JPS5944040B2 - 抗生物質ｘｋ−１０１−１および／またはｘｋ−１０１−２の製造法 - Google Patents
抗生物質ｘｋ−１０１−１および／またはｘｋ−１０１−２の製造法Info
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- JPS5944040B2 JPS5944040B2 JP52038358A JP3835877A JPS5944040B2 JP S5944040 B2 JPS5944040 B2 JP S5944040B2 JP 52038358 A JP52038358 A JP 52038358A JP 3835877 A JP3835877 A JP 3835877A JP S5944040 B2 JPS5944040 B2 JP S5944040B2
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- A61P31/04—Antibacterial agents
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
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- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
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- C12P19/26—Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は抗生物質ＸＫ−１０１−１および／またはＸＫ
−１０１−２の新規な製造法に関する。
−１０１−２の新規な製造法に関する。
その目的とするところは、グラム陽性菌や陰性菌に対し
て抗菌力を有する抗生物質ＸＫ−１０１−１七トγに／
すｆ−１寸ＹＴｔ’−１／１１−’）ん１虞告ナス新規
な方法を提供することにある。
て抗菌力を有する抗生物質ＸＫ−１０１−１七トγに／
すｆ−１寸ＹＴｔ’−１／１１−’）ん１虞告ナス新規
な方法を提供することにある。
本発明者らは、このような目的のもとに天然界より数多
くの微生物を入手して抗生物質の生産性について研究し
た。
くの微生物を入手して抗生物質の生産性について研究し
た。
その結果、東京都町田市の土壌から分離した菌株（ＭＫ
−１０１株と称する）を培地に培養すると、培養物中に
抗生物質を生産する事実を見出した。
−１０１株と称する）を培地に培養すると、培養物中に
抗生物質を生産する事実を見出した。
この抗生物質はその後化学的、物理的性状について分析
が行なわれた結果、下記一般式Ｉで示すような構造をも
った抗生物質であることが明らかになった。
が行なわれた結果、下記一般式Ｉで示すような構造をも
った抗生物質であることが明らかになった。
一般式Ｉ
（但し、Ｒは−ＮＨ２または−ＯＨを示す）一般式Ｔ中
Ｒが−ＮＨ２の場合ＸＫ−１０１−１と称し、一般式Ｉ
中Ｒが一〇Ｈの場合ＸＫ−１０１−２と称し、両者を総
称してＸＫ−１０１と言う。
Ｒが−ＮＨ２の場合ＸＫ−１０１−１と称し、一般式Ｉ
中Ｒが一〇Ｈの場合ＸＫ−１０１−２と称し、両者を総
称してＸＫ−１０１と言う。
ＸＫ−１０１−１は７−ジアザアデノシン（またはツベ
ルシジン）とも呼ばれ、放線菌の一種であるストレプト
ミセス・ツベルシディクス（Ｓｔｒ−ｅｐｔｏｍｙｃｅ
ｓ ｔｕｂｅｒｃｉｄｉｃｕｓ）によって生産されるこ
とが知られている。
ルシジン）とも呼ばれ、放線菌の一種であるストレプト
ミセス・ツベルシディクス（Ｓｔｒ−ｅｐｔｏｍｙｃｅ
ｓ ｔｕｂｅｒｃｉｄｉｃｕｓ）によって生産されるこ
とが知られている。
（Ｋ、Ａｎｚａｉら、Ｊ。Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ、Ａ
Ｉｏ、 ２０１ （１９５７）など）。
Ｉｏ、 ２０１ （１９５７）など）。
またＸＫ−１０１−２は７−ジアザイノシンとも呼ばれ
有機化学的合成法により７−ジアザアデノシンから誘導
されることが知られている。
有機化学的合成法により７−ジアザアデノシンから誘導
されることが知られている。
（Ｙ。ＭｉｚｕｎｏらＪ、Ｏｒｇ、Ｃｈｅｍ、、２８．
３３３１（１９６３）など）。
３３３１（１９６３）など）。
又、両物質とも抗癌性物質として開発中のものである。
しかしながら両物質とも、これまでミクロモノスポラ属
の放線菌によって生産されるという知見はなく、本発明
者らによってはじめて見出された。
の放線菌によって生産されるという知見はなく、本発明
者らによってはじめて見出された。
以下、本抗生物質ＸＫ−１０１の製造法（こついて詳述
する。
する。
ＡＭＫ−１０１菌株の同定
前記のＭＫ−１０１菌株の形態的特徴および生理的性質
を観察、試験した結果は次の通りである。
を観察、試験した結果は次の通りである。
■ 形態的特徴
本菌株は合成培地上より、天然培地上に比較的よく生育
し、一般に使用されている寒天培地上では真性気中菌糸
を形成しない。
し、一般に使用されている寒天培地上では真性気中菌糸
を形成しない。
よく生育した培地上では基底菌糸は粒状（こ盛り上がっ
ており、橙色から暗茶褐色を呈している。
ており、橙色から暗茶褐色を呈している。
胞子の形成が良好な培地上では菌糸の色はオリーブ色か
ら黒色を帯びている。
ら黒色を帯びている。
液体培養、あるいは寒天培地上で生育させた菌糸を顕微
鏡で観察すると菌糸は直径約０．５μで直状によく伸長
し、分枝支は比較的長く、隔壁があり、菌糸の先端ある
いは途中に膨潤したものが認められる。
鏡で観察すると菌糸は直径約０．５μで直状によく伸長
し、分枝支は比較的長く、隔壁があり、菌糸の先端ある
いは途中に膨潤したものが認められる。
胞子溝はなく、胞子は基底菌糸から単純分枝した短胞子
柄の頂点に１個のみ着成し、比較的長い菌糸全体にくま
なく形成されるが、房状にも形成される。
柄の頂点に１個のみ着成し、比較的長い菌糸全体にくま
なく形成されるが、房状にも形成される。
そして成熟した胞子の直径は約１．０μであり、球状か
又は卵形を示し、電子顕微鏡観察ではその表面は平滑で
ある。
又は卵形を示し、電子顕微鏡観察ではその表面は平滑で
ある。
■ 各種培地上での生育状態
本菌株を各種培地上で生育させた時の生育、色などにつ
いて以下に示す。
いて以下に示す。
色の表示はＣｏｂｏｒ Ｈａｒｍｏｎｙ Ｍａｎｕａｌ
（Ｃｏｎｔａｉｎｅｒ Ｃｏｒ−ｐｏｒａｔｉｏｎ
ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ）による色の分類に従ったもので
ある。
（Ｃｏｎｔａｉｎｅｒ Ｃｏｒ−ｐｏｒａｔｉｏｎ
ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ）による色の分類に従ったもので
ある。
尚、本菌は以下の培地Ｅこおいて可溶性色素の生産は認
められなかった。
められなかった。
色は、特に断らないかぎり、集落表面の菌叢色および基
生菌糸の表面および裏面の色を示す。
生菌糸の表面および裏面の色を示す。
（１）ツアペック寒天培地
生簀：不良、平滑、緑黒色の胞子層形成
色ニオリーブ（１１／２ｎｉ）
（２）クルコース・アスパラギン寒天培地生育：不良、
粒状 色ニルセット・オレンジ（４ｐｃ） （３）栄養寒天培地 生育：不良、平滑 色 ニブライト・イエロー （３ｎａ）（４）グリセ
ロール・アスパラギン寒天培地生育：不良、粒状 色ニオレンジ（４１ａ） ゛（５）卵アルブミン寒天培地 生育：不良ないし普通、平滑 色 ：マスタード・ブラウン（２ｐｌ）裏面の色シルバ
ー・グレイ（３ｆｅ） （６）澱粉寒天培地 生育：普通、粒状 色：メロン・イエロー（３ｇａ）からクローブ・ブラウ
ン（３ｐｌ） （７）麦芽エキス・酵母エキス寒天培地 生育：不良ないし普通、粒状 色 ニライト・オレンジ（４ｉａ）一部黒色を呈す （８）オートミール寒天培地 生育：普通、粒状 色 ：サン・オレンジ（５１ａ）一部黒色を呈す （９）ベネット氏寒天培地 生育：普通ないし良好、粒状 色ニオレンジ（４１ａ） ００）エマーソン氏寒天培地 生育：普通ないし良好、粒状 色ニオレンジ（４１ａ） （１１）グルコース・酵母エキス寒天培地生育：良好、
隆起状 色：ディープ・ブラウン（ａ ｐｌ） ０２）ヒツキー・トレヌナー氏寒天培地 生育：普通、隆起状 色 ：ダーク・ブラウン（３ｐｎ） （１３）ペプトン・鉄・酵母エキス寒天培地生育：不良
、平滑 色ニオレンジ（４１ａ） 住ａ チロシン寒天培地 生育：不良、平滑 色ニライト・メロン・イエロー（３ｅａ）■ 生理的性
質 ＭＫ−１０１菌株の生理的諸性質を以下に示す。
粒状 色ニルセット・オレンジ（４ｐｃ） （３）栄養寒天培地 生育：不良、平滑 色 ニブライト・イエロー （３ｎａ）（４）グリセ
ロール・アスパラギン寒天培地生育：不良、粒状 色ニオレンジ（４１ａ） ゛（５）卵アルブミン寒天培地 生育：不良ないし普通、平滑 色 ：マスタード・ブラウン（２ｐｌ）裏面の色シルバ
ー・グレイ（３ｆｅ） （６）澱粉寒天培地 生育：普通、粒状 色：メロン・イエロー（３ｇａ）からクローブ・ブラウ
ン（３ｐｌ） （７）麦芽エキス・酵母エキス寒天培地 生育：不良ないし普通、粒状 色 ニライト・オレンジ（４ｉａ）一部黒色を呈す （８）オートミール寒天培地 生育：普通、粒状 色 ：サン・オレンジ（５１ａ）一部黒色を呈す （９）ベネット氏寒天培地 生育：普通ないし良好、粒状 色ニオレンジ（４１ａ） ００）エマーソン氏寒天培地 生育：普通ないし良好、粒状 色ニオレンジ（４１ａ） （１１）グルコース・酵母エキス寒天培地生育：良好、
隆起状 色：ディープ・ブラウン（ａ ｐｌ） ０２）ヒツキー・トレヌナー氏寒天培地 生育：普通、隆起状 色 ：ダーク・ブラウン（３ｐｎ） （１３）ペプトン・鉄・酵母エキス寒天培地生育：不良
、平滑 色ニオレンジ（４１ａ） 住ａ チロシン寒天培地 生育：不良、平滑 色ニライト・メロン・イエロー（３ｅａ）■ 生理的性
質 ＭＫ−１０１菌株の生理的諸性質を以下に示す。
温度ならびにミルクおよび繊維素ｔこ対する作用以外の
ものについては２７℃で２週間後の観察結果を示し、温
度は５日後、ミルク及び繊維素に対する作用については
１ケ月後の結果を示す。
ものについては２７℃で２週間後の観察結果を示し、温
度は５日後、ミルク及び繊維素に対する作用については
１ケ月後の結果を示す。
（１）炭素源の資化性：Ｄ−ガラクトース、Ｄ−グルコ
ース、スターチ、Ｄ−ラフィノース、サッカロース、Ｄ
−４シローヌ、マンノース、α−メリビオースを資化す
るが、Ｄ−アラビノース、グリセロール、Ｄ−ラクトー
ス、Ｌ−インシトール、Ｄ−マンニトール、Ｌ−ラムノ
ースは資化しない、Ｄ−フラクトースの資化力は弱い。
ース、スターチ、Ｄ−ラフィノース、サッカロース、Ｄ
−４シローヌ、マンノース、α−メリビオースを資化す
るが、Ｄ−アラビノース、グリセロール、Ｄ−ラクトー
ス、Ｌ−インシトール、Ｄ−マンニトール、Ｌ−ラムノ
ースは資化しない、Ｄ−フラクトースの資化力は弱い。
（２）ゲラチンの液化作用：弱い
（３）ミルクｔこ対する作用：凝固作用はないがわずか
に液化する。
に液化する。
（４）繊維素の分解作用 ：わずかにある。
（５）澱粉の加水分解作用：ある
（６）至適生育ｐＨ： ６．５〜８．０
（７）至適生育温度：２８℃〜３７℃
（８）硝酸還元作用：不明確
（９）チロシナーゼの生成 なし
く１０） メソノイド色素の生成 なしＭＫ−１０１
菌株は寒天培地において真性気中菌糸を形成せず基底菌
糸より分枝した胞子柄上に胞子を単一生成する中温菌で
あり、細胞壁の分析によりハイドロキシおよびメソ−デ
ィアミノピメリン酸（ｈｙｄｒｏｘｙ−ＤＡＰ、。
菌株は寒天培地において真性気中菌糸を形成せず基底菌
糸より分枝した胞子柄上に胞子を単一生成する中温菌で
あり、細胞壁の分析によりハイドロキシおよびメソ−デ
ィアミノピメリン酸（ｈｙｄｒｏｘｙ−ＤＡＰ、。
ｍｅｓｏ−ＤＡＰ）を有し、又菌体の糖の分析によりア
ラビノース、キシロースを含有することからして放線菌
のミクロモノスポラ属に属する菌株である。
ラビノース、キシロースを含有することからして放線菌
のミクロモノスポラ属に属する菌株である。
かくして該ＭＫ−１０１菌株をミクロモノスポラ、ｓｐ
、ＭＫ−１０１ト称することにした。
、ＭＫ−１０１ト称することにした。
本属の分類についてパージ第８版（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ
Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｄｅｔｅｒ−ｍｉｎａｔｉｖｅ
Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ、 ｅｉｇｈｔｈ ｅｄ−ｉ
ｔｉｏｎ）では、糖の資化性の明確なものと不明なもの
に分け、前者を糖の利用性を中心に、後者を色素生産で
分類している。
Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｄｅｔｅｒ−ｍｉｎａｔｉｖｅ
Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ、 ｅｉｇｈｔｈ ｅｄ−ｉ
ｔｉｏｎ）では、糖の資化性の明確なものと不明なもの
に分け、前者を糖の利用性を中心に、後者を色素生産で
分類している。
ＭＫ−１０１菌株はα−メリビオーヌ、Ｄ−ラフィノー
スを資化し、ツアペック寒天培地上での生育が不良であ
り、パージの分類に従えばミクロモノスポラ管チャルセ
ア（Ｍｉ ｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａｃｈａｌｃｅａ）
に属することになる。
スを資化し、ツアペック寒天培地上での生育が不良であ
り、パージの分類に従えばミクロモノスポラ管チャルセ
ア（Ｍｉ ｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａｃｈａｌｃｅａ）
に属することになる。
ミクロモノスポラ・チャルセアＡＴＣＣ１２４５２は菌
糸全体【こおいて無柄あるいは短い又は比較的長い胞子
柄上に黒色の平滑な表面を有する胞子を着成し、一方菌
糸に関しては細かい分枝とか分断などが認められないと
報告されている。
糸全体【こおいて無柄あるいは短い又は比較的長い胞子
柄上に黒色の平滑な表面を有する胞子を着成し、一方菌
糸に関しては細かい分枝とか分断などが認められないと
報告されている。
このような形態的特徴は本菌株においても認められる。
生理的性質ｆこおいては本菌株はミクロモノスポラ・チ
ャルセアとほとんど一致するがゲラチン、ミルク、繊維
素に対する作用などで若干異なる。
ャルセアとほとんど一致するがゲラチン、ミルク、繊維
素に対する作用などで若干異なる。
即ち本菌株はミクロモノスポラ・チャルセアよりもそれ
らの作用が弱い。
らの作用が弱い。
ミクロモノスポラ・チャルセア種の菌株（こよる抗生物
質生産ｌこついては、ミクロモノスポラ・チャルセア・
サブスピーシズ・フラビダＮＲＲＬ ３２２２及びミク
ロモノスポラ・チャルセア・サブスピーシズ・イズメン
シヌＡＴＣＣ２１５６１によるアミノ配糖体抗生物質Ａ
ｎｆｉｂｉｏｔｉｃ ／ｆ６４６０ （特公昭４６−１
６１５３号公報）及びマクロライド抗生物質シュベニミ
シンＣ特公昭４７−４５１４号公報）の報告があるが、
ツベルジジン（ＸＫ−１０１−１）生産の報告はない。
質生産ｌこついては、ミクロモノスポラ・チャルセア・
サブスピーシズ・フラビダＮＲＲＬ ３２２２及びミク
ロモノスポラ・チャルセア・サブスピーシズ・イズメン
シヌＡＴＣＣ２１５６１によるアミノ配糖体抗生物質Ａ
ｎｆｉｂｉｏｔｉｃ ／ｆ６４６０ （特公昭４６−１
６１５３号公報）及びマクロライド抗生物質シュベニミ
シンＣ特公昭４７−４５１４号公報）の報告があるが、
ツベルジジン（ＸＫ−１０１−１）生産の報告はない。
以上のことからして、ＭＫ−１０１菌株
をミクロモノスポラ・チャルセア・サブスピーシズ°ツ
ベルシディカ（Ｍｉ ｃ ｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａｃｈ
ａｌｃｅａ ５ｕｂｓｐ、ｔｕｂｅｒｃｉｄｉｃａ）Ｍ
Ｋ−１０１と命名した。
ベルシディカ（Ｍｉ ｃ ｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａｃｈ
ａｌｃｅａ ５ｕｂｓｐ、ｔｕｂｅｒｃｉｄｉｃａ）Ｍ
Ｋ−１０１と命名した。
該菌株は微工研に寄託されており、その微工研菌寄は第
３９６３号である。
３９６３号である。
ＢＭＫ−１０１菌株の培養
本菌株の培養【こおいては通常の放線菌の培養法が一般
ｔこ用いられる。
ｔこ用いられる。
培養のための栄養源としてはいろいろのものが用いられ
る。
る。
炭素源としてはブドー糖、デン粉、マンノース、フラク
トース、シュークロース、糖密などが単独または組合せ
て用いられる。
トース、シュークロース、糖密などが単独または組合せ
て用いられる。
さらに菌の資化性によっては炭化水素、アルコール類、
有機酸なども用い得る。
有機酸なども用い得る。
無機および有機窒素源としては塩化アンモニウム、硫酸
アンモニウム、尿素、硝ｅアンモニウム、硝酸ソーダな
どが、また天然窒素源としてはペプトン、肉エキス、酵
母エキス、乾燥酵母、コーンスチープリカー、大豆粉、
カザミノ酸、ソリュブルベジタブルプロテインなどが単
独または組合せて用いられる。
アンモニウム、尿素、硝ｅアンモニウム、硝酸ソーダな
どが、また天然窒素源としてはペプトン、肉エキス、酵
母エキス、乾燥酵母、コーンスチープリカー、大豆粉、
カザミノ酸、ソリュブルベジタブルプロテインなどが単
独または組合せて用いられる。
そのほか必要に応じて食塩、塩化カリ、炭酸カルシュー
ム、燐酸塩などの無機塩類を加えるほか、本菌の生育や
ＸＫ−１０１の生産を促進する有機物や無機物を適当に
添加することができる。
ム、燐酸塩などの無機塩類を加えるほか、本菌の生育や
ＸＫ−１０１の生産を促進する有機物や無機物を適当に
添加することができる。
培養法としては、液体培養、とくに深部撹拌培養法がも
つとも適している。
つとも適している。
培養温度は２５〜４０°Ｃ，ｐＨは中性付近で培養を行
なうことが望ましい。
なうことが望ましい。
液体培養で通常２日ないし７日培養を行なうと本抗生物
質が培養液中に生成蓄積される。
質が培養液中に生成蓄積される。
培養液中の蓄積量が最大に達したときに培養を停止し菌
体を炉別して得られる培養沢液中より目的物を精製単離
する。
体を炉別して得られる培養沢液中より目的物を精製単離
する。
ＣＸＫ−１０１の精製・単離
培養泥液から本物質の精製単離には微生物代謝生産物を
その培養液から単離するためにふつう用いられる分離精
製の方法が利用される。
その培養液から単離するためにふつう用いられる分離精
製の方法が利用される。
本抗生物質ＸＫ−１０１は後記するように水によく溶け
るが一般の有機溶媒にはよく溶けない塩基性物質なので
、いわゆる水溶性、塩基性抗生物質の精製によく用いら
れる方法が採用できる。
るが一般の有機溶媒にはよく溶けない塩基性物質なので
、いわゆる水溶性、塩基性抗生物質の精製によく用いら
れる方法が採用できる。
すなわち、カチオン交換樹脂による吸脱着法、セルロヌ
カラムクロマトグラフイー、シリカゲルカラムクロマト
クラフィー、セファデックスＬＨ−２０カラムクロマト
グラフィー、活性炭による吸脱着などの方法を適当に組
合せて用いることができる。
カラムクロマトグラフイー、シリカゲルカラムクロマト
クラフィー、セファデックスＬＨ−２０カラムクロマト
グラフィー、活性炭による吸脱着などの方法を適当に組
合せて用いることができる。
次（こその一例を示す。すなわち、培養炉液を塩酸でｐ
Ｈ４０に調整したあと活性炭粉末を加え撹拌する。
Ｈ４０に調整したあと活性炭粉末を加え撹拌する。
抗生物質を活性炭粉末に吸着させた抜水でよく水洗し、
ついで８０％のアセトン水溶液で抽出する。
ついで８０％のアセトン水溶液で抽出する。
この抽出操作を数回繰り返し、抽出画分を集めて減圧下
で濃縮する。
で濃縮する。
この濃縮液をあらかじめ水を飽和させたｎ−ブタノール
で懸濁しカラムにつめたセルロースに通し同じく水飽和
ｎ−ブタノールで溶出する。
で懸濁しカラムにつめたセルロースに通し同じく水飽和
ｎ−ブタノールで溶出する。
溶出画分のうちＸＫ−１０１の含まれる両分を集め、減
圧下で濃縮したあと、５０係メタノールで懸濁し、カラ
ムに充填したセファデックスＬＨ−２０（Ｐｈａｒｍａ
ｃｉａ ＦｉｎｅＣｈｅｍｉｃａｌｓ Ｉｎｃ、製）に
通塔する。
圧下で濃縮したあと、５０係メタノールで懸濁し、カラ
ムに充填したセファデックスＬＨ−２０（Ｐｈａｒｍａ
ｃｉａ ＦｉｎｅＣｈｅｍｉｃａｌｓ Ｉｎｃ、製）に
通塔する。
このカラムを５０％−メタノールで溶出すると、最初の
活性画分としてＸＫ−１０，１−２が溶出され、ついで
２番目の活性画分としてＸＫ−１０１−１が溶出されて
くる。
活性画分としてＸＫ−１０，１−２が溶出され、ついで
２番目の活性画分としてＸＫ−１０１−１が溶出されて
くる。
それぞれの活性画分を集め減圧下で濃縮してメタノール
を潮力したあと、少量の水に溶解して凍結乾燥を行なう
と、白色の粉末としてＸＫ−１０１−１およびＸＫ−１
０１−２の精製標品を得ることができる。
を潮力したあと、少量の水に溶解して凍結乾燥を行なう
と、白色の粉末としてＸＫ−１０１−１およびＸＫ−１
０１−２の精製標品を得ることができる。
上記精製工程中のＸＫ−１０１−１及びＸＫ−１０１−
２の活性区分の動向はワットマン扁１Ｐ紙による上昇式
ペーパークロマトグラフィーＥこよりチェックする。
２の活性区分の動向はワットマン扁１Ｐ紙による上昇式
ペーパークロマトグラフィーＥこよりチェックする。
展開溶媒としては、アンモニア水でｐＨ１０，０に調整
した水を用いる。
した水を用いる。
室温で８〜１０時間展開したあと、紫外線ランプで検出
するとＲｆｏ、５０付近にＸＫ−１０１−１のスポット
が、Ｒｆｏ、６２付近にＸＫ−１０１−２のスポットが
検出される。
するとＲｆｏ、５０付近にＸＫ−１０１−１のスポット
が、Ｒｆｏ、６２付近にＸＫ−１０１−２のスポットが
検出される。
かくして得られたＸＫ−１０１−１およびＸＫ−１０１
−２の理化学的性状は表１に示すとおりである。
−２の理化学的性状は表１に示すとおりである。
ＸＫ−１０１およびＸＫ−１０１−２の各種展開剤によ
るペーパークロマトグラフィーおよび薄層クロマトグラ
フィーのＲｆ値は表２のとおりである。
るペーパークロマトグラフィーおよび薄層クロマトグラ
フィーのＲｆ値は表２のとおりである。
ＸＫ−１０１−１およびＸＫ−１０１−２に関するこれ
らの諸性質を既知の抗生物質と比較検討した。
らの諸性質を既知の抗生物質と比較検討した。
その結果ＸＫ−１０１−１は放線菌ストレプトミセス・
ツベルシディクスによって生産されるツベルクリン（７
−ジアザアデノシン）に一致した。
ツベルシディクスによって生産されるツベルクリン（７
−ジアザアデノシン）に一致した。
またＸＫ−１０１−２は、７−ジアザイノシンと同定さ
れた。
れた。
しかしながら、これらの物質が各々単独で、あるいは共
存の状態でミクロモノスポラ属の放線菌によって生産さ
れるとの報告はない。
存の状態でミクロモノスポラ属の放線菌によって生産さ
れるとの報告はない。
以下、本発明の実施例を示す。
実施例 １
種菌としてミクロモノスポラ・チャルセア・サブスピー
シス・ラベルシブイカ（Ｍｉ ｃｒｏｍｏｎｏｓｐ−ｏ
ｒａ ｃｈａｌｃｅａ ５ｕｂｓｐ、 ｔｕｂｅｒｃ
ｉｄｉｃａ）ＭＫ−１０１株、（微工研菌寄第３９６３
号） （Ｎ ＲＲＬ１１１０７）を用い、第一種培地と
してグルコース２ ｇ／ｄｌ、ペプトン０．５ ｇ／ｄ
ｌ、酵母エキス０、５９７ｄｌ、炭酸カルシューム０．
１９／ｄｌ、の組成を有する培地（殺菌＠ ｐＨ７，２
）を用いた。
シス・ラベルシブイカ（Ｍｉ ｃｒｏｍｏｎｏｓｐ−ｏ
ｒａ ｃｈａｌｃｅａ ５ｕｂｓｐ、 ｔｕｂｅｒｃ
ｉｄｉｃａ）ＭＫ−１０１株、（微工研菌寄第３９６３
号） （Ｎ ＲＲＬ１１１０７）を用い、第一種培地と
してグルコース２ ｇ／ｄｌ、ペプトン０．５ ｇ／ｄ
ｌ、酵母エキス０、５９７ｄｌ、炭酸カルシューム０．
１９／ｄｌ、の組成を有する培地（殺菌＠ ｐＨ７，２
）を用いた。
種菌−白金耳を５０ｍ１大型試験管に入れた上記種培地
に植菌し、３０℃で５日間培養する。
に植菌し、３０℃で５日間培養する。
この種培％ 液１０ ｍｌを２５０ｙｄ容エルレンマイ
ヤーフラスコに入った３０＋７１１の第二種培地に植菌
する。
ヤーフラスコに入った３０＋７１１の第二種培地に植菌
する。
第二種培地の組成は第一種培地の組成と同じである。
第二種培養は３０℃で２日間振盪培養する。
この種培養液３０ ｒｄを２１バッフル付きエルレンマ
イヤーフラスコに入った３００Ｉ７１１の第三種培地に
植菌する。
イヤーフラスコに入った３００Ｉ７１１の第三種培地に
植菌する。
第三種培地の組成は第一種培地の組成と同じである。
第三種培養は３０℃で２日間振盪培養する。
この第三種培養液９００ｍ１（フラスコ３本分）を３０
１容のステンレススチール製ジャーファーメンタ−中の
主発酵培地１５Ａに植菌する。
１容のステンレススチール製ジャーファーメンタ−中の
主発酵培地１５Ａに植菌する。
主発酵培地組成はシュークロース３ｇ／ｄｌ、ファーマ
メディア（綿実粕の商品名、Ｔｒａｄｅｒｓ ０１１Ｍ
１ｌｌＣｏ、製） １．５ ｇ／ｄｌ、肉エキス０．５
９７ｄｌ、コーンスチープリカ−０，５９／ｄｌ、 Ｋ
２ＨＰＯ４０，０５＆／ｄｉ！、 ＭｇＳＯ４，７Ｈ２
００，０５ｇ／ｄｌ、 ＣｕＳＯ４−５Ｈ２０５ｍｔｐ
／Ｌ ＭｎＣｌ２ 、４Ｈ２０５ＴＱ／ｌ。
メディア（綿実粕の商品名、Ｔｒａｄｅｒｓ ０１１Ｍ
１ｌｌＣｏ、製） １．５ ｇ／ｄｌ、肉エキス０．５
９７ｄｌ、コーンスチープリカ−０，５９／ｄｌ、 Ｋ
２ＨＰＯ４０，０５＆／ｄｉ！、 ＭｇＳＯ４，７Ｈ２
００，０５ｇ／ｄｌ、 ＣｕＳＯ４−５Ｈ２０５ｍｔｐ
／Ｌ ＭｎＣｌ２ 、４Ｈ２０５ＴＱ／ｌ。
ＺｎＳＯ４，７Ｈ２０５１ｎ９＃、 ＣｏＣｌ２．６
Ｉ−Ｌ、０１ｙｙ／ ｌ、 ＦｅＳＯ４，７Ｈ２０２０
ｍｔ？／１１． ＣａＣＯ３０，２，９／ｄｌの培地（
殺菌前ｐＨ７，３）を用いる。
Ｉ−Ｌ、０１ｙｙ／ ｌ、 ＦｅＳＯ４，７Ｈ２０２０
ｍｔ？／１１． ＣａＣＯ３０，２，９／ｄｌの培地（
殺菌前ｐＨ７，３）を用いる。
この主発酵培養は３０℃で４日間通気撹拌力式（回転数
３５ Ｏｒ、ｐ、ｍ、 ｙ通気量１５ ｌ／ｍｉｎ、）
により行なう。
３５ Ｏｒ、ｐ、ｍ、 ｙ通気量１５ ｌ／ｍｉｎ、）
により行なう。
かくして得られた発酵液のｐＨを濃硫酸を添加してｐＨ
４０に調整し、瀘過助材としてラジオライト＃６００（
昭和化学工業製）を約１ｋｇ加え菌体を炉別する。
４０に調整し、瀘過助材としてラジオライト＃６００（
昭和化学工業製）を約１ｋｇ加え菌体を炉別する。
得られた炉液１２１に活性炭素（和光紬薬工業製）２４
０ｇを加え３０分はど撹拌する。
０ｇを加え３０分はど撹拌する。
そののち、活性炭素を炉別し、水でよく水洗したのち、
８０％−アセトン水溶液２１の中に懸濁し１５分はど撹
拌する。
８０％−アセトン水溶液２１の中に懸濁し１５分はど撹
拌する。
活性炭素を炉別し、涙液を別にとったのち、ふたたび活
性炭素を８０係−アセトン水溶液２１の中に懸濁し、活
性成分の抽出を行なう。
性炭素を８０係−アセトン水溶液２１の中に懸濁し、活
性成分の抽出を行なう。
この抽出操作を３回繰り返すと活性炭素（こ吸着された
ＸＫ−１０１はほとんどアセトン水溶液中に溶離されて
くる。
ＸＫ−１０１はほとんどアセトン水溶液中に溶離されて
くる。
得られたアセトン水溶液６１を減圧下で濃縮し、約５０
ＴＬｌとする。
ＴＬｌとする。
一方、セルロース粉末（アビセル、フナコシ薬品株式会
社製）５００ｍｌを水飽和ｎ−ブタノール中（こ懸濁し
ガラス製カラムに均一に充填し、これｔこ先のアセトン
抽出液の濃縮物５０１１１１をチャージする。
社製）５００ｍｌを水飽和ｎ−ブタノール中（こ懸濁し
ガラス製カラムに均一に充填し、これｔこ先のアセトン
抽出液の濃縮物５０１１１１をチャージする。
・ついでこのカラムを水飽和ｎ−ブタノールで１ｒｕｌ
／ｍｉｎの流速で溶出すると、ＸＫ−１０１は大部分の
色素と分れて溶出されてくる。
／ｍｉｎの流速で溶出すると、ＸＫ−１０１は大部分の
色素と分れて溶出されてくる。
溶出画分を２０ｒｒＪずつの両分ｔこ分取し紫外部吸収
により検定するとフラクションＡ３９１１９の間に活性
成分が溶出されてくる。
により検定するとフラクションＡ３９１１９の間に活性
成分が溶出されてくる。
この両分を集め、少量の水を加入で減圧下で濃縮する。
約１０ｒｒＬｌまで濃縮したのち、あられしめ５０係−
メタノール水溶液で懸濁しガラス製カラムに均一に充填
したセファデックスＬＨ−２０（３００ｍｌ）のカラム
にチャージする。
メタノール水溶液で懸濁しガラス製カラムに均一に充填
したセファデックスＬＨ−２０（３００ｍｌ）のカラム
にチャージする。
ついで同じく５０％−メタノール水溶液でカラムを１ｍ
ｌ／ｍｉｎの流速で溶出し、溶出フラクションを５７１
１１ずつ分取すると、フラクション／１６２１〜２８に
ＸＫ−１０１−２が溶出され、ついでフラクション４３
９〜４５にＸＫ−１０１−１が溶出されてくる。
ｌ／ｍｉｎの流速で溶出し、溶出フラクションを５７１
１１ずつ分取すると、フラクション／１６２１〜２８に
ＸＫ−１０１−２が溶出され、ついでフラクション４３
９〜４５にＸＫ−１０１−１が溶出されてくる。
フラクション４２１〜２８の両分を集め、減圧下で５ｒ
Ｉｌｌまで濃縮し、これに２１ｒＬｌのエタノールを加
えて冷所に保存すると、白色の結晶が析出する。
Ｉｌｌまで濃縮し、これに２１ｒＬｌのエタノールを加
えて冷所に保存すると、白色の結晶が析出する。
この結晶をＰ別し、エタノールで洗滌したのちデシケー
タ中で乾燥すればＸＫ−１０１−２の精製標品を得るこ
とができる。
タ中で乾燥すればＸＫ−１０１−２の精製標品を得るこ
とができる。
収量は４０１ｎＩ？であった。
一方、フラクション扁３９〜４５の両分を減圧下で濃縮
し、約５ｍｌとする。
し、約５ｍｌとする。
これをあらかじめ、濃アンモニア水でｐＨ１０，０に調
整した水で懸濁したセルロース粉末のガラスカラムｐこ
チャージする。
整した水で懸濁したセルロース粉末のガラスカラムｐこ
チャージする。
ついで同じく濃アンモニア水でｐＨ１０，０に調整した
水でカラムを溶出する。
水でカラムを溶出する。
流速１ ｒｕＶｍｉ ｎ 、＋フラクション当り５ｍｌ
の容量で溶出画分を分取すると、フラクション４２６〜
３０にＸＫ−１０１−１が溶出されてくる。
の容量で溶出画分を分取すると、フラクション４２６〜
３０にＸＫ−１０１−１が溶出されてくる。
この両分を集め減圧下で濃縮乾固したあと、１ ｒｕｌ
の温水に溶解し冷所（こ放置すると白色の結晶が析出し
てくる。
の温水に溶解し冷所（こ放置すると白色の結晶が析出し
てくる。
この結晶を戸別し、冷水で洗滌したあと減圧下で乾燥す
れば、ＸＫ−１０１−１の精製標品を得ることができる
。
れば、ＸＫ−１０１−１の精製標品を得ることができる
。
収量は３５０■であった。
第１図および第２図はそれぞれＸＫ−１０１−１および
ＸＫ−１０１−２の紫外部吸収スペクトルを、第３図お
よび第４図はそれぞれＸＫ−１０１−１およびＸＫ−１
０１−２の光外部吸収スペクトルを示す。
ＸＫ−１０１−２の紫外部吸収スペクトルを、第３図お
よび第４図はそれぞれＸＫ−１０１−１およびＸＫ−１
０１−２の光外部吸収スペクトルを示す。
Claims (1)
- １ ミクロモノヌポラ属に属し、抗生物質ＸＫ−１０１
−１および／またはＸＫ−１０１−２を生産する能力を
有する微生物を栄養培地に培養し、培養物中ｔこ抗生物
質ＸＫ−１０１−１および／またはＸＫ−１０１−２を
蓄積せしめ、該培養物から該蓄積された抗生物質を採取
することを特徴とする抗生物質ＸＫ−１０１−１および
／またはＸＫ−１０１−２の製造法。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP52038358A JPS5944040B2 (ja) | 1977-04-04 | 1977-04-04 | 抗生物質ｘｋ−１０１−１および／またはｘｋ−１０１−２の製造法 |
| US05/893,433 US4316957A (en) | 1977-04-04 | 1978-04-04 | Process for the production of 7-deazaadenosine and 7-deazainosine |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP52038358A JPS5944040B2 (ja) | 1977-04-04 | 1977-04-04 | 抗生物質ｘｋ−１０１−１および／またはｘｋ−１０１−２の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS53124685A JPS53124685A (en) | 1978-10-31 |
| JPS5944040B2 true JPS5944040B2 (ja) | 1984-10-26 |
Family
ID=12523046
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP52038358A Expired JPS5944040B2 (ja) | 1977-04-04 | 1977-04-04 | 抗生物質ｘｋ−１０１−１および／またはｘｋ−１０１−２の製造法 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4316957A (ja) |
| JP (1) | JPS5944040B2 (ja) |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3300479A (en) * | 1965-08-05 | 1967-01-24 | Upjohn Co | Deazapurine riboside cyclic 3', 5'-phosphates and process therefor |
| US3454696A (en) * | 1968-02-19 | 1969-07-08 | Schering Corp | Antibiotics 460 and methods for their production |
-
1977
- 1977-04-04 JP JP52038358A patent/JPS5944040B2/ja not_active Expired
-
1978
- 1978-04-04 US US05/893,433 patent/US4316957A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS53124685A (en) | 1978-10-31 |
| US4316957A (en) | 1982-02-23 |
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