JPS59230160A - ビリルビン分析素子 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、分析素子、特に流体中のあらかじめ定められ
た特定成分を分析するだめの分析素子に関し、更に詳し
くは生物学的流体試料中のビリルビンを分析するだめの
乾式分析素子に関する。

〔従来技術〕

従来、流体試料中の検体成分を分析する方法に関しては
多数開発がなされてきたが、それらは大別して、溶液内
で反応が行われる反応系と同相担体内で行われる反応系
の二種類に分けることができる。溶液系における分析反
応（以下ウェット・ケミストリイーと略す）は用手法と
呼ばれる全く機械を用いない分析方法から自動分析機器
まで幅広く知られている。特に臨床化学の分野において
はその進歩が著しく、近年種種の臨床検査用自動定量分
析機器が病院の臨床検査室に導入されている。

しかしながら、上述の方法は基本的に水溶液の形で反応
を行わせるために種種の欠点を有している。すなわち、
その分析過程で大量の水、特に精製された純水あるいは
蒸留水を必要とすることからエネルギー消費の増大を招
くことは必然であシ、また種種の自動分析Φ器はそれ自
体著しい高価であシ、且つその操作に多大の熟練を必要
とし、ばく大な時間と労力を必要とするばかシでなく、
その廃液は必然的に環境汚染を引起すという欠点を内包
している。

これに対して固相の分析反応（以下、ドライ・ケミスト
リイーと略すンを用いる分析法も広範に用いられている
が、これらは１紙等に試薬を含浸させた形で提供される
。

上記の１紙は、例えば米国特許第５，０５０，５７５号
あるいは同第３，０６　Ｌ５２５号各明細書等に記載さ
れているように１紙のごとき吸水性繊維質担体に試薬溶
液を含浸させ、乾燥させて作られるものでおる。これら
は一般に分析試験紙又は単に試験片と呼称されるもので
、上記の試験片上に流体試料を滴下するか、又は流体試
料中へ試験片を浸漬させ試験片の色変化又は濃度変化を
肉眼判定か、又は反射濃度計によシ測定し、流体試料中
の特定成分の濃度レベルを決定するものである。

これらの試験片は、その取扱いが簡便であり、且つ直ち
に結果が得られるので有用ではあるが、その構成上から
半定量又は定性分析の領域にとどまっている。

一方、上述のごとき従来の分析方法に対して操作性の簡
便なドライ・ケミストリイーを用い、その上高い定量性
を有する多層分析素子が知られている。例えば特公昭５
５−２１６７７号、特開昭５５−１６４５５６号、同５
７−１２５８４７号、同５７−１９７４６６号、及び同
５８−９０１６７号明細書等に上記多層分析素子が記載
されている。

上記各明細書によれば分析反応に用いられる一切の試薬
類を一枚の分析素子中に含有すると共に血清又は全゛血
液を一定容量上記素子上に滴下し、一定時間一定温度に
保温した後、支持体側から反射濃度測定を行い反射濃度
から物質濃度を決定することが可能である。

上記方法は従来の試験紙型のものに対して飛躍的な分析
精度を有し、且つ試薬をあらかじめ調整することなく用
いられウェット・ケミストリイーと同等以上の性能を有
するものである。

このような分析素子を用いてビリルビンを分析するだめ
の方法がいくつか開示されている。

例えば特開昭５５−８９７９６号明細書には、媒染剤組
成物を用いることによシビリルビンを媒染し、吸収波長
をシントさせ、分子吸光係数を５０−以上上昇させて分
光測定を行いビリルビンを定量する方法が記載されてい
る。また、特開昭５３−８９７９７号明細書には、ビリ
ルビンがアルブミンなどと強固に結合する性質を利用し
て、あらかじめ色素とアルブミンの錯体を親水性バイン
ダ一層の上に配置しておき、試料溶液中に含まれる遊離
のビリルビンによって錯体を形成している色素分子が置
換され、放出された色素を分光測定する原理により、ビ
リルビンを定量する方法が記載されている。更に、また
、特開昭５７−３７２６２号明細書には、疎水性アミン
を含む疎水性ビリルビン抽出組成物を用いてビリルビン
を抽出し、分光測定によシビリルビンを定量する方法が
記載されている。

しかしながら、これら各明細書に記載の分析素子は、い
ずれも定量感度の点で必ずしも満足できるものとは言い
難い。

〔発明の目的〕

本発明の目的は、定量感度及び測定精度に優れ、且つ操
作も簡単なビリルビン測定用分析素子を提供することに
ある。

〔発明の構成〕

本発明者等は鋭意検討を重ねた結果、下記構成を有する
分析素子を用いることによシ、上記欠点を克服すること
ができた。

すなわち本発明を概説すれば、本発明はビリルビン分析
素子に関する発明であって、支持体上に、少なくとも試
薬層及びその上方に展開層を設けた分析素子において、
該試薬層にジアゾニウム塩及び重合体酸物質を含有させ
、更に該試薬層及び／又は展開層に非イオン系界面活性
剤を含有させたことを特徴とする。

本発明の分析素子で使用する重合体酸物質の例としては
、共重合可能なエチレン性不飽和酸の単量体単位を少な
くとも５重量％以上含む重合体で、平均分子量が＋、０
００〜１００万、好ましくは２，０００〜５０万のもの
を含むものがある。

前記した共重合可能なエチレン性不飽和酸の単量体とし
て本発明において好ましいものは、少なくとも１つのカ
ルボキシル基、スルホ基若しくはホスホノ基を有するも
のである。カルボキシル基若しくはスルホ基を有するも
のの中でも好ましいのは、１又は２個のカルボキシル基
若しくはスルホ基を有するものであり、特に下記一般式
（１）によ勺表わされる単量体が好ましい。

一般式（１） 式中、Ｒ１はカルボキシル基、スルホ基又はカルボキシ
ル基、スルホ基を有する基を、Ｒ１は水素原子又はアル
キル基を、Ｒ３は水素原子又はアルコキシカルボニル基
を表わす。

Ｒ１におけるカルボキシル基、スルホ基を有する基とし
て好ましいのは、スルホフェニル基、スルホアルキルオ
キシカルボニル基（このアルキル基は炭素原子数１〜４
のものが好ましいへスルホアルキルカルバモイル基（こ
のアルキル基は炭素原子数１〜５のものが好ましい）で
ある。

Ｒ２におけるアルキル基は置換基を有してもよく、好ま
しい置換基としては、アルコキシカルボニル基、カルボ
キシル基を挙げることができる。好ましいアルキル基と
しては、メチル基、炭素原子数１〜４のアルコキシ基を
含むアルコキシカルボニルメチル基、カルボキシメチル
基が挙げられる。

Ｒ３として表わされるアルコキシカルボニル基としては
、炭素原子数２〜５のものが好ましい。

一般式（Ｊ）により表わされる単量体としては、例えば
アクリル酸、メタクリル酸、イタコン酸、イタコン酸モ
ノアルキルエステル（好ましくは炭素原子数１〜４のア
ルキルエステル、例えばイタコン酸モノメチル、イタコ
ン酸モノブチル］、マレイン酸モノエステル（好ましく
は、炭素原子数１〜４のアルキルエステル、例えばマレ
イン酸モノメチル、マレイン酸モノプチルン、スチレン
スルホン酸、アクリロイルオキシアルカンスルホン酸（
例えばアクリロイルオキシプロパンスルホン酸、アクリ
ロイルオキシエタンスルホン酸ン、メタクリロイルオキ
シアルカンスルホン酸（例えばメタクリロイルオキシプ
ロパンスルホン酸、メタクリロイルオキシブタンスルホ
ン酸ン、アクリルアミドアルカンスルホン酸（例えば２
−アクリルアミド−２−メチルエタンスルホン酸、２−
アクリルアミド−２−メチルプロパンスルホン酸、２−
アクリルアミド−２−メチルブタンスルホン酸）、メタ
クリルアミドアルカンスルホン酸（例えば２−メタクリ
ルアミド−２−メチルエタンスルホン酸ンヲ挙げること
ができる。

前記の共重合可能なエチレン性不飽和酸の単量体のうち
、ホスホノ基を有する単量体の中でも好ましいのは、１
個のホスホノ基を有するものであ夛特に下記一般式（Ｉ
Ｉ）で示されるものである。

一般式（Ｉｔ） 〔式中、Ｒ４は水素原子又はメチル基を、Ｒ５は炭素原
子数２〜１０の脂肪族炭化水素基又は、−（Ｒ，−０す
ｍＲ７−を表わし、Ｒ７は炭素原子数２〜６の脂肪族炭
化水素基を表わし、Ｒ６は水素原子、アルカリ金属又は
−ＮＨ４基を表わし、ｍは１〜５の整数である。〕 Ｒ，又はＲ７により表わされる脂肪族炭化水素基として
はアルキレン基が好ましく、このアルキレン基は分岐で
もよいし、また塩素原子のごときハロゲン原子、エトキ
シ基のごとき低級アルコキシ基、フェニル基のごときア
リール基を置換基として有していてもよい。

一般式（ｎ）で示される単量体の例としては、例えば、
２−アクリロイルオキシエチルホスフェート、１−メチ
ル−２−アクリロイルオキシエチルホスフェート、２−
７クリロイルオキシエトキシエチルホスフェート、４−
アクリロイルオキシブチルホスフェート、２−メタクリ
ロイルオキシエチルホスフェート、１−メチル−２−メ
タクリロイルオキシエチルホスフェート、１−クロロメ
チル−２−メタクリロイルオキシエチルホスフェート、
２−メタクリロイルオキシエトキシエチルホス７エート
、４−メタクリロイルオキシブチルホスフェートを挙げ
）ことができる。

前記重合体酸物質を構成するエチレン性不飽和酸単量体
は、単独で、又は二種以上を共重合させて更には他の共
重合可能なエチレン性不飽和単量体と共重合させること
も可能である。

本発明で使用する重合体酸物質を構成する他の共重合可
能なエチレン性不飽和単量体として好ましいものとして
は、エチレン性不飽和ニトリル類、スチレン類、エチレ
ン性不飽和酸エステル類、エチレン性不飽和酸アミド類
、共役ジエン類、ビニル異部環化合物、架橋性単量体を
挙げることができる。

エチレン性不飽和ニトリル類としては、下記一般式ＣＩ
［］で示されるものを、好ましいものとして挙けること
ができる。

一般式（ｆｆｌ） 〔式中、Ｒａ　　及びＲ９は水素原子又は）・ロゲン原
子を、Ｒｌｏは水素原子、ノ・ロゲン原子、アルキル基
、アルコキシ基、アシルオキシ基、アリール基、シアノ
基又はカルノくモイル基を表わす。〕 Ｒ８及びＲ９として好ましいものは、水素原子及びフッ
素原子であシ、特に水素原子が好ましい。ＲＩＯとして
宍わされるノ・ログン原子としては、フッ素原子、塩素
原子、臭素原子を挙げることができる。Ｒ１（ｉとして
表わされるアルキル基としては、炭素原子数１〜５の低
級アルキル基が好ましく、例えばメチル基、トリフルオ
ロメチル基、エチル基、１ｓｏ−プロピル基、ｎ−プロ
ピル基、ｎ−ペンチル基を挙げることができる。ＲＩＯ
として表わされるアルコキシ基としては炭素原子数１〜
３のものが好ましく、例えばメトキシ基を挙げることが
できる。Ｒｓｅ　として表わされるアシルオキシ基とし
ては、炭素原子数２〜４のアルキルカルボニルオキシ基
が好ましく、例えばアセトキシ基を挙げることができる
。ＲＩＧ　として表わされるアリール基としては、フェ
ニル基（このフェニル基は置換基としてシアノ基、塩素
原子のごとき〕・ロゲン原子、メチル基のごとき低級ア
ルキル基、メトキシ基のごとき低級アルコキシ基を有し
ていてもよい）が好ましく、例えばフェニル基、メトキ
シフェニル基、メチルフェニル基、クロロフェニル基、
シアノフェニル基を挙げることができる。ＲＩＯの中で
も好ましいのは、水素原子　／％ロゲン原子又はアルキ
ル基であシ、水素原子が特に好ましい。

一般式（１）により示される具体的な単量体としては、
以下のものを挙げることができる。

アクリロニトリル、メタクリロニトリル、α−クロロア
クリロニトリル、α−ブロモアクリロニトリル、α−フ
ルオロ７りＩＪＯニドＩＪ／ｌ／、α−クロロ−β−ジ
フルオロ−アクリロニトリル、σ−トリフルオロメチル
アクリロニトリル、α−エチルアクリロニトリル、α−
イングロピルアクリμニトリル、α−ｎ−プロピルアク
リロニトリル、α−ｎ−ペンチルアクリロニトリル、α
−メトキンアクリロニトリル、α−アセトキシアクリロ
ニトリル、α−フェニルアクリロニトリル、α−シアン
フェニルアクリロニトリル、α−クロロフェニルアクリ
ロニトリル、α−メチルフェニルアクリロニトリル、α
−メトキシフェニルアクリロニトリル及びシアノ化ビニ
リデン。

スチレン類としては、下に一般式〔１ｖ〕で示されるも
のを好ましいものとして挙げることができる。

一般式〔■■ Ｃ式中、Ｒ１１は水素原子、ハロゲン原子又はアルキル
基を表わし、Ｆｉｎは水素原子、ハロゲン原子、アルキ
ル基、アルコキシ基、シクロアルキル基、アルコキシカ
ルボニル基、アシルオキシアルキル基を表わし、ｎは１
〜５の整数である。〕 ＲＨで表わされるアルキル基としては、炭素原子数１又
は２のものが好ましい。

Ｒ１２で表わされるアルキル基としては、炭素原子数１
〜６のものが、アルコキシ基としては、炭素原子数１〜
４のものが、シクロアルキル基としては炭素原子数５又
は６のものが、アルコキシカルボニル基のアルキル基と
しては、炭素原子数１又は２のものが、アシルオキシア
ルキル基のアシル基としては、炭素原子数２又は３のも
のが、アシルオキシアルキル基のアルキル基としては、
炭素原子数１又は２のものが好ましい。ｎは、好ましく
は１又は２である。

一般式（ＩＶ）で示されるスチレン類の具体的なものと
しては、次のものが挙げられる。

スチレン、ｐ−メチルスチレン、α−メチルスチレン、
ｐ−クロロスチレン、ｐ−クロロメチルスチレン、ｍ−
クロロメチルスチレン、ｍ−メチルスチレン、ｍ−エチ
ルスチレン、Ｐ−エチルスチレン、２，５−ジメチルス
チレン、３゜４−ジメチルスチレン、３，５−ジエチル
スチレン、ｍ　−１ｓｏ−プロピルスチレン、ｐ　−１
８０−プロピルスチレン、ｐ−ブチルスチレン、ｍ−ｔ
−ブチルスチレン、ｐ−へキシルスチレン、ｐ−シクロ
へキシルスチレン、ｍ−メトキシスチレン、４−メトキ
シ−３−メチルスチレン、ｐ−エチルスチレン、３，４
−ジメトキシスチレン、ｍ−クロロスチレン、５．４−
ジクロロスチレン、３．５−ジクロロスチレン、ｍ−ブ
ロモスチレン、ｐ−ブロモスチレン、５．５−ジプロモ
スチレン、４−フルオロ−３−トリフルオロメチルスチ
レン、２−ブロモー４−トリフルオロメチルスチレン、
ｐ−メトキシカルボニルスチレン、ｐ−ア七トキシメチ
−ルスチレ／。

エチレン性不飽和酸エステル類としては、エチレン性不
飽和カルボン酸エステル類が好ましく、特に下記一般式
〔Ｖ〕で示されるものが好ましい。

一般式（Ｖ） 〔式中、ＲＩｓ　は水素原子又はメチル基を表わし、Ｒ
１４はアルキル基又はフェニル基を表わす。〕該アルキ
ル基としては、炭素原子数１〜８のもの、特に１〜４の
ものが好ましい。

一般式（Ｖ）で示されるものとしては例えば次のものが
挙げられる。

アクリル酸メチル、アクリル酸エチル、アクリル酸−ｎ
−ブチル、アクリル酸−ｎ−プロピル、アクリル酸−１
日Ｏ−ブチル、アクリル酸−５ｅｃ−ブチル、アクリル
酸−２−ヒドロキシ血チル、アクリル酸−２−ヒドロキ
シプロピル、アクリル酸−２−エチルヘキシル、アクリ
ル酸ヘキシル、アクリル酸−２−フェノキシエチル、ア
クリル酸−２−クロロエチル、アクリル酸−ジメチルア
ミノエチル、アクリル酸ベンジル、アクリル酸シクロヘ
キシル、アクリル酸フェニル、アクリル酸−２−ヒドロ
キシプロピル、アクリル酸テトラヒドロンルフリル、ア
クリル酸−２，６−シヒドロキシグロビル、メタクリル
酸メチル、メタクリル酸エチル、メタクリル酸−ｎ−ブ
チル、メタクリル酸プロピル、メタクリル酸−２−ヒト
日キシエチル、メタクリル酸−２−ヒドロキシプロピル
、メタクリル酸−ｉｓ。

−ブチル、メタクリル酸アセトキシエチル、メタクリル
酸ジメチルアミノエチル、メタクリル酸クロロベンジル
、メタクリル酸オクチル、メタクリル酸フルフリル、メ
タクリル酸フェニルを挙げる仁とができる。

共重合可能な共役ジエン単体として本発明において好ま
しいのは、下記一般式（Ｖｌ）により表わされる単量体
である。

一般式〔■１〕 〔式中、ＲＩＩＳ〜Ｒｇｏはそれぞれ水素原子、）１０
ゲン原子、アルキル基、アリール基、シアノ基又は−Ｃ
！ＯＯＲ，、基（ｌｌ　はアルキル基を表わす）を表わ
す。〕 Ｒ□〜Ｒ２゜とじて表わされるハロゲン原子として好ま
しいのは、塩素原子又は臭素原子である。

Ｒ１１〜Ｒ１１で表わされるアルキル基は好ましくは低
級アルキル基であシ、特に炭素原子数１〜４の低級アル
キル基が好ましい。その中でもメチル基が特に好ましい
。また、Ｒ１！ｉ　”　Ｒ２１で表わされるアルキル基
は置換基を有してもよいが、好寸しくは無置換のもので
ある。

ＲｌＢ　”Ｒ２Ｏで表わされるアリール基として好まし
いのはフェニル基であり、該フェニル基は置換基を有し
てもよい。好ましい置換基としては、ハロゲン原子（好
ましくは塩素原子、臭素原子ファルキル基（好ましくは
炭素原子数１〜５のものであシ、特にメチル基が好まし
い）を挙げることができる。

以上Ｆｊｔｓ　、＋ｙ　Ｒ１（１として各種の原子及び
基を挙げたが、その中でも好ましいのけ水素原子、）・
ロゲン原子又はアルキル基である。

また、前記一般式（Ｖｌ　）により表わされる単量体の
全炭素原子数については、好ましいのは４〜１２のもの
であり、更に好ましくは４〜９、特に好ましくは４〜６
のものである。まだ、Ｒｓｓ〜Ｒｇｏの少なくとも２つ
旨水素原子であることが好ましい。

一般式〔Ｖ１〕によジ表わされる単量体の例としては以
下のものを挙げることができる。

１．３−ブタジェン、アルキル（好ましくけ炭素原子数
１〜４の低級アルキルλ置換１，３−ブタジェン（例え
ば、イソグレン、１，３−ペンタジェン、２−エチル−
１，３−ブタジェン、２−ｎ−プロピル−１，３−ブタ
ジェン、２−ｎ−ブチル−１，５−ブタジェン、２，３
−ジメチル−１゜３−ブタジェン、２−メチル−１，５
−ペンタジェン、４−メチル−１，５−ペンタジェン等
ン、アリール（好ましくはフェニル）置換１．５−ブタ
ジェン（例えば１−フェニル−１，５−ブタジェン、２
−フェニル−１，５−ブタジェン、１−（ｐ−クロロフ
ェニル）−１，３−ブタジェン、１−フェニル−２−カ
ルボメトキシ−１，５−ブタジェン、２−ｐ−）ジル−
１，３−ブタジエフ等フ、ハロゲン（好ましくは塩素、
臭素］置換１．３−ブタジェン（例えば、１−クロロ−
１，３−ブタジェン、２−り四ロー１，３−ブタジェン
、１−プルモー１，３−ブタジエン、２−プロモー１．
３−ブタジェン、１，１−ジクロ目−１，３−ブタジェ
ン、２．５−ジクロロ−１，５−ブタジェン、２．５−
ジブロモ−１，５−ブタジェン、１．１．２−トリクロ
ロ−１，３−ブタジェン、＋、　１．２．３−テトラク
ロロ−１，３−ブタジェン等）、シアノ置換１，３−ブ
タジェン（例工ば１−シア／−１，５−ブタジェン、２
−シアノ−１，３−ブタジェン等］が挙げられる。

エチレン性不飽和酸アミド類としては、アクリルアミド
、メタクリルアミドを挙げることができる。アクリルア
ミド類としては、例えばアクリルアミド、ジアセトンア
クリルアミド、メチロールアクリルアミド、メチルアク
リルアミドを挙げることができる。

メタ文クリルアミド類としては、例えばメタ黴クリルア
ミド、ベンジルメタＶクリルアミドを挙げることができ
る。

ビニル異部環化合物としては、例えばＮ−ビニルピロリ
ドン、Ｎ−ビニルイミダゾール、ビニルピリジン類（例
えば、４−ビニルピリジン、２−ビニルピリジン等ンを
挙げることができる。

架橋性単量体としては、例えばジビニルベンゼン、エチ
レングリコールジメタ太クリレート、トリメチロールプ
ロパントリアクリレート、ペンタエリトリットトリメタ
文りリレートを挙げることができる。

本発明で使用する重合体酸物質を構成するエチレン性不
飽和酸単量体又はエチレン性不飽和酸単量体及び他のエ
チレン性不飽和単量体からなる重合体は前述の種種の単
量体を組合せることにより容易に得られるが、好ましく
はエチレン性不飽和酸単量体を約５重量Ｓ〜１００重量
％、他のエチレン性不飽和単量体をＯ重量係〜約９５重
量係を有する重合体であシ、更に好ましくはエチレン性
不飽和酸単量体を約８重量％〜１００重量％、他のエチ
レン性不飽和酸単量体を０重量−〜約９２重量％である
。

次に本発明で使用する重合体酸物質の具体例を示すが、
本発明はこれらによって何ら限定されるものではない。

例示重合体酸 ＋１１　　ポリアクリル酸 （２）　　ポリメタクリル酸 （３）　　イタコン酸−スチレン共重合体（重量％　５
０：５０） （４）　　アクリル酸−アクリル酸ブチル共重合体（重
量％　　　７５：２５） （５）　　アクリル酸−塩化ビニリデン共重合体（重量
％　８０：２０） （６）　　エチレン−マレイン酸モノブチル共重合体（
重量％　ｓｏ：５ｏ） （７）　　スチレン−マレイン酸モツプチル共重合体（
重量％　５０：５０） （８）　　マレイン酸モノブチル−メチルエチルケトｙ
共重合体 （重量％　５０：５０） （９）　　マレイン酸モノブチル−イソブチレン共重合
体 （重量％　ｓｏ：ｓｏ） ａＱ　メタクリル酸−ジビニルベンゼン（重量％　９８
：　　２） （ＩＥＩ　　アクリル酸−スチレン−ジビニルベンゼン
（重量％　９０：８：　２） （６）　ポリスチレンスルホン酸 （２）　ポリアクリルアミド−２−メチルエタンスルホ
ン酸 θ◆　ポリメタクリロイルオキシプロパンスルホン酸 四　スチレンスルホン酸−スチレン共重合体（重量％　
８０：２０） ａＱ　　スチレンスルホン酸−ジビニルベンゼン共重合
体 （重量％　９０：１０） ０乃　アクリルアミド−２−メチルエタンスルホン酸−
アクリル酸ブチル−スチレン共重合体（重量％　＋５：
８０：５） （至）　メタクリロイルオキシプロパンスルホン酸−２
，３−ジメチル−１，５−ブタジェン−アクリロニトリ
ル共重合体 （重量％　　Ｂニア５：１７） α呻　スチレンスルホン酸−塩化ビニリデン（重量％　
７５：２５） に）　メタクリロイルオキシプロパンスルホン酸−メタ
クリル酸メチル （重量％　５０：５０） Ｑυ　ポリ２−アクリロイルオキシエチルホスフェート ＠　ポリ２−メタクリロイルオキシエチルホスフェート １２１２−アクリロイルオキシエチルホスフェート−ア
クリル酸メチル共重合体 （重量％　８０：２０） Ｇ！４）　　４−メタクリロイルオキシブチルホスフェ
ート−スチレン−ジビニルベンゼン共重合体（重量％　
５０：４５：５） （ハ）　２−メタクリロイルオキシエトキシエチルホス
フェート−アクリル酸エチル−アクリロニトリル共重合
体 （重量％　１５ニアＱ：１５） （１）　２−アクリルアミド−２−メチルプロパンスル
ホン酸〜アクリル酸ブチル共重合体（重量％　　５０：
５０） ＠　２−アクリルアミド−２−メチルプロパンスルホン
酸−アクリル酸アミド共重合体く重量％　７５：２５Ｊ 更に市販の強酸及び弱酸性カチオンイオン交換樹脂も用
いることができる。例えばアンバーライト１５、アンバ
ーライトＣＧ−５０、アンバー２イトエＲｅ　−５０（
商品名、ロームアンドハース社Ｍ）を挙げることができ
る。これらの樹脂をそのまま、あるいは粉砕して用いる
ことができる。

上記の重合体酸物質は、通常のラジカル重合、例えば溶
液重合、乳化重合、懸濁重合等を適宜用いることによシ
容易に合成することが可能である。また酸部分を高分子
反応によって導入又は変換することも可能である。

本発明で使用する重合体酸物質は、−流体試料中のどリ
ルビンとジアゾニウム塩とのカップリング反応に適当な
ｐＨとする量存在すればよく、通常流体試料適用時に層
内のｐｌ（が約０．１〜約４になる程度に存在すれば良
い。

本発明で使用するジアゾニウム塩の例とじては、ｐ−二
トロベンゼンジアゾニウム！、２．５−ジクロロベンゼ
ンジアゾニウム塩等が挙げられるが、中でもｐ−ニトロ
ベンゼンジアゾエラ＼ 酸塩は、ビリルビンの識別能が高い点で好適なものであ
る。

また、塩としては、テトラフルオロはう酸塩及びヘキサ
フルオロシん酸塩が好適なものである。

ジアゾニウム塩は広範に選択された量を用いることが可
能であるが、０．５〜２００ミリモル／ｍ２、好ましく
は２〜５０ミリモル／−２の範囲で用いることができる
。

本発明で使用する非イオン系界面活性剤はビリルビンと
ジアゾニウム塩との反応を促進させるために用いられ、
例えばアルキルフェノキシポリエトキシエタノール（別
名ポリエチレングリコールのアルキルフェニルモノエー
テル）カ挙げられる。特に分子中に５〜４０個のエチレ
ンオキシド単位を有するインオクチルフェノキシポリエ
トキシエタノールが好ましく、この種のものは、例えば
ロームアンドハース社からトライトンＸ−１００又はト
ライトンＸ−４０５として市販されている。非イオン系
界面活性剤は広範に選択された量を用いることが可能で
あるが、５　ｍＷ　〜５０　ｆ　／　ｍｊ　、好ましく
は０．５２〜２０９７ｍ”　　の範囲で用いることがで
きる。

本発明に係る展開層は、（１）一定容量の流体試料を単
位面積当シ一定容量を試薬層に均一に配布する機能を有
するものである。その上、更に、特公昭５３−２１６７
７号明細書に記載された性能、すなわち（２）流体試料
中の分析反応を阻害する物質又は要因を除去する機能、
及び／又は（３）分光光度分析を行うときに支持体を経
て透過する測定光を反射するバックグランド作用を行う
機能を有するものであれば好ましい。したがって、本発
明に係る展開層は、上記（１）の機能のみを有する層、
（１１に加えて（２）及び／又は（３）の機能を併せて
有する層のいずれかとすることができ、あるいは、（１
）を包含する複数の機能を適宜分離し、各機能ごとに別
の層を使用することも可能である。更に（１）、（２）
及び（３）の機能のうち、２つの機能を有する層と、残
りの１つの機能を有する層を組合せて使用することもで
きる。例えば、前述の特公昭５５−２１６７７号公報に
記載された二酸化チタン及び二酢酸セルロースから成る
プラッシュポリマーと呼称される非繊維多孔質媒体の展
開層、特開昭５５−　＋６４５５６号明細書に記載され
た親水化処理した織物の展開層、特開昭５７−９４６５
８号、同５７−１２５８４７号、同５７−１９７４６６
号及び同５Ｂ−７０１６１号等の各明細書に記載された
繊維構造展開層、特開１１ｇ５８−９０１６７号明細書
に記載された粒子結合体構造展開層が挙げられる。特に
、上記繊維構造展開層及び粒子結合体構造展開層は、血
球部分も速やかに移送することが可能な素材として特に
有用である。

本発明の分析素子における展開層の膜厚は、その空隙率
によって決定されるべきであるが、好ましくは約１００
〜約５００μｍ１更に好ましくは約１５０〜５５０μｍ
である。また、空隙率は好ましくは約２０〜約８５チで
゛ある。

本発明に係る試薬層とは、該層に分析すべき検体成分で
あるビリルビンと定量反応を行わせる、あるいはその反
応に関与する試薬類を含有する層を意味するものであり
、親水性コロイド若しくは、有機溶媒に可溶性の高分子
物質を媒体とした層が好適である。

上記試薬層に含有させる試薬類としては、前記のジアゾ
ニウム塩及び重合体酸物質が必須なものとして挙げられ
る。更に１上記試薬層には、前記の非イオン系界面活性
剤及び必要に応じて、他の添加剤（例えば硬膜剤、保恒
剤等）を加えることもできる。

上記試薬層は、１紙のごとき担体に試薬を含浸させる従
来のものとは異なシ、均一に試薬類を含有することが可
能であシ、且つ、試薬の含有量を自由にコントロールで
きるという利点を有している。このような本発明に係る
試薬層に用いられる親水性コロイド物質としては、天然
又は合成の高分子物質が好ましいが、更に好ましくは７
タル化ゼラチン等のゼラチン誘導体、アガロース、グル
ラン等の多糖類、カルボキシメチルセルロース、ヒドロ
キシエチルセルロース等のセルロース誘導体、ポリビニ
ルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリアクリルア
ミド、ポリメタクリルアミド又はこれらと他のビニル系
単量体との共重合体等が挙げられる。中でも、特にフタ
ル化ゼラチン、ポリアクリルアミド、ポリビニルピロリ
ドン、ポリビニルアルコール等が有利なものである。

これらの親水性コロイド物質は約１５０〜約５００チの
膨潤度を有することが好ましく、また、その膜厚は所望
に応じて選択することが可能であシ、少なくとも約５μ
ｍ以上であることが必要である。

有機溶媒に可溶性の高分子物、質としては、例えばポリ
スチレン類、ポリアクリル酸エステル類、ポリメタクリ
ル酸エステル類、メチルセルロース、エチルセルロース
等のアルキルセルロース類、ポリビニルアルコール、ポ
リビニルカーボネート等を挙げることができる。

更に、本発明で使用する重合体酸物質を、そのままバイ
ンダーとして用いることも可能である。

上記試薬層には、使用する試薬の特性に応じ　−て、直
接分散法等の分散法及び溶解等により、試薬を含有させ
ることができる。

本発明に係る支持体は、従来公知のものでよく、好適な
ものには、液体不浸透性で、且つ光透過性のものがあり
、例えば酢酸セルロース、ポリエチレンテレフタレート
、ポリカーボネート、又はポリスチレンのような種種の
重合体材料が、この使用目的に適する。更には、上記重
合体材料のみならず、ガラスのごとき無機材料も同様に
用層ることが可能である。本発明に係る支持体の厚さは
任意であるが、好ましくは約５０〜約２５０μｍである
。また、本発明に係る支持体の観測側の一側面は、その
目的に応じて任意に加工することが可能である。更に試
薬層を積層する側の支持体面に、場合によっては光透過
性の下塗υ層を使用して試薬層と支持体との接着性を改
良することができる。

本発明の分析素子は、必要に応じて、例えば米国特許第
５，９９２，１５８号明細書記載の反射層、下塗シ層、
米国特許第４，０４２ｊ　３５号明細書記載の放射線ブ
ロッキング層、米国特許第４．０６６，４０５号明細書
記載のバリヤ一層、及び特開昭５５−９０８５９号明細
書記載のスカベンジャ一層等を任意に組合せて本発明の
目的に合わせた任意の構成とすることができる。

これら分析素子の種種の層は、本発明に係る支持体上に
所望の構成に従い、従来写真工業において公知のスライ
ドホッパー塗布法、押出し塗布法、浸漬塗布法等を適宜
選択して用い、順次積層することで任意の厚みの層を塗
設することができる。

以上のように構成された本発明の分析素子は、展開層側
から流体試料を供給した後、試薬層の分析反応を透明支
持体側又はその反対側から観察し、反射濃度を測定し、
得られた測定値を予め作製しておいた検量線にあてはめ
る事で未知ビリルビンの量を決定することができる。

本発明の分析素子に適用される流体試料の量は任意に定
めることができるが、好ましくは約５μｔから約５０μ
ｔであり、更に好ましくは５μｔから２０μｔである。

通常的１０μｔの流体試料を適用するのが好ましい。

本発明の分析素子は、全血液、血清及び血漿のいずれの
分析にも不都合なく用いることができる。更には尿、フ
ン便等の他の体液も不都合なく用いられる。全血液を用
いる場合には、必要に応じて検出のための放射線が血球
により妨害を受けるのを避けるだめに、前述の放射線ブ
ロッキング層又は他の反射層を設けることができる。

〔実施例〕

以下、実施例を挙げて本発明を更に具体的に説明するが
、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。

実施例１ 膜厚１８０μｍの透明な下引溝ポリエチレンテレフタレ
ート支持体上に表−■に示す組成の試薬層を一層又は二
層設け、次いで各試薬層上に下記の組成の展開層を設け
、表−Ｈに示す本発明の分析素子１〜７及び比較分析素
子１と２を作成した。

展開層（８−１） 粉末１紙（ｃ　）　　　　　　　　　　　　　９　ｊ、
Ｏ９７ｍ”（東洋１紙（株）６００メツシュ以上）スチ
レン−グリシジルメタクリレート共重合体　　　　１！
ＬＯり／ｆｎ”（重量比９：１） トライトンＸ　−＋　００　　　　　　　　　　　　　
　　　　　９．　Ｏ９７ｍ”表−■ 上記本発明の分析素子１〜７及び比較分析素子１と２に
対して、ビリルビン・コントロール（米国ディト社製ン
よシ調製した種種の異なった濃度のビリルビン標準液を
１０μを展開層上に滴下し、３７℃１０分間保温した後
、５４０ｎｍ　　での反射濃度を支持体側から測定し、
表−間の結果を得た。

表−■ 上記表−■の結果から明らかなように、本発明に係る重
合体酸物質を用いて作成した分析素子１〜７、特にｐ−
ニトロベンゼンジアゾニウム塩を用いた分析素子は、比
較の低分子酸物質を用いて作成した比較分析素子１及び
２に比し、ビリルビン濃度の差に対して良好な発色濃度
差を示し、識別能つまシ定量感度が高いことが判る。

実施例２ 膜厚１８０μｍの透明な不引済ポリエチレンテレフタレ
ート支持体上に表−ＩＶに示す組成の試薬層を設け、次
いで各試薬層上に下記の組成の展開層を設け、表−■に
示す本発明の分析素子８．９及び比較分析素子３．４を
作成した。

表−１■ 展開層（Ｓ−２ど” 二酸化チタン　　　　　　　　３０．０ｔ／ｍ”二酢酸
セルロース　　　　　　１７９／ｍ”骨畳　　特公昭５
５−２１６７７号明細書に記載されている方法に準じて
塗設。

表−■ 上記本発明の分析素子８．９及び比較分析素子５．４に
対して、実施例１と全く同様にして反射濃度を測定し、
表−Ｖｌの結果を得た。

表−■１ 上記表−Ｖｌの結果から明らかなように、本発明に係る
非イオン系界面活性剤を用いて作成した分析素子８．９
は、比較の界面活性剤を用いずに作成した比較分析素子
３及びカチオン性界面活性剤を用いて作成した比較分析
素子４に比し、ビリルビン濃度の差に対して良好な発色
濃度差を示し、ビリルビンとジアゾニウム塩との反応が
著しく促進されていることが判る。

〔発明の効果〕

以上詳細に説明したように、本発明の分析素子は、定量
感度及び測定精度に優れ、且つ操作も簡単なビリルビン
測定用分析素子である点で顕著な効果を有するものであ
る。

特許出願人　　小西六写真工業株式会社代理人　中　本
　　宏

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １、　支持体上に、少なくとも試薬層及びその上方に展
   開層を設けた分析素子において、該試薬層にジアゾニウ
   ム塩及び重合゛体酸物質を含有させ、更に該試薬層及び
   ／又は展開層に非イオン系界面活性剤を含有させたこと
   を特徴とするビリルビン分析素子。