JPS5946253A - ＧｎＲＨ「きっ」抗薬２ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、ヒトを含む哺乳類において下垂体による生殖
腺刺激ホルモンの放出を抑制するペプチド、ならびに刊
卵を阻止し、および／またはステロイド゛の放出を抑制
する方法に関する。より詳細には本発明は生殖腺の機能
ならびにステロイドホルモンでル）るプロゲステロンお
よびテストステロンの放出を１≦１１止する投プチドに
関する。

下垂体は視床下部として知ら′Ｊ１ている脳の基底領域
に下垂体茎により連結している。竹に戸胞成熟ボルモン
（Ｆ’ＳＨ）および黄体形成ホルモン（ＬＨ）（１〜ば
しば生殖腺刺激ホルモンと呼ば、ｈる）は下任体ｆより
放出さＪする。こ」１らのホルモンは一緒ＶＣ，ｆ、「
つで、陥丸においてテストステロンケ、卵巣においてプ
ロゲステロンおよびエストロゲンを産生する生殖腺の機
能を調節し、また生殖子の産生および成熟を調節する。

下垂体前葉によるホルモンの放出には通常は、視床下部
により産生される他の種類のホルモンがあらかじめ放出
されることが必要である。視床下部ホルモンの１つは生
殖腺刺激ホルモン、特にＬＨの放出を誘発する因子とし
て作用し、このホルモンをここではＧｎＲＨと呼ぶ（こ
ｉｌは従来はＬＨ−ＲＨおよびＬＲＦとも叶ば罎１てい
る）。ＧｎＲ）Ｉは下記の構造をもつデカー？プチト゛
とｌ−て車内１１、定性さ、ｈている。

ｐ−Ｇ、ｄｕ−８１ｓ−Ｔｒｐ−８ｅｒ−Ｔｙｒ−Ｇｌ
ｙ−Ｌｅｕ−Ａｒ　ｙ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−ＮＨ２ ペプチドは１個の酸のカルボキシル基がイ１１！の酸の
アミノ基に結合した。２個以上のアミノ酸を含む化合物
である。」−記のＧｎＲＨに関する式は、アミン基を左
に、カルボキシル基を右に表わす１１（ｌ用の破プチド
表示によるものである。アミノ酸残基の位置はアミノ酸
残基に左から右へ％号をつけることにより確認さ」する
。ＧｎＲＨの場合、グリシンのカルボキシル基の水酸基
はアミン（ＮＨ２）により置換されている。」−記のｒ
ｌｉ’ｉｉ々のアミノ酸残基に関する略号は慣用さｊす
るものであり、アミノ酸力慣用名に基づく。たとえばｐ
−Ｇ７ｕはピログルタミン酸、Ｈｉｓはヒスチジン、Ｔ
ｒｐはトリプトファン、Ｓｅｒはセリン、Ｔｙｒはチロ
シン、Ｇｌｙはグリシン、Ｌｅｕはロイシン、Ａｒｙは
アルギニン、　Ｐｒｏはプロリン、Ｐｈｅはフェニルア
ラニン、　Ａｌａはアラニンである。こねし〕のアミノ
酸はバリン、イソロイシン、スレオニン、リジン、アス
パラギン酸、アス／にラキン、グルタミン、システィン
、メチオニン、フェニルアラニンおよびプロリンとＪＩ
ＧＶ　　ｌ１ｌＱ’に普、１！１σ）天然または蛋白質
由来のアミノ酸であると孝女−らｉする。本発明の投プ
チドのアミノ酸はグリシンを除いてｔｌ−１ｌ−に指示
Ｌ　ｔ、ｃい限りＬ型立体配置のもθ−）である。

ＧｎＲＨデカ−ぐブチ１．９の６位のＧ］、ｙをＤ−ア
ミノ酸で置換するとＧｎＲＨが吐乳類の下垂体によるＬ
Ｈその他の生殖腺刺激ホルモンの放出に作用するよりも
約１〜３５倍大きな効力をもつＲプチド物ノ釣が１（）
られることは周知である。Ｋ、肌　ゾラサト’　（Ｐｒ
ａＳａｄ　）により（Ｊ、Ｍｅｄ、　Ｃｈｅｍ、　、Ｖ
ｏｌ、、１９゜４９２（１９７６））、３位において３
−（ｌ−ナフチル）Ａｅａ　（Ｆ、より置換することに
よってより大きな効力が１（）らＪすることも教示さＪ
ｌている。その放出作用ばＣｎＲＨ同族体を叶乳類に静
脈内、皮下、筋肉内、経口、鼻腔内または膣内に投与さ
れた場合に得ろＡする。

ＧｎＲＨデカＲプチドσ）２イ☆においてＨｉｓケ各ｆ
中アミノ酸で置換することにより（５トたはＨｊｓを除
去１−ることにＪ：す）吐乳類の−１・重体に、１：る
ＬＨその他の牛＃ｆ　ｌｌ３ｉξ刺激ホルモンの放出に
★・１し抑：ｔｉｌ１作川をも用同族体がｉＵ）　ｌら
」することも周知である１、雌吐乳づ〕′ＩＶｒ、おい
て排卵１り）１夕Ｉ」、　＋ｌ−′ｆ？＝望む理由がル
、す、ＧｎＲＨの１Ｆ常な（殻能に対し拮抗作Ｊ４１’
ａテ示すＧｎＦｔＨ同疾体の投与が排卵を阻１１−１−
るために採用さ」］てきた。このためＧ丁ｒ　ＲＩ−１
に貸・ｌ　シＪＷｉ　Ｊプ°１゛イ’＋＝　Ｉｆｆケ示
すＧｎＲＨ同族体が、避Ｖ、（［薬としてそ」１「）を
使月１する可能性について、“または受胎期間を調節す
ることについて仙列さ」１ている。こ」′１らの拮抗系
は雄叫乳類において生殖腺刺激ホルモンの分泌を調節す
るのに有用であることも見出されており、雑用σ）避姐
薬として用いることもできる。内生ＧｎＲＨ＆こ対し強
い拮抗作用を示し、ＬＨの分泌および吐乳カーｉ　ｔｌ
）年少１白腺によるステロイドの放出Ｓ７１Ｓ１１　＋
Ｉ″′□４−るベプチｌ−″を？’Ｊることか望ま」１
ている。

本発明は、ヒトを含む吐乳類において４ト９ｎｔ腺刺敞
ホルモンの放出を抑制する投プチト゛を提供し、また頭
Ｊ４１．の咄！１力′１θ）生殖腺によるステロイド゛
の放出を抑制″４〜る方法を提供する。改良さねたＧｎ
ＲＨ同族体はＧｎＲＨに対し拮抗作用を示し、吐乳類の
η：ＩＡＣ！過程に対Ｉ〜抑制作用をもつ。こハらの同
族体は早発７嬰春期、ホルモン依存性新形式、月経困Ａ
ｆＧおよび子宮内膜症を含む各神の状況下において牛ｐ
Ｈ−＋腺刺檄ホルモンおよび件ホルモンの産生な抑制す
るために用いることかで゛きる。

一般゛に本発明によ」１ば、ヒトを含む吐乳′ｌ、ｌ′
ｌｌ７）下−！［ト体による年少１保刺激ホルモンの分
泌を強く抑制御２、および／または生り１＾腺によるス
テロイドの放出を抑制するベブチ１−゛が合成さＪする
。これ「〕のペプチド゛はＧｎＲＨσ）同族体であり、
β−（２−ナフチル）Ｄ−アラニン（以下β−Ｄ−２Ｎ
ＡＬ）の形の１位置換、Ｄ−Ｔｒｐの形の３位置換、６
位置換が７ｔｃさね、２位にも置換基が存在する。１位
の置換基はそのα−アミノ基がアシル基（たと女ばホル
ミル基、アセチル基、アクＩＪ　ＩＪル基、ビニルアセ
チル基またはベンゾイル基；　アセチル基（ＡＣ）およ
びアクＩＪ　ＩＪル基（Ａｃｒ）が好ましい）を含むよ
うに変化していてもよい。変化しｆこ［）　−Ｐｂｅは
好ましくは２位に存在Ｉ〜、インゼン環中に存在−１−
るこの変化の結果、増大した拮抗活性をｌｊえる。水素
原子の単一置換は好まｌ−１＜はパライ伶または４位に
おいて行わ脂１、置換基は塩素原子、フッ素片子、臭素
原子および二）ｏ基がｂ選ば」］、地素原仔およびフッ
素原子が好ま（−い。２斗置換は好まｌ、＜は：う位お
よび１１位において行わ」する（たと女ば３゜４−　Ｃ
１−Ｄ−Ｐｈｅ）。／Ｉ−ＮＨ２−Ｄ　−Ｐｌ）ｅ−ま
たはＤ−Ａｒｑは６イ台に存在する。５位、７位および
１０位における置換は任意である。（Ｊ−Ｐｈｅが５位
に挿入さＪする場合、Ｃ７は好まし７くはオルト位また
は２位に存在する。

こＪｌらの投プチドはＬＨの放出を抑制する効力が高い
ため、しばｌ−ばＧｎＲＨ拮抗薬と呼ばｈる。

これらカベプチト゛は発情前期にきわめて低い水準で投
与さ」′１だ場合に鮪咄乳類の排卵を抑制（−１受胎爾
後に投与さ」１．た場合には受精卵を杓吸収するのにモ
有効である。こ」１．らハベブチ！パばｊ４Ｆ咄乳類の
避ＩＩＦ処理にも有効である。

、１：り詳細には本発明のペプチドは次式により表わさ
Ｊｌる。

Ｘ−β−Ｄ−２ＮＡＬ−Ｒ２−Ｄ−Ｔｒｐ−８ｅｒ−Ｆ
ｌ　５−ｆ’（６−丁（７−Ａｒ、７−Ｐｒｏ−Ｒｈ＋ １−制式中χは水素原子、または７個以−トの炭素原イ
ケモツアンル基てあり、Ｒ２は（Ｊ−Ｄ−Ｐｂｅ、Ｆ−
Ｄ−Ｐｂｅ　、　Ｎ０２−Ｄ−Ｐｈｅ、　Ｃｅ２−Ｄ−
Ｐｂｅ−またはＢ　ｒ　−Ｄ　−Ｐｂ　ｅ　；ＩＲ５は
ＴｙｒまたはＧ、ｅ　−Ｐｈ　ｅ　；　Ｒ６はＤ−Ａｒ
ｑまたは、１−ＮＨ２−Ｄ−Ｐｈｅ　；　Ｒ５はＬｅｕ
　またはＮ“Ｍｅ−Ｌｅｕ；　　そしてＲｌｏはＣ１ｙ
−ＮＨ２゜ＮＨＣＨ２ＣＨ３マたばＤ　−Ａ　ｌａ　−
ＮＨ２である。

β−Ｄ−ＮＡＬはβ−炭素原子においてナフチル基によ
り置換さ」またアラニンのＤ−異性体を音吐１−１こ、
ｈは３−Ｄ　−ＮＡＬ　　と表わすこともできる。好−
ましくはβ−Ｄ　−２ＮＡＬが用いられ、こ」１はβ−
炭素原仔が」坩構造θ）２位においてナフチレンに結合
していることｋｍ味する。

本発明のペプチドは古典的な溶液合成法により、または
クロルメチル化樹脂、メチルベンゾヒト゛リルアミン（
ＭＢＨＡ）４１１脂もしくはベンゾヒドリルアミン（Ｂ
ＨＡ　）　４ｆｔｉ脂を用いる同相法により合成するこ
とができる。同相合成は米国羽許第４，２１１．６り３
号明細書に詳述さまた（）η式で鎖中α）アミノ酸うで
段階的に伺加１゛る方法により行わ」する。当技術分野
で周知のイ則鎖保獲基は々ｆましくはＳｅｒ　、　Ｔｙ
ｒ　。

Ａｒ、ｑおよびＨｉｓに、−また随意Ｔｒｐ　Ｖ（も、
コｆｌ　ｋ）　（１）アミノ酸を樹脂−にに形成さ」す
る鎖に結合さぜる前に加矢らＪする。この方法により、
完全に保護さＡまた中間ベプチビ枝］脂が（（１し）」
］る。

本発明における中間体は次式により表わすことができる
。

Ｘｌ−β−Ｄ−２ＮＡＬ−４（２−Ｄ−Ｔｒｐ（Ｘｌ）
−３ｅｒ（Ｘ３）−Ｒ５（Ｘ’　）−Ｒ６（Ｘ”）　　
Ｒ７−Ａｒ、ｑ（Ｘ”　）　−Ｐｒｏ　　Ｘ　にの式中
Ｘ１は当技術分！１１．でポリペプチドσ）段階的合成
に際し有用であることが知ら」１ている型のα−アミノ
基保護基であり、希望１−るーヱゾチト゛紹成において
Ｘが特定のアシル基である場合、こび）基は保護基と１
−で用いら」するでル、ろう。ｘｌに包含さＪするａ−
アミノ基保護基類にはり下゛のものが含−ま」する。（
１）アシルバ（ｊ保護基、たとえばホルミル基（Ｆｏｒ
）、トリフルオルアセチル基、フタリル基、Ｔ、）−ｌ
・ルエンスルポニル基（Ｔｏｓ）、ベンゾイル基（Ｂｚ
）、　ベンゼンスルホニル基、ｏ−ニトロフェニルスル
フェニル基（Ｎｐｓ）　、）　ＩＪ−ｙ−ルスルフェニ
ル基、０−二トロフエノキシアセチル基、アクリリル基
（Ａｃｒ）、クロルアセチル基、アセチル基（Ａｃ）お
よびγ−クロルブチリル基；（２）芳香族１／Ｌ／タン
型保Ｍ’１　基、たとえばベンジルオキシカルボニル基
（Ｚ）、ならびに置換ベンジルオキシカルボニル基、た
とえばｐ−クロルベンジルオキシカルボニル基、ｐ−二
トロベンジルオキシカルポニル基、ｐ　−ブロムベンジ
ルオキシノノルボニル基オよびｐ−メトキシベンジルオ
キシカルボニル基；（３）脂肪族ウレタン型保護基、た
とえばｔｅｒｌ、、−プチルオギシカルボニル基（ｔ３
ｏｃ）、ジイソプロピルメトキシカルポニル基、イソプ
ロピルオキシカルボニル基、エトキシカルボニル基およ
びアリルオキシカルボニル基；（４１シクロアルキルウ
レタン型保獲基、たとえば／クロペンチルオキシカルボ
ニル基、アダマンチルオキシカルボニル基およびシクロ
ヘキシルオギシカルホニル”Ｊ＋Ｋ　；　　（５１チオ
ウレタン型保両基、たとえばフェニルチオノノルボニル
基；　（６）アルギル型保脇基、たとえばアリル基（Ａ
、ｇｙ）、トリフェニルメチル（トリチル）基およびベ
ンジル基（Ｂｚｅ）　；（７１）リアルキルシラン型保
護）、（、たと女ばｊ・リッチルシラン。好ま（２い（
χ−アミノ基保設基ば、Ｘが水素原子でル、る場合はＳ
ＯＣである。

Ｘ２は水素原子、　またはインドール窒素σ）ための保
護基、たとえばホルミル基もｌ−＜はベンジル基である
。、しかし多くの合成に際し、Ｔｒｐを保護する必要は
ない。

Ｘ３は水素原子、゛またはＳｅｒα）アルコール性水酸
基のための保ｄφ基であり、アセチル基、ベンゾイル基
、テトラヒト ル基、トリチル基、ベンジル基および２，６−ジクロル
ベンジル基よりなる群がＩｌ：）選ばハる。ベンジル基
が好ましい。

χ４は水素原子、　またはＴｙｒのフェノール性水酸基
のための保護基であり、テトラ上１０ヒ０ラニル基、ｔ
ｅｒｌ；、−ブチル基、トリチル基、ベンジルノーよ、
咬ンジルオキシカルボニル基、／ｌ−ブロムベンジルオ
キシカルボニル基および２，６−ジクロルベンジル基よ
りなる群から選ば」］る。２，６〜ジクロルベンジル基
が好ましい。

Ｘ５はＡｒｑσ）窒素原子のための保護基であり、二１
・口Ｍ、Ｔｏｓ，ベンジルオキシカルボニル基、アダマ
ンチルオキシカルボニル基およびＢＯｃよりなる群から
選ば牙する。あるいはｘ５は水素原子で慶、つてもよい
。こ」１はアルギニンの側鎖窒素原子上に保護基がない
ことを意味する。ＴＯＳが好ましい。

Ｘ６はＧ＋．ｙ−０−ＣＯ２−［支持体樹脂’：ｌ　；
　　Ｏ−ＣＨ２−［支持体樹脂〕；　　Ｄ−ｋｅａＯ−
ＣＨ２−’　　［−支持体樹脂］　；　　Ｇｌｙ−ＮＨ
−［支持体樹脂］　；　　Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ−［支持体
樹脂〕；ならびにＯＨ、グリシンまたはＤ−Ａｅａのエ
ステル、アミド８およびヒドラジドりなる群から選ばね
、あるいはＰｒｏに直接に結合している。

Ｘ２〜χ５　グ）ためσ）ｌｌ！ｌｌ釦保ｉφ基を選ぶ
ため力規準は、保砕基が合成の各工程でαーアミノ基保
ｎφ基を除去するために選ば」する反応条件下で試柴に
対し安定でなければｔｃらないことである。保護基は結
合反応条件下で離ＩＩｓ’　Ｌ．ては７’：Ｃ　ｈず、
また保ｔφ基は希望するアミノ酸配列が完了し，た時点
で・くゾチト゛鎖ケ変什さぜない反応条件下−（除去で
きｌｃけＪｌばならない。

基Ｘ６がＣ］．ｙ−〇−ＣＨ２−し支持体樹脂〕、Ｄ−
ＡＡａ−Ｏ＝ＣＨ２−　［支持体樹脂〕またはＯ−ＣＨ
２−［支持体樹脂〕である場合、、＋：　リスチレン樹
脂系支持体の多数の宣能基σ月つのエステル部分が表わ
さＪｌている。基Ｘ６がＧ＋．ｙ−ＮＨ−　［支持体樹
脂〕−またはＤ−Ａｅａ−ＮＨ”　［支持体樹脂〕であ
る場合、アミド結合はＧＩＹまたはＤ−ＡｇａをＢＨＡ
樹脂またはＭＢＨＡ樹脂に結合させる。

Ｘがたとえばり，３・終式に含ま，ｈる場合、この最終
アミノ酸なはゾチピ鎖に結合さぜる前にこ，ｆ＋を加え
ることにより、こ」１をＤ−ＮＡＬのα−　アミノ基の
ためのＸ１保護基として用いることもできる。しかし、
反応は好ましくは樹脂」二〇）ベプチｌ−’を用いて（
仙釧基が保に１斜また状態でα−アミノ基を脱保ｔ１φ
（−たθ）も）、たとえば酢酸をジシクロへギシル力ル
ポンイミド（ＤＣＣ）、好まＬ　＜は無水酢酸と反応さ
せることにより、または通技術分野で既知σ）仙σ）適
切ｌｃ反応により行わハる。

完全に保柩さ」また投プチビを尚技術分野【おいて周知
のとおりアンモノリシスによりクロルメチル化樹脂系支
持体から離脱させて、完全に保獲さ→また中間体アミド
゛を得ることができる。投プチビ１１５　保護Ｊの除去
ならびにベンゾヒトゝリルアミン系樹脂からのペプチド
９の離脱は、０℃でフッ化水素酸（ＨＦ）を用いて行わ
れる。ＨＦで処理する前にアニソールを一３プチト゛に
添加することが好ましい。

真空下でＨＦ”を除去したのち、離脱（−かつ保Ｈφ基
を除去さ→またＲン°チト゛をエーテルで処理し、デカ
ントｌ−１希酢酸中に人ね、凍結乾燥′１″ることか好
都合である。

ズゾチドの精製はＣＭＧカラム上でイオン交換クロマト
グラフィー処理した力ち溶離系ルーブタノール：　　０
．ＩＮ酢酸（客量比１：１）を用（・てセファデックス
Ｇ−２５を充填したカラム上で分配クロマトクラフィー
処理するか、または当技術外！Ｉｌ−で既知の）ＩＰＬ
Ｃ？採用することにより行わｊする。

本発明のベプチ（パは発情前期σ用ニ１のほぼ止午匠投
与さ灼た場合、１００μｇ／体知に！す、下σ）水準で
叫１ラットの排卵をｆｕｌｌ、　＋　ｆ−、−４−るた
めに有効でル、る。排卵を長期的に抑制御−るためには
、約０１−約２５ｍ９／体重に！の範囲σ）投与水準を
採用する必留があろう。こ」９［）σ）拮抗薬ばＪ４１
山１１乳類に普通の基準で投与さＪまた場合も避始某と
（２て有効である。、こハ［）の化合物はテストステロ
ンσ）水準をか下させる（４イ１−的に活性な正常な雄
においては望ましく）７い結果である）θ）で、ＧｎＲ
Ｈ拮抗薬と共に代替珀ハチストステロンを投与１−るこ
とが妥当であろう。

こ」１Ｆ）の拮抗薬は、−上記の仙の目的で年少面版刺
激ホルモンおよび性ステロイド９の産生な調節するため
にも用いることができる。

実施例 前記の固相法により下記式の構造をもつ表１に示すペプ
チドを製造し、た。

Ａｃ−β−ＩＪ−２ＮＡＬ”Ｆ（２−Ｄ−’ｌ’ｒｐ−
３ｅｒ−’Ｌ’ｙｒ−Ｒ６−Ｌｅｕ−八ｒｇ−Ｐｒｏ−
Ｆ（、。

表１ ２Ｒ６Ｒ ０ １１Ｉ−Ｆ−Ｄ−Ｐｈｅ　　　　　　Ｄ−Ａｒｙ　　　
　　　　　　　　Ｃ１，ｙ−１’ＪＨ□２　　ｔｔ　　
４−１ｉ）（、−Ｄ−Ｐｈｅ　　ｕ３　／Ｉ−Ｃｅ−Ｄ
−Ｐｂｅ　Ｄ−Ａｒｑｔｔ／Ｉ　　　　　４−（Ｊ−Ｄ
−１−’ｈｅ　　　　　　　　　／／　　　　　　　　
　　ＮＨＣＨ２Ｃ）（３５ｌｌ　Ｎｏ２−Ｄ　ｐＨｅ　
　　　ｔｔ　　　　　　　ｕ６４−Ｆ３ｒ−Ｄ−Ｐｈｅ
　　／／　　　　／／７　４−Ｆ’−Ｄ−Ｐｈｅ　　　
　　／／Ｄ−Ａ６ａ　−ＮＩ（２団　　　　ｔ’　　　
　　　　　／／　　　　　Ｇ　１ｙ−ＯＣＨ３ＩＩ　　
　　　’／　　　　　　　／／　　　　’Ｇｌｙ−１批
相２−例として上記Ｎｏ、Ｉ　α）Ｒプチドヘー〜（［
Ａｃ−β−Ｄ−２ＮＡＬ’、　４−Ｆ−Ｄ−Ｐｂｅ２．
　Ｄ−Ｔｒｐ３゜Ｄ−Ａｒ　、！ＩＴ”　］−ＧｎＲＨ
と呼ぶ）の代表的な周４’ｌ：Ｉ合成Ｗつき以下に述べ
る。このペプチド９は下記の式令′もつ。

Ａｃ−β−Ｄ−２ＮＡＬ−４−Ｆ−Ｄ−Ｐ）＋ｅ−Ｄ−
Ｔｒｐ−３ｅｒ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ａｒｙ−Ｌｅｕ−Ａｒｑ
−Ｐｒｏ−Ｇ］、ｙ−ＮＨ２ＢＨＡ樹脂を使用し、Ｂｏ
ｃ保護さハたＣｒ１．ｙをＣＨ２Ｃｅ２中で：う倍過剰
の１３ｏｃ誘導体および活性化剤としてのＤｃＣヲ用い
て２時間にわたつ−Ｃに配位１脂に結合させた。グリシ
ン残基は１３８Ａ　４Ｍｌ脂にアミド結合により連結す
る。

各アミノ酸残基を結合させたり）ち、洗浄、保巡基の除
去および次ぎのアミノ酸残基の結合を下記の計画に従っ
て自ｊｉＬｔ化さ」また機器を用いて、約５ｇｖ）（ν
、１脂から出発して行った。

工程　　　試薬および操作　　　　　混合時（Ｈｉ′分
）ＩＣＨ２Ｃｅ２洗浄−８０ｍｇ（２回）　　　　　３
２　　メタノール（ＭｅＯ）１）洗浄−３０ｍ１（２回
）　　３３Ｃ■］２Ｃｅ２洗浄−８０ｍｇ（３回）　　
　　　３４　５０％ＴＦＡ　＋５％１，２−エタン力吋
−ル　　１０（ＣＨ２Ｃで２中）−７０ｍｇ（２回）５
ＣＨ２Ｃｅ２洗浄−８０ｍｇ（２回）　　　　　　３６
　１２５％ＴＥＡ（ＣＨ２Ｃ１２中）　　７０ｍｇ　　
　５（２回） ７　　　ＭｅＯＨ洗浄−４Ｑｍｅ（２回）　　　　　　
２８ＣＨ２Ｃｉ２洗浄−８０＃＋ｇ（３回）　　　　　
３！ｌ　　　ＤＭＦｉｆ、：ＭＣＨＧｅ　（イ１′ｈ１
々）保設さｊまたアミカ挾σ）溶解性に応じて）３０　
ｍｌ中のＢｏｃ−アミノ酸（１０ミリモ／ｌ／）　（１
回）　−ｈ　ＣＨ２Ｃ１２中のＤＣＣ（１０ミリモル）
　　　　　　　　　　　　　　　３０−３００１０　　
　ＭｅＯＨ洗浄−４０ｍｇ（２回）　　　　　　　３１
１　　１．２．５％ＴＥＡ　（ＣＨ２Ｃ１２中）７０ｍ
ｇ３（１回） １２　　　ＭｅＯＨ洗浄−３０ｍ１（２回）　　　　　
　　３１３ＣＨ２Ｃｅ２洗浄−８０ｍｌ　（２回）　　
　　　　３工程１３α）α）ちニンヒトゞリン試験のた
め一部を採取する。すなわち試験がマイナスα）」温合
Ｇ土次ぎのアミノ酸の結合のため工程１に戻る。試験が
プラスまたはわずかにプラスの場合は戻って］゛稈９〜
１３　を繰り返１−３、 一ヒ紀の言１画は、最初のアミノ酸が結合したのちに本
発明σ）投プチドの各アミノ酸を結合させるために用い
ろノする。Ｎ”）３０ｃ　　保護は合成全体を辿ｔ〜で
残りのアミノ酸そ、１１そＪｌに用いｌ：）ハる。

Ｎ“Ｂｏｃ−β−Ｄ−２ＮＡＬは当技術分野で既知の方
法、たとえば米国特許第４．２３　＝１５７１月明細：
１４：　（１シ）８０年１１月１８日発行）［詳述さＪ
また方法により製造さ」する。Ａｒｑｏ）イ則鎖はＴｏ
ｓで゛仙！獲さｉする。０ＢｚｅはＳｅｒの水酸基０）
ための（ｆｉｌｌ　６Ｕ保獲基と（−７て）＋４いＩ”
＋　ｆ′ｌ、２．６−シクロルインジル基はＴｙｒの水
酸基１ｌ１７）ための佃１錯保護基としで用い「）れる
。Ｔｒｐはイ呆静さ」１ｒｃい状態の土まである。Ｎ“
Ｂ□ｃ−β−Ｄ−２ＮＡＬは最終アミノ酸として導入さ
」する。１３ｏｃ　−Ａｒ、７（’ｌ’ｏｓ　）および
Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｒｐ　（ＣＨ２Ｇｌｌｚ中における溶解
性が低い）はＤＭＦ　：　ＣＨ２Ｃｅ２　　混合物を用
いて結合させる。

Ｎ−末端のα−アミン基の保護基を除去したσ）ち、ジ
クロルメタン中の大過剰の無水酢酸を用いてアセチル化
２行った。樹脂からの−？ブチ１、゛の前照１：ｔ、；
　、１：び細いの完全な脱保巡は、ＨＦを用いて０００
できわめて速やかに起こった。ＨＦ処理σ）前にスキャ
ベンジャ−としてアニソールを添加した。

真空下でＨＦを除去したのち、残査を５０％酢酸で抽出
し７、洗液を凍結乾燥１−で粗製ペプチド粉末を７１）
だ。

次いで・投プチドσ）精製はＣＭＣ」二でσ−）イオン
交換クロマトクラフィー（ワットマンＣＭ３２５（１１
５０メｊ’　／　−＃　／水中〕０１１５〜０．３Ｍ　
−ＮＨ４０Ａｃσ）勾配を用（・て）により、次いで溶
離系７Ｌ−ブタノール：ｏ、＋Ｎ　酢酸（容量比＋　：
　１）Ｖ用（・るゲラ−濾過カラム中での分配クロマト
グラフィーにより行った。

ペプチド゛は薄層クロマトグラフィーおよび数和ｊの溶
剤系を用いて、また逆相高圧液体クロマトグラフィーお
よびリン酸トリエチルアンモニウム水溶液士アセトニト
リルを月１いて均一であると判定された３、？ｉＪら、
ｉまた精製ペプチドα）アミノ醒分析は予定さＪまた構
造式のものと一致ｌ１、鎖中σ）各アミンｔ゛１・夕に
関り、て実り４的に整数ｆ的＾・示１−でいた。旋光１
印は光電旋光ｒｉ’ｌに、１：す〔α〕“１″；＝−２
４）０＋１　（（−’−Ｉ＋５０％酢酸）とｆｉｌｌ定
さ」また。

ベプチｉパをインビトロお、Ｌびインビボで検定した。

インビｉ・ロル（験は検定前・Ｉ　Ｅ１間培イ１すまた
解離ｌ〜たラット下垂体細胞を用いて行わＪまた３、ペ
プチドの投与に応じて生じたＬＨの水準なラッｌ−ＬＨ
に特異的１．Ｃラジオイムノアッセイによりイψ定（、
た。

対Ｊｌ弁）細胞工メ’ｊｆ１皿には３ナノモル濃１υの
０１］ＲＨ（１）みな入」１、被験培養皿には３ナノモ
ル濃１すα）ＧｎＲｎと−Ｊ（にＪＪ？、在の標準的４
４’、Ｊ−７１，鈷（比較用）１−なわら［Ａｃ−デヒ
ｌ−’ｏＰｒｏ　　、ｚｌ−Ｆ−Ｄ−Ｐｂｅ”、Ｄ−Ｔ
ｒｐ　　’　　］−ＧｎＲＨまたばＯ１四〜１０ナノモ
ル濃度の被験−安プチ！パを入」また。ＧｎＲＨのみで
処］す］シた試ネ・１において分泌さ、＃またＬＨσ）
＃を、投プチトゞ十ＧｎＲＨで゛処理した試料πより分
泌さｊまたも力と比ｉ１ｊ：ｒ　１．−　ｆこ。

３ナノモル濃度のＧｎＲＨにより放出さノまたＬＨσ１
　’）ｉｉを被験ペプチド゛が減少させる効力を、現在
の化“″増面はゾチト゛（ハ）場合と比較した。結果は
３〜５（！１１の用ｈ１の各ペプチド゛を用いて統言−
１的プログラムＢＩＯＰＲＯＧ（Ｄ、ロソピバードトＩ
ＩＣＨＤによる）によりｉｔ　１−′）さＪｌ、現在σ
）標準品に対する効力として表わさ、＋］だ。標準的ペ
プチドは通常 ０１　〔］占抗薬〕 １１：ＧｎｌＥ（Ｈ〕 σ）比率以下でＧｎＲＨにより放出さＪまたＬＨｏ’）
５０％を遮断する１、 十記投ゾチト゛は部ラットにおいて排υ１ｊを阻止１−
る効力を判定するためにも用いらり、る。こり）試験に
おいてはそ」１そ牙］体重２２５〜２５０ｇグ）一定匹
数（１−なわち６匹）０）成熟したｌ１ｌｆｈスズラ−
クートゝ−レイラットにトウモロコシ油中のＲズチト９
１０Ｂ９を発情Ａｒ１期０）日のほぼ叶午に注射した。

発情前期は発情（排卵）前の午後である。別飼１の顛５
ラットグループを対照として用い、こり、には投ブチ１
、゛を投与１＝なかった。対照ラット雌はそねぞＪ１発
情ＪＯ＋に排卵Ｌ７、処理したラット［ついてはいず」
１も刊卵しｆ、ｃかった。従ってこのペプチド゛はきわ
めて低い投与量で＋ｌｔｉ；ラットの排卵を四重するの
に著しく有効であると考身り、ｔｉる。このベプチ１゛
は約１１０１ｔ力投４Ｍｌで総体的に有効でル）ると考
λ「）」２る１、よりかい投与ｈｔで、ｉ口側試験を行
った。

結味を後記の表１１に示す。

残りの−Ｓブチｌ−″’Ｎｏ、２−７も同様に（−で合
成さＪｌ、精製さ牙また。アミノ酩：分析σ）終了後、
異ｒｃる溶剤系を用いるＨＰＬＣにより純ｊ貧を確認ｌ
−だ。回イー１２な様式のインビトロ試ｈ・；・により
、そ」１そＪｌのペプチドが表にｙｒり−４−、Ｌつな
現在の標準的」−Ｉ抗薬ｆ対比した効力をもつことが示
さＪまた。インビボ試ｊ、険はわ１々σ）投与量で行わ
１＋た。そ」１らσ）結果を表１１　Ｋ示す。

表１１ ペプチド９　　インビトロ　　　　　　インビボ５０／
８ ２゜５　　　　０／Ｉ　０ １０／８ ０．５　　　　２／ＩＩ ３’、　　　　　　０．５６　　　　　　０．５　　　
　２／１０・１　　　　　０詔８　　　　　　１０　　
　　　０／８５（１／７ ２．５　　　　０／１０ １　　　　　０／４ ０゜５　　　　６．／６ ０゜５　　　　７／ｌ　Ｏ ８、Ｉ　　　　　　０５ ０．５ ９　　　　　　　　　　　　　　Ｉ　　　　　０７０゜
５ ＊　［Ａｃ−ｄｅｈｙｄｒｏ　ｐｒｏ　、４−Ｆ−Ｄ−
Ｐｂｅ　、Ｄ−Ｔｒｐ”６］−ＧｎＲＨに対比したもの 示さＪまたペプチドはすべて、大部分がインビトロでは
現在の標準品よりもわずかに効力が低いが、ある妥半な
誤用でＧｎＢＨ誘発性ＬＨ分泌を遮断−１″るσ）ＶＣ
著しく有効である。（７かしこね「）のペプチドはイン
ビボではよりいっそう効力が高い。

これし）のベプチ白ますべてきわめて低い捗り相で雌咄
乳類σ）Ｊｕｌ卵を阻止するのに有効であると孝女られ
、若干のものはこハまでに知ら１＋ており試験さ」］た
いかなるＧｎＲＨ拮抗架α）少なくとも２倍σ）効力を
もつと考えらＪする。

本発明のペプチド９はしばしば薬剤学的に受容できる無
′ｆ！ｆ件塩、たとえば酸イ・ｊ　７Ｉｎ　地α）形で
、またはたとえば亜鉛、バリウム、カルシウム、マグネ
シウム、アルミニウムなどとの金属錯体（こ、ｈらは不
発り１の目的のための伺加Ａ　）−Ｊえら」Ｌる）Ｖ′
）形で、またはこｊｌら両省を組合わせた形で投与さ旧
る。こり）ｆｊｌｌの酸伺加」島の具体例はＪ：１ｌｉ
ｉ酸塩、臭化水素酸塩、値、酸塩、リン酸塩、硝酸塩、
シュウ酸ｊ島、フマルＭｔ、、クルコン酸塩、タンニン
酸４　、マレイン酸塩、酢耐°塩、クエン酸塩、安息香
酸塩、コハク酸」スペアルギン１月番、パモゴート（ｐ
ａｍｏａｔｅ）、リンゴ′酸ｊ、ｉＰ、アスコルビン酸
塩、酒石酸塩などである。イＪ効成分を偵１コ剤の形で
投与したい場合、錠剤は薬剤学的に受容できる希釈剤を
含有していてもよく、こＪｌには結合剤たとえばトラガ
カント、コーンスターチもしくはゼラチン；崩壊剤たと
えばアルギン酸；および７１１沢剤たとえばステアリン
酸マグネシウムノｔ’ｓ含ま」ｌる。液状でσ）投与ケ
望む場合、薬剤学的に受容できる希釈剤σ）一部として
１１味剤および／または力香剤を使用してもよく、等張
角塩液、リン酸緩衝首い、Ｃどｆ入１＋て静脈内投与す
ることもできる。

薬剤組成物は通常はべ゛プチドを、常用さ、ｌする薬剤
学的に受容できるキャリヤーと共に含有するであろう。

通常目投与（ｆ；は静脈内税Ｊう才る場合受容者θ）体
重１　ｋｙ当たり投ブチド約１〜約１００μｇであろ５
゜経「１投与ｈ：はこ」１よりも高いであろう。全体と
じてこねらのペプチドによる被験者の処置は通常は他σ
）ＧｎＲＨ拮抗薬を用いる臨床処置と同じ方法で行われ
る。

こねらの破プチドは吐乳類に静脈内、皮下、筋肉内、経
［１、鼻腔内または膣内に投与されて受胎を抑制および
／−または１ｌＡ１節１．、また早発春期り）処置”の
ためにまたは放射線４〕：ｒ法もｌ、　＜は化学療法σ
）期間中に牛夕（１１腺θ）活′、ｉＲＩ＋σ）町逆的
抑９工１１を求めるために使用することができる３、有
効に１は投与形態および処置さ」する吐乳類力個々の１
中に応じて変わるであろう。代表的ｔＣ投与形態の一例
はペプチドを含有１″る牛埋的食塩液であり、こび）溶
液は約旧〜２．５ｍｇ／体重ｋｙの範囲（／’）投与損
となるように投与さＡする。投ブチドσ）経口投与は固
体状でも液体状でも行うことができる。

本発明をそ（１）好まし７い形態について記述ｌ〜だが
、当業者に明「）かと思わ」する変更および修正は特Ｍ
’１晶求の範囲に示さ牙また本発明の１ｌｉｊ’ｌ囲を
逸脱することなく行いうると解すべきである。たとえば
、本発明の−ごプチビＶこおいてペプチドゝの有効性を
有意に損わないことが知らｈでいる他の置換を採用する
ことができる。たとえばＲ１０に関して示さねた残基Ｉ
７）代わりに］１ｙ−ＯＣＨ３，Ｇｌｙ−ＯＣＨ２Ｃ；
Ｒ３゜Ｑ］、ｙ−Ｎ）ＩＮＨ２または５ａｒ−ＮＨ２（
Ｓａｒ　＝サルコシン）を用いることがで゛と、こハら
はそＪｌらの同等％と考えら」するｄ 喝許出願人　　ザ・ザルク・インステチュート・フォー
・バイオロジカル・スタディーズ （外４名）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）　　次式 ％式％ ］ （式中Ｘは水素原仔、または７個以下０）炭素原子をも
   ツアシル基であり、Ｒ２はＧ、ｅ　−Ｄ−Ｐｈｅ、　　
   Ｆ　−ｐ−ＰＩ＋ａ、１４０　Ｑ　−Ｄ　−Ｐ　ｈ　ｅ
   　、　’　　Ｇ　１２　　Ｄ　　Ｐ　ｈ　ｅまたはＢｒ
   −Ｄ−Ｐｈｅ　；　Ｒ５はＴｙｒまたは２−　Ｃｇ　−
   Ｐｈｅ　；　Ｒ６は４−ＮＨ２−Ｄ−Ｐ　ｈ　ｅまたは
   Ｄ−八ｒｑ；Ｒ７はＬｅｕまたはＮ”Ｍｅ　−Ｌｅｕ　
   ；そしてＲ３゜はＧ１．ｙ−ＮＨ２、ＮＨＣＨ２ＣＨ３
   またはＤ−Ａｌａ　−Ｎ　Ｈ２である）ノ投プチドまた
   はそれらの無毒性塩。 （２）Ｒ２が４−　Ｇ、ｌ　−Ｄ　−Ｐｈｅまたは１ｌ
   −Ｆ−Ｄ−Ｐｈｅでル）る、特許請求のｆｌｌｉＪ、間
   第１項記載び）はプチト゛０（３）Ｒ７がＬｅｕである
   、特許請求の範囲第２項記載の４ブチド。 （４）　Ｒ６がＤ−４ｒ、ｑである、特Ｒ’１．ｉＷ４
   求の瞳４囲第３項記載の投ブチド３、 （５）Ｒ５がＴｙｒでル）る、特バフ１梢求の範囲第１
   １項記１１ｆｋのペプチド。 （６）　ＸがＡ（・である、％ｓ’ｌ請求σ）ホｈ囲第
   ５項記載θ）−２プチド。 （７１Ｘ　ｌｒ″−Ａｃｒでル）る、牛１許粕求０）範
   囲第５　”Ｊ’ｌ　記載σ）ペプチド。 （８１ＸがＡｃであり、Ｒ４がＤ−Ａｒｙである、特π
   １−諸求の範囲第１項記載の破ゾチド。 （９）　Ｒ２が４−Ｃｅ−Ｄ−Ｐｈｅである、特許請求
   の範囲第８項記載のきプチビ。 （１０）Ｒ２が４−Ｆ−Ｄ−Ｐｈｅである、傷許請求０
   ）６Ｊｐ囲卯２８項記載σ）ペプチド。 （印　有効成分として治効皐のも許請求の範囲第１項記
   載の被プチト゛を土量の薬剤学的に受容できる希釈剤と
   共に含む、生殖腺刺激ホルモン分泌Ｍ４節のための薬剤
   組成物１．