JPS5948095A - ヘルペス抗原の調製方法 - Google Patents
ヘルペス抗原の調製方法Info
- Publication number
- JPS5948095A JPS5948095A JP58137894A JP13789483A JPS5948095A JP S5948095 A JPS5948095 A JP S5948095A JP 58137894 A JP58137894 A JP 58137894A JP 13789483 A JP13789483 A JP 13789483A JP S5948095 A JPS5948095 A JP S5948095A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- preparation
- dna
- fragment
- section
- vector
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/16011—Herpesviridae
- C12N2710/16611—Simplexvirus, e.g. human herpesvirus 1, 2
- C12N2710/16622—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Virology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、ヘルはスウイルスよりの抗原性蛋白質のため
の遺伝フードを有する組換えデオキシリボ核酸（ＤＮＡ
） ｓその組換えＤＮＡを含有し且つこの抗原性抗蛋白
質を産生ずる細胞、ならびにその組換えＤＮＡまたはこ
の細胞のこの抗原性蛋白質の調製のための使用およびこ
の蛋白質の調製方法、そしてこの抗原性蛋白質の使用忙
関する。
の遺伝フードを有する組換えデオキシリボ核酸（ＤＮＡ
） ｓその組換えＤＮＡを含有し且つこの抗原性抗蛋白
質を産生ずる細胞、ならびにその組換えＤＮＡまたはこ
の細胞のこの抗原性蛋白質の調製のための使用およびこ
の蛋白質の調製方法、そしてこの抗原性蛋白質の使用忙
関する。
ヘルはスウィルスに対する抗体の産生に働くおよび治療
のだめの接種剤を調製するために甚だ興味深いものであ
る。
のだめの接種剤を調製するために甚だ興味深いものであ
る。
最近の数年間における研究からは、ある特定の種類の癌
がヘルはスウィルス（ＨＶ）Ｋ：より惹起され得ること
が推察される。従って１例えば１ｉヘルにス・シンプレ
ックスウィルス（Ｈ８Ｖ−１）または■型（Ｉ（ＳＶ−
２）に対抗する接種剤（ワクチン）には、このものはあ
り得べき癌性形角転換を排除するために絶対にＨＦ！
Ｖ −ＤＮＡを含まず、あるいはウィルスＤＮＡは不活
性化さｉｌねば々らぬという要求が牒せられている。
がヘルはスウィルス（ＨＶ）Ｋ：より惹起され得ること
が推察される。従って１例えば１ｉヘルにス・シンプレ
ックスウィルス（Ｈ８Ｖ−１）または■型（Ｉ（ＳＶ−
２）に対抗する接種剤（ワクチン）には、このものはあ
り得べき癌性形角転換を排除するために絶対にＨＦ！
Ｖ −ＤＮＡを含まず、あるいはウィルスＤＮＡは不活
性化さｉｌねば々らぬという要求が牒せられている。
この要求条件にかなう接綽剤の通常法妊よる調製は、手
間のかがる精製操作により達成さｉＩζ る。
間のかがる精製操作により達成さｉＩζ る。
ＨＲＶの抗原性成分として、ウィルスの被膜に統合され
そしてその遺伝子の位置が配列決定され得た数種類の蛋
白質（被膜蛋白質）が記述されてきた。
そしてその遺伝子の位置が配列決定され得た数種類の蛋
白質（被膜蛋白質）が記述されてきた。
ここにおいて、ヘルにスウイルスの核酸を含有しないヘ
ルにス抗原の調製およびヘルにスウイルスに起因する疾
患に対抗する接種剤の調製という課題が存続した。
ルにス抗原の調製およびヘルにスウイルスに起因する疾
患に対抗する接種剤の調製という課題が存続した。
その課題は今やヘルはス・シンプレックスウィルスから
ケ゛ツムの切片が単離され、微生物に移入され、そこで
複製され且つ発現されることによシ解決された、下記に
糖蛋白質をコードする遺伝子切片のクローニングが記述
される。他のすでに記述された被膜蛋白質ｇＡ、 ｇＢ
、 ｇＤ およびｇＷならびにその他のウィルス蛋白質
についても類似の操作方法が実施可能である。
ケ゛ツムの切片が単離され、微生物に移入され、そこで
複製され且つ発現されることによシ解決された、下記に
糖蛋白質をコードする遺伝子切片のクローニングが記述
される。他のすでに記述された被膜蛋白質ｇＡ、 ｇＢ
、 ｇＤ およびｇＷならびにその他のウィルス蛋白質
についても類似の操作方法が実施可能である。
欧州特許出願第０．０１３，８２８号において、Ｂ型肝
炎ウィルスの抗原的特性を有するポリペプチドの調製方
法が記述され、そこにおいてはウィルスの抗原性決定因
子をコードするウイノ１スＤＮＡからのＤＮＡ配列部分
が、いわゆる「クローニングベヒクル」あるいり［ベク
ター−］Ｋ結合され、この絹換え１）ＮＡが宿主細胞に
導入さノ１、それにより宿主細胞はＢ型肝炎ウィルスの
抗１県性を有するポリペプチドを産生する。
炎ウィルスの抗原的特性を有するポリペプチドの調製方
法が記述され、そこにおいてはウィルスの抗原性決定因
子をコードするウイノ１スＤＮＡからのＤＮＡ配列部分
が、いわゆる「クローニングベヒクル」あるいり［ベク
ター−］Ｋ結合され、この絹換え１）ＮＡが宿主細胞に
導入さノ１、それにより宿主細胞はＢ型肝炎ウィルスの
抗１県性を有するポリペプチドを産生する。
下記には課題の解決に適する操作方法が記ｉホされる。
この方法の改変法もまた、例えｉｌ １＋１１．のばフ
タ−／宿主の組合わせのように、本発明の目的のために
使用可能である８ 実施例 １、 ウィルス特異的核酸のｒｐｙ、 ｔｒ＋１．１
ｎｓｖ株の選定 高い値の投与用による感染は、多くのウイノトス糸にお
いて欠陥のあるウィツトスゲツムの形成に導く。従って
そのよう表アーティファクト（人工産物）を避けるため
にクロー−一−ングツノ１たウィルス株を用い、それを
宿主細胞例えばば口細胞に低い増殖数（細胞１個当り０
．１プラ一ク形成単位）に接種した。本発明者らは）Ｉ
ＳＶ−１ウイルスのＦ株を用いた。他の株（例えば００
８株またはマツキンタイア株）を用いる操作も同様に実
施してよいであろう。
タ−／宿主の組合わせのように、本発明の目的のために
使用可能である８ 実施例 １、 ウィルス特異的核酸のｒｐｙ、 ｔｒ＋１．１
ｎｓｖ株の選定 高い値の投与用による感染は、多くのウイノトス糸にお
いて欠陥のあるウィツトスゲツムの形成に導く。従って
そのよう表アーティファクト（人工産物）を避けるため
にクロー−一−ングツノ１たウィルス株を用い、それを
宿主細胞例えばば口細胞に低い増殖数（細胞１個当り０
．１プラ一ク形成単位）に接種した。本発明者らは）Ｉ
ＳＶ−１ウイルスのＦ株を用いた。他の株（例えば００
８株またはマツキンタイア株）を用いる操作も同様に実
施してよいであろう。
１．２ Ｈ８ＶのＤＮＡの単離
ウィルス精製の際に生ずるロスを避けるためにウィルス
は細胞溶解物から面接に取得された。
は細胞溶解物から面接に取得された。
このために、沈降密度が著しく異方る細胞ＤＮＡのウィ
ルスＤＮＡよυの充分な分離を可能にする高分離能の密
度勾配（ＫＴ 、Ｎａ工）中における遠心法が用いられ
た。インターカレートする色素例えば臭化エチジウムの
添加は、分離結果の直接的視認およびウィルスＤＮＡの
取得を可能ならしめた［ ＷａｌｂｒｏｍｅｒおよびＳ
ｃｈｅｇｇａｔ両氏ｒＶｉ ｒｏ１ｏｇｙＪ第７４巻第
２５６〜２５８頁（１９７６年）］。
ルスＤＮＡよυの充分な分離を可能にする高分離能の密
度勾配（ＫＴ 、Ｎａ工）中における遠心法が用いられ
た。インターカレートする色素例えば臭化エチジウムの
添加は、分離結果の直接的視認およびウィルスＤＮＡの
取得を可能ならしめた［ ＷａｌｂｒｏｍｅｒおよびＳ
ｃｈｅｇｇａｔ両氏ｒＶｉ ｒｏ１ｏｇｙＪ第７４巻第
２５６〜２５８頁（１９７６年）］。
２、 ウィルス被膜の抗原性蛋白質をコードするゲノム
切片の単離 ＨｓｖｌのＤＮＡは制限エンドヌクレアーゼを用いて加
水分解され、そしてＤＮＡのフラグメントはアガロース
ゲル中において電気泳動的に分離された。これにはＨ１
ｎｄｌｌｌヌクレアーゼが適当であシ、それはこの酵素
を用いるＤＮＡ ’；’ｒ Ｍｏ後で、ｇＣに関する完
全な情報が１個の特異的なフラグメント（ＴＨｎｄ’１
ｌｌ−Ｌフラグメント）に局在化されるからである。Ｈ
ｊｎｄ ｍ−Ｌフラグメント（ＤＮＡ切片：０．５９２
〜０．６４７、約ａ２００塩基対、第１図をも参照）は
アガロースゲルから抽出された〔Ｊ、 Ｌａｎｇｒｊｄ
ｇｅ氏その他ｒＡｎｐｌｙｔ 、 Ｂｌｏｃｈｅｍ Ｊ
第１０３巻第２６４〜２７１頁（１９Ｂ ［］４Ｆ ）
〕、 ■）ｒａハはまたＨ、Ｏ，日ｒｌｔｈｆ＋：の
方汐−（ｒ＋ｑｑ↑、ｈ、 Ｆ：ｎｚｙｍｅｌ、ｌ第６
５巻第３７１〜３８０負（１９８ｒｌイ「）Ｊによって
も単離される、 ３、 Ｈ８Ｖ−ＤＮＡのＨｌｎｄ ｌ１ｌ−Ｔ、−切
片を有するプラスミドの調製およびこの組換えプラスミ
ドによる細菌の形質転換 Ｈｌｎｄｌ［Ｉ−Ｌフラグメントは％ ｐＢＲ３２２シ
ラスミド［ｒＧｅｎｅｊ第２巻第９５頁（１９７７年）
〕のヲトラサイクリン（Ｔｅｔ）遺伝子領域に接着され
［ｊＭｅｔｈ、 Ｅｎｚｙｍｏｌ、Ｊ第６５巻第２４５
Ｍ（１９８０年）％第１図〕、モして大腸菌ＨＢ１０１
株中における形貴転換に利用された。
切片の単離 ＨｓｖｌのＤＮＡは制限エンドヌクレアーゼを用いて加
水分解され、そしてＤＮＡのフラグメントはアガロース
ゲル中において電気泳動的に分離された。これにはＨ１
ｎｄｌｌｌヌクレアーゼが適当であシ、それはこの酵素
を用いるＤＮＡ ’；’ｒ Ｍｏ後で、ｇＣに関する完
全な情報が１個の特異的なフラグメント（ＴＨｎｄ’１
ｌｌ−Ｌフラグメント）に局在化されるからである。Ｈ
ｊｎｄ ｍ−Ｌフラグメント（ＤＮＡ切片：０．５９２
〜０．６４７、約ａ２００塩基対、第１図をも参照）は
アガロースゲルから抽出された〔Ｊ、 Ｌａｎｇｒｊｄ
ｇｅ氏その他ｒＡｎｐｌｙｔ 、 Ｂｌｏｃｈｅｍ Ｊ
第１０３巻第２６４〜２７１頁（１９Ｂ ［］４Ｆ ）
〕、 ■）ｒａハはまたＨ、Ｏ，日ｒｌｔｈｆ＋：の
方汐−（ｒ＋ｑｑ↑、ｈ、 Ｆ：ｎｚｙｍｅｌ、ｌ第６
５巻第３７１〜３８０負（１９８ｒｌイ「）Ｊによって
も単離される、 ３、 Ｈ８Ｖ−ＤＮＡのＨｌｎｄ ｌ１ｌ−Ｔ、−切
片を有するプラスミドの調製およびこの組換えプラスミ
ドによる細菌の形質転換 Ｈｌｎｄｌ［Ｉ−Ｌフラグメントは％ ｐＢＲ３２２シ
ラスミド［ｒＧｅｎｅｊ第２巻第９５頁（１９７７年）
〕のヲトラサイクリン（Ｔｅｔ）遺伝子領域に接着され
［ｊＭｅｔｈ、 Ｅｎｚｙｍｏｌ、Ｊ第６５巻第２４５
Ｍ（１９８０年）％第１図〕、モして大腸菌ＨＢ１０１
株中における形貴転換に利用された。
Ｔ）ＢＲ３２２プラスミドの他に、他の適当なベクター
例えばｐＢＲ５２７，ｐＢＲ３２８またはｐＢＲ３２９
［ｒＧｅｎｅＪ第１７巻第７９〜８９頁（１９８２年）
〕あるいはｐＵＣ７、ｐＵＣ８またはｐＵｃ９［（Ａ、
Ｇ、 ’Ｗａｌｔｏｎ氏編ｒＲｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ
ＤＮＡＪ第１４３〜１５３頁（１９８１年）〕あるい
はプラスミドｐＵＲ２２２［ｒＮｕｃｌ、Ａｃ１ｄｓＲ
ｅｓ 、 Ｊ第９巻第４０８７〜９８頁（１９８１年）
〕が用いられ得る、 ＨＢ１０１株の他に、大腸菌の他の株ｃ６ｏ。
例えばｐＢＲ５２７，ｐＢＲ３２８またはｐＢＲ３２９
［ｒＧｅｎｅＪ第１７巻第７９〜８９頁（１９８２年）
〕あるいはｐＵＣ７、ｐＵＣ８またはｐＵｃ９［（Ａ、
Ｇ、 ’Ｗａｌｔｏｎ氏編ｒＲｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ
ＤＮＡＪ第１４３〜１５３頁（１９８１年）〕あるい
はプラスミドｐＵＲ２２２［ｒＮｕｃｌ、Ａｃ１ｄｓＲ
ｅｓ 、 Ｊ第９巻第４０８７〜９８頁（１９８１年）
〕が用いられ得る、 ＨＢ１０１株の他に、大腸菌の他の株ｃ６ｏ。
［［Ｂａｃｔ、ｅｒｌｏｌ、 Ｆｔθｖ、ｌ第３６巻第
５２５〜５５７負（１９７２年）〕、ＲＲＩ、ＥＩＦＢ
また１ｌｉｌＦＩＫ１５９２が木発明者らが用いたと近
似の方法により７Ｆ’／ ’ｔ’１転換可能である［ｒ
Ｂｊｏｃｈｔｍ、 Ｂ１０ｐｈｙｐ、 Ａｃｔ、ａＪ
ｐ６６５巻第２４５〜２５０頁（１９８１年）およびｒ
Ｆｐ；ＭｑＭｊＣｒＯｂｌＯ］、、 Ｔ、＋ｅｔ↑、」
第５巻第２１９〜２２２ＰＬ（１９７９牟）〕。
５２５〜５５７負（１９７２年）〕、ＲＲＩ、ＥＩＦＢ
また１ｌｉｌＦＩＫ１５９２が木発明者らが用いたと近
似の方法により７Ｆ’／ ’ｔ’１転換可能である［ｒ
Ｂｊｏｃｈｔｍ、 Ｂ１０ｐｈｙｐ、 Ａｃｔ、ａＪ
ｐ６６５巻第２４５〜２５０頁（１９８１年）およびｒ
Ｆｐ；ＭｑＭｊＣｒＯｂｌＯ］、、 Ｔ、＋ｅｔ↑、」
第５巻第２１９〜２２２ＰＬ（１９７９牟）〕。
真核生物細胞の形η転換に際してＵ２、例え１牛の乳頭
腫ウィルスＤＮＡ ［ＴＭｏｌ、 ｃｅｌｌ、 ＢＪｏ
］、、Ｊ第１巻第４８６〜４９６頁（１９８１年）〕、
ｑｖ４０ｒＡｎｎ、 Ｒｅｖ、 Ｇｏｎｅｔ、１ｃｓＪ
第１５巻第２９５〜３４０頁（１９８１年）〕またはキ
メラ状ヅラスミドであるｐＳＧ （ｒ−Ｍｏ１．ｃｅｌ
ｌＢｉＯｌ、」ＩＢ １巻第７４３〜７５２頁（、１９
８１年）〕等のベクターを用い得る。
腫ウィルスＤＮＡ ［ＴＭｏｌ、 ｃｅｌｌ、 ＢＪｏ
］、、Ｊ第１巻第４８６〜４９６頁（１９８１年）〕、
ｑｖ４０ｒＡｎｎ、 Ｒｅｖ、 Ｇｏｎｅｔ、１ｃｓＪ
第１５巻第２９５〜３４０頁（１９８１年）〕またはキ
メラ状ヅラスミドであるｐＳＧ （ｒ−Ｍｏ１．ｃｅｌ
ｌＢｉＯｌ、」ＩＢ １巻第７４３〜７５２頁（、１９
８１年）〕等のベクターを用い得る。
４、適当なりローンの選出
組換えプラスミドにより形Ｊｊ転換されｆｒ、細１ｆ；
−１はＲトリ皿上においてアンピシリンナトリウム（ｓ
ｏｍｙ／ｚ）を添加した栄養源り一肉汁のはトリ皿培地
上に塗布され、そして１日間６７℃に保温（インキュベ
ート）された。アンピシリン耐性でデトラザイクリン感
受性であることが糺明されｆｃ りＯ−ンは、放射性の
Ｈ８Ｖ−Ｈｌｎｄ ｌ１ｌ−Ｌフラグメントとの間で交
雑された［ ｒＭｅｔｈ 、 Ｋｎｚｙｍｏｌ、Ｊ第６
５巻第１５冫〜１７６頁（１９８０年）〕。
−１はＲトリ皿上においてアンピシリンナトリウム（ｓ
ｏｍｙ／ｚ）を添加した栄養源り一肉汁のはトリ皿培地
上に塗布され、そして１日間６７℃に保温（インキュベ
ート）された。アンピシリン耐性でデトラザイクリン感
受性であることが糺明されｆｃ りＯ−ンは、放射性の
Ｈ８Ｖ−Ｈｌｎｄ ｌ１ｌ−Ｌフラグメントとの間で交
雑された［ ｒＭｅｔｈ 、 Ｋｎｚｙｍｏｌ、Ｊ第６
５巻第１５冫〜１７６頁（１９８０年）〕。
陽性のクローンは５ ｍｅフつの液体培養で育成されそ
してＤＮＡが単離された［ｒＭｅｔｈ、 ＢｎｚｙＴｒ
ＩｏＬＪ第６５巻第７５〜９０頁（１９８０年）および
ｒＡｎａｌ。
してＤＮＡが単離された［ｒＭｅｔｈ、 ＢｎｚｙＴｒ
ＩｏＬＪ第６５巻第７５〜９０頁（１９８０年）および
ｒＡｎａｌ。
Ｂｉｏｃｈｅｒｎ、 Ｊ第１１４巻第１９３〜１９７頁
（１９８１年）〕。
（１９８１年）〕。
エンドヌクレアーセＨａｎｄ ｍ 、 ＢａｍＨＩ 、
Ｓａｌ Ｉ、Ｐｖｕ ＩｆおよびＭｓｔＩＩを用いる
絹換えヅラスミドの分解ならびに）（ＳＶ−１の００８
株の制限酵素切断位置図との対比により、 Ｈｌｎｄ
ＩＴＩ−ＬフラグメントがｐＢＲ３２２のＨｌｎｄ Ｉ
１１位置に統合されたクローンが明白に同定された。
ｐＭＢ ＦＩＢＶ９中における■ヨーフラグメントおよ
びｇＣ−ｍＲＮＡの配列方向づけは第１図に示される、 ５、 Ｈｌｎｄ ＩＩＩ−Ｌフラグメントの短縮およ
びフラグメントの逆クローニング ｇｃは後期の（ｒ） ｓｆＥ白ａであり、そのｒｎＦｔ
ＮＡはＨｌｎｄｌｌｌ−Ｌフラグメントの右側部分十に
局在する〔［Ｊ。
Ｓａｌ Ｉ、Ｐｖｕ ＩｆおよびＭｓｔＩＩを用いる
絹換えヅラスミドの分解ならびに）（ＳＶ−１の００８
株の制限酵素切断位置図との対比により、 Ｈｌｎｄ
ＩＴＩ−ＬフラグメントがｐＢＲ３２２のＨｌｎｄ Ｉ
１１位置に統合されたクローンが明白に同定された。
ｐＭＢ ＦＩＢＶ９中における■ヨーフラグメントおよ
びｇＣ−ｍＲＮＡの配列方向づけは第１図に示される、 ５、 Ｈｌｎｄ ＩＩＩ−Ｌフラグメントの短縮およ
びフラグメントの逆クローニング ｇｃは後期の（ｒ） ｓｆＥ白ａであり、そのｒｎＦｔ
ＮＡはＨｌｎｄｌｌｌ−Ｌフラグメントの右側部分十に
局在する〔［Ｊ。
Ｖｉ ｒｏｌ 、 Ｊ印刷中（１９ｓ５卯））。ｇＣの
蛋白、７．ｑ Ｈａｔ分をコードするｇＣ−ｍＲＮＡは
おそらくスヲライシングされないσ）で、デノムが有す
る情報１ｌＳｌ原核生物系中において発現され得る。そ
こにおいてＨｌｎｄ Ｉｎ−Ｌフラグメント中でｇ（ｚ
合成に必要でないＤＮＡ部分を除去することけ努力の価
ＬＩＩｔｉ金有する。このことはＤＮＡを他の適当外エ
ンドヌクレアー七を用いて分Ｗｆすることにより達成さ
れる。
蛋白、７．ｑ Ｈａｔ分をコードするｇＣ−ｍＲＮＡは
おそらくスヲライシングされないσ）で、デノムが有す
る情報１ｌＳｌ原核生物系中において発現され得る。そ
こにおいてＨｌｎｄ Ｉｎ−Ｌフラグメント中でｇ（ｚ
合成に必要でないＤＮＡ部分を除去することけ努力の価
ＬＩＩｔｉ金有する。このことはＤＮＡを他の適当外エ
ンドヌクレアー七を用いて分Ｗｆすることにより達成さ
れる。
Ｈ１ｎｃ３ Ｔｉｔ−Ｔ、フラグメントの釘択出発点か
ら５′で終るＨｌｎｄＩＴＩ−Ｌフラグメントのエキソ
ヌクレア−ゼＢａ１３１ を用いる翻訳出発点までの分
解および短縮されたＬ−フラグメントの効率のよいプロ
モーター＜、 ｅ’１１えばＴｒｐ−１Ｌａｃ−または
Ｔａ、ｃ−プロモーター）の後にお（ハ）る接着により
原核生物系においてｇＣ“ポリにプチドの高率な合成が
達成される（第２図）。
ら５′で終るＨｌｎｄＩＴＩ−Ｌフラグメントのエキソ
ヌクレア−ゼＢａ１３１ を用いる翻訳出発点までの分
解および短縮されたＬ−フラグメントの効率のよいプロ
モーター＜、 ｅ’１１えばＴｒｐ−１Ｌａｃ−または
Ｔａ、ｃ−プロモーター）の後にお（ハ）る接着により
原核生物系においてｇＣ“ポリにプチドの高率な合成が
達成される（第２図）。
抗体の産生を可能にするためには、結局ｇＣの全蛋白質
は必要ではなく、蛋白質の一部分のみが抗原性の決定因
子を担う。このよう々ボ□す×プチドの産生のためにク
ローニングされたＤＮＡフラグメントが用いられ得る。
は必要ではなく、蛋白質の一部分のみが抗原性の決定因
子を担う。このよう々ボ□す×プチドの産生のためにク
ローニングされたＤＮＡフラグメントが用いられ得る。
そしてその際Ｔ３ａｌ ３１のようなエキソヌクレアー
ゼによｌ） ｇｃのコー１−’された領域中へ挿入され
るかまたは例えばＦｉｃｏ／Ｈ１ｎｄＩ−Ｌフラグメン
トのようなＨｉｎｄｌｌｌ −ＴＪフラグメントの短縮
切片中に挿入される。
ゼによｌ） ｇｃのコー１−’された領域中へ挿入され
るかまたは例えばＦｉｃｏ／Ｈ１ｎｄＩ−Ｌフラグメン
トのようなＨｉｎｄｌｌｌ −ＴＪフラグメントの短縮
切片中に挿入される。
ｐＵＣａ中におけるＩＦｌ、ＣＵＶ５プロモーターの後
でＰｉｃｏ／Ｈ１ｎｄ Ｉ−ＬフラグメントをＰＣ！Ｏ
Ｒ１位置へ接着することはβ−ガラクトシダー七の最初
のアミノ酸およびｇＣポリはツヂドの大部分を有する融
合蛋白質の合成を■１訃、にする（第５図）。
でＰｉｃｏ／Ｈ１ｎｄ Ｉ−ＬフラグメントをＰＣ！Ｏ
Ｒ１位置へ接着することはβ−ガラクトシダー七の最初
のアミノ酸およびｇＣポリはツヂドの大部分を有する融
合蛋白質の合成を■１訃、にする（第５図）。
Ｈ，ＥＩＶのｇＣ以外の他の抗原性糖蛋白質のクローニ
ングおよび発現はここに実施された経講と同様にして実
施される、 対応するｍＤＮＡのスゾライシングが起る場合には、相
補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ ）が糖蛋白ηの発現に用いられ
得る、そしてそのとき）＋ｑｖ＝１のｇｃｍＤＮＡのみ
が結合しているＰｃ ｏ／Ｈ１ｎｄ Ｉ ＩＪフラグ
メントのような小さなりローニングされたＤＮＡフラグ
メントがＪ−ＪＳＶ［感染した細胞の分解物から対応す
るｍＲＮＡの選別に働き得る。対応する原核生物中に卦
いて生成する遺伝子産物はまた、ここにスラライシング
機構が存在しないにもかかわらず抗原性決定因子の一部
または全部を川う蛋白質を産生じ得るので、このような
ｔμ合Ｋ ｉ−けるゲ′ツムＤＮＡのクローニングが考
慮され得る。さらにまた唯一または異なる二つの型のヘ
ルペスウィルスからの各種の遺伝子のＤＮＡフラクメン
トの＊ 着によびこのような交雑穐蛋白りの発現が可能
である、 さらにまだ、真相生物細胞（酵母、動物の細胞培蓋）に
おｋＪる発現は特に蛋白質のグリコジル化が望ましい駒
、台に可能である。
ングおよび発現はここに実施された経講と同様にして実
施される、 対応するｍＤＮＡのスゾライシングが起る場合には、相
補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ ）が糖蛋白ηの発現に用いられ
得る、そしてそのとき）＋ｑｖ＝１のｇｃｍＤＮＡのみ
が結合しているＰｃ ｏ／Ｈ１ｎｄ Ｉ ＩＪフラグ
メントのような小さなりローニングされたＤＮＡフラグ
メントがＪ−ＪＳＶ［感染した細胞の分解物から対応す
るｍＲＮＡの選別に働き得る。対応する原核生物中に卦
いて生成する遺伝子産物はまた、ここにスラライシング
機構が存在しないにもかかわらず抗原性決定因子の一部
または全部を川う蛋白質を産生じ得るので、このような
ｔμ合Ｋ ｉ−けるゲ′ツムＤＮＡのクローニングが考
慮され得る。さらにまた唯一または異なる二つの型のヘ
ルペスウィルスからの各種の遺伝子のＤＮＡフラクメン
トの＊ 着によびこのような交雑穐蛋白りの発現が可能
である、 さらにまだ、真相生物細胞（酵母、動物の細胞培蓋）に
おｋＪる発現は特に蛋白質のグリコジル化が望ましい駒
、台に可能である。
そのような蛋白鎖は、そり、が壱する特性によって抗血
清および／またＵＳ合により添加剤および通常の補助剤
の使用のもとで抗血清および／−またけ接種剤の取得に
適当である。
清および／またＵＳ合により添加剤および通常の補助剤
の使用のもとで抗血清および／−またけ接種剤の取得に
適当である。
それはまた診断目的、例えばヘルペスウィルスに対する
抗体の検出に用いらり、 Ｑる、このよう々蛋白質に対
する抗血清はヘルペスウィルス自体の検出に役立ち得る
。
抗体の検出に用いらり、 Ｑる、このよう々蛋白質に対
する抗血清はヘルペスウィルス自体の検出に役立ち得る
。
第１図はヘルペスウィルス（ＨＦＩＶ） ＤＮＡのＨｌ
ｎｄｌ［１−ＬフラグメントがｐＢＲツラスミドに接
着統合されて組換えクローンｐＭＢ Ｉ（ＳＶ ９を生
ずる操作経過を図式的に示す図であり、第２図はＨｌ
ｎｃＪＩＩＩ −Ｌフラグメントが切断゛短縮された後
にプロモーターを含有するベクターに接着統合されて絹
換えクローンを生ずる操作経泗を図式的に示・１図であ
り、そして第６図はＨ４ｎｄｌｌｌおよびＷｃ○王（１
の二重切断による短縮切片がｐＵｌ−１８シラスミドに
接着統合されて組換えクローンＴ′ＩＭＢ ）］Ｓｖ
５９を生ずる操作経過な図式的に示す図である。 特許出願人 ベーリングヴエルケ・アクチェンゲセル
ンヤフト 代 理 人 弁理士 山 下 白へ＼＼′
１′Ｉ、 ｇＣ−ｍＲＮＡ ＦＩＧ、２ 叩僅閣景％
ｎｄｌ［１−ＬフラグメントがｐＢＲツラスミドに接
着統合されて組換えクローンｐＭＢ Ｉ（ＳＶ ９を生
ずる操作経過を図式的に示す図であり、第２図はＨｌ
ｎｃＪＩＩＩ −Ｌフラグメントが切断゛短縮された後
にプロモーターを含有するベクターに接着統合されて絹
換えクローンを生ずる操作経泗を図式的に示・１図であ
り、そして第６図はＨ４ｎｄｌｌｌおよびＷｃ○王（１
の二重切断による短縮切片がｐＵｌ−１８シラスミドに
接着統合されて組換えクローンＴ′ＩＭＢ ）］Ｓｖ
５９を生ずる操作経過な図式的に示す図である。 特許出願人 ベーリングヴエルケ・アクチェンゲセル
ンヤフト 代 理 人 弁理士 山 下 白へ＼＼′
１′Ｉ、 ｇＣ−ｍＲＮＡ ＦＩＧ、２ 叩僅閣景％
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １）ウィルスのＤＮＡからある種のホＩＪ ハプチドを
コード化するゲノム切片を単離し、ゲノム切片をベクタ
ーのＤＮＡに酵素的に接着し、この組合せＤＮＡをそれ
が抗原性ポリＲプチドの産生のために働く細胞中へ導入
し、そしてそのポリベヅチドを取得することを特徴とす
る、ヘルはス・シンプレックスウィルス（Ｄ 抗原性決
定因子を有するポリハプチドの調製方法。 ２）ケノム切片カヘルＲス・シンプレックスＤＮＡのＨ
ｌｎｄ ＩＩＩ−Ｔ、フラグメント（ゲノム切片０．５
９２〜０．６４７）であることを特徴とする特許請求の
範囲第１項記載の調製方法。 ３）ケノム切片カヘルＲス・シンプレックスＤＮＡのＨ
ｌｎｄ ｌ１ｌ−Ｌフラグメントの一部であることを特
徴とする特許請求の範囲第１項記載の調製方法。 ４）ベクターがｐ１３２２ヅラスミトであることを特徴
とする、ｔｒ斤＊ｒ請求の範囲第１項記載の調製方法。 ５）組合せＤＮＡが０．５９２〜０６４７のゲノム切片
お：びｐＢＲ３２２プラメミト′のＤＮＡの切片よりな
ることをｆｒｊ徴とする、特ｔｒ’Ｆ ＲＮ求の範囲第
１項記載の調製方法。 ６）組合せＩ）ＮＡが０５９２〜０． ／） ４７のゲ
ノム切片の一部およびベクターのＤ１昂の切片よりなる
ことを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の調製方法
、 ７）細胞がバチルス、放線菌、酵母または動物細胞であ
ることを特徴とする、儀＃′Ｆ情求の範囲第１項記載の
調製方法。 ８）細胞が大腸菌であることを貸機とする、／ｒ￥許請
求の範囲第１項記載の調製方法。 ９）°特許請求の範囲第１〜８項のいずれか一つに記載
の調製方法によシ取得されるポリはプチド。 １０）％許請求の範囲第９功記載のポリペプチドの抗血
清の取得および／または接種剤あるいは診断用試薬の調
製のための使用。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE32285019 | 1982-07-30 | ||
| DE19823228501 DE3228501A1 (de) | 1982-07-30 | 1982-07-30 | Verfahren zur herstellung eines herpes-antigens, dazu geeignetes mittel sowie verfahren zu seiner herstellung und die verwendung dieses antigens |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5948095A true JPS5948095A (ja) | 1984-03-19 |
Family
ID=6169723
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58137894A Pending JPS5948095A (ja) | 1982-07-30 | 1983-07-29 | ヘルペス抗原の調製方法 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0100521B1 (ja) |
| JP (1) | JPS5948095A (ja) |
| AT (1) | ATE56044T1 (ja) |
| AU (1) | AU577516B2 (ja) |
| CA (1) | CA1273884A (ja) |
| DE (2) | DE3228501A1 (ja) |
| IL (1) | IL69374A0 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60155974A (ja) * | 1983-08-30 | 1985-08-16 | ジエネンテク，インコ−ポレイテツド | 分子クロ−ンされた診断用産物 |
Families Citing this family (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| PT77014B (en) * | 1982-07-20 | 1986-01-24 | Molecular Genetics Inc | Production of herpes simplex viral proteins |
| US4818694A (en) * | 1982-07-20 | 1989-04-04 | American Cyanamid Company | Production of herpes simplex viral protein |
| NZ209308A (en) * | 1983-08-30 | 1991-08-27 | Genentech Inc | Vaccine against hsv involving a truncated membrane-free derivative of a membrane-bound protein |
| US7264817B1 (en) | 1983-08-30 | 2007-09-04 | Genentech, Inc. | Immunogenic composition based on a truncated derivative of a membrane bound protein and process for making it |
| JPS6051120A (ja) * | 1983-08-31 | 1985-03-22 | Chemo Sero Therapeut Res Inst | 単純ヘルペスサブユニットワクチン |
| US4642333A (en) * | 1983-09-16 | 1987-02-10 | Stanley Person | Immunologically reactive non-glycosylated amino acid chains of glycoprotein B of herpes virus types 1 and 2 |
| US5171568A (en) * | 1984-04-06 | 1992-12-15 | Chiron Corporation | Recombinant herpes simplex gb-gd vaccine |
| ATE118353T1 (de) * | 1984-04-06 | 1995-03-15 | Chiron Corp | Rekombinanter herpes simplex gb-gd impfstoff. |
| JPS615786A (ja) * | 1984-06-19 | 1986-01-11 | Chemo Sero Therapeut Res Inst | 単純ヘルペスウイルス遺伝子を組込んだ組換えｄｎａ、形質転換動物細胞および単純ヘルペスウイルス蛋白質の製法 |
| EP0170169B1 (en) * | 1984-07-20 | 1991-03-20 | Juridical Foundation The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute | Recombinant dna containing a herpes simplex virus gene or a fragment thereof, yeast transformed with said recombinant dna, and method for the production of herpes simplex virus proteins |
| JPS6153226A (ja) * | 1984-08-24 | 1986-03-17 | Chemo Sero Therapeut Res Inst | 単純ヘルペスサブユニツトワクチンの精製方法 |
| US4659568A (en) * | 1985-02-27 | 1987-04-21 | American Cyanamid Company | Process for solubilization, purification and characterization of protein from insoluble protein aggregates or complexes and compositions of matter therefrom |
| DE3510734A1 (de) * | 1985-03-25 | 1986-09-25 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Verfahren zur herstellung eines fuer herpes simplex virus typ 2 spezifischen antigens, dazu geeignetes mittel und verwendung dieses antigens |
| JPH0668B2 (ja) * | 1985-08-30 | 1994-01-05 | 財団法人化学及血清療法研究所 | 単純ヘルペスウイルス遺伝子が組込まれた組換えプラスミド |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS59118097A (ja) * | 1982-07-20 | 1984-07-07 | アメリカン サイアナミド カンパニー | 単純ヘルペスウイルスタンパク質をコードするｄｎａ配列 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FI83662C (fi) * | 1980-07-17 | 1991-08-12 | Scripps Clinic Res | Diagnostik antikropp och foerfarande foer dess framstaellning. |
| PT77014B (en) * | 1982-07-20 | 1986-01-24 | Molecular Genetics Inc | Production of herpes simplex viral proteins |
| NZ209308A (en) * | 1983-08-30 | 1991-08-27 | Genentech Inc | Vaccine against hsv involving a truncated membrane-free derivative of a membrane-bound protein |
-
1982
- 1982-07-30 DE DE19823228501 patent/DE3228501A1/de not_active Withdrawn
-
1983
- 1983-07-27 DE DE8383107373T patent/DE3381843D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1983-07-27 EP EP83107373A patent/EP0100521B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1983-07-27 AT AT83107373T patent/ATE56044T1/de not_active IP Right Cessation
- 1983-07-29 AU AU17452/83A patent/AU577516B2/en not_active Ceased
- 1983-07-29 CA CA000433648A patent/CA1273884A/en not_active Expired - Lifetime
- 1983-07-29 JP JP58137894A patent/JPS5948095A/ja active Pending
- 1983-07-29 IL IL69374A patent/IL69374A0/xx unknown
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS59118097A (ja) * | 1982-07-20 | 1984-07-07 | アメリカン サイアナミド カンパニー | 単純ヘルペスウイルスタンパク質をコードするｄｎａ配列 |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60155974A (ja) * | 1983-08-30 | 1985-08-16 | ジエネンテク，インコ−ポレイテツド | 分子クロ−ンされた診断用産物 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| IL69374A0 (en) | 1983-11-30 |
| EP0100521A2 (de) | 1984-02-15 |
| AU1745283A (en) | 1984-02-02 |
| EP0100521B1 (de) | 1990-08-29 |
| ATE56044T1 (de) | 1990-09-15 |
| DE3228501A1 (de) | 1984-02-02 |
| DE3381843D1 (de) | 1990-10-04 |
| CA1273884A (en) | 1990-09-11 |
| AU577516B2 (en) | 1988-09-29 |
| EP0100521A3 (en) | 1985-12-04 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPS5948095A (ja) | ヘルペス抗原の調製方法 | |
| EP1105466B1 (en) | Process for purifying human papillomavirus virus-like particles | |
| US5470720A (en) | HIV antibody assays comprising p24-gp41 chimeric antigens | |
| US5187261A (en) | Process for the preparation of mature human serum albumin | |
| EP0013828A1 (en) | Recombinant DNA, hosts transformed with it and processes for the preparation of polypeptides | |
| JPH07203968A (ja) | ヘテロポリマー系蛋白質の発現ベクターおよび該ベクターを含む細胞 | |
| JPH0779700B2 (ja) | 組換えバキユロウイルス発現ベクターの製法 | |
| JPH0813275B2 (ja) | バキユロウイルス転移ベクター | |
| JPH11504801A (ja) | パピローマウイルス様粒子、融合タンパク質並びにそれらの製造方法 | |
| GB2209764A (en) | Recombinant vaccinia virus | |
| JP2755574B2 (ja) | 乳頭腫ウイルスの特徴を示すポリペプチドを含む組成物 | |
| JPH0690769A (ja) | バキュロウイルス発現系 | |
| JPH01285198A (ja) | 日本脳炎ウイルス表面抗原蛋白質の製造法 | |
| JP2702899B2 (ja) | 肝炎ｂ型ウイルスワクチン | |
| Nukuzuma et al. | Establishment and characterization of a carrier cell culture producing high titres of polyoma JC virus | |
| JPS6270397A (ja) | 水痘−帯状疱疹ウイルスにたいするワクチン | |
| JPS58995A (ja) | ウイルス蛋白の合成 | |
| JPS62296891A (ja) | ヒトサイトメガロウィルスの主要グリコプロテイン、その製造および使用 | |
| US5059538A (en) | Recombinant plasmid inserted with herpes simplex virus gene | |
| US5411732A (en) | Preparation of fused proteins, antibodies and processes therefore | |
| JPS6387976A (ja) | シユ−ドラビ−ズウイルス組換え体およびそれを使用するタンパク質の製法 | |
| Thompson et al. | Expression of human papillomavirus type 6 El, E2, L1 and L2 open reading frames in Escherichia coli | |
| JP2819023B2 (ja) | 麻疹ウィルス属の構造蛋白質（ｈａ、ｆおよび／またはｎｐ）の一つまたは二つ以上をコードするウィルスベクターおよび組換えｄｎａ、感染細胞培養物、それより得られた蛋白質、ワクチンおよび抗体 | |
| EP0475182A2 (en) | Method for protein synthesis using CKS fusion proteins | |
| JPH067186A (ja) | ダニ主要アレルゲンの製造方法 |