JPH0377461B2 - - Google Patents
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- JPH0377461B2 JPH0377461B2 JP57126527A JP12652782A JPH0377461B2 JP H0377461 B2 JPH0377461 B2 JP H0377461B2 JP 57126527 A JP57126527 A JP 57126527A JP 12652782 A JP12652782 A JP 12652782A JP H0377461 B2 JPH0377461 B2 JP H0377461B2
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- red blood
- agglutination
- cell membrane
- blood cells
- aqueous solvent
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
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-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/554—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being a biological cell or cell fragment, e.g. bacteria, yeast cells
- G01N33/555—Red blood cell
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- Health & Medical Sciences (AREA)
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- Analytical Chemistry (AREA)
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- General Health & Medical Sciences (AREA)
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- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
技術分野
本発明は、凝集試験用水性溶媒に関するもので
る。 抗原抗体反応や、ある種の動植物菌体、又はウ
イルス由来の凝集物質と生体蛋白質や赤血球との
凝集反応を追跡することにより、それらの一方か
又は両者を定量的に測定する方法は、赤血球凝集
反応（PHA法）、逆受身赤血球凝集反応
（RPHA法）、細菌の凝集反応、又はラテツクス
凝集反応などとして広く臨床検査の分野で利用さ
れている。 背景技術 例えばPHA法について説明すれば、精製した
HBs抗原を凝集試験用担体（以下担体と略す）
であるヒツジ赤血球に感作せしめてHBs抗原感
作ヒツジ赤血球を得、このものと血液検査とを混
合した時に水性溶媒中で凝集反応がみられるか否
かによつて検体中にHBs抗体が存在していたか
否かを判定できる。 また凝集反応がみられた場合は、その検体を更
に段階的に希釈して凝集反応が観察できなくなる
までの希釈倍数を求めることにより、その検体中
のHBs抗体を定量的に測定することができる。 またRPHA法では、精製したHBs抗体を担体
である赤血球に感作してHBs抗体感作赤血球を
製し、このものと検体とを混合した時に水性溶媒
中で凝集反応がみられるか否かによつて、検体中
にHBs抗原が含まれているか否かを検知するこ
とができる。 更にある種のウイルスと鳥類の赤血球とはウイ
ルスの有する凝集素の作用により赤血球を水性溶
媒中で凝集する。この水性溶媒中での凝集反応の
有無、強弱によつてウイルスの濃度を定量的に測
定することができる。これら多くの水性溶媒中で
の凝集反応を利用した分析方法は、簡便でかつ測
定感度も高いので各種抗原や抗体の検査に広く利
用されていることは周知の通りである。 しかし、これら水性溶媒中での凝集試験に共通
した欠点として、担体に対する抗体を含む検体に
おいては、非特異的な凝集反応がおこり判定を誤
まるという問題がある。従つて、検体を測定する
場合には、これらの凝似反応物の影響が出てこな
い程度にまで予め希釈した後に測定を行うか、も
しくは適当な確認試験法を用いて水性溶媒中での
凝集反応の真偽を確かめる必要がある。 また、水性溶媒中でのこれら非特異的凝集反応
を少なくする方法として、測定に用いる水性溶媒
の中に少量の動物蛋白やアクリノールを加える方
法が既に知られている。しかしこれらの方法にお
いてもある程度の非特異凝集反応を防止しうる
が、尚多くの非特異反応が残るので更に優れた方
法の出現が待望されている。 また、非特異反応を消去する別の方法として検
体中の凝似反応物質を感作していない担体で予め
吸着除去する方法もあるが、多数の検体を同時に
短時間に処理するにはあまりにも煩雑である。 従つて、本発明の目的は非特異反応を消去し極
めて検出感度の優れた凝集試験用水性溶媒を提供
せんとするにある。 発明の開示 発明者等は永年この凝集反応における非特異反
応を消去するため測定方法の改良研究を続け、担
体とは異種の動物由来の細胞膜成分を測定系に存
在させることにより測定感度が顕著に改善される
こと、さらに当該細胞膜成分として超音波処理後
の１〜2μの膜通過濾液を用いて、特定濃度に存
在させた場合に、特に好ましい結果が得られるこ
とを見出し、本発明を完成した。即ち、本発明は
凝集試験の際に用いる担体の由来する動物と異な
る動物をその由来とする細胞膜成分を0.001〜0.4
％（ｗ／ｖ）の濃度で含有する凝集試験用水性溶
媒であつて、前記担体が抗体感作ヒツジ赤血球、
前記細胞膜成分がウシおよび／またはヤギ赤血球
膜成分であり、前記細胞膜成分として超音波処理
後の１〜2μの膜通過濾液を用いることを特徴と
する凝集試験用水性溶媒に関する。 この水性溶媒を各種凝集反応試験用試薬の調整
に用いることにより上記測定感度の改善を達成す
ることができる。 水性溶媒としては、従来既知のあらゆる凝集試
験用水性溶媒が利用でき、例えば水、生理食塩
水、各種緩衝液（リン酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、
グリシン緩衝液）、アルブミン溶液、デキストラ
ン溶液、正常ヒト及び動物血清溶液、合成高分子
物質の溶液、界面活性剤含有水溶液、およびこれ
らの組み合せからなる溶液が例示される。当該水
性溶媒のPHは、約6.0〜8.5が好ましく、かかるPH
への調整は緩衝液でおこなわれることが好まし
い。水性溶媒の塩濃度は、比較的低濃度であるこ
とが好ましく、より好ましくは、生理的等張な溶
液である。 なお、さらにこの溶液に上記の従来既知の非特
異凝集反応阻止物質を混合してもよい。担体とし
ては、自体既知のものが使用され、具体的には、
たとえばヒツジ、モルモツト、Ｏ型の人、ニワト
リなどの赤血球をホルマリン、グルタルアルデヒ
ドなどで固定したものなどがあげられ、これらの
うちでも特に好ましいものはヒツジ赤血球であ
る。このような担体は約20μ以下、特に５〜15μ
程度の粒状のものを使用するのが有利である。こ
のような担体に抗体又は抗原を感作させる処理は
自体公知の方法に準じて行うことができる。 本発明にて使用される細胞膜成分とは、たとえ
ば細胞膜を微細に分解したもの（たとえば、細胞
の1.5μ以下の超微細分解物など）などであり、か
かる超微細分解物は、たとえば細胞を超音波処理
することなどによつて得られる。超音波処理にお
ける条件は、通常30℃以下、10〜20KH、10〜60
分間であり、超音波処理後2μの膜を通過したも
のを用いることが好ましい。細胞としては、赤血
球、白血球などの血球、リンパ球、株化リンパ球
などがあげられる。 実施例 モルモツトに精製HBs抗原を免疫してHBs抗
血清を得た。この抗血清を硫安分画法とイオン交
換クロマトグラフイー法とで処理し精製HBs抗
体を得、この精製HBs抗体をグルタルアルデヒ
ドにより固定されたヒツジ赤血球に感作して
HBs抗体感作ヒツジ赤血球を得た。 他方、本発明からなる水性溶媒として0.1Mリ
ン酸緩衝液（PH7.5）に正常動物血清およびウシ
又はヤギの赤血球膜成分を終濃度が0.001及び0.4
％（ｗ／ｖ）になる様に加え、コントロールとし
て無添加のものを用意した。また、終濃度が
0.0001％（ｗ／ｖ）のウシ赤血球膜成分を含有す
るものを比較として用意した。確認試験の結果非
特異凝集をおこすことが分つているクエン酸塩加
入血漿の２検体（表中検体(1)及び(2)）をRPHA
法に従いこの各種水性の溶媒を用いてマイクロプ
レート上でそれぞれ２倍数希釈を行い、その希釈
列へ上記で得たHBs抗体感作ヒツジ赤血球を混
合した。別にHBs抗原が陽性の検体(3)につき同
様に処理、試験した。なお混合量は検体希釈液
25μl、HBs抗体感作ヒツジ赤血球25μlであり室温
で２時間後の凝集の強さ（凝集度）を４，３，
２，１の評価とし、非凝集を評価０として表現し
た時表の成績を得た。 尚赤血球膜成分はそれぞれの洗浄赤血球沈層の
10倍量の水にて溶血せしめた後、PH8.0のリン酸
ナトリウム溶液に懸濁し、超音波処理し1.2μの膜
を通過した液を用いた。
る。 抗原抗体反応や、ある種の動植物菌体、又はウ
イルス由来の凝集物質と生体蛋白質や赤血球との
凝集反応を追跡することにより、それらの一方か
又は両者を定量的に測定する方法は、赤血球凝集
反応（PHA法）、逆受身赤血球凝集反応
（RPHA法）、細菌の凝集反応、又はラテツクス
凝集反応などとして広く臨床検査の分野で利用さ
れている。 背景技術 例えばPHA法について説明すれば、精製した
HBs抗原を凝集試験用担体（以下担体と略す）
であるヒツジ赤血球に感作せしめてHBs抗原感
作ヒツジ赤血球を得、このものと血液検査とを混
合した時に水性溶媒中で凝集反応がみられるか否
かによつて検体中にHBs抗体が存在していたか
否かを判定できる。 また凝集反応がみられた場合は、その検体を更
に段階的に希釈して凝集反応が観察できなくなる
までの希釈倍数を求めることにより、その検体中
のHBs抗体を定量的に測定することができる。 またRPHA法では、精製したHBs抗体を担体
である赤血球に感作してHBs抗体感作赤血球を
製し、このものと検体とを混合した時に水性溶媒
中で凝集反応がみられるか否かによつて、検体中
にHBs抗原が含まれているか否かを検知するこ
とができる。 更にある種のウイルスと鳥類の赤血球とはウイ
ルスの有する凝集素の作用により赤血球を水性溶
媒中で凝集する。この水性溶媒中での凝集反応の
有無、強弱によつてウイルスの濃度を定量的に測
定することができる。これら多くの水性溶媒中で
の凝集反応を利用した分析方法は、簡便でかつ測
定感度も高いので各種抗原や抗体の検査に広く利
用されていることは周知の通りである。 しかし、これら水性溶媒中での凝集試験に共通
した欠点として、担体に対する抗体を含む検体に
おいては、非特異的な凝集反応がおこり判定を誤
まるという問題がある。従つて、検体を測定する
場合には、これらの凝似反応物の影響が出てこな
い程度にまで予め希釈した後に測定を行うか、も
しくは適当な確認試験法を用いて水性溶媒中での
凝集反応の真偽を確かめる必要がある。 また、水性溶媒中でのこれら非特異的凝集反応
を少なくする方法として、測定に用いる水性溶媒
の中に少量の動物蛋白やアクリノールを加える方
法が既に知られている。しかしこれらの方法にお
いてもある程度の非特異凝集反応を防止しうる
が、尚多くの非特異反応が残るので更に優れた方
法の出現が待望されている。 また、非特異反応を消去する別の方法として検
体中の凝似反応物質を感作していない担体で予め
吸着除去する方法もあるが、多数の検体を同時に
短時間に処理するにはあまりにも煩雑である。 従つて、本発明の目的は非特異反応を消去し極
めて検出感度の優れた凝集試験用水性溶媒を提供
せんとするにある。 発明の開示 発明者等は永年この凝集反応における非特異反
応を消去するため測定方法の改良研究を続け、担
体とは異種の動物由来の細胞膜成分を測定系に存
在させることにより測定感度が顕著に改善される
こと、さらに当該細胞膜成分として超音波処理後
の１〜2μの膜通過濾液を用いて、特定濃度に存
在させた場合に、特に好ましい結果が得られるこ
とを見出し、本発明を完成した。即ち、本発明は
凝集試験の際に用いる担体の由来する動物と異な
る動物をその由来とする細胞膜成分を0.001〜0.4
％（ｗ／ｖ）の濃度で含有する凝集試験用水性溶
媒であつて、前記担体が抗体感作ヒツジ赤血球、
前記細胞膜成分がウシおよび／またはヤギ赤血球
膜成分であり、前記細胞膜成分として超音波処理
後の１〜2μの膜通過濾液を用いることを特徴と
する凝集試験用水性溶媒に関する。 この水性溶媒を各種凝集反応試験用試薬の調整
に用いることにより上記測定感度の改善を達成す
ることができる。 水性溶媒としては、従来既知のあらゆる凝集試
験用水性溶媒が利用でき、例えば水、生理食塩
水、各種緩衝液（リン酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、
グリシン緩衝液）、アルブミン溶液、デキストラ
ン溶液、正常ヒト及び動物血清溶液、合成高分子
物質の溶液、界面活性剤含有水溶液、およびこれ
らの組み合せからなる溶液が例示される。当該水
性溶媒のPHは、約6.0〜8.5が好ましく、かかるPH
への調整は緩衝液でおこなわれることが好まし
い。水性溶媒の塩濃度は、比較的低濃度であるこ
とが好ましく、より好ましくは、生理的等張な溶
液である。 なお、さらにこの溶液に上記の従来既知の非特
異凝集反応阻止物質を混合してもよい。担体とし
ては、自体既知のものが使用され、具体的には、
たとえばヒツジ、モルモツト、Ｏ型の人、ニワト
リなどの赤血球をホルマリン、グルタルアルデヒ
ドなどで固定したものなどがあげられ、これらの
うちでも特に好ましいものはヒツジ赤血球であ
る。このような担体は約20μ以下、特に５〜15μ
程度の粒状のものを使用するのが有利である。こ
のような担体に抗体又は抗原を感作させる処理は
自体公知の方法に準じて行うことができる。 本発明にて使用される細胞膜成分とは、たとえ
ば細胞膜を微細に分解したもの（たとえば、細胞
の1.5μ以下の超微細分解物など）などであり、か
かる超微細分解物は、たとえば細胞を超音波処理
することなどによつて得られる。超音波処理にお
ける条件は、通常30℃以下、10〜20KH、10〜60
分間であり、超音波処理後2μの膜を通過したも
のを用いることが好ましい。細胞としては、赤血
球、白血球などの血球、リンパ球、株化リンパ球
などがあげられる。 実施例 モルモツトに精製HBs抗原を免疫してHBs抗
血清を得た。この抗血清を硫安分画法とイオン交
換クロマトグラフイー法とで処理し精製HBs抗
体を得、この精製HBs抗体をグルタルアルデヒ
ドにより固定されたヒツジ赤血球に感作して
HBs抗体感作ヒツジ赤血球を得た。 他方、本発明からなる水性溶媒として0.1Mリ
ン酸緩衝液（PH7.5）に正常動物血清およびウシ
又はヤギの赤血球膜成分を終濃度が0.001及び0.4
％（ｗ／ｖ）になる様に加え、コントロールとし
て無添加のものを用意した。また、終濃度が
0.0001％（ｗ／ｖ）のウシ赤血球膜成分を含有す
るものを比較として用意した。確認試験の結果非
特異凝集をおこすことが分つているクエン酸塩加
入血漿の２検体（表中検体(1)及び(2)）をRPHA
法に従いこの各種水性の溶媒を用いてマイクロプ
レート上でそれぞれ２倍数希釈を行い、その希釈
列へ上記で得たHBs抗体感作ヒツジ赤血球を混
合した。別にHBs抗原が陽性の検体(3)につき同
様に処理、試験した。なお混合量は検体希釈液
25μl、HBs抗体感作ヒツジ赤血球25μlであり室温
で２時間後の凝集の強さ（凝集度）を４，３，
２，１の評価とし、非凝集を評価０として表現し
た時表の成績を得た。 尚赤血球膜成分はそれぞれの洗浄赤血球沈層の
10倍量の水にて溶血せしめた後、PH8.0のリン酸
ナトリウム溶液に懸濁し、超音波処理し1.2μの膜
を通過した液を用いた。
【表】
表１に示した結果より、ウシ赤血球膜成分、ヤ
ギ赤血球膜成分又はヒツジ組織成分を0.001〜0.4
％（ｗ／ｖ）の濃度に添加することにより非特異
反応は１：64〜１：128から１：４〜１：16にま
で抑えられている。また陽性検体ではこれらのも
のを添加しても影響はないことが判る。 他方、ウシ赤血球膜成分を0.0001％（ｗ／ｖ）添
加した場合には、非特異凝集反応を阻止すること
ができず、0.001％（ｗ／ｖ）よりも低濃度では、
本発明が奏する効果は得られないことが判る。 以上の如く本発明からなる凝集試験用水性溶媒
は、著るしく凝集反応の感度を上昇させるもので
あつて、すぐれた凝集試験を可能とするものであ
る。 以下に本発明を実施例によつて示す。 実施例 １ ヒツジ赤血球をタルタルアルデヒドで固定し、
公知の方法で抗HBs抗体を感作して担体を得た。
本担体を用いた凝集試験用水性溶媒として、
0.1Mリン酸緩衝液PH7.3にウシ赤血球膜成分0.1％
〔ｗ／ｖ）およびヤギ赤血球膜成分0.1％（ｗ／
ｖ）を加えた。なお、ウシ赤血球膜成分及びヤギ
赤血球膜成分はそれぞれ、実験例における膜成分
の調製と同様にして調製したものである。 実施例 ２ ニワトリ赤血球をグルタルアルデヒドで固定し
公知の方法でHBs抗原を感作した。 本担体を用いた凝集試験用水性溶媒として、
0.9％塩化ナトリウム溶液にヒトリンパ球膜成分
およびガチヨウ赤血球膜成分をそれぞれ0.1％濃
度に加えた。 実施例 ３ 実施例１及び２において、適当な保存剤（例え
ばNaN3）を加えた。
ギ赤血球膜成分又はヒツジ組織成分を0.001〜0.4
％（ｗ／ｖ）の濃度に添加することにより非特異
反応は１：64〜１：128から１：４〜１：16にま
で抑えられている。また陽性検体ではこれらのも
のを添加しても影響はないことが判る。 他方、ウシ赤血球膜成分を0.0001％（ｗ／ｖ）添
加した場合には、非特異凝集反応を阻止すること
ができず、0.001％（ｗ／ｖ）よりも低濃度では、
本発明が奏する効果は得られないことが判る。 以上の如く本発明からなる凝集試験用水性溶媒
は、著るしく凝集反応の感度を上昇させるもので
あつて、すぐれた凝集試験を可能とするものであ
る。 以下に本発明を実施例によつて示す。 実施例 １ ヒツジ赤血球をタルタルアルデヒドで固定し、
公知の方法で抗HBs抗体を感作して担体を得た。
本担体を用いた凝集試験用水性溶媒として、
0.1Mリン酸緩衝液PH7.3にウシ赤血球膜成分0.1％
〔ｗ／ｖ）およびヤギ赤血球膜成分0.1％（ｗ／
ｖ）を加えた。なお、ウシ赤血球膜成分及びヤギ
赤血球膜成分はそれぞれ、実験例における膜成分
の調製と同様にして調製したものである。 実施例 ２ ニワトリ赤血球をグルタルアルデヒドで固定し
公知の方法でHBs抗原を感作した。 本担体を用いた凝集試験用水性溶媒として、
0.9％塩化ナトリウム溶液にヒトリンパ球膜成分
およびガチヨウ赤血球膜成分をそれぞれ0.1％濃
度に加えた。 実施例 ３ 実施例１及び２において、適当な保存剤（例え
ばNaN3）を加えた。
Claims (1)
- １ ウシ及び／又はヤギ赤血球膜成分を、超音波
処理後の１〜2μの膜通過濾液として、0.001〜0.4
％（ｗ／ｖ）の濃度で含有する水性溶媒であつ
て、抗体感作ヒツジ赤血球を担体とする凝集試験
用水性溶媒。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12652782A JPS5915859A (ja) | 1982-07-19 | 1982-07-19 | 凝集試験用水性溶媒 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12652782A JPS5915859A (ja) | 1982-07-19 | 1982-07-19 | 凝集試験用水性溶媒 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5915859A JPS5915859A (ja) | 1984-01-26 |
| JPH0377461B2 true JPH0377461B2 (ja) | 1991-12-10 |
Family
ID=14937406
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP12652782A Granted JPS5915859A (ja) | 1982-07-19 | 1982-07-19 | 凝集試験用水性溶媒 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5915859A (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0954091A (ja) * | 1995-08-09 | 1997-02-25 | Nippon Zoki Pharmaceut Co Ltd | 抗赤血球抗体の測定法 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5523402A (en) * | 1978-03-24 | 1980-02-19 | Yatoron:Kk | Manufacture of reagent for indirect red corpuscle agglutination which absorbs simultaneously heterogenetic antibody |
-
1982
- 1982-07-19 JP JP12652782A patent/JPS5915859A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5915859A (ja) | 1984-01-26 |
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