JPS5970621A - 抗原抗体複合体沈着疾患の治療剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はヒトガンマΦグロブリンの一分屑である遊離の
ＦＣフラグメントを有効成分とする抗原抗体複合体の細
胞及び組織への沈着が原因となり発症する疾患、例えば
全身性エリトマト−デスや慢性関節リウマチ等の膠原病
、原発性糸球体腎炎等の新規治療剤に関する。

現在、これらの疾患の治療には副腎皮質ホルモン、免疫
抑制剤、非ステロイド性抗炎症剤、金塩製剤、Ｄ−ペニ
シラミン製剤等が用いられているが、これらは根治的治
療剤とはいえず、むし・う長期連用による重篤゛な副作
用の原因ともなり、より有効な治療剤の開発が望まれて
いた。

これら抗原抗体複合体沈着が引き金となっている諸疾患
において、ヒトガンマ・グロブリンのＦＣフラクメント
　（ヒト昂フラグメントと略記することもある。）を投
与することにより、この複合体の溶解又は顕著な消失が
起こり、これら疾患の原因を除去することによる根治的
療法を本発明者が見い出したのである。

ところで、ＮＺＢ／ＷＦｔマウスは自然発生する自己免
疫病のモテルとして知られ、ループス腎炎様の腎病変が
高頻度に発生することが認められている。この腎病変は
組織学的には２ケ月令ごろから見られるものであるが、
８ケ月令ごろには金側が組織学的病変を示す。この時点
から蛋白尿を呈１−るものが増してきて、ときにネフロ
ーゼ症候群を示［７て死亡する。

蛋白尿が認められたＮＺＢ／ＷＦｌマウスを用い、これ
にマウスガンマ・グロブリンのＦＣフラグメント　（マ
ウスＦ。フラグメントと略記することもある。）を静脈
内投与したところ蛋白尿の顕著な減少又は消失が認めら
れ、ネフローゼにより死亡する例は認められなかった。

腎組織の検策において、該Ｆ。

フラグメント非投与群ではその血管及び糸球体毛細血管
において抗原抗体複合体、例えば免疫グロブリンＧ（Ｉ
ｇＧ）の沈着が認められたが該Ｆ。フラグメント投与群
ではこの様な沈着が殆んど認められなかった。

一方、ＦＣフラグメントの効果をｉｎ　ｖｉｔｒｏで確
認するためにＮＺＢ／ＷＦ＋マウス腎組織全光学顕微鏡
と螢光抗体法にて腎炎を確認後、これら腎凍結切片にマ
ウスＦＣフラグメント溶解液または対照として食塩添加
リン酸緩衝液を滴下し、螢光抗体法で観察した結果、対
照群では糸球体沈着１ｇＧが顕著に認められたが、マウ
スＦＣフラグメント処理群では殆んど消失しているか或
いは軽微に認められる程度であった。

更に、ヒトにおける効果を確認するため、ヒト病変腎組
織（例えば膜性増殖性腎炎、ループス腎炎、膜性腎症）
を用い、前記と同様の方法によりヒトＦＣフラグメント
の効果を調べた結果、対照群では糸球体沈着１ｇＧが広
範に認められだが、ヒトＦＣフラグメント添加群では全
く乃至殆んど認められなかった。

ＦＣフラグメントの作用機序について糸球体腎炎を例に
とって説り１すると以下の如くである。

糸球体腎炎の場合、抗原抗体複合体は血管の種々の場所
に沈着するが、とくに腎糸球体毛細血管基底膜上に著り
１に沈着する。その結果、補体系を活性化させ血管作動
性アミンを放出させる。更に本発明者の知見によると、
抗原抗体複合体自体が抗原となり、更に抗体（リウマト
イド因子）の結合か起こり連鎖的により大きな沈着物を
形成し、糸球体腎炎が発症する。この病変部に、例えば
静脈投与されたｐｃフラグメントが到達すると、抗原抗
体複合体沈着物にＦＣフラグメントが過ＩＩ＋に結合し
、その沈着物の構造に変化が生じ、沈着物中の抗原抗体
結合が解裂踵これにより抗原抗体複合体が崩壊踵沈着物
の溶解が生じるものと認められる。

・二）Ｆ。フラグメントは公知の物質であり、例えば次
の様にして製造、精製される。

８０ｒｎＭシスティンの存在下で人由来のガンマ・グロ
ブリン（］、　６６．５％　５０　ｍｔをｐＨ７，３，
３７℃で６〜１２時間プラスミン７０ｃｕ／ｇ蛋白で消
化した後、セファデックス−Ｇ　２００カラム（５×９
０ｃｍ）を用い流出率４＋Ｏｍｔ／１１９間でゲルｒ過
を行ない、この際未消化の７Ｓ画分と３．５Ｓ画分（’
　ＦＣ＋　Ｆａｂ）とが分離され、ついでａ、　５　Ｓ
　ｒＩｉＩ１分をＣＭ−セルロースカラム（７，６Ｘ３
０ｃｍ）でクロマトグラフィーを行なうか、抗Ｆａｂア
ガロース免疫吸着体によりＦａｂ画分を除去し、その残
余Ｆ。両分をとる。このＦＣ画分をプール後５０％飽和
硫安で濃縮し、０．２％ＮａＣ１て１〜２昼夜透析する
とヒトＦ。フラグメントが結晶化してくる。この結晶を
再度分離溶解して０．２％ＮａＣ１で透析し、精製ヒト
ＦＣフラグメントを得る。

この精製ヒ１−ＦＣフラグメンＨ，公知の注射剤の製造
法に従い、必要に応じてグリシン、メチルチオレート等
の安定化剤・防腐剤を添加し、これを凍結乾燥し、水剤
を製することができる。

本則の投与経路は通常静脈内投与であるが、筋肉内又は
患部局所への注入も可能である。

抗原抗体複合体沈着疾患に対する用法用量は体重１　ｋ
ｇ当りヒトＩ？。フラグメントとして５〜３０　ｍｇ又
は成人１回３００〜１５００　ｍｇを１日１回、１〜数
週間連日静脈内投与が標準的であるが、症状に応じ投与
量の増減並びに免疫抑制剤等の併用を行ってもよい。

水剤は、免疫学的理論に基つくこれら難治性疾患の病因
の解析からその有効性が理論づけされ、抗原抗体複合体
の細胞及び組織への沈着を原因とする疾患に適用てきる
画期的な治療剤である。

以下にＦ。フラグメントの抗原抗体複合体沈着物の溶解
効果について、実験例を挙げて更に具体的に説明する。

実施例 ８ケ月令のＮＺＢ　／　ＷＦ１雄マウス２５匹を無作為
に対照群（１３匹）とマウスＦ。フラグメント処置群（
１２匹）に分け、マウスＦＣフラグメントクｌ、置群に
はマウスＦＣフラグメント６０　ｍ９／　ｋｇｆ　１日
おきに１２日間静脈内投与した。対照群にはマウスＦＣ
フラグメント処１Ｈ群と同様のスケジュールで生理食塩
水を投力した。表１に示す如く対照群では１５ケ月で１
３匹中５匹が生存するのみであったが、マウスＦＣフラ
グメント処置群ては１２匹金側の生存が認められた。マ
ウスＦＣフラグメント処置群において該フラグメント投
与前には、蛋白尿（）　３００　ｍｇ／　Ｔ１１　）は
金側に認められたが、該フラグメント投与後でｔ／′ｉ
１２匹中６匹に認められた。

また、対照群においては５匹の生存マウスすべてに蛋白
尿が認められた。

表ＩＮＺＢ／ＷＦ１マウスにおけるマウスＦＣフラグメ
ントの効果 生　　存　　率 処置前（８ケ月令）１３／１３（１３）　　　　１２／
１２（１２）処置後（１５ケ月令）　　５／１３（５）
　　　　１２／１２（６）（）；　　蛋白尿を認めた因
数 実施例 ＮＺＢ　／　ＷＦｌマウス腎組織を光学顕微鏡と螢光抗
体法にてループス様腎炎を確認後、これら腎凍結切片に
マウスＦＣフラグメント溶解液（０，０１〜５％）を滴
下し１時間反応後３０分間洗浄した。この操作２６回繰
り返し最終的に螢光抗体法で観察した。対照としてマウ
スＦＣフラグメントの代りに食塩添加リン酸緩衝液（ｐ
Ｈ７，２）を滴下した。表２に示す如く、マウスＦ。フ
ラグメント溶解液（０，５゜１．０，５．０％）を滴下
した組織において沈着１ｇＧが約半数の糸球体では全く
消失し、残りの糸球体では一部メザンジウムに軽微に認
められるのみであった。しかし、対照として用いた食塩
添加リン酸緩衝液では糸球体沈着Ｌ（ＪＧが広範に認め
られた。

表２　　ＮＺＢ　／　ＷＦｔマウス腎糸球体におけるＩ
ｇＧ沈着に対するマウスＦＣフラグメントの効果対　　
　照　　　　　　　　　　　　　　　　十０．０１　　
　　＋ ０．１　　　　　± ０．５− １．０− 実施例 腎疾患４者（膜性腎症、膜性増殖性腎炎、ループス腎炎
）より得られた腎生検組織を４ノ・の薄切片にし、その
上にヒトＦＣフラグメント溶解液（０，０１〜５％）全
滴下し、１時間反応させその後食塩添加リン酸緩衝液に
て３０分間洗浄した。この操作を６回繰り返し、その後
螢光抗体法にて観察した０対照としてヒトＦＣフラグメ
ントの代りに食塩添加リン酸緩衝液（ｐＨ７，２）　’
を滴下した。ヒトＦＣフラグノント溶解液（０，５、１
，０、５，０％）滴下により膜性腎症、膜性増殖性腎炎
、ループス腎炎のいずれの疾患においても糸球体沈着１
ｇＧは消失した。

一方対照では糸球体沈Ｎ　Ｌ！ＪＧの消失が認められな
かった。その結果を下表３に示した０ ＋：著名な沈着、±：軽度な沈着、−：沈着なしＭＧ：
膜性腎症 ＭＰＧＮ：膜性増殖性腎炎 ＬＮ：ルーブス腎炎

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. ヒトガンマ・グロブリンのＦ。フラグメントを有効成分
   とする抗原抗体複合体の細胞又は組織沈着を原因とする
   疾患の治療剤。