JPS5934117B2 - 血清中でオキシダ−ゼの作用下に酸素によりｈ↓２ｏ↓２を形成する物質を定量測定するための方法及び試薬 - Google Patents
血清中でオキシダ−ゼの作用下に酸素によりｈ↓２ｏ↓２を形成する物質を定量測定するための方法及び試薬Info
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- JPS5934117B2 JPS5934117B2 JP52000709A JP70977A JPS5934117B2 JP S5934117 B2 JPS5934117 B2 JP S5934117B2 JP 52000709 A JP52000709 A JP 52000709A JP 70977 A JP70977 A JP 70977A JP S5934117 B2 JPS5934117 B2 JP S5934117B2
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- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、形成されたＨ２Ｏ２をメタノール及びカタラ
ーゼの存在でホルムアルデヒドに変換し、このホルムア
ルデヒドをＦｅＣｌ３の存在でヒドラゾンと反応させか
つその際に形成された色素を光度測定することにより、
オキシダーゼの作用下に酸素によりＨ２Ｏ２を形成する
物質を定量測定する方法に関する。
ーゼの存在でホルムアルデヒドに変換し、このホルムア
ルデヒドをＦｅＣｌ３の存在でヒドラゾンと反応させか
つその際に形成された色素を光度測定することにより、
オキシダーゼの作用下に酸素によりＨ２Ｏ２を形成する
物質を定量測定する方法に関する。
仏国特許第２１９８６４２号明細書から、尿酸をＨ２Ｏ
２の形成下にウリガーゼと反応させ、Ｈ２Ｏ２をホルム
アルデヒドの形成下にカタラーゼ及びメタノールと反応
させ、このホルムアルデヒドを３ーメチルベンゾチアゾ
ロンヒドラゾン及びＦｅＣｌ３と、測光により測定する
ことができる色素の形成下に反応させることにより尿酸
を測定する方法が公知である。
２の形成下にウリガーゼと反応させ、Ｈ２Ｏ２をホルム
アルデヒドの形成下にカタラーゼ及びメタノールと反応
させ、このホルムアルデヒドを３ーメチルベンゾチアゾ
ロンヒドラゾン及びＦｅＣｌ３と、測光により測定する
ことができる色素の形成下に反応させることにより尿酸
を測定する方法が公知である。
相応する方法が、グルコースオキシダーゼの使用下にグ
ルコースを測定することに関してゞケミカル・エンド・
フアーマスユーチかいブリチン（Ｃｈｅｍ．ＰｈａｒＩ
ｎ．Ｂｕｌｌ．）２、１７巻、１３０４〜１３０５頁（
１９６９年）から公知である。この方法の利点は、医薬
及び他の異種物質に相対する際の比較的低い妨害感度で
ある。しかしながら、著明な欠点はＭＢＴＨの低い安定
性でありかつ呈色反応で形成される色素の比較的不良の
水溶性である。これにより、個々の測定間の進行遅延が
比較的高く、従つてこの方法は特に分析自動装置での実
施には殆んど適してはいない。この傾向は、呈色に必要
な酸化工程で、不溶の生成物が形成される副反応が起る
ので一層強くなる。分析自動装置ではこれは導管、例え
ばチユーブ及びガラス製螺管中で沈澱し、それ故更に進
行遅延が著しくなる。更に、これにより不安定な、即ち
浮動する基線が描かれる。これらの欠点にもかかわらず
該公知方法を適用し得るようにするために、分析時間を
著しく長くしかつ装置を度々洗浄しなければならなかつ
た。
ルコースを測定することに関してゞケミカル・エンド・
フアーマスユーチかいブリチン（Ｃｈｅｍ．ＰｈａｒＩ
ｎ．Ｂｕｌｌ．）２、１７巻、１３０４〜１３０５頁（
１９６９年）から公知である。この方法の利点は、医薬
及び他の異種物質に相対する際の比較的低い妨害感度で
ある。しかしながら、著明な欠点はＭＢＴＨの低い安定
性でありかつ呈色反応で形成される色素の比較的不良の
水溶性である。これにより、個々の測定間の進行遅延が
比較的高く、従つてこの方法は特に分析自動装置での実
施には殆んど適してはいない。この傾向は、呈色に必要
な酸化工程で、不溶の生成物が形成される副反応が起る
ので一層強くなる。分析自動装置ではこれは導管、例え
ばチユーブ及びガラス製螺管中で沈澱し、それ故更に進
行遅延が著しくなる。更に、これにより不安定な、即ち
浮動する基線が描かれる。これらの欠点にもかかわらず
該公知方法を適用し得るようにするために、分析時間を
著しく長くしかつ装置を度々洗浄しなければならなかつ
た。
ついには、基線の浮動性を甘受しなければならなかつた
。それ故、本発明は、初めに挙げたような方法で前記の
欠点を除くという課題に基づいている。
。それ故、本発明は、初めに挙げたような方法で前記の
欠点を除くという課題に基づいている。
本発明により、この課題は、形成されたＨ２Ｏ２をメタ
ノール及びカタラーゼの存在でホルムアルデヒドに変換
し、これを酸化剤の存在でヒドラゾンと反応させかつこ
の際に形成される色素を光度測定することにより血清中
でオキシダーゼの作用下に酸素によりＨ２Ｏ２を形成す
る物質を定量測定するに当り、ヒドラゾンとして３−メ
チル−２一（スルホニノ（へ）−ベンゾチアゾロンヒド
ラゾンを使用することにより解決される。本発明方法で
非常に良好に溶解する色素が形成されることは驚異的で
ある。
ノール及びカタラーゼの存在でホルムアルデヒドに変換
し、これを酸化剤の存在でヒドラゾンと反応させかつこ
の際に形成される色素を光度測定することにより血清中
でオキシダーゼの作用下に酸素によりＨ２Ｏ２を形成す
る物質を定量測定するに当り、ヒドラゾンとして３−メ
チル−２一（スルホニノ（へ）−ベンゾチアゾロンヒド
ラゾンを使用することにより解決される。本発明方法で
非常に良好に溶解する色素が形成されることは驚異的で
ある。
それ故、色素形成の際に生じる酸化生成物の不溶性に原
因を帰すべき前記の難点がもはや惹起されない。このこ
とは驚異的である。それというのもＭＢＴＨ自体は水性
媒体中で良好な溶解性を有しており（ＰＨｌで４．９９
／１００ｍ．１）かつこの点では言うべきことはないが
、本発明で使用するＭＢＴＨ−スルホネートはＭＢＴＨ
よりも著しく低い溶解性を有している（ＰＨｌで０．６
９／１００ｍ１）ので、形成された酸化生成物により更
に低下した溶解度及び相応して低下した利用性がこのよ
うな方法範囲では予測されたからである。原則的に、本
発明方法は、Ｈ２Ｏ２を形成するすべての測定に適用す
ることができる。
因を帰すべき前記の難点がもはや惹起されない。このこ
とは驚異的である。それというのもＭＢＴＨ自体は水性
媒体中で良好な溶解性を有しており（ＰＨｌで４．９９
／１００ｍ．１）かつこの点では言うべきことはないが
、本発明で使用するＭＢＴＨ−スルホネートはＭＢＴＨ
よりも著しく低い溶解性を有している（ＰＨｌで０．６
９／１００ｍ１）ので、形成された酸化生成物により更
に低下した溶解度及び相応して低下した利用性がこのよ
うな方法範囲では予測されたからである。原則的に、本
発明方法は、Ｈ２Ｏ２を形成するすべての測定に適用す
ることができる。
このＨ２Ｏ２形成はオキシダーゼによる酵素による触媒
作用で惹起され、従つて一般にこの方法はオキシダーゼ
のすべての基質の測定に好適である。オキシダーゼでは
、その基質をＨ２Ｏ２の形成下に分子状酸素により酸化
することができるような酵素が包含される。この種のオ
キシダーゼの代表的な例は、ウリガーゼ、グルコースオ
キシダーゼ及びコレステリンオキシダーゼである。
作用で惹起され、従つて一般にこの方法はオキシダーゼ
のすべての基質の測定に好適である。オキシダーゼでは
、その基質をＨ２Ｏ２の形成下に分子状酸素により酸化
することができるような酵素が包含される。この種のオ
キシダーゼの代表的な例は、ウリガーゼ、グルコースオ
キシダーゼ及びコレステリンオキシダーゼである。
これに対応する基質は尿素、グルコースもしくはコレス
テリンである。この方法は、冒頭に挙げた文献から公知
の条件により実施することができる。
テリンである。この方法は、冒頭に挙げた文献から公知
の条件により実施することができる。
測定すべき物質の、相応するオキシダーゼ、例えばウリ
ガーゼ、コレステリンオキシダーゼ又はグルコースオキ
シダーゼによる反応は当業者に公知である方法で行なう
。形成されたＨ２Ｏ２をメタノール及びカタラーゼと、
ホルムアルデヒドと水の形成下に反応させる。この反応
も同様に当業者に周知であり、ここで詳説する必要はな
い。形成されたホルムアルデヒドを酸化剤の存在でＭＢ
ＴＨ−スルホネートと反応させてλＭａｘ６２Ｏ及び６
７０ｎｍ，ε〜６００００の色素を形成する。色素形成
の反応は次の反応式により与えられる：本発明に特に好
適な酸化剤の例は、カリウムシアノフエラート（１１）
、ＦｅＣｌ３又は（ＮＨ４）４Ｃｅ（ＳＯ４）４である
。
ガーゼ、コレステリンオキシダーゼ又はグルコースオキ
シダーゼによる反応は当業者に公知である方法で行なう
。形成されたＨ２Ｏ２をメタノール及びカタラーゼと、
ホルムアルデヒドと水の形成下に反応させる。この反応
も同様に当業者に周知であり、ここで詳説する必要はな
い。形成されたホルムアルデヒドを酸化剤の存在でＭＢ
ＴＨ−スルホネートと反応させてλＭａｘ６２Ｏ及び６
７０ｎｍ，ε〜６００００の色素を形成する。色素形成
の反応は次の反応式により与えられる：本発明に特に好
適な酸化剤の例は、カリウムシアノフエラート（１１）
、ＦｅＣｌ３又は（ＮＨ４）４Ｃｅ（ＳＯ４）４である
。
殊に、これらの酸化剤は稀酸、特に硫酸中の０５２〜５
％一溶液として使用する。溶剤を選択するに当り、形成
された色素の吸光係数がＰＨ値に左右されかつ酸性媒体
中３より低いＰＨ値で最も強い。それ故、ＰＨＯ．５〜
３の間で作業すると有利である。このＰＨ値を得るため
に、硫酸、塩酸、燐酸、硝酸等のような強い鉱酸中で作
業すると有利である。本発明の他の目的は、オキシダー
ゼ、カタラーゼ、メタノール、緩衝液、酸化剤及び酸を
含有する、血清中でオキシダーゼの作用下に酸素により
Ｈ２Ｏ２を形成する物質を定量測定するための試薬であ
り、これは３−メチル−２−（スルホニル）一ベンゾチ
アゾロンヒドラゾンを含有することを特徴とする。
％一溶液として使用する。溶剤を選択するに当り、形成
された色素の吸光係数がＰＨ値に左右されかつ酸性媒体
中３より低いＰＨ値で最も強い。それ故、ＰＨＯ．５〜
３の間で作業すると有利である。このＰＨ値を得るため
に、硫酸、塩酸、燐酸、硝酸等のような強い鉱酸中で作
業すると有利である。本発明の他の目的は、オキシダー
ゼ、カタラーゼ、メタノール、緩衝液、酸化剤及び酸を
含有する、血清中でオキシダーゼの作用下に酸素により
Ｈ２Ｏ２を形成する物質を定量測定するための試薬であ
り、これは３−メチル−２−（スルホニル）一ベンゾチ
アゾロンヒドラゾンを含有することを特徴とする。
当該試薬は乾燥した形で又は溶液として存在してよい。
その都度使われる緩衝物質は使用する酵素に相応させか
つ最も好適なＰＨ値に応じて決定する。両方共当業者に
は公知である。例えばカタラーゼと共にウリガーゼを使
用する場合には、ＰＨ値約７〜９、殊に８．０〜８．６
が適当である。硼酸塩緩衝液は優れている。コレステリ
ンオキシダーゼとカタラーゼの場合には、ＰＨ値６．０
〜８．５、殊に６，５〜７５が好適である。この場合に
は燐酸塩緩衝液が優れている。メタノール濃度は約２〜
８容量７０にすべきである。
つ最も好適なＰＨ値に応じて決定する。両方共当業者に
は公知である。例えばカタラーゼと共にウリガーゼを使
用する場合には、ＰＨ値約７〜９、殊に８．０〜８．６
が適当である。硼酸塩緩衝液は優れている。コレステリ
ンオキシダーゼとカタラーゼの場合には、ＰＨ値６．０
〜８．５、殊に６，５〜７５が好適である。この場合に
は燐酸塩緩衝液が優れている。メタノール濃度は約２〜
８容量７０にすべきである。
しかしこれよりも高い或いは低い濃度も適用することが
できる。次に本発明を実施例により詳説する。
できる。次に本発明を実施例により詳説する。
Ａ）本発明で使用するヒドラゾンの製造
純粋な（９５〜９８％）硫酸１５８０ｍ１に氷冷及び攪
拌下に、ＳＯ３一含量が少なくとも６５％である発煙硫
酸１０００ｍ１を徐々に加える。
拌下に、ＳＯ３一含量が少なくとも６５％である発煙硫
酸１０００ｍ１を徐々に加える。
得られた混合物を０〜５℃に冷却しかつＮ−メチルベン
ゾチアゾロンヒドラゾンヒドロクリロド（ＭＢＴＨ・Ｈ
ＣＩ）５００９を少量ずつ加える。温度が１０〜１３℃
を越えないように注意する。添加は１時間後に終結する
。その後、溶液が完全に澄明で、僅かに黄色に着色する
まで約＋１０℃で更に１．５時間攪拌する。バツチを注
意深く氷２０１土に注ぎかつ温度を更に氷を加えること
によりＯ℃にする。
ゾチアゾロンヒドラゾンヒドロクリロド（ＭＢＴＨ・Ｈ
ＣＩ）５００９を少量ずつ加える。温度が１０〜１３℃
を越えないように注意する。添加は１時間後に終結する
。その後、溶液が完全に澄明で、僅かに黄色に着色する
まで約＋１０℃で更に１．５時間攪拌する。バツチを注
意深く氷２０１土に注ぎかつ温度を更に氷を加えること
によりＯ℃にする。
２時間放置した後で、形成した結晶を吸引沢取し、冷い
蒸留水で洗浄しかつ洗浄水がサルフェートを含まなくな
るまでこの洗浄を繰返す。
蒸留水で洗浄しかつ洗浄水がサルフェートを含まなくな
るまでこの洗浄を繰返す。
形成された遊離酸を再結晶するに当り、なお湿つている
物質を蒸留水約４１中に懸濁させかつ十分な攪拌下に新
たに調整した３０％−ＫＯＨ約４００ｍ１でＰＨ８．Ｏ
に調節した。
物質を蒸留水約４１中に懸濁させかつ十分な攪拌下に新
たに調整した３０％−ＫＯＨ約４００ｍ１でＰＨ８．Ｏ
に調節した。
その際に全沈澱は溶解する。その後、淵過器〔タリスタ
ルテオリツト（ＫｒｉｓｔａｌｌｔｈｅＯｒｉｔ）〕を
介して澄明淵過しかつ１０Ｎ一硫酸を用いて十分な攪拌
下にＰＨｌ．５に酸性化する。沈澱を１時間放置し、吸
引淵過しかつ前記のように洗浄して酸を除去する。引続
いて、真空中４『ＣでＣａｃｌ２上で乾燥させる。収量
：５００−５４０９。カリウム塩を製造する際には、そ
のようにして得られた酸を熱水１．５１１中に懸濁させ
かつ新たに調製した３０％−ＫＯＨ約４００７１１でＰ
Ｈ８にする。
ルテオリツト（ＫｒｉｓｔａｌｌｔｈｅＯｒｉｔ）〕を
介して澄明淵過しかつ１０Ｎ一硫酸を用いて十分な攪拌
下にＰＨｌ．５に酸性化する。沈澱を１時間放置し、吸
引淵過しかつ前記のように洗浄して酸を除去する。引続
いて、真空中４『ＣでＣａｃｌ２上で乾燥させる。収量
：５００−５４０９。カリウム塩を製造する際には、そ
のようにして得られた酸を熱水１．５１１中に懸濁させ
かつ新たに調製した３０％−ＫＯＨ約４００７１１でＰ
Ｈ８にする。
溶液を８０℃に加熱しかつ僅かな混濁が生じるまで沸騰
温度のイソプロパノール約４１を撹拌下に混合する。そ
の後、混合物を氷浴中で冷却しかつ−２０℃で結晶させ
る。結晶を吸引涙取し、メタノールで洗浄しかつ再び真
空中高められた温度でＣａｃｌ２上で、一定重量になる
まで乾燥させる。収量：カリウム塩５００〜５２０９（
理論量の７２〜７５％）。例１ 尿酸の測定 反応は次式により進行する： 測定は、テヒニコン社（ＦｉｒｍａＴｅｃｈｎｉｃＯｎ
）製のオートアナライザー（ＡｕｔＯａｎａｌｙ２ｅｒ
［有］）で次のように実施する。
温度のイソプロパノール約４１を撹拌下に混合する。そ
の後、混合物を氷浴中で冷却しかつ−２０℃で結晶させ
る。結晶を吸引涙取し、メタノールで洗浄しかつ再び真
空中高められた温度でＣａｃｌ２上で、一定重量になる
まで乾燥させる。収量：カリウム塩５００〜５２０９（
理論量の７２〜７５％）。例１ 尿酸の測定 反応は次式により進行する： 測定は、テヒニコン社（ＦｉｒｍａＴｅｃｈｎｉｃＯｎ
）製のオートアナライザー（ＡｕｔＯａｎａｌｙ２ｅｒ
［有］）で次のように実施する。
チユーブ型ポンプを用いて酵素試薬１ｍ１／分を流動系
中にポンプ装入する。試薬に同じチユーブ型ポンプを用
いて測定すべき尿酸試料０．１ｍ１／分を供給する。適
当な装置を用いて気泡により分割した混合物を、引続い
て２０回巻きのガラス製螺管を通して流動させる。この
際に、反応１及びが進行する。その後、混合物は透析器
中に達する。試薬が連続流動する透析器は、半透膜で分
けられているに過ぎない２つの流れがそれを流動し得る
ように構成されている。分子量約６００以下の分子が既
に記載した混合物から、同一のチユーブ型ポンプにより
供給される色原体試薬から成つている受容液中に透析さ
れる。ポンプ速度は１，０ｍ１／分である。この流動体
もまた適当な装置を用いて通気することにより分割する
。受容液中に透析されたホルムアルデヒドは、酸化試薬
をポンプ速度０．２３ｍ１／分で混合した後で、他のガ
ラス製螺管を流動する際に前記の色素に変換される。
中にポンプ装入する。試薬に同じチユーブ型ポンプを用
いて測定すべき尿酸試料０．１ｍ１／分を供給する。適
当な装置を用いて気泡により分割した混合物を、引続い
て２０回巻きのガラス製螺管を通して流動させる。この
際に、反応１及びが進行する。その後、混合物は透析器
中に達する。試薬が連続流動する透析器は、半透膜で分
けられているに過ぎない２つの流れがそれを流動し得る
ように構成されている。分子量約６００以下の分子が既
に記載した混合物から、同一のチユーブ型ポンプにより
供給される色原体試薬から成つている受容液中に透析さ
れる。ポンプ速度は１，０ｍ１／分である。この流動体
もまた適当な装置を用いて通気することにより分割する
。受容液中に透析されたホルムアルデヒドは、酸化試薬
をポンプ速度０．２３ｍ１／分で混合した後で、他のガ
ラス製螺管を流動する際に前記の色素に変換される。
その吸光度は、貫流キユベツトを備えている適当な光度
計中で（気泡の除去後）６２０又は６７０ｍ１測定する
。知られている濃度の尿酸標準との較正後に、この方法
により未知の試料中の尿酸濃度を測定することができる
。この装置を試料供給部と接続すると、６０種の試料を
１時間で測定することができる。同一試料の多重試験で
の変動係数は１％である。
計中で（気泡の除去後）６２０又は６７０ｍ１測定する
。知られている濃度の尿酸標準との較正後に、この方法
により未知の試料中の尿酸濃度を測定することができる
。この装置を試料供給部と接続すると、６０種の試料を
１時間で測定することができる。同一試料の多重試験で
の変動係数は１％である。
試料溶液２０ｍ９／１００Ｔｎ１までは吸光度と尿酸濃
度との間には直線的な関係が得られ、それ故臨床的診断
に重要である範囲全体が包含される。妨害を含まないも
のであるとして認められている血清中の尿酸測定法〔Ｎ
．Ｋａｇｅｙａｍａ著、ゞクリニカ・キミカ・アクタ″
（Ｃｌｉｎ．Ｃｈｉｍ．Ａ一Ｃｔａ）、３１巻、４２１
頁（１９７１年）及びＨ．Ｍａｔｈｉｅｓ及びその他共
著、ゞメジカル・クリニツクス７（Ｍｅｄ．Ｃｌｉｎ）
、６９巻、６０７頁（１９７４年）〕との方法比較を実
施する際に、相関係数０．９９３の式：ｙ−０．９８ｘ
＋０．３の相関直線が得られる。ｘ一値は比較方法であ
り、ｙ一値は本方法である。
度との間には直線的な関係が得られ、それ故臨床的診断
に重要である範囲全体が包含される。妨害を含まないも
のであるとして認められている血清中の尿酸測定法〔Ｎ
．Ｋａｇｅｙａｍａ著、ゞクリニカ・キミカ・アクタ″
（Ｃｌｉｎ．Ｃｈｉｍ．Ａ一Ｃｔａ）、３１巻、４２１
頁（１９７１年）及びＨ．Ｍａｔｈｉｅｓ及びその他共
著、ゞメジカル・クリニツクス７（Ｍｅｄ．Ｃｌｉｎ）
、６９巻、６０７頁（１９７４年）〕との方法比較を実
施する際に、相関係数０．９９３の式：ｙ−０．９８ｘ
＋０．３の相関直線が得られる。ｘ一値は比較方法であ
り、ｙ一値は本方法である。
その結果は、非常に良好な相関性を証明している。例２
コレステリン測定
測定は、遊離のコレステリンか又はコレステリンエステ
ルを測定するかどうかに応じて行なう。
ルを測定するかどうかに応じて行なう。
これらは、例１の式及びと関連して次式の１ａ及びＩｂ
に相等する：試薬： １．酵素試薬： コレステリンオキシダーゼ＞０．０７Ｕ／ｍｌコレステ
リンエステラーゼ＞０．０７Ｕ／ｍｌカタラーゼ ９０
０Ｕ／ｍｌ 燐酸塩緩衝液 ＰＨ７．Ｏ，Ｏ．４モル メタノール ４％（ｖ／ｖ） ヒドロキシポリエトキシドデカン ０．３％２．色原体
試薬： 水中の０．１％−ＳＭＢＴＨ溶液 ３．酸化試薬： ０．４５Ｎ−硫酸中の１％−ＦｅＣｌ３溶液装置の構造
は例１に記載したものと同一である。
に相等する：試薬： １．酵素試薬： コレステリンオキシダーゼ＞０．０７Ｕ／ｍｌコレステ
リンエステラーゼ＞０．０７Ｕ／ｍｌカタラーゼ ９０
０Ｕ／ｍｌ 燐酸塩緩衝液 ＰＨ７．Ｏ，Ｏ．４モル メタノール ４％（ｖ／ｖ） ヒドロキシポリエトキシドデカン ０．３％２．色原体
試薬： 水中の０．１％−ＳＭＢＴＨ溶液 ３．酸化試薬： ０．４５Ｎ−硫酸中の１％−ＦｅＣｌ３溶液装置の構造
は例１に記載したものと同一である。
唯一の相違：試料と酵素試薬との混合後に、溶液は３７
．５℃の加熱浴中を流動する。
．５℃の加熱浴中を流動する。
この場合には、反応１ａ，Ｉｂが進行する。引続く過程
は例１の尿酸測定の場合のそれと同じである。分析を実
施する際には、試料を１：２５に前稀釈する。それとい
うのもさもないと極めて高い吸光度が得られるはずだか
らである。吸光度とコレステリン濃度との間の直線関係
の範囲は試料（血清）１００ｍ１中のコレステリン６０
０Ｔｎ９までである。
は例１の尿酸測定の場合のそれと同じである。分析を実
施する際には、試料を１：２５に前稀釈する。それとい
うのもさもないと極めて高い吸光度が得られるはずだか
らである。吸光度とコレステリン濃度との間の直線関係
の範囲は試料（血清）１００ｍ１中のコレステリン６０
０Ｔｎ９までである。
同一試料の多重測定での変動係数は１％である。
正確でありかつ妨害を含まないものとして認められてい
る参照法〔レツシユラウ〕（Ｒｅｆｅｒｅｎｚｍ一Ｅｔ
ｈＯｄｅ；Ｐ．ＲＯｅｓｃｈｌａｕ）及びその他の共著
、゛Ｚ．Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｃｌｉｎ．ＢｉＯｃｈｅ
ｍ．’、１２巻、２２６頁（１９７４年）〕との方法の
比較により、相関係数０．９９の式：ｙ ＝ ０．９８
ｘ＋ ５．４の相関直線が得られる。
る参照法〔レツシユラウ〕（Ｒｅｆｅｒｅｎｚｍ一Ｅｔ
ｈＯｄｅ；Ｐ．ＲＯｅｓｃｈｌａｕ）及びその他の共著
、゛Ｚ．Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｃｌｉｎ．ＢｉＯｃｈｅ
ｍ．’、１２巻、２２６頁（１９７４年）〕との方法の
比較により、相関係数０．９９の式：ｙ ＝ ０．９８
ｘ＋ ５．４の相関直線が得られる。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 形成されたＨ＿２Ｏ＿２をメタノール及びカタラー
ゼの存在でホルムアルデヒドに変換し、これを酸化剤の
存在でヒドラゾンと反応させかつその際に形成された色
素を光度測定することにより、血清中でオキシダーゼの
作用下に酸素によりＨ＿２Ｏ＿２を形成する物質を定量
測定するに当り、ヒドラゾンとして３−メチル−２−（
スルホニル）−ベンゾチアゾロンヒドラゾンを使用する
ことを特徴とする血清中でオキシダーゼの作用下に酸素
によりＨ＿２Ｏ＿２を形成する物質を定量測定するため
の方法。 ２ 尿素、グルコースもしくはコレステリンを測定しか
つオキシダーゼとしてウリカーゼ、グルコースオキシダ
ーゼもしくはコレステリンオキシダーゼを使用すること
を特徴とする特許請求の範囲第１項記載の方法。 ３ 酸化剤としてカリウムシアノフエラート（III）、
ＦｅＣｌ＿３又は（ＮＨ＿４）＿４Ｃｅ（ＳＯ＿４）＿
４を使用することを特徴とする特許請求の範囲第１項記
載の方法。 ４ 酸化剤を稀酸中の０．２〜５％一溶液として使用す
ることを特徴とする特許請求の範囲第３項記載の方法。 ５ 色素形成をｐＨ値０．５〜３で実施することを特徴
とする特許請求の範囲第１項記載の方法。 ６ オキシダーゼ、カタラーゼ、メタノール、緩衝液、
酸化剤及び酸を含有している、血清中でオキシダーゼの
作用下に酸素によりＨ＿２Ｏ＿２を形成する物質を定量
測定するための試薬において、３−メチル−２−（スル
ホニル）−ベンゾチアゾロンヒドラゾンが含有されてい
ることを特徴とする血清中でオキシダーゼの作用下に酸
素によりＨ＿２Ｏ＿２を形成する物質を定量測定するた
めの試薬。 ７ ウリカーゼ＞０．１Ｕ／ｍｌ カタラーゼ＞８００Ｕ／ｍｌ 緩衝液ｐＨ７〜９０．０２〜０．１モル メタノール２〜８容量％ 非イオン表面活性剤０．０１〜０．１％ 及びこれとは別個に ＳＭＢＴＨ０．０３〜０％ 稀酸流中のカリウムシアノフエラート（III）０．３〜
３％を含有することを特徴とする尿酸を測定するための
特許請求の範囲第６項記載の試薬。 ８ コレステリンオキシダーゼ＞０．０５Ｕ／ｍｌコレ
ステリンエステラーゼ＞０．０５Ｕ／ｍｌカタラーゼ＞
８００Ｕ／ｍｌ緩衝液ｐＨ６．０〜８．００．２〜１．
０モルメタノール２〜８容量％非イオン表面活性剤０．
１〜０．８％ 及びこれとは別個に ＳＭＢＴＨ０．０３〜０．５％ 稀硫酸中のＦｅＣｌ＿３０．５〜３．０％を含有するこ
とを特徴とする特許請求の範囲第６項記載の試薬。 ９ 緩衝液として硼酸塩緩衝液ｐＨ８．０〜８．６を含
有することを特徴とする特許請求の範囲第７項記載の試
薬。 １０ 緩衝液として燐酸塩緩衝液ｐＨ６．５〜７．５を
含有することを特徴とする特許請求の範囲第８項記載の
試薬。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE000P26005265 | 1976-01-08 | ||
| DE2600526A DE2600526C3 (de) | 1976-01-08 | 1976-01-08 | Verfahren zur quantitativen Bestimmung von mit Sauerstoff unter Oxidaseeinwirkung H↓2↓O↓2↓ bildenden Substanzen und Reagens zu seiner Durchführung |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5286392A JPS5286392A (en) | 1977-07-18 |
| JPS5934117B2 true JPS5934117B2 (ja) | 1984-08-20 |
Family
ID=5967159
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP52000709A Expired JPS5934117B2 (ja) | 1976-01-08 | 1977-01-07 | 血清中でオキシダ−ゼの作用下に酸素によりｈ↓２ｏ↓２を形成する物質を定量測定するための方法及び試薬 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4101381A (ja) |
| JP (1) | JPS5934117B2 (ja) |
| DE (1) | DE2600526C3 (ja) |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| JPS55108297A (en) * | 1979-02-13 | 1980-08-20 | Toyobo Co Ltd | Determining method of free fatty acid |
| US4247297A (en) * | 1979-02-23 | 1981-01-27 | Miles Laboratories, Inc. | Test means and method for interference resistant determination of oxidizing substances |
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| US5206148A (en) * | 1989-07-24 | 1993-04-27 | Asahi Kasei Kogyo Kabushiki Kaisha | Method for assaying aliphatic alcohol, aliphatic aldehyde or ω-carboxylic acid derivatives thereof |
| US5518891A (en) * | 1993-03-25 | 1996-05-21 | Actimed Laboratories, Inc. | Dye forming composition and detection of hydrogen peroxide therewith |
| US5710012A (en) * | 1993-08-25 | 1998-01-20 | Actimed Laboratories, Inc. | Salt of 6-carboxy-3-methylbenzothiazolone hydrazone hydrate in colorimetric determination of hydrogen peroxide |
| JPH07155196A (ja) * | 1993-12-10 | 1995-06-20 | Dai Ichi Pure Chem Co Ltd | 生体成分の測定法 |
| US5776719A (en) * | 1997-07-07 | 1998-07-07 | Mercury Diagnostics, Inc. | Diagnostic compositions and devices utilizing same |
| US6040151A (en) | 1998-03-10 | 2000-03-21 | Mercury Diagnostics, Inc. | Diagnostic compositions and devices utilizing same |
| US5989845A (en) | 1996-04-05 | 1999-11-23 | Mercury Diagnostics, Inc. | Diagnostic compositions and devices utilizing same |
| US5962215A (en) * | 1996-04-05 | 1999-10-05 | Mercury Diagnostics, Inc. | Methods for testing the concentration of an analyte in a body fluid |
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| CN114214389B (zh) * | 2022-02-21 | 2022-07-12 | 北京沃森赛瑟生物技术有限公司 | 脂蛋白胆固醇检测方法和试剂盒 |
| CN115201407B (zh) * | 2022-06-06 | 2025-08-15 | 华电电力科学研究院有限公司 | 三氧化硫测量装置、烟气分析仪及三氧化硫测量方法 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT986838B (it) * | 1972-05-12 | 1975-01-30 | Sclavo Inst Sieroterapeut | Complesso di reagenti per la deter minazione enzimatica del glucosio sistema glucosio ossidasi perossi dasi con metodo manuale e automati co con lettura a termine o in cinetica |
| FR2198642A5 (en) | 1972-09-06 | 1974-03-29 | Vogel Charles | Uric acid assay in blood - using stable reagents containing uricase, catalase, methanol and colour formers |
| DK678474A (ja) * | 1974-02-15 | 1975-10-13 | Hoffmann La Roche |
-
1976
- 1976-01-08 DE DE2600526A patent/DE2600526C3/de not_active Expired
- 1976-12-27 US US05/754,878 patent/US4101381A/en not_active Expired - Lifetime
-
1977
- 1977-01-07 JP JP52000709A patent/JPS5934117B2/ja not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE2600526C3 (de) | 1981-06-19 |
| JPS5286392A (en) | 1977-07-18 |
| US4101381A (en) | 1978-07-18 |
| DE2600526B2 (de) | 1980-07-17 |
| DE2600526A1 (de) | 1977-07-14 |
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