JPS5934896A - 抗腫瘍性多糖類の製造法 - Google Patents
抗腫瘍性多糖類の製造法Info
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- JPS5934896A JPS5934896A JP57145982A JP14598282A JPS5934896A JP S5934896 A JPS5934896 A JP S5934896A JP 57145982 A JP57145982 A JP 57145982A JP 14598282 A JP14598282 A JP 14598282A JP S5934896 A JPS5934896 A JP S5934896A
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- Japan
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- culture
- polysaccharide
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- cultured
- Prior art date
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- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、アクレモニウ４＠ （Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ
）に属する多糖類生産ｍを培養することにより抗腫瘍活
性を示す多糖類を製造する方法に関する。
）に属する多糖類生産ｍを培養することにより抗腫瘍活
性を示す多糖類を製造する方法に関する。
近年、担子菌類を培養することにより多糖類ヲ活性成分
とする抗腫瘍性物質の製造法が多数報告されており、工
業的に実施されているものもある。
とする抗腫瘍性物質の製造法が多数報告されており、工
業的に実施されているものもある。
一方、不完全菌類のうちには液体培地中で培養すること
によｐ囲体細胞外に多糖類を生産するものがあることが
報告されているが、有効な抗腫瘍活性を示すものは未だ
知られていない。
によｐ囲体細胞外に多糖類を生産するものがあることが
報告されているが、有効な抗腫瘍活性を示すものは未だ
知られていない。
本発明者は、土壌中の不完全菌類について有効な抗＠瘍
活性を示す多糖類の生産能を有するものについて検討し
た結果、アクレモニウム属（Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ）に
属する窮種であるアクレモニウムやスビーシイズ（Ａｃ
ｒｅｍｏｎｉｕｍ ｓｐ、 ’） ’Ｑ菌株を培養する
ことにより有効な抗腫瘍活性を示す多糖類を生産するこ
との知見を得て不発明をなすに至った。
活性を示す多糖類の生産能を有するものについて検討し
た結果、アクレモニウム属（Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ）に
属する窮種であるアクレモニウムやスビーシイズ（Ａｃ
ｒｅｍｏｎｉｕｍ ｓｐ、 ’） ’Ｑ菌株を培養する
ことにより有効な抗腫瘍活性を示す多糖類を生産するこ
との知見を得て不発明をなすに至った。
因みに、本発明で言う６多糖類”とは異種の糖及び糖以
外の物質が結合したヘテロ多糖類を意味する。
外の物質が結合したヘテロ多糖類を意味する。
以下本発明を詳しく説明する〇
本発明は、アクレモニウム属に属する多糖類生産菌を寒
天平板培地で培養して得られる菌糸体又は分生子を液体
培地中で培養し、培養物から抗腫瘍活性を示す多糖類を
採取することを特徴とする。
天平板培地で培養して得られる菌糸体又は分生子を液体
培地中で培養し、培養物から抗腫瘍活性を示す多糖類を
採取することを特徴とする。
本発明で利用するアク、レモニウム属に属する多糖類生
産菌は、土壌（埼玉県秩父市山林土壌）より分離された
ものであって、不完全菌亜門（Ｄｅｕｔｅｒｏｍｙｃｏ
ｔｉｎａ）、不完全糸状囲網（Ｈｙｐｈｏ −ｍｙｃｅ
ｔθＢ）のフイアロ型アクレモニクム属（Ａｃｒｅｍｏ
ｎｉｕｍ）に属し、アクレモニウム会スビーシイズ（Ａ
ｃｒｅｍｏｎｉｕｍ ｓｐ、）日ＢＴ ７０１６の表示
で微工研菌寄第６６０１号（ＦＢＲＭＰ−６６０１）１
７）番号で工業技術院微生物工業技術研究所に受託され
ている。
産菌は、土壌（埼玉県秩父市山林土壌）より分離された
ものであって、不完全菌亜門（Ｄｅｕｔｅｒｏｍｙｃｏ
ｔｉｎａ）、不完全糸状囲網（Ｈｙｐｈｏ −ｍｙｃｅ
ｔθＢ）のフイアロ型アクレモニクム属（Ａｃｒｅｍｏ
ｎｉｕｍ）に属し、アクレモニウム会スビーシイズ（Ａ
ｃｒｅｍｏｎｉｕｍ ｓｐ、）日ＢＴ ７０１６の表示
で微工研菌寄第６６０１号（ＦＢＲＭＰ−６６０１）１
７）番号で工業技術院微生物工業技術研究所に受託され
ている。
なお、Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ ｓｐ、 ＳＢＴ ７０１
６ の同定は、Ｗ、 Ｇａｍｅ、 ［Ｏｅｐｈａｌ
ｏｓｐｏｒｉｕｍ −ａｒｔｉｇｅ Ｓｈｉｍ−１
８（１９８０）及び徳増征二：「防菌防黴Ｊｖｏｌ。
６ の同定は、Ｗ、 Ｇａｍｅ、 ［Ｏｅｐｈａｌ
ｏｓｐｏｒｉｕｍ −ａｒｔｉｇｅ Ｓｈｉｍ−１
８（１９８０）及び徳増征二：「防菌防黴Ｊｖｏｌ。
８、 Ｎｏ、 ２．１８ （１９８０）に準拠して行な
った。
った。
以下にＡｃｒｅｍｏＨｌｕｍ ｓｐ、 ＥＩＢＴ ７０
１６ の菌学的性質を示す。
１６ の菌学的性質を示す。
（１）生育
麦芽寒天培地上の生育は遅く、コロニーは綿毛状で黄褐
色を呈し、分生子形成により暗褐色となシ、裏面および
寒天は暗褐色になる。表面に褐色水滴を生ずる。ポテト
・デキストロース寒天培地上の生育は速やかであって、
綿毛状で白色を呈し、分生子形成によっても白色であり
、且つ裏面も白色のままである。
色を呈し、分生子形成により暗褐色となシ、裏面および
寒天は暗褐色になる。表面に褐色水滴を生ずる。ポテト
・デキストロース寒天培地上の生育は速やかであって、
綿毛状で白色を呈し、分生子形成によっても白色であり
、且つ裏面も白色のままである。
（２ン 形態
ポテト・デキストロース寒天培地におけるスライド培養
についての顕微鏡所見では、菌糸は無色、分生子柄は気
生菌糸側面から直立して生じ無色で隔壁を有しない。分
生子柄はほとんどが無分枝であるが、極く僅かに一度分
枝を含む。
についての顕微鏡所見では、菌糸は無色、分生子柄は気
生菌糸側面から直立して生じ無色で隔壁を有しない。分
生子柄はほとんどが無分枝であるが、極く僅かに一度分
枝を含む。
フイアライドは細長で先細りしている。分生子はフイア
ロ型、無色、卵形、単細胞で、粘球となって分生子柄の
先端にかたまる。
ロ型、無色、卵形、単細胞で、粘球となって分生子柄の
先端にかたまる。
ユクロース、マルトース、ラクトースおよび澱粉を利用
するもキシロースを利用しない。
するもキシロースを利用しない。
本発明ではＡｃｒｅｍｏｎｉｕｍ ｅ２−、 ＳＢＴ
７０１６ ｆ’！ず寒天平板培地で培養して培地表面
に生育したその菌糸体又は分生子或はそれらの混合物を
得る。
７０１６ ｆ’！ず寒天平板培地で培養して培地表面
に生育したその菌糸体又は分生子或はそれらの混合物を
得る。
この培養は通常２０〜３０℃、好ましくは２５〜２７℃
で１０〜１４日間行なう。また、ここで使用する寒天平
板培地は通常糸状菌、酵母等の培養に用いられるポテト
・デキストロース寒天培地に０．１〜０．３重量係の酵
母エキスを添加し、ｐＨを４〜７に調整したものである
。
で１０〜１４日間行なう。また、ここで使用する寒天平
板培地は通常糸状菌、酵母等の培養に用いられるポテト
・デキストロース寒天培地に０．１〜０．３重量係の酵
母エキスを添加し、ｐＨを４〜７に調整したものである
。
次いで、本発明では上述のごとく培養して得ら扛る白色
の菌糸体又は分生子（胞子）或はそｔしらの混合物全種
母とし、これを液体培地中で培養する。この液体培地中
での培養に当っては、培養初期（一般には３〜６日間）
には静置培養又は、通気培養で行ない、次いで振とう培
養又は通気攪拌培養を４〜６日間程度行なうことが好ま
しい。このような培養方式を採用するのは、種母として
の菌糸体を液体培養に接種し、静置培養を行なうことな
く、直ちに振とう培養又は通気攪拌培養を行々うときに
は菌糸体の増殖は旺盛となる反面目的物質である多１ｉ
！＠を主要成分とする抗帽瘍活性物質の生産が低減する
ことに因る。液体培地中での培養温度は上記２段階の期
間を通して２０〜３０℃、好ましくは２５〜２７℃であ
る。
の菌糸体又は分生子（胞子）或はそｔしらの混合物全種
母とし、これを液体培地中で培養する。この液体培地中
での培養に当っては、培養初期（一般には３〜６日間）
には静置培養又は、通気培養で行ない、次いで振とう培
養又は通気攪拌培養を４〜６日間程度行なうことが好ま
しい。このような培養方式を採用するのは、種母として
の菌糸体を液体培養に接種し、静置培養を行なうことな
く、直ちに振とう培養又は通気攪拌培養を行々うときに
は菌糸体の増殖は旺盛となる反面目的物質である多１ｉ
！＠を主要成分とする抗帽瘍活性物質の生産が低減する
ことに因る。液体培地中での培養温度は上記２段階の期
間を通して２０〜３０℃、好ましくは２５〜２７℃であ
る。
上記液体培養に用いる培地は一般に微生物の培養に適用
される公知の液体培地でよく、例えばグルコースを糖源
とし、ペプトン、＃母エキスを含む培地であればよい。
される公知の液体培地でよく、例えばグルコースを糖源
とし、ペプトン、＃母エキスを含む培地であればよい。
更に、この培地に無機垣頽、アミノ酸、ビタミンあるい
は乳成分等を添加したものも用い得る。
は乳成分等を添加したものも用い得る。
又、液体培地のｐＨは４〜７の範囲が適当であシ、滅菌
前のｐＨが５．５である液体培地の使用が特に好ましい
。
前のｐＨが５．５である液体培地の使用が特に好ましい
。
なお、液体培地中での培養は継代的に行なうことが可能
であるが、継代回数の増加に伴って多糖類の生産性が次
第に低下するので液体培地のみによる菌の植えつぎは３
〜５回以内にすべきであるが、多糖体の生産性の観点か
らすれば、寒天平板培地上に生育させた菌糸体全種母と
して新たに液体培養することが有利である。
であるが、継代回数の増加に伴って多糖類の生産性が次
第に低下するので液体培地のみによる菌の植えつぎは３
〜５回以内にすべきであるが、多糖体の生産性の観点か
らすれば、寒天平板培地上に生育させた菌糸体全種母と
して新たに液体培養することが有利である。
しかし、培養規模が大きくなると（例えば１０を以上の
液体培養を行う場合）上記寒天平板培養の菌糸体全種母
として用いることは操作上困難となるので菌培養として
の液体培地での静置培養により得られる培養物を種母と
して用いるとよい。又、寒天平板培養物からの第１伏目
の振とう又は通気攪拌培養物を滅菌生理食塩水で３〜５
倍稀釈し、ホモジナイズしたもの？、種母と用いること
もできる。
液体培養を行う場合）上記寒天平板培養の菌糸体全種母
として用いることは操作上困難となるので菌培養として
の液体培地での静置培養により得られる培養物を種母と
して用いるとよい。又、寒天平板培養物からの第１伏目
の振とう又は通気攪拌培養物を滅菌生理食塩水で３〜５
倍稀釈し、ホモジナイズしたもの？、種母と用いること
もできる。
本発明で利用するＡａｒｅｍｏｎｉｕｍ ｅｐ、 ５Ｂ
Ｔ７０１６の菌糸体（又鉱分生子）を上述のようにして
液体培養すると高粘性物質を生産して培養物自体が高粘
性を示すようになる。この高粘性培養物から目的とする
抗腫瘍活性を有する多糖類を採取するには、抽出手法を
適用し得るが、培養物そのままでは粘性が高い故に抽出
効率がよくないので、培養物を２〜３倍の蒸留水で希釈
し、ミキサーでよく攪拌混合し、この混合物に遠心分離
、ろ過等の手法を施して水溶液画分を得る。また、上記
分別によシ得られる残渣（菌糸体）を蒸留水で２〜３回
洗浄し、再び加水後、例えばワーリングブレンダーで菌
糸体を破砕し、遠心分離して得られる水溶液画分を用い
ることもでき、更に該両分全上記水溶液画分と一緒にし
てもよい。更に又菌糸体の懸濁液そのままの状態でも用
いることが可能である。
Ｔ７０１６の菌糸体（又鉱分生子）を上述のようにして
液体培養すると高粘性物質を生産して培養物自体が高粘
性を示すようになる。この高粘性培養物から目的とする
抗腫瘍活性を有する多糖類を採取するには、抽出手法を
適用し得るが、培養物そのままでは粘性が高い故に抽出
効率がよくないので、培養物を２〜３倍の蒸留水で希釈
し、ミキサーでよく攪拌混合し、この混合物に遠心分離
、ろ過等の手法を施して水溶液画分を得る。また、上記
分別によシ得られる残渣（菌糸体）を蒸留水で２〜３回
洗浄し、再び加水後、例えばワーリングブレンダーで菌
糸体を破砕し、遠心分離して得られる水溶液画分を用い
ることもでき、更に該両分全上記水溶液画分と一緒にし
てもよい。更に又菌糸体の懸濁液そのままの状態でも用
いることが可能である。
次いで、これらの水溶液画分中の遊離蛋白、遊離核酸、
還元ａ！などの夾雑物を除去するために、該両分を活性
炭、弱塩基性イオン交換樹脂又はクロマトグラフィーで
処理する。これらの処理により上記画分の脱色、低分子
物質の除去も行われる。
還元ａ！などの夾雑物を除去するために、該両分を活性
炭、弱塩基性イオン交換樹脂又はクロマトグラフィーで
処理する。これらの処理により上記画分の脱色、低分子
物質の除去も行われる。
さらに、硫安による頃析、低級アルコールやアセトンを
用いる沈殿法、分子篩、限外濾過等の処理を単独或は組
合わせて適用してもよく、その他培養物からの多糖類の
抽出に用いられるセパグ法や酵素法なども適用し得る。
用いる沈殿法、分子篩、限外濾過等の処理を単独或は組
合わせて適用してもよく、その他培養物からの多糖類の
抽出に用いられるセパグ法や酵素法なども適用し得る。
上述のごとくして培養物から採取した多糖類は蒸留水に
対する透析を行ない、必要に応じて濃縮した後、凍結乾
燥して製品とする。
対する透析を行ない、必要に応じて濃縮した後、凍結乾
燥して製品とする。
次に、このようにして得られた多糖類（以下本物質と称
す）の物性について説明する。
す）の物性について説明する。
外観・・・・・・白色を呈し、加熱すると分解して炭化
する。
する。
融点・・・・・・本物質は明確な融点を示さない。
赤外吸収スペクトル・・・・・・ＫＢｒ錠剤法により測
定した結果添付図に示すとおりである。
定した結果添付図に示すとおりである。
溶解性・・・・・・水及びジメチルスルホキザイドに可
溶性であるが、一般有機溶剤並びに有機酸には不溶。
溶性であるが、一般有機溶剤並びに有機酸には不溶。
なお、本物質の水溶液は半透膜を通過
せず、２〜１０％水溶液のｐＨは６．２〜６．４であり
、０．１係水溶液の紫外部吸収は認められない。
、０．１係水溶液の紫外部吸収は認められない。
呈色反応・・・・・・モーリッシュ反応、アンスロン反
応及びニンヒドリン反応は陽性であり、エルソンモルガ
ン反応、バハアル反応及びヨードデンプン反応は陰性で
ある。
応及びニンヒドリン反応は陽性であり、エルソンモルガ
ン反応、バハアル反応及びヨードデンプン反応は陰性で
ある。
本物質は種々の条件下で薄層クロマトグラフィーを行な
っても原点は移動しない。本物質を２〜４Ｎ硫酸で加水
分解し、中和後トリメチルシリル化を行ったものについ
てガスクロマトグラフィーで分析した結果、グルコース
と少量のマンノース及びガラクトースを検出した。また
、本物質を４Ｎ塩酸で１４時間加水分解した試料につい
てアミノ酸自動分析創で分析した結果ガラクトサミンと
少量のグルコサミン全検出した。
っても原点は移動しない。本物質を２〜４Ｎ硫酸で加水
分解し、中和後トリメチルシリル化を行ったものについ
てガスクロマトグラフィーで分析した結果、グルコース
と少量のマンノース及びガラクトースを検出した。また
、本物質を４Ｎ塩酸で１４時間加水分解した試料につい
てアミノ酸自動分析創で分析した結果ガラクトサミンと
少量のグルコサミン全検出した。
更に、本物質を水で５０＃ｖ１５０ｒｎｌの懸濁液とな
し、超音波のような処理を施して十分に可溶化させた後
遠心分離して得られる上清についてゲルろ過或はイオン
交換系のカラムクロマトグラフィーもしくは溶液のｐＨ
調整による溶解度の差を利用した分別手法等を用いて分
析した結果、グルコースを主要な構成成分とする中性糖
およびガラクトサミンを主要構成成分とするアミノ糖の
各重合体と蛋白とから成っていた。
し、超音波のような処理を施して十分に可溶化させた後
遠心分離して得られる上清についてゲルろ過或はイオン
交換系のカラムクロマトグラフィーもしくは溶液のｐＨ
調整による溶解度の差を利用した分別手法等を用いて分
析した結果、グルコースを主要な構成成分とする中性糖
およびガラクトサミンを主要構成成分とするアミノ糖の
各重合体と蛋白とから成っていた。
なお、これら成分の含量比率は本物Ｗｋ得るための培養
条件や培養物の抽出条件により異なるが、一般には下記
のとおｐである。
条件や培養物の抽出条件により異なるが、一般には下記
のとおｐである。
中性糖・・・５０〜６０亜量チ（フェノール硫酸法咥よ
る全ヘキソースとして） アミノ糖・°・２５〜３５亜量チ（インドール塩酸法に
よるヘキソサミンとして） 蛋白・・・５〜１５京量％（ローリ−フォーリン法によ
る蛋白として） 次に、本発明により得られる多糖類の薬理学的特性につ
いて説明する。
る全ヘキソースとして） アミノ糖・°・２５〜３５亜量チ（インドール塩酸法に
よるヘキソサミンとして） 蛋白・・・５〜１５京量％（ローリ−フォーリン法によ
る蛋白として） 次に、本発明により得られる多糖類の薬理学的特性につ
いて説明する。
（１）急性毒性
マウスは工ＯＲ−ＪＯＬ系、４〜５週令、体重２０〜２
５ｆのものを、ラットはウィスター系、４〜５週令、体
重１１０〜１４０ ｙのもの全それぞれ用いて、各試験
群２５匹に対し本物賀ヲ経口並びに腹腔内投与してその
急性毒性試験全下記により行なった。
５ｆのものを、ラットはウィスター系、４〜５週令、体
重１１０〜１４０ ｙのもの全それぞれ用いて、各試験
群２５匹に対し本物賀ヲ経口並びに腹腔内投与してその
急性毒性試験全下記により行なった。
本物質を投与後、１週間にわたって各試験動物の一般的
症状、体重変化及び死亡例につき観察した後層殺剖検し
た。結果は下記表のとおりであってＬＤ５Ｑ値が極めて
高いことがわかる。
症状、体重変化及び死亡例につき観察した後層殺剖検し
た。結果は下記表のとおりであってＬＤ５Ｑ値が極めて
高いことがわかる。
（２）抗１１１１瘍活性
本物質の抗腫瘍活性の検定はＳａｒｃｏｍａ １８０固
型唾瘍を皮下接種したマウス、及びＦｉｈｒｌｉｓｈ腫
瘍細胞を腹腔内に移植したマウスにおけるｉｎ ｖｉｖ
ｏ試験法で行なった。
型唾瘍を皮下接種したマウス、及びＦｉｈｒｌｉｓｈ腫
瘍細胞を腹腔内に移植したマウスにおけるｉｎ ｖｉｖ
ｏ試験法で行なった。
（イｌ Ｓａｒｃｏｍａ １８０固型腫瘍に対する抗
腫瘍活性： 試験動物は工０Ｒ−ＪＯＬ、 ６週令雌マウス（体重２
５２±３１）を採用し、Ｓａｒｃｏｍａ １８０腫瘍細
胞はマウスの腹腔内に腹水型で１週間毎に継代している
ものを用いた。試験に当っては接種後−週間口の腹水中
の細胞を取り出し、約４００万個を含有する生理食頃水
０ 、１ ｄ ｋ試験マウスの右脇腹下部皮下に移植し
た。移植して２４時間後に本物質を生理食塩水に５０〜
／１０ゴの濃度になるように溶解し、１２０℃１５分間
滅菌した溶液ｉ０．２５ｒｎｌマウスの腹腔内に投与し
、以後１０日間連続して投与を行なった。
腫瘍活性： 試験動物は工０Ｒ−ＪＯＬ、 ６週令雌マウス（体重２
５２±３１）を採用し、Ｓａｒｃｏｍａ １８０腫瘍細
胞はマウスの腹腔内に腹水型で１週間毎に継代している
ものを用いた。試験に当っては接種後−週間口の腹水中
の細胞を取り出し、約４００万個を含有する生理食頃水
０ 、１ ｄ ｋ試験マウスの右脇腹下部皮下に移植し
た。移植して２４時間後に本物質を生理食塩水に５０〜
／１０ゴの濃度になるように溶解し、１２０℃１５分間
滅菌した溶液ｉ０．２５ｒｎｌマウスの腹腔内に投与し
、以後１０日間連続して投与を行なった。
対照マウスには滅菌生理食頃水を０．２５ｒｎｔ同様に
投与した。
投与した。
１瘍移植後３０日経過してマウスを解剖し、増殖した固
型ｌｌｊ！瘍を摘出してその重量を測定することで対照
群との比較を行なった。尚マウスは１０匹を１群とした
。
型ｌｌｊ！瘍を摘出してその重量を測定することで対照
群との比較を行なった。尚マウスは１０匹を１群とした
。
その結果、本物質は腫瘍抑制率８７．鏝の強い抗腫瘍活
性を示し治療群ｉｏ匹中６匹のｌ１１瘍は完全に消失し
ていた。
性を示し治療群ｉｏ匹中６匹のｌ１１瘍は完全に消失し
ていた。
ここにおいてＳａｒｃｏｍａ １８０固型・ｉ＠瘍に対
する；圃潟抑制率は次式を用いて算出した値である。
する；圃潟抑制率は次式を用いて算出した値である。
０Ｂ
Ｃｓエ 対照群の平均腫瘍重量
ＴＢ： 試験群の
本物質のＳａｒｃｏｍａ １８０固型腫瘍に対する有効
な投与量は１日当り５〜１５■／神（体重）であって、
常法によＩ）ｉＲ剤化して適用し得る。
な投与量は１日当り５〜１５■／神（体重）であって、
常法によＩ）ｉＲ剤化して適用し得る。
（口ｌ Ｆｉｈｒｌｉθｈ腹水唾瘍に対する抗腫瘍活
性：試験動物は工０Ｒ−ＪＯＬ、 ８週令雌マウス（
体重２５２±３Ｆ）を採用し、このマウス１１匹を１群
とする４群の各々Ｋ Ｉ Ｘ １０６個のＥｈｒｌｉｓ
ｈｌ１１１瘍細胞を移植し、２４時間後対照群以外の各
３群に本物質を２５η／梅（体重）７日、１０り／ ｋ
ｙ （体重）７日並びに２．５η／紛（体重）／８宛そ
れぞれ１０日間腹腔内投与して各群の延命効果及び治癒
効果を観察もた。なお、対照群には生理的食塩水のみを
投与した。
性：試験動物は工０Ｒ−ＪＯＬ、 ８週令雌マウス（
体重２５２±３Ｆ）を採用し、このマウス１１匹を１群
とする４群の各々Ｋ Ｉ Ｘ １０６個のＥｈｒｌｉｓ
ｈｌ１１１瘍細胞を移植し、２４時間後対照群以外の各
３群に本物質を２５η／梅（体重）７日、１０り／ ｋ
ｙ （体重）７日並びに２．５η／紛（体重）／８宛そ
れぞれ１０日間腹腔内投与して各群の延命効果及び治癒
効果を観察もた。なお、対照群には生理的食塩水のみを
投与した。
結果に下記のとおシであった。
２５ ＞２００ １１匹ウニ０匹１０
＞２００ １１匹ウニ０匹２．５
＞２００ １１匹中 ９匹（註） １）延命率は下記にょυ算出した。
＞２００ １１匹ウニ０匹２．５
＞２００ １１匹中 ９匹（註） １）延命率は下記にょυ算出した。
２）治癒バ数り各群における腫瘍細胞を移植後６０日を
経過して生存しておｐ且っ腹水の貯留が認められないも
のの数を示す。
経過して生存しておｐ且っ腹水の貯留が認められないも
のの数を示す。
なお、本発明によシ得られる物質はＳａｒｃｏｍａ１８
０腹水帽瘍に対しても上記と同様な抗腫瘍活性を示した
。
０腹水帽瘍に対しても上記と同様な抗腫瘍活性を示した
。
以下に実施例を示して本発明を更に具体的に説明する。
実施例１
培地組成：
ポリペプトン １．Ｏｆ
酵母エキス ５．０２
グルコース ３０ ｆ
水 １ｔ
ｐＨ＝５．５
の比率から成る液体培地を２００−ずつ５００ｄ容の三
角フラスコ５０本に分注し、綿栓を附した後に１２０℃
で１５分間滅菌し、別に０．３％酵母エキスを添加した
ポテトデキストロース寒天培地で斜面培養しておいたＡ
ｃｒｅｍｏｎｉｕｍ ｓｐ、 ＳＢＴ ７０１６ ｆ上
記液体培地に接種し、２３〜２７℃で３日間静置培養を
行なった。ひきつづいてこれ全２３〜２７℃で５日間、
１８０ ｒｐｍにて回転式の振とう培養を行い、高粘性
の培餐物１０ｔを得た。これに１０ｔの熱水を加えて、
ミキサーで攪拌混合した後ｔｏ、ｏｏｏ ｙにて２０分
間遠心分離を行い菌糸体を除去し、粘稠な透明液を得た
。この液の中に予め濃塩酸処理後充分水洗し次いでエタ
ノール、アセトンで洗って乾燥した活性炭−七ライト（
１：１）混合物を重量比で４％加え、室温で１６時間攪
拌した。
角フラスコ５０本に分注し、綿栓を附した後に１２０℃
で１５分間滅菌し、別に０．３％酵母エキスを添加した
ポテトデキストロース寒天培地で斜面培養しておいたＡ
ｃｒｅｍｏｎｉｕｍ ｓｐ、 ＳＢＴ ７０１６ ｆ上
記液体培地に接種し、２３〜２７℃で３日間静置培養を
行なった。ひきつづいてこれ全２３〜２７℃で５日間、
１８０ ｒｐｍにて回転式の振とう培養を行い、高粘性
の培餐物１０ｔを得た。これに１０ｔの熱水を加えて、
ミキサーで攪拌混合した後ｔｏ、ｏｏｏ ｙにて２０分
間遠心分離を行い菌糸体を除去し、粘稠な透明液を得た
。この液の中に予め濃塩酸処理後充分水洗し次いでエタ
ノール、アセトンで洗って乾燥した活性炭−七ライト（
１：１）混合物を重量比で４％加え、室温で１６時間攪
拌した。
濾過によシ活性炭−セライト混合物を除去して得られた
液を蒸留水に対して５℃で４８時間透析した後、凍結乾
燥したところ灰白色の粉末２７．５ Ｆを得た。このよ
うにして得られた物質はグルコースを主成分とする中性
糖並びにガラクトサミンを主成分とするアミン糖の各重
合体と蛋白から成る多糖類で、その抗腫瘍効果を検定し
た結果、ｌ０Ｒ−ＪＯＬ、 ６週令マウスにおける腹
腔内投与ｆｔ１０１’ｆ／ｋｆでのＳａｒｃｏｍａ １
８０固型腫瘍に対する抑制率は８７．３係であった。
液を蒸留水に対して５℃で４８時間透析した後、凍結乾
燥したところ灰白色の粉末２７．５ Ｆを得た。このよ
うにして得られた物質はグルコースを主成分とする中性
糖並びにガラクトサミンを主成分とするアミン糖の各重
合体と蛋白から成る多糖類で、その抗腫瘍効果を検定し
た結果、ｌ０Ｒ−ＪＯＬ、 ６週令マウスにおける腹
腔内投与ｆｔ１０１’ｆ／ｋｆでのＳａｒｃｏｍａ １
８０固型腫瘍に対する抑制率は８７．３係であった。
実施例２
培地組成：
ポリペプトン ５ｙ
酵母エキス ３２
グルコース ３０２
〜リン酸ｌカリウム ０．５２
リン酸２カリウム ０．５ｆ
塩化マグネシウム ０．３２
塩化マンガン ０．０５ｆ
水 １ｔ
ｐＨ＝５．５
の比率から成る液体培地を１００ｄずつ５００ｍ容三角
フラスコに分注し、綿栓を附した後に１２０℃で１５分
間滅菌したものに、別に寒天斜面培地で培養しておいた
Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ ｓｐ、 ８ＢＴ ７０１６ ｆ
常法によシ接種し、２５℃で４日間静置培養した。
フラスコに分注し、綿栓を附した後に１２０℃で１５分
間滅菌したものに、別に寒天斜面培地で培養しておいた
Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ ｓｐ、 ８ＢＴ ７０１６ ｆ
常法によシ接種し、２５℃で４日間静置培養した。
一方、２０を容ジャーファーメンタ−に前記の組成の液
体培地１０ｔｆ入れ、１２０℃で３０分間滅菌、冷却し
、これに上記の培養物をワーリングプレンダーで均質化
した後移植して、２５℃にて２日間静置培養の後、つづ
いて通気ｉｉ０．４ｖｖｍ、攪拌数２５Ｏｒｐｍの条件
下で５日間通気攪拌培養を行なった。
体培地１０ｔｆ入れ、１２０℃で３０分間滅菌、冷却し
、これに上記の培養物をワーリングプレンダーで均質化
した後移植して、２５℃にて２日間静置培養の後、つづ
いて通気ｉｉ０．４ｖｖｍ、攪拌数２５Ｏｒｐｍの条件
下で５日間通気攪拌培養を行なった。
得られた培養物を２倍に稀釈し、Ｆ布を用いて菌糸体を
分離除去した。
分離除去した。
このようにして得た透明な粘稠液に容蓋比で１０チのア
ンバーライ） ＸＡＤ −２を加え、室温で２時間混合
攪拌した。上記アンバーライト樹脂を分離後、上溝液に
エタノールを等を添加して、生じる白色沈殿を真空乾燥
したところ、暗灰色の粉末２４．５２を得た。この粉末
はグルコースを主成分とする中性糖並びにガラクトサミ
ンを主成分とするアミン糖の各重合体と蛋白とから成る
多糖類でその抗腫瘍活性を検定した結果、ＩＯＲ−ＪＯ
Ｌ、６週令マウスにおける腹腔的投与量１０ｑ／ｍＫよ
シＳａｒｅｃｏｍａ １８０固型Ｉｌｌ瘍に対する抑制
率は８３１５チであった・
ンバーライ） ＸＡＤ −２を加え、室温で２時間混合
攪拌した。上記アンバーライト樹脂を分離後、上溝液に
エタノールを等を添加して、生じる白色沈殿を真空乾燥
したところ、暗灰色の粉末２４．５２を得た。この粉末
はグルコースを主成分とする中性糖並びにガラクトサミ
ンを主成分とするアミン糖の各重合体と蛋白とから成る
多糖類でその抗腫瘍活性を検定した結果、ＩＯＲ−ＪＯ
Ｌ、６週令マウスにおける腹腔的投与量１０ｑ／ｍＫよ
シＳａｒｅｃｏｍａ １８０固型Ｉｌｌ瘍に対する抑制
率は８３１５チであった・
添附図は本発明によシ得られる多糖類から成る抗腫瘍性
物質のＫＢｒ錠剤法により測定した赤外吸収スペクトル
を例示したものである。
物質のＫＢｒ錠剤法により測定した赤外吸収スペクトル
を例示したものである。
Claims (2)
- （１） アクレモニウム属（Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ）に
楓する多糖類生産菌を寒天平板培地で培養して得られる
菌糸体又は分生子或はそれらの混合物を液体培地中で培
養し、培養物から抗腫瘍活性を示す多糖類を採取するこ
とを特徴とする抗腫瘍性多糖類の製造法。 - （２）液体培地中での培養は、２０乃至３０℃で３乃至
５日間静置又は通気培養し、次いで２５乃至２７℃で４
〜６日間振とり培養又は通気攪拌培養することによシ行
なう特許請求の範囲第１項記載の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57145982A JPS5934896A (ja) | 1982-08-23 | 1982-08-23 | 抗腫瘍性多糖類の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57145982A JPS5934896A (ja) | 1982-08-23 | 1982-08-23 | 抗腫瘍性多糖類の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5934896A true JPS5934896A (ja) | 1984-02-25 |
| JPH0238198B2 JPH0238198B2 (ja) | 1990-08-29 |
Family
ID=15397450
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57145982A Granted JPS5934896A (ja) | 1982-08-23 | 1982-08-23 | 抗腫瘍性多糖類の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5934896A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH04109843U (ja) * | 1991-03-01 | 1992-09-24 | ブラザー工業株式会社 | 加工機における案内面の保護装置 |
| KR100398065B1 (ko) * | 1999-12-21 | 2003-09-19 | 한국생명공학연구원 | 신균주 곰팡이 아크레모니움속 ｍｔ70646(ｋｃｔｃ8973ｐ)와 이 균주로부터 생산된 신규 화합물과 이의 용도 |
-
1982
- 1982-08-23 JP JP57145982A patent/JPS5934896A/ja active Granted
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH04109843U (ja) * | 1991-03-01 | 1992-09-24 | ブラザー工業株式会社 | 加工機における案内面の保護装置 |
| KR100398065B1 (ko) * | 1999-12-21 | 2003-09-19 | 한국생명공학연구원 | 신균주 곰팡이 아크레모니움속 ｍｔ70646(ｋｃｔｃ8973ｐ)와 이 균주로부터 생산된 신규 화합물과 이의 용도 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0238198B2 (ja) | 1990-08-29 |
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