JPS5965058A - ヘンエイコサペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 いたインスリン様成長因子一ｌ（以下，ＩＧＦ−１と略
記する）の測定に関するものである。

１ＧＦ−Ｉは１９７６年，　Ｒｉｎｄｅｒｋｎｅｃｈｔ
らによりインスリン抗体により抑制されない血中インス
リン様活性物質の一つとして見出され（　Ｐｒｏｃ．　
Ｎａｔｌ．　ｋｃａｄＪｃｉ．ＵＳＡ．７３：　　２８
６５〜２３６９（１９７（３））＋その後彼らによりヒ
ト血清より単離され．その７０個のアミノ酸配列が明、
うかにされた（　Ｊ．Ｂｉａｌ．　Ｏｈｅｍ，　２５３
　：　２７６９＝２７７６（１９７８））ｏ　　Ｚａｐ
ｆ　　らは、この抽出工ＧＦ−Ｉを用いて血清中１ＧＦ
−１をラジオイムノアッセイで測定し，臨床的有用性に
ついても報告した（　Ａｃｔａ　Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ
　、、　９　５　：　５　０　５　〜５１７（１９８０
））が、抽出法では型部精製が煩雑困難で収量も極めて
少なく，満足な方法とは言えない。

その後，　Ｚａｐｆらにより前記抽出工ＧＦ−工を用い
たラジオイムノアッセイにより下垂体疾患等における血
清９工Ｇｖ　−　工測定の意砂が確認された（　Ｊ．Ｏ
ｌｉｎ．　Ｉｎｖｅｓｔ．、　６　８　：１３　２１〜
ｌ３８　０（１９８１））が日常検査に応用し得る測定
系の確立には至っていない。

そこで本発明者は工ＧＦ一工の優れたラジオイムノア，
セイ法を確立すべく研究を重ね。

、工９ｙ一工の２６位から４６位に相当するアミノ酸配
列（Ｉ）を有するヘンエイコサペプチドを製し，本物質
を用いた工Ｇ，　Ｆ一工のラジオイムノアッセイを確立
した。

Ａｏｎ　−Ｌｙｎ　−Ｐｒｏ　−Ｔｈｒ　−Ｇｌｙ　−
Ｔｙｒ　−Ｇｕｙ　−Ｓｅｒ　−５ｅｒ−Ｓｅｒ　−Ａ
ｒｇ　−Ａｒｇ−Ａｌａ　−Ｐｒｏ　−Ｇｉｎ　−Ｔｈ
ｒ　−Ｇｌｙ−工１ｅ−Ｖａｌ　−Ａｓｐ　−Ｇｌｕ　
　（１）なお１本明細書において各アミノ酸残基は原則
として英語名最初の３文字で示し９例外としてＡＢｎは
アスパラギニル、　Ｇｉｎはグルタミニル。

工１ｅはイソロイシルを示す。

以下特別に示す以外は本明細書中ではこの式（１）のア
ミノ酸配列を有するペプチドをヘンエイコサペプチドと
称す。

このペプチドは実施例に示した如く、適切な保護基と能
率的なフラグメンテーションにより簡便に製造すること
ができる。すなわち、　’Ｉｈｒ−Ｇｕｙ−工１ｅ　−
Ｖａｌ　−Ａｓｐ　−Ｇｌｕで表わされるアミノ酸配列
を有するヘキサペプチドのＣ端を保護し。

このＮ端にＡｒｇ　−Ａｒｇ　−Ａｌａ　−Ｐｒｏ　−
Ｇｉｎ、Ｔｙｒ　−Ｇｌｙ　−８ｅｒ　−Ｓｅｒ　−Ｓ
ｅｒ及びＡｓｎ　−ＩＩｙｅ　−Ｐｒｏ　−Ｔｈｒ　−
Ｇｌｙで表わされるアミノ酸配列を有する３種のペンタ
ペプチドを段階的に縮合させる。その後必要に応じ保護
基を脱離させる。

このものは式（１）で示した基本的なアミノ酸配列を有
していれば目的に応じ多少の修飾を加えてもよく、アッ
セイ用または合成中間体として使用することができる。

タトえば、ヘンエイコサペプチドから工ＧＦ−工のラジ
オイムノア、セイに必要な抗血清及びトレーサーを製造
することができる。抗血清作成のための免疫用抗原とし
てはヘンエイコサペプチドとアルブミン、グロブリン、
アスカリス抽出物等のタンパクとの縮合体を使用するの
が適当であり、トレーサーはハンターとグリーンウッド
の方法（Ｎａｔｕｒｅ　、　１９４　：　４９４　（１
９６２）　）を用いることにより得ることができる。

次に実施例を挙げて説明するが、アミノ酸はグリシンを
除いてＬ−型を用いた。また９本明細書中に記載の記号
は次の意味を有する。

２：　ベンジルオキシカルボニル Ｂｏａ　ｅ三級ブチルオキシカルボニルＴｏａ：ｐ−ト
ルエンスルホニル ＮＯ７：ニトロ ０Ｂｕｔ　：三級エチルエステル ＯＭＯ：メチルエステル Ｏ８ｕ：Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミドエステル　　　
。

ＤＭＦ　ニジメチルホルムアミド １１０Ｂｔ：　１−ヒドロキシベンゾトリアゾールＤ０
０＝　ジシクロへキシルカルボジイミドＴＨＦ：　テト
ラヒドロフラン また、薄層クロマトグラフィーはシリカゲル薄層を用い
、　Ｒｆはｌ−ブタノール・酢酸・水（４：１：５）を
、　Ｒｆ”は１−ブタノール・ピリジン・酢酸・水（８
０：２０：６：２４）を展開溶媒としたときの値である
。

例１：原料の製法 Ａ、　（１）　　Ｚ　−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−ＯＭｅＺ　−
Ｔｈｒ−ＯＨ１０，１３９をＤＭＦ７５−に溶かした溶
液に、　ＨＯＢｔ　５．４１６水溶性カルボジイミド塩
酸塩７．６６９及びＨ−Ｇｕｙ　−ＯＭｅ塩酸塩５．２
８９のトリエチルアミン（５，６，７）を含むＤＭＦ（
７５ｍ＋／）溶液を０℃で攪拌しながら添加した。混合
物を０℃で２時間、さ らに室温で２４時間攪拌したのち溶媒 を留去した。

残渣を酢酸エチルに溶解し、ＩＮ− クエン酸、飽和炭酸水素ナトリウム溶 液及び飽和食塩水で洗浄したのち、無 水硫酸ナトリウム上で乾燥し、ついで 溶媒を留去した（以上の処理操作を以 下常法と称す。）。

残液をｎ−ヘキサンで処理すること により固化させたのち、酢酸エチル・ ｎ−ヘキサンより再結晶した。収量 １０．８３９．融点１１５〜１１６℃０Ｒｆ’　０．６
　？　、　Ｒｆ　　０．７２゜〔α）、％９−６５．０
°（０−１，０７，メタノール）。

元素分析　Ｃ，。Ｈ，Ｎ、Ｏ，として 計算値　０５７．００．　　Ｈ６，４６，Ｎ　９．９７
実験値　０５６．９６．　　Ｈ６，２４，Ｎ　９．９０
（２）　　Ｚ　−Ｐｒｏ　−Ｔｈｒ　−Ｇｕｙ　−ＯＭ
ｅ上記生成物５．３３５９をＩＮ−塩酸 を含むメタノール（１６，４５，ａｇ）中でパラジウム
黒を触媒として１７時間接 接触光を行なった。濾過後溶媒を留去 し、残渣を五酸化リン・水酸化カリウ ム上で乾燥した（　Ｒｆ’　０．３６　、　Ｒｆ”ｏ、
７ｏ）。

Ｚ　−Ｐｒｏ−０Ｈ８，６９９のＤＭＦ（１５ｍ）溶液
にＮ−メチルモルホリ ン１．６３−及びクロルギ酸イソブチル１．９２−を−
１５℃で攪拌しながら加えた。これに上記還元体のトリ
エチル アミン（２，３１ｍｇ）を含むＤＭＩＦ（１５ｍ）溶液
を一り５℃°で攪拌しながら加えたのち一１０℃で１分
間攪拌 した。この混合物を濃縮したのち酢酸 エチルに溶解し常法により処理した。

得られた油状の残渣に石油エーテルを 加え固化させたのち、酢酸エチル・ｎ −ヘキサンから再結晶して目的のトリ ペプチドを得た。収ｆｆ１４．１３り、融点元素分析　
０２゜Ｈ２７Ｎ３０７とじて計算値　０５７．００．　
　Ｈ６，４６，Ｎ　９．９７実験値　０５６．９６．　
　Ｈ６，２４，Ｎ　９．９０（３）　　Ｚ　−Ｉｙｓ　
（ＴｏＢ）　−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−ＯＭｅＺ　−
Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−ＯＭｅ　４．１５９をメタノ
ール中でパラジウム黒を触媒と して２０時間接接触光した。濾過後。

溶媒を留去し残液をエーテルで処理し たのち減圧乾燥し、固化物を得た。

Ｚ　−Ｌｙｓ　（Ｔｏｅ）　−ＯＨ４，２８９をＤＭＦ
５０−に溶かした溶液にＨＯＢｔＬ６０９．ＤＯＯ２，
０８９及び上記 還元体のＤＭＩＦ　（５０ｓｄ）溶液を０℃で攪拌しな
がら加えた。混合物を０℃ で２時間、さらに室温で２０時間攪拌 したのち濃縮し、酢酸エチルに溶解し た。これを常法により処理し、得られ た油状の残渣にｎ−ヘキサンを加えガ ム状の物質を得た。このガム状の物質。

をエーテルで処理したのち減圧乾燥し 固化物を得た。収量５．９（１゜ Ｒｆ　　Ｏ，７４，Ｒｆ　　Ｏ，８３゜〔α〕腎−５０
，３°（０−２，１１，メタノ−ル）。

元素分析　０１８Ｈ４５’１ｌｏｌｏｓとシテ計算値　
０５６．８２．　　Ｈ６，４４，Ｎ　９．９５実験値　
０５６．１８．　　Ｈ６，４２，Ｎ　９．６９（４）　
　Ｚ−Ａｓｎ−ＩＩｙｓ（Ｔｏｓ）−Ｐｒｏ−’Ｔｈｒ
−Ｇｌｙ−ＯＭθ 上記生成物２．８２９をＩＮ−塩酸を 含むメタノール（ｓｏｂ）中でパラジ ウム黒を触媒として８０時間接触還元 を行なった。濾過後濃縮し、残渣をエ ーテル処理したのちエーテルをデカン テーションにより除き、メタノール− エーテルを加えて固化させた（　Ｒｔｌｏ、８０　、　
　Ｒｒｌｌ　　０．６５　）。

上記還元体をトリエチルアミンを含 むＤＭＦ２ａｍに溶解した溶液に２− Ａｓｎ−ｏｓｕ　１．４５りをｏｔ＋で攪拌しながら加
えた。混合物を４℃で１５時間 攪拌し、さらにｚ　−Ａｓｎ−０８ｕ　Ｏ，２９９を０
℃で攪拌しながら加えたのち。

４℃で５時間攪拌した。溶媒を留去し たのち、残渣を０℃でＩＮ−クエン酸 で処理した。得られたガム状物に水を 加え、さらに酢酸エチルを加えて懸濁 させた。有機層を水洗したのち、濃縮 乾固した。収量２．４８ｇ。融点１６２〜１６８℃。

Ｒｆ’　０．４８　、　Ｒｆ　　Ｏ，７８゜〔α）ｐ−
２ｏ、７°（０−１，２４，ＤＭＦ）元素分析　ＣＩ？
Ｈ１ｌＩＮ？ｏｌ！ｓ　として計算値　０５４．３３．
　　Ｈ６，２８，Ｎ　ＩＩＪ）９実験値　０５４．２８
．　　Ｈ６，２６，Ｎ　１１．７６「を加水分解物中の
アミノ酸の比率 Ａｓｐ　Ｏ，９５、Ｇ１７１．０１　、　Ｐｒ。

Ｌ、０８　、　Ｔｈｒ　１．００　、　Ｌｙｓ　　Ｏ，
９０（５）　　Ｚ−Ａｓｎ−Ｉ７ｙｓ（Ｔｏｓ）−Ｐｒ
ｏ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ　　Ｂ・−ＮＩＩＮＨ２ Ｚ　−Ａｓｎ　−ＴＪｙｓ　（Ｔｏｓ　）　−Ｐｒｏ　
−Ｔｈｒ　−Ｇｌｙ−ＯＭｅ　　１．００　ｐをメタノ
ール８ｏ−に溶解し、０℃でヒドラジン水和物 ０．６−を加えた。混合物を室温で２日間放置し、濃縮
し１−ブタノールに溶 解したのち水で洗浄した。溶媒を留去 したのち残渣にエーテルを加え固化さ せた。メタノール・エーテルよす再結 晶を行ない製品とした。収量０．８８り。

融点１７３〜１７４℃。

Ｒｆ’　０．４０　、　Ｒｆ　　Ｏ，７４゜元素分析　
’１１６Ｈ１１１’１ｌｏｌｌｓ　’　＋Ｈｔｏとして
計算値　０５２．２９．　　Ｈ６，Ｌ４．　　Ｎ　１５
．２４実験値　０５２゜８８．　　Ｈ６，２１，Ｍ　１
４．９９酸加水分解物中のアミノ酸の比率 Ａｓｐ　１．０８　、　Ｇｌｙ　１．０１　、　Ｐｒ。

Ｏ，９９、Ｔｈｒ　Ｏ，９２、Ｌｙｓ　Ｏ，９，１（１
）　　−Ｂｏａ　−Ｔｙｒ　−Ｇｌｙ　−ＮＨＮＨ２Ｂ
ｏａ−Ｔｙｒ−ＯＨ５，６４９をＤＭＩＦ４０％ｔに溶
かした溶液にＨＯＢｔ　２．７０９゜ＤＯＯ４，１２ｇ
及びＨ−Ｇｌｙ　−ＯＭｅ塩酸塩８．００９のトリエチ
ルアミン （３，８６，７）を含むＤＭＦ（２０ｒ／）溶液を０℃
で攪拌しながら添加した。

混合物を０℃で１時間さらに室温で ２０時間攪拌したのち溶媒を留去し酢 酸エチルに溶解した。これを常法にて 処理し、得られた油状物にエーテル・ ｎ−ヘキサンを加え結晶化させたのち メタノール−エーテル（１：１）に溶 解し、活性炭処理のあと、酢酸エチル ・ｎ−ヘキサンから再結晶を行ない。

ジペプチドのメチルエステル体 ５．７９９を得た（ＲｆＯ，８５゜ Ｒｆ　　　Ｏ，８８）。

上記メチルエステルをメタノール ５０−に溶解し、ヒドラジン水和物 ８．９＋＋＋ｌを加えたのち、室温で２４時間放置した
。混合物を水を飽和した１− ブタノールで抽出したのち、メタノー ル−エーテルから再結晶を行ない目的 物を得た。収ｆｉ５．０１９．融点１５７〜１６０℃。

Ｒｆ’　０．６７　、　Ｒｆ”　０．７７゜〔α）％’
　＋１　ａ、ｏｏ（０−Ｌ９１．　、ｉｌタノール〕。

元素分析　０．。Ｈ２４Ｎ４０５として計算値　０５４
．５（、Ｈ６，８７，Ｎ　１５．９０実験値　０５４．
７０．　　Ｈ６，８−２，Ｎ　１５．８８（２）　　Ｚ
　−Ｓｅｒ　−Ｓｏｒ　−ＯＭｅＺ−Ｆ３ｅｒ−ＨＨＨ
Ｈ，２，５８９をＤＭＩ＋’２０−に溶カルだ溶液に６
Ｎ−塩酸／ ジオキサン５．０１−及び亜硝酸イソアミルト３４−を
一１５℃で激しく攪拌 しながら加えた。混合物をトリエチル アミンで中和したのちＨ−Ｓｅｒ　−ＯＭｅｌ、８５９
のトリエチルアミン （１，６８，ｊ）を含むＤＭｌｒ　（２０常ｌ）溶液を
一１５℃で加えた。混合物を 一１０℃で２時間、さらに４℃で２０ 時間攪拌したのち溶媒を留去し酢薗エ チルに溶解した。これを常法にて処理 したのちエーテルを加えて結晶化させ。

サラにメタノール−エーテルから再結 晶して製品とした。収５１２．５２９゜融点１４２〜１
４３℃。

〔α〕背−４，２°（０−１，１４，メタノール）元素
分析　ＣヤＨ２ＯＮ２Ｏ？として 計算値　０５２．９４．　　Ｈ５，９２，Ｎ　８．１？
実験値　０５＆１３．　　Ｈ５，９２，Ｎ　８．１７（
８）　　Ｚ　７　Ｓｅｒ　−Ｓｅｒ　−Ｓｅｒ　−ＯＭ
。

Ｚ−３ｅｒ−８ｅｒ−ＯＭｅ　４．７０９をＩＮ−塩酸
を含むメタノール（１，３，８ｍ）中でパラジウム黒を
触媒として２６時間 接触還元を行なった。濾過後溶媒を留 失して固化物を得た。

Ｚ−８ｅｒ−ＮＨＮＨ２４，１９９の６Ｎ−塩酸／ジオ
キサン（８，３０ｔｄ）を含むＤＭｙ（３ｏｇ）溶液に
一１５℃で攪 拌しながら亜硝酸イソアミル２．２２ｄを加え、トリエ
チルアミンで中和した のち、上記還元体のトリエチルアミン （１，９３，ｊ）を含むＤＭＦ　（８０ｇＬｔ）溶液を
一１５℃で攪拌しながら加えた。

混合物を一１５℃で１時間、さらに ４℃で２０時間攪拌したのち溶媒を留 失し、残渣を水で飽和した１−ブタノ ールで抽出した。濃縮し、酢酸エチル から結晶化させ、さらにメタノール・ 酢酸エチルから再結晶し製品とした。

収量４，１５９　、融点２０４〜２０７℃。

Ｒｆｌ　０．６７、Ｒｆｌ　０．７６　。

〔α）　”＋　１０．７°（０−１，１８，ＤＭＦ　）
元素分析　Ｃ１１１Ｈ２ｓＮ８０ｏとして計算値　０５
０．５８．　　Ｈ５，９０，Ｎ　９．８３実験値　０５
０．３９．　　Ｈ５，７６、Ｎ　９．７９（４）　　Ｂ
ｏＣ−Ｔｙｒ　−Ｇｌｙ　−Ｓｅｒ　−Ｓｅｒ　−Ｓｏ
ｒ　−ＯＭｅＺ−８ｅｒ−８ｅｒ−８ｅｒ−ＯＭｅ　　
２．０５９を１０％酢酸（２０ｍ）を含むメタノー ル（１５０ａｔ　）中でパラジウム黒を触媒として１５
時間接触還元を行なった。

濾過後、溶媒を留去し残渣をエーテル により固化した（　Ｒｒｌ　Ｏ，１９、ＲｔＲＯ，５７
）。

Ｂｏｏ　−Ｔｙｒ　−Ｇｌｙ　−ＮＨＮＨ２２，０３９
をＤＭＦＩＯ艷に溶かした溶液に６Ｎ− 塩酸／ジオキサン２．８８４を一１５℃で攪拌しなから
°加えたのち、亜硝酸イソアミル０．７７−を加え、ト
リエチルアミンで中和した。この溶液に上記還 元体のトリエチルアミン（０，６７，７）を含むＤＭＦ
　（１０コ）溶液を一１５℃で攪拌しながら加え、−１
５℃で１時 間、さらに４℃で１５時間攪拌した。

溶媒を留去し、残渣を水に溶解し酢酸 でｐＨを８−４に調整したのち、１− ブタノールで抽出した。溶媒を留去し たのち残渣をエーテルにより固化し。

さらにメタノール・エーテルから再結 晶し製品とした。収量２．５４９．融点１５６〜１５８
℃。

〔α麿−１３，２°（０−１，００，メタノール〕。　
　　　　Ｃ６ 元素分析　Ｃ工Ｈ８゜Ｎ、Ｏ□、・−）Ｈ２Ｏとして計
算値　０５０．４０．　　Ｈ６，４５，Ｎ　１１．８０
実験値　０５０．３５．　　Ｈ６，３５，Ｈ１１，２８
（５）　　Ｂｏａ　−Ｔｙｒ　−Ｇｌｙ　＝　Ｓｅｒ　
−Ｓｏｒ　−Ｓｅｒ　−ＮＨＮＨ。

ＢＱＯ−Ｔｙｒ　−Ｇｕｙ　−Ｓｅｒ　−５ｅｒ−タｅ
ｒ　−ＯＭｅｌ、２２ｇをメタノール・エタノール （１：１）２０−に溶かした溶液に ０℃でビドラジン水和物１．０−を加えた。混合物を室
温で２０時間放置した のち、沈澱物を濾別し、エタノールで 洗浄した。得られた粗生成物１．２２９をメタノールに
懸濁させ、エーテルに より沈澱させ目的物を得た。収量 １．１　ａ　９　、融点２１５℃（分解）。

Ｒｆｌ　Ｏ，４Ｂ　、　Ｒｆｌ　０．７３゜〔α〕曾−
８３．６°（０−１，０４，水）。

元素分析　’！１ｌＨ１ｌＮ？０１１として計算値　０
４８．９３．　　Ｈ６，４１，Ｎ　１５．９Ｂ実験値　
０４８．８７．　　Ｈ６，５８，Ｎ　１５．５３（１）
　　Ｚ　−Ｐｒｏ−Ｇｉｎ　−ＮＨｍＨＢｏｃＺ−Ｇｉ
ｎ−１１ＨＩＪＨＢｏｃ　７．８９９をメタノール中で
パラジウム黒を触媒として接 触還元した。濾過し、溶媒を留去した のち、残渣をエーテルで処理した（Ｒｆｌｏ、４７．Ｒ
ｆｌ　０．６４）　　。

Ｚ−Ｐｒｏ−ＯＨ４，４９９をＤＭＰ１５ｍに溶解した
溶液にＮ−メチルモルホリ ブ′ ン１．９８−及びクロルギ酸イソ←チル２．８４−を−
１８℃で攪拌しながら加えた。これに上記還元体のＮ−
メチル モルホリン（ｇ、２ｏ−）を含むＤＭＦ（１０ｍ）溶液
を−１８℃で攪拌しな がら加え一１０℃で１分間攪拌した。

溶媒を留去したのち、酢酸エチルに溶 解し常法により処理した。残渣をエー テルによす固化し、メタノール・エー テルから再結晶して製品とした。収量 ？、６１９　、融点１７７〜１７９℃。

Ｒｆｌ　Ｏ，７７、Ｒｆｌ　Ｏ，８６゜（α）Ｄ−７１
８°（０−２，５５，メタノール） 元素分析　’ｔｇＨｓｓＮｓｏ’ｒ　として計算値　０
５６．２６．　　Ｈ６，’ｌ’ｌ、　　Ｎ　１４．２５
実験値　０５６．１９．　　Ｈ６，８０，Ｎ　１４．２
９（２）　　Ｚ　−Ａｌａ　−Ｐｒｏ　−Ｇｉｎ　−Ｎ
ＨＩＪＨＢｏａＺ　−Ｐｒｏ　−Ｇｌｎ　−ＮＨＨＨＢ
ｏａ　　５．７６ｇをメタノール中でパラジウム黒を触
媒と して４時間接触還元した。濾過後溶媒 を留去し固化物を得た（　Ｒｆｌ　Ｏ，８５。

Ｒｆ璽　０．６５）。

Ｚ−Ａｌａ−ＯＨ２，６２９をＤＭＦ １５−に溶解した溶液にＮ−メチルモ ルホリン１．２９−及びクロルギ酸イソブチル１．５２
−を−１８℃で撹拌しながら加えたのち、上記還元体の
Ｎ−メ チルモルホリン（１，２９ｍ）を含む ＤＭＦ　（１５ｔｇ）溶液を一１８℃で攪拌しながら加
え一１０℃で１分間攪拌 した。溶媒を留去したのち、酢酸エチ ルで抽出し、エーテルにより固化させ。

メタノール・エーテルから再結晶した。

収量５．５４９．融点１１４〜１１７℃。

Ｒｆｌ　　Ｏ，７１，Ｒｆ履　０．８５゜〔α）”−８
８，４°（０−１，８５，メタノール）。

元素分析　’２６Ｈ３８Ｎ６０ｇ・＋Ｈ２０として計算
値　０５４．６３．　　Ｈ６，８８，Ｎ　１４．７０実
験値　０５．４．６８．　　Ｈ６，８９，Ｎ　１４．．
７６（ａ）　　Ｚ−Ａｒｇ　（Ｎｏ、　）　−Ａｌａ−
Ｐｒｏ−Ｇｌｎ−ＮＨＮＨＢｏｃ Ｚ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｇｉｎ−ＮＨＮＨＢｏｃ　２．２
５９をメタノール５〇−中でパラジウム黒 を触媒として１５５時間接触還した。

濾過後溶媒を留去し、残渣にエーテル を加えたのち乾燥させ固化物を得た （　Ｒｆｌ　Ｏ，２６、Ｒｆｌ　Ｏ，６０）。

Ｚ−Ａｒｇ（Ｎｏ、）−０Ｈ１，２９９を６Ｍア１０−
に溶かした溶液にＮ−メチルモ ルホリン０．４−及びクロルギ酸イソブチル０．４７−
を−１８℃で攪拌しながら加えた。この混合物に上記還
元体の Ｎ−メチルモルホリン（０，４ｍ）を含むＤＭＦ（ｌＯ
−）溶液を°−１５℃で攪拌しながら加えたのち一１０
℃で１ 分間攪拌した。溶媒を留去したのち。

残渣にエーテルを加えガム状物を得。

飽和炭酸水素す）　ＩＪウム溶液で洗浄し　゛１−ブタ
ノールψ酢酸エチル（１：　１゜１５０．１１／）に溶
解した。有機層を水で洗浄したのち１０％酢酸でｐＨ４
・０に調節し、１−ブタノールで飽和した ２％酢酸溶液で洗浄した。有機層をま とめて溶媒を留去したのち、残渣をエ ーテルから固化し、メタノール・エー テルより再結晶し°（目的物を得た。

収量２，７１９　、融点１５２℃（分解）。

Ｒｆｌ　Ｏ，５６、Ｒｆｌ　Ｏ，８２゜〔α〕背−３９
，８°（０−１，０２，ＤＭＦ）元素分析　’ｊ２Ｈ４
９Ｎｌ１０１１・＋Ｈ，Ｏとして計算値　０４９．７３
．　　Ｈ６，５２，Ｎ　１４゜９４実験値　０４９．６
５．　　Ｈ６，４２，Ｎ　１４．８８（４）　　Ｚ　−
Ａｒｇ　（Ｎｏ、　）　−Ａｒｇ　−Ａｌａ−Ｐｒｏ　
−Ｇｉｎ　−ＮＨＮＨＢｏ。

Ｚ　−Ａｒｇ　（Ｎｏ２）　−Ａｌａ　−Ｐｒｏ　−Ｇ
ｉｎ　−ＮＨＩＪＨＢｏｃ　　２，７８　ｇをメタノー
ル（５０＋ｄ）、酢酸（８−）及び水 （４２，ｇ）の混合液中パラジウム黒を触媒として４０
０時間接触還した。

濾過後、濾液を濃縮し、残渣を凍結乾 燥し、固化物を得た（ｕｒｌＯ，１７゜ＲｆｌＩ　Ｏ，
６３）。

Ｚ　−Ａｒｇ　（ＮＯ２）　−ＯＨ１−１６９をＤＭＦ
１０ｃ＋ｔＩＣ溶かした溶液にＮ−メチルモ　Ｄ。

ルボリン０．３６−及びクロルギ酸イソブチル０．４２
−を一１８℃で攪拌しながら加えた。この混合物に上記
還元体 のＤＭＦ　（１５ｓ＋ｔ）溶液を一１８℃で攪拌しなが
ら加えたのち一１０℃で１ 分間攪拌した。溶媒を留去し、残渣を 酢酸エチルから固化させた。得られた 粗生成物（Ｌ２．５９）　　を１−ブタノールに溶解し
、２％酢酸溶液で洗浄した。

溶媒を留去したのち残渣をエーテルに より固化し、さらにメタノール・酢酸 エチルから再結晶を行ない製品とした。

収量２．３９　ｇ、融点１６６〜１６８℃。

Ｒｆｌ　００３７　、　Ｒｆｌ　Ｏ，７？。

〔α〕￥）−ａａ、ａｏ（０−１，１５，メタノール）
元素分析　Ｃｌ１ｌＨ６ｊＮｊ５０１２・ＯＨ，０ＯＯ
Ｈ・２Ｈ２０として 計算値　０４８゜０４１．　　Ｈ６，９５，Ｎ　２］、
、０１実験値　０４７．８５．　　Ｈ６，６２，’Ｎ　
２１．０２（リ　　Ｚ−’ｌｈｒ　−Ｇｌｙ−ＮＨＮＨ
。

Ｚ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−ＯＭｅ　４．３９のエタノール（
８０ｍ）溶液にヒドラジン水和物 フ一を０℃で加え、室温で２０時間放 置した。沈澱を濾別し、濃硫酸及び五 酸化リン上で減圧乾燥した。得られた 粗生成物（４，２２９）を熱エタノールに懸濁し、冷却
した後、沈澱物を濾取 した。収ｆｉＬ９７ｇ、融点１７０〜 １７１℃。

Ｒｆｌ　Ｏ，５７、Ｒｆｌ　Ｏ，８２゜〔α〕蟹−Ｌｌ
’　（０−１，８８，Ｄ　Ｍ　Ｆ’　）元素分析　Ｃｌ
４Ｈ２ｏＮ４０５として計算値　０５１．８５．　　Ｈ
６，２２，Ｎ　１７．２７実験値　０５１．６８．　　
Ｈ６，１９，Ｎ　１７．２４（２）　　　　　Ｚ−Ｖａ
ｌ−Ａｅｐ（ＯＤｕｔ）−Ｇｌｕ（ＯＢｕｔ）２Ｚ−Ａ
ｓｐ（ＯＢｕｔ）　−ＯＨ６，４７９のＴＨＦ（５０−
３溶液にＮ−メチルモルポリ ＞　２２　ｖｄ及びクロルギ酸イソブチル２．６４□−
を−１８℃で攪拌しながら加えた。

この溶液にＨ−Ｇｌｕ　（０Ｂｕｔ　）、塩酸塩５．９
２９のＮ−メチルモルホリン （２，２＊／　）を含むＴＨＦ　（５ｏ＠ｔ）の溶液を
一１８℃で攪拌しながら加えたのち 一１０℃で１分間攪拌した。溶媒を留去したのち、残渣
をエーテルに溶解し、常法により処理した。残渣をｎ−
ヘキサンで２回処理したのち、減圧乾燥してジ ペプチドＺ　−Ａｓｐ　（ＯＢｕｔ）−Ｇｌｕ（ＯＢｉ
ｚｔ）２１０．０４９（油状物）を得た（ｎｆ　Ｏ，８
６゜ ＲｒＯ，８３）。得られた油状物をメ タノール中でパラジウム黒を触媒とし て２時間接触還元を行なった（Ｒｆ’ ０．７３　、　Ｒｆ　　Ｏ，８）。濾過し、溶媒を留去
したのち、残液を減圧乾燥した。

Ｚ−’Ｖａｌ−ＯＨ４，０２９のＴ　ＨＦ（３０ｍ）溶
液にＮ−メチルモルホリ ン（１，７６、／）及びクロルギ酸イソブチル２．１１
−を−１８℃で攪拌しながら加えた。この溶液に上記還
元体のＮ −メチルモルホリン（１，７６−ｄ）を含むＴＩＰ（８
０ｇＩり溶液を一１８℃で攪拌しながら加えたのち、−
１０℃で １分間攪拌した。溶媒を留去したのち。

残渣をエーテルに溶解し、常法により 処理した。残渣をｎ−ヘキサンにより 結晶化し、さらに酢酸エチル・ｎ−ヘ キサンから再結晶を行ない製品とした。

収量８．０９９　、融点１４５〜１４７℃０Ｒｆｌ　Ｏ
，？　８　、　Ｒｆｌ　Ｏ，８２゜〔α〕腎−８５，９
°（ａ−ｉ、４ｇ、メタノール）元素分析　０８４Ｈ，
、Ｎ３０．。として計算値　０６１．５２．　　Ｈ８，
０５，Ｎ　６．３３実験値　０６１．．８７．　　Ｈ７
，９９，Ｎ　６．４７（３）ｚ−工１ｅ　−Ｖａｌ　−
Ａｓｐ　（０Ｂｕｔ　）　−Ｇｌｕ（ｏｎｕｔ）。

Ｚ　−Ｖａｌ−Ａｏｐ　（０Ｂｕｔ　）　−Ｇｌｕ　（
０Ｂｕｔ　）。

５．３４９をメタノール中でパラジウム黒を触媒として
２０時間接接触光した （　Ｒｆｌ　Ｏ，６８、ＲｆＩＩｏ、７６　）。濾過し
溶媒を留去したのち残渣を減圧乾燥し た。

Ｚ−１１ｅ−ＯＨ２，１８９をＴ　ＨＩＦ５０−に溶か
した溶液にＮ−メチルモ ルホリン０．８８５−及びりｐルギ酸イソブチル１．０
６−を−１８℃で攪拌しながら加えたのち、これに上記
還元体 のＮ−メチルモルホリン（０，８８５ｍｇ）を含むＴＨ
Ｆ（ａｎｄ）溶液を一１８℃で攪拌しながら加えた。−
１０℃で１ 分間攪拌したのち、溶媒を留去し酢酸 エチルに溶解した。常法処理により得 られた酢酸エチル抽出物を石油エーテ ルにより固化し、酢酸エチル・ｎ−ヘ キサンから再結晶を行ない製品とした。

収量ｆｉ、４５９．融点１８１〜１８２℃。

Ｒｆｌ　Ｏ，８Ｑ　、　ＲｆｌＩ　Ｏ，９８。

〔α〕腎−４８，２°（０−ＬＯ８，メタノール） 元素分析　０４０Ｈ６４Ｎ４０１１として計算値　０６
１．８４．　　Ｈ８，３０，Ｂｌ　７．２１実験値　０
６１．５３．　　Ｈ８，１６，Ｎ　７．２１（４）　　
Ｚ　−Ｔｈｒ　−Ｇｌｙ−工Ｒｅ　−Ｖａｌ　−Ａｓｐ
　（０Ｂｕｔ　）−Ｇｌｕ（ＯＢｕｔ）２ ２−よりｅ　−Ｍａｌ　−Ａｓｐ　（０Ｂｕｔ　）　−
Ｇｌｕ　（ｏｎｕｔ）。

２．５２９をメタノール中パラジウム黒を触媒として２
４時間接触還元した。

濾過し、溶媒を留去したのち残渣をｎ −ヘキサンで処理し、減圧乾燥して固 化物を得た（　Ｒｆｌ　Ｏ，６４、Ｒｆｎ　Ｏ，８２）
Ｚ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−ＮＨＮＨ２１，２６９をＤＭＦ　
１５−に溶かした溶液に６Ｎ−塩酸／ジオキサン１．９
４−及び亜硝酸イソアミル０．５２＠ｔを一１８℃で攪
拌しながら加えた。トリエチルアミンで。

中和したのち、上記還元体のトリエチ ルアミン（ｏ、４５−）を含むＤＭＦ （２ｏ−）溶液を、加え、−１５℃で２時間、さらに４
℃で１８時間攪拌した。

溶媒を留去したのち、残渣にＩＮ−ク エン酸を加えて沈澱物を得、メタノー ル・エーテルから再結晶を行ない製品 とした。収ｉ２．５５９．融点２１６〜２１８℃。

Ｒｆｌ　　Ｏ，９２、Ｒｆ画　０．９４゜〔α〕曾−２
２．６°（０−１，１３，ＤＭＦ）元素分析　０４ｅｌ
Ｈ１４’６０１４として計算値　０５９．０Ｂ、　　Ｉ
（７，９Ｂ、　　Ｎ　８．９９実験値　０５８．８３．
　　Ｈ７，９２，Ｎ　８．９６酸加水分解物中のアミノ
酸の比率 Ａｓｐ　１．０４　、　Ｔｈｒ　１．０８　。

Ｇｌｕ　　１．０４　、　　Ｇｌｙ　　１．０９　。

Ｖａｌ　　Ｏ，９３、工１ｅｏ、８６ 例２：　　Ｚ−Ａｒｇ（ＮＯ，）−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｐ
ｒＯ−ＧＬｎ−Ｔｈｒ　−Ｇｌｙ−工ｉｓ−’Ｖａｌ−
Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）−Ｇｌｕ（ＯＤｕｔ　）ｔの製法 Ｚ　−Ｔｈｒ　−Ｇｌｙ−工Ｒｅ　−Ｖａｌ　−Ａｓｐ
　（０Ｂｕｔ）　−Ｇｌｕ（ＯＢｕｔ）２１．１２９を
メタノール（５ｏ−）及びＤＭＦ　（１０＊）の混液中
でパラジウム黒を触媒として１８時間接触還元した。濾
過後溶媒を留去し、残渣を五酸化リン上で減圧乾燥して
固化物を得た（　Ｒｆｌ　Ｏ，６７、Ｒｆｌｌｏ、７９
　）。

ｚ　−Ａｒｇ　（Ｎｏ２）　−Ａｒｇ　−Ａｌａ　−Ｐ
ｒｏ　−Ｇｉｎ　−ＮＨＮＨＢＯＩ：！１．８２９をト
リフルオロ酢酸４艷に溶解し。

室温で４５分間放置したのち、エーテルにより沈澱させ
ヒドラジドを得た（　Ｒｆ’　０．１　Ｇ　。

Ｒｆ’　０．６９　）　。コｆ）　ヒドラジドをＤＭＦ
ｌｏｆｉ（に溶解した溶液に６Ｎ−塩酸／ジオキサン０
．７２−及び亜硝酸イソアミ／Ｌ−０，１９８−を加え
一１８℃で攪拌した。トリエチルアミンで中和したのち
、トリエチルアミン（０，ｉｏａ＋ｙ）を含むＤＭＦ　
（２０ｍ）に溶解した上記還元体の溶液を一１０℃で攪
拌しながら加えた。

２時間攪拌したのち、さらに２０時間４℃で攪拌した。

溶媒を留去し、残渣を水により固化させ粗生成物を得た
（　１．７５９　）。ＤＭＦ−メタノール−酢酸エチル
より再結晶を行ない製品とした。収Ｊ１．２３．融点２
０２〜２０４℃。

Ｒｆｌ　Ｏ，４０、Ｒｆ”　０．’８２゜〔α）２６−
３０．２°（０−１，０２，ＤＭＦ　）。

元素分析　０．、Ｈ，、、Ｎ、９０２．　・０Ｈ３００
０Ｈ・５Ｈ２０として 計算値　Ｃ５θ４２．　　Ｈ７，５９，Ｎ　１５．３０
実験値　０５０．５９．　　Ｈ６，９９，Ｎ　１５．５
０酸加水分解物中のアミノ酸の比率 Ａｒｇ　１．８７　、　Ａｓｐ　１．０５．　’１ｌｈ
ｒ’　０．９７゜Ｇｌｕ　２．１０．　Ｐｒｏ　１．０
３．　Ｇ１７１．０１゜Ａｌａ　１．０２　、　Ｖａｌ
　１．０１　、工１ｅｏ、９４例８　：　　Ｉ３ｏｃ−
Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−８ｅｒ−８ｅｒ−８ｅｒ−Ａｒｇ−Ａ
ｒｇ　−Ａｌａ　−Ｐｒｏ　−Ｇ１７１−　Ｔｈｒ　−
Ｇｌｙ−工１ｅ−ｖａｌ−Ａｓｐ（０Ｂｕｔ）　−Ｇｌ
ｕ（ＯＢｕｔ）２の製法Ｚ　−Ａｒｇ　（Ｎ　Ｏ２）　
−Ａｒｇ　−Ａｌａ　−Ｐｒｏ　−Ｇｉｎ　−Ｔｈｒ　
−Ｇｌｙ−工１ｅ　−Ｖａｌ　−Ａｅｐ　（ＯＢｕｔ）
−Ｇｌｕ　（ＯＢｕｔ）。

０．１３８９をＤ　Ｍ　Ｆ　（４０”　）　＊酢酸（２
−）及び水（１０ｍ）の混液中でパラジウム黒を触媒と
して４０時間接触還元した。濾過し。

溶媒を留去したのち、残渣にエーテルを加えるとガム状
物が得られ、これを凍結乾燥した（　Ｒｆｌ　Ｏ，１８
、Ｒｆｌ　Ｏ，６５）。

Ｂｏｃ　−Ｔｙｒ　−Ｇｌｙ　−Ｓｅｒ　−Ｓｅｒ　−
Ｓｅｒ　−ＮＨＮＨ７０，８９７９をＤＭＦＩＯ−に溶
解した溶液に６Ｎ−塩酸／ジオキサン０．３２−及び亜
硝峻イソアミル０．０８６４を−１８℃で攪拌しながら
加えた。トリエチルアミンで中和したのち、混合物にト
リエチルアミン（０，１８ｍｌ　）を含むＤＭＩＦ　（
１５ｍ＜）に溶解した上記還元体の溶液を一１５℃で攪
拌しながら加えた。

−１５℃で２時間攪拌したのちさらに４℃で１５時間撹
拌した。溶媒を留去したのち、残渣をエーテルより沈澱
させ、得られた沈澱物を５０％酢酸水溶液に溶解し、濾
過したのち濾液を５０％酢酸水溶液を用いたセファデッ
クスＧ−２５カラムクロマトグラフイー（３φｘｉ３８
ｃｍ）により精製した。溶出ピークは薄層クロマトグラ
フィー及び２８０　ｎｍにおける吸光度により求めた。

このピークフラクションを収集し凍結乾燥して製品とし
た。

収量６３０”９ｍ融点２４０℃（分解）。

Ｒｆｌ　Ｏ，２Ｂ　、　Ｒｆｌ　Ｏ，７３゜〔α〕甘せ
６６．２°（０−１，０１，５０％酢酸水溶液）。

元素分析　０１１８Ｈ１４２Ｎ２３０！＠・２０Ｈ３０
００Ｈ・５Ｈ，０として 計算値　０５０．１９．　１１７．５５．　　Ｎ　１４
．ｆ！３実験値　０５０．０４．　　Ｈ７，１６，Ｎ　
１４．５６酸加水分解物中のアミノ酸の比率 Ａｒｇ　１．９８．　Ａｓｐ　Ｏ，９９，Ｔｈｒ　６．
８２゜Ｓｅｒ　１．８８．　Ｇｌｕ　２．００．　Ｐｒ
ｏ　１．０８＋Ｇｌｙ　　２．００．　　Ａｌａ　　１
．９６．　　Ｖａｌ　　１．０　１゜■Ｉｓ　　Ｏ，９
４、Ｔｈｙ　　Ｏ，９５例４　：　　Ｚ−Ａｎｎ−ＩＩ
ｙｓ（Ｔｏｓ）−Ｐｒｏ−４’ｈｒ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−
Ｇｌｙ　−Ｓｅｒ　−Ｓｅｒ　−Ｓｅｒ　−Ａｒｇ、　
−Ａｒｇ　−Ａｌａ　−Ｐｒｏ　−Ｇｉｎ　−’Ｉｈｒ
　−Ｇｌｙ−工Ｒｅ　−Ｖａｌ　−Ａｓｐ　−Ｇｌｕ−
ＯＨの製法 Ｂｏａ　−’［’ｙｒ　−Ｇｌｙ　−Ｓｅｒ　−Ｓｅｒ
　−Ｓｅｒ　−Ａｒｇ　−Ａｒｇ　−Ａｌａ　−Ｐｒｏ
　−Ｇｉｎ　−Ｔｈｒ　−Ｇｌｙ−工Ｒｅ　−ｖａｌ　
−Ａｓｐ（ｏｎｕｔ）−Ｇｔｕ（ｏＢｕｔ）２５　ａ　
９　ｒｎｇをアニソール（０，２ｇＬｔ）　　を含むト
リフルオロ酢酸（１−５ｍｇ）に溶解させ、室温で４５
分間放置したのちエーテルから沈澱さぜた（Ｒｆｌｏ、
ｏ　ｏ　、　ＲｔＨＯ，ａ、５　）。

Ｚ　−Ａｓｎ−Ｌｙｓ　（−Ｔｏｓ）　−Ｐｒｏ−Ｔｈ
ｒ−Ｇｌｙ−Ｎ２Ｈ３４ＢＢ１ｎｇのＤＭＦ（１０ｍｇ
）溶液に６Ｎ−塩酸／ジオキサン０．２６６−及び亜硝
酸イソアミルの１０％ＤＭＦ溶液１０−を−１８℃で攪
拌しながら加えたのち、上記沈澱物のＤＭ’Ｆ　（１Ｏ
ｄ）溶液を一１５℃で攪拌しながら加えた。−１θ℃で
２時間攪拌したのちさらに４℃で１８時間攪拌し、その
後、濃縮乾固した。得られた物質を５０％酢酸水溶液を
用いたセフアゾ、クスＧ−２５カラムクロマトグラフィ
ー（３φｘ１４Ｑｃｍ）により精製した。前述と同様な
方法でピークフラクションを収集し、凍結乾燥したのち
ＤＭＦ−酢酸エチルから再結晶して目的物を得た。収量
５２Ｂ＋１９．融点２１（１）（分解）。

Ｒｆｌ　Ｏ，２７、Ｒｆｌ　Ｏ，５６゜〔α〕背−６３
．７°（ｏ−’１Ｌ５０％酢酸水溶液）。

元素分析　Ｃ１０？Ｈ１６！Ｎ５ｙＯｓｓＳ・２０Ｈ８
Ｃｏｏ）ｉ・６Ｈ２０として 計算値　ａ　４，８．７１．　　Ｈ６，４８，Ｎ１５Ｊ
５実験値　０４８．６４．　　Ｈ６，３８，Ｎ　１６．
２８酸加水分解物中のアミノ酸の比率 Ｌｙｓ　Ｏ，９５，Ａｒｇ　２．０１．　ＡＢｐ　１．
９９゜Ｔｈｒ　１．７　：３．　Ｓｅｒ　２．３５．　
Ｇｌｕ　２．（１２゜Ｐｒｏ　２．０５．　Ｇｌｙ　３
．１５．　Ａｌａ　１．０　？。

’Ｖａｌ　　１．０２　、　工１ｅ　Ｏ，９４、Ｔｙｒ
　１．０７例５　：　　Ｈ−Ａｅｎ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ’
−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−８ｅｒ−
３ｅｒ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｐｒｏ　−Ｇｌｎ　
−Ｔｈｒ　−Ｇｌｙ−工１ｅ　−Ｖａｌ　−Ａｓｐ　−
Ｇｌｕ　−ＯＨの製法 Ｚ　−Ａｓｎ　−Ｉ／ｙａ　（Ｔａ２）　−Ｐｒｏ　−
’Ｉｈｒ　−Ｇｌｙ　−Ｔｙｒ　−Ｇｌｙ　−Ｓｅｒ　
−Ｓｅｒ　−Ｓｅｒ　−Ａｒｇ　−Ａｒｇ　−Ａｌａ　
−Ｐｒｏ　−Ｇｌｎ−Ｔｈｒ　−Ｇｌｙ−工１ｅ−Ｖａ
ｌ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−ＯＨＩ　Ｑ　ｌｎｇ及びＨ−Ｔｈ
ｒ−Ｐｒｏ−ＯＨ１２０１１９を一５０℃で攪拌しなが
ら液体アンモニア５０−に溶解した。この溶液に少量の
ナトリウムを無水条件下−５０℃で攪拌しながら加え、
溶液の色が青色を呈して１０秒後に塩化アンモニウム１
ｇを加えアンモニアを除去した。残渣をＩＮ−塩酸でｐ
Ｈ３に調節し、水で５−に希釈した。不溶物を遠心分離
により除去し、上清をＩＭ−酢酸を用いたセファデック
スＧ−２５カラムクロマトグラフイーにより精製しピー
クフラクションを収集し凍結乾燥して製品とした。収量
６８・３ｍ９．融点１９３°（分解）。

Ｒｆ　　Ｏ，２２，Ｒｆ　　Ｏ，５４゜〔α〕賢−７９
．３°（０−α６６、ＩＭ−酢酸）。

元素分析　０．、Ｈ，、Ｈ，Ｏ，・ｉｏＨ，Ｃｏｏｎ・
、ｌｌ０ｊ！￥Ｈ，Ｏとして 計算値　Ｃ４８・５５　　７．０８　　１５・８７４Ｉ
４１゜■４°　　　６．７９°　　　１６．０８実験値
　０４３．６２．　　Ｈ６，３２，Ｎ　１５．７５酸加
水分解物中のアミノ酸の比率 １″ｙｒＯ，９０，工Ｒｅ　Ｏ，８６、Ｖａｌ　Ｏ，８
９。

Ａｌａ　１．０９．　Ｇｌｙ　８．１８．　Ｐｒｏ　２
．０２゜ｏｌｕ　１．８８．　Ｓｅｒ　２．７８．　Ｔ
ｈｒ　１．８２゜Ａｓｐ　２．００　、　Ａｒｇ　２．
００　、　ＴＪｙａ　０．９５例６：　放射性ヨウ素化 ガラス製試験管に蒸留水に溶解した例５で得たヘンエイ
コサペプチド５μ９（５μｌ　）及びＩ　Ｍ　’Ｊ　ン
ｆｉｌ緩衝液（ｐｕ　７．４　）　２　ｏ’ｐｔを加え
た。

Ｎａ　Ｉｔ６エ　１　ｍｏｉ及び酸化剤としてクロラミ
ンＴ２０μｇ（水溶液、１０μｔ）を加えてよく混和し
約３０秒後、１００／７１（水溶液、　５０１１１　）
のソジウムメタビサルファイトで反応を停止させた。こ
の混合液をセファデックスＧ−Ｎ。

のカラムで１Ｍ酢酸を溶出液としてゲル濾過した。各７
ラクシヨンの放射活性を測定し。

そのピークフラクションを分取して１２５工標識ヘンエ
イコサペプチドを得た。約２００　ｍＯｉ／ｌｎｇの比
放射活性が得られた。

例７：　抗原の製造 例５で得たヘンエイコサペプチド５１ｎ９及び牛血清ア
ルブミン１０１１１９を水Ｌ５−に溶解した。この溶液
に水溶性カルボジイミド塩酸塩１０ｏｍｇを０℃で攪拌
しながら加え、０．ＩＮ塩酸でｐＨを５．５〜６．０に
調製したのち０℃で２時間さらに４℃で２０時間攪拌し
た。その後１反応混合物に酢酸を２滴加え１Ｍ酢酸を溶
出液とするセフＴデ、クスＧ−１０カラムクロマトグラ
フィーにより精製した。溶出ピークは薄層クロマトグラ
フィー及び２８０ｎｍの吸光度より求めた。このピーク
フラクションを凍結乾燥して免疫用抗原を得た。

例８：　抗体の製造 例７で得た免疫用抗原１１１１９（０，５１１１９）を
生理食塩水に溶解し、これを１ｓｔ（０，５ｓ／）のフ
ロイントの補助液（ｃｏｍｐｌｅｔｅ　１ｒｒｅｕｎａ
７ｓ　ａｄｊｕｖａｎｔ）に懸濁し、家兎〔モルモット
〕に皮下注射した。２週間後回様な方法で抗原Ｑ、５ｍ
ｇ（０，２５１１１９）を用い追加免疫した。３回乃至
４回の注射後１０日後に採血し抗血清を得た。

例９：　ラジオイムノア、セイ ０、ＯＩＭリン醗緩衝液（ｐ）ｌ　７．４　、０．５％
牛血清アルブミン及び０．０２５Ｍエチレンジアミン四
酢酸ナトリウム含有）０．４−と検体または同じ緩衝液
に溶かした標準液０．１−および適当な濃度に希釈した
抗血清０．１−並びニ１２″工標識ヘンエイコサペプチ
ド・０．１−を混合し４℃で４８時間放置した。反応液
をデキストラン炭末法の常法に従って処理し、得られた
上清の放射能を計測した。第１図のＡはこのようにして
得られた標準曲線である。またＢはＲｉｎｄｏｒｋｎｅ
ｃｈｔらの方法（Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｏｈｅｍ、。

２５３：２７６９〜２７７６（１９７８））　　に準じ
てヒト血清より得られた工ＧＩＩ′−■を標準物質とし
て用いて得られた標準曲線である。

【図面の簡単な説明】

図面は標準曲線である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 式 ％式％ で表わされるアミノ酸配列を有するヘンエイコサペプチ
   ド