータである
ウロキナーゼとしては、高分子ウロキナーゼ（ＭＷ５４
，０．Ｃ１Ｏ）、低分子ウロキナーゼ（ＭＷ３３，００
０．）いずれも用いられるし、混合しても用いられる。

ポリプロピレングリコールの分子量は２００〜２０，０
００のものが含まれるが、特に１、０００〜１へ０００
が好ましい。また、ポリプロピレングリコールの形態と
してはＨＯ（ＣＪ　ＣＨ６）ＯＨ２０）ｎＨの様な直鎖
もしくはＣＨ３ＣＨ２Ｃ（ｃｇ２ｏ（ａｎ２ａＨ（０Ｈ
６）Ｏ）ｎＨ）３．Ｈ（Ｏｃｕ（ＯＨ３）ＣＨ２）ｎｏ
ａＨ〔ＣＨ２（ＯＨ２ＣＨ２−ゼ６月ｎ　ｏｕ）　２　
　などの分枝状のものも含まれる。

ポリプロピレングリコールと抗原性のないプラスミノー
ゲンアクチベータを結合させるためのカップリング剤と
しては、修飾しようとするアクチベータのアミノ酸側鎖
と反応し、化学的に反応しうるもの例えば、アシルアジ
ド、ハロゲン化シアヌル、ｐ−ジアゾニウムベンジルエ
ーテル、３−（ｐ−ジアゾニウムフェノキシ）−２−ヒ
ドロキシプロピルエーテル、ジハロゲノ無水コノ・り酸
などが挙げられる。すなわち、これらのカップリング剤
を介シてポリプロピレングリコールとアクチベータとの
結合形態としては、次のような形態である。

ＰＡ ＰＰＧ−０−ＯＨ２ＱＮ２−ＦＡ、ＰＰＧ−０−ＯＨ２
０Ｈ（ＯＨ）ＯＨ。

ＣＨ２−ＦＡ、ＰＰＧ−０００（３Ｈ２０Ｈ２Ｃｏ−Ｆ
Ａ　。

（ここで、ＰＰＧはポリプロピレングリコール残基を、
Ｘは〕・ロゲン原子を、ＦＡはプラスミノーゲンアクチ
ベータ残基金示す）本発明の新規ブラスミノーゲンアク
テベータ誘導体は、ポリプロピレングリコールとカップ
リング剤の結合物を、人由来で抗原性のないプラスミノ
ーゲンアクチベータと反応恣せることにより製造される
。

ここで、ポリプロピレングリコールとカップリング剤の
結合物としては、ポリプロピレングリコール−４，６−
ジクロロ−１，６゜５−トリアジン、ポリプロピレング
リコール−４，６−ジフルオロ−１，３，５−トリアジ
ン、ポリプロピレングリコール−４−クロロ−６−ヒド
ロキシ−１，５，５−トリアジン、ポリプロピレングリ
コールーβ−（ブロモカルボニル）−モノプロピオネー
ト、ポリプロピレングリコール−アジドカルボニルメチ
ルエーテル、ポリプロピレンクリコール−（ｐ−ジアゾ
ニウムベンジル）エーテル、ポリプロピレングリコール
−６−（ｐ−ジアゾニウムフェノキシ）−２−ヒドロキ
シプロピルエーテルなどがあげられる。

ポリプロピレングリコール−カップリング剤結合物とグ
ラスミノーゲンアクチベータとの反応は、グラスミノー
ゲンアクチベータの酵素活性の低下が少ない条件を選ば
なければならない。すなわち、バッファー（ｂｕｆｆｅ
ｒ　）等の水溶液中で、０℃〜室温等の低温で行なうの
が好ましい。反応時間は、数分〜５時間が好ましい。バ
ッファーのｐＨは、アクテベータの酵素活性が低下しな
い範囲、すなわち２〜１０、特に５〜９が好ましいが、
カップリング剤の反応性にもよる。ポリプロピレングリ
コール−カップリング剤の結合物の試薬濃度を変化させ
ることにより、プラスミノーゲンアクチベータのアミノ
酸側鎖の修飾度を変化させることができる。例えば、平
均分子ｉ１，０００のポリプロピレングリコール−４−
クロロー６−ヒドロキシ−１，５，５−トリアジンの試
薬濃度ｔ−４ｍＭ’、　２　ｍＭまたは０．４ｍＭ　　
と変化させて、ｐＨ７，０において高分子ウロキナーゼ
と反応させて得られた新規ウロキナーゼ誘導体について
未修飾リジン残基を、２．４．６〜トリニトロベンゼン
スルホン酸ナトリウムを用いて定量した。これより修飾
度を検討したところ、２，４．６−）リニトロベンゼン
スルホン酸ナトリウムと反応するりジン残基中、４　ｍ
Ｍ　　の場合が修飾率６１％、２　ｍＭ　の場合が修飾
率２１％、ＣＬ　４　ｍＭ　の場合が修飾率１８％であ
った、。また、これら反応成績体の分子量をＳＤＳポリ
アクリルアミドゲル電気泳動を用いて測定したところ、
平均分子量は４　ｍＭ　の場合は約７３，０００，２７
ｏ、ｏｏ。

■　の場合は約駐≠孝母であった。このように、プラス
ミノーゲンアクチベータに対しポリプロピレングリコー
ル−カップリング剤結合物による修飾度を高めようとす
れば、高いｐＨで該結合物の量を増やし、修飾度を低め
ようとすれば低いｐＨで該結合物の量を減じて反応を行
えばよい。また、反応時間を調節することによっても修
飾度を変えることもできる。これらの反応条件を組みあ
わせることにより、目的とする物理的に安定で、線溶活
性持続時間の延長された新規プラスミノーゲンアクチベ
ータ誘導体が得られる。

なお、ポリプロピレングリコールとカップリング剤の結
合物は、次の如くし會得られる。

ポリプロピレングリコール−４，６−シハロゲノー１．
３．５−トリアジンはポリプロピレングリコールとハロ
ゲン化シアヌルを無水溶媒中、塩基の存在下に反応させ
ることにより得られる。ポリプロピレングリコール−４
−ハロゲノ−６−ヒドロキシ−１，５，５−トリアジン
はポリプロピレングリコールとハロゲン化シアヌルを反
応させ、少量の水で処理することにより得られる。ポリ
プロピレングリコール−アセトアジドはポリプロピレン
グリコールのアニオンとクロル酢酸エチルエステルを反
応させ、次いでヒドラジンで処理し、得られたヒドラジ
ドを亜硝酸で活性化することにより得られる。ポリプロ
ピレングリコ−ルー　ｐ　−シアゾニウムベンジルエー
テルハホ＋）７’ロピレングリコールにｐ−ニトロベン
ジルクロライドを反応させ、次いでニトロ基をアミン基
へと還元後、亜硝酸によりジアゾ化することにより得ら
れる。ポリプロピレングリコール−３−（Ｉ）−シフ：
／’ニウムフェノキシ）−２−ヒドロキシグロビルエー
テルも同様にして得られる。

ポリプロピレングリコールとカンプリング剤の結合物と
プラスミノーゲンアクチベータの反応終了後、生成物の
単離・精製は、それ自体公知の生化学的方法、例えばゲ
ルｐ過、透析、イオン交換クロマトグラフィおよびアフ
イニテイクロマトグラフイ等の方法を単独もしくは組み
あわせることにより行なわれる。

なお、生成物は、バッファーや生理的塩類を含む状態あ
るいは単品の溶液として一２０℃以下に凍結するか、も
しくはそれらを凍結乾燥して保存するのが好ましい。

以上の如くして得られた新規プラスミノーゲンアクチベ
ータは物理的に安定でなおかつ、活性持続時間が延長さ
れた血栓溶解剤および血栓形成阻止剤として有用である
。これらの優れた作用を、新規ウロキナーゼ誘導体の場
合を例にあげて説明する。新規ウロキナーゼ誘導体の至
適ｐＨは、使用したポリプロピレングリコールの分子量
、種類、カップリング剤あるいはウロキナーゼへの修飾
度や基質等の測定条件の違いにより異なるが、合成基質
Ｓ−２４４４を用いてアミダーゼ活性で測定した時、約
８〜９の範囲である。例えば平均分子量１，０００のポ
リプロピレングリコール−４−クロロ−６−ヒドロキシ
−１，３，５−トリアジンの試薬濃度４ｍＭ、ｐＨ７，
０，０℃、３時間で修飾した高分子ウロキナーゼ（以下
ＰＰＧ−ＵＫと略す）のアミダーゼ活性における至適ｐ
Ｈは第１図に示した如くａ６である。本発明の新規グラ
スミノーゲンアクチベータ誘導体は、非修飾プラスミノ
ーゲンアクチベータに比較して物理的安定性が増大して
いる。例えば、新規ウロキナーゼ誘導体は非修飾ウロキ
ナーゼに比べて、臨床時に点滴で使用する濃度までリン
ゲル液または生理食塩水で希釈し、室温下に放置した時
の心 残存活性を経時無に測定したところ、安定性の増大がみ
られた。すなわち、ＰＰＧ−ＵＫ放装し、Ｓ−２４４４
にて残存活性を測定すると、４時間後には非修飾ウロキ
ナーゼでは２４．６％にまで失活しているのに対し、Ｐ
ＰＧ−ＵＫでは７４．８　％にとどまっていた。同様に
リンゲル液中では活性は各々６１．８％および６６．１
％であった。また、新規ウロキナーゼ誘導体は非修飾ウ
ロキナーゼに比べて、血中での活性持続時間が延長され
ている。例えば、ＰＰＧ’−ＵＫおよび非修飾ウロキナ
ーゼを正常家兎に各々ａ、ｏｏｏ１ｕ／Ｋｆ静脈注射に
て投与し、投与前から投与後４時間まで経時的に採血し
、血中プラスミンインヒビタ−量および血中プラスミノ
ーゲン量を測定することにより、血中持続時間を観察し
た。その結果Ｆ１　　分画中の゛プラスミンインヒビタ
ー量では非修飾ウロキナーゼ投与群では２時間後ですで
に投与前と同じまで戻ってしまうのに対し、ＰＰＧ投与
群では４時間後でも８５％まで戻ったにすぎなかった。

またＦ６　　分画中のプラスミノーゲン量、血漿中のプ
ラスミノーゲン量ともに同じ傾向がみられた。

従って、本発明の新規グラスミノーゲンアクチベータ誘
導体は、プラスミノーゲンアクチベータと同様に線溶酵
素の賦活作用を有しながらも、プラスミノーゲンアクチ
ペータノ欠点である物理的不安定さ、血中半減期の短い
ことを改善した優れた線溶酵素賦活剤であるＯ 本発明の新規プラスミノーゲンアクチベーどの血液の過
凝固性を基礎疾患とする種々の疾病治療に使用される。

投与方法としては、静脈注射、点滴、経口投与があげら
れる。好ましくは、静脈注射であり、製剤の形態として
は、凍結乾燥品が好ましい。水晶はリンゲル等の生理的
塩類を含む溶液や生理食塩水に溶解された状態で、ある
いはその−１：ま凍結乾燥すれば、臨床使用時に蒸留水
で溶解して、もしくは浸透圧調節のために蒸留水でさら
に希釈して使用できる。また、本発明の新規ウロキナー
ゼは安定なので、アルブミンなどの安定化剤を添加する
必要はないが添加しても何ら差し支えない。また凍結乾
燥時に、賦形剤を添加することも何ら差し支えない。

さらに、本発明の新規プラスミノーゲンアクチペータ誘
導体は、修飾したことによる毒性の上昇は全く認められ
ない。例えば、ウロキナーゼ誘導体は、ラットに対し１
ｏａｎ、ｏｏ。

ｉｕ　／　Ｋｆ　投与しても全く死亡例は認め〉れなか
りた。さらに、修飾による抗原性の出現も全く認められ
ず、安５全な薬剤であるといえる。

次に実施例をあげて本発明の詳細な説明するが、もとよ
りこれにより何ら制限されるものではない。

実施例１゜ ポリプロピレングリコール−４−クロロ−６−ヒドロキ
シ−１，３，５−トリアジン二平均分子量１．０００の
ポリプロピレングリコール４．０７を無水ベンゼン５０
−に溶解し、無水炭酸ナトリウム１．２７　ｆを加え、
攪拌下に塩化７アヌル０．５５２　ｆを加えた。室温に
て一晩攪拌後、水１−を加え、更に６時間室温にて攪拌
した。反応液を沖過後、ｐ液を減圧で留去し、残渣に無
水ベンゼンと無水硫酸す）ＩＪクムを加え、室温下１０
分間攪拌したｐ過後、炉液よシ溶媒を留去し、残渣を減
圧−乾燥して無色粘稠前として、２１０部分の平均分子
量１．０００のポリプロピレングリコール−４−クロロ
−６−ヒドロキシ−１，６゜５−トリアジンを定量的に
得た。

同様にして、ＰＰ０９分の平均分子量 ４、０００のポリプロピレングリコール−４−クロロ−
６−ヒドロキシ−１，３，５−）リアジン、２１０部分
の平均分子量１０．０００のポリプロピレングリコール
−４−クロロ−６−ヒドロキシ−１，３，５−）リアジ
ンを得た。

ここで用いたポリプロピレングリコールは直鎖状、すな
わちＨＯ（ＯＨ（ＣＨ３）ＯＨ２０）ｎＨの式で表わさ
れるものである。

実施例２ ポリプロピレングリコール−４−クロロ−６−ヒドロキ
シ−１，３，５−トリアジン二平均分子量４．０００の
ポリプロピレングリコールａＯグ、無水ベンゼン８．（
ｌｄ、無水炭酸ナトリウム０．６５６ｔおよび塩化シア
ヌル０．５６Ｂｔを用いて実施例１と同様の操作にて、
２１０部分の平均分子量４．０００のポリプロピレング
リコール−４−クロロ−６−ヒドロキシ−１，５，５−
）リアジンを白色物質として定量的に得た。

ここで用いたポリプロピレングリコールは分枝状、すな
わち、Ｃ！Ｈ３ＯＨ２Ｏ［０Ｈ２０（０Ｈ２ＣＨ（ＯＨ
５）すｎＨ〕、　　の式で表わされるものである。

また、式 ％式％）］ ）） ：］ で表わされる平均分子量！Ｉ、ｏｏｏのポリプロピレン
グリコールを用いて、同様にＰ’ＰＧ部分の平均分子量
へ０００のポリプロピレングリコール−４−クロロ−６
−ヒドロキシ−１゜３．５−トリアジンを得た０ 実施例五 ポリプロピレングリコール−４−クロロ−６−ヒドロキ
シ−１，３，５−トリアジン修飾ウロキナーゼ： ウロキナーゼ（分子量５４．０００． １０１１６７１ｕＡｎｌ）　　液α５−に、氷冷下０．
１Ｍリン酸バッファー（ｐＨ７，０）　　１．５　ｍｌ
を加え、更に実施例１で得た２１０部分の平均分子量１
．０００のポリプロピレングリコール−４−クロロ−６
−ヒドロキシ−１，６゜５−トリアジンのジオキサン溶
１（１ｏ。

岬／ｒｎ１．）α０５−を加え、氷冷下６時間反応させ
た。反応終了後、反応液を透析チー−プに移して透析し
過剰の試薬を除去した。透析は、水冷下、Ｑ、１Ｍリン
酸バッファー（ｐＨ７，２）で４時間透析し、内容物を
リン酸バッファーで５−にメスアップし、−８０℃にて
凍結保存した。得られたボリグロビレングリコールー４
−クロロ−６−ヒドロキシ−１，３，５−トリアジン修
飾ウロキナーゼはフィブリン平板法によるウロキナーゼ
活性測定で、原料のウロキナーゼに比較して９６．４　
％の活性を保持していた。

また、同様にＰｐＧ部分の平均分子量 ｉ、　ｏ　ｏ　ｏのポリプロビレ／グリコール−４−ク
ロロ−６−ヒドロキシ−１，３，５−）リアジンのジオ
キサン溶液（１００ｍｇ／ｍｌ　）をそれぞれＱ、１−
１［１，２ｍｌを使用することにょ９修飾度の異ったポ
リプロピレングリコール−４−クロロ−６−ヒドロキシ
−１，３，５−トリアジン修飾ウロキナーゼを得た。こ
れらは、それぞれ原料の無修蕃ウロキナーゼに比較して
９９６％、１０／ｌＬ８％の活性を示した。

実施例４゜ ポリフロピレンゲリコール−４−クロロ−６−ヒドロキ
シ−ｉ、３．５−トリアジン修飾ウロキナーゼ： 実施例２で得たＰＰ０部分の平均分子量４、ｏｏｏｏボ
リグロピレンクリコールー４−クロロー６−ヒドロキシ
−？、’３．５−）リアジン′のジオキサン溶液（４０
０１！ｖｍ７！　）０．０５ｄ、Ｑ、１−１０．２−を
用いて、実施例３と全く同様の操作にて各修飾度のポリ
プロピレングリコール−４−クロロ−６−ヒドロキシ−
１，３，５−トリアジン修飾ウロキナーゼを得た。その
フィブリン平板法によるウロキナーゼ活性は、原料のウ
ロキナーゼに対して、それぞれ８９．７％、１０Ｑ、０
チ、９８．９％を示した。

実施例＆ 凍結乾燥注射剤： 実施例５で得られたポリプロピレングリコール−４−ク
ロロ−６−ヒドロキシ−１，６゜５−トリアジン修飾ウ
ロキナーゼ（４ｍＭ　　で修飾したもの）を分子ふるい
膜（アミコンゲル■）により濃縮し、生理食塩水および
［１，０５Ｍ　＋）　／酸バッファーを加えた。これを
メンブランフィルタ−を用いて無菌的に濾過した。涙液
を滅菌済のバイアル瓶に分注し、凍結乾燥した。以上の
如くして得られたポリプロピレングリコール−４−クロ
ロ−６−ヒドロキシ−１，３，５−修飾ウロキナーゼ（
４ｍＭで修飾したものンの凍結乾燥注射剤のフィブリン
平板法による線溶活性は ６５、０００１ｕ／Ｑつ′バイアルであった。

実施例＆ 凍結乾燥注射剤： 実施例４で得られたポリプロピレングリコール−４−ク
ロロ−６−ヒドロキシ−１，６゜５−トリアジン修飾ウ
ロキナーゼ（２ｍＭで修飾したもの）を分子ふるい膜（
アミコンゲル■）により濃縮し、生理食塩水を加えた。

これをメンブランフィルタ−を用いて無菌的に濾過した
０戸液を滅菌済のバイアル瓶に分注し、凍結乾燥した。

以上の如くして得られたｔ”　リフロピレングリコール
ー４−クロロ−６−ヒドロキシ−１，３，５−トリアジ
ン修飾ウロキナーゼ（２ｍＭ　で修飾したもの）の凍結
乾燥注射剤のフィブリン平板法にょる線溶活性は６８．
０００　ｉｕ／＋＋＋７！／バイアルであった。

【図面の簡単な説明】

第１図は、ＰＰＧ−ＵＫのアミダーゼ活性のｐＨ依存性
を示す。横軸はｐＨを、たて軸は相対活性（４１０ｎｍ
における吸光度）を示す。 以　　　上

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）人由来で抗原性のないプラスミノーゲンアクチベ
   ータのアミノ酸側鎖に、カップリング剤を介して、分子
   量２００〜２０，０００のポリプロピレングリコールが
   結合してなる新規プラスミノーゲンアクチベータ誘導体
   。 （２）人由来で抗原性のないグラスミノーゲンアクチベ
   ータがウロキナーゼである特許請求の範囲第１項記載の
   新規グラスミノーゲンアクチベータ誘導体。 （６）　　カップリング剤がハロゲン化シアヌルである
   特許請求の範囲第１項または第２項記載の新規プラスミ
   ノーゲンアクチベータ誘導体。 （４）　　ポリプロピレングリコールの分子量が１、０
   ００〜１０，０００である特許請求の範囲第１項〜第３
   項のいずれかの項記載の新規グラスミノーゲンアクチベ
   ータ誘導体。 （５）分子量２００〜２０，０００のポリプロピレング
   リコールとカップリング剤の結′合物を、人由来で抗原
   性のないプラスミノーゲンアクチベータと反応させるこ
   とを特徴とする、人由来で抗原性のないプラスミノーゲ
   ンアクチベータのアミノ酸側鎖にカップリング剤を介し
   て、分子量２００〜２０，０００のポリプロピレングリ
   コールが結合してなる新規グラスミノーゲンアクチベー
   タ誘導体の製造法。 （６）　　プラスミノーゲンアクチベータの生理活性が
   失なわれない条件下で反応させることを特徴とする特許
   請求の範囲第５項記載の新規プラスミノーゲンアクチベ
   ータ誘導体の製造法。 （７）人由来で抗原性のなりプヲスミノーゲンアクチベ
   ータのアミノ酸側鎖に、カップリング剤を介して、分子
   量２００〜２Ｑ、ＯＯＤ有してなる血栓溶解剤。 （８）人由来で抗原性のないプラスミノーゲンアクチベ
   ータのアミノ酸側鎖に、カンプリング剤を介して、分子
   量２００〜２０，０００のポリプロピレングリコールが
   結合してなる新規プラスミノーゲンアクチベータ誘導体
   を含有してなる血栓形成阻止剤。