JPS593475B2 - インドキシル−アミノ酸エステル及び−ペプチドエステル、該化合物の製法並びに該化合物を色原体として含有する蛋白質分解酵素検出用診断剤 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 体液、特に尿中の白血球の検出は腎臓及び泌尿生殖器路
の疾病の．診断において非常に重要である。

従来、この検出は遠心分離していない尿又は尿沈渣中の
白血球を苦労して教え上げることにより行なわれている
。これらの方法においては、完全な白血球のみが確認さ
れるということは当然共通している。

一方、白血球溶解の速度はそれぞれ尿の状態により大き
な変動を示すということは公知である；こうして、例え
ば強いアルカリ性の尿中では白血球−半減期はわずか６
０分と見込まれる。低くすぎる白血球数もしくは長い尿
放置時間の場合には、むしろ誤つたマイナスの診断結果
となる。溶解による誤差を除外すれば、計算板中の遠心
分離していない均質な尿中の白血球の定量的鏡検測定は
非常に信頼性のある値を提供する。

実際には、この方法は困難であり、めんどうで、かつ時
間がかかり、かつ習熟した人が行なうことが条件となる
ので、ほとんど使用されない。医学上の実務において、
尿中の白血球測定の大多数は、尿沈渣中のいわゆる視野
法により行なわれる。

このためには、まず試料（沈渣）を遠心分離により獲得
しなければならない。しかしながら、この際、例えば塩
及び上皮細胞のような尿の他の成分も増加し、これは白
血球の鏡検測定をかなり困難とすることがある。変動す
る沈渣成分、沈渣の不均一性、並びにあるいは顕微鏡の
異なる倍率又は顕微鏡の異なる光学上の設備により、顕
微鏡の視野毎の白血球数に関するここで常用の数値が数
百％の誤差を有することになる。従つて本発明の課題は
、体液中の白血球を、簡単で、操作の容易な方法で、並
びに出米るだけ迅速にかつ完全に検出することのできる
診断剤を製造することであつた。

白血球は幅広い酵素スペクトルを有するので、このよう
な白血球試験のための検出法原理としては、酵素的反応
がある。

米国特許第３０８７７９４号明細書中にはすでに、顆粒
状白血球中に存在するペルオキシダーゼ活性により行な
われる、白血球検出法が記載されている。

過酸化水素及び有機指示薬例えばｏ−トリジンで含浸さ
れた吸収性担体は、有色酸化物の形成により白血球の存
在を示す。しかしながら、このような試験は決定的な欠
点を有する：例えば、０−トリジンを使用してのペルオ
キシダーゼ反応は一般に尿中の還元性物質、例えばアス
コルビン酸により非常に妨害されやすい。更に、誤まつ
たマイナスの診断結果に導びく尿中の白血球ペルオキシ
ダーゼの不安定性に関しては多くの文献（例えばＬ．Ｍ
ｅｔｔｌｅｒ著、Ｍｅｄ．Ｗｅｌｔｌ第２３巻、第３９
９頁、〔１９７２年〕参照）中に記載されている。赤血
球に対するこの試験の予想される不充分な選択性はなお
不利である。ここ数年、組織一及び細胞化学酵素学で、
一定の系統中に存在する酵素のエステル分解活性に基づ
く検出法がその確固たる地位を有する（例えば、Ａ．Ｇ
．Ｆ．ＰｅａｒｓｅｓＨｉｓｔＯｃｈｅｍｉｓｔｒｙｌ
ＴｈｅＯｒｅｔｉｃａｌａｎｄＡｐｐｌｉｅｄ参照）。

この際、原則的には無色又は弱く着色したエステルを使
用し、これを酵素的分解によりたいていは無色の酸成分
及び同様に無色のアルコール（フエノール）成分に分解
する。次いで、アルコール（フエノール）成分を酵素的
鹸化に続く反応により有色生成物とする（例えば、ジア
ゾニウム塩とのカツプリング又は酸化反応）。こうして
、例えばシユマルツル（Ｆ． Ｓｃｈｍａｌｚｌ）及びブラウンシユタイナ一（Ｈ．Ｂ
ｒａｕｎｓｔｅｉｎｅｒ）はクリーニツシエ●ボツヒエ
ンシユリフト（Ｋｌｉｎ．Ｗｓｃｈｒ．）第４６巻、第
６４２頁（１９６８年）中に基質としてのナフトール−
ＡＳ−Ｄ−クロルアセテートと有色アゾ化合物を形成す
るためのジアゾニウム塩とでの特有の細胞化学白血球エ
ステラーゼ一検出法を記載している。

公知のように尿中に存在する多くの化合物、例えばウロ
ビリノーゲン、ステルコビリノーゲンビリルピン等はジ
アゾニウム塩と反応するので、この種の二成分系は体液
、例えば尿中の白血球の迅速でかつ簡単な検出のための
診断剤に適していないということが判明する。

更に、この方法は非鋭敏すぎる。例えば白血球５０００
／μｅを有する試料は全く反応を示さない。更に、英国
特許第１１２８３７１号明細書中には体液中の加水分解
酵素の検出用診断剤が記載されている。

ここでは吸収性担体を無色インドキシルエステル又はチ
オインドキシルエステル及び場合により緩衝剤及び酸化
剤で含浸させる。加水分解酵素が存在すると、エステル
から遊離インドキシル又はチオインドキシルが生じ、空
中酸素又は酸化剤により濃色のインジゴ又はチオインジ
ゴが生じる。しかしこの特許明細書で請求された化合物
は白血球１００００／μ′とですら全く反応を示さない
ので、これは白血球試験には使用することができない。
こうして、尿中の白血球検出はは最もしばしば実施され
る臨床試験に属するにもかかわらず、簡単で迅速な白血
球の検出を可能とする試験テープは今日まで市販されて
いない。

意想外にも、中性好性白血球一顆粒中に存在するエステ
ラーゼ（プロテアーゼ）を検出するために基質としてイ
ンドキシル−アミノ酸エステル又はインドキシルーペブ
チドエステルを使用するとき、白血球を体液中で良好に
検出することのできる安定で迅速な指示診断剤が得られ
るということが判明した。

更に、この基質は純粋な水溶液中又は体液、例えば血漿
、血清、体液、膵液又は便抽出水液中の蛋白質分解酵素
、例えばエラスターゼキモトリプシン又はトリプシンの
一般的な検出において優れているということが判明した
。従つて本発明の課題は、一般式 〔式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は同一又は異なつて
いてよく、それぞれ水素原子又は・・ロゲン原子、低級
アルキル基、低級アルコキシ基、アリール基、アルアル
キル基、アルアルコキシ基、ヒドロキシ基、カルボキシ
基、カルボキシ一低級アルコキシ基、アルアルコキシカ
ルボニル基、アルアルコキシカルボニル一低級アルコキ
シ基、ニトロ基又は低級アシルアミノ基を表わし、Ｘは
低級アルキル基、アリール基、アルアルキル基又はアシ
ル基で置換されていてよいイミノ基を表わし、Ａは脂肪
族、芳香族、天然のＬ−モノアミノカルボン酸並びにそ
のＤ一及びＤＬ一型又はこれらアミノ酸２〜５個から成
るペプチド基を表わし、Ｂはペプチ ニド化学に常用の
窒素保護基を表わす〕のインドキシルアミノ酸エステル
及び／又はインドキシルペプチドエステルが色原体とし
て使用されている、１種以上の色原体及び適当な緩衝剤
を含有する吸収性担体、膜層、粉末混合物、凍結乾燥物
、溶液Ｚ又ぱ錠剤から成る蛋白質分解酵素検出用診断剤
である。

本発明のもう一つの課題は一般式１のインドキシルアミ
ノ酸エステル及び／又はインドキシルペプチドエステル
を蛋白質分解酵素、特に体液中の ５白血球中に存在す
るプロテアーゼの検出用診断剤を製造するために使用す
ることである。

一般式１のすべてのインドキシルアミノ酸エステル及び
インドキシルペプチドエステル新規化合物である。

従つて本発明の目的は、一般式１のインドキシル−アミ
ノ酸エステル及びーペプチドエステル並びにその製法で
ある。

一般式１の新規インドキシルアミノ酸輩スチル及びイン
ドキシルペプチドエステルの製造はペプ４チド化学の分
野においては自体公知の方法で行なうことができる。

自体公知法で一般式： 〔式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＸぱ前記のものを
表わす〕の相応するインドキシル化合物と一般式〔式中
、Ａ及びＢは前記のものを表わす〕のアミノ酸及びペプ
チドとを、もしくはこれの適当な反応性誘導体とを反応
させるのが有利である。

反応性誘導体としては例えば酸クロリド、もしくはペプ
チド合成において常用の混合無水物が例えばクロル蟻酸
エチルエステルと共に又は活性エステルが使用される。
一般式のインドキシル化合物、並びに一般式のアミノ酸
及びペプチドは公知物質である（例えば、Ｐ．Ｆｒｉｅ
ｄｌａｅｎｄｅｒ著、ＦＯｒｔｓｃｈｒｉｔｔｅｄｅｒ
ＴｅｅｒｆａｒｂｅｎｆａｂｒｉｌｃａｔｉＯｎｕｎｄ
ＶｅｒｗａｎｄｔｅｒＩｎｄｕｓｔｒＩｅｚｗｅｉｇｅ
ｌ第３−２０巻、もしくはＨＯｕｂｅｎ−ＷｅｚｌｓＭ
ｅｔｈＯｄｅｎｄｅｒＯｒｇａｎｉｓｃｈｅｎＣｈｅｍ
ｉｅｌ第１５／１巻参照）か又は公知化合物と類似の方
法で製造することができる。

Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４の定義でハロゲンとは、弗素
、塩素、臭素及び沃素であり、有利に塩素及び臭素であ
る。

Ｒ，、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４の定義中Ｔｗ低級アルコキシ
基１１並びにＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＸの１低級ア
ルキル基３１は炭素原子数１〜５、有利に１〜３のもの
であり、この際メトキシ基及びメチル基が特に有利であ
る。

Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４の定義で１１アルアルコキシ
基５７並びにＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＸの定義で１
アルアルキル基１１とは、例えばオキシ一低級アルキル
基もしくは低級アルキル基で置換されたフエニル基及び
ナフチル基を表わし、この際アルキル基は、炭素原子数
１〜５、有利に１〜３のものである。

ベンジルオキシ基及びベンジル基は特に有利である。Ｒ
１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４の１１低級アシルアミノ基１と
しては、炭素原子数１〜５、有利に１〜３の低級脂肪族
カルボン酸のアミド基が挙げられる。

特にアセチルアミノ基が有利である。Ｘの定義中゛アシ
ル基゛としては炭素原子数１〜５、有利に１〜３の脂肪
族カルボン酸の基又は芳香族カルボン酸、例えば安息香
酸又はナフトエ酸の基が挙げられる。

アセチル基及びベンゾイル基．は特に有利である。Ｒ１
、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＸの定義で１ｅアリール基８と
は有利に７エニル基又はナフチル基を表わす。

Ａの定義で１７アミノ酸基ｔ］としては有利にＬ型又は
Ｄ型の又はラセミ体の天然α−アミノ酸が挙げられる。

グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン
、フエニルアラニン及びチロシンが特に有利である。場
合により存在する遊離の水酸基はアシル化、有利にアセ
チル化されていてよい。Ａの定義の１１ペプチド基ｑ１
とは例えばジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド
及びペンタペプチド、有利にジペプチド及びトリペプチ
ドであり、この際、アミノ酸成分としては有利に前記ア
ミノ酸を使用する。

Ｂの定義で１１ペプチド化学において常用の窒素保護基
１Ｖとしては例えばアシル基、オキシカルボニル基、チ
オカルボニル基、スルホニル基、スルフエニル基、ビニ
ル基、シクロヘキセニル基、ホスホリル基又はカルバモ
イル基が挙げられる。

色原体として本発明で使用される一般式１のインドキシ
ルアミノ酸エステル及び／又はインドキシルペブチドエ
ステルを含浸液、被覆材料又は検査すべき液体に対して
１０−４〜１モル／′、有利に１０−３〜１０−１モル
／ｌの濃度で使用する。蛋白質溶解酵素及び特に白血球
一プロテアーゼの検出用診断剤のもう１つの成分は適当
な緩衝剤系である。

これには、例えば燐酸塩一緩衝剤、硼酸塩一緩衝剤、バ
ルビツール酸塩一緩衝剤、トリス一（ヒドロキシメチル
）−アミノメタン−（ニトリス一）一緩衝剤、２−アミ
ノ−２−メチルプロパンジオール−１・３−（ニアメジ
オール）−緩衝剤又はアミノ酸一緩衝剤が挙げられ、こ
の際ＰＨ値及び容量を測定溶液中のもしくは試験テープ
上のＰＨ値が６〜１０、有利に７〜９となるように選択
しなければならない。更に、蛋白質分解酵素、特に体液
中の白血球一プロテアーゼの検出のための本発明による
診断剤の製造の際に、付加的に酸化剤を使用して、酵素
反応の際に始めに生じるインドキシル化合物を有色のイ
ンジゴ化合物に変じることもできる。

この酸化剤例えば、ヘキサシアノ鉄（）酸カリウム、臭
素酸カリウム、クロム酸カリウム、フエナジンーメトス
ルフエート又はテトラゾリウム塩を含浸溶液、被膜材料
又は検査用液体に対して１０−４〜１モル／ｅ、有利に
１０−３〜１０−１モル／ｅの濃度で使用する。蛋白質
分解酵素、特に白血球一プロテアーゼ検出用診断剤のも
う一つの成分は湿潤剤であつてよい、それというのもこ
れにより僅かに短縮された反応時間及び一部はよりあざ
やかな色を得ることができるからである。

非イオン性もしくは両性、陽イオン性又は陰イオン性湿
潤剤を０．０５〜２％有利に０．１〜１％の濃度で使用
するのが有利である。本発明による薬剤を製造するため
に、例えば吸収性担体、有利に濾紙、セルロース又は合
成繊維フリースを易揮発性溶剤例えば水、メタノール、
エタノール又はアセトン中の通例試験テープの製造に必
要で、使用されている試薬（基質、緩衝剤、場合により
湿潤剤、酸化剤等）の溶液で合浸させる。

これを別個の二工程で実施するのがよい：先ず、緩衝剤
及び他の水溶性付加物を含有する水性溶液で含浸させる
。その後、一般式１のプロテアーゼ基質の溶液で含浸さ
せる。特別な場合には逆の含浸順序を使用することもで
きる。完成した試験紙をそのまま使用することもできる
し又は自体公知法で支持体に張り付けるか又は有利に西
ドイツ国特許第２１１８４５５号明細書によりプラスチ
ツク及び微細網状物の間に封入することもできる。

被膜した試験テープを製造するために、膜形成性物質、
例えばポリビニルエステル又はポリアミドの溶液又は懸
濁液中に全試薬を添加し、均質に混合する。

この混合物をプラスチツク担体上に薄い膜状に塗付し、
乾燥させる。本発明により被膜された試験テープを乾燥
後切断し、そのまま使用することもできるし、又は公知
法で支持体上に張り付けるか又は例えば西ドイツ国特許
第２１１８４５５号明細書によりプラスチツク及び微細
網状物の間に封入することもできる。

前記試験成分をガーレン製剤に常用の添加物と混合し、
顆粒とすることによつて、蛋白質分解酵素、特に白血球
プロテアーゼの検出のための本発明による診断剤を粉末
混合物又ぱ試薬錠剤の形に製造することができる。

この種の添加物は例えば炭水化物、例えば単糖類、オリ
ゴ糖類又は多糖類、又は糖アルコール、例えばマンニツ
ト、ゾルピット又はキシリツト、又は他の溶性不活性化
合物、例えばポリエチレングリコール又はポリビニール
ピロリドンである。粉末混合物又は試薬錠剤は一般に５
０〜２００Ｗ９、有利に５０〜８０〜の最終重量を示す
。それぞれ約５〜２０Ｗ１９、有利に約１０１１９の全
重量の凍結乾燥物の製造のために、試験に必要な全試薬
の他に常用の結合剤、例えばポリビニルピロリドン、及
び場合により他の添加剤、例えばマンニツト、ゾルピッ
ト又はキシリツトを含有する溶液を凍結乾燥させる。

溶液の形の本発明による診断剤は有利に試験に必要な全
試薬を含有する。

溶剤としては水又は水と水溶性有機溶剤、例えばメタノ
ール、エタノール、アセトン又はジメチルホルムアミド
との混合物が挙げられる。保存性という理由から、試験
に必要な試薬を２種以上の溶液にわけ、これを検査の際
にはじめて一緒にするのが有利であろう。このように製
造した診断剤は、検査すべき体液．中に浸すか又は該当
する体液に添加することにより、蛋白質分解酵素、特に
白血球−プロテアーゼの存在を、視覚的又は測光法、例
えば拡散反射測定法により又はキユベツト中で判定する
ことのできる色素形成により迅速かつ簡単に証明するこ
とを可能とする。細胞毎の白血球−プロテアーゼの活性
を主に一定の大きさであると見なすことができるので、
色素形成の強度により検査した体液の白血球濃度を知る
ことができる。この際、白血球一プロテアーゼの活性は
白血球の溶解後も完全に ｔ保持されるので、完全な白
血球も溶解した白血球も本発明による診断剤で把握され
る。したがつて溶解誤差は現われない。

例１ 濾紙（例えばＳｅｈｌｅｉｃｈｅｒ＋ＳｅｈＵｌｌ２３
ＳＬ）を順に次の溶解で含浸させ、次いで６０゜Ｃで乾
燥させる。

溶液１ 四硼酸ナトリウム・１０水化物 １．９１ｆ蒸留
水 約３０ｍ１この溶液を０
．１Ｎ塩酸でＰＨ値 全１００．０ｍ１８．０に調整す
る、蒸留水溶液２ ３−〔Ｎ−（ベンジルオキシカル ボニル）−Ｌ−アラニルオキシ］ インドール ３３．８ｍ９ アセトン 全１００．０ａ 黒色の試験紙が得られ、これは白血球含有尿中に浸す際
、白血球濃度によりそれぞれ淡トルキース色〜青色とな
る。

白血球５０００／μ′尿は約２分、 白血球１０００／μ′尿は約６分、 白血球５００／μｅ尿は約１０分、 白血球２００／μｅ尿は約１５分 で検出できる。

この試験の感度は約白血球２００／μｅである。

評価は拡散反射測定法により６２０ｎｍで実施すること
もできる。類似の特性（感度：白血球２００〜２０００
／μ′を有する試験紙は、３−〔Ｎ−（ベンジルオキシ
カルボニル）−Ｌ−アラニルオキシ〕−インドールのか
わりに次に挙げる物質を使用しても得られ、この際特に
記載のない場合は、白血球含有尿中に浸す時、それ以外
は無色の試験紙の同様な淡トルキース色〜青色への着色
が観察できる：１．１．３−〔Ｎ−（ベンジルオキシカ
ルボニル）−Ｌ−アラニルオキシ〕−４−メチル−イン
ドール１．２，３−〔Ｎ−（ベンジルオキシカルボニル
）−Ｌ−アラニルオキシ〕−５−メチル−インドール１
．３．３−〔Ｎ−（ベンジルオキシカルボニル）一Ｌ−
アラニルオキシ〕−６−メチル−インドール１．４．３
−〔Ｎ−（ベンジルオキシカルボニル）−Ｌ−アラニル
オキシ〕７ーメチルーインド一ル１．５．３−〔Ｎ−（
ベンジルオキシカルボニル）−Ｌ−アラニルオキシ〕−
４・７ージメチルーインドール１．６．３−〔Ｎ−（ベ
ンジルオキシカルボニル） ：ー一Ｌ−アラニルオキシ
〕−４−クロル−インドール１．７．３−〔Ｎ−（ベン
ジルオキシカルボニル）一Ｌ−アラニルオキシ〕−５−
ブロム−インドール
１，１．８．３−〔Ｎ−（ベンジルオキシカル
ボニル）一Ｌ−アラニルオキシ〕−６−クロル−インド
ール着色：無色から紫色 １．９．３−〔Ｎ−（トルオール一４′−スルホニル）
１一Ｌ−アラニルオキシ〕−４−クロム−５−ブロム−
インドール１．１０．３−〔Ｎ−（トルオール一４′−
スルホニル）一Ｌ−アラニルオキシ〕−４・５・７ート
リクロルーインドール
２１．１１．３−〔Ｎ−（トルオールーイースルホニル
）一Ｌ−アラニルオキシ〕−４−クロル−５−プロムー
Jメ[メチルーインドール１．１２．３−〔Ｎ−（トルオ
ール一４′−スルホニル）一Ｌ−アラニルオキシ〕−５
−ヒドロキシーイ ２ンドール１．１３．３−〔Ｎ−（
ベンジルオキシカルボニル）−Ｌ−アラニルオキシ〕−
５−メトキシ−インドール１．１４．３−〔Ｎ−（トル
オール一４′−スルホニル）ごＬ−アラニルオキシ〕−
５−ベンジルオキシーインドール１．１５．３−〔Ｎ−
（トリオール−４′−スルホニル）Ｌ−アラニルオキシ
〕−４−カルボキシ−インドール１．１６．３−〔Ｎ−
（トルオール一ｌ−スルホニル）Ｌ−アラニルオキシ〕
−４−ペンジルオキシカルボニルーインドール１．１７
．３−〔Ｎ−（トルオール一４′〜スルホニル）−Ｌ−
アラニルオキシ〕−５−（カルボキシ−メトキシ）−イ
ンドール１．１８．３−〔Ｎ−（トルオール一４′−ス
ルホニル）Ｌ−アラニルオキシ〕−５−（ペンジルオキ
シカルボニルーメトキシ）−インドール１．１９．３−
〔Ｎ−（トルオール一４′−スルホニル）Ｌ−アラニル
オキシ〕−６−ニトロ−インドール１．２０．３−〔Ｎ
−（トルオール一ｌ−スルホニル）−Ｌ−アラニルオキ
シ〕−６−アセチルアミノインドール１．２１．３−〔
Ｎ−（トルオール一４′−スルホニル）Ｌ−アラニルオ
キシ〕−ベンゾ〔ｇ〕−インドール着色：無色から緑色 １．２２．１−メチル−３−〔Ｎ−（ベンジルオキシカ
ルボニル）−Ｌ−アラニルオキシ〕−インドール着色：
無色から緑色 １．２３．１−ベンジル−３−〔Ｎ−（トルオール一４
′−スルホニル）−Ｌ−アラニルオキシ〕−インドール
着色．無色から緑色 １．２４．１−フエニル一３−〔Ｎ−（トルオール一４
′−スルホニル）−Ｌ−アラニルオキシ］−インドール
着色：無色から青緑色 １．２５．１−アセチル−３−〔Ｎ−（トルオール一ｌ
−スルホニル）−Ｌ−アラニルオキシ〕−インドール着
色：無色から赤色 １．２６．１−ベンゾイル−３−〔Ｎ−（トルオール４
′−スルホニル）−Ｌ−アラニルオキシ〕−インドール
着色：無色から紫色 １．２７．３−〔Ｎ−（ベンジルオキシカルボニル）−
グリシルオキシ〕−インドール１．２８．３−〔Ｎ−（
トルオール一ｌ−スルホニル）−グリシルオキシ〕−イ
ンドール１．２９．３−〔Ｎ−（トルオール一２′−ス
ルホニル）Ｌ−アラニルオキシ〕−インドール１．３０
．３−〔Ｎ−（トルオール一３′−スルホニル）一Ｌ−
アラニルオキシ〕−インドール１．３１．３−〔Ｎ−（
トルオール一４′−スルホニル）−Ｌ−アラニルオキシ
〕−インドール１．３２．３−〔Ｎ−（トルオール一４
′−スルホニル）Ｄ−アラニルオキシ〕−インドール１
．３３．３−〔Ｎ−（ベンジルオキシカルボニル）−Ｄ
−Ｌ−アラニルオキシ〕−インドール１．３４．３−〔
Ｎ−（ベンジルオキシカルボニル）−Ｌ−バリルオキシ
］−インドール１．３５．３−〔Ｎ−（トルオール一ｌ
−スルホニル）一Ｌ−バリルオキシ〕−インドール１．
３６．３−〔Ｎ−（ベンジルオキシカルボニル）−Ｌ−
ロイシルオキシ〕−インドール１．３７．３−〔Ｎ−（
ベンジルオキシカルボニル）一Ｌ−イソロイシルオキシ
］−インドール１．３８．３−〔Ｎ−（ベンジルオキシ
カルボニル）一Ｌ−フエニルアラニルオキシ〕−インド
ール１．３９．３−〔Ｎ−（トルオール一４′−スルホ
ニル）一Ｌ−フエニルアラニルオキシ〕−インドール１
．４０．３−〔Ｎ−アセチル−Ｌ−チロシルオキシ］−
インドール１．４１．３−〔Ｎ−ベンゾイル−Ｌ−チロ
シルオキシ］−インドール１．４２．３−〔Ｎ−（ベン
ジルオキシカルボニル）−Ｌ−チロシルオキシ〕−イン
ドール１．４３．３−〔Ｎ−（トルオール一ｌ−スルホ
ニル）一Ｌ−チロシルオキシ〕−インドール ２
１．４４，３−〔Ｎ−（トルオール一４′−スルホニル
）一Ｏ−アセチル−Ｌ−チロシルオキシ〕−インドール
１．４５．３−〔Ｎ−（ベンジルオキシカルボニル）一
Ｌ−アラニル一Ｌ−アラニルオキシ〕−イン ２ドール
１．４６．３−〔Ｎ−（トルオール一４′−スルホニル
）−Ｄ−アラニル一Ｌ−アラニルオキシ〕−インドール
１．４７．３−〔Ｎ−（ベンジルオキシカルボニル）
３一Ｌ−アラニル一Ｌ−アラニル一Ｌ−アラニルオキシ
〕−インドール１．４８．３−〔Ｎ−（トルオール一４
′−スルホニル）−Ｄ−アラニル一Ｄ−アラニル一Ｌ−
アラニルオキシ〕−インドール
３．１．４９．３−〔Ｎ−ホルミル−Ｌ−アラニルオキ
シ］−インドール１．５０．３−〔Ｎ−アセチル−Ｌ−
アラニルオキシ〕一インドール１．５１．３−〔Ｎ−サ
クシニル一Ｌ−アラニルオキ４ｔシ〕−インドール１．
５２．３−〔Ｎ−ベンゾイル−Ｄ−Ｌ−アラニルオキシ
〕−インドール１．５３．３−〔Ｎ−プタロール−Ｌ−
アラニルオキシ〕−インドール１．５４．３−〔Ｎ−（
エトキシカルボニル）−Ｌアラニルオキシ〕−インドー
ル１．５５．３−〔Ｎ−（Ｔｅｒｔ−ブチルオキシカル
ボニル）−Ｌ−アラニルオキシ〕−インドール１．５６
．３−〔Ｎ−（３′・６′−ジオキサ−ｎ−ヘプチルオ
キシカルボニル）−Ｌ−アラニルオキシ〕−インドール
１．５７．３−〔Ｎ−（シクロヘキシルオキシカルボニ
ル）−Ｌ−アラニルオキシ］−インドール１．５８．３
−〔Ｎ−（フエニルオキシカルボニル）−Ｌ−アラニル
オキシ〕−インドール１．５９．３−〔Ｎ−（４′−メ
チル−ベンジルオキシカルボニル）−Ｌ−アラニルオキ
シ〕−インドール１．６０，３−〔Ｎ−（４′−メトキ
シ−ベンジルオキシカルボニル）−Ｌ−アラニルオキシ
〕−インドール１．６１．３−〔Ｎ−（４′−ニトロ−
ベンジルオキシカルボニル）−Ｌ−アラニルオキシ〕−
インドール１．６２．３−〔Ｎ−（Ｎ仁〈ピペリジノ〉
−オキシカルボニル）−Ｌ−アラニルオキシ〕−インド
ール１．６３．３−〔Ｎ−（フリル一くグ〉−メトキシ
カルボニル）−Ｌ−アラニルオキシ］−インドール１．
６４．３−〔Ｎ−（チエニル一く２′〉−メトキシカル
ボニル）−Ｌ−アラニルオキシ］−インドール１．６５
．３−〔Ｎ−（ベンジルチオカルボニル）Ｌ−アラニル
オキシ〕−インドール１．６６．３−〔Ｎ−（メタンス
ルホニル）−Ｌ−アラニルオキシ〕−インドール１．６
７．３−〔Ｎ−（ベンジルスルホニル）−Ｌアラニルオ
キシ〕−インドール１．６８．３−〔Ｎ−（ベンゾール
スルホニル）−Ｌアラニルオキシ〕−インドール１．６
９．３−〔Ｎ−（４′−プロムーベンゾールスルホニル
）−Ｌ−アラニルオキシ］−インドール１．７０．３−
〔Ｎ−（４′−ニトローベンゾールスルホニル）−Ｌ−
アラニルオキシ〕−インドール１．７１．３−〔Ｎ−（
４′−ジメチルアミノーベンゾールスルホニル）−Ｌ−
アラニルオキシ〕−インドール１．７２．３−〔Ｎ−（
４′−アセチルアミノーベンゾールスルホニル）−Ｌ−
アラニルオキシ〕−インドール１．７３．３−〔Ｎ−（
４′−ｎ−ブチルーベンゾールスルホニル）−Ｌ−アラ
ニルオキシ〕−インドール１．７４．３−〔Ｎ−（４！
−Ｔｅｒｔ−ブチルーベンゾールスルホニル）−Ｌ−ア
ラニルオキシ〕−インドール１．７５．３−〔Ｎ−（４
′−ｎ−オクチルーベンゾールスルホニル）−Ｌ−アラ
ニルオキシ〕−インドール１．７６．３−〔Ｎ−（４′
−ヒドロキシーベンゾールスルホニル）−Ｌ−アラニル
オキシ〕−インドール１．７７．３−〔Ｎ−（４′−メ
トキシーベンゾールスルホニル）−Ｌ−アラニルオキシ
〕−インドール１．７８．３−〔Ｎ−（４′−ベンジル
オキシーベンゾールスルホニル）−Ｌ−アラニルオキシ
〕−インドール１．７９．３−〔Ｎ−（４′−く７ーヒ
ドロキシーエトキシ〉−ベンゾールスルホニル）−Ｌ−
アラニルオキシ］−インドール１．８０．３−〔Ｎ−（
４′−くざ１−オキサーダーヒドロキシ一ｎ−ベンチル
オキシ〉−ベンゾールスルホニル）−Ｌ−アラニルオキ
シ〕−インドール１．８１．３−〔Ｎ−（４′−く丁・
６″−ジーオキサ一ｎ−ヘプチルオキシ〉−ベンゾール
スルホニル）Ｌ−アラニルオキシ〕−インドール１．８
２．３−〔Ｎ−（４′−く２″−ヒドロキシ−エチル〉
−ベンゾールスルホニル）−Ｌ−アラニルオキシ〕−イ
ンドール１．８３．３−〔Ｎ−（４′−く２″−｛４″
′−ニトロ−ベンジルオキシ｝一エチル〉−ベンゾール
ースルホニル）−Ｌ−アラニルオキシ〕−インドール１
．８４．３−〔Ｎ−（イ一〈２″−クロル−エチル〉−
ベンゾールスルホニル）−Ｌ−アラニルオキシ〕−イン
ドール１，８５．３−〔Ｎ−（４′−アセチルーベンゾ
ールスルホニル）−Ｌ−アラニルオキシ〕−インドール
１．８６．３−〔Ｎ−（４′−シアノーベンゾールスル
ホニル）−Ｌ−アラニルオキシ〕−インドール１．８７
．３−〔Ｎ−（４′一カルボキシーベンゾールスルホニ
ル）−Ｌ−アラニルオキシ〕−インドール１．８８．３
−〔Ｎ−（４′−メトキシカルボニルーベンゾールスル
ホニル）−Ｌ−アラニルオキシ〕−インドール１．８９
．３−〔Ｎ−（４′−ベンジルオキシカルボニルーベン
ゾールスルホニル）−Ｌ−アラニルオキシ〕−インドー
ル１．９０．３−〔Ｎ−（４′一カルバモイルーベンゾ
ールスルホニル）−Ｌ−アラニルオキシ〕−インドール
１．９１．３−〔Ｎ−（４′−くジメチル−カルバモイ
ル〉−ベンゾールスルホニル）−Ｌ−アラニルオキシ〕
−インドール１．９２．３−〔Ｎ−（４′一カルボキシ
メチルーベンゾールスルホニル）−Ｌ−アラニルオキシ
〕インドール１．９３．３−〔Ｎ−（４′一カルボキシ
メトキシーベンゾールスルホニル）−Ｌ−アラニルオキ
シ〕インドール１．９４．３−〔Ｎ−ｌ−カルボキシメ
チルアミノーベンゾールスルホニル）−Ｌ−アラニルオ
キシ〕インドール１．９５．３−〔Ｎ−（４′−くベン
ジルオキシカルボニル−メチルアミノ〉−ベンゾールス
ルホニル）−Ｌ−アラニルオキシ］−インドール１．９
６．３−〔Ｎ−（イーフルオルーベンゾールスルホニル
一Ｌ−アラニルオキシ］−インドール１．９７．３−〔
Ｎ−（４′−フルオルスルホニルーベンゾールスルホニ
ル）−Ｌ−アラニルオキシ〕−インドール１．９８．３
−〔Ｎ−（４′−スルフアモイルーベンゾールスルホニ
ル）−Ｌ−アラニルオキシ〕−インドール１．９９．３
−〔Ｎ−メチル−Ｎ−（トルオール一４′スルホニル）
−Ｌ−アラニルオキシ〕−インドール１．１００．３−
〔Ｎ−アセチル−Ｎ−（トルオール４′−スルホニル）
−Ｌ−アラニルオキシ］−インドール１．１０１．３−
〔Ｎ−（１・４ζ６′一トリメチルベンゾールスルホニ
ル）−Ｌ−アラニルオキシ］−インドール１．１０２．
３−〔Ｎ−（ビフエニル一ｌ−スルホニル）−Ｌ−アラ
ニルオキシ〕−インドール１．１０３．３−〔Ｎ−（ナ
フタリン−２′−スルホニル）−Ｌ−アラニルオキシ〕
−インドール１．１０４．３−〔Ｎ−（４′−アセチル
アミノ−ナフタリン−１′−スルホニル）−Ｌ−アラニ
ルオキシ〕−インドール１．１０５．３−〔Ｎ−（５′
−ジメチルアミノ−ナフタリン−丁一スルホニル）−Ｌ
−アラニルオキシ］−インドール１．１０６．３−〔Ｎ
−（キノリン−８′−スルホニル）Ｌ−アラニルオキシ
〕−インドール１．１０７，３−〔Ｎ−（ピリジン−ｙ
−スルホニル）一Ｌ−アラニルオキシ］−インドール１
．１０８．３−〔Ｎ−（２′−ニトローベンゾールスル
フエニル）−Ｌ−アラニルオキシ〕−インドール着色：
黄色から緑色 シ１．１０９．
３−〔Ｎ−（１′−メチル−ｉ−ベンゾイル−ビニル）
−Ｌ−アラニルオキシ〕−インドール１．１１０．３−
〔Ｎ−（５′・５′−ジメチル−３′−オキソーシクロ
ヘキセン一１′−イル）−Ｌ−アラ ≧ニルオキシ〕−
インドール１．１１１．３−〔Ｎ−（ジフエニルカルバ
モイル一Ｌ−アラニルオキシ〕−インドール１．１１２
．３−〔Ｎ−（ジ一く４′−ニトロベンジル〉一ホスホ
リル）−Ｌ−アラニルオキシ〕−イ ５ンドール１．１
１３，３−〔Ｎ−（ジ一〈４′−プロムベン迦〉ホスホ
リル）−Ｌ−アラニルオキシ〕−インドール１．１１４
．３−〔Ｎ−（トルオール一４′−スルホニ５ル）−Ｌ
−アラニルオキシ〕−５−ベンジルインドール１．１１
５．３−〔Ｎ−（トルオール一４′−スルホニル）−Ｌ
−アラニルオキシ〕−５−フエニルーインドール
４１．１１６．３−〔Ｎ−
（トルオール一ｌ−スルホニル）−Ｌ−アラニルオキシ
］−５−メトキシ−インドール例２ 沢紙（例えばＳｃｈｌｅｉｃｈＯｒ＋Ｓｃｈｉｉｌｌ２
３ＳＬ）を順次、次の溶液で含浸させ、次いで６０℃で
乾燥させる。

溶液１ 四硼酸ナトリウム・１０水化物 蒸留水 ノニルフエノールポリグリコー ルエーテルこの溶液を塩酸０．１ Ｎ′（′ＰＨ値８．０に調整する、 １．９１ｔ 約３０ｍ１ ０．２ｔ 蒸留水 溶液２ 全１００．０ｍ１ ３−〔Ｎ−（ベンジルオキシカル ３３．８ワボニ
ル）−Ｌ−アラニルオキシ〕インドール アセトン 全１００．０ｍ１無色
の試験紙が得られ、これは白血球含有尿素に浸す際、そ
れぞれ白血球濃度により淡トルキース色〜青色に着色す
る。

例１の処方せんに対し、わずかに短縮された反応時間と
僅かにあざやかな色が生じる。例１の他の基質を用いて
、湿潤剤、例えば前記ノニルフエノールポリグリコール
エーテル（非イオン性）、又は例えばココヤシ（ＣＯｃ
Ｏｓ）イミダゾリン化合物（両性）又はベンジルトリメ
チルアンモニウムクロリド（陽イオン性）又はドデシル
ベンゼンスルホン酸ナトリウム（陰イオン性）を使用し
て試験紙が得られるが、これは湿潤剤を使用しない類似
の試験紙に対し、一部でわずかに短縮された反応時間と
わずかにあざやかな色を示す。

例３溶液１ ３−〔Ｎ−ベンゾイル−Ｄ−Ｌ− １５４．２ワアラ
ニルオキシ］−インドールメタノール
全１００．０ｍ１！溶液２四硼酸ナトリウム・１０
水化物 ７．６３ｙ蒸留水
約５０ｍ１この溶液を１Ｎ塩酸でＰＨ値８．０に
調製する、 蒸留水 全１００．０ｍ１１試験
管中で、溶液１ 溶液２ 白血球含有尿 １ｍ１ １ｍ１ ２ｍ１ を混合する。

この混合物は徐々に、それぞれ白血球濃度により淡緑色
〜深青色となる。

室温で約１０分間放置した後、白血球濃度を標準色を用
いて視覚的に又は例えば１ｃ１ｎ−キユベツト中６２０
ｎｍで測光法により測定する。

この試験の感度は約白血球２００／μ′尿である。

他の例１及び２の基質でも試験管試験もしくはキユベツ
ト試験を類似の感度（白血球２００〜１０００／μｅ尿
）で実施することができる。

例４３−〔Ｎ−（４′一カルボキシメチル ２．０
ＴＩ１９アミノーベンゾールスルホニル）Ｌ−アラニル
オキシ〕−インドール 燐酸二水素カリウム Ｏ・８即燐酸
一水素ナトリウム １６．８ワマンニツ
ト 全７０．０〜を含有する錠
剤を試験管中の白血球含有尿２ｍ１中に加える。

尿は徐々に着色し、それぞれ白血球濃度により、淡緑色
〜深青色となる。室温で１０分間放置後、白血球濃度を
標準色を用いて視覚的に又は例えば１Ｃｆ１Ｌ−マイク
ロキユベツト中６２０ｎｍで測光法により行なう。

この試験の感度は白血球約２００／μｅ尿である。

３７℃での恒温保持を実施する時、反応時間を明らかに
短縮することができる。

例１の他の基質でも類似の感度（白血球２００〜１００
０／μｅ）を得ることができ、この際、難溶性の基質の
場合、有機溶剤、例えばメタノール又はジメチルホルム
アミドを添加することが好ましい。

例５ ▲紙（例えばＳｃｈｌｅｉｃｈｅｒ＋Ｓｃｈｉｌｌ２３
ＳＬ）を順次、次の溶液に含浸させ、次いで６０℃で乾
燥させる。

溶液１ ） 四硼酸ナトリウム・１０水化物 １．９１ｔ蒸留
水 約３０ｍｊこの溶液を０
．１Ｎ塩酸でＰＨ値８．０に調整する、 蒸留水 全１００．０ｍ１溶液２
３−〔Ｎ−（トルオール一４′−ス ４５．１ｍ９
ルホニル）−Ｌ−チロシルオキシΣインドール アセトン 全１００．０ｍ１無
色の試験紙が得られ、これを蛋白質溶解酵素キモトリプ
シンを含有する水溶液中に浸す時、青色となる。

こうして１ｍ１あたり０．０２Ｕキモトリプシンの濃度
でも約６〜７分で検出することができる。（前記酵素活
性は基質としてＮ−アセチル−Ｌ−チロシン−エチルエ
ステルを使用して、２５゜ＣでＰＨ７．Ｏ及びλ＝２３
７ｎｍで測定した。

）例１の他の基質を使用して、それぞれアミノ酸基もし
くはペプチド基により、純粋な水溶液中の又は例えば体
液、例えば完全血液、血漿、体液、膵液又は便抽出水液
中のキモトリプシン又は他の蛋白質分解酵素、例えばエ
ラスターゼ又はトリプシンが検出できる。例６ ３−〔Ｎ−（トルオール一４′−スルホニル）一Ｌ−ア
ラニルオキシ〕−インドール溶液１ 一工程法により酸クロリドを製造するためにＮ（トルオ
ール一４−スルホニル）−Ｌ−アラニン５．３５Ｖ（０
．０２２モル）を無水ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）
２０ｍ１中に溶かし、−３０℃に冷却する。

次いで攪拌及び冷却下に塩化チオニル１．７６ｍ１（０
．０２４モル）をピペツトで加え、反応混合物を冷却浴
中で−３０℃で３０分間放置する。溶液２ 撹拌機、温度計及びガス導入及び排出管を備えた２５０
ｍ１三顆フラスコ中に、弱い窒素気流により空気を完全
に除去した後、無水Ｄ゛ ４０ｍ１中のインドキシル（
３−ヒドロキシ−インドール）２．９０ｙ（０．０２２
モル）の溶液を加え、無水ビリジン９．７４ｍ１を加え
て、−１５℃に冷却する。

反応溶液２に溶液１を注ぎ、酸素及び水の遮断下に−１
５℃で約５時間、薄層クロマトグラフイ一により全くイ
ンドキシルが認められなくなるまで、攪拌する。

処理のために、反応混合物を最高４０〜５０℃の浴温で
真空中濃縮する。

残分を酢酸エステル１００ｍ１中に溶かし、順次２回、
それぞれ１Ｎクエン酸３０ｍ１１水２０ｍ１１５％炭酸
ナトリウム溶液５０ｍ１及び水２５ｍ１で洗浄する。酢
酸エステル相を硫酸ナトリウムで乾燥させた後、真空中
で濃縮する。こうして得られた粗生成物をシリカゲルで
のカラムクロマトグラフイ一によりトルオールージオキ
サン混合物（９：１）で精製する。合したフラクシヨン
の溶剤を真空中留去した後、残分をエーテル中でかきま
わすと３−〔Ｎ−（トルオール一４′−スルホニル）−
Ｌ−アラニルオキシ〕−インドール１．４５ｔ（１８．
４％）、無色結晶、融点１０３℃；α青：一５６．６４
、ｃ＝１％（メタノール）が得られる。副生成物として
は前記カラムクロマトグラフイ一分離の他のフラクシヨ
ンから、酢酸エステルから結晶とし、無色結晶、融点１
８７〜１８８℃、α青：一４１．７、ｃ＝１％（ＤＭＦ
）の１−〔Ｎ−（トルオール一４′−スルホニル）−Ｌ
−アラニルオキシ〕−３−ヒドロキシ−インドール＝１
〔Ｎ−（トルオール一４′−スルホニル）−Ｌ−アラニ
ルオキシ〕−３−オキソーインドリンを単離することが
できる。

同様な方法により、相応して置換したインドキシル一化
合物をそれぞれのアミノ酸と反応させると次の基質が得
られ、この際すべての場合（６．２２．〜６．２６．を
除いて）、副生成物として前記１一置換−３−ヒドロキ
シ−インドールが形成される：６．１．３−〔Ｎ−（ベ
ンジルオキシカルボニル）−Ｌ−アラニルオキシ〕−イ
ンドール、無色結晶、融点１２３℃．α青：一４９．０
０、ｃ＝１％（メタノール）．６．２．３−〔Ｎ−（ベ
ンジルオキシカルボニル）−Ｌ−アラニルオキシ〕−４
−メチル−インドール、無色結晶、融点１１３℃．α青
：一４４．６融、ｃ−１％（メタノール）．６，３．３
−〔Ｎ−（ベンジルオキシカルボニル）Ｌ−アラニルオ
キシ〕−５−メチル−インドール、無色結晶、融点１４
３−１４４℃．α青：一４８．００、ｃ＝１％（メタノ
ール）．６．４．３−〔Ｎ−（ベンジルオキシカルボニ
ル）Ｌ−アラニルオキシ〕−６−メチル−インドール、
無色結晶、融点１４８℃．α賀：一４９．０融、ｃ−１
％（メタノール）．６．５．３−〔Ｎ−（ベンジルオキ
シカルボニル）Ｌ−アラニルオキシ〕−Jメ[メチルーイ
ンドール、無色結晶、融点１４６℃．α青：一５１．２
融、ｃ＝１％（メタノール）．６．６．３−〔Ｎ−（ベ
ンジルオキシカルボニル）−Ｌ−アラニルオキシ〕−４
・７ージメチルインドール、無色結晶、融点１２１℃．
α青：一４６．３結、ｃ＝１％（メタノール）．６．７
．３−〔Ｎ−（ベンジルオキシカルボニル）一Ｌ−アラ
ニルオキシ〕−４−クロル−インドール、無色結晶、融
点１４２−１４３℃．α賀：一６１．４融、ｃ＝１％（
メタノール）．６．８．３−〔Ｎ−（ベンジルオキシ・
カルボニル）−Ｌ−アラニルオキシ〕−５−ブロム−イ
ンドール、無色結晶、融点１３８℃．α青：一２８．０
０、ｃ−１％（メタノール）．６．９．３−〔Ｎ−（ベ
ンジルオキシカルボニル）一Ｌ−アラニルオキシ〕−６
−クロル−インドール、無色結晶、融点１７０℃．α青
：一４１．３融、ｃ−１％（メタノール）．６．１０．
３−〔Ｎ−（トルオール一４′−スルホニル）−Ｌ−ア
ラニルオキシ〕−４−クロル−５−ブロム−インドール
、無色結晶、融点１５０−１５２イＣα青：一３１．０
０、ｃ＝１％（メタノール）．６．１１．３−〔Ｎ−（
トルオール一４′−スルホニル）Ｌ−アラニルオキシ〕
−４・５・７ートリクロルーインドール６．１２．３−
〔Ｎ−（トルオール一４′−スルホニル）Ｌ−アラニル
オキシ〕−４−クロル−５−プロムーJメ[メチルーイン
ドールわずかに着色した結晶、融点１４３−１４５℃．
薄層クロマトグラフイーリシリカゲルプレート、（展開
剤：トルオールージオキサン２：１、検出：紫外線、Ｎ
Ｈ３（ガス）、Ｒｆ一値：０．５６）６．１３．３−〔
Ｎ−（トルオール一４′−スルホニル）−Ｌ−アラニル
オキシ〕−５−ヒドロキシーインドール６．１４．３−
〔Ｎ−（ベンジルオキシカルボニル）Ｌ−アラニルオキ
シ］−５−メトキシ−インドール６．１５．３−〔Ｎ−
（トルオール一４′−スルホニル）５−Ｌ−アラニルオ
キシ〕−５−ベンジルオキシインドール６．１６．３−
〔Ｎ−（トルオール一４′−スルホニル）−Ｌ−アラニ
ルオキシ〕−４−カルボキシ−インドール
１１６．１７．３−〔Ｎ−（
トルオール一４′−スルホニル）Ｌ−アラニルオキシ〕
−４−ベンジルオキシ−カルボニル−インドール６．１
８．３−〔Ｎ−（トルオール一４ｆ−スルホニル）一Ｌ
−アラニルオキシ〕−５−（カルボキシ一 １．メトキ
シ）−インドール６．１９．３−〔Ｎ−（トルオール一
４′−スルホニル）一Ｌ−アラニルオキシ］−５−（ベ
ンジルオキシ−カルボニル−メトキシ）−インドール６
．２０．３−〔Ｎ−（トルオール一４′−スルホニル）
２−Ｌ−アラニルオキシ〕−６−ニトロ−インドール６
．２１．３−〔Ｎ−（トルオール一ｌ−スルホニル）−
Ｌ−アラニルオキシ〕−６−アセチルアミノ−インドー
ル ２６．２
２．１−メチル−３−〔Ｎ−（ベンジルオキシカルボニ
ル）−Ｌ−アラニルオキシ〕−インドール、無色結晶、
融点９２℃．α青：一４９．５融ｃ−１％（メタノール
）．６．２３．１−ベンジル−３−〔Ｎ−（トルオール
一 ５４′−スルホニル）−Ｌ−アラニルオキシ〕−イ
ンドール、無色結晶、融点１４９−１５２℃．α智：一
５４．９晶ｃ＝１％（ＤＩ８′）．６．２４．１−フエ
ニル一３−〔Ｎ−（トルオール一４′−スルホニル）−
Ｌ−アラニルオキシ〕−イ ５ンドール６．２５．１−
アセチル−３−〔Ｎ−（トルオール４′−スルホニル）
−Ｌ−アラニルオキシ〕−インドール６．２６．１−ベ
ンゾイル−３−〔Ｎ−（トルオール４′−スルホニル）
−Ｌ−アラニルオキシ〕インドール、無色結晶、融点１
５５−１５６℃．α青：一５４．７結、ｃ＝１％（ＤＭ
Ｆ）．６．２７．３−〔Ｎ−（ベンジルオキシカルボニ
ル）グリシルオキシ〕−インドール、無色結晶、融点１
２２−１２４℃．６．２８．３−〔Ｎ−（トリオール−
４′−スルホニル）一グリシルオキシ〕−インドール、
無色結晶、融点１０３−１０５℃．６．２９．３−〔Ｎ
−（トルオール一ｌ−スルホニル）−Ｌ−アラニルオキ
シ〕−インドール、無色無定形粉末；α賀：一６２．５
キ、ｃ＝１％（メタノール）．薄層クロマトグラフイー
リシリカゲルプレート（展開剤：トルオールージオキサ
ン９：１、検出：紫外線、ＮＨ３（ガス）、Ｒｆ一値：
０．２０）６．３０．３−〔Ｎ−（トルオール一ｙ−ス
ルホニル）Ｌ−アラニルオキシ〕−インドール、無色結
晶、融点９４℃．α智：一５４．９ ６．３１．３−〔Ｎ−（トルオール一４−スルホニル）
Ｄ−アラニルオキシ〕−インドール、無色結晶、融点９
８℃５α智：＋５３．１ ６．３２．３−〔Ｎ−（ベンジルオキシカルボニル）Ｄ
−Ｌ−アラニルオキシ〕−インドール、無色結晶、融点
１１０−１１「Ｃ．６．３３．３−〔Ｎ−（ベンジルオ
キシカルボニル）Ｌ−バリルオキシ〕−インドール、無
色結晶、融点６４−６５℃．α貨：一４１．１．、ｃ＝
１％（メタノール）．６．３４．３−〔Ｎ−（ベンジル
オキシカルボニル）Ｌ−ロイシルオキシ］−インドール
、無色結晶、融点７３−７５℃．α貨：一４２．２５、
ｃ−１％（メタノール）．６．３５．３−〔Ｎ−（ベン
ジルオキシカルボニル）−Ｌ−イソロイシルオキシ〕−
インドール、無色、無定形粉末．α賀：一３０．６ 薄層クロマトグラフイーリシリカゲルプレート、（展開
剤：トルオールージオキサン２：１、検出：紫外線、Ｎ
Ｈ３（ガス）、Ｒｆ一値：０．５７）．６．３６．３−
〔Ｎ−（ベンジルオキシカルボニル）Ｌ−フエニルアラ
ニルオキシ〕−インドール、帯黄色結晶、融点１２５℃
．薄層クロマトグラフイーリシリカゲルゾレート、（展
開剤：トルオールージオキサン９：１、検出：紫外線、
ＮＨ３（ガス）、Ｒｆ一値：０．５６）．６．３７．３
−〔Ｎ−（トリオール−４７−スルホニル）Ｌ−フエニ
ルアラニルオキシ〕−インドール、無色結晶、融点１６
７−１６９℃．α青：一３４．４６、ｃ−１％（メタノ
ール）．６．３８．３−〔Ｎ−アセチル−Ｌ−チロシル
オキシ〕．一インドール６．３９．３−〔Ｎ−ベンゾイ
ル−Ｌ−チロシルオキシ〕−インドール６．４０．３−
〔Ｎ−（ベンジルオキシカルボニル）−Ｌ−チロシルオ
キシ〕−インドール、無色、 １無定形泡状物．α貨：
一２２．６キ、ｃ＝１％（メタノール）．薄層クロマト
グラフイーリシリカゲルプレート、（展開剤：トルオー
ルージオキサン４：１、検出：紫外線、ＮＨ３（ガス）
、Ｒｆ一値：０．２７）．６．４１．３−〔Ｎ−（トル
オール一４′−スルホニル）−Ｌ−チロシルオキシ〕−
インドール、無色結晶、融点１７１℃．α青：一２８．
３．、ｃ＝１％（メタノール）．６．４２．３−〔Ｎ−
（トルオール一４′−スルホニル）ＳＯ−アセチル−Ｌ
−チロシルオキシ〕−インドール、無色結晶、融点１６
８−１７０イｃ．α青：一２４．１、ｃ＝１％（ジメチ
ルホルムアミド）．６．４３．３−〔Ｎ−（ベンジルオ
キシカルボニル） Ｓ−Ｌ−アラニル一Ｌ−アラニルオ
キシ〕−インドール、無色結晶、融点１４４℃．α青：
一１７．３、ｃ＝１％（メタノール）．６．４４．３−
〔Ｎ−（トルオール一４′〜スルホニル）−Ｄ−アラニ
ル一Ｌ−アラニルオキシ〕−インドール、帯黄色、無定
形泡状物．α青：＋５．８、、ｃ＝１％（メタノール）
．薄層クロマトグラフイーリシリカゲルプレート、（展
開剤：トルオールージオキサン４：１、検出：紫外線、
ＮＨ３（ガス）、Ｒｆ一値：０．１９）．．６．４５．
３−〔Ｎ−（ベンジルオキシカルボニル）Ｌ−アラニル
一Ｌ−アラニル一Ｌ−アラニルオキシ〕−インドール、
無色結晶、融点１５６℃α咽：一３９．５ー、ｃ＝１％
（メタノール）．６．４６．３−〔Ｎ−（トルオール一
４′−スルホニル）一Ｄ−アラニル一Ｄ−アラニル一Ｌ
−アラニルオキン〕−インドール、無色結晶、融点２１
６℃α青：＋５３．８ー、ｃ＝１％（メタノール）．６
．４７．３−〔Ｎ−アセチル−Ｌ−アラニルオキシ〕イ
ンドール、無色、無定形泡状物．α昭：＋１２，５、、
ｃ＝１％（メタノール）．薄層クロマトグラフイーリシ
リカゲルプレート、（展開剤：酢酸エステルージクロル
メタン１０：１、検出：紫外線、ＮＨ３（ガス）、Ｒｆ
一値：０．３３）．６．４８．３−〔Ｎ−サクシニル一
Ｌ−アラニルオキシ〕−インドール、無色結晶、融点１
４２℃．α青：一６３．９、、ｃ−１％（メタノール）
．６．４９．３−〔Ｎ−ベンゾイル−Ｄ−Ｌ−アラニル
オキシ〕−インドール、無色結晶、融点１７１℃６．５
０．３−〔Ｎ−プタロール−Ｌ−アラニルオキシ〕−イ
ンドール、無色結晶、融点５８℃．α青：一２６．３、
、ｃ＝１％（メタノール）！６．５１．３−〔Ｎ−（エ
トキシカルボニル）−Ｌアラニルオキシ〕−インドール
、無色結晶、融点９６℃．α青：一６８．９−、ｃ＝１
％（メタノール）．６．５２．３−〔Ｎ−（シクロヘキ
シルオキシカルボニル）−Ｌ−アラニルオキシ〕−イン
ドール、無色結晶、融点１４９℃．α青：一６０，４４
、ｃ＝１％（メタノール）．６．５３．３−〔Ｎ−（フ
エニルオキシカルボニル）−Ｌ−アラニルオキシ〕−イ
ンドール、無色結晶、融点１６１℃．α碧：一９６．０
．、ｃ＝１％（メタノール）．６．５４．３−〔Ｎ−（
４′−メチルーベンジルオキシカルボニル）−Ｌ−アラ
ニルオキシ〕−インドール、無色結晶、融点１３５℃．
α青：一４５．９融、ｃ＝１％（メタノール）．６．５
５．３−〔Ｎ−（４′−ニトローペンジルオキシカルボ
ニル）−Ｌ−アラニルオキシ〕−インドール、帯黄色結
晶、融点１６０℃．α青：一２９、４、、ｃ＝１％（メ
タノール）．６．５６．３−〔Ｎ−（ベンジルチオカル
ボニル）Ｌ−アラニルオキシ〕−インドール、無色結晶
、融点１２２℃．α昭：ーJモV．８シ、ｃ＝１％（メタ
ノール）．６．５７．３−〔Ｎ−（メタンスルホニル）
−Ｌ−アラニルオキシ〕−インドール、無色結晶、融点
１６４−１６６−Ｃ．α碧：一５４．００、ｃ−１％（
メタノール）．６．５８．３−〔Ｎ−（ベンジルスルホ
ニル）−Ｌーアラニルオキシ〕−インドール、無色、粘
性油状物．α青：一５４．８−、ｃ＝１％（メタノール
）． ：，薄層クロマトグラフイーリシリカゲルプレー
ト、（展開剤：トルオール一酢酸エステル２：１、検出
：紫外線、ＮＨ３（ガス）、Ｒｆ一値０．４０）．６．
５９．３−〔Ｎ−（ベンゾールスルホニル）−Ｌ一アラ
ニルオキシ〕−インドール、無色、粘性 １油状物．α
昭：一５９．８〕、ｃ−１％（メタノール）．薄層クロ
マトグラフイーリシリカゲルプレート、（展開剤：トル
オール一酢酸エステル２：１、検出：紫外線、ＮＨ３（
ガス）、Ｒｆ一値：０．４８）．１６．６０．３−〔Ｎ
−（４′−プロムーベンゾールスルホニル）−Ｌ−アラ
ニルオキシ］−インドール、帯黄色、無定形粉末．薄層
クロマトグラフイーリシリカゲルプレート、（展開剤：
トルオールージオキサン４：１、検２出：紫外線、ＮＨ
３（ガス）、Ｒｆ−値：０．３９）．６．６１．３−〔
Ｎ−（４′−ニトローベンゾールスルホニル）−Ｌ−ア
ラニルオキシ〕−インドール、無色結晶、融点１３６−
１３７℃．α青：一３５．９３、ｃ＝１％（メタノール
）． ２６．６２．３−〔Ｎ−（４′−アセチルアミノ
ーベンゾールスルホニル）−Ｌ−アラニルオキシ〕−イ
ンドール、無色結晶、融点１６２−１６３℃．α青：一
５７．２晶、ｃ＝１％（メタノール）．６．６３．３−
〔Ｎ−（４′−ｎ−ブチルーベンゾール ５スルホニル
）−Ｌ−アラニルオキシ］−インドール、無色結晶、融
点１０５℃．α貨：一４６．１融、ｃ＝１％（メタノー
ル）．６．６４．３−〔Ｎ−（４′−Ｔｅｒｔ−ブチル
ーベンゾールスルホニル）−Ｌ−アラニルオキシ〕−イ
３ンドール、無色結晶、融点１４０℃．α青：一４３
．３晶、ｃ＝１％（メタノール）．６．６５．３−〔Ｎ
−（４′−ｎ−オクチルーベンゾールスルホニル）−Ｌ
−アラニルオキシ〕−インドール、無色結晶、融点５７
℃． ４α２Ｂ：一３４，２融、ｃ＝１％
（メタノール）．６．６６．３−〔Ｎ−（４′−ヒドロ
キシーベンゾールスルホニル）−Ｌ−アラニルオキシ〕
−インドール、粘性、わずかに赤色の油状物．薄層クロ
マトグラフイーリシリカゲルプレート、（展開剤：トル
オールージオキサン１：１、検出：紫外線、ＮＨ３（ガ
ス）、Ｒｆ一値：０．６２）．６．６７．３−〔Ｎ−（
４′−メトキシーベンゾールスルホニル）−Ｌ−アラニ
ルオキシ〕−インドール、無色結晶、融点１２６−１２
８℃．α２Ｂ：一５４．３１、ｃ−１％（メタノール）
．６．６８．３−〔Ｎ−（４′−ベンジルオキシーベン
ゾールスルホニル）−Ｌ−アラニルオキシ〕−インドー
ル、無色結晶、融点１１２℃α２δ：一４０．３、、ｃ
−１％（メタノール）．６．６９．３−〔Ｎ−（４′−
〈２″−ヒドロキシ−エトキシ〉−ベンゾールスルホニ
ル）−Ｌ−アラニルオキシ〕−インドール６．７０．３
−〔Ｎ−（４′−くずーオキサ−５″−ヒドロキシ−ｎ
−ペンチルオキシ〉−ベンゾールスルホニル）−Ｌ−ア
ラニルオキシ〕−インドール、無色、粘性油状物．α青
：一３６．４状、ｃ＝１％（メタノール）．薄層クロマ
トグラフイーリシリカゲルプレート、（展開剤：トルオ
ール一酢酸エチルエステル１：１０、検出：紫外線、Ｎ
Ｈ３（ガス）、Ｒｆ一値：０．３７）．６．７１．３−
〔Ｎ−（４′−〈３″・６″−ジーオキサ一ｎ−ヘプチ
ルオキシ〉−ベンゾールスルホニル）Ｌ−アラニルオキ
シ〕−インドール、わずかに赤色の粘性油状物．薄層ク
ロマトグラフイーリシリカゲルプレート、（展開剤：ト
ルオールージオキサン４：１、検出：紫外線、ＮＨ３（
ガス）、Ｒｆ一値：０．２１）．６．７２．３−〔Ｎ−
（４′−くグーヒドロキシーエチル〉−ベンゾールスル
ホニル）−Ｌ−アラニルオキシ〕−インドール、帯黄色
、無定形粉末、α賀：一５４．５０，．ｃ−１％（メタ
ノール）．薄層クロマトグラフイーリシリカゲルプレー
ト、（展開剤：トルオール一酢酸エチルエステル１：２
、検出、紫外線、ＮＨ３（ガス）、Ｒｆ一値：０．２６
）．６．７３．３−〔Ｎ−（４″−く７一｛４５″−ニ
トロベンジルオキシ｝一エチル〉−ベンゾールスルホニ
ル）−Ｌ−アラニルオキシ〕−インドール６．７４．３
−〔Ｎ−（４′−く２″−クロル−エチル〉−ベンゾー
ルスルホニル）−Ｌ−アラニルオキシ〕−インドール、
わずかに赤色の、無定形泡状物．α青：一４８．３一、
ｃ＝１％（メタノール）．薄層クロマトグラフイーリシ
リカゲルプレート、（展開剤：トルオール一酢酸エステ
ル５：１、検出：紫外線、ＮＨ３（ガス）、Ｒｆ一値：
０．２０）．こ６．７５．３−〔Ｎ−（４′−シアノー
ベンゾールスルホニル）−Ｌ−アラニルオキシ］−イン
ドール、無色結晶、融点１３１℃．α青：一４７．０３
ｃ＝１％（ジメチルホルムアミド）．
１６，７６。

３−〔Ｎ−（４′一カルボキシーベンゾールスルホニル
）−Ｌ−アラニルオキシ〕−インドール、無色結晶、融
点１４３℃．α青：一５１．００、ｃ＝１％（メタノー
ル）．６．７７．３−〔Ｎ−（４′−ベンジルオキシカ
ルボニ ｌルーベンゾールスルホニル）−Ｌ−アラニル
オキシ〕−インドール、無色結晶、融点１７８℃．α青
：一４２．８ル、ｃ＝１％（アセトン）．６．７８．３
−〔Ｎ−（４′一カルバモイルーベンゾールスルホニル
）−Ｌ−アラニルオキシ〕−イン２ドール、無色結晶、
融点２０６℃．α青：一５８．０、、ｃ＝１％（アセト
ン）．６．７９．３−〔Ｎ−（４／−くジメチル−カル
バモイル〉−ベンゾールスルホニル）−Ｌ−アラニルオ
キシ〕−インドール、無色結晶、融点１７０乏一１７２
℃α青：一４６．４ーｃ＝１％（ジメチルホルムアミド
）．６．８０．３−〔Ｎ−メチル−Ｎ−（トルオール一
ｌ−スルホニル）−Ｌ−アラニルオキシ］−イン ５ド
ール、無色結晶、融点８２℃．α青：一４２．２、、ｃ
＝１％（メタノール）．６．８１．３−〔Ｎ−（２′・
４′・６′一トリメチルーベンゾールスルホニル）−Ｌ
−アラニルオキシ〕−インドール、無色結晶、融点１９
２−１９４℃α青：一６３．８色、ｃ−１％（メタノー
ル）．６．８２．３−〔Ｎ−（ビフエニル一４′−スル
ホニル）−Ｌ−アラニルオキシ〕−インドール、無色結
晶、融点１５９℃．α２１Ｓ：一４２．０〕、ｃ＝１％
（メタノール）．６．８３．３−〔Ｎ−（ナフタリンー
グースルホニル）−Ｌ−アラニルオキシ〕−インドール
、わずかに赤色の結晶、融点１０３−１０５℃．薄層ク
ロマトグラフイーリシリカゲルプレート、（展開剤：ト
ルオールージオキサン４：１、検出：紫外線、ＮＨ３（
ガス）、Ｒｆ一値：０．４１），６．８４．３−〔Ｎ−
（４′−アセチルアミノ−ナフタリン−１′−スルホニ
ル）−Ｌ−アラニルオキシ］−インドール、無色結晶、
融点１２９−１３２℃α２Ｂ：一６３．２結、ｃ＝１％
（メタノール）．６．８５．３−〔Ｎ−（５′−ジメチ
ルアミノ−ナフタリン−１′−スルホニル）−Ｌ−アラ
ニルオキシ〕−インドール、無色結晶、融点１７０℃．
α青：一３０．７色、ｃ＝１％（メタノール），６．８
６．３−〔Ｎ−（トルオールーイースルホニル）Ｌ−ア
ラニルオキシ〕−５−ベンジル−インドール６．８７．
３−〔Ｎ−（トルオール一４′−スルホニル）Ｌ−アラ
ニルオキシ〕−５−フエニルーインドール例７ ３−〔Ｎ−（Ｔｅｒｔ−ブチロキシカルボニル）一Ｌ−
アラニルオキシ］−インドールカルボジイミド法による
反応のためには、Ｎ−Ｔｅｒｔ−ブチロキシカルボニル
一Ｌ−アラニン３．２３ｙ（０．０１７モル）及びイン
ドキシル２．２７ｆ（０．０１７モル）を無水ジオキサ
ンージクロルメタン１：１１００ｍ１中に溶かす。

無水ジオキサン２０ｍ１中のシンクロヘキシルカルボジ
イミド（ＤＣＣ） ３．８７ｔ（０．０１９モル）の溶
液を添加した後、水及び酸素遮断下に室温で６８時間撹
拌する。分離するＮ−Ｎ′−ジシクロヘキシル尿素を吸
引濾過し、この溶液を真空中留去し、残分を酢酸エチル
エステル約１００ＷＬＩ中に溶かす。更に析出するＮ−
Ｎ″−ジシクロヘキシル尿素を濾別した後、透明な酢酸
エステル溶液を順次１Ｎクエン酸３０ｍ１、水２０ｍ１
１５〜１０％炭酸水素ナトリウム溶液５０ｄ及び水２５
ｍ１でそれぞれ２回洗浄する。硫酸ナトリウム上で乾燥
させた後、酢酸エステル相を真空で濃縮する。無定形残
分をシリカゲルのカラムクロマトグラフイ一によりトル
オールージオキサン混合物（９：１）で精製する。集め
たフラクシヨンを真空中で濃縮し、残分を酢酸エステル
−エーテル（１：１０）から再結晶すると、無色結晶で
、融点１５８℃、α青：ー６５．００ｃ＝１％（メタノ
ール）の３−〔Ｎ（Ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル
）−Ｌ−アラニルオキシ〕−インドール１．０４７（２
０％）が得られる。副生成物として１位で置換された３
−ヒドロキシ−インドール（例７参照）が得られる。

同様にして相応して置換したインドキシル化合物とその
つどのアミノ酸とを反応させることにより次の基質が得
られ、この際ここでもすべての場合に副生成物として相
応する１位で置換された３−ヒドロキシ−インドールが
生ずる：７．１．３−〔Ｎ−ホルミル−Ｌ−アラニルオ
キシ］−インドール、無色結晶、融点１２１−１２２℃
α青：一２．５無ｃ＝１％（メタノール），７．２．３
−〔Ｎ−（イーメトキシーベンジルオキシカルボニル）
−Ｌ−アラニルオキシ］−インドール、無色結晶、融点
９２℃．α青：一４２．９、、ｃ−１％（メタノール）
．７．３．３−〔Ｎ−（Ｎ′−くピペリジノ〉−オキシ
カルボニル）−Ｌ−アラニルオキシ〕−インドＺール、
無色結晶、融点１０４℃．α青：一２４．７融、ｃ＝１
％（メタノール）．７．４．３−〔Ｎ−（チエニル一（
２′）−メトキシカルボニル）−Ｌ−アラニルオキシ〕
−インドール、無色結晶、融点１３４℃．
＝α智：一５５．７融、ｃ＝１％（メタノール）．７
．５．３−〔Ｎ−（キノリン−８′−スルホニル）一Ｌ
−アラニルオキシ〕−インドール、無定形の、わずかに
帯赤色粉末．薄層クロマトグラフイーリシリカゲルプレ
ート、（展開剤：トルオールージオキサン４：１、検出
：紫外線、ＮＨ３（ガス）、Ｒｆ一値：０．２３）．７
．６．３−〔Ｎ−（ジフエニルカルバモイル）Ｌ−アラ
ニルオキシ〕−インドール、無色結晶、融点１８８−１
９０℃．α笛：＋２２．２０ｃ＝１％（ピリジン）．例
８３−〔Ｎ−（フリル一〈ｉ〉−メトキシカルボニル）
−Ｌ−アラニルオキシ〕−インドール活性エステル法に
より反応を行なうためにはＮ（フリル一〈ｉ〉−メトキ
シカルボニル）−Ｌ一アラニン４．２６ｆ（０．０２モ
ル）及びＮ−ヒドロキシ−ベンゾトリアゾール５．４ｔ
（０．０４モル）を無水テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）
５０ｍ１中に溶かし、Ｏ℃に冷却し、無水ＴＨＦｌＯ
ｍｌ中のシンクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）
４．４ｔ（０．０２２モル）の溶液と混合する。

活性エステルを形成するために反応混合物を０℃で１．
５時間撹拌し、次いで室温で２時間攪拌する。これにイ
ンドキシル２．６６ｔ（０．０２モル）及び無水トリエ
チルアミン２．７７ｍ１（０．０４モル）を酸素及び水
遮断下に加える。この混合物を室温で１８時間攪拌する
。生じたＮ−Ｎ′−ジシクロヘキシル尿素を吸引濾過し
、この溶液を真空中留去し、残分を例７に記載したよう
に処理する。次いで、無定形粗生成物をシリカゲルカラ
ムでトリオール一酢酸エステル混合物（５：１）を用い
てカラムクロマトグラフイ一により精製する。相応する
合したフラクシヨンを濃縮し、酢酸エスチル−石油エー
テル１：１から再結晶すると、無色結晶、融点１２９℃
、α青：一５１．９無ｃ−１％（メタノール）の３−〔
Ｎ−（フリル一〈グ〉−メトキシカルボニル）−Ｌ−ア
ラニルオキシ〕−インドール３．０ｔ（４５．７％）が
得られる。同様にして、相応する置換したアミノ酸又は
ペプチドとそのつどのインドキシル化合物とを反応させ
ると次の物質が得られる：８．１．３−〔Ｎ−（トルオ
ール一４′−スルホニルーＬ−バリルオキシ〕−インド
ール、無色結晶、融点１２５−１２７℃．α貨：一２４
．５７、ｃ＝１％（メタノール）．８．２．３−〔Ｎ−
（４′−ジメチルアミノーベンゾールスルホニル）−Ｌ
−アラニルオキシ〕−インドール、無定形のわずかに赤
色の粉末．薄層クロマトグラフイーリシリカゲルプレー
ト、（展開剤：トルオールージオキサン３：１、検出：
紫外線、ＮＨ３（ガス）、Ｒｆ一値：０．２５）．８．
３．３−〔Ｎ−（４′−アセチルーベンゾールスルホニ
ル）−Ｌ−アラニルオキシ〕−インドール８．４．３−
〔Ｎ−（４′−メトキシカルボニルーベンゾールスルホ
ニル）−Ｌ−アラニルオキシ〕一インドール、無色結晶
、融点１４０−１４１℃α青：一４０．３色、ｃ＝１％
（メタノール）．８．５．３−〔Ｎ−（４′一カルボキ
シメチルーベンゾールスルホニル）−Ｌ−アラニルオキ
シ〕一インドール、無定形、無色泡状物．α青：一８２
．１３、ｃ＝１％（メタノール）．薄層クロマトグラフ
イーリシリカゲルプレート、（展開剤：イソプロパノー
ル一酢酸−ｎ−ブチルエステル−水 ５：３：２、検出
：紫外線、ＮＨ３（ガス）、Ｒｆ一値：０．６８）．８
．６．３−〔Ｎ−（４′一カルボキシメトキシーベンゾ
ールスルホニル）−Ｌ−アラニルオキシ〕−インドール
、無定形、無色泡状物．α甘：一４７．７定、ｃ＝１％
（メタノール）．薄層クロマトグラフイーリシリカゲル
プレート、（展開剤：トルオールージオキサン一氷酢酸
６：２：１、検出：紫外線、ＮＨ３（ガス）、Ｒｆ一値
：０．２７）．８．７．３−〔Ｎ−（４′一カルボキシ
メチルアミノーベンゾールスルホニル）−Ｌ−アラニル
オキシ〕−インドール、無色結晶、融点１５１１５３℃
（分解）． α智：ー７１．５．、ｃ＝１％（メタノール）．８．８
．３−〔Ｎ′−（４′−くベンジルオキシカルボニル−
メチルアミノ〉−ベンゾールスルホニル）Ｌ−アラニル
オキシ〕−インドール、無色結晶、融点１１０−１１３
℃．α２δ：一６０．００、ｃ＝１％（メタノール）．
８．９．３−〔Ｎ−（４′−フルオルーベンゾールスル
ホニル）−Ｌ−アラニルオキシ〕−インド− ｓル、無
色結晶、融点９４−９５℃．α青：一４８．５点、ｃ＝
１％（メタノール）．８．１０．３−〔Ｎ−（４′−フ
ルオルスルホニルーベンゾールスルホニル）−Ｌ−アラ
ニルオキシ〕−インドール８．１１．３−〔Ｎ−（４′
−スルフアモイルーベンゾールスルホニル）−Ｌ−アラ
ニルオキシ〕−インドール８．１２．３−〔Ｎ−アセチ
ル−Ｎ−（トルオールｌ−スルホニル）−Ｌ−アラニル
オキシ〕−インドール、無色無定形粉末．α昭：一１０
．６定、ｃ＝１％（メタノール）．薄層クロマトグラフ
イーリシリカゲルプレート、（展開剤：トルオールージ
オキサン９：１、検出：紫外線、ＮＨ３（ガス）、Ｒｆ
一値：０．１７）．・８．１３．３−〔Ｎ−（ピリジン
−３仁スルホニル）−Ｌ−アラニルオキシ〕−インドー
ル、無色結晶、融点１５５−１５７℃．α青：一５５．
１１ｃ＝１％（メタノール）．８．１４．３−〔Ｎ−（
５′・５′−ジメチル−３′−オキソーシクロヘキセン
一１′−イル）−Ｌ−アラニルオキシ〕−インドール、
無色結晶、融点１５４シＣ α青：一２７２．２ー、ｃ＝１％（メタノール）．８．
１５．３−〔Ｎ−（ジ一く４′−ニトロベンジル〉−ホ
スホリル）−Ｌ−アラニルオキシ〕−インドール８．１
６．３−〔Ｎ−（ジ一〈４′−ブロムベンジル〉−ホス
ホリル）−Ｌ−アラニルオキシ〕−インドール８．１７
．３−〔Ｎ−（トルオール一４′−スルホニル）一Ｌ−
アラニルオキシ〕−５−メトキシ−インドール、無色粘
性油状物．α青：一４６．８油、ｃ−１％（メタノール
）．薄層クロマトグラフイーリシリカゲルプレート（展
開剤二トルオール一酢酸エチルエステル２：１、検出：
紫外線、ＮＨ３（ガス）、Ｒｆ一値：０．４５）．例９ ３−〔Ｎ−（３′・６′−ジオキサ−ｎ−ヘプチルオキ
シ−カルボニル）−Ｌ−アラニルオキシ〕−インドール
混合無水物法により反応させるために、Ｎ一（３・６−
ジオキサ−ｎ−ヘプチルオキシ−カルボニル）−Ｌ−ア
ラニン３，５２ｆ（０．０１５モル）を無水テトラヒド
ロフラン（ＴＨＦ） ３５ｍ１中に溶かす。

トリエチルアミン２．１ｍ１（０．０１５モル）を添加
した後、混合物を−１５０℃に冷却し、次いで混合無水
物を形成させるためにクロル蟻酸エチルエステル１．４
３ＷＬ１（０．０１５モル）と混合する。−１５℃で１
時間攪拌した後、酸素及び水遮断下に−１５℃に冷却し
た無水ＴＨＦ２Ｏｍｌ中のインドキシル２．００ｔ（０
．０１５モル）を加える。この混合物を更に−１５℃〜
−２０℃で２時間撹拌し、次いで一夜冷蔵庫中に放置す
る。生じた塩酸トリエチルアミンを吸引濾過し、この溶
液を真空中で留去し、残分を例７の記載と同様に処理す
る。次いで無定形粗生成物をシリカゲルでのカラムクロ
マトグラフイ一にかけ、先ず塩化メチレン−メタノール
混合物（９５：５）、次いでトルオールーメチルエチル
ケトン混合物（１：２）で精製する。集めたフラクシヨ
ンを活性炭で処理し、溶剤を留去した後、３−〔Ｎ−（
３′・６′−ジオキサ一ｎ−ヘプチルオキシ−カルボニ
ル）−Ｌ−アラニルオキシ］−インドール０．５１ｙ（
９．５％）が得られ、これは無色粘性油状物であり、α
碧：４０．４、、ｃ−１％（メタノール）、薄層クロマ
トグラフイーリシリカゲルプレート、（展開剤：トルオ
ールーメチルエチルケトン１：２、検出：紫外線、ＮＨ
３（ガス）、Ｒｆ値：０．５４）である。同様にして相
応する置換アミノ酸とそのつどのインドキシル化合物と
の反応により次の物質が得られる。９１．３−〔Ｎ−（
クーニトローベンゾールスルフエニル）−Ｌ−アラニル
オキシ〕−インドール、黄色結晶、融点１３３−１３４
℃．α２Ｂ：一１１６．００、ｃ＝１％（メタノール）
．）．２．３−〔Ｎ−（１′−メチルーグーベンゾイル
ビニル）−Ｌ−アラニルオキシ〕−インドール、わずか
に赤色を帯びた結晶、融点１３０１３３ずＣ薄層クロマ
トグラフイーリシリカゲルプレート、（展開剤：トルオ
ールージオキサン４：１、検出：紫外線、ＮＨ３（ガス
）、Ｒｆ一値：０．４５）。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 一般式 I ： ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ）〔式中、Ｒ
   ＿１、Ｒ＿２、Ｒ＿３およびＲ＿４は同一又は異なつて
   いてよく、それぞれ水素原子又はハロゲン原子、低級ア
   ルキル基、低級アルコキシ基、アリール基、アルアルキ
   ル基、アルアルコキシ基、ヒドロキシ基、カルボキシ基
   、カルボキシ−低級アルコキシ基、アルアルコキシカル
   ボニル基、アルアルコキシカルボニル−低級アルコキシ
   基、ニトロ基又は低級アシルアミノ基を表わし、Ｘは低
   級アルキル基、アリール基、アルアルキル基又はアシル
   基で置換されていてよいイミノ基を表わし、Ａは脂肪族
   、芳香族、天然のＬ−モノアミノカルボン酸並びにその
   Ｄ−及びＤＬ−型又はこれらアミノ酸２〜５個からなる
   ペプチド基を表わし、Ｂはペプチド化学に常用の窒素保
   護基を表わす〕のインドキシル−アミノ酸エステル及び
   −ペプチドエステル。 ２ 一般式 I ： ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ）〔式中、Ｒ
   ＿１、Ｒ＿２、Ｒ＿３及びＲ＿４は同一又は異なつてよ
   く、それぞれ水素原子又はハロゲン原子、低級アルキル
   基、低級アルコキシ基、アリール基、アルアルキル基、
   アルアルコキシ基、ヒドロキシ基、カルボキシ基、カル
   ボキシ−低級アルコキシ基、アルアルコキシカルボニル
   基、アルアルコキシカルボニル−低級アルコキシ基、ニ
   トロ基又は低級アシルアミノ基を表わし、Ｘは低級アル
   キル基、アリール基、アルアルキル基又はアシル基で置
   換されていてよいイミノ基を表わし、Ａは脂肪族、芳香
   族、天然のＬ−モノアミノカルボン酸並びにそのＤ−及
   びＤＬ−型又はこれらアミノ酸２〜５個からなるペプチ
   ド基を表わし、Ｂはペプチド化学に常用の窒素保護基を
   表わす〕のインドキシル−アミノ酸エステル及び−ペプ
   チドエステルを製造するために、一般式II：▲数式、化
   学式、表等があります▼（II）〔式中、Ｒ＿１、Ｒ＿２
   、Ｒ＿３、Ｒ＿４及びＸは前記のものを表わす〕の化合
   物と一般式III：Ｈ−Ｏ−Ａ−Ｂ（III） 〔式中、Ａ及びＢは前記のものを表わす〕のアミノ酸及
   びペプチドとを、もしくはその反応性誘導体とを自体公
   知法で反応させることを特徴とする、インドキシル−ア
   ミノ酸エステル及び−ペプチドエステルの製法。 ３ １種以上の色原体及び適当な緩衝剤を含有する吸収
   性担体、膜層、粉末混合物、凍結乾燥物、溶液又は錠剤
   から成る蛋白質分解酵素検出用診断剤において、色原体
   として一般式 I ：▲数式、化学式、表等があります▼
   （ I ）〔式中、Ｒ＿１、Ｒ＿２、Ｒ＿３及びＲ＿４は
   同一又は異なつていてよく、それぞれ水素原子又はハロ
   ゲン原子、低級アルキル基、低級アルコキシ基、アリー
   ル基、アルアルキル基、アルアルコキシ基、ヒドロキシ
   基、カルボキシ基、カルボキシ−低級アルコキシ基、ア
   ルアルコキシカルボニル基、アルアルコキシカルボニル
   −低級アルコキシ基、ニトロ基又は低級アシルアミノ基
   を表わし、Ｘは低級アルキル基、アリール基、アルアル
   キル基又はアシル基で置換されていてよいイミノ基を表
   わし、Ａは脂肪族、芳香族、天然のＬ−モノアミノ酸カ
   ルボン酸並びにそのＤ−及びＤＬ−型又はこれらアミノ
   酸２〜５個からなるペプチド基を表わし、Ｂはペプチド
   化学に常用の窒素保護基を表わす〕のインドキシル−ア
   ミノ酸エステル及び／又はインドキシル−ペプチドエス
   テルを使用することを特徴とする、蛋白質分解酵素検出
   用診断剤。 ４ 付加的に常用の助剤を添加含有する、特許請求の範
   囲第３項記載の診断剤。 ５ 付加的な助剤として湿潤剤、酸化剤、膜形成剤、ガ
   ーレン製剤用添加物及び／又は結合剤を使用する、特許
   請求の範囲第４項記載の診断剤。