JPS6321480B2 - - Google Patents
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- Publication number
- JPS6321480B2 JPS6321480B2 JP12525581A JP12525581A JPS6321480B2 JP S6321480 B2 JPS6321480 B2 JP S6321480B2 JP 12525581 A JP12525581 A JP 12525581A JP 12525581 A JP12525581 A JP 12525581A JP S6321480 B2 JPS6321480 B2 JP S6321480B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- mitomycin
- mitomycins
- fermentation liquid
- fermentation
- added
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はマイトマイシンＡ、Ｂ、Ｃなど（以下
マイトマイシン類という）の製造法に関するもの
である。ストレプトミセス属菌の生産するマイト
マイシン発酵液においては、菌体中に含まれるマ
イトマイシン分解酵素の作用により、培養後通気
撹拌を止め発酵液を静置すると短時間でマイトマ
イシン類が分解される現象がある。マイトマイシ
ンの分解を抑制する方法については、短時間に通
気および冷却をしながら菌体を分離し安定化する
方法さらにはフエノール、ホルマリン、クロロホ
ルム、トルエン、ラウリル硫酸ナトリウム、ホウ
酸ナトリウムなどを発酵液に添加し安定化させる
方法が知られている。しかしこれらの方法では、
工業的規模でマイトマイシンＡ、Ｂ、Ｃを同時に
収率よく製造することが難かしい。そこで本発明
者らは、発酵液でのマイトマイシン類の分解を防
止し、マイトマイシン類を同時に製造する方法に
ついて検討を行なつた結果、発酵液にエタノー
ル、ｎ−プロパノール、iso−プロパノール、ア
セトン、メチルエチルケトンなどの水溶性有機溶
媒を加えることにより、マイトマイシン類の分解
を防止できることを見出した。そしてこれらの水
溶性有機溶媒を添加した発酵液に過助剤を加え
て過すると、その液から容易にマイトマイシ
ン類を製造することができることを見出し本発明
を完成するに致つた。
マイトマイシン類という）の製造法に関するもの
である。ストレプトミセス属菌の生産するマイト
マイシン発酵液においては、菌体中に含まれるマ
イトマイシン分解酵素の作用により、培養後通気
撹拌を止め発酵液を静置すると短時間でマイトマ
イシン類が分解される現象がある。マイトマイシ
ンの分解を抑制する方法については、短時間に通
気および冷却をしながら菌体を分離し安定化する
方法さらにはフエノール、ホルマリン、クロロホ
ルム、トルエン、ラウリル硫酸ナトリウム、ホウ
酸ナトリウムなどを発酵液に添加し安定化させる
方法が知られている。しかしこれらの方法では、
工業的規模でマイトマイシンＡ、Ｂ、Ｃを同時に
収率よく製造することが難かしい。そこで本発明
者らは、発酵液でのマイトマイシン類の分解を防
止し、マイトマイシン類を同時に製造する方法に
ついて検討を行なつた結果、発酵液にエタノー
ル、ｎ−プロパノール、iso−プロパノール、ア
セトン、メチルエチルケトンなどの水溶性有機溶
媒を加えることにより、マイトマイシン類の分解
を防止できることを見出した。そしてこれらの水
溶性有機溶媒を添加した発酵液に過助剤を加え
て過すると、その液から容易にマイトマイシ
ン類を製造することができることを見出し本発明
を完成するに致つた。
マイトマイシンＡ、Ｂ、Ｃ等はストレプトミセ
ス・ケスピトーズスの生産する抗菌性抗腫瘍物質
である。中でもマイトマイシンＣは抗腫瘍剤とし
て広く使用され、その効果は大きなものがある。
一方マイトマイシンＡ、Ｆは現在抗腫瘍剤として
使用されていないが、その抗腫瘍効果は強いもの
があり抗腫瘍剤としての使用が期待されるととも
に、マイトマイシン誘導体の合成原料としても非
常に重要な物質である。
ス・ケスピトーズスの生産する抗菌性抗腫瘍物質
である。中でもマイトマイシンＣは抗腫瘍剤とし
て広く使用され、その効果は大きなものがある。
一方マイトマイシンＡ、Ｆは現在抗腫瘍剤として
使用されていないが、その抗腫瘍効果は強いもの
があり抗腫瘍剤としての使用が期待されるととも
に、マイトマイシン誘導体の合成原料としても非
常に重要な物質である。
以下本発明をさらに詳細に説明する。
ストレプトミセス・ケスピトーズスを生産菌と
したマイトマイシン類発酵液を培養終了後、直ち
に菌体を分離すると、上澄液中のマイトマイシン
類の安定性は比較的良好となるが、菌体の存在す
る発酵液では極めて不安定で室温で30分程度静置
するとマイトマイシン類はほぼ100％分解される。
したマイトマイシン類発酵液を培養終了後、直ち
に菌体を分離すると、上澄液中のマイトマイシン
類の安定性は比較的良好となるが、菌体の存在す
る発酵液では極めて不安定で室温で30分程度静置
するとマイトマイシン類はほぼ100％分解される。
発酵液を培養終了後通気撹拌しながら５℃前後
まで冷却することにより、マイトマイシン分解酵
素活性はある程度抑えられ、マイトマイシンＣは
比較的安定化するがマイトマイシンＡ、Ｂ、Ｆは
ほとんど安定化されない。
まで冷却することにより、マイトマイシン分解酵
素活性はある程度抑えられ、マイトマイシンＣは
比較的安定化するがマイトマイシンＡ、Ｂ、Ｆは
ほとんど安定化されない。
また発酵液にホルマリン、フエノール等の薬剤
を添加するとマイトマイシン分解酵素活性は抑え
られるが、薬剤の影響でマイトマイシン類が分解
を受け、安定化はそれ程良くない。
を添加するとマイトマイシン分解酵素活性は抑え
られるが、薬剤の影響でマイトマイシン類が分解
を受け、安定化はそれ程良くない。
これらの結果から新しい安定化剤を見出すた
め、発酵液に種々の薬剤の添加実験を行なつた。
この結果発酵液に対して10〜20％の量に相当す
る、エタノール、ｎ−プロパノール、iso−プロ
パノール、アセトン、メチルエチルケトン等の水
溶性有機溶媒を添加し、室温で１時間静置後、マ
イトマイシン類を測定したところ、マイトマイシ
ンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｆはそれぞれほぼ100％発酵液中
に残存し安定化することが見出された。
め、発酵液に種々の薬剤の添加実験を行なつた。
この結果発酵液に対して10〜20％の量に相当す
る、エタノール、ｎ−プロパノール、iso−プロ
パノール、アセトン、メチルエチルケトン等の水
溶性有機溶媒を添加し、室温で１時間静置後、マ
イトマイシン類を測定したところ、マイトマイシ
ンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｆはそれぞれほぼ100％発酵液中
に残存し安定化することが見出された。
上記水溶性有機溶媒を添加した後、菌体を分離
しその分解酵素活性を測定すると活性は完全に失
活していることが認められた。さらに上記水溶性
有機溶媒にマイトマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｆを溶解
させ安定性を測定した結果、水溶液中よりも安定
性が良好となつていることが確認できた。
しその分解酵素活性を測定すると活性は完全に失
活していることが認められた。さらに上記水溶性
有機溶媒にマイトマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｆを溶解
させ安定性を測定した結果、水溶液中よりも安定
性が良好となつていることが確認できた。
以上の結果よりマイトマイシン発酵液に上記水
溶性有機溶媒を添加し、マイトマイシン分解酵素
を失活させ、発酵液中のマイトマイシン類を安定
化できることがわかる。
溶性有機溶媒を添加し、マイトマイシン分解酵素
を失活させ、発酵液中のマイトマイシン類を安定
化できることがわかる。
また上記水溶性有機溶媒を発酵液に加え、マイ
トマイシン類を安定化させた後、過助剤を加え
フイルタープレスで過を行ない、液をダイヤ
イオンHP（10、20、30、40、50）樹脂（三菱化
成工業社製の商品名）、アンバーライトXAD（、
）（ロームアンドハース社製の商品名）などの
合成吸着樹脂に通塔しマイトマイシン類を吸着さ
せる。吸着後メタノール、エタノール、アセトン
等の水溶液を用いマイトマイシン類を溶出し、溶
出液を減圧濃縮する。濃縮後に食塩等の無機塩を
加え、酢酸エチル等の溶媒で抽出液に無水硫酸ナ
トリウムを加え脱水処理をして、減圧濃縮を行な
う。この濃縮液を酢酸エチル：アセトン＝10：１
〜１：１の展開溶媒でシリカゲルクロマト分離を
行なうと、マイトマイシンＦ、Ｂ、Ａ、Ｃの順で
溶出される。各成分の区分をとり、濃縮し各成分
を結晶化および沈でん化し、分離後真空乾燥し、
マイトマイシン各成分を得る。
トマイシン類を安定化させた後、過助剤を加え
フイルタープレスで過を行ない、液をダイヤ
イオンHP（10、20、30、40、50）樹脂（三菱化
成工業社製の商品名）、アンバーライトXAD（、
）（ロームアンドハース社製の商品名）などの
合成吸着樹脂に通塔しマイトマイシン類を吸着さ
せる。吸着後メタノール、エタノール、アセトン
等の水溶液を用いマイトマイシン類を溶出し、溶
出液を減圧濃縮する。濃縮後に食塩等の無機塩を
加え、酢酸エチル等の溶媒で抽出液に無水硫酸ナ
トリウムを加え脱水処理をして、減圧濃縮を行な
う。この濃縮液を酢酸エチル：アセトン＝10：１
〜１：１の展開溶媒でシリカゲルクロマト分離を
行なうと、マイトマイシンＦ、Ｂ、Ａ、Ｃの順で
溶出される。各成分の区分をとり、濃縮し各成分
を結晶化および沈でん化し、分離後真空乾燥し、
マイトマイシン各成分を得る。
以下に実施例をあげて本発明を具体的に説明す
る。
る。
実施例 １
種菌としてストレプトミセス・ケスピトーズス
Ｖ−621〔The Journal of Antibiotics Vol.No.
４（1965）記載〕（FERM BP−1530）を用い、
グルコース1.5ｇ／dl、酵母１ｇ／dl、デンプン
0.5ｇ／dl、食塩0.5ｇ／、炭酸カルシウム0.3
ｇ／dlの培地でPH7.5、28℃で種培養を行なう。
得られた種培養液を同じ組成の培地で28℃２日間
培養する。発酵液中にはマイトマイシンA8γ／
ml、マイトマイシンB10γ／ml、マイトマイシン
C12γ／mlが蓄積した。培養終了後、発酵液１Kl
にｎ−プロパノール100を添加した後10℃まで
冷却する。冷却後過助剤を加えフイルタープレ
スで過し液を得る。液をダイヤイオンHP
−20 200に通塔し、マイトマイシン類を吸着さ
せ、水洗を行なつた後、50％アセト水でマイトマ
イシン類を溶出する。溶出液のマイトマイシン類
区分を集め減圧濃縮し、アセトンを除去した後、
食塩を30％濃度になるように加え酢酸エチル100
でマイトマイシン類の抽出を行なう。酢酸エチ
ル層を分離した後、約10まで減圧濃縮を行な
い、無水硫酸ナトリウム１Kgを加え脱水処理をす
る、硫酸ナトリウムを分離した後、過を酢酸エ
チルを用いて充填したシリカゲルカラム５に通
塔しマイトマイシン類を吸着させる。吸着後酢酸
エチル：アセトン＝９：１〜１：１の展開溶媒で
溶出を行なうと、マイトマイシンＢ、マイトマイ
シン類Ａ、マイトマイシンＣの順で各成分が溶出
される。それぞれの成分を分画し、濃縮後結晶化
させ、分離乾燥したところ、マイトマイシA4.5
ｇ、マイトマイシンB6.0ｇ、マイトマイシンC6.3
ｇを得た。
Ｖ−621〔The Journal of Antibiotics Vol.No.
４（1965）記載〕（FERM BP−1530）を用い、
グルコース1.5ｇ／dl、酵母１ｇ／dl、デンプン
0.5ｇ／dl、食塩0.5ｇ／、炭酸カルシウム0.3
ｇ／dlの培地でPH7.5、28℃で種培養を行なう。
得られた種培養液を同じ組成の培地で28℃２日間
培養する。発酵液中にはマイトマイシンA8γ／
ml、マイトマイシンB10γ／ml、マイトマイシン
C12γ／mlが蓄積した。培養終了後、発酵液１Kl
にｎ−プロパノール100を添加した後10℃まで
冷却する。冷却後過助剤を加えフイルタープレ
スで過し液を得る。液をダイヤイオンHP
−20 200に通塔し、マイトマイシン類を吸着さ
せ、水洗を行なつた後、50％アセト水でマイトマ
イシン類を溶出する。溶出液のマイトマイシン類
区分を集め減圧濃縮し、アセトンを除去した後、
食塩を30％濃度になるように加え酢酸エチル100
でマイトマイシン類の抽出を行なう。酢酸エチ
ル層を分離した後、約10まで減圧濃縮を行な
い、無水硫酸ナトリウム１Kgを加え脱水処理をす
る、硫酸ナトリウムを分離した後、過を酢酸エ
チルを用いて充填したシリカゲルカラム５に通
塔しマイトマイシン類を吸着させる。吸着後酢酸
エチル：アセトン＝９：１〜１：１の展開溶媒で
溶出を行なうと、マイトマイシンＢ、マイトマイ
シン類Ａ、マイトマイシンＣの順で各成分が溶出
される。それぞれの成分を分画し、濃縮後結晶化
させ、分離乾燥したところ、マイトマイシA4.5
ｇ、マイトマイシンB6.0ｇ、マイトマイシンC6.3
ｇを得た。
実施例 ２
種菌としてストレプトミセス・ケスピトーズス
Ｔ−17−135（NRRL 12508）を用いグルコース
１ｇ／dl、酵母１ｇ／dl、デンプン0.5ｇ／、
食塩0.5ｇ／dl、炭酸カルシウム0.3ｇ／dl、PH7.2
の培地を用い、28℃で種培養を行なう。得られた
種培養液をフラクトース２ｇ／dl、大豆粉４ｇ／
dl、デンプン１ｇ／dl、食塩0.5ｇ／dl、炭酸カ
ルシウム0.5ｇ／dl、PH7.2の培地を用い30℃で３
日間培養する。発酵液中にはマイトマイシン
A65γ／ml、マイトマイシンB25γ／ml、マイトマ
イシンF5γ／mlが蓄積した。培養終了後通気を止
めアセトン20を発酵液100に加えマイトマイ
シン類を安定化させる。安定化させた培養を実施
例１と同様の操作を行ない、マイトマイシンA3
ｇ、マイトマイシンB1.2ｇ、マイトマイシンF0.1
ｇを得た。
Ｔ−17−135（NRRL 12508）を用いグルコース
１ｇ／dl、酵母１ｇ／dl、デンプン0.5ｇ／、
食塩0.5ｇ／dl、炭酸カルシウム0.3ｇ／dl、PH7.2
の培地を用い、28℃で種培養を行なう。得られた
種培養液をフラクトース２ｇ／dl、大豆粉４ｇ／
dl、デンプン１ｇ／dl、食塩0.5ｇ／dl、炭酸カ
ルシウム0.5ｇ／dl、PH7.2の培地を用い30℃で３
日間培養する。発酵液中にはマイトマイシン
A65γ／ml、マイトマイシンB25γ／ml、マイトマ
イシンF5γ／mlが蓄積した。培養終了後通気を止
めアセトン20を発酵液100に加えマイトマイ
シン類を安定化させる。安定化させた培養を実施
例１と同様の操作を行ない、マイトマイシンA3
ｇ、マイトマイシンB1.2ｇ、マイトマイシンF0.1
ｇを得た。
実施例 ３
実施例２と同様な操作を行ない、マイトマイシ
ンA70γ／ml、マイトマイシンB40μ／ml、マイト
マイシンF6γ／mlの蓄積した発酵液100に培養
終了直後、メチルエチルケトン10を加えマイト
マイシン類を安定化させる。安定化させた発酵液
を実施例１と同様の操作を行ないマイトマイシン
A4ｇ、マイトマイシンB22ｇ、マイトマイシン
F0.2ｇを得た。
ンA70γ／ml、マイトマイシンB40μ／ml、マイト
マイシンF6γ／mlの蓄積した発酵液100に培養
終了直後、メチルエチルケトン10を加えマイト
マイシン類を安定化させる。安定化させた発酵液
を実施例１と同様の操作を行ないマイトマイシン
A4ｇ、マイトマイシンB22ｇ、マイトマイシン
F0.2ｇを得た。
実施例 ４
実施例２と同様な操作を行ないマイトマイシン
A73γ／ml、マイトマイシンB30γ／ml、マイトマ
イシンF4γ／ml、の蓄積した発酵液を得た。培養
直後に発酵液100に対しiso−プロパノール18
を加えてマイトマイシン類を安定化させた。安定
化後実施例１と同様の操作を行ない、マイトマイ
シンA4.5ｇ、マイトマイシンB1.4ｇ、マイトマ
イシンＦを0.2を得た。
A73γ／ml、マイトマイシンB30γ／ml、マイトマ
イシンF4γ／ml、の蓄積した発酵液を得た。培養
直後に発酵液100に対しiso−プロパノール18
を加えてマイトマイシン類を安定化させた。安定
化後実施例１と同様の操作を行ない、マイトマイ
シンA4.5ｇ、マイトマイシンB1.4ｇ、マイトマ
イシンＦを0.2を得た。
Claims (1)
- １ マイトマイシン類を蓄積させた発酵液に、ｎ
−プロパノール、iso−プロパノール、アセトン
およびメチルエチルケトンから選ばれる水溶性有
機溶媒の少なくとも１種を添加し、該発酵液中の
マイトマイシン分解酵素を失活させ、マイトマイ
シン類を安定化させた後、該発酵液からマイトマ
イシン類を採取することを特徴とするマイトマイ
シン類の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12525581A JPS5828293A (ja) | 1981-08-12 | 1981-08-12 | マイトマイシン類の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12525581A JPS5828293A (ja) | 1981-08-12 | 1981-08-12 | マイトマイシン類の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5828293A JPS5828293A (ja) | 1983-02-19 |
| JPS6321480B2 true JPS6321480B2 (ja) | 1988-05-07 |
Family
ID=14905572
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP12525581A Granted JPS5828293A (ja) | 1981-08-12 | 1981-08-12 | マイトマイシン類の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5828293A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0425467U (ja) * | 1990-06-18 | 1992-02-28 |
-
1981
- 1981-08-12 JP JP12525581A patent/JPS5828293A/ja active Granted
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0425467U (ja) * | 1990-06-18 | 1992-02-28 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5828293A (ja) | 1983-02-19 |
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