JPS5930061A - 微量金属の比色定量方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は一般式ＣＩ）で示される２−ピリジルアゾアミ
ンフェノール誘導体又はその塩を発色剤とする亜鉛又は
ニッケルの比色定量方法に関する。

（式中、Ｘ、Ｙはハロゲン又は水素を、Ｒ１は水素又は
低級アルキル基、−ＣＯＯＨ、−８ｏ３Ｈ。

（ＣＲ２）ｎ　Ｓ　ＯｓＨ（ｎ　＝　１〜４　）を、Ｒ
２、Ｒ３は水素、低級アルキル基、　　（ＣＨｚ）ｎＳ
ＯｓＨ’（ｎ＝１−４）　。

４）を表わす。） 環境・衛−生上及び生化学的診断法に於て、微量金属の
定量は近年その重要性を増しつつある。

亜鉛は生体微量金属であり生体内に広く分布し成長に必
要な必須金属元素の１つである。最近腸亜鉛欠乏症など
で血清亜鉛濃度が低下することが報告され、これらの疾
患の診断、治療および予後の観察に匍清亜鉛測定の必要
性が望まれるようになってきた。

９方ニッケルは、桂ニッケル鉱をしてそれ自体の鉱石と
しても産出されるが、鉄や銅と化学的性質が類似してい
るのでこれらの金属中に不純物として混入している場合
が多く、大部分は鉄や銅を伴って産出される。

今日まで亜鉛、ニッケルの微量金属定量方法は、主に原
子吸光法、炎光々度法、比色定量法によっているが、多
数の検体を迅速に処理でき、特殊分析装置を必要としな
いという点からは比色定量法が有利である。

亜鉛の比色試薬としては、ジチゾン、ジンコン、ＰＡＮ
　（１−（２−ピリジルアゾ）−２−ナフトール）が主
に用いられ、ニッケルの比色法としては、ジメチルグリ
オキシム法、ジエチルジチオカルバミン酸法、東−（２
−ピリジルアゾ）−２−ナフトール（ＰＡＮ）法がある
が、いずれも特異性という点からは必ずしも完壁とはい
えず、鉄、銅、コバルトマンガンの妨害を除く為、シア
ン化合物や種々のマスキング剤を組合せて使用したり、
有機溶媒による抽出を必要としていた。

一方、前記一般式〔Ｉ〕で示される２−ピリジルアゾア
ミノフェノール誘導体又はその塩は近年開発された亜鉛
、ニッケルを主な測定対象物とする比色定量用試薬であ
り、分子吸光係数が７．０〜１３．３　Ｘ　１０’と極
めて高感度であるが、従来の比色定量性同様−鉄、銅、
コバルトにも感応するなど特定金属に対する特異性には
欠ける場合が多い。

従ってこれらは使用するにあたり、特定目的物以外の金
属を従来同様マスキングする必要がある。

通常この目的には、鉄のマスキング剤としてクエン酸塩
、縮合リン酸塩、フッ化ナトリウム、ニトリロ三酢酸、
銅のマスキング剤としてザリチルアルドキシム、２−メ
ルカプトベンゾチアゾール、ジチオカルボキシザルコシ
ン、ジチオカルボキシグリシン、コバルトのマスキング
剤としてジチオカルボキシザルコシン、２−メルカプト
ベンゾチアゾール、亜鉛のマスキング剤としてグリコー
ルエーテルジアミン四酢酸、ｐＨ８以下に於けるクエン
酸、酒石酸、縮合リン酸が用いられている。

しかるにこれらのマスキング剤の内には、目的物である
亜鉛又はニッケルをもマスクして感度低下をきだしたり
（例えば、亜鉛に於けるクエン酸、縮合リン酸、ニッケ
ルに於ける２−メルカプトベンゾチアゾール。）、又、
銅やコバルトのマスキング剤として使用ａれる部分構造
−５−Ｃ＝Ｓや−Ｓ　Ｈ基含有物質は調製後の安定性が
著しく悪かったり、又鉄３価を還元して１２価とする為
、鉄の発色促進剤となる場合もあり甚だ不都合である。

我々はこれらの欠点を改良すべく、安定性に優れ特定金
属のみに特異的に作用するマスキング剤について鋭意研
究し種々検索した結果−（Ｉ界面活性剤が特定金属のマ
スキング剤として多大な効果があることを見い出し本発
明を完成するに至った。

即ち、本発明は一般式〔■〕で示される２−ピリジルア
ゾアミノフェノール誘導体又はその塩を発色剤とする亜
鉛又はニッケルの比色定量方法に於て、マスキング剤と
して一種又は二種以上の界面活性剤を使用することを特
徴とする微量金属の比色定量方法である。

本発明で使用する界面活性剤は特に限定されないが、発
色剤の至適ｐＨ４〜１０の範囲で澄明に溶解するものが
好ましい。

亜鉛に関しては、特にノニオン系、カチオン系又は、両
性界面活性剤が亜鉛の発色を阻害せず、鉄、銅、コバル
ト、ニッケルの発色をも抑制する。

又、アニオン系界面活性剤とノニオン系界面活性剤を併
用した場合においても同様の効果が得られる。ζノれ１
−１ら・・界面活性剤は、既存のマスキング剤と併用す
るとその効果は著しく増大する。

ニッケルに関しては、アニオン系界面活性剤を既存の鉄
、銅、コバルト、亜鉛のマスキング剤と併用した場′合
、ニッケルの発色を阻害せず鉄、銅、コバルト、亜鉛の
発色をも抑制する。

ノニオン系界面活性剤としては、Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ　−
１００〔ホリオキシエチレンインオクチルフエニルエー
テル１．ローム及β−ス社商品名〕、Ｂｒ１ｊ　−３５
〔ポリオキシエチレンラウリルエーテル、化工アトラス
株商品名〕、エマルゲン１２０〔ポリオキシエチレンラ
ウリルエーテル、化工アトラス■商品名〕、Ｔｗｅｅｎ
２０〔ポリオキシエチレンンルビタンモノラウリルエー
テル、化工アトラス（株）商品名〕、Ｔｗｅｅｎ　８０
　〔ポリオキシエチレンソルビタンモノオレイルエーテ
ル、化工アトラス（株）　商品名〕、ソフタノール９０
〔ポリオキシエチレン下ルキルエーテル９日本触媒化学
工業（株）〕、ＴｒｉｔｏｎＸ　−４０５（ポリオキシ
エチレン、ローム及β−ス社商品名〕、エマルゲン１４
７〔ポリオキシエチレンラウリルエーテノＣ９花王アト
ラス（株）商品名〕、エマルゲン９２０〔ポリオキシエ
チレンラウリルエーテル、化工アトラス（株）商品名〕
、エマルゲン９５０　（、Ｉ−”　ＩＪオキシエチレン
ノニルフェニルエーテル、化工アトラス（株）商品名〕
、エマルゲンＰＰ２９ＯＮ〔オキシエチレン−オキシプ
ロピレンプロツクポリマー、化工アトラス（株）商品名
〕、・エマゾール３１３０［ポリオキシエチレンフルピ
タンモノステアレート、化工アトラス（株）商品名〕な
どが用いられるがこれらに限定されるものではない。

アニオン系界面活性剤としては、サンデツ）ＥＭＮ〔ポ
リエチレンアルキルエーテル硫酸エステルＮａ塩、三洋
化成工業（株）商品名〕、エマールＮＣ〔ポリオキシエ
チレンアルキルフェニルエーテル硫酸エステル、化工ア
トラス（株）商品名〕、アラノンＡＣＥＣＮ−ココイル
ーＮメチル−〇−アラニンＮａ塩、用研ファインケミカ
ル（株）商品名〕、エマール２０Ｃ〔ポリオキシエチレ
ンアルキルサルフエー）　Ｎａ塩、化工アトラス（株）
商品名〕、ノニポールＳ　−４０［ホＩＪエチレンアル
キルフェニルエーテル硫酸エステルＮａ塩、三洋化成工
業（株）商品名〕、ラウリル硫酸ナトリウム〔ラウリル
硫酸エステルＮａ塩〕、サンデノ）Ｂｌ、Ｃアルキルベ
ンゼンスルホン酸ホルマリン縮合物、三洋化成工業（株
）　商品名〕、レベノールＷＸ〔ポリオキシエチレンア
ルキルサルフエー）　Ｎａ塩、化工アトラス（株）商品
名〕、ウルトラホンＷ〔ペンクデシールベンズイミダゾ
ールスルホン酸Ｎａ塩９日本チノくガイイー（株）商品
名〕、チモールＮ〔ナフタレンスルフォン酸ホルマリン
縮合物、化工アトラス（株）商品名〕、ソフタノール３
０Ｓ−２５［第二級アル−キル硫酸ソーダ塩９日本触媒
化学工業（株）商品名〕、アラノンＡＣＥ［Ｎ−ココイ
ル−Ｎメチル−〇−アラニンＮａ塩、用研ファインケミ
カル（株）商品名〕、エマール２０　Ｃ［、Ｉ−’　Ｉ
Ｊオキシエチレンアルキルザルフエー）　Ｎａ塩、化工
アトラス（株）商品名〕、レベノールＷＺ〔ポリオキシ
エチレンアルキルサルフエ−）　Ｎａ塩、化工アトラス
（株）商品名〕などが用いられるがこれらに限定される
ものではない。

カチオン系界面活性剤としては、コータミン２４Ｐ（ラ
ウリルトリメチルアンモニウムクロリド。

化工アトラス（株）商品名〕、コータミン８６Ｐ〔ステ
アリルトリメチルアンモニウムクロリド、化工アトラス
（株）商品名〕、レバソーブＮＬ［第４級アンモニウム
塩、三好油脂（株）商品名〕などが用いられるがこれら
に限定されるものではない。

両性界面活性剤としては、アシヒトール２４Ｂ〔ラウリ
ルベタイン、化工アトラス（株）商品名〕、アン上トー
ル８６ＢＣステアリルベタイン、化工アトラス（株）商
品名〕などが用いられるがこれらに限定されるものでは
ない。

本発明における界面活性剤の有効濃度は特に限定され々
いが、好ましくは０．０１〜２０．０％である。

発色剤である２−ピリジルアゾアミノフェノール形導体
又はその塩は、部分構造 Ｈ を発色団として有する。

代表的な化合物は一般式［Ｉ）で示される２−ピリジル
アゾアミノフェノール誘導体又ハソの塩ニ包含される。

（式中、Ｘ、Ｙはハロゲン又は水素を、Ｒ１は水素又は
低級アルキル基、−ＣＯＯＨ、−５Ｏ３Ｈ。

（ＣＨ２）ｎ５Ｏ３Ｈ（ｎ　＝　１〜４　）をＲ２、Ｒ
３は水素、低級アルキル基、　（ＣＲ２）ｎ　Ｓ　０３
Ｈ（ｎ　＝　１〜４　）、（ＣＨ２）ＩＴＩ　　Ｃ（Ｃ
Ｈ２）ｎ５Ｏ３Ｈ−（ｍ　＝　Ｏ〜４　　、　　ｎ　＝
Ｈ Ｏ〜４）を表わす。） 例えば、 Ｏ ＣＨ３ などがあげられる。

その塩とは、例えばこれらのジエチルアミン塩、トリエ
チルアミン塩々どの有機アミン塩、又は、アンモニウム
塩、アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩などの無機塩
゛を表わす。

界面活性剤は、難溶性発色剤の可溶化剤、吸収波長のシ
フト、試料の混濁防止、呈色の安定化、目的金属の分解
遊離、生成キレートの有機溶媒への抽出の目的で比色分
析法に於て利用されているが、本発明者らは、界面活性
剤が金属のマスキング剤となることを見出した。

即ち、本発明は、２−ピリジルアゾアミノフェノール誘
導体〔Ｉ〕又はその塩を発色剤とする亜鉛又は、ニッケ
ルの比色定量方法に於て、界面活性剤が特定金属のマス
キング剤として極めて有効に作用することを見い出し完
成させたものである。

以下に実験例を挙げ、本発明の界面活性剤の効果に付説
明する。

実施例 （１）発色試液 ５Ｂｒ　　ＰＡ、ＰＳ（２（５−プロモー２−ピリジル
７ソ）　−５−（Ｎ−−ｊロピルーＮ−スルホプロピル
アミン）フェノールＮａ塩）　０．０−５　ｍｍ　ｏ　
ｔｓクエン酸ナト１１ウム３３ｇ、サリチルアルドキシ
ム１ｇ、ホウ砂０．０３　ｍｏＡを水に溶かして全量を
１ｔとし、塩酸でｐＨを８．５とする。

（２１試料液Ａ 亜鉛５　ｍｉを水に溶解して全量を１００　ｍｌとする
。

（３）試料液Ｂ 鉄１０　ｍｇを水に溶解して全量を１００　ｍｌとする
。

（４）試料液Ｃ 銅５　ｎ１ｇを水に溶解して全量を１００　ｍｌとする
。

（５）試料液Ｄ ニッケル５ｍｇを水に溶解して全量を１００　ｍｌとす
る。

（６）試料液Ｅ コバルト５　ｍｇ　’ｆ”水に溶解して全ＩＩ　’ｅ　
１００　ｍｌとする。

実験方法 試料液Ａ−Ｅ２０μｔに発色試液３　ｍｌを加え室温で
２０分間放置後５５５　ｎｍの吸光度を試薬盲検を対照
に測定する。

表１に、各金属の吸光度、亜鉛の発色度を１００とした
ときの各金属の相対的な値、及びニッケルの発色度を１
００としたときの各金属の相対的な値を示す。

表　　１ 実施例 試薬 （１）発色試液 ５　Ｂｒ−ＰＡＰＳｏ、０５ｍｍｏｔ、　　クエン酸ナ
トリウム３３ｇ、サリチルアルドキシム１ｇ、界面活性
剤としてトリトンＸ−１００、ブリッジ−３５、エマル
ゲン１２０、ツイーン２０、ツイーン８０、ソフタノー
ル９０、アン上トール２４Ｂ１ユータミン２４Ｐ１又は
ユータミン８６　Ｐ　１．６％、ホウ砂ｏ、ｏａｍｏｚ
を水に溶かして全量を１ｔとし、塩酸でｐＨを８．５と
する。

（２）試料液Ａ 実施例 （３）試料液Ｂ 実施例 （４）試料液Ｃ 実施例 （５）試別液り 実施例 （６）試料液Ｅ 実施例 実験方法 試別液Ａ−Ｅ２０μｔに各々の界面活性剤を含む発色試
液３　ｍｔを加え室温で２０分間放置後、５５５ｎｍの
吸光度を試薬盲検を対照に測定する。

表２に、実験例１０発色に対する各金属の発色率、及び
亜鉛の発色度を１，００どしたときの各金属の相対的な
値を示す。

表　　２ （発色率上段は実験例１０発色に対する各金属の発色率
、下段は亜鉛の発色度を１００としたときの各金属の相
対的な値） 表１．２より明らかなように界面活性剤の添加により亜
鉛に対する特異性は飛躍的に向上する。

特に、鉄、銅に対する発色抑制はすぐれており、これは
臨床化学分析に於て極めて重要な事実である。

実施例 試薬 （１）発色試液 ５　Ｂｒ−ＰＡ、Ｐ　Ｓ　Ｏ，０５ｍｍｏｔ、クエン酸
ナトリウム３３ｇ、ザリチルアルドキシム１ｇ、界面活
性剤トしてサンデツ）ＥＭＮ、エマールＮＣ、アラノン
ＡＣＥ、又はエマール２０　Ｃ１，６チ、ホウ砂Ｑ、Ｑ
　３　ｍｏｌを水に溶かして全量を１ｔとし、塩酸でｐ
　Ｈｆｆ：８．５とする。

（２）試料液Ａ 実施例 （３）試料液Ｂ 実施例 （４）試料液Ｃ 実施例 （５）試料液り 実施例 （６）試料液Ｅ 実験例ＩＶＣ同じ。

実験方法 試料液Ａ−Ｅ２０μｔに各々の界面活性剤を含む発色試
液３１ｎｔを加え室温で２０分間放置後、５５５ｎｍの
吸光度を試薬盲検を対照に測定する。

表３に、実験例１の発色に対する各金属の発色率、及び
ニッケルの発色度を１００としたときの各金属の相対的
な値を示す。

表　　３ （発色率上段は実験例１の発色に対する各金属の発色率
、下段はニッケルの発色度を１００としたときの各金属
の相対的な値） 表１．３より明らかなように界面活性剤の添加によりニ
ッケルに対する特異性は飛躍的に向上する。

実施例 試薬 （１）発色試液 ５　Ｂｒ−ＰＡＰＳ　Ｏ，０５ｍｍｏｔ、クエン酸ナト
リウム３３ｇ、サリチルアルトチシム１ｇ、界面活性剤
としてアラノンＡ　ＣＥ　１．６　％又は、アラノンＡ
ＣＥ　（１，７％及びブリッジ３５１係、ホウ砂帆０３
ｍｏｔを水に溶かして全量を１ｔとし、塩酸でｐＨを８
．５とする。

（２）試料液Ａ 実施例 （３）試料液Ｂ 実施例 （４）試料液Ｃ 実施例 （５）試料液り 実施例 （６）試料液Ｅ 実施例 実験方法 試料液Ａ−Ｅ２０μｔに各々の界面活性剤を含む発色試
液３　ｍｔを加え室温で２０分間放置後、５５５　ｎｍ
の吸光度を試薬盲検を対照に測定する。

表４に、実験例１の発色に対する各金属の発色率、及び
亜鉛の発色度を１００としたときの各金属の相対的な値
を示す。

表　　４ （発色率」二段は実験例１の発色に対する各金属の発色
率、下段は亜鉛の発色度を１００としたときの各金属の
相対的な値） 表４より明らかなようにアニオン系界面活性剤単独では
亜鉛の発色が０〜１チであるが、これにノニオン系界面
活性剤を共存させると亜鉛が脱マスクされるのに対し、
コバルトは更にマスクされる。

以上説明のように、試料中に共存が予想される妨害金属
から界面活性剤を適宜選択、組み合せて用いることによ
り精度良く亜鉛又はニッケルの定量を行うことができる
。

以下実施例を示す。

実施例　１ 試薬 （１）発色試液 ５Ｂｒ−ＰＡＰ３　０．０５ｍｍ、ｏｔ、ホウ砂０．０
’３ｍｏｔｓ。

ブリッジ−３５１０，９を水に溶かして全量を１ｔとし
、塩酸でｐＨ８，５とする。

（２）試料液 亜鉛１　ｍｆＩ、鉄１　ｍｇ　％銅１　ｍ１１　ｓニッ
ケル１　ｍｇ、コバル）　１　ｍｇを水に溶解して全量
を１ｔとする。

測定方法 試料液１　ｍｌに発色試液３　ｍＡを加え室温で５分間
放置後５５５　ｎｍの吸光度を試薬盲検を対照に測定し
、亜鉛の濃度を測定する。

このとき、表２より明らか々ように鉄の影響はブリッジ
３５無添加の場合に比べ約１７４になる。

実施例　２ 試薬 （１）発色試液 ５Ｂｒ　　ＰＡＰＳ　　Ｏ，０５ｍｍｏｔ、　　クエン
酸ナト１ノウム３３１１サリチルアルドキンム　１ｇ、
フ゛１ノツジ３５５ｇ、トリトンＸ−１００５９、ホウ
砂０．０３　ｍｏｌを水に溶かして全量をＩＬとし、塩
酸でｐＨを８．５とする。

（２）試料液 血清 （３）ＦＪＤＴＡ・４Ｎａ塩溶液 ＩＭ　　ＥＤＴＡ・４Ｎａ塩溶液を調整する。

測定方法 試料液２００μＡＫ発色試１７１２．５　ｍｌを加え室
温で５分間放置後５５５　ｎｒｒｉの吸光度を測定する
。その後ＥＤＴＡ・４Ｎａ塩溶液１滴を加え脱色して１
０分間放置後、ＥＤＴＡを添加した試薬盲検を対照にし
て５５５　ｎｍの吸光度を測定し検体盲検とする。試料
の吸光度から検体盲検の吸光度を差弓１いて、亜鉛の濃
度を算出する。

このとき、鉄、銅は存在しても表２より明らめシなよう
に殆んど影響しない。

実施例　３ 試薬 （１）発色試液 ５　Ｂｒ−ＰＡＰ　Ｓ　　Ｏ，０５ｍｍｏｔ、クエン酸
ナトリウム３ｊ、ｇ、すｌＪｆルアルドキシム１ｇ１エ
マソ゛−ル３１３０　１６ｇ、ホウ砂０．０３　ｍｏＬ
を水に溶かして全量を１ｔとし、塩酸でｐＨを８．５と
する。

（２）試料液 実施例１に同じ。

測定方法 試料液１　ｍｔに発色試液３　ｍｌを加え室温で５分間
放置後５５５　ｎｍの吸光度を試薬盲検を対照に測定し
、亜鉛の濃度を算出する。

このとき、表２より明らかなように鉄、銅は存在しても
殆んど影響しない。

実施例　４ 試薬 （１）発色試液 ５Ｂｒ−ＰＡＰＳ　　Ｏ，０５ｍｍｏｔ、？リチルアル
トキシム１ｇ、アラノンＡＣＥ７ｇ、ブリッジ３５１０
ｇ、ホウ砂０．０３ｍｏｔを水に溶かして全量を１ｔと
し１、塩酸でｐＨを８．５とする。

（２）試料液 実施例１に同じ。

測定方法 試料液１．０ｙｎｔに発色試液３　ｍｌを加え室温で５
分間放置後５５５　ｎｍの吸光度を試薬盲検を対照に測
定し、亜鉛の濃度を算出する。

このとき、表４より明らかなようにコバルトが共存して
も妨害しない。

実施例　５ 試薬 （１）発色試液 ５Ｂｒ−ＰＡＰＳ　　０．０５ｍｍｏＡ、クエン酸ナト
リウム３３ｇ、サリチルアルドキシム１ｇ、エマール２
０ｃ１６，９．ホウ砂０．０３　ｍａｔを水に溶かして
全量を１ｔとし、塩酸でｐＨを８．５とする。

（２）試料液 実施例１に同じ。

測定方法 試料液１　ｍｌに発色試液３　ｍｌを加え室温で５分間
放置後５５５ｎｍの吸光度を試薬盲検を対照に測定しニ
ッケルの濃度を算出する。

このとき、表３より明らかなように亜鉛、銅、コバルト
が共存してもニッケル測定に影響しない。

実施例　６ 試薬 （１）発色試液 ５Ｂｒ−ＰＡＰＳ　　０．０５ｍｍｏｔ、クエン酸ナト
リウム３３ｇ、サリチルアルドキシム１ｇ、レバノール
ＷＸ１６ｇ、ホウ砂帆０３ｍｏｔを水に溶解して全量を
１ｔとし、塩酸でｐＨを８．５とする。

（２）試料液 実施例１に同じ。

測定方法 試料液１　ｍｔに発色試液３　ｍＡを加え室温で５分間
放置後５５５　ｎｍの吸光度を試薬盲検を対照に測定し
、ニッケルの濃度を算出する。

このとき、表３より明らかなように鉄、銅が存在しても
殆んど影響しない。

実施例　７ 試薬 （１）発色試液 ５　Ｂｒ−ＰＡＰＳ　　Ｏ，０５ｍｍｏｔ、クエン酸ナ
トリウム３３ｇ、サリチルアルドキシム１ｇ、ラウリル
硫酸ナトリウム１０ｇ、デモールＮ１０ｇ、ホウ砂０．
０３ｍｏｔを水に溶かして全量を１ｔとし、塩酸でｐＩ
（：を８．５とする。

（２）試料液 実施例１に同じ。

測定方法 試料液Ｌｍｌに発色試液３　ｍｌを加え室温に５分間放
置後５５５　ｎｍの吸光度を試薬盲検を対照に測定し、
ニッケルの濃度を算出する。

このとき、表１，３より明らかなように鉄、銅が存在し
ても測定の妨げとはならない。

手続補正書（方式） ％式％ １、事件の表示 昭和５７年特許願第１４００９５号 ２、発明の名称 微量金属の比色定量方法 ３、　補正をする者 事件との関係　　特許出願人 郵便番号　　５４１ 住　所　　大阪府大阪市東区道修町３丁目１０番地連絡
先　特許課（東京）　置Ｏ３−２７０−８５７１５、　
補正の対象 明細書（１，４，１２，１３，１６，１８，２１及び２
３頁）− ６、補正の内容 明細書（１，４，１２，１３，１６，１８，２１及び２
３頁）の浄書（内容に変更なし）。

別紙の通り。

以上 明　　　　細　　　　書 １、発明の名称 微量金属の比色定量方法 ２、特許請求の範囲 （１）下記一般式（Ｉ）で示される２−ピリジルアゾア
ミンフェノール誘導体又はその塩を発色剤とする亜鉛又
はニッケルの比色定量方法に於て、マスキング剤として
一種又は二種以上の界面活性剤を使用することを特徴と
する微量金属の比色定量力（式中、Ｘ、Ｙはハロゲン又
は水素を、Ｒ１は水素又は低級アルキル基、−ＣＯＯＨ
、−３Ｏ，Ｈ。

−（ＣＨｔ）ｎＳＯｓＨ（ｎ　＝　１〜４　）を、Ｒ”
　、　Ｒｓｆｉ水素、低級アルキル基、−（ＣＨ，）ｎ
Ｓ　Ｏ８Ｈ（ロー１〜４）、Ｈ ＝（ＣＨ２）−〇−（ＣＨ２）ｎＳＯ８Ｈ（ｍ−０〜４
．ｎ一〇〜４）を表わす。） （式中、Ｘ、Ｙはハロゲン又は水素を、Ｒ１は水素又は
低級アルキル基、−ＣＯＯＨ，−８Ｏ，Ｈ。

−（ＣＨ２）。５Ｏ３Ｈ（ｎ＝１〜４）を、Ｒ１、Ｒ３
は水素、低級アルキル基、−（ＣＨ２）ｎ５Ｏ３Ｈ（ｎ
＝ｔ　〜４）　。

を表わす。） 環境衛生上及び生化学的診断法に於て、微量金属の定量
は近年その重要性を増しつつある。

亜鉛は生体微量金属であり生体内に広く分布し成長に必
要な必須金属元素の１つである。最近腸性肢端皮膚炎、
味覚障害、５ＬＥ（全身性エリテマトーデス）、高カロ
リー輸液投与中に見られる亜鉛欠乏症などで血清亜鉛濃
度が低下することが報告され、これらの疾患の診断、治
療および予後の観察に血清亜鉛測定の必要性が望まれる
ようになってきた。

定されないが、好ましくは０．０１〜２０．０　％であ
る。

発色剤である２−ピリジルアゾアミノフェノール誘導体
又はその塩は、部分構造 Ｈ を発色団として有する。

代表的な化合物は一般式ＣＩ）で示される２−ピリジル
アゾアミノフェノール誘導体又はその塩に包含される。

Ｈ （式中、Ｘ、Ｙはハロゲン又は水素を、Ｒ１は水素又は
低級アルキル基、−ＣＯＯＨ，−３Ｏ，Ｈ。

−（ＣＨ，）。５Ｏ８Ｈ（ｎ＝１〜４）をＲ”　、　Ｒ
３は水素、低級アルキル基、　（ＣＨｚ　）ｎ　Ｓ　Ｏ
ｓＨ（ｎ−１〜４　）、０Ｈ Ｏ〜４）を表わす。） 例えば ）ＩＯ Ｏ ＣＨ。

で２０分間放直後５５５ｎｍの吸光度を試薬盲検を対照
に測定する。

表１に、各金属の吸光度、亜鉛の発色度を１００とした
ときの各金属の相対的な値、及びニッケルの発色度を１
００としたときの各金属の相対的な値を示す。

表　　１ 実施例 試薬 （１）発色試液 ５　Ｂｒ−ＰＡＰＳ　Ｏ，０５ｍｍｏＡ！　１　クエン
酸ナトリウム３３ｇ、サリチルアルドキシム１ｇ、界面
活性剤としてトリトンＸ−１００，ブリッジ−３５、率
、及び亜鉛の発色度を１００としたときの各金属の相対
的な値を示す。

表　　２ 表　　３ （発色率上段は実験９＋１１の発色に対する各金属の発
色率、下段はニッケルの発色度を１ｏ。

としたときの各金属の相対的な値） 表１．３より明らかなように界面活性剤の添加によりニ
ッケルに対する特異性は飛躍的に向上する。

実施例 試薬 吸光度を試薬盲検を対照に測定する。

表４に、実験例１の発色に対する各金属の発色率、及び
亜鉛の発色度を１００としたときの各金属の相対的な値
を示す。

表　　４ （発色率上段は実験例１０発色に対する各金属の発色率
、下段は亜鉛の発色度を１００としたときの各金属の相
対的な値） 表４より明らかなようにアニオン系界面活性剤単独では
亜鉛の発色がθ〜１チであるが、これにノニオン系界面
活性剤を共存させると亜鉛が脱マスクされるのに対し、
コバルトは更にマスクされ手続補正書 １、事件の表示 ２、発明の名称 ３　補正をする者 事件との関係　　特許出願人 郵便番号　５４１ 連絡先　特許線（東京）　置　０３−２７０−８５７１
ワ　　コウノＡンヤク　コウギック 名称　和光純薬工業株式会社 ５、　補正の対象 明細書の特許請求の範囲の欄、及び発明の詳細な説明の
欄。

６、補正の内容 （１）特許請求の範囲を別紙のとおり補正する。

（２）明細書４頁５行目から１０行目にかけて記載の「
（式中、Ｘ、Ｙはハロゲン又は水素を、・・・・・・・
・・・・・（ｍ＝０〜４、ｎ＝ｏ〜４）を表わす。）」
を「（式中、Ｘ、Ｙはハロゲン又は水素を、Ｒ１は水素
又は低級アルキル基を、Ｒ２、Ｒ３は水素、低級アルキ
ル基、　（ＣＨ２）ｎＳ０３Ｈ（ｎ　＝　１〜４）、−
（ＣＨ２）、−ＣＨ−（ＣＨ２）ｍ８０３Ｈ（ｔ　＝　
Ｏ〜４、ｍ＝Ｈ Ｏ〜４）を表わす。）」と補正する。

（３）明細書５頁５行目に記載の「伴って産出される。

」の後に［又、ニッケルは触媒や表面処理に多く利用さ
れたり、ニッケルを含む合金は耐食性機材として広く一
般に使用されている。従って、鉱物中や廃液中のニッケ
ルの分析は資源開発上、環境衛生上等、操業の管理分析
として極めて重要な意味をもつ。」を挿入する。

（４）明細書５頁１７行目に記載の「完壁とはいえず、
」を「完璧とはいえず、」と補正する。

（５）明細書６頁１１行目から１２行目にかけて記載の
「ニトリロ三酢酸、」の後に、「１−ヒドロキシエタン
−１，１−ジホスホン酸、」を挿入スル。

（６）明細書６頁１７行目から１８行目にかけて記載の
「グリコールエーテルジアミン四酢酸」の後に「１−ヒ
ドロキシエタン−１，ｌ−ジホスホン酸」を挿入する。

（７）明細書７頁１３行目に記載の「見い出し本発明を
」を「見出し本発明を」と補正する。

（８）明細書８頁１３行目に記載の［亜鉛の発色をも抑
制する。Ｊを「亜鉛の発色を更に抑制する。」と補正す
る。

（９）明細書８頁１４行目に記載の「ノニオン系界面活
性剤としては、」を「本発明に特に有効なノニオン系界
面活性剤としては、」と補正する。

ＯＱ明明細書１負 の［〔Ｎ−ココイル−Ｎメチル−〇−アラニンＮａ塩、
用研ファインケミカル■商品名〕、」を「〔Ｎ−ココイ
ル−Ｎ−メチル−β−アラニンＮａ塩、用研ファインケ
ミカル■商品名〕、」と補正する。

Ｏ−アラニンＮａ塩、用研ファインケミカル■商品名〕
、エマール２０Ｃ［ポリオキシエチレンアルキルサルフ
ェー）　Ｎａ塩、化工アトラス■商品名〕、」を削除す
る。

ｏつ明細書１１頁１２行目から１３行目にかけて記載の
「〔第４級アンモニウム塩、」を「〔臭化ラウリルピリ
ジニウム、」と補正する。

０］明細書１２頁１６行目から１３頁３行目にかけて記
載の［（式中、Ｘ、Ｙはハロゲン又は水素を、・・・・
・・・・・（ｍ＝０〜４、ｎ＝ｏ〜４）を表わす。）」
を［（式中、Ｘ、Ｙはハロゲン又は水素を、Ｒ１は水素
又は低級アルキル基を、Ｒ２、Ｒ３は水素、低級アルキ
ル基、−（ＣＨ２）ｎＳｏ３Ｈ（ｎ　＝　１〜４）、−
（ＣＨ２）ｚ−ＣＨ−（ＣＨ２）ｍＳｏ３Ｈ（ｔ　＝　
ｏ〜４、ｍ＝品 ０４明細書１４頁７行目に記載の「試料の混濁防止、」
を「試料の混濁防止及び澄明化、」と補正する。

θ時明細書１４頁１６行目に記載の「見い出し」を「見
出し」と補正する。

ａＱ明明細書１真 ８、５とする。」を「塩酸でｐＨを９．５とする。」と
補正する。

ｏ”ｈ明細書１７頁５行目から１８行目にかけて記載）
ｒ　（２）試料液Ａ・・・・・・・・・コバルト５グを
水に溶解して全量を１００−とする。」を以下のとおり
補正する。

［（２）試料液Ａ 酢酸亜鉛１４ｑ（亜鉛として５ツ）を水に溶解して全量
を１００イとする。

（３）試料液Ｂ 硫酸第２鉄アンモニウム４８グ（鉄として１０”／）を
０．Ｉ　Ｎ　−　ＨＣＩに溶解して全量を１００−とす
る。

（４）試料液Ｃ 硫酸銅１８ツ（銅として５ツ）を水に溶解して全量を１
００−とする。

（５）試料液り 塩化ニッケル１１”／にッケルとして５グ）を水に溶解
して全量を１００−とする。

（６）試料液Ｅ 塩化コバル）　１　１’５’（コバルトとして５ツ）を
水に溶解して全量を１００ｄとする。」 ０→明細書１６頁１９行目から１７頁５行目にかけて記
載の「界面活性剤としてトリトンｘ−ｉｏｏ、・・・・
・・・・・塩酸でｐＨを８．５とする。」を［ホウ砂０
、０　３　ｍｏｌ、界面活性剤としてトリドアＸ−１０
０、ブリッジ−３５、エマルゲン１２０、ツイーン２０
、ツイーン８０，ソフタノール９０，エマゾール３１３
０、アンヒトール２４Ｂ，コータミン２４Ｐ％コータミ
ン８６ＰルベノールＷＸ，ラウリル硫酸ナトリウム、又
はデモールＮを夫々単独で１．６俤用いるか、又はブリ
ッジ−３５　１チとトリトンＸ−１００１％を併用する
かあるいは、ラウリル硫酸ナトリウム１チとデモールＮ
１％を併用し、水に溶かして全量を１ｔとし、塩酸でｐ
Ｈを９、５とする。」と補正する。

（至）明細書１８頁に記載の表２を以下の通シ補正する
。

表２ （１）明細書１９頁１７行目に記載のｒｐＨを８．５と
する。」をｒｐＨを９．５とする。」と補正する。

？００明細書２２３行目に記載の「サリチルアルトチシ
ム と補正する。

翰明細書２２頁６行目から７行目にかけて記載の「塩酸
でｐＨを８．５とする。」を「塩酸でｐＨを９．５とす
る。」と補正する。

（至）明細書２４頁３行目に記載の「妨害金属から界面
活性剤を適宜選択、」を「妨害金属から、従来使用のマ
スキング剤及び界面活性剤を適宜選択，」と補正する。

（ハ）明細書２４頁１４行目から１５５行目かけて記載
の「亜鉛１ｑ１鉄１ｊ！／・・・・・・・・・全量を１
ｔとする。」を「亜鉛約１００μｆ　／　ｄｔ程度含む
と推定される試料液。」と補正する。

（ハ）明細書２４頁２０行目に記載の「このとき、表２
より」を「このとき、表１及び表２より」と補正する。

（ハ）明細書２５頁１行目に記載の「約２になる。」を
「約１／６になる。」と補正する。

（イ）明細書２５頁６行目から９行目にかけて記載の「
ブリッジ３５　　５９，・・・・・・・・・塩酸でｐＨ
を８．５とする。」を「ブリッジ３５　　２０Ｆ、トリ
トンＸ−１００　　２０５’、０．０５Ｍ炭酸塩緩衝液
に溶かして全量を１ｔとし、塩酸でｐ′Ｈを９．５とす
る。」と補正する。

（ハ）明細書２６頁１０行目に記載の「塩酸でｐＨを８
．５とする。」を「塩酸でｐＨを９．５とする。」と補
正する。

（ハ）明細書２７頁５行目に記載の「塩酸でｐＨを８、
５とする。」を「塩酸でｐＨを９．５とする。」と補正
する。

（ト）明細書２７頁２０行目に記載の「塩酸でｐＨを８
．５とする。」を「塩酸でｐＨを９．５とする。Ｊと補
正する。

０］）明細書２８頁２行目に記載の「実施例１に同じ。

」を「ニッケルを１００μｆ／ｄｔ程度含むと推定され
る試料液。」と補正する。

０埠明細書２８頁１３行目から１４４行目かけて記載の
「レバノールＷＸ１６Ｆ、」を［レベノールＷＸ１６Ｆ
、」と補正する。

０１明細書２８頁１５行目に記載の「塩酸でｐＨを８．
５とする。」を「塩酸でｐＨを９．５とする。」と補正
する。

（口）明細書２９頁１行目に記載の「ニッケルの濃度を
算出する。」を「亜鉛の濃度を算出する。」と補正する
。

（至）明細書２９頁２行目に記載の「表３より明らかな
ように鉄、」を「表２より明らかなように鉄、」と補正
する。

（至）明細書２９頁１０行目から１１１行目かけて記載
の「塩°酸でｐＨを８．５とする。」を「塩酸でｐＨを
９．５とする。」と補正する。

（口）明細書２９頁１７行目に記載の「ニッケルの濃度
を算出する。」を「亜鉛の濃度を算出する。」と補正す
る。

（至）明細書２９頁１８行目に記載の「表３より明らか
なように鉄、」を「表２より明らかなように鉄、」と補
正する。

以上 別　　紙 ２、特許請求の範囲 （１）下記一般式ＣＩ）で示される２−ピリジルアゾア
ミノフェノール誘導体又はその塩を発色剤とする亜鉛又
はニッケルの比色定量方法に於て、マスキング剤として
一種又は二種以上の界面活性剤を使用することを特徴と
する微量金属の比色定量方法。

Ｈ （式中、Ｘ、Ｙはハロゲン又は水素を、Ｒ１は水素又は
低級アルキル基を、Ｒ２、Ｒ３は水素、低級アルキル基
、　（ＣＨ２）ｎ５０３Ｈ（ｎ　＝　１〜４）、Ｈ −（ＣＨ２）ｔ−ＣＨ−（ＣＨ２）ｍ８０３Ｉ（（ｔ　
＝　Ｏ〜４、ｍ−〇〜４）を表わす。） （２）一般式〔１〕で示される２−ピリジルアゾアミノ
フェノール誘導体又はその塩を発色剤とする亜鉛の比色
定量方法に於て、既存のＦｅ　、　ＣｕＳＣｏ　。

Ｎｉのマスキング剤に加えて界面活性剤を併用する特許
請求の範囲第１項記載の比色定量方法。

（３）一般式〔ｌ〕で示される２−ピリジルアゾアミノ
フェノール誘導体又はその塩を発色剤とする亜鉛の比色
定量方法に於て、界面活性剤としてノニオン系界面活性
剤を用いる特許請求の範囲第１項又は第２項記載の比色
定量方法。

（４）一般式ＣＤで示される２−ピリジルアゾアミノフ
ェノール誘導体又はその塩を発色剤とする亜鉛の比色定
量方法に於て、界面活性剤としてカチオン系界面活性剤
を用いる特許請求の範囲第１項又は第２項記載の比色定
量方法。

（５）一般式〔Ｉ〕で示される２−ピリジルアゾアミノ
フェノール誘導体又はその塩を発色剤とする亜鉛の比色
定量方法に於て、界面活性剤として両性界面活性剤を用
いる特許請求の範囲第１項又は第２項記載の比色定量方
法。

（６）一般式〔Ｉ〕で示される２−ピリジルアゾアミノ
フェノール誘導体又はその塩を発色剤とする亜鉛の比色
定量方法に於て、界面活性剤としてアニオン系界面活性
剤とノニオン系界面活性剤を併用する特許請求の範囲第
１項又は第２項記載の比色定量方法。

（７）一般式〔■〕で示される２−ピリジルアゾアミノ
フェノール誘導体又はその塩を発色剤とするニッケルの
比色定量方法に於て、既存のＦｅ、Ｃｕ、Ｃｏ、Ｚｎの
マスキング剤に加えて界面活性剤を併用する特許請求の
範囲第１項記載の比色定量方法。

（８）一般式〔ｌ〕で示される２−ピリジルアゾアミノ
フェノール誘導体又はその塩を発色剤とするニッケルの
比色定量方法に於て、界面活性剤としてアニオン系界面
活性剤を用いる特許請求の範囲第１項又は第７項記載の
比色定量方法。

以上

Claims (8)

【特許請求の範囲】
1. （１）下記一般式ＣＩ）で示される２−ピリジルアゾア
   ミノフェノール誘導体又はその塩を発色剤とする亜鉛又
   はニッケルの比色定量方法に於て、マスキング剤として
   一種又は二種以上の界面活性剤を使用することを特徴と
   する微量金属の比色定量方法。 ■ Ｈ （式中、Ｘ、Ｙはハロゲン又は水素を、Ｒ１は水素又は
   低級アルキル基、−ＣＯＯＨ、−８Ｏ３Ｈ。 （ＣＲ２）Ａ’Ｓ　０３Ｈ（ｎ　＝　ｌ　〜４　）を、
   Ｒ２、Ｒ３は水素、低級アルキル基、　　（ＣＲ２）ｎ
   　Ｓ　０３Ｈ（ｎ　＝　１〜４　）、Ｈ ■ （ＣＩ（２）ｍ　　Ｃ（ＣＨ２）ｎ５Ｏ３Ｈ（ｍ＝ｏ−
   ４、ｎ−〇〜４）を表わす。）
2. （２）一般式〔工〕で示される２−ピリジルアゾアミノ
   フェノール誘導体又はその塩を発色剤とする亜鉛の比色
   定量方法に於て、既存のＦｅｓ　Ｃｕ、　Ｃｏ、Ｎｉの
   マスキング剤に加えて界面活性剤を併用する特許請求の
   範囲第１項記載の比色定量方法。
3. （３）一般式ＣＩ）で示される２−ピリジルアゾアミノ
   フェノール−導体又はその塩を発色剤とする亜鉛の比色
   定量方法に於て、界面活性剤としてノニオン系界面活性
   剤を用いる特許請求の範囲第１項又は第２項記載の比色
   定量方法。
4. （４）一般式ＣＩ）で示される２−ピリジルアゾアミン
   フェノール誘導体又はその塩を発色剤とする亜鉛の比色
   定量方法に於て、界面活性剤としてカチオン系界面活性
   剤を用いる特許請求の範囲第１項又は第２項記載の比色
   定量方法。
5. （５）一般式（Ｉ）で示される２−ピリジルアゾアミン
   フェノール“誘導体又はその塩を発色剤とする亜鉛の比
   色定量方法に於て、界面活性剤として両性界面活性剤を
   用いる特許請求の範囲第１項又は第２項記載の比色定量
   方法。
6. （６）一般式ＣＩ）で示される２−ピリジルアゾアミン
   フェノール誘導体又はその塩を発色剤とする亜鉛の比色
   定量方法に於て、界面活性剤としてアニオン系界面活性
   剤とノニオン系界面活性剤を併用する特許請求の範囲第
   １項又は第２項記載の比色定量方法。
7. （７）一般式ＣＩ）で示される２−ピリジルアゾアミノ
   フェノール誘導体又はその塩を発色剤とするニッケルの
   比色定量方法に於て、既存のＦｅ　’、Ｃｕ　ｓＣＯ，
   Ｚｎのマスキング剤に加えて界面活性剤を併用する特許
   請求の範囲第１項記載の比色定量方法。
8. （８）一般式〔Ｉ〕で示される２−ピリジルアゾアミノ
   フェノール誘導体又はその塩を発色剤とするニッケルの
   比色定量方法に於て、界面活性剤としてアニオン系界面
   活性剤を用いる特許請求の範囲第１項又は第７項記載の
   比色定量方法。