JPS5934176B2 - 生理活性ペプチドの製造法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、生理活性ペプチドの合成法に関する。

人間および動物の下垂体の成長機能を抑制する因子とし
てソマトスタチン（ ＳＯｍａｔＯｓｔａｔｉｎ）なる
ペプチドホルモンの存在が知られている。このソマトス
タチンは他に血糖を低下させる作用があることから近年
糖尿病の治療薬としての期待がもたれている。

しかしながら作用時間が短い点、あるいはまた出血傾向
などの血液障害が起こる等の副作用の問題が提起されて
おり、このアミノ酸配例が明らかにされると〔Ｐ．Ｂｒ
ａｚｅａｕｅｔａｌ，．Ｓｃｉｅｎｃｅｌ７９巻７７頁
（１９７３年）〕、上記問題点の解決を目的として各種
近似化合物の合成研究がなされるようになつた。 ★１
本発明者等は、ソマトスタチンのＮ末端アラニン１、
グリシン２は活性発現に必須でないこと、また分子中の
２個のシステインによるジスルフイド結合は活性発現に
必須でないのみならず、化学的に極めて不安定である等
の点に着目し、ソマトスタチンの構造変換につき独自に
研究を続けた結果、Ｃ末端のシステインを下記式のＬ＝
α−アミノスベリン酸に置き代え、このω位カルボキシ
ル基をリジン４ と縮合せしめて環状構造となした次式
で表わされ。

ペプチド（以下Ｌ−Ａｓｕ型ソマトスタチンという）が
、実験動物に対する成長ホルモン分泌抑制作用に関し天
然型ソマトスタチンの活性と同等以上の生物活性を有し
、しかも化学的に安定性が高く、生体内において長い作
用時間を有する期待のされるものであることを知つた。
本発明はこれらの知見にもとづいて完成されたものであ
る。一方、最近ＤＬ−Ａｓｕ型ソマトスタチンが公表さ
れたが〔Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．ＳＯｃ．９８２３６７（
１９７６）、１９７６年４月１４日発行〕、同報告によ
れば、ＤＬ−Ａｓｕ型ソマトスタチンの成長ホルモン分
泌抑制能は天然型ソマトスタチンの半分の活性しか示さ
ない。

すなわち、同報告においては光学不活性なＤＬ−α−ア
ミノスベリン酸を原料として用いるため、目的物質にお
いても対応するＤＬ−α−アミノスベリン酸を構成アミ
ノ酸とする生物学的活性の低いものが得られるにすぎな
い。また同報告によれば、ＤＬ−Ａｓｕ型ソマトスタチ
ンの合成法として、ＤＬ−α−アミノスベリス酸をＮ末
端とするペプチドをアジド法による環化反応に付するも
のであるが、本発明方法によればＬ−α＝アミノスベリ
ン酸をＣ末端とするペプチドを環化反応に付するもので
あるため、技術的容易な活性エステル法による環化が可
能であり、かつ目的とする生物学的高活性のＬ −Ａｓ
ｕ型ソマトスタチンを高純度かつ高収率で製造すること
ができる。

次に本発明方法について詳細に説明する。

本発明方法においては、まず式 （式中、ｘｌ およびＸ２はアミノ保護基を示し、ｙは
水酸基の保護基を示す）で表わされるテトラペプチドの
ヒドラジドと式 （式中、ｙは前記と同じ意味を示し、Ｚはカルボニル基
と一緒に保護されたカルボキシル基を示す）で表わされ
るトリペプチドを縮合させた後、Ｎ末★端アミノ酸のア
ミノ保護基を脱離して式 （式中、Ｘ２、ｙおよびＺは前記と同じ意味を示す）で
表わされるヘプタペプチドを製造し、このへプタペプチ
ドと式 （式中、ｘｌおよびＸ２は前記と同じ意味を示す）で表
わされるテトラペプチドのヒドラジドを縮合させ、この
縮合物のＣ末端Ｌ−α−アミノスベリン酸のω位カルボ
キシル基の活性エステル化およびＮ末端Ｌ−リジンのア
ミノ保護基の脱離工程を経た後、環化反応に付し、つい
で保護基を脱離せしめて式 で表わされる生理活性ペプチド、すなわちＬ−Ａｓｕ型
ソマトスタチンまたはその塩を製造するものである。

本発明方法において、構成単位とする上記のトリおよび
テトラペプチドは、構成アミノ酸を活性エステル法、カ
ルボジイミド法、酸無水物法等の常法手段に従つて順次
縮合することにより得られる。

本発明方法において、アミノ基、カルボキシル基あるい
は水酸基の保護に関しては、ペプチド化学の領域におけ
る周知慣用の手段により適宜保護基の選択および着脱を
することができる。

そしてアミノ保護基としては、例えばホルミル基、トリ
フルオロアセチル基、プタロール基等のアシル基、ベン
ジル基、ジフエニルメチル基、トリフエニルメチル基等
のアラルキル基、メンジルオキシカルボニル基、ｏ−ブ
ロモベンジルオキシカルボニル基、ｏ−クロロベンジル
オキシカルボニル基等の置換ベンジルオキシカルボニル
基、ｔ−ブトキシカルボニル基、ジイソプロピルメトキ
シカルボニル基等の脂肪族オキシカルボニル基等を挙げ
ることができる。

ただし、アミノ保護基の選択に際し、リジンの側鎖アミ
ノ基とα−アミノ基の保護基は各々異なる手段で脱離で
きるものを相互に選択して用いなければならないことは
言うまでもない。つぎにカルボキシル基の保護は、主と
してエステル化により行われるが、アミド形成等によつ
ても保護される。

例えばメタノール、エタノール、ｔ＝ブタノール等のア
ルカノール、ベンジルアルコール、ｐ−ニトロベンジル
アルコール、ベンズヒドリルアルコール等のアルカノー
ル、２・４・６−トリクロルフエノール、ｐ−ニトロフ
エノール等のフエノール類、あるいはチオフエノール、
ｐ−ニトロチオフエノール等のチオフエノール類により
エステル化して保護することができる。また水酸基の保
護は例えばエステル化またはエーテル化によつて保護す
ることができる。このエステル化に適する基としては、
例えばアセチル基等のアルカノイル基、ベンゾイル基等
のアロイル基、ベンジルオキシカルボニル基、エチルオ
キシカルボニル基等の炭酸から誘導される基が挙げられ
る。またエーテル化に適する基としては、例えばベンジ
ル基、テトラヒドロピラニル基、ｔ−ブチル基等が挙げ
られる。しかしながら、これら水酸基は必ずしも保護す
る必要はない。本発明方法において、構成単位とする側
鎖アミノ基の保護されたテトラペプチドのヒドラジドと
遊離のα−アミノ基を有する他のペプチドの縮合は公知
のアジドカツプリング法により行われる。

すなわち、例えばテトラペプチドのヒドラジドを亜硝酸
ｔ−ブチルまたはイソアミルエステル等の有機亜硝酸エ
ステルと反応させて対応するアジドとし、これを他のペ
ブチドの遊離アミノ基と低温で攪拌下に縮合させること
により行われる。本発明方法において、Ｌ−α−アミノ
スベリン酸のω位カルボキシル基とＮ末端Ｌ−リジンの
αアミノ基との縮合による環化は活性エステル法により
行われる。この場合、ω位カルボキシル基の活性エステ
ル化は常法により例えばこれをシアノメチルエステル、
チオフエニルエステル、ｐニトロチオフエニルエステル
、ｐ−メタンスルホニルフエニルエステル、ｐ−ニトロ
フエニルエステル、２・４−ジニトロフエニルエステル
、２・４・５：トリクロロフエニルエステル等とするこ
とにより行われる。つぎに本発明方法において、Ｌ−α
−アミノスベリン酸のω位カルボキシル基の活性エステ
ルとＮ末端Ｌ−リジンの遊離アミノ基との縮合による環
化反応は常法に従つて有機塩基の存在下に常温若しくは
加熱により容易に行われる。

かくして得られる環化生成物からアミノ基および水酸基
の保護基の脱離は、使用した保護基の種類により加水分
解、酸分解あるいは還元等の既知手段によつて容易に行
うことができる。かくして生成された環化生成物Ｌ−Ａ
ｓｕ型ソマトスタチンはペプチドの分離精製における常
法手段に従つて、例えば反応混合物より有機溶媒を除去
した残渣をイオン交換樹脂によるクロマトグラフイ一、
分子ふるいクロマトグラフイ一およびこれらの再クロマ
トグラフイ一により分離精製することができる。

本発明によるＬ−Ａｓｕ型ソマトスタチンはその？―分
離精製の条件により塩基またはその形で得られる。

次に本発明方法で得られたＬ−Ａｓｕ型ソマトスタチン
の実験動物に対する成長ホルモン分泌抑制効果について
述べる。

〔実験方法〕

ウイスタ一系雄ラツト（体重約２００７）を用い、ウレ
タン麻酔下にて頚静脈を露出し、一側頚静脈より合成Ｔ
ＲＨ（ＴｈｙｒＯｔｈｒＯｐｉｎＲｅｌｅａｓｉｎｇＨ
ＯｒｍＯｎｅ） ２００ｎ７／１００ｙ体重を靜注した
。

一部のラツトにおいては、ＴＲＨ投与５分前に合成ソマ
トスタチンを２０μｙ／１００７体重皮下に注射した。
全ての薬剤は生理食塩水に溶解し、対照群には生理食塩
水のみを投与した。ＴＲＨ投与前、５分後、１０分後に
他側頚静脈より採血し、血漿を分離した後、血漿ラツト
ＧＨ値をラジオイムノアツセイで測定（ＥｎｄＯｃｒｉ
ｎＯｌＯｇｙ９５ｌ６Ｏ８〜１６１３１９７４年）した
。標準物質としてはＮＩＡＭＤＤ−ＲａｔＧＨＲＰ−１
を用いた。（最小検出量１。０ｎ７／ｍｌ）。

〔結果〕第１表に示す通り、ＴＲＨ２ＯＯｎ７／１００
７体重の静注は全てのラツトにおいて血漿ＧＨ値を明ら
かに増加させた。

一方合成ソマトスタチン２０μ７／１００７体重投与後
にＴＲＨを静注した群およびＬ−Ａｓｕ型ソマトスタチ
ン２０μ７／１００７体重投与後にＴＲＨを静注した群
においては血漿ＧＨの有意の増加は認められなかつた。
また合成ソマトスタチン投与群およびＬ−Ａｓｕ型ソマ
トスタチン投与群におけるＴＲＨ投与後の血漿ＧＨの最
大増加量は各々１５．６±８．１ｎ７／ｍｌ、９７±３
．１ｎｙ／ｍｌ′（′ＴＲＨ単独投与群に比して有意に
（ｐ〈０．０１）低値であつた。

なお、本明細書中の略記号は次の意味を有する。

また、アミノ酸分析は被検体を６Ｎ塩酸（アニソール数
滴添加）で１０８℃、２４時間加水分解し、これを減圧
乾固してアミノ酸分析に供した。

次に実施例を挙げて本発明方法を具体的に説明するが、
本発明はこれにより制限されるものではない。実施例 （１） ＢＯＣ−Ａｓｕ−０Ｈの製造 Ｌ−α−アミノスベリン酸３８０７をジオキサン５００
ｍｅにとかし、ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｓ−４・
６−ジメチルピリミジ一２イルーチオカルボネイトと室
温で２４時間反応させる。

ジオキサンを減圧留去後、過剰の試薬をジエチルエーテ
ルで抽出除去する。水層を２Ｎ塩酸でＰＨ２〜３とした
後、生成する油状物を酢酸エチルで抽出する。有機層を
十分水洗した後、硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮してか
らｎ−ヘキサンで結晶化し、同溶媒系で再結晶化して上
記目的化合物４６．２７（収率８０％）を得た。（２）
ＢＯＣ−Ａｓｕ−０Ｂｚ１−ＤＣＨＡの製造ＢＯＣ−
Ａｓｕ−０Ｈ２６。

０７とトリエチルアミン１２．６ｍ１をＤＭＦ２Ｏｍｌ
ｌ臭化ベンジル１７．１７を加えて室温で１２時間反応
させる。

反応液に過剰の水を加えて生成する油状物を酢酸エチル
で抽出する。有機層を水と５％重曹水でよく洗う。有機
層を５％炭酸ナトリウムで３度抽出することにより目的
物を水層に転溶する。水層を６Ｎ塩酸で酸性にすること
により生成する油状物を再び酢酸エチルで抽出し、水で
洗つた後、硫酸ナトリウムで脱水する。酢酸エチル溶液
をエーテルにおきかえてからＤＣＨＡを冷却下に滴下し
ながら加えて中和する。ついで生成する結晶を沢取して
ジエチルエーテルで十分洗う。このものをメタノール−
ジエチルエーテルから再結晶化することにより上記目的
化合物１０．０ｙ（収率２０％）を得た。３） ＢＯＣ
−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−Ａｓｕ−０Ｂｚ１・ＣＨＡの製造
ＢＯＣ−Ａｓｕ−０Ｂｚ１−ＤＣＨＡ９．Ｏ７を酢酸エ
チルに懸濁して１Ｎ硫酸で分液してＤＣＨＡを除去する
。

有機層を水洗後、硫酸ナトリウムで脱水して濃縮するこ
とにより油状物を得る。このものをＴＦＡ２Ｏｍｌにと
かして室温で４５分間処理する。過剰のＴＦＡを減圧で
留去後、生成する油状物をＤＭＦ２Ｏｍｌにとかし、ト
リエチルアミンで中和する。０℃に冷却しながらＢＯＣ
−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−０ＳＵ７．５７とＨＯＢＴｌ７を
加える。

反応液をＯ℃で４時間、そして室温で２０時間攪拌しな
がら放置する。

ジメチルプロパンジアミン１ｍ１を反応液に加えて過中
活性エステルを不活性化した後に酢酸エチル２００ｍ１
を加えてひきつづき有機層を１Ｎ塩酸、水、５％重曹水
、水の順によく洗う。

硫酸ナトリウムで有機層を脱水し、濃縮した後ジエチル
エーテルにとかす。エーテル層にＣＨＡを滴下しながら
加えて中和する。生成した結晶を沢取し、エーテルで洗
う。このものを酢酸エチル−ｎ−ヘキサンの溶媒系で再
結晶することにより、上記目的化合物６．８ｙ（収率６
５％）を得た。ＣＨＡ３．６７を酢酸エチル１００ｍ１
に懸濁して１Ｎ塩酸で分液することによりＣＨＡを除去
する。

有機層を水洗後、硫酸ナトリウムで脱水して濃縮するこ
とにより油状物を得る。このものをＴＦＡ３Ｏｍｌにと
かし室温で４５分間処理する。過剰のＴＦＡを減圧で留
去後、生成する油状物をＣＭＦ２Ｏｍｌにとかし、トリ
エチルアミンで中和する。Ｏ℃に冷却しながらＢＯＣＴ
ｈｒ（Ｂｚｌ）−０ＳＵ３，５ｙとＨＯＢＴＯ．５７を
加える。

反応液を０℃で２時間、室温で２０時間撹拌しながら放
置する。ジメチルプロパンジアミン１ｍ１を反応液に加
えて過剰の活性エステルを不活性化した後に酢酸エチル
１００ｍ１を加えて有機層を１Ｎ塩酸、水、５％重曹水
、水の順に洗う。硫酸ナトリウムで有機層を脱水して濃
縮した後、ジエチルエーテルにとかす。工ーテル層にＣ
ＨＡを滴下しながら加えて中和する。生成した結晶を沢
取してエーテルで洗う。このものを酢酸エチル−ｎ−ヘ
キサンの溶媒系で再結晶することにより上記目的化合物
３．６７（収率８７％）を得た。２００ｍ１にとかし、
Ｏ〜−５℃に２時間、室温に１８時間攪拌しながら放置
する。

反応液の塩化メチレンを酢酸エチルにおきかえた後、１
Ｎ塩酸水、５％重曹、水で順次洗い、硫酸マグネシウム
で脱水する。有機層を濃縮してｎ−ヘキサンで結晶化す
ることにより、上記目的化合物３９，０ｙ（収率８１％
）を得た。をＴＦＡにとかして室温で４５分間処理する
。

過剰のＴＦＡを減圧で留去後、ｎ−ヘキサンを加えて残
渣を沈澱させる。沈澱物を沢取し、ＮａＯＨ上デシケー
タ一中で減圧乾燥する。このものをＤＭＦ３Ｏｍｌにと
かし、トリエチルアミン４．２ｍ１で中和した後、０℃
に冷却しながらＢＯＣ−ＬｙｓＣＣｂｚ（０−Ｃｌ）〕
−０ＮＰ２４７を加えてＯ℃で１時間、室温で７２時間
反応させる。ジメチルプロパンジアミン１ｍ１を加えて
過剰の活性化エステルを不活性化した後、酢酸エチル２
００ｍ１を加えて１Ｎ塩酸、水、５％重曹水、水で順次
洗い、硫酸マグネシウムで脱水する。有機層を減圧で濃
縮後ｎ−ヘキサンで結晶化させる。このものをメタノー
ル−ジエチルエーテルの溶媒系で再結晶することにより
上記目的化合物１７．０７（収率７３％）を得た。Ｐｈ
ｅ−０ＥｔをＴＦＡ５Ｏｍｌにとかし、室温で４５分間
処理する。減圧で過剰のＴＦＡを留去後、残渣をエーテ
ルを加えることにより沈澱としておとす。沈澱物を▲取
し、ＮａＯＨ上デシケータ一中で減圧乾燥する。このも
のをＤＭＦ５Ｏｍｌにとかし、トリエチルアミン４．２
ｍ１で中和した後、Ｏ℃に冷却しながらＢＯＣＴｒｐ−
０ＮＰ１６．６７とＨＯＢＴｌ７を加えて反応させる。

反応液をＯ℃で２時間、室温で４８時間攪拌放置する。
反応液にクロロホルム２００ｍ１を加えて飽和炭酸ナト
リウム、水、１Ｎ塩酸、水の順によく洗い、硫酸マグネ
シウムで脱水する。有機溶媒を留去後、クロロホルムジ
エチルエーテルの溶媒系で結晶化することにより、上記
目的化合物２８７（収率９６％）を得た。Ｍｅ０Ｈ（−
２：１）混液２０ｍ１にとかし、室温で抱水ヒドラジン
（８０％）５ｍ１と５時間反応させる。

生成した沈澱を酢酸エチルに懸濁して沢取し、同溶媒で
繰り返し洗う。このものをＤＭＦ−酢酸エチルの溶媒系
で再結晶して上記目的化合物４．３７（収率８６％）を
得た。０Ｂｚ１−ＣＨＡ４．４７を酢酸エチル１００ｍ
ｅに懸濁して１Ｎ塩酸５０ｍ１で分液することによりＣ
ＨＡを除去する。

有機層を水で十分洗つた後に硫酸ナトリウムで脱水後、
減圧濃縮する。ＴＦＡ２Ｏｍｌにとかし、室温で４５分
間処理する。減圧下過剰のＴＦＡを留去し、生成した油
状物をＤＭＦ５ｍｌにとかし、トリエチルアミンで中和
してから−１０℃に冷却してＨＴｈｒ（Ｂｚｌ）−Ｓｅ
ｒ（Ｂｚｌ）−Ａｓｕ−０Ｂｚ１のＤＭＦ溶液を得る。

ＤＭＦｌ５ｍｌにとかし、−１５℃以下で４Ｎ塩酸／ジ
オキサン６．２ｍ１を加える。

これに−１５℃で激しく攪拌しながらイソアミルニトリ
ツト０．８４ｍ１を加えて１０分間反応させる。これに
前記で得たＤＭＦ溶液を加え、トリエチルアミンで中和
した後、−１０℃で４８時間、５℃で４８時間縮合反応
を行う。゛反応液に多量の水を加え、生ずる沈澱を▲取
する。この沈澱物を酢酸エチルに懸濁、煮沸し、不溶性
物質を沢取する。これをクロロホルム−ｎ−ヘキサン、
次いでエタノールリジエチルエーテルの溶媒系でそれぞ
れ再沈澱させて上記目的化合物５．１ｆ（収率５７．９
％）を得た。０Ｅｔ−ＨＣｌ２２．９ｙをクロロホルム
１５０ｍ１にとかし、−１０℃に冷却しながらＷＳＣｌ
８４ｍｌを加える。

反応液を−１０℃で２時間続いて室温で１５時間攪拌し
ながら放置する。次いで減圧濃縮し、残渣を酢酸エチル
２００ｍ１にとかし、１Ｎ塩酸、水、５％重曹水、水の
順に洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水後、再び減圧濃縮し
、残渣にｎ−ヘキサンを加え、生ずる不定形沈澱物を採
取、同溶媒系で再沈澱して上記目的化合物３７７（収率
８４％）を得た。３５ｍ１にとかし、室温で３５分間処
理した後、過剰のＴＦＡを減圧で留去する。

残渣にエーテルを加え、生ずる沈澱を沢取し、ＮａＯＨ
土デシケータ一中で減圧乾燥する。このものをＤＭＦ２
５ｍｌにとかし、トリエチルアミン２．８ｍ１で中和し
た後、０℃に冷却しながらＢＯＣ一Ａｓｎ−０ＮＰ１０
．６７と１−ヒドロキシベンゾトリアゾール１ｙを加え
る。

反応液をＯ℃で２時間室温で２０時間攪拌する。反応混
液に大量の水を加え、生成する沈澱物を沢取し、水とジ
エチルエーテルで洗浄した後、メタノール−ジエチルエ
ーテルから結晶化し、更にメタノール単独で再結晶して
上記目的化合物８．０ｙ（収率７３％）を得た。をＴＦ
Ａ２５ｍｌにとかし、室温で３５分間処理した後、過剰
のＴＦＡを減圧留去する。

残渣にジエチルエーテルを加え、生ずる沈澱を沢取し、
ＮａＯＨ上デシケータ一中で減圧乾燥する。これをＤＭ
Ｆ２Ｏｍｌにとかし、トリエチルアミン１，４ｍ１で中
和後、０℃に冷却しながらＢＯＣＬｙｓＣＣｂｚ（０−
Ｃ１）〕−０ＮＰ７７と１ヒドロキシベンゾトリアゾー
ル０．５７を加える。反応液をＯ℃２時間、ひきつづき
室温で２０時間反応させた後、反応液に大量の水を加え
、生成する沈澱を沢取し、水、ジエチルエーテルでよく
洗浄後、メタノールで結晶化して上記目的化合物７．０
７（収率８６％）を得た。Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−０Ｅｔ５．
６７をＤＭＦ２Ｏｍｌとメタノール３０ｍ１の混液にと
かし、抱水ヒドラジン（８０％）６．６ｍ１を加えて室
温で４８時間反応させる。

反応後減圧濃縮し、残渣に大量の水を加え、生じる沈澱
を沢取する。このものをＤＭＦ一水より再沈澱させて上
記目的化合物４．１７（収率７０％）得た。Ｓｅｒ（Ｂ
ｚｌ）−Ａｓｕ−０Ｂｚ１４．８７をエタンジチオール
１ｍ１を含むＴＦＡ２５ｍｌにとかし、室温で４５分間
反応させる。

過剰のＴＦＡを留去した後、残渣にジエチルエーテルを
加え、生ずる沈澱を沢取し、ジエチルエーテルで洗浄後
、ＮａＯＨ上デシケータ一中で減圧乾燥する。これをＤ
ＭＦｌＯｍｌにとかし、トリエチルアミン４．３ｍ１で
中和する。でイソアミルニトリツト０．８ｍ１を攪拌し
ながら加える。

この反応液を−１０℃で１０分間保持した後、−３０℃
に冷却し、トリエチルアミンで中和し、これを前記で得
たＤＭＦ溶液に加え、５℃で１時間、５℃で４８時間の
縮合反応を行う。反応後、これに大量の水を加え、生ず
る沈澱を沢取し、メタノールで洗浄後、ＤＭＦメタノー
ルより再沈澱させて上記目的化合物５．５７（収率７９
．３％）を得た。乾燥ピリジン５０ｍ１にとかし、ＴＦ
Ａ−０ＮＰ７．０７を加え、４５℃で３時間攪拌後減圧
にしピリジンを留去し、残渣にジエチルエーテルを加え
、生ずる沈澱を沢取する。

ジエチルエーテ３５ルで洗浄後、ＤＭＦ−ジエチルエー
テルより再沈澱して上記目的化合物５．７ｙ（収率１０
０％）を得た。エタンジオール１ｍ１を含むＴＦＡ３Ｏ
ｍｌにとかし、室温で２５分間処理する。

過剰のＴＦＡを減圧留去した残渣をＤＭＦ３Ｏｍｌにと
かし、これをピリジン２，３１に５０℃で１時間にわた
つて滴下しながら加える。更に同温度で２４時間攪拌後
減圧濃縮し、残渣に０．５Ｎ塩酸を加え、生成する沈澱
を水およびジエチルエーテルで十分洗う。このものをＤ
ＭＦ−ジエチルエーテルから再沈澱させて上記目的化合
物４．０ｔ（収率７７．７％）を得た。墳 ＲｒＴＴ） ０Ｈの製造 前記０６）で得た化合物３．５７、アニソール６ｍ１お
よびメチオニン０．７Ｖを無水フツ化水素６０ｍ１にと
かし、０〜２℃で６０分間処理し、過剰のフツ化水素留
去後残渣をジエチルエーテルで洗浄し、ＮａＯＨ上デシ
ケータ一中で乾燥して淡黄色粉末を得た。

これを５％酢酸にとかし、ダウエツクス１×２（３×１
５ＣＴＬ１酢酸型）に通し、溶出液を凍結乾燥して上記
目的化合物の酢酸塩約２．３７を得た。上記で得た粉末
２．０ｆ７の２Ｍ酢酸溶液をセフアデツクスＬＨ−２０
を充填したカラム（３．５×１３５Ｃ７１１）上に注入
し、２Ｍ酢酸で溶出し、溶出液の活性画分を凍結乾燥す
る。

この粉末の０．１Ｍ酢酸溶液をＣＭ−セルロースを充填
したカラム（３．５×３０（：Ｔｎ）に注入し、０．１
Ｍ酢酸水溶液１０００ｍ１〜０．５Ｍ酢酸アンモニウム
水溶液（ＰＨ７．Ｏ）１０００ｍ１の直線型濃度勾配溶
出を行い、溶出液の活性画分を凍結乾燥する。この粉末
の２Ｍ酢酸溶液をセフアデツクスＧ２５を充填したカラ
ムに注入し、２Ｍ酢酸で溶出し溶出液の活性画分を凍結
乾燥して上記目的化合物の活性粉末７８５〜（収率３４
％）を得た。

本品は沢紙電気泳動（ＰＨ４．８、１５００Ｖ、６０分
）、ＴＬＣ〔溶媒系：ｎ−ブタノール−酢酸一水（ ＝
４：１：５、上層）Ｒｆ＝ ０．５２、溶媒系：ｎ−
ブタノールー酢酸−水一ピリジン（ ＝ ３０：６：２
４：２０）Ｒｆ＝ ０．８２〕において単一スポツトを
有する。

〔α〕２Ｔ５−４１．６す（ Ｃ ＝ ０．３７、１％
酢酸）元素分析〔Ｃ７３Ｈ９９Ｏｌ７Ｎｌ５・ ７Ｈ２
０・ ３ＡＣ０Ｈとして〕アミノ酸分析 （※分光学的に測定）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、ｘ＾２、ｙおよびｚは前記と同じ意味を示す）
   で表わされるヘプタペプチドを製造し、このヘプタペプ
   チドと式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、ｘ＾１およびｘ＾２はアミノ保護基を示し、ｙ
   は水酸基の保護基を示す）で表わされるテトラペプチド
   のヒドラジドと式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、ｙは前記と同じ意味を示し、Ｚはカルボニル基
   と一緒に保護されたカルボキシル基を示す）で表わされ
   るトリペプチドを縮合させた後、Ｎ末端アミノ酸のアミ
   ノ保護基を脱離して式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、ｘ＾１およびｘ＾２は前記と同じ意味を示す）
   で表わされるテトラペプチドのヒドラジドを縮合させ、
   この縮合物のＣ末端Ｌ−α−アミノスベリン酸のω位カ
   ルボキシル基の活性エステル化およびＮ末端Ｌ−リジン
   のアミノ保護基の脱離工程を経た後、環化反応に付し、
   ついで保護基を脱離せしめることを特徴とする式 で表わされる生理活性ペプチドまたはその塩の製造法。