JPS5931454A - 赤血球凝集試験用水性溶媒 - Google Patents
赤血球凝集試験用水性溶媒Info
- Publication number
- JPS5931454A JPS5931454A JP14189382A JP14189382A JPS5931454A JP S5931454 A JPS5931454 A JP S5931454A JP 14189382 A JP14189382 A JP 14189382A JP 14189382 A JP14189382 A JP 14189382A JP S5931454 A JPS5931454 A JP S5931454A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- red blood
- aqueous solvent
- aqueous
- blood cells
- reaction
- Prior art date
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- Pending
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/554—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being a biological cell or cell fragment, e.g. bacteria, yeast cells
- G01N33/555—Red blood cell
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- Health & Medical Sciences (AREA)
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- Engineering & Computer Science (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
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- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
技術分野
本弁明は、赤血球凝集試験用水性溶媒に関するものであ
る。
る。
抗原抗1体反応や、ある神の動植物菌体、又はウィルス
由来の凝梁物1.Bitと生体(什白γ1や赤血球との
憔集f☆応を3% i#I・することにより、そわらの
−万か又は+t+j者を定1目的に測定する方法は、赤
血球#集反応(PHA法)、逆受身赤血球凝集反応(R
PHA法)、細菌の凝集反応、又はラテックス凝集反応
などとして広く臨床(゛美食の分野で利用されている。
由来の凝梁物1.Bitと生体(什白γ1や赤血球との
憔集f☆応を3% i#I・することにより、そわらの
−万か又は+t+j者を定1目的に測定する方法は、赤
血球#集反応(PHA法)、逆受身赤血球凝集反応(R
PHA法)、細菌の凝集反応、又はラテックス凝集反応
などとして広く臨床(゛美食の分野で利用されている。
背踏技jlrr
例えばP II A法について説1す1す第1ば、精製
したllBs抗原をIj11#集試験川世体(用下担体
と略す)であるヒシジ赤血球に感作せしめてHBs抗原
感作ヒツジ赤血球を得、このものと曲成(1〜体とを解
合した時に水性溶媒中で凝集反応がみられるか否かによ
って検体中にJ(’Bs抗体が存在しているか杏かを判
定できる。
したllBs抗原をIj11#集試験川世体(用下担体
と略す)であるヒシジ赤血球に感作せしめてHBs抗原
感作ヒツジ赤血球を得、このものと曲成(1〜体とを解
合した時に水性溶媒中で凝集反応がみられるか否かによ
って検体中にJ(’Bs抗体が存在しているか杏かを判
定できる。
また^ト集反応がみられた場合は、その検体を史に段階
的に希釈して凝集反応か観、察できなくなるまでの希釈
倍数を求めることにより、その(ii棒体中H’、13
s抗体を定h1的に測定することができる。
的に希釈して凝集反応か観、察できなくなるまでの希釈
倍数を求めることにより、その(ii棒体中H’、13
s抗体を定h1的に測定することができる。
またRP)(A法でlJ、精製したJJ、’B s抗体
を411体である赤血球に感作してllBs抗体(11
9作赤血球を製し、このものと検体とを胛1合した時に
水性階か4中で凝集反応がみられるか否かによって、検
体中にJ(I3s抗原が含まれているか否かを検知する
ことができる。
を411体である赤血球に感作してllBs抗体(11
9作赤血球を製し、このものと検体とを胛1合した時に
水性階か4中で凝集反応がみられるか否かによって、検
体中にJ(I3s抗原が含まれているか否かを検知する
ことができる。
史にある神のウィルスと鳥類の赤血球とはウィルスの有
する凝集素の作用により赤血球を水性溶媒中で凝集する
。この水性溶媒中でのuF集反応の有無、強弱によって
ウィルスの八°(ル“を定量的に測定することかできる
。これら水性溶媒中での凝集反応を利用した分析方法は
、110便でかつ?111定M’? I’Mも旨いので
各神抗原や抗体の検査に広く利用さねていることは周知
のjjtJりである。
する凝集素の作用により赤血球を水性溶媒中で凝集する
。この水性溶媒中でのuF集反応の有無、強弱によって
ウィルスの八°(ル“を定量的に測定することかできる
。これら水性溶媒中での凝集反応を利用した分析方法は
、110便でかつ?111定M’? I’Mも旨いので
各神抗原や抗体の検査に広く利用さねていることは周知
のjjtJりである。
しかし、これら水性溶媒中での凝集試験に共Jt!’1
した欠点として、担体に対する抗体を含む(1力体にお
いては、非持異的な凝集反応かおこり判定を挾まるとい
う間W(1がある。従って、検体を測定する場合には、
これらの塀似反応物の彫物が出てこない程IWにまで予
め希釈した後に測定を行うか、もしくは適当な確認試験
法を用いて水性浴媒中での凝集反応の真偽を確かめる必
要がある。
した欠点として、担体に対する抗体を含む(1力体にお
いては、非持異的な凝集反応かおこり判定を挾まるとい
う間W(1がある。従って、検体を測定する場合には、
これらの塀似反応物の彫物が出てこない程IWにまで予
め希釈した後に測定を行うか、もしくは適当な確認試験
法を用いて水性浴媒中での凝集反応の真偽を確かめる必
要がある。
また、水性Mts中でのこれら非特異的凝集反応を少な
くする方法として、1tll+定に用いる水性溶媒の中
に少量の動物伽白やアクリノールを加える方法が既に知
られている。しかしこれらのlIθ−においてもある稈
IWの非持b¥; M集lシ応をμ/j山しつるが、尚
多くの非%異反応が残るので史に鋳第1だ11法の出現
か待Liノさねでいる。
くする方法として、1tll+定に用いる水性溶媒の中
に少量の動物伽白やアクリノールを加える方法が既に知
られている。しかしこれらのlIθ−においてもある稈
IWの非持b¥; M集lシ応をμ/j山しつるが、尚
多くの非%異反応が残るので史に鋳第1だ11法の出現
か待Liノさねでいる。
また、非特異反応を/l!l去する別の方法としてi’
i13体中の/lif似反応物貿をシ傅作していtcい
担体で予め0メタ着除去する方法もあるが、ル裟・(の
検体を1「tl時に短時間に処理するにはJ)まりにも
*tJAcである。
i13体中の/lif似反応物貿をシ傅作していtcい
担体で予め0メタ着除去する方法もあるが、ル裟・(の
検体を1「tl時に短時間に処理するにはJ)まりにも
*tJAcである。
σ「つで1本発明の目的は非特異反応を消去し棚めて使
用(鰻屋の優れた〜果試騎月1水件溶妨を挫供せ/【と
するにある。
用(鰻屋の優れた〜果試騎月1水件溶妨を挫供せ/【と
するにある。
発明のDり示
発明名等は永年この凝集反応における非特異反応を消去
するため測定方法の改良/rl)死へ偕は、動物由来の
胎盤組%l’″lル1分叉は助吟I組紳/j12.分を
測定系に存在させることにより?1Ilj定に’? I
Q−が顧者に改f1÷されること、さらに当nシ組廠1
r/分を特定、28度に存在させた場合に、特にtII
マしい到(果が得らtすることを−7出し、本発明を完
成した。
するため測定方法の改良/rl)死へ偕は、動物由来の
胎盤組%l’″lル1分叉は助吟I組紳/j12.分を
測定系に存在させることにより?1Ilj定に’? I
Q−が顧者に改f1÷されること、さらに当nシ組廠1
r/分を特定、28度に存在させた場合に、特にtII
マしい到(果が得らtすることを−7出し、本発明を完
成した。
即ち、本発明は動物由来の胎盤組織成分又は筋肉組織成
分を40.01〜0.4%(w/v)のtb度に含有す
ることを特徴とする赤血球凝集試験用水性浴(Ivに関
する。
分を40.01〜0.4%(w/v)のtb度に含有す
ることを特徴とする赤血球凝集試験用水性浴(Ivに関
する。
この水性溶媒を赤血球→シを集反応試験用試薬の調整に
用いることにより」二組測定感lWの改善を悴成するこ
とができる。
用いることにより」二組測定感lWの改善を悴成するこ
とができる。
水性溶媒としては、従来既知のあらゆる凝集試験用水性
俗媒が利用でき1例えば水、生理渡1t、A水、各神緩
辿S液(リン酸緩(資)液、ホウ酸緩衝液、クリシン緩
細浩)、アルブミン溶液、デキ、ストラン溶液、正常ヒ
ト及び動物血清溶Hシ、合成高分子物質の溶液、界面活
性剤含有水溶液、およびこれらの組み合せからなる溶液
が例示される。当該水性溶媒のpHは、約6.0〜8.
5が好ましく、かかるp Hへの調整は緩#I液でおこ
なわれることが好ましい。水性溶媒の塩濃度は、比較的
fル濃度であることが好ましく、より好ましくは、生理
的等幅な溶液である。
俗媒が利用でき1例えば水、生理渡1t、A水、各神緩
辿S液(リン酸緩(資)液、ホウ酸緩衝液、クリシン緩
細浩)、アルブミン溶液、デキ、ストラン溶液、正常ヒ
ト及び動物血清溶Hシ、合成高分子物質の溶液、界面活
性剤含有水溶液、およびこれらの組み合せからなる溶液
が例示される。当該水性溶媒のpHは、約6.0〜8.
5が好ましく、かかるp Hへの調整は緩#I液でおこ
なわれることが好ましい。水性溶媒の塩濃度は、比較的
fル濃度であることが好ましく、より好ましくは、生理
的等幅な溶液である。
なお、さらにこの溶液に」二組の従来既知の非特異凝集
反応阻止物質を混合してもよい。担体としては、自体既
知のものが使用され、具体的には、たとえばヒツジ、モ
ルモット、0型の人、ニワト−リl(どの赤血球をホル
マリン、グルタルアルデヒドi(どで固定したものなど
があけられ、これらのうちでも特に好ましいものはヒツ
ジ赤血球および0型の人赤面球である。このような担一
体は約20μ以下、特に5〜15μ程度のネ)!、状の
ものを使用するのが有利である。このような担体に抗体
又は抗原を(嵌作させる処理は自体公知の方法に準じて
行うことができる。
反応阻止物質を混合してもよい。担体としては、自体既
知のものが使用され、具体的には、たとえばヒツジ、モ
ルモット、0型の人、ニワト−リl(どの赤血球をホル
マリン、グルタルアルデヒドi(どで固定したものなど
があけられ、これらのうちでも特に好ましいものはヒツ
ジ赤血球および0型の人赤面球である。このような担一
体は約20μ以下、特に5〜15μ程度のネ)!、状の
ものを使用するのが有利である。このような担体に抗体
又は抗原を(嵌作させる処理は自体公知の方法に準じて
行うことができる。
また組繊成分とは、たとえば各組織を微細に粉砕ないし
分解したもの(たとえば、細胞組織の1゜51i以下の
紹微糾分解物など)などであり、かかるH(微細分解物
は、たとえば組織をブレンター処理後超音波処理するこ
とによって、あるいはブレンター処理後パパイン等の休
日分解酵素処理をすることによって得らtl、消化1り
が総窒素111に対し非蛋白性窒≠21@が20〜70
%のものを用いることが好ましい。超音波処理における
条件は1通常30”C以下、lO〜20KH110〜6
0分間でJ)す、超音波処理後粒子口径2μの膜を通過
したものを用いることが好ましい。
分解したもの(たとえば、細胞組織の1゜51i以下の
紹微糾分解物など)などであり、かかるH(微細分解物
は、たとえば組織をブレンター処理後超音波処理するこ
とによって、あるいはブレンター処理後パパイン等の休
日分解酵素処理をすることによって得らtl、消化1り
が総窒素111に対し非蛋白性窒≠21@が20〜70
%のものを用いることが好ましい。超音波処理における
条件は1通常30”C以下、lO〜20KH110〜6
0分間でJ)す、超音波処理後粒子口径2μの膜を通過
したものを用いることが好ましい。
実施例
モルモットに精製1]13s抗原を免疫してHB s抗
血清を得た。この抗11fll を肖を硫安分画法とイ
オン交換クロマトグラフィー法とで処理し精製H13s
抗1体を得、この精製トIBs抗体をグルタルアルデヒ
ドにより固定されたヒツジ赤血球に牌作してHBs抗体
(嶋作ヒツジ赤血球を得た。
血清を得た。この抗11fll を肖を硫安分画法とイ
オン交換クロマトグラフィー法とで処理し精製H13s
抗1体を得、この精製トIBs抗体をグルタルアルデヒ
ドにより固定されたヒツジ赤血球に牌作してHBs抗体
(嶋作ヒツジ赤血球を得た。
他方、本発明からなる水性俗媒として01μリン酸緩歯
% (pH7,5)に正常動物血t〜およびヒト又はヒ
ツジの胎盤分解成分を終taN9が00・1・伎び0.
4012(w/v)になる様に加え、コントロールとし
て無添加のものを用意した。確認試験の結果非特異凝集
をおこすことが分っているクエン酸a;f加入血漿の2
(ψ体(表中1及び2)をJj P HA法に従いこの
5抽類の溶媒を用いてマイクロプレート上でそれぞれ2
倍数希釈を行い、この希断列へ上記で得たHEs抗体挿
作ヒツジ赤而赤血球合した。
% (pH7,5)に正常動物血t〜およびヒト又はヒ
ツジの胎盤分解成分を終taN9が00・1・伎び0.
4012(w/v)になる様に加え、コントロールとし
て無添加のものを用意した。確認試験の結果非特異凝集
をおこすことが分っているクエン酸a;f加入血漿の2
(ψ体(表中1及び2)をJj P HA法に従いこの
5抽類の溶媒を用いてマイクロプレート上でそれぞれ2
倍数希釈を行い、この希断列へ上記で得たHEs抗体挿
作ヒツジ赤而赤血球合した。
別lζHEs抗原が腸性の検体(3)につき同様に処理
、試験した。なお混合液t74は邊体希釈故25μLH
’Bs抗体賄作ヒツジ赤血球25μeであり室温で2時
間後の凝集の仲さく凝集1!F )を4.8.2.1の
評価とし、非んト集を評価0として表現した時第1表の
成11?を得た。
、試験した。なお混合液t74は邊体希釈故25μLH
’Bs抗体賄作ヒツジ赤血球25μeであり室温で2時
間後の凝集の仲さく凝集1!F )を4.8.2.1の
評価とし、非んト集を評価0として表現した時第1表の
成11?を得た。
尚胎盤′Ml &を成分としては胎フ:キのミンチを1
07Q甲の水にて洗f4tせしめた後、p −H7,0
のリンハルナトリウムf’8Dに懸l匍し、ブレシダー
によって分解し、さらにH1音波処理し1.2μの膜を
jlJ過した沖欣を用いた。
07Q甲の水にて洗f4tせしめた後、p −H7,0
のリンハルナトリウムf’8Dに懸l匍し、ブレシダー
によって分解し、さらにH1音波処理し1.2μの膜を
jlJ過した沖欣を用いた。
(以下余日)
表 1
表1に示した結果より、ヒト組糸;ν成分又は、ヒツジ
組紗成分を0.01〜0,4%(W/v)の必用に添加
することにより非特異度広は1:64〜1:128から
l:4〜1:16にまで抑えら才1ている。また陽性に
’件ではこれらのものを添加しても影響はないことが判
る。
組紗成分を0.01〜0,4%(W/v)の必用に添加
することにより非特異度広は1:64〜1:128から
l:4〜1:16にまで抑えら才1ている。また陽性に
’件ではこれらのものを添加しても影響はないことが判
る。
以−トの如く本発明からj(る凝集試験用水性l6媒は
、奢るしく凝集反応の炒LWを上ガ1させるものであっ
て、すぐ第1た6)集試験を可n1コとするものである
。
、奢るしく凝集反応の炒LWを上ガ1させるものであっ
て、すぐ第1た6)集試験を可n1コとするものである
。
以下に本発明を実7Ji11例に、Lつで示す。
実施例1
ヒツジ赤血球をグルタルアルデヒドで固定17、公知の
方法で抗H1ls抗体を感作して411体を得た。
方法で抗H1ls抗体を感作して411体を得た。
本担体を用いた絣集試鹸用水件俗媒として、OIM I
Jン酸紛伸Ihをp H7,8にヒト飴弥′組緘hν5
分01%(W/V)を加えて赤血球凝集反応試験用水性
か奴を得た。組緑成、分は、実験(9+lにおける。;
1.!1!製と旧1様にして調製したものである。
Jン酸紛伸Ihをp H7,8にヒト飴弥′組緘hν5
分01%(W/V)を加えて赤血球凝集反応試験用水性
か奴を得た。組緑成、分は、実験(9+lにおける。;
1.!1!製と旧1様にして調製したものである。
実R11,イν112
二ワI・り赤血球をゲルタルアルデヒドで固定し公知の
方法でHB s抗原を竹作した。
方法でHB s抗原を竹作した。
本生体を用いたんF集試験用水性俗紡として、09%塩
化ナトリウムな4イタにヒッジハ′り内組1“1し成分
をそ第1ぞ第101%idQ屋に加えたものを得た。
化ナトリウムな4イタにヒッジハ′り内組1“1し成分
をそ第1ぞ第101%idQ屋に加えたものを得た。
実/1iliイゲ113
実111−410及び2で<4)だ水性溶媒に史に保存
バ11としてNaNaを加えたものを得た。
バ11としてNaNaを加えたものを得た。
特許出i+、:i人 株式会社ミドリ十字代 理 人
弁理士 *−as、・: −手続前if(’;’:
’ (1茫) 1ち1イfl15フイ140月1ゴ1」’I!1.f’
l庁長官 殿1 1: f’lの)(、Jミ 昭(、,57〕1 特許 に11・、5141893号
2 発明の名称 赤血球凝集試験用水性溶媒゛3 浦
11をする古 」1叶1との閂「系 特訂出に(人 f]1□11 氏 ii (f’+ l’l・)株式会社ミ トリ十字
fi、 111i1にまり増JJIIする発明の数1
、明細1第6頁、第20行σ〕「夛ト蛋白1’h J
’k r可溶性」に訂正する0
弁理士 *−as、・: −手続前if(’;’:
’ (1茫) 1ち1イfl15フイ140月1ゴ1」’I!1.f’
l庁長官 殿1 1: f’lの)(、Jミ 昭(、,57〕1 特許 に11・、5141893号
2 発明の名称 赤血球凝集試験用水性溶媒゛3 浦
11をする古 」1叶1との閂「系 特訂出に(人 f]1□11 氏 ii (f’+ l’l・)株式会社ミ トリ十字
fi、 111i1にまり増JJIIする発明の数1
、明細1第6頁、第20行σ〕「夛ト蛋白1’h J
’k r可溶性」に訂正する0
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 +l) 4;f東試試験用担体して動物白米の胎盤組
織lid、分又はパノ)肉組織成分をJIIO,01〜
0.4%(w/v)の濃度に含有することを特徴とする
赤面球凝果試験用水件俗媒。 (2)担体が抗体+5(i、作ヒツジ赤血球であり、組
恒Jコシ1分がヒト及びヒト以外の動物胎Nr組織、ヒ
ト以外の動ゼ、1の1f’)肉組憧である特、i′f
#r ’5F−のQil’1trr+第(1)項記載の
水性f/i’yL
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14189382A JPS5931454A (ja) | 1982-08-16 | 1982-08-16 | 赤血球凝集試験用水性溶媒 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14189382A JPS5931454A (ja) | 1982-08-16 | 1982-08-16 | 赤血球凝集試験用水性溶媒 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5931454A true JPS5931454A (ja) | 1984-02-20 |
Family
ID=15302612
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP14189382A Pending JPS5931454A (ja) | 1982-08-16 | 1982-08-16 | 赤血球凝集試験用水性溶媒 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5931454A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH01320145A (ja) * | 1988-06-22 | 1989-12-26 | Nissan Shatai Co Ltd | ハニカム構造体の製造方法 |
| US4964936A (en) * | 1988-10-11 | 1990-10-23 | Imi-Tech Corporation | Method of making foam-filled cellular structures |
-
1982
- 1982-08-16 JP JP14189382A patent/JPS5931454A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH01320145A (ja) * | 1988-06-22 | 1989-12-26 | Nissan Shatai Co Ltd | ハニカム構造体の製造方法 |
| US4964936A (en) * | 1988-10-11 | 1990-10-23 | Imi-Tech Corporation | Method of making foam-filled cellular structures |
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