JPS5936678A - 抗腫瘍抗生物質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 不発ｌｉｔ旧抗菌および抗ＢＪｉ！瘍活性を有する新規
なピロロ〔２゜５− １−Ｃ）−（ｔ４）ベンゾジアゼピン−５−オン化合物
ならびに新規な微生物の醗酵によるその製造に関する。

本発明の抗腫瘍抗生物質はアントラマイシン−ネオトラ
マイシン群の新しいメンバーである。

抗腫瘍抗生物質、ネオトラマイシンＡおよびネオトラマ
イシフＢはＪ、アンタイバイオティクスＣＪａ　Ａｎ　
ｔ　ｉ　ｂ　ｒ　Ｏｔ　＠　ｃｓ）、第２９巻（法第９
５−９６頁、１９７６年およびＪ、アンタイバイオティ
クス、第３０巻（４入第５４０−３４５頁、１９７７年
に次の構造を有すると記載されている。

６一 ＲＩ　　　　Ｒ１ ネ４トラツイシンＡ　　　　　　　１１　　　０Ｈネオ
トラマイシンＢ　　　　　　ＯＨＨ本発明のＩＷ、生物
質ＢＢＭ−２０４０Ｂはそのヒドロキシ基の位置につい
てこれらのネオトラマイシン類とは構造上具っている。

本発明のＢＢＭ−２０４ＯＡおよびＢのジアステレオマ
ーは［シンポジウム・ペーノ々−ズ曽オプ・ザ１１２４
ス番シンポジウム・メン・ザ・ケミストリー・オブ・ナ
チュラル・プロダクツＪ　　（Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ　Ｉ
’ａｐｅｒｓ　　ｏｆ　　ｔｈｅ　　２４ｔｈＳｙｍｐ
ｏｓｉｕｍ　　ｏｎ　　ｔｈｅ　　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ
　　ｏｆ　　Ｎａｔｕｒａｌｐｒｏｄｕｃｔｓ　）　　
（日本、大阪、１９８１年１０月１３〜１６日）、ペー
パー＃７２、第５５２−５５９頁に記載されテイル。こ
のペーパーでの化合物３１ｂおよびＳ　２　ｂ　ｔｄ、
次ノ構造を有している。

１ｂ ２ｂ そして、これらの化合物は本発明のＢＢＭ−２０４ＯＡ
およびＢとＣ−２ヒドロキシ基の配位において相違して
いる。すなわち、ＢＢＭ−２０４ＯＡおよびＢはα−配
位にＣ−２ヒドロキシｉを有し、一方相当する３１ｂお
よび５２ｂジアステレオマーはＣ−２ヒドロキシ基でβ
−配位を有している。

本発明者等は、文献記載のβ−ヒドロキシ異性体がＰ５
８８マウス白血病テストで本質的に抗腫瘍活性を欠除し
ている妙ζ本願のα−ヒドロキシ異性体は同一のスクリ
ーニング試験でＰ３８８マウス白面病に対１７て顕微な
活性を有することを見い出した。

Ｊ。アンタイバイオティクス、第２５巻（８入第４３７
−４４４頁、１９７２年およびケム・７アルム轡プル（
Ｃｈａｍ。

Ｐｈａｒｍ、Ｂｕｌｌ、）　、第１９巻、１１、第２２
８９−２２９３頁、１９７１年には、抗腫瘍抗生物質ト
メイマイシン（ｔｏｍＢｙｍｙｃｉｎ）　ｆ）ζストレ
プトマイセス・アクロモゲネより得られる旨開示されて
いる。構造 を有するトメイマイシンはＣ−２位でのエチリデン基の
存在によりＢｎＭ−２０４ＯＡとは別異のものである。

９− 抗腫瘍抗生物質プレトメイマイシン（ｐ　ｒ　ｅ　ｔ　
ｏｍａｙｍｙ　ｃ　ｉｎ）は次の構造を有するとＪ。ア
ンタイバイオティクス、第２５巻、第４３７頁、１９７
２年に記載されている。

プレトメイマイシンはＣ−２位でのエチリデン基により
ＢＢＭ−２［１４０Ｂとは別異のものである。

式 を有する抗Ｊｌ！Ｉ瘍抗生物質オキソトメイマイシン（
ｏｘｏｔｏｍａｙ−ｍｙｃｉｎ）がナム・７アルム・プ
ル、第１９巻、第２２８９１０− 頁、１９７１年に開示されている。オキソトメイマイシ
ンは２−エチリデン基Ｊ’、ＩよびＣ−１１でのカルボ
ニル基の存在で１１１１Ｍ−２０４０抗生物質と異って
いる。

１ノ’ｔｌｌ１１！１１抗牛物質のアントラマイシン（
ａｎｔｈｒＢｍｙｃｉｎ）群のメンバーのうちに目１１
．Ｔ、アム・ケム・ツク（Ｊ、　Ａｍ。

Ｃｔ＋ｅｍ、　ＳｏＣ，）　、第８７巻、第５７９１頁
、１９６５年に記載の式 を有するアントラマイシン、Ｊ。アンタイバイオティク
ス、第３３巻、（６入第６６５−６６７真、１９８０年
に記載の式を有するマイトラマイシン（ｍＢｚｅｔｈｒ
ａｍｙｃｉｎ）およびＪ。

アンタイバイオティクス、第２７巻、（１１）、第８６
６−８７３頁、１９７４年およびＪ、アンタイバイオテ
ィクス、第２５巻（１１）、第６６８−６７５Ｂ、１９
７２年に記載の式 を有するシビロマイシン（ｓｉｂｉｒｏｍｙｃｉｎ）が
あげられる。

アントラマイシン、トメイマイシンおよびジビロマイシ
ンの人混な比較検討はＪ。アンタイバイオティクス、第
３０巻（５人第３４９−３７０頁、１９７７年に報告が
ある。

本発明によｔＬば、以下本文で口ＢＭ−２０４０と称す
る新規なピロロベンゾジアゼピン抗生物質が提供さｔ−
この抗生物質し、１、深部好気条件下に同什叶能な炭素
および窒素源を含ｔｒ水性栄養培地でストレブ）ｖイセ
スｓｐ。菌株Ｊ５７６−９９（Ａ’ｒＣＣ５９１４５）
と称する新規なストレプトマイセスの菌株を、実質的な
凰のＢＢＭ−２０４０が該培地中に該―株によって生産
されるまで、培養しそして次に培地からＢＩＩＭ−２０
４０抗生物質を採取することにより製造される。

４発明の新規１１［ＩＭ−２０４０抗生物漬は醗酵プロ
スから構活式 ％式％ のメタノール付加物形態で、または構造式の当初に形成
されるデスメタノール形態のいずれかで（使用する単離
方法に依存する）採取することができる。本文で使用す
る「ＢＢＭ−２０４０Ｊなる用語はメタノール付加物形
態またはデスメタノール形態いずれのＢＢＭ−２０４０
抗生物質を称する。

本発明のＢＢＭ−２０４０抗生物質は種々のダラム陽性
菌および抗酸菌の活性を阻害する。更に、該抗生物質は
哺乳動物の腫場例えばマウスのＰ３８８白血病の生育を
阻害する。

従って、この新規な抗生物質は抗菌剤または哺乳動物の
腫瘍１４− を阻害する抗ＩＩＩＩ！石剤として使用し得る。

本発明は本文で０１１Ｍ−２０４ＯＡおよびＢＢＭ−２
０４０Ｉｌｌと称する卵１規な抗＋１＋Ｉ＋Ｉ鮎１ノ１
、牛ｔ１夕ｎｔおよびストレプトマイセスｓｐ、菌株＋
１５７６−９９　（５ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｓｐ。

５ｔｒａｉｎ　Ｊ５７６−９９　）と称するス］レブト
マイセスの新菌株の醗醇によるその製活に関する。上記
生産菌はペルー、プエルトーチカＹ　（ｐｅｒｕ、　　
Ｐｕｅｒｌｏ　Ｃｈｉｃａｍａ　）で採集した土壌見本
から単離された。この菌の生物学的に純粋な培養物はワ
シントンＩ）Ｃ（ＷａｓｌｔムｎｇｔｏｎｙＬ　　Ｃ−
）　’）ジ−７メリカンΦタイグ・カルチュアｅコレク
ション（ｔｈｅＡｍｅｒｉｃａｎ　’Ｉ’ｙｐｅ　Ｃｕ
１ｔｕｒｅ　Ｃｏ目ｅｃ日ｏｎ）　　に寄託され、その
微生物水入保存品にＡＴＣＣ３９１４３として加えら！
′ｔ７１１−０ 微生物 放梅菌類菌株ＡＪ　５７６−９９は土壌見本から分離さ
れう常法により特定するために生物学的に純粋な培養物
として調製した。菌株Ｊ５７６−９９は長い分校状の気
菌糸（巾０５μｍ１分断していない）を生じる。胞子連
鎖は単軸でまたは気菌糸の菌糸先端に形成される。６−
１０胞子／鎖を有する短い、直もしくはかぎ状胞子連鎖
が有機寒天培地例えばベネット寒天（Ｂｅｎｎｅｔ１’
　ｓ　Ｂｇ２１ｒ　）およびオートミール寒天で生成さ
れる。長い、不規則に渦巻いた、開いたらせん形もしく
は波状の１０−４０胞子／鎖を有する胞子連鎖が化学的
特定培地例えばツアペック（Ｃｚａｐｅｋ’ｓ）は糖、
硝酸塩寒天で形成される。胞子連鎖の先端に密な渦巻き
もしくはループが往々にして密な球状体として観察され
る。成熟後、ビーズ状の間隔のあいた胞子配列が普通観
察される。胞子は球形、長円形もしくは悄円形（Ｃ６−
１，Ｏｘ　Ｏ，６−１，５μｍ）であり、滑かな表面を
有している。胞子のう、遊走性胞子および菌核は生成し
ない。

＋！！ｉ株Ｊ５７６−９９は１８Ｐ培地およびその他の
通常に使用さｔｌている培地で良く増殖する。気菌糸は
ツアペック・しよ糖−硝酸塩寒天、無機塩−でん粉寒天
およびベネット寒天で＆帛に生成し一方酵母エキスー麦
芽エキス寒天およびオートミール寒天では微弱に生成す
る。気菌糸の集団の色は白−黄色味を帯びた白である。

基底菌糸は黄色味を帯びたー明るい褐色である。メラノ
イドおよびその他の拡散性色素は形成されない。普通の
生育のだめの温度は２０℃乃至４７℃の範囲である。５
０℃では生育がみられない。塩化ナトリウムに苅する耐
容性か高く、１５％以下のＮａＣ１濃度で生育する。

菌株Ｊ５７６−９９の培養および生理的特性をそれぞれ
第１表および第２表に示す。菌株の炭水化物利用パター
ンは第３表に示す。

１７− 第１表 トリプトン−酵母エキス　　Ｇ　　普通生育、およびむ
ら毛彫ブロス（ＩＳＰＡＩ）　　　　　　　成、淡黄色
ペレットしよ糖−硝酸塩寒天　　　　Ｇ　　豊富（ツア
ペック寒天）　　　　Ｒ黄色味を帯びた白（９２）〜中
程度の黄色味を帯びた 褐色（７７） Ａ４１富、白（２６３）〜黄色 を・膚びた白（９２） Ｄ　　なし グルコースーアスパラギ　　Ｏｔａ弱 ン弱火寒天　　　　　　　　Ｒ黄色味を帯びた白（９２
）Ａ　　なし Ｄ　　なし グリセロール−アスパラ　　Ｇ　　普通ギン寒天　　　
　　　　　　Ｒ黄色味を帯びた白（９２）（ＩＳＰ　　
Ａ５）　　　　　　　　　〜代置（９０）Ａ　　普通、
白（２６３）〜黄色 味を帯びた白（９２） Ｄ　　なし 無機塩−でん粉寒天　　　　Ｇ　　豊富Ｒ淡黄（８９）
〜 中程度オリーブ褐（９５） Ａ　　豊富、白（２６３）〜黄色 味を帯びた白（９２） Ｄ　　なし １８− チロシン寒天　　　　　　　０　　龜冨（ＩａＰ　　Ａ
７）　　　　　　Ｒ黄白（９２）〜中程度黄褐（７７） Ａ　　普通、白（２６３）〜 黄色味を帯びた白（９２） １）　　なし 栄養培地　　　　　　　　　Ｇ　　微弱〜普通Ｒ黄色味
を帯びた白（９２） 〜淡黄（８９） Ａ　　微弱、白（２６３）〜 黄色！＊を惜びた白（９２） １）　　なし 酵母エキスール勾・エキス　　０　　豊富寒天（ＩＳＰ
　Ａ　２　）　　　　　Ｒ淡黄（８９）〜暗橙黄（７２
） Ａ　　微弱〜普通、白（２６３） Ｉ）　　中程度黄褐（７７） ４−］・ミール寒天　　　　　０　　＃弱〜ｖＩ曲（Ｉ
Ｓ’Ｐ　＆　５）　　　　　　　　Ｒ黄色味をイ！Ｙび
た白（９２）Ａ　　微弱、白（２６３） １）　　なし ベネット寒天　　　　　　Ｇ　　豊富 １（暗橙黄（７２）〜中程度 黄褐（７７） −１９＝ Ａ　　豊富、白（２６３）〜 黄色味を帯びた白（９２） Ｄ　　なし Ｄ　　明るいオリーブ褐（２４） 季米牽　括弧内の色および番号は「ケリイ、Ｋ、　　Ｌ
アンドＤ。

Ｂ、シュド：　ｌ５ＣＣ−ＮＢＳ　　カラー−ネーム・
チャート・イラストレーテッド・ウィズ・セントロイド
ーカラーズ、Ｕｓデプト・オプ・コム、サーキュラ−５
５６、ワシントンＤＣ，１９７５年１１月」＠ｅｌｌｙ
、に、　Ｌ、　＆Ｄ、　Ｂ、　Ｊｕｄｄ　：　ｌ８ＣＣ
−ＮＢＲｃｏｌｏｒ　−ｍａｍｅ　ｃｈＢｒｔｓ口１ｕ
ｓｔｒａｔｅｄ　ｗＨｈＣｅｎｔｒｏｉｄ　Ｃｏ１ｏｒ
ｓ、Ｕ６　８１１　　Ｄｅｐｔ、ｏｆ　　Ｃｏｍｍ、。

Ｃｉｒ、　５５３．　ＷａＢ１１ムｎｇｔｏｎ、Ｄ、Ｃ
，、Ｎｏｖ、、　１９７５）に従う。

２０− 第２表 菌株ＡＪ　５７６−９９の生理学的特性試　験　　　　
　反　　ｊノｂ　　　　　方法および培地生Ｗ渇ｌＩＬ
範囲　２８℃〜４３℃で　　ベネット寒天鰻大生育。

２０℃〜４７℃で 普通生育。１０℃ および５０℃で生 育せず ゼラチン液化　液化　　　　　　　　グルコースーヘフ
トンーゼラチン培地 でん粉加水分　加水分解　　　　　　でん粉寒天平板解
脱脂乳での　凝固しない１　　　ディフコ（Ｄ目ｃｏ）
反応　　　　　ペプトン化もしな　脱脂乳い メラノイド色　形成しない　　　　　チロシン寒天、氷
形成　　　　　　　　　　　　　ペプトン−酵母−鉄寒
天およびトリプトン ー酵母エキスブロス 硝酸塩還元　　陰性　　　　　　　　ツアペックグルコ
ース−硝酸塩ブロスおよびグ ルコースー酵母エキス プロス ｐＩＩ耐容性　　Ｐ　ＩＩ　５．０〜１０で　酵母エキ
ス−麦芽エキ生育、４．５で生育　　ス寒天 せず ２１− ＮａＣ１耐容８：　極めて耐性　　　　１％酵母エキス
、１５％以下で　　　２％呵溶性でん粉、生育　　　　
　　　１．５％寒天 リゾチーム耐容　極めて耐性。　　　　］・リプシダー
ゼ大豆性　　　　　　　０１．００１、　　プロス＋１
５％寒天０００１およ び０．０００１％で 生育 第３表 菌株Ｊ５７６−９９による炭素源の利用グリセロール　
　　　　　　　　　＋ Ｄ（−）−アラビノース　　　　　　　＋Ｌ（＋）−ア
ラビノース　　　　　　　＋Ｄ−キシロース　　　　　
　　　　士 り−リボース　　　　　　　　　　　＋Ｌ−ラムノース
　　　　　　　　　　＋Ｄ−グルコース　　　　　　　
　　　＋Ｄ−ガラクトース　　　　　　　　　＋Ｄ−フ
ルクトース　　　　　　　　　士り−マンノース　　　
　　　　　　　＋Ｌ（−）−ソルボース しよ糖　　　　　　　　　　　　　十 乳糖　　　　　　　　　　　　　　十 セルビオース　　　　　　　　　　　十２２− メリビイース トレハロース　　　　　　　　　　＋ ラフィノース　　　　　　　　＋ Ｄ（ト）−メレジトース 可溶性でん粉　　　　　　　　士 セルロース　　　　　　　　　　　− ズルシット イフシツト　　　　　　　　　＋ Ｄ−マンニット　　　　　　　＋ ■）−ソルビット　　　　　　　　士 すリシン　　　　　　　　　　士 基礎培地：プリダム−ゴツトリーブ（Ｐｒｌｄｔ＋４ｍ
−Ｇｏｔｔ目ａ　ｂ’ｉ　）無ｔｌｉＡ！培地２８℃で
ろ凋間＃ｆ養俣に観察 菌株Ｊ５７６−９９の精製細胞種はＬＬ−ジアミノピメ
リン酸およびグリシンを含有し、全細胞加水分解物はリ
ボースおよびマンノースを含有しているがその他の鑑別
糖を欠いている。菌株Ｊ５７６−９９の化学組成はこの
菌株が細胞壁タイプＩの放線菌に属することを示してい
る。

菌株Ｊ５７６−９９の胞子および胞子連鎖形態学は非ス
トレプトマイセテス（ｎｏｎ−ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅ
ｔｅｓ）属例えばアクチノマドウラ（Ａｃｔｉｎｏｍａ
ｄｕｒａ）のそれと類似している力ζ菌株Ｊ５７６−９
９の培養、生理学的特性ならびにそのタイプ−■細胞壁
組成は、菌株Ｊ５７６−９９がストレプトマイセス属に
属するものと分類し得ることを示している。バージエイ
−マニコアル（Ｂｅｒｇｅｙ’　ｓ　Ｍａｎｕａｌ）（
第８版、１９７４年）の記述によれば、菌株Ｊ５７６−
９９は、種のグループ、スビラレス（ｓｐｉｒａｌｅｓ
）　、白色シリーズ、非色素産生性および平滑胞子表面
で１７の柚を包含するところに位置されるべきものであ
る。ＩＭＦ（インターナショナル・ストレプトマイセス
中プロジェクト（ＩｎｔｅｒｎＢ口ｏｎＢＩＳｔｒｅｐ
ｔｏｍｙｃｅｓ　ｐｒｏｊｅｃｔ　）の種の記述に基い
て、菌株Ｊ５７６−９９はその短い胞子連鎖が主として
形成される点においてＳｏ　アルプス（ｓ、　　Ｂｉｂ
旧’）、Ｓ−アルムクイスティ（８，ａｌｍｑｕｉｓｔ
ｉ）、Ｓ、カカオイ（Ｓ、　　ｃＢｃＢｏ刀および８゜
ラングーン（８，ｒａｎｇｏｏｎ）に類似してし）る〃
ζ炭素源利用パターンが異っているＯ菌株Ｊ５７６−９
９の炭水化物利用パターン０Ｓｏヘルベセンス（Ｓ、　
　ｈｅｒｂｅｓｃｅ−ｎｓ）お１びｓ、　ｉクラセイス
クレロテイクス（Ｓ、　　ｏｃｈｒａ−ｃｅｉｉｃｌｅ
ｒｏ目ＣＵＳ）に似ている力ζＳ、ベルベセンスは緑色
の基底菌糸を有し、また８、オクラ七イスクレロテイク
ス←白、黄、赤もしくは灰色の気菌糸およびチャイニア
（ＣｈＢｌｎｌＢ）タイプの菌核を形成する点に相違が
みられる。

それ故、菌株Ｊ５７６−９９は抽グループ１７゜４１ｆ
（）ぐ−ジエイ・マニュアル、第８版）の新種であると
みなされる。

〜別な菌株ストレプトマイセスミル、菌株、Ｔ　５７６
−９９（ＡＴＣＣ３９１４３）に関して詳述するもＱ）
の、ＢＢＭ−２０４０抗生物質の生産のためには本発明
社この菌または本文に開示した培養特性で詳記した菌類
に限定されるものでないことは盲うまでもない。本発明
は菌株Ｊ５７６−９９な２５− らびにその全ての天然および人為的ＢＢＭ−２０４０生
産変異株（ｖＢｒｉＢｎｔｓ　　Ｂｎｄ　ｍｕｔＢｎｔ
ａ）を包含することが特に企図されている。

抗生物質生産 本発明のＢＢＭ−２０４０抗生物質は、ストレプトマイ
セス属のＢＢＭ−２０４０生産菌、好ましくはＡＴＣＣ
３９１４３の同定特性を有するストレプトマイセスｓｐ
、の菌株またはその変異株を放線菌のための既知の栄養
源、すなわち炭素および窒素の同化可能源プラス任意の
無機墳およびその他の既知の生育因子を含有する通常の
水性栄養培地で培養することにより製造することができ
る。大鼠の抗生物質を生産するのに深部好気条件を好ま
しく使用し得る力ζ限られた皺の生産には表面培養およ
び容器も使用し得る。その他の放線菌の培養に使用され
る一般的操作を本発明に適用し得る。

栄養培地は適当な同化可能な炭素源例えばグリセロール
、２６一 アラビノース、キシロース、リボース、グルコース、フ
ルクトース、シよ糖、乳糖、可溶性でんぷん、マンニッ
トまたはソルビットを含有していなければならない。窒
素源として、ｎ、を化アンモニウム、ω■酸アンモニウ
ム、Ｍ”ｈ、Ｗ４ｍアンモニウム、硝酸すトリウム等を
単独でまたは有機窒素源例えばペプトン、肉エキス、酵
母エキス、コーン・ステイープ・リカー、大見粉、綿束
粉等と組合せて使用することができる。必要に応じて、
ナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウム、ホ
スフェート、サルフェート、クロライド、フロマイト、
カーボネート、亜鉛、マグネシウム、マンガン、コバル
ト、鉄等の源を提（Ｊ（する栄養Ｘ１Ｉｌｉ機塩を加え
てもよい。

Ｂ１’３Ｍ−２０４０抗生物資の生産は、生産菌の好都
合な生育に役立つ任意の温度すなわち〜２０−４７℃で
実施することができ、約２７−３２℃の温度で好都合に
実施される。通常、約５１１間の培養期間後伽とうフラ
スコで最適生産が得られる。タンク培養を実施するとき
は、ブロス培地に生産菌の斜面培養物もしくは土培養物
または凍結乾燥培養物を接種することにより栄養ブロス
中に栄養接種体を生成させるのが望ましい。このように
して活性接種体を得たのち、醗酵タンク培地に無菌的に
移す。抗生物質生産を、試験菌としてバチルＸ−７プチ
リス（、ｓａｃ目１ｕｓ　５ｕｂｔｉｌｉｓ　）　Ｍ４
５　（Ｒｅｃ−変異株、ミューチージョン−レス（Ｍｕ
ｔＢ目ｏｎＲｅａ、）　　第１６巻、第１６５−１７４
頁、１９７２年〕を用いるペーパーディスク−寒天拡散
検定法によりモニターする。

分離および精製 本発明のＢＢＭ−２０４０抗生物質は醗酵ブロスから抗
生物質の抽出、精製に使用する操作に従って２種の別異
の形態ＡおよびＢで得られる。構造研究によれば、ＢＢ
Ｍ−２０４ＯＡはＢＢＭ−２０４０Ｂのメタノール付加
体の形態であることが明らかとなつム従って、抗生物質
は抽出およびクロマトグラフィー精製操作においてメタ
ノールの使用を避けることに」：リデスーメタノール形
態　（ＢＢＭ−２０４０Ｂ）で採Ｉｆ’／することがで
きるし一方メタノール付加体形ｉＭ（ＢｒｌＮ４−２　
ｎ　４　［ＦＡ）　ｔｌ仙出溶り！ＬＪ：、ｓよび溶離
剤としてメタノールを使用する以外は同一の一般的抽出
および精製操作に従って得られる。

醗酵完丁時に採取したブロスな例えばｐ過または遠心分
離を用いることにより菌糸ケーキおよびブロス１−泣液
に分離する。菌糸ケーキをメタノールと共にかくはんし
、次にメタノール抽出液を水ｍ１＾に―縮する。ブロス
上澄液を例えばこれを非イオン性巨大網状尚分子例えば
ダイアイオン（Ｄ　Ｉ　Ａ　ｌ０Ｎ）　Ｈｌ）　−２０
（三Ａ２化成］二柴株式会社の商標名）のカラムに適用
し。次に適当なメタノール含有溶媒系（例えば、ｎ−ブ
タノール：メタノール：水（２二１：１ｖ／す〕で展２
９− 開して抗生物質生産分を溶離することによりクロマトグ
ラフィー分離にかける。活性溶出物を次に水性濃縮物に
濃縮し菌糸抽出物から得られた水性濃縮物と合する。ｍ
細物の混合物をＢＢＭ−２０４０抗生物質が実質的に不
溶の溶媒（例えば酢酸エチル）で洗いそして適当な溶媒
例えばｎ−ブタノールで抽出する。溶媒抽出液を次に濃
縮すると褐色を帯びた固体として粗製ＢＢＭ−２０４０
が得られる。不純な生成物をメタノールに溶解し、そし
てメタノール溶液を溶離剤として例えば酢酸エチル：メ
タノール（９／Ｉｖ／ｖ）の混合物を用いるシリカゲル
カラムクロマトグラフィーにかけることによって精製す
る。精製ＢＢＭ−２０４ＯＡの溶出を２５４ｎｍの活性
溶出物を水溶液に濃縮し、そして適当な非メタノール性
溶媒例えばｎ−ブタノールで抽出する。溶媒抽出液を濃
縮してＢＢＭ−２０４０Ｂの粗製固体とする。粗製ｎＢ
Ｍ−２０４０Ｂは適当な非メタノール性溶媒例えば水性
アセ）二３０− トリルに溶解しそしてこのＢＢＭ−２０４０Ｂ溶液を非
メタノール性溶媒削例えば水性アセトニトリルを用いる
シリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけることによ
り精製する。

精製ＢＩ３Ｍ−２０４０Ｂの溶出をバイオアッセイおよ
び薄層クロマトグラフィー（８ｉ０．：酢酸エチル：メ
タノール（４／１　　ｖ／ｖ））によりモニターする。

活性フラクションを合臥濃縮しそして凍結乾燥すると実
質的に純粋なりＢＭ　−２０４０ＢがｉＵられる。ＢＢ
Ｍ−２０４０Ｂは溶液中で比較的不安定であるので、上
記のクロマトグラフィー操作を好ましくは室温以下の温
度例えば釣５℃で実施する。ＵＶ吸収およびバイオアッ
セイによりモニターする。活性７ラクシヨンを合し、真
空濃縮しそして凍結乾燥すると実質的に純粋なりＢＭ−
２０４ＯＡがｔｏられる。更に精製するのはクロマトグ
ラフィー精製操作をくりかえすことにより、そして（ま
たは）適当な溶媒例えばメタノールから結晶化させるこ
とにより達成される。

醗酵完了時、採集したブロスを例えばｐ過および遠心分
離により菌糸ケーキおよびブロス上澄液に分離する。菌
糸ケーキを水性アセトンと共にかくはんムそして不溶物
をｐ失する。ｐ液を水溶液に濃縮しこれをブロス上澄液
と合し例えば非イオン性巨大網状重合体樹脂例えばダイ
アイオンＨＰ−２０によるクロマトグラフィー分離を施
しそして非メタノール性溶媒例えば水性アセトンで展開
する。

ＢＢＭ−２０４ＯＡおよびＢＢＭ−２０４０Ｂはメタノ
ール、エタノール、ｎ−ブタ／−ル、およびピリジンに
易溶であり、酢酸エチル、アセトンおよび水に微溶であ
り、そしてベンゼン、クロロホルムおよびｎ−ヘキサン
に事実上不溶である。両形態の抗生物質共に塩化第二鉄
、ライドン−スミス（Ｒｙｄｏｎ−８ｍｉｔｌ＋）　　
およびニンヒドリン（弱い褐桃色）試薬に陽性の反応を
示す〃ζ板目、エールリッヒ（Ｅｈｒｌｉｃｈ）および
アンスロン反応に対しては陰性である。　”Ｃ−ＮＭＲ
および質嵐スペクトルデータならびに徴証分析に基いて
ＢＢＭ−２０４ＯＡおよびＢに対してそれぞれＣ１４Ｈ
１８Ｎ！Ｏ５および０１ｍ１鳳４Ｎ！０４の分子式が与
えられる。ＢＢＭ−２０４ＯＡおよび口の物理化学的性
質を第４．５および６表に要約する。ＩＩＢＭ−２０４
ＯＡおよびＢのＩＲスペクトル（Ｋ、Ｂｒペレット）は
第１図および第２図に示す。

３３− −３４− 第４表（続き） ＵＶスペクトル：λ　ｎｍ（＃） ＣＨｓ　ＣＮ　　　　　　　Ｎ／　１０ＨＣＩ　・９０
ｆ−ＣＨｓ　ＣＮ３２５　　（３，９ｏｏ）　　　　　
３２ｏ　　（ｔｚｏｏ）５７８− Ｎ／１ＯＮａ０１ｉ９０％ＣＨｓＣＮ ２８７　　　（１４゜０００） ３１７　　　（１１１，１００） ２３４　　　（ｊステ００） ３５− −３６− 第６表 ＢＢＭ−２０４ＯＡのｕＣ−ＮＭＲ（ピリジン−ｄｓ）
ケミカルシフト　　オアーレゾナンス カーボン　　（δ：ｐｐｍ）　　　　多重度ｉ　　　　
　　　２５．Ｏｔ ２　　　　　　４３．４　　　　　　　　　ｄ３４１９
　　　　　　　　　ｔ ５　　　　　１５１．７ ５ａ　　　　　　１２６．ａ季 ６　　　　　　９０、Ｏｄ ７　　　　　１３７．５　　　　　　　　１６　　　　
　１５０．１　　　　　　　　　　ｍ９　　　　　１０
１６　　　　　　　　　ｄ９Ｂ　　　　　　１２５．４
＊−５ １１７３，４ｄ ｌｌａ　　　　　　５３６ｄ ７−ＯＣＩ（３４１４辛＊　　　　　　　　ｑｌ　１−
ＯＣＨ，３８，９辛辛　　　　　　　ｑ米、米米：指定
は交換可能である ３７− ＢＢＭ−２０４ＯＡのＰＭＲスペクトル（第５図、６０
ＭＨＸ　％　ピリジン−ｄ、）は２個のＯＣＨｓ　Ｍ　
（δ３３０および３．；ｚｓｐｐｍ）、１個の高磁場メ
チレ／Ｍ　（δ：２．ＩＰｆ）ｍ）、約δ：３．９−４
．８ｐｐｍに５個のプロトンおよび２個の芳香族プロト
ン（δ：６．８２および８．ｌＯｐｐｍ）を１個のＮＨ
（δニア、ａ４ｐｐｍ）および２個のＯＨ（δ：６．２
および１ｔｓｏｐｐｍ）信号に沿って包括している。Ｂ
ＢＭ−２０４０ＢのＰＭＲスペクトルはＢＢＭ−２０４
ＯＡでみられる高磁場ＯＣＨ３およびＮＨプロトンの信
号を欠除り、　−カニ重結合プロトン（δ：ａ、２４ｐ
ｐｍ）がＢＢＭ−２０４０Ｂのスペクトル中に存在して
いる。ＢＢＭ−２０４ＯＡおよびＢについての上記の物
理化学的性質はｔ４−ベンゾジアゼピン群抗生物質、ネ
オトラマイシンおよびトメイマイシンに類似している。

しかしながら、これら抗生物質はそれらのＴＬＣ挙動（
第７表）およびＰＭＲスペクトルにより容易に５８− 区別される。ＢＨＭ−２０４ＯＡおよびＢは３棺の検討
したＴ　Ｌ　Ｃ系で１２区別することができない。

ＢＢＭ−２０４ＯＡおよびＢの構造 ＢＢＭ−２０４ＯＡおよびＢのＵＶ吸収スペクトルはネ
オトラマイシンおよびトメイマイシンのスペクトルと類
似しこれらが発色団構造に類似していることを示唆して
いる。Ｂ十 ＢＭ−２０４ＯＡの質量スペクトルはｍ／ｚ　２６２　
（Ｍ　　−ＣＨ，ＯＨ）にベース・ピークを示１　これ
はＢＢＭ−２０４０Ｂおよびネオトラマイシンの分子イ
オンと同一であった。

ＢＢＭ−２０４ＯＡ、ＢＢＭ−２０４０Ｂおよびネオト
ラマイシンの質量スペクトルで共通イオン・ピーク（ｍ
　／　ｚ　２４２．２１９．１７８．１５０．１２２．
８６等）が認められ、これはＢＢＭ−２０４ＯＡおよび
Ｂの構造かネオトラマイシンと密接な関係があることを
示している。１１口Ｍ−２０４０人およびＢのスペクト
ルデータおよび物理化学的性質ｔｉＢＢＭ−２０４０Ｂ
がＢＢＭ−２０４ＯＡのデスメタノール形態に相違ない
ことを示している。これは、ＢＢＭ−２０４０Ａを宰温
でピリジンで処理するとＢＢＭ−２０４０ＢがＢＢＭ−
２０４ＯＡから好収率で製造される事実により証明され
た。

以下の構造研究は主としてＢＢＭ−２０４ＯＡについて
行ったＯ ピリジン中でアセチル化すると、ＢＢＭ−２０４ＯＡは
ジ＋　。

一〇−アセチルーデスメタノール誘導体（ＩＩ、Ｍ　　
、ｍ／ｚ３４６）を生じ、このことはＢＢＭ−２０４０
Ａ中に２個のアシル化可能なヒドロキシ基が存在するこ
とを示すＰＭＲデータと一致した。同一のアセチル生成
物がＢＢＭ−２０４０Ｂのアセチル化で得られた。■を
一２０℃でｍ−クロロ過安息香酸で処理するとオキソ化
合物１　（Ｍ＋：　ｍ／ｚ　５６２）が得られた。■を
６ＮＨＣ１で２０時間１０５℃で酸加水分解すると、４
−ヒドロキシ−５−メトキシアントラニル酸（Ｉ％’）
およびシス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン（Ｖ）が得
られた。

ｖｙ ＢＢＭ−２０４０＾の３６０Ｍｌ１スペクトル（第５表
）の−次解析を伴う上述の情報に基いて、ＢＢＭ−２０
４ＯＡの構／ｌｉｔま以下に示すとおりに決定された。

１３１３Ｍ−２０４ＯＡ １１ＢＭ−２０４ＯＡ（７）ＰＭＲスペクトルでは、２
個の芳香族プロトン、１個のＮ８１１個の７エノール性
水酸基および２個のＯＣ■ｓＪｋに指定され得る信号は
同一条件下で測定され４３− たトメイマイシンの対応する信号と非常に似ている。カ
ルビノールアミンカーボン上のプロトン（Ｈｔｔ）は二
重線として共鳴しこれはδ：ｚ９４ｐｐｍ（ＮＨ）の照
射で一重線に収束した。ＢＢＭ−２０４ＯＡで詔められ
た１１１１　とＨ１１ａとの間のカップリングの欠除は
またＣ１ｌでｒＲＪ配位およびＣＩＩＢでＦ８Ｊを有す
るアントラマイシンートメイマイシン群抗生物質につい
ても報告されている。すなわち、ＢＢＭ−２０４ＯＡの
１．４−ベンゾジアゼピン部分り、トメイマイシンのそ
れと同一である筈である。ＢＢＭ−２０４１１Ａのアル
コール性水酸基は二重線としてδ：　６．３４　ｐ　ｐ
　ｒｎで観察された。脱カップリング実験により、この
プロトンはδ：４．５３ｐｐｍでのメチンプロトン（Ｈ
２）とカップリング１次いで高磁場メチレンプロトン）
（１ＡおよびＨｌＢ（δ：２．３９および２．５７）と
、そしてまたδ：４．１４ＰＰｍでプロトン（Ｈ，）と
カップリングした。非均等なメチレンプロトンの４４− 一方をＪｌｉｌＡｌｌするとδ：　４．０　Ｂ　（ｌｌ
ＩＩａ）の三ｍｍプロトンを二■（腺に変侠臥そ【２て
ＩＩ８　プロトンの分割パターンに著しい変化をもたら
しも　これらのＰＭＲデータはＢＢＭ−２０４０Ａの２
０二水１’ｌがピロリジン環のＣ−２に位置していると
の指定と一致する。

口ＩＩＭ−２０４＋］ＡのＣＭＲスペクトルは１４カー
ボン（８Ｂ６表）の存在を立、ｒＩｌ臥その指定はオフ
・レゾナンス脱力ツノリング実験にＭ；きかつネオトラ
マイシンの文献データと比較してされたものである。

それで、１３１１Ｍ−２０４ＯＡの構造は（２８、１１
ａ８）−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−２，
８−ジヒドロキシ−７，１１−ジメトキシ−５−オキソ
−Ｉ　Ｈ−ピロロ（２，１−Ｃ）（ｔ４）ベンゾジアゼ
ピンであると決定さｔ′へまたＢＢＭ−２［１４０Ｂの
構Ａ′：ｉ／：Ｊ以下に不すとおりのそのデスメタノー
ル形態であると決定された。

ＢＢＭ−２０４０Ｂ ＢＢＭ−２０４０の最小阻止濃度（ＭＩＣ）を連続二倍
寒天希釈法により種々のダラム陽性、ダラム陰性および
抗酸菌について測定しも栄養寒天培地をダラム陽性およ
びダラム陰性菌について使用しまたＡ１００１培地（３
％グリセロール、０．３％Ｌ−グルタミン酸ナトリウム
、０２％ペプトン、０３１％Ｎａｐ　ＨＰＯ４，０，１
％ＫＨ，ＰＯ４、α００５％クエン酸アンモニウム、０
．００１％ＭｇＳＯ４および１５％寒天）を抗酸菌につ
いて使用した。第８表に示したように、ＢＢＭ−２０４
０＼および１３はストレプトコツカス・ピオゲネス（８
ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　　ｐｙｏｇｅｏｅｓ）、ミ
クロコツカスφルテウス（ＭｉｃｒｎｃｏＣｃｕｓ　　
１ｏｔｅｕｓ　）、ミクロコツカス・７ラバス（Ｍｉｃ
ｒｎｃｏｃｃｕｓ　　ｆｌＢｖｕｓ）およびマイコバク
テリウム（ＭｙｃｏｈＢｃｔｅｒ　ｉｔｅｍ）　菌株に
対して弱い抗菌活性を示した。■ロＩＭ−２ｒ１４０の
抗菌スペクトルはネオトラマイシンのそれと類似してい
る。ＢＩＪＭ−２０４０は１００ｍｃｇ／ｍｌの濃度ま
でｍＮｌ：菌でプロファージを誘起しない。

４７− −４８− ＢＢＭ−２０４ＯＡおよびＢの抗Ｐ４ｉ鳥活性をマウス
（ＢＤＦ系）でリンパ性白血病Ｐ３８８に対して測定し
た各マウスに腫瘍細胞１０−を腹腔内に接種した。供試
化合物の段階付は投与鼠をｌｌ！ｌ！ｍ移植後２４時間
にマウスに腹腔内投与した。

１日１回９日間処置をした（ｑｄ１→９スケジュール）
。ネオトラマイシンを対照化合物として比較試験した。

結果を第９表に示す。この実験ではＢＢＭ−２０４ＯＡ
およびネオトラマイシンは同様に活性であっためＸＸ　
ＢＢＭ−２０４０ＢはＢＢＭ−２０４ＯＡよりも若干活
性が低かった。

ＢＢＭ−２０４ＯＡおよびＢの急性毎性をマウス（ｄ　
ｄ　Ｙ糸）で単独膜腔内投与により測定しｆｃＪ３ＬＤ
Ｉ、ｏはそれぞれ３４■／Ｋｙおよび５７■／Ｋｙであ
った。ネオトラマイシンの腹腔内Ｌ　Ｉ）ｓｏは２０−
３０〜／Ｋｙであると報告されている。

４９− ５８３− 第　　９　　表 Ｔ／Ｃ（％）ｉｎ　　ＭＳｌｌ’ 投与量、”ｏ／Ｋｙ／日（ｉｐ） １０　　　　３　　　　１　　　　　０．３　　　　０
．１ＢＢＭ−２０４０Ｂ　　　　　口　　（ｉリ　　１
１２　　　　９６　　　１１１４ネオトラマイシン　　
　　　　　−　　　ｉ　　■　　１１２　　　１０４米
　　供試および比較対照動物の中間生存日数の比軸　円
形でかこんだのは顕著な抗腫場効果を示している。

　０６ ６ ５０− ＢＢＭ−２０４ＯＡの抗蝕賜活性はまたＢＢＭ−２０４
０ＡをネオトラマイシンおよびＢＢＭ−２０４ＯＡの２
β−ヒドロキシエピマーとの比較においてＰ３８Ｂ白血
病に対して試験した第二の実験によっても証明された。

この実験では、リンパ性白血病Ｐ３８８を接種量１０６
細胞／マウスで雄ＢＤＦｌマウスに腹腔内に移植した。

供試化合物をジメチルスルホキサイド１０％を含む０．
９％食塩水に溶解した。段階付は投与量の供試化合物を
腫瘍移植後２４時間にマウスに腹腔的投与した。この処
置を１日１同９日間続けた。実験結果を以下の第１０表
に示す。ＢＢＭ−２０４ＯＡおよびネオトラマイシンは
同様に活性であっため−ＢＢＭ−２０４ＯＡの２β−ヒ
ドロキシエピマーは供試最大投与量１９／〜／日で無効
であった。

５１− ５８４− （第１０表注） 腫瘍接種体：腹腔内移植したｉｎｓ腹水がん宿主　　　
：雄ＢＤＦ、マウス 処置　　　：ＱＤ１→９、腹腔内 評価　　　：Ｍ８Ｔ＝中間生存日数 効果　　　二％Ｔ　／　Ｃ−（処置Ｍ８Ｔ／比較対照Ｍ
ＳＴ、）ｘ　００ 判定基準　二％Ｔ／Ｃ＞１２５顕著な抗ＩＩ！Ｉ！瘍活
性とみなす５３− ｂ　２− 前述の如（、ＢＢＭ−２０４ＯＡおよびＢは棟々のダラ
ム陽性および抗酸菌に対して抗菌活性を有１それでこれ
らの１１１１菌によって起る感染症について哺乳動物お
よびその他の動物の治療的処置に有用である。更に、こ
れらの抗生物質は抗菌剤のその他の通常の適用例例えば
医療および細針用機器の消毒にも利用し得る。

マウスのＰ３８８白血病に対して示す著しい抗腫瘍活性
により、ＢＢＭ−２０４ＯＡおよびＢは＋１４乳動物の
腫脇の生長を阻止するのに治療上有用でもあることがわ
かる。

従って、本発明は、細菌感染症または亜性腫瘍に罹って
いる動物宿主にＢＢＭ−２０４ＯＡまたはＢあるいはそ
の一桑組成物の有効な抗菌まだは劇瘍阻害投与社を投与
することを特徴とする該宿主を治療的に処置する方法を
提供するものである。

他の特徴では、本発明により不活性製薬上許容し得る（
■体５４− またｔま希釈剤と組合さったＩＮＩＭ−２０４ＯＡまた
はＢあるいはその混合物の有効な抗菌まノ（はル１ｉ掲
阻害伝を包含する製薬組成物が提供さＩＩる。これらの
組成物は非経口投与に適した任意の製桑形肺に調製する
ことができる。

本発明による：Ｊ１−紅１１投勺のだめの製剤には無菌
の水性または非水性溶液、懸ｔｌＩｊ剤または７１）剤
が包含される。これらの製剤はまた使用＋ｔｉ：ｉｌｌ
に滅１♀１水、生理食塩水まだはいくつかのその他の無
菌の往側１１ｆ　ｈＬ”な媒質に溶解しイｌる無菌の固
形組成物の形態で製造することもできる。

１１１１　Ｍ　−２０４ｔｌ抗生物質の実際に々Ｉまし
い使用態は、処方される特別な組成物、ＪＷ用の様式な
らひに処置される特別な部位、宿主およｒｙ疾病に従っ
て変ることが明らかであろう。

Ｍ・物の作Ｊ’ｌｌを変化させる多くの要素、例えば年
令、体重、性別、食事、投与時、投与経路、Ｄト泄率、
宿主の状態、薬物の組合せ、反応感度および疾病の稈度
は当業者により考慮されよう。投与は最大耐容投与量の
範囲内で連続または定期的に行うことができる。所定の
条件の組合せのだめの最適の適用率は上記のガイドライ
ンに鑑み通常の適用社投与試験を使用して当業者が確か
めることができる。

以下の実施例は例示の目的のためにのみ掲げるものであ
って、本発明の範囲を限定することを企図していない。

実施例１ ＢＢＭ−２０４０の醗酵 ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）　ｓ
　ｐＩｌ菌株屋Ｊ５７６−９９の良く生育した寒天斜面
培地を用いて大豆粉３．０％、とうもろこしでん粉２，
０％、ＣａＣ０１１０％およびＭｇＳＯ４・７Ｈ２０の
α３３％を含み、滅菌前７．０にｐｉ（を調節した種培
地に接種した。種培地を２８０℃で３日間を回転振とう
機（２５０ｒ　ｐｍ）で培養しそして生育物４ゴを種培
地と同一組成を有する醸酵培地１００−の入った５００
−のエルレンマイエルフラスコに移した。醗酵を２８℃
で回転振とう砲で行い、そして醋ｎｔプロス中の抗生物
質活性を、バチルスースブナリス（ｌｌａｃｉｌｌｕｍ
　ｓｔ＋ｂｔｌｌｉｓ　）　Ｍ４５（ｉ　ｅ　ｃ、″″
変異株）各供試菌として使用するペーパー・ディスク寒
天拡散検ｔ；！法により１ｌｌｌＪ定しも醗酵の進行に
つれてブロスのｐｏが徐々に＋シ１４シ、そして１２０
時間後５Ｑｍｃｇ／−のビーク抗生物質力価が得られた
とき８．０−８．２となった。

実施例２ 実施例１に従って得られた採１μブロス（２０１）を連
続遠心分ＡＩｃ４Ｍコクツン（Ｋｏｋｕｓａｎ）　１１
−６００　）を用いて菌糸ケーキおよびプロス上澄液に
分離した。菌糸ケーキをメタノール３ｊと共に５０分間
かくはんし、そしてメタノール抽出液を水溶液（４００
＋ｄ）に濃縮しもプロス上澄液をダイ５７− アイオン（ＤＩＡＩＯＮ）ＨＰ−２０（２７）のカラム
に入枳そして水（３））で洗った後カラムをｎ−ブタノ
ール−メタノール−水（２：　１　：　１　ｖ／ｖ）の
混合物で展開して抗生物質油性分を溶出しも活性溶出液
を真空濃縮して水性濃縮液（４００ｍｌ）と１そして菌
糸抽出液から得られた水性濃縮液と合した。混合物を酢
酸エチル８００ｄ２部分景で洗い、ｎ−ブタノール８０
０ｍｇ２部分量で抽出した。ブタノール抽出液を合し、
真空で濃縮すると褐色を帯びた固体として粗ｉｎｎＭ−
２ｏ４ｏが得られた＜６．６１１＞。この固体を小鼠の
メタノールに溶解ＬＡシリカゲル〔ワコーゲル（ＷＢｋ
ｏ−ｇｅｌ　）Ｃ−２００，１００１Ｉ）のカラムに充
てんしそしてこのカラムを酢酸エチル−メタノール（９
：　１　ｖ／ｖ）　（７）混合物で展開した。溶出をバ
イオアッセイ（Ｂ、　スプチリスＭ４５）および２５４
ｎｍでのＵＶ吸収によりモニターした。

クロマトグラフィー処理を５℃で冷い室内で行つム活性
溶５８− 出液を合し、真空濃縮１そして凍結乾燥しムこのように
して得られた無定形白色固体をメタノールから結晶化さ
せると無色針状品として純粋なり１３Ｍ−２０４ＯＡ生
産物（１，１０ｇ）が？Ｍられた。

実施例６ 実施例１で得られた醗酵ブロス（Ｓ　ＯＺ）を連続遠心
分離ｊ４鮪′で遠心分離１．た。集めた菌糸ケーキを３
０分間８０％水性アセトン（１４１）と共に均質化し、
そして不溶物をｐ去１．２ｋ。、ｌ−ｉ飲を水浴液に真
空濃縮し、このものをブロス上澄液と合し、そしてダイ
アイ詞ンＨｌ）　−２０（２，５７）のカラムを通し九
　カラムを水（８１）で洗い、そして活性分を８０％水
性アセトンで溶離しム合した活性溶出液（８りを真空濃
縮して水溶液（２１）と１これを酢酸エチル２！２部分
量で洗い、次にｎ−ブタノール２４２部分量で抽出した
。

ｎ−ブタノール抽出液を合一真空蒸発するとＢＢＭ−２
０４０Ｂの粗製固体（２３９ｇ）が得られた。ＢＢＭ−
２０４０Ｂは溶液中で比較的不安定であるので、下記の
クロマトグラフィー処理を冷い室（５℃）で行った。Ｂ
ＢＭ−２０４０Ｂの粗製固体（２ｓｙ）を小量のアセト
ニトリルに溶解獣そしてシリカゲル（２００、ｐ）カラ
ムに入れた。このカラムを９５％水性アセトニトリルで
展開しそして溶出をバイオアッセイ　（Ｂ、　　スブチ
リスＭ４５）およびＴＬＣ（ｓｔｏ２　：ＥｔＯＡｃ−
ＭｅＯＨ＝４二１ｖ／りでモニターした。適切なフラク
ションを集め、３５℃以下で＾空濃縮しそして凍結乾燥
すると無定形白色粉末としてＢＢＭ−２０４０Ｂの純粋
な試料（３，３０ｐ）が得られも

【図面の簡単な説明】

第１図はＢＢＭ−２０４ＯＡの赤外吸収スペクト／ｌ／
　（ＫＢｒペレット）を示す。第２図はＢＢＭ−２０４
０Ｂの赤外吸収スペクトル（ＫＢｒペレット）を示す。 第３図はピリジン−ｄｌ＋　（６０ＭＩ（ｘ）でのｆ３
ＢＭ−２０４ＯＡのＰＭＲスペクトルを示す。第４図は
ピリジン−ｄ＠　　（６０ＭＨｚ）でのＢＨＭ−２０４
０ＢのＰ　Ｍ　Ｉｔスペクトルを示す。第５図はアセ１
−　二ｌ−リＡ／、０．１　ＮｌＩＣＩ−アセトニトリ
ル（１：　９　Ｖ／Ｖ）および０．１Ｎ　　Ｍａｉｌ（
−アセトニトリ＃（１：９ｖ／ｖ）中の８１３Ｍ−２０
４ＯＡの紫外吸収スペクトルを示す。第６図はアセトニ
トリル、（ＩＩＮＨｃＩ−了セトニトリル（１：９ｖ／
ｖ）および［１１Ｎ　　ＮａＯＨ−アセトニトリル（１
：９ｖ　／　ｖ　）中のＢＪ）Ｍ−２０４０Ｂの紫外吸
収スペクトルを示す。 特許出願人　　プリストル萬有研究所株式会社代　理　
人　　弁理士　　川　　瀬　　良　　治〃　　　斉　　
藤　　武　　彦 ６１−

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １式 を有する抗生物質ＢＢＭ−２０４ＤＡ０２、式 を有する抗生物質ＢＢＭ−２０４０８０６式 （ を有する抗生物質ＢＢＭ−２０４ＯＡの製法において、
   ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　）　
   ｓｐ、のＢＢＭ−２０４０生産菌を深部好気条件下に炭
   素および窒素の同化可能な源を含有する水性栄養培地で
   実質的な量の８口Ｍ　−２０４０が該培地中に該菌で生
   産されるまで培養上そして次に培地からＢＢＭ−２０４
   ０抗生物質をそのメタノール付加体形態で採取すること
   を特徴とする上記の製法。 ４、　　ＢＢＭ−２０４０生産菌がストレプトマイセス
   Ｓｐ、菌株Ｊ５７６−９９　（ＡＴＣＣ３９１４３）ま
   たはそのＢＢＭ−２０４０生産変異株である特許請求の
   範囲第３項記載の方法。 ５式 を・ｆｊする抗４（−物質１３　［Ｉ　Ｍ　−２０４０
   Ｈの製法において、スト１／ブトマイセスｉｐ、のｌ（
   ＩＩＭ−２０４０生産菌を深部好気条件下に成像お上び
   窒素の同化ｒＩｉ能な源を含有する水性栄養培地で実質
   的なｆｒｔのＨ１，Ｉ　Ｍ　−２０４０が該培地中に該
   菌で生産きれるまで墳養臥そして次に培地からＢＢＭ−
   ２０４０抗生物質をそのデスメタノール形態で採取する
   ことを特徴とする上記の製法。 ６、　　ｌＮ５Ｍ−２０４０／＋産菌がストレプトマイ
   セスｓｐ、菌株、１５７６−９９　（Ａ’ｌ’ＣＣ５９
   １４Ｂ）またはそのＢＢＭ−２０４０生産変異株である
   Ｍ＋ｔ’ｌ・ＩＩＩＪ求の範囲第５項記載の方法。 Ｚ　微生物ストレプトマイセスｓｐ、ＡＴＣＣ５９１４
   ３の生物学的に純粋な培養物であり、而して窒素および
   炭素の同化可能な源を含有する水性栄養培地中の培養で
   採取可能な量で抗生物質ＢＢＭ−２０４０を生産し得る
   該培養−８細菌感染症に罹っている動物宿主にＢＢＭ−
   ２０４ＯＡの有効抗菌投与量を投与することを特徴とす
   る前記宿主を治療的に処置する方法。 ９　細菌感染症に罹っている動物宿主にＢＢＭ−２０４
   ０Ｂの有効抗菌投与量を投与することを特徴とする前記
   宿主を治療的に処置する方法。 １０、　　ＢＢＭ−２０４ＯＡに感受性を有する悪性腫
   瘍に罹っている動物宿主にＢＢＭ−２０４ＯＡのｌｌ！
   Ｉｒ戻阻害投与量を投与することを特徴とする前記宿主
   を治療的に処置する方法。 １１、　　ＢＢＭ−２０４０Ｂに＃、受性を有する急性
   腫瘍に補っている動物宿主にＢＢＭ−２０４０Ｂの腫瘍
   明害投与楓を投与することを特徴とする１１１１記宿主
   を治療的に処置する方渦１２、製薬担体または希釈剤と
   組合さって有効投菌積のＢＢＭ−２１１４０Ａを含有す
   ることを舶徴とする細菌感染症処置のための製Ｊ＃組成
   物。 １３　製薬担体または希釈剤と組合さって有効投与鮒の
   ＢＢＭ−２０４０Ｂを含イＪすることを特徴とする細菌
   感染症処置のだめσ廊゛バ・８１１成１１級 １４、製薬（１（休またｄ希釈剤と組合さって有効腫瘍
   阻害量のＢｎＭ−２０４ＯＡを含有することを特徴とす
   る哺乳動物宿主の悪（’１ｌｌｌ１１現を処置するだめ
   の製薬組成物。 １５　製薬担体または希釈剤と組合さって有効態ＪｍＩ
   ｇ４害量の１目３Ｍ−２０４０Ｂを含有することを特徴
   とする咄乳動物宿主σ樺、−性ｌｌ１ｌ！瘍を処置する
   ｆｃめの製薬組成物。