JPS597316B2 - ネオスラマイシンａまたは、およびｂの製造法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は抗生物質ネオスラマイシンＡＣ以下Ａ物質と呼
称する）捷たけ、およびネオスラマイシンＢ（以下Ｂ物
質と呼称する）を含有する水溶液からそれらの濃厚溶液
を収率よく採取・製造する方法に関するものである。

本発明に係わるＡ物質およびＢ物質は本発明者らによっ
て発見された新抗生物質で、諸種の細菌に弱い抗菌作用
しか示さないが、マウス白血病Ｌ−１ ２ １ ０細胞
およびある種の癌細胞の発育を強く抑制し、制癌剤とし
て用いられる（特願昭５０−１２３２５６号、昭和５０
年１０月１５日出願特願昭５１−２５９号、昭和５１年
１月１日出願及びジャーナル・オブ・アンチビオチック
ス第２９巻１月号９３〜９６頁（１９７６））。

本発明に係わるＡ物質およびＢ物質は前記の特願昭５０
−１２３２５６号および特願昭５１−２５９号で明らか
にされた如く、放線菌 （ Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ） Ｍｅ ９ １ ６
−Ｃ ４株の培養によって蓄積される抗生物質で、Ａ物
質およびＢ物質の性状は次に示すとおりである。

Ａ物質は白色粉末で明確な融点を示さず１０５℃付近か
ら徐々に溶融し１３２〜１４７℃で発泡分解する。

比旋光度は〔α〕２６Ｄ＝＋２７２°（ｃＯ．５２、ジ
オキサン）の値を得た。

元素分析値はＣ５７．４６係、Ｈ５．７６係、Ｎ９．８
４係を示し、バージャー秋谷法による分子量の測定結果
（２５０〜３００）からＣ１３ Ｈ１４Ｎ２ ｏ，
・能マススクベクトルによって証明された（実測値＝ｍ
／ ｅ ２ ６ ２ ． ０ ９ ３ ４ ｐ Ｃ１３
Ｈ１４Ｎ２ ０４の理論値：２６２，０９５２ ）。

Ａ物質は低級アルコール、クロロホルム、ジオキサンに
よく溶け、水に僅かに溶け、エーテル、ｎ−ヘキサンに
は難溶あるいは不溶である。

ライドンースミス反応、レッドテトラゾリウム反応は陽
性であり、ニンヒドリン反応は僅かに陽性で、エールリ
ツヒ、坂口反応は陰性である。

Ａ物質はシリカゲルの薄層クロマトグラフイー（展開系
クロロホルムーメタノール１０：１容）でＲｆ値，０．
５ ７を与え、後述のＢ物質のＲｆ値０．５０と区別
されるが、蟻酢一酢酸一水（２５：７５：９００容）を
用いた高圧Ｆ紙泳動（３５００Ｖ、３５分）ではアラニ
ンの原点からの動きを１．０としたときＡ物質およびＢ
物質のそれは共に０．１７を示し九Ｂ物質は白色粉末で
その性状においてＡ物質と非常に類似しているが融点は
明確でなく、１４４℃で発泡分解を始め１５１℃で完全
に熔融する。

比旋光度は〔α〕閉 ＝−｝−３１４°（ｃＯ．４８，
ジオキサン）の値を得た。

元素分析値はＣ５７．００％、Ｈ５．５８係、Ｎ９．７
５％を示し、Ａ物質と同高分解能マススペクトルによっ
て証明された（実測値ｍ／ｃ ２６２．０９３９、ＣＬ
ＩＨ１４Ｎ２ ０４の理論値２６２．０９５２）。

Ｂ物質は低級アルコール、クロロホルム、ジオキサンに
よく溶け、水に僅かに溶け、エーテル、ｎ−ヘキサンに
は難溶あるいは不溶である。

まだライドンースミス反応、レッドテトラゾリウム反応
は陽性であり、ニンヒドリン反応は価かに陽性で、エー
ルリツヒ、坂口反応は陰性である。

Ａ物質およびＢ物質は粉末状態では安定であるが、溶液
中で不安定で、特にｐＨ２．５の５０％エタノール水溶
液中室温で１６時間経過すると、それらの抗菌力はそれ
ぞれ２５％および２２チまで減少する。

またｐＨ６．５およびｐＨ８．０の３０係エタノール水
溶液で室温に保存すると、それらの抗菌力は殆んど減少
しないが、Ａ物質はＡ物質とＢ物質の平衡混合物に、ま
たＢ物質もＡ物質とＢ物質の平衡混合物に変化している
ことが薄層クロマトグラフイーによって確かめられた。

さらにネオスラマイシンＡ物質およびＢ物質の構造研究
の結果から、次の構造式が提出されるに至った。

？物質：Ｒ，＝ＯＨ， Ｒ２＝Ｈ Ｂ物質：Ｒ＝Ｈ Ｒ２＝ＯＨ 前記の特願昭５０−１２３２５６号および特願昭５１−
２５９号で詳述した如《、Ａ物質またはおよびＢ物質を
含有する水溶液からそれらの抗生物質を抽出するにはプ
タノールを使用する溶剤抽出法および活性炭を使用する
吸着法によって行なわれる。

しかし、ブタノールによる抽出は、Ａ物質またはおよび
Ｂ物質の濃厚溶液をうるに当り、減圧下濃縮する操作が
必要で、Ａ物質およびＢ物質の不安定性のために好収率
に濃縮液をうることは難かしい。

また、活性炭による吸着法では、工業的に操作が繁雑と
なり、溶出収率も低い。

そこで本発明者らはＡ物質またはおよびＢ物質を含有す
る水溶液から、Ａ物質またはおよびＢ物質の濃厚溶液を
うる方法を種々検討した結果、非イオン交換性の多孔質
樹脂を使用する塔クロマトグラフイーによって収率のみ
ならず純度の高い濃厚溶液をうる方法を開発することが
できた。

本発明に使用される非イオン交換性の多孔質樹脂として
はジビニルベンゼンで架橋したポリスチレン樹脂が使用
され、市販のアンバーライトＸＡＤ−２，ＸＡＤ−４，
ＸＡＤ−７ （以上米国ローム・アンド・ハース社製）
やダイヤイオンＨＰ一１０，ＨＰ−２０（以上三菱化成
製）などを用いることができる。

使用される樹脂の容量は吸着に供されるＡ物質またはお
よびＢ物質の溶液の１／５〜１／２０量が適当で、樹脂
塔は一般に直径と高さの比が５〜２０のものが使用され
、好ましくは１０〜１５である。

吸着に供される溶液はＡ物質およびＢ物質が比較的安定
なｐＨ５以上が望ましく、好ましくはｐＨ５〜７である
。

Ａ物質まだはおよびＢ物質を吸着した樹脂は、樹脂量の
４〜１０倍溶量の水で洗浄したのち、次に述べる溶出操
作が行なわれる．樹脂に吸着したＡ物質またはおよびＢ
物質を溶出せしめるには一般に水と混合しうる有機溶媒
の水溶液および稀アンモニア水などが用いられる。

例えば５〜２０係アセトン水溶液、３０〜５０％メタノ
ール水溶液および０．０１Ｎ〜０．ＩＮアンモニア水が
好んで用いられる。

これらのクロマトグラフイーはＡ物質，およびＢ物質の
不安定性から１０℃以下の低温室で操作するのが好まし
く、その流速は樹脂容量当り０．５〜１時間が適当であ
る。

Ａ物質またはおよびＢ物質を含有する放線菌ＭＣ９１６
−Ｃ４株の培養液からＡ物質またはおよびＢ物質の濃厚
溶液をうるためにも本発明の方法はきわめて有効である
。

本発明による多孔質樹脂のクロマトグラフイーを行なう
ことにより、純度の高いＡ物質またはおよびＢ物質の粗
粉末を一回の操作で収率よくうることかできるが、この
操作を適宜繰返すことにより、さらに高純度のＡ物質ま
だはおよびＢ物質の粉末をうろことができる。

次に実施例によって本発明の方法を詳しく説明する。

実施例 １ ネオスラマイシンＡ物質およびＢ物質を含有する放線菌
ＭＣ９１６−Ｃ４株の培養Ｐ液をｐＨ５．０に調整し、
ダイヤイオンＨＰ−１０，ＨＰ−２０：アンバーライト
ＸＡＤ−２，ＸＡＤ−４，ＸＡＤ−７の種々の樹脂の塔
（内径２７ ａｍ ）に通過吸着せしめ、樹脂量の６倍
容量の水で洗浄後、種々の溶出剤で溶出した実験結果を
次表に示す。

この実験でえられた各溶出液を凍結乾燥してえられた粗
粉末の純度を併記した。

Ａ物質およびＢ物質の含有量は純粋なＡ物質（ １００
０ｕ／ｍｇ）を標準として黄色ぶどう球菌を使用する通
常の円筒平板法によって測定した。

実施例 ２ ネオスラマイシンＡ物質およびＢ物質を含有する放線菌
ＭＣ９１６−Ｃ４株の培養戸液１０５０１１ （ ｐＨ
５．７， ２ ６ ０ ｕ／ｍｌ）を、ダイヤイオン
ＨＰ−２０樹脂（三菱化成製）１００ｌを充填した塔（
内径２７ｃｒｆＬ）に通過吸着せしめ、１０００ｌの水
で洗浄後、０．０５Ｎアンモニア水で溶出した。

初めの溶出液１ ４ １ （ ｐＨ６．１ ）を捨て、
ｐＨが上昇しはじめてから１６５ｌの活性溶出液（ｐＨ
９．８）を採取した。

この溶出液はＡ物質およびＢ物質を含有し、１２８２ｕ
／ｍｌの抗菌力を示した。

収率７８％。実施例 ３ 実施例２でえられた溶出液（１６５７，１２８２ｕ／ｍ
ｃ ｐＨ９．８ ）を３Ｎ硫酸でｐ Ｈ ５． ５に調
整したのち、アンバーライトＸＡＤ−７樹脂（ローム・
アンド・ハース製）２０ｌを充填した塔（内径１０（１
１７７１）にかけて、Ａ物質およびＢ物質を吸着せしめ
、９０１の水で洗浄する。

続いて５％アセトン水溶液で溶出し、５Ｍの活性溶出液
（ ２３２０ｕ／ｍＡ！ ）をえた。

収率６３係。この溶出液を凍結乾燥してＡ物質およびＢ
物質を含有する粉末（７３５ｕ／ｍｇ）１１２ｇをえた
。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ ネオスラマイシンＡまたはおよびネオスラマイシン
   Ｂを含有する水溶液から、それらを多孔質樹脂に吸着せ
   しめ、含水溶媒または稀アンモニア水で溶出してネオス
   ラマイシンＡまたはおよびネオスラマイシンＢの濃厚溶
   液を採取することを特徴とする抗生物質ネオスラマイシ
   ンＡまたはおよびネオスラマイシンＢの製造法。